專利名稱：：妊娠促進劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及在通過人胚泡移植進行的不孕癥治療中的促進妊娠的組合物及其制造方法。
背景技術(shù)：
：據(jù)稱，人的不孕癥的發(fā)生率在所有夫婦中有10%左右。因此，不孕癥治療的需求大，如今正在廣泛地進行。在作為不孕癥治療所采用的方法中，直接操作精子和卵子的方法有人工授精和體外受精。人工授精是如下技術(shù)-利用導(dǎo)管等器具將精子注入子宮頸附近的陰道內(nèi)，或者直接注入子宮或輸卵管內(nèi)，從而促進受精；其目的是回避到精子與卵子相遇為止的過程中存在的各種障礙，從而提高受精的成功率。與此相對，體外受精是如下技術(shù)從體內(nèi)收集通過對患者給予排卵誘發(fā)劑而產(chǎn)生的卵子，在試管內(nèi)與精子混合，從而使卵子受精(授精)，對受精卵進行培養(yǎng)，一般在培養(yǎng)的第2天或第3天用導(dǎo)管將4細胞期或8細胞期的胚胎移植至子宮腔內(nèi)。為使所移植的胚胎易于著床，通常會補充用于調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜的促黃體生成激素。為了向母體發(fā)送信號來告知自身的存在，著床前胚胎在發(fā)育時會產(chǎn)生多種因子。例如，白細胞介素一l(IL一l)是調(diào)節(jié)母體的子宮內(nèi)膜和胚胎之間的信息交換的主要因子，在人胚胎發(fā)育的所有階段均可檢出完整的IL一1系統(tǒng)(參照非專利文獻1)。作為另一種來源于胚胎的因子的人絨毛膜促性腺激素(HCG)在2細胞期的胚胎中其基因就已被轉(zhuǎn)錄(參照非專利文獻2)。此外，觀察到包括這些因子在內(nèi)的與信息交換相關(guān)的多種來源于胚胎的因子在體外(試管內(nèi))對胚胎進行培養(yǎng)時被釋放至細胞外。g卩，調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜的感受性的多種來源于胚胎的因子在胚胎的培養(yǎng)上清中被檢出(參照非專利文獻39)。在體內(nèi)(人體內(nèi))，也已知在輸卵管中發(fā)育的胚胎誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜的分化(參照非專利文獻10)。所有這些事實表明，在胚胎發(fā)育的早期階段，胚胎和子宮內(nèi)膜之間介以由胚胎產(chǎn)生的因子進行信息交換。事實上，已知不僅是子宮腔內(nèi)的著床前胚胎，輸卵管內(nèi)的早期胚胎也可調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜的分子，使胚胎自身能控制著床(參照非專利文獻10)。近年來，作為改善人的不孕癥治療中的著床成功率的方法，提倡作為體外受精的一種形態(tài)的胚泡移植，并在臨床上得到實施(參照非專利文獻1113)。該移植技術(shù)是將上述體外受精后的胚胎培養(yǎng)至第5天第6天，從而使其發(fā)育至胚泡，然后將其注入子宮腔內(nèi)。通過胚泡移植，可使子宮內(nèi)膜與胚胎的發(fā)育階段在生理上同步化，且經(jīng)由長時間的體外培養(yǎng)，更容易選擇著床能力高的胚胎，因而與早期胚胎的移植相比著床的成功率提高(參照非專利文獻14及15)。關(guān)于到著床為止的天數(shù)，培養(yǎng)23天的胚胎為45天，而胚泡移植與之相比要短1天，胚胎向子宮外流失的風(fēng)險降低，這也有利于著床。然而，即便如此，目前人胚泡移植的妊娠率仍停留在36.4%左右。胚泡移植中的著床失敗被認為是由于胚泡無法從透明帶開始孵化，或是由于所移植的胚泡的發(fā)育在子宮腔內(nèi)停止等。如上所述，即使通過現(xiàn)行的胚泡移植也無法實現(xiàn)妊娠的案例較多，因此需要進一步提高妊娠成功率的方法。非專利文獻1:DelosSantosMJ，AndersonDJ，RacowskyC，SiraonC，和HillJA(1998)BiolR印rod.59，1419-1424非專利文獻2:JurisicovaA，AntenosM，KapasiK,MerianoJ，禾口CasperRF(1999)HuraR印rod.14，1852-1858非專利文獻3:TazukeSI，禾BGiudiceLC，(1996)SeminReprodEndocrinol.14，231-245非專禾U文獻4:SimonC，GimenoMJ，MercaderA，0'ConnorJE，RemohiJ，PolanML，和PellicerA(1997)JClinEndocrinolMetab.82，2607-2616非專利文獻5:GiudiceLC(1995)SeminReprodEndocrinol.13，93-101非專利文獻6:ShethKV，RocaGL，al-SedairyST，ParharRS，HamiltonCJ,禾卩al-AbdulJabbarF(1991)FertilSteril.55，952-957非專利文獻7:BaranaoRI，PiazzaA，RumiLS，禾BPolakdeFriedE(1997)AmJReprodImmunol.37，191-194非專利文獻8:LichtP，RussuV，和WildtL(2001)SeminR印rodMed.19，37-47非專利文獻9:Perrierd'HauteriveS，Charlet-RenardC，BerndtS，DuboisM，MunautC,GoffinF，等(2004)HumR印rod.19,2633-2643非專利文獻10:WakudaK，TakakuraK，NakanishiK，KitaN，ShiH，HiroseM，和NodaY(1999)JReprodFertil.115，315-324非專利文獻ll:GardnerDK，SchoolcraftWB,WagleyL，SchlenkerT，StevensJ，和HeslaJA(1998)HumReprod.13,3434-3440非專利文獻12:ScholtesMC，和ZeilraakerGH(1998)FertilSteril.69，78-83非專利文獻13:MilkiAA，F(xiàn)ischJD，和BehrB(1999)FertilSteril.72，225-228非專利文獻14:GardnerDK，VellaP，LaneM，WagleyL，SchlenkerT和SchoolcraftWB(1998)FertilSteril.69，84-88非專利文獻15:EdwardsRG,禾卩BeardHK(1999)HumReprod.14,1-4發(fā)明的揭示本發(fā)明的目的是以現(xiàn)在妊娠成功率停留在36.4%左右的人胚泡移植為基礎(chǔ)，提供用于提高利用該技術(shù)的妊娠的成功率的方法。本發(fā)明人估計，胚泡移植最終失敗的一個主要原因在于，從早期胚胎到胚泡為止的發(fā)育階段中存在子宮內(nèi)膜和胚胎之間的信息交換的欠缺。該信息交換的欠缺可能是無法充分地調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜的胚胎感受性的原因。因此，為提高人胚泡移植中的著床及妊娠的成功率，本發(fā)明人著眼于胚胎本身對子宮內(nèi)膜的感受性的調(diào)節(jié)進行了研究。即，預(yù)先將人胚胎的培養(yǎng)上清注入接受者的子宮腔，再嘗試進行胚泡移植后，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)能夠以明顯比以往的胚泡移植高的成功率實現(xiàn)著床及妊娠。對于通過預(yù)先將胚胎的培養(yǎng)上清注入子宮可提高胚泡移植中的著床及妊娠的成功率的發(fā)現(xiàn)至今尚無報道，本發(fā)明是基于該發(fā)現(xiàn)進一步研究而完成的。艮P，本發(fā)明提供以下技術(shù)內(nèi)容。1.一種在胚泡移植中使用的妊娠促進劑，該妊娠促進劑含有將人胚胎在培養(yǎng)基中培養(yǎng)至胚泡而得的培養(yǎng)物的培養(yǎng)上清。2.上述l所述的妊娠促進劑，其中，所述培養(yǎng)上清是從人胚胎在其中培養(yǎng)了至少2天的培養(yǎng)基得到的培養(yǎng)上清。3.上述1或2所述的妊娠促進劑，其中，培養(yǎng)在每1個人胚胎10100u1的培養(yǎng)基中進行。4.上述13中任一項所述的妊娠促進劑，該妊娠促進劑至少含有相當于0.3個人胚胎的量的培養(yǎng)上清。5.上述14中任一項所述的妊娠促進劑，其中，所述培養(yǎng)基為無血清培養(yǎng)基。6.—種在胚泡移植中使用的妊娠促進劑的制造方法，該方法包括在培養(yǎng)基中培養(yǎng)人胚胎，從而形成胚泡的步驟；以及收集形成有胚泡的培養(yǎng)液的上清的步驟。7.上述6所述的妊娠促進劑的制造方法，其中，所述培養(yǎng)進行至少2天。8.上述6或7所述的妊娠促進劑的制造方法，其中，培養(yǎng)在每l個人胚胎10100y1的培養(yǎng)基中進行。9.上述68中任一項所述的妊娠促進劑的制造方法，該方法中，至少收集相當于0.3個人胚胎的量的培養(yǎng)上清。10.上述69中任一項所述的妊娠促進劑的制造方法，其中，所述培養(yǎng)基為無血清培養(yǎng)基。11.一種用于促進人的妊娠的方法，該方法包括將人胚胎在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，直至該人胚胎發(fā)育成胚泡的步驟；將含有該培養(yǎng)物的上清的組合物注射至接受胚泡移植的人類患者的子宮腔內(nèi)的步驟；以及將l個或2個以上的胚泡移植至該患者的子宮腔內(nèi)的步驟。12.上述ll所述的方法，其中，所述培養(yǎng)進行至少2天。13.上述11或12所述的方法，其中，培養(yǎng)在每l個人胚胎10100W1的培養(yǎng)基中進行。14.上述1113中任一項所述的方法，其中，所述組合物至少含有相當于0.3個人胚胎的量的培養(yǎng)上清。15.上述1114中任一項所述的方法，其中，所述培養(yǎng)基為無血清培養(yǎng)基。16.上述1115中任一項所述的方法，其中，所述組合物的注射在胚泡移植的15天前進行。上述基于本發(fā)明的妊娠促進劑通過在將胚泡移植至胚胎的接受者的子宮內(nèi)之前預(yù)先注入子宮腔，與現(xiàn)行的胚泡移植的情況相比，可顯著提高所移植的胚泡的著床及妊娠的成功率。實施發(fā)明的最佳方式本發(fā)明者認為，基于本發(fā)明的胚泡移植中的著床及妊娠的成功率的顯著提高的原因在于，胚胎的培養(yǎng)上清中存在由胚胎所分泌的調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜的感受性的來源于胚胎的因子，通過投與該培養(yǎng)上清，子宮內(nèi)膜受到刺激而形成適宜胚泡移植的環(huán)境。因此，本發(fā)明通過在胚泡移植前利用培養(yǎng)液中的來源于胚胎的因子來彌補以往的胚泡移植中欠缺的從早期胚胎到胚泡的發(fā)育階段中的子宮內(nèi)膜和胚胎之間的信息傳遞，從而使著床及妊娠的成功率提高。本發(fā)明的妊娠促進劑是含有將人胚胎在培養(yǎng)基中培養(yǎng)至胚泡而得的培養(yǎng)上清的組合物(例如培養(yǎng)上清本身)。收集的培養(yǎng)上清優(yōu)選在收集前用其進行了至少2天、更好的是至少3天的培養(yǎng)的培養(yǎng)上清。所用的培養(yǎng)基可以是胚泡移植中慣用的培養(yǎng)基中的任一種，如果考慮到阻斷朊病毒及其它感染性因子的混入的可能性，則優(yōu)選無血清培養(yǎng)基。作為上述優(yōu)選的無血清培養(yǎng)基，現(xiàn)在可例舉例如BlastAssist系統(tǒng)(BlastAssistSystem)培養(yǎng)基1和2，特別是適用于到胚泡為止的約3天的培養(yǎng)的BlastAssist系統(tǒng)培養(yǎng)基2(麥迪克特(MediCult)公司，丹麥基林閣(Jyllinge))。考慮到為胚泡提供足夠量的培養(yǎng)基的必要性和從培養(yǎng)液中收集胚泡的方便性，上述人胚胎的培養(yǎng)以在每1個人胚胎10100y1的培養(yǎng)基中進行為宜，優(yōu)選在每l個人胚胎1060yl的培養(yǎng)基中進行。已發(fā)育至胚泡的人胚胎的培養(yǎng)上清中，較好的是至少含有相當于0.3個人胚胎的量的培養(yǎng)上清。即，例如將l個胚胎在50ul的培養(yǎng)基中培養(yǎng)至發(fā)育成胚泡的情況下，較好的是本發(fā)明的組合物中含有從培養(yǎng)基中收集的至少15pl(即50y1X0.3)的液量的上清。但是，由于也可將本發(fā)明的組合物分成少量的單位保存，在使用(注入患者體內(nèi)時)時將多個單位合并使用，因此在該情況下，單位給藥量的組合物中并不一定要含有相當于0.3個胚胎的量的培養(yǎng)上清。所收集的培養(yǎng)上清可直接使用，也可先冷凍保存，在使用時解凍使用。此外，也可添加藥學(xué)上呈惰性的稀釋劑(例如無菌純水，或含有實施例部分中記載的BlastAssist系統(tǒng)培養(yǎng)基2所含的人血漿白蛋白、葡萄糖、氯化鈉等成分的水溶液)，從而稀釋增量至易于操作的液量，例如0.2ral或0.5ml等。在胚泡移植中，為提高妊娠及著床的成功率，本發(fā)明的妊娠促進劑在將胚泡移植至接受者的子宮內(nèi)之前注入接受者的子宮腔。胚泡的接受者主要是發(fā)育成該胚胎的卵子的提供者本人，但也可以是第三者，因此接受本發(fā)明的妊娠促進劑的注入的人同樣既可以是發(fā)育成胚胎的卵子的提供者，也可以是第三者。此外，可預(yù)先將通過多個胚胎的培養(yǎng)而得的上清例如分別冷凍保存，在對其他接受者進行的其它胚泡的移植中，在移植前將其解凍，注入接受者的子宮腔內(nèi)。本發(fā)明的妊娠促進劑較好的是在對患者進行胚泡移植的15天前、更好的是24天前注入患者的子宮腔內(nèi)。注入可以進行1次(例如在3天前進行l(wèi)次)，也可以隔天或每天進行多次注入。本發(fā)明還提供一種妊娠促進方法，該方法包括如下步驟將人胚胎在培養(yǎng)基中培養(yǎng)至胚泡，將含有該培養(yǎng)上清的上述組合物(例如培養(yǎng)上清本身)注入接受胚泡移植的人的子宮腔，然后移植胚泡。這里，該組合物的注入以在胚泡的移植的15天前進行為宜，優(yōu)選在移植的24天前進行，特優(yōu)選在移植的3天前進行。本發(fā)明還提供一種用于促進人的妊娠的方法，該方法包括如下步驟將人胚胎在培養(yǎng)基中培養(yǎng)至該人胚胎發(fā)育成胚泡為止，將含有該培養(yǎng)物的上清的組合物(例如該培養(yǎng)上清本身)注射至接受胚泡移植的人患者的子宮腔內(nèi)，然后將胚泡移植至該患者的子宮腔內(nèi)。這里，本組合物的注射以在胚泡的移植的15天前進行為宜，優(yōu)選在移植的24天前進行，特優(yōu)選在移植的3天前進行。本發(fā)明的妊娠促進劑通過在胚泡移植前預(yù)先注入接受者的子宮腔，可顯著提高胚泡移植中的著床及妊娠的成功率。實施例下面，參照實施例對本發(fā)明進行更具體的說明，但并不表示本發(fā)明限定于實施例。(試驗方案)登記了22名患者。這些患者在2005年1月到2006年4月期間，在雌激素和黃體酮的激素補充療法(HRT)下接受了經(jīng)凍結(jié)融解的胚泡的移植。該試驗針對的患者的標準為年齡在32歲以上，過去曾有過l次以上的胚泡移植或兩階段(連續(xù)2次的)胚胎移植失敗的治療經(jīng)歷，且在采卵周期的第2天至少具有4個以上的發(fā)育成早期胚胎的胚胎。作為前治療周期，對患者進行基于長方案(longprotocol)的治療。艮P，自治療前周期的高溫期的第7天起開始使用60ug的促性腺激素釋放激素(GnRH)激動劑，自月經(jīng)第3天起至第二優(yōu)勢卵泡(secondleadingfollicle)的直徑達到18mm為止連續(xù)用促卵泡激素(FSH制劑或HMG制劑)來刺激卵巢。在第二優(yōu)勢卵泡的直徑超過18mm時促使排卵。肌肉注射5000單位的人絨毛膜促性腺激素(hCG)，36小時后利用超聲波檢査法經(jīng)陰道采卵。卵泡的測量采用超聲波掃描儀(三菱(Mitsubishi)RDF173H)進行?；厥盏穆炎油ㄟ^授精法或卵細胞質(zhì)內(nèi)精子注入法使其受精。將受精卵在50u1的BlastAssist系統(tǒng)培養(yǎng)基1(含有合成血漿替代物(SSR)、人血漿白蛋白、葡萄糖、丙酮酸鈉、乳酸鹽、硫酸鉀、硫酸鎂、氯化鈉、磷酸氫鈉、非必需氨基酸、L一谷氨酰胺、牛磺酸、碳酸氫鈉、HEPES、鏈霉素50mg/L、青霉素50000IU/L及酚紅；麥迪克特公司，丹麥基林閣)的小滴中培養(yǎng)，在第2天得到早期胚胎。接著，將14個所得的早期胚胎在礦物油(油狀胚胎培養(yǎng)基(0ilEmbryoCulture)，埃爾文科技(IrvineScientific)公司，美國加利福尼亞圣塔安那(SantaAna))被膜下，在50u1的BlastAssist系統(tǒng)培養(yǎng)基2(含有合成血漿替代物(SSR)、人血漿白蛋白、葡萄糖、丙酮酸鈉、乳酸、硫酸鉀、硫酸鎂、氯化鈉、磷酸氫鈉、必需氨基酸、非必需氨基酸、L一谷氨酰胺、碳酸氫鈉、鏈霉素50mg/L、青霉素50000IU/L及酚紅；麥迪克特公司，丹麥基林閣)的小滴中，即每l個胚胎的培養(yǎng)基量為12.550yl的條件下進一步培養(yǎng)3天，直至總計的第5天，得到胚泡。作為培養(yǎng)板，使用FALC0N353002組織培養(yǎng)皿(TissueCultureDish)(BD(BectonDickinson)公司，美國富蘭克林湖(FranklinLakes))。胚胎的培養(yǎng)在設(shè)定為5%C02、5%02、90%N2、37°C、100%濕度的培養(yǎng)箱(TE-HERPRODUCT02002培養(yǎng)箱CP02-1800系列，平澤(hirasawa)株式會社，日本東京)內(nèi)進行。該培養(yǎng)過程中得到的早期胚胎及胚泡的一部分在新鮮的狀態(tài)用于前治療周期的移植。未用于前治療周期的移植的剩余的胚泡冷凍保存。此外，將BlastAssist系統(tǒng)培養(yǎng)基2中的胚胎培養(yǎng)上清在一20'C下保存。對于患者，在前治療周期中，分別于采卵后第2天移植通過上述培養(yǎng)而得的早期胚胎，于采卵后第5天移植通過上述培養(yǎng)而得的胚泡。通過該前期治療而妊娠的患者從本試驗中排除。對于未通過前治療周期的移植而妊娠的患者(22名)，在該移植后的下一個月經(jīng)周期或再下一個月經(jīng)周期進行如下治療。自月經(jīng)周期第2天起開始貼附作為雌二醇制劑的EstradermM。自第2天起隔天貼附2片EstradermM，隨后逐漸增加，第10天增至3片，第12天增至4片，第14天增至6片，然后自第16天起到作為妊娠判定日的第30天為止維持在3片。并且，作為孕激素制劑，自月經(jīng)周期第15天起并用黃體酮陰道栓劑(400mg/天)和乙酸氯地孕酮12mg/天(內(nèi)服)。在激素補充療法(HRT)療程的第20天，將l個或2個胚泡移植至患者體內(nèi)。移植通過子宮頸管采用FaiconIVF導(dǎo)管(富士系統(tǒng)(FujiSystems)株式會社)進行。對于子宮內(nèi)膜刺激胚胎移植組(SEET(StimulationofEndometriumEmbryoTransfer)組)，在胚泡移植前，先在激素補充療法(HRT)療程的第17天將冷凍保存的BlastAssist系統(tǒng)培養(yǎng)基2中的患者自身的胚胎培養(yǎng)上清解凍，將約20u1的該培養(yǎng)上清給藥至11名患者的子宮腔。給藥通過下述方法進行將裝填有20ul胚胎培養(yǎng)上清的FaiconIVF導(dǎo)管(富士系統(tǒng)株式會社)插入子宮頸管，在導(dǎo)管的前端到達距離子宮腔的基底部約lcm的位置時放出培養(yǎng)基。對屬于作為對照的通常的胚泡移植組(BT組)的ll名患者，在不將胚胎培養(yǎng)上清給藥至子宮腔的情況下進行胚泡移植。在胚胎移植后第17天，利用超聲波掃描儀(三菱RDF173H)來確認子宮內(nèi)是否有胎囊。(受試者組)SEET組和BT組的患者的基本特征示于表1。SEET組和BT組的平均年齡(士SD)分別為37.1±4.1歲以及36.0±3.4歲(p=0.47)。不孕的持續(xù)時間(士SD)為SEET組7.6±3.8年，BT組6.0±2.3年(p=0.27)。在本次試驗前接受過的體外受精等生殖輔助技術(shù)(ART)的療程數(shù)為SEET組1.6±0.9次，BT組2.5±2.9次(p=0.39)。促卵泡激素(FSH)的基礎(chǔ)值(土SD)為:SEET組6.5±2.OmlU/ml，BT組5.7±2.7mlU/ml(p=0.46)。受精了的卵細胞的數(shù)量(士SD)為SEET組8.5±2.0個，BT組8.5±1.7個(p=1.0)。所移植的胚泡的數(shù)量(士SD)為SEET組1.5±0.5個，BT組1.5±0.5個(p=0.69)。如上所述，SEET組和BT組的患者之間在基本特征方面沒有顯著差異。此外，所移植的胚泡的品質(zhì)在兩組間是同等的。(結(jié)果)SEET的有效性及安全性試驗結(jié)果示于表1。SEET組中，11名患者中有IO名妊娠，而BT組中，11名患者中僅有4名妊娠。妊娠率(確認有胎囊的發(fā)育的患者的比例(％))為SEET組91.9X，BT組36.4%;與BT組相比，SEET組的妊娠率的提高在統(tǒng)計學(xué)上顯著(p=0.027)。此外，著床率(所移植的胚泡中發(fā)育至胎囊的胚泡的比例(％))為SEET組70.6%，BT組25.0%;與BT組相比，SEET組的著床率的提高在統(tǒng)計學(xué)上顯著。=0.023)。兩組的患者均未觀察到副作用。[表l]<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>產(chǎn)業(yè)上利用的可能性本發(fā)明作為顯著改善胚泡移植中的妊娠率、著床率的新型妊娠促進劑有用。權(quán)利要求1.一種在胚泡移植中使用的妊娠促進劑，其特征在于，含有將人胚胎在培養(yǎng)基中培養(yǎng)至胚泡而得的培養(yǎng)物的培養(yǎng)上清。2.如權(quán)利要求l所述的妊娠促進劑，其特征在于，所述培養(yǎng)上清是從人胚胎在其中培養(yǎng)了至少2天的培養(yǎng)基得到的培養(yǎng)上清。3.如權(quán)利要求1或2所述的妊娠促進劑，其特征在于，培養(yǎng)在每l個人胚胎10100u1的培養(yǎng)基中進行。4.如權(quán)利要求13中任一項所述的妊娠促進劑，其特征在于，至少含有相當于0.3個人胚胎的量的培養(yǎng)上清。'5.如權(quán)利要求14中任一項所述的妊娠促進劑，其特征在于，所述培養(yǎng)基為無血清培養(yǎng)基。6.—種在胚泡移植中使用的妊娠促進劑的制造方法，其特征在于，包括在培養(yǎng)基中培養(yǎng)人胚胎，從而形成胚泡的步驟；以及收集形成有胚泡的培養(yǎng)液的上清的步驟。7.如權(quán)利要求6所述的妊娠促進劑的制造方法，其特征在于，所述培養(yǎng)進行至少2天。8.如權(quán)利要求6或7所述的妊娠促進劑的制造方法，其特征在于，所述培養(yǎng)在每1個人胚胎10100"1的培養(yǎng)基中進行。9.如權(quán)利要求68中任一項所述的妊娠促進劑的制造方法，其特征在于，至少收集相當于0.3個人胚胎的量的培養(yǎng)上清。10.如權(quán)利要求69中任一項所述的妊娠促進劑的制造方法，其特征在于，所述培養(yǎng)基為無血清培養(yǎng)基。11.一種用于促進人的妊娠的方法，其特征在于，包括將人胚胎在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，直至該人胚胎發(fā)育成胚泡的步驟；將含有該培養(yǎng)物的上清的組合物注射至接受胚泡移植的人類患者的子宮腔內(nèi)的步驟；以及將l個或2個以上的胚泡移植至該患者的子宮腔內(nèi)的步驟。12.如權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于，所述培養(yǎng)進行至少2天。13.如權(quán)利要求11或12所述的方法，其特征在于，所述培養(yǎng)在每l個人胚胎10100u1的培養(yǎng)基中進行。14.如權(quán)利要求1113中任一項所述的方法，其特征在于，所述組合物至少含有相當于0.3個人胚胎的量的培養(yǎng)上清。15.如權(quán)利要求1114中任一項所述的方法，其特征在于，所述培養(yǎng)基為無血清培養(yǎng)基。16.如權(quán)利要求1115中任一項所述的方法，其特征在于，所述組合物的注射在胚泡移植的15天前進行。全文摘要本發(fā)明以人胚泡移植為基礎(chǔ)，揭示了一種用于提高利用該技術(shù)的妊娠的成功率的方法。該方法包括一種在胚泡移植中使用的妊娠促進劑，該妊娠促進劑含有將人胚胎在培養(yǎng)基中培養(yǎng)至胚泡而得的培養(yǎng)物的培養(yǎng)上清。本發(fā)明還揭示了該藥劑的制造方法，以及一種用于促進人的妊娠的方法，該方法包括如下步驟將人胚胎在培養(yǎng)基中培養(yǎng)至胚泡，將含有該培養(yǎng)物的上清的組合物注射至接受胚泡移植的人類患者的子宮腔內(nèi)，然后將胚泡移植至該患者體內(nèi)。文檔編號A61K35/48GK101500585SQ20078002893公開日2009年8月5日申請日期2007年7月31日優(yōu)先權(quán)日2006年8月4日發(fā)明者后藤榮,鹽谷雅英申請人:日本化學(xué)研究株式會社