專利名稱：：癌和其他疾病的預防和治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及癌癥治療領(lǐng)域和特別是使用反轉(zhuǎn)錄酶(RT)抑制劑的組合用于抑制癌細胞生長以及治療和預防癌癥的方法。本發(fā)明還包括使用核苷類似物和其他RT抑制劑連同DNA損害劑例如遺傳毒性試劑或放射或光動力學治療或這些的組合，用于各種癌癥的治療的方法。本發(fā)明還涉及新的核苷化合物，其與脫氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)的特定結(jié)構(gòu)相互作用。更具體地說，本發(fā)明的化合物干擾端粒末端轉(zhuǎn)移酶和反轉(zhuǎn)錄酶的活性，并可以用作抗病毒劑、抗寄生蟲劑、抗菌劑和抗癌劑。
背景技術(shù)：
：細胞分裂(增殖)是在幾乎所有組織中和在許多環(huán)境下都發(fā)生的生理過程。細胞周期的進程都被激酶、磷酸酶和抑制蛋白質(zhì)的組合作用所控制，所述抑制蛋白質(zhì)是被蛋白質(zhì)伴侶及正-及負-磷酸化作用所調(diào)節(jié)的。細胞周期進程的特征在于檢查點(checkpoint)，在此細胞在前進之前確定之前的步驟是否已經(jīng)成功完成。大多數(shù)細胞在它們死亡之前有固定的分裂次數(shù)(大約50次)。PCT申請公開W02005/069880描述了細胞怎樣進入死亡期(Ml和M2)和某些細胞逃避開死亡期的條件，并通過端粒維持以保持不受控制的方式快速分裂的能力。細胞不受控制的和經(jīng)?？焖俚脑鲋衬軐е履[瘤的形成(良性的或惡性的)。良性腫瘤不擴散到身體的其他部分或侵入其他組織，并且它們很少威脅到生命，除非它們壓迫重要的結(jié)構(gòu)或是生理活性的(例如，產(chǎn)生激素例如雌激素)。惡性腫瘤能侵入其他器官，擴散到遠處的位置(轉(zhuǎn)移)和變得危及生命。能夠形成惡性腫瘤的細胞顯示出不受控制的分裂能力(或，它們是永生的)，并且它們通常以與健康組織或甚至良性腫瘤的細胞相比更高的速率分裂。因此，癌癥的治療通常集中于清除惡性細胞。傳統(tǒng)上，據(jù)信許多癌癥治療的效力是由細胞毒性產(chǎn)生，所述細胞毒性來源于化學治療誘導的和/或放射誘導的DNA損害。認為這樣的DNA損害觸發(fā)了細胞調(diào)亡反應(yīng)。例如，據(jù)信卡培他濱(capecitabine)(也被稱為Xeloda)和蒽環(huán)類抗生素柔紅霉素(也被稱為MR)治療誘導細胞毒性，所述細胞毒性是藥物誘導的對DNA損害的結(jié)果。近年來，已經(jīng)建立了更靶向目標的方法，所述方法干擾癌癥細胞中的端粒維持并導致細胞周期停滯和細胞調(diào)亡。通過端粒末端轉(zhuǎn)移酶延長縮短的端粒是已知的人癌癥細胞中的端粒維持機制。端粒末端轉(zhuǎn)移酶維持端粒DNA并在腫瘤細胞永生中扮演了關(guān)鍵性的角色。人端粒末端轉(zhuǎn)移酶在正常體細胞中被抑制或僅有瞬時活性并且端粒在幾十年間逐漸縮短。已經(jīng)報道說在大多數(shù)癌癥中，端粒(盡管短)被端粒末端轉(zhuǎn)移酶所維持。已經(jīng)證明了在端粒末端轉(zhuǎn)移酶活化和腫瘤進展之間的相關(guān)性。這導致本領(lǐng)域技術(shù)人員相信端粒末端轉(zhuǎn)移酶的抑制是用于癌癥治療的有希望的方法。然而，高達30%的不同類型人腫瘤沒有表達端粒末端轉(zhuǎn)移酶。據(jù)報道非端粒末端轉(zhuǎn)移酶調(diào)節(jié)的端粒維持或其它端粒延長存在于高達30%的不同類型人腫瘤、腫瘤衍生細胞系和體外永生化人細胞系中(Bryanetal.，#ecT.3:1271-1274，1997;Reddeletal.，層/",細.155:194-200，2001;Bryanetal.，脫/.C露er33:767-773,1997;Bryanetal.,細O/.14:4240-4248,1995)和在腫瘤和永生細胞系的某些子集中高達50%(Guptaetal.，/.Ca"cer//2^.88:1152-1157(1996))。PCT申請公開WO2005/069880報道說，某些核苷類似物能在端粒末端轉(zhuǎn)移酶陰性癌細胞中誘導細胞調(diào)亡。例如，當用治療濃度的AZT或更昔洛韋(GCV)處理U-20S和Saos-2骨肉瘤細胞時，在治療14天后這些核普類似物在這些癌癥細胞中誘導了端粒縮短、G2期停滯和大量的細胞凋亡。同樣地，美國專利6，723，712報告了用于治療癌癥的某些核苷類似物。特別地，它報道了抗病毒核苷磷酸類似物、西多福韋和放射的組合作為用于治療人癌癥的方法。特別地，它報道說當用放射和西多福韋單獨處理Ramos(淋巴瘤)HTB31和SCC97(癌瘤)細胞時，單獨放射和單獨西多福韋兩者都誘導弱的生長延遲，然而兩種試劑的相伴聯(lián)合對于研究的腫瘤細胞劇烈的減少生長延遲。另外，Sci瞧纖etal.，2005，Oncogene24:3923,才艮道"i兌內(nèi)源性的反轉(zhuǎn)錄酶(RT)或非端粒末端轉(zhuǎn)移酶反轉(zhuǎn)錄酶是一種細胞增殖的后生調(diào)節(jié)劑，并且在動物試驗中體內(nèi)RT活性的抑制拮抗腫瘤生長。這些報道說明用于抑制癌癥細胞生長的治療在穩(wěn)步進展。然而，仍存在這樣的事實，即使目前最好的治療也并不總是足夠有效和/或經(jīng)常在治療之后變得無效，并且經(jīng)常伴隨有顯著的副作用，因此一直在尋找改良的抗癌治療。已知合成核苷類似物是治療有益的，尤其是，作為抗病毒、抗生素和抗癌劑。這些核苷類似物中的許多都在市場上出售。然而，盡管有廣泛的藥物化學研究，病原體抗性的增加和在化學治療中核苷通常嚴重的副作用加強了對核苷類似物較高數(shù)量和多樣性的需要。特別地，對于方法和藥劑的需要持續(xù)存在，所述方法和藥劑用于實現(xiàn)對異常細胞增殖的足夠控制和對癌癥的治療，所述異常細胞增殖包括癌細胞異常生長潛能。發(fā)明概要治療病況的需求，所述病況的特征在于細胞增殖，包括但不限于，癌和轉(zhuǎn)移。發(fā)明還公開了在酶促核酸合成/延長反應(yīng)中用作鏈終止劑的新無環(huán)核苷類似物。本發(fā)明是部分地基于如下發(fā)現(xiàn)，多種端粒維持機制(T麗)的同時抑制導致在癌癥細胞中漸進的端粒縮短和細胞周期的G2/M期停滯，從而限制了細胞的增殖潛能。它還表明了在缺少這種同時抑制的情況下，細胞通過從一種端粒維持機制切換為另一種來繼續(xù)異常增殖。為了同時抑制多種端粒維持機制，使用化合物(幾種反轉(zhuǎn)錄酶的抑制劑)的組合。此外，本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)T固的同時抑制使癌細胞對任意種類的DNA損害治療(例如，遺傳毒性化學治療、放射治療、光動力學治療)更敏感。更具體地說，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了端粒維持的抑制，導致在癌細胞中端粒縮短和G2/M期停滯，不僅能限制細胞的異常增殖而且能增加DNA損害劑的效力，因為也許是由于G2/M期停滯，細胞對這種試劑最敏感。一方面，本發(fā)明提供了一種用于治療具有以異常哺乳動物細胞增殖為特征的病況的患者的方法。該方法包括向需要這種治療的患者施用抑制增殖有效量的化合物的端粒維持影響(或端?？s短)組合，其中所述組合是雙雞尾酒組合或三雞尾酒組合。根據(jù)一個具體實施方式，患者以某種方式和以某種數(shù)量使用給定的化合物雞尾酒治療，以抑制原發(fā)腫瘤的增殖，或抑制轉(zhuǎn)移擴散或生長，同時最小化全身性毒性的可能，特別是由于使用其他DNA損害劑。在某些具體實施方式中，異常的哺乳動物細胞增殖顯現(xiàn)為腫瘤。意欲通過本發(fā)明方法治療的一些病況包括良性的(即，非癌的)、惡性前的和惡性的(即，癌)腫瘤。在某些具體實施方式中，以異常哺乳動物細胞增殖為特征的病況的特征還在于存在具有與它們在連續(xù)細胞分裂后的正常對應(yīng)物相比的長端粒的細胞。在其他具體實施方式中，異常哺乳動物細胞增殖可以是一種病況，其被診斷為癌瘤、肉瘤和黑素瘤。在其他具體實施方式中，所述病況是結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、腎癌、黑素瘤和纖維肉瘤的任一種。在其他具體實施方式種，所述病況可以是與骨和結(jié)締組織肉瘤相關(guān)的一種，其實例包括，但不限于，骨肉瘤和纖維肉瘤。在某些其他具體實施方式中，所述異常哺乳動物細胞增殖是在上皮細胞中。某些以異常哺乳動物上皮細胞增殖為特征的病況包括上皮組織例如乳腺、結(jié)腸和前列腺的腺瘤，以及惡性腫瘤。根據(jù)本發(fā)明的其他具體實施方式，提供了一種用于治療具有上皮來源的轉(zhuǎn)移的患者的方法。如上所述，待治療的患者是具有以異常哺乳動物細胞增殖或癌為特征的病況的患者。然而，在某些具體實施方式中，所述患者沒有異常哺乳動物細胞增殖或癌，但很可能產(chǎn)生這種病況(根據(jù)某些生物標記物或遺傳缺陷)，從而要求用化合物的組合來治療，用于端?？s短和G2/M期停滯。在本發(fā)明的另一個方面，提供了一種方法，其中將能夠影響端粒維持的化合物的組合與一個或多個DNA損害劑例如遺傳毒性化學治療劑組合施用。在另一個具體實施方式中，將有或沒有DM損害劑的化合物的組合與手術(shù)組合施用，以移除異常增殖細胞團塊。在相關(guān)的具體實施方式中，將有或沒有DNA損害劑的化合物的組合施用到巳經(jīng)進行了手術(shù)的患者，以移除異常增殖細胞團塊。在一些具體實施方式中，所述異常的哺乳動物細胞增殖表現(xiàn)為腫瘤。在另一個具體實施方式中，所述異常哺乳動物細胞增殖選自癌瘤、肉瘤和黑素瘤。在另一個具體實施方式中，以異常哺乳動物細胞增殖為特征的病況是轉(zhuǎn)移。在其他具體實施方式中，所述病況選自乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、腎癌、肺癌、黑素瘤和纖維肉瘤。在另一個具體實施方式中，所述異常哺乳動物細胞增殖在上皮細胞中，意指上皮細胞是異常增殖的?；衔锏慕M合或其組合物可以全部以全身性的方式施用，通過以下施用途徑例如，但不限于，口服、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)和腹膜內(nèi)施用。然而，在有些情況下，包含三個不同化合物的組合，兩個可以被全身性施用，而第三個通過其他途徑施用。全身性施用途徑是優(yōu)選的，例如，如果患者具有轉(zhuǎn)移性的病灶時。也可以局部施用給定組合的部分或全部化合物。在某些具體實施方式中，將化合物或包含所述化合物的組合物靶向至腫瘤。這能通過特定的施用方式來實現(xiàn)。例如，容易接近的腫瘤例如乳腺或前列腺腫瘤可以通過直接的針刺注射到病灶位點來乾向。肺腫瘤可以通過使用作為施用途徑的吸入來把向。雖然不是必須的，但在某些具體實施方式中，給定組合的一個或靶向到細胞團塊(例如，胖瘤)。在某些具體實施方式中，所述化合物通過使用耙向化合物靶向到原發(fā)病灶或在某些情況下繼發(fā)(即，轉(zhuǎn)移)病灶，所述乾向化合物優(yōu)選的識別細胞表面標記物。在其他具體實施方式中，給定組合的一個或多個化合物也可以在持續(xù)釋放制劑中施用。因此，在本發(fā)明的一個方面，公開了分子式U)、(n)、(ni)、(iv)、(v)和(vi)的胸腺嘧啶和腺噪呤衍生物。公開了分子式u)、(n)、(in)、(iv)、(v)和(vi)的的生理上可接受的鹽、光學異構(gòu)體和前體藥物。在一個具體實施方式中，胸腺嘧啶衍生物是1-(2-羥基乙氧基甲基)和腺嘌呤衍生物是9-(2-羥基乙氧基甲基)腺噪呤。還公開了具有作為活性成分的分子式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)的化合物與藥學上可接受的載體結(jié)合的藥物制劑。在本發(fā)明的另一個方面，公開了用于在動物或人類患者中治療癌癥的方法。其包括施用治療有效量的組合物，所述組合物具有作為活性成分的分子式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)的化合物或其生理上可接受的鹽或其光學異構(gòu)體與疊氮基-2、-二脫氧胸腺嘧啶核苷(AZT)和2'，-雙去氧肌苷(去羥肌苷(didanosine)或ddl)結(jié)合。所述組合物進一步包含治療有效量的具有抗癌劑例如，環(huán)磷酰胺、卡培他濱、紫杉醇、順鉑、卡鉑、喜樹堿和/或多柔比星的組合物。除了基于使用無環(huán)、抗端粒末端轉(zhuǎn)移酶、抗L1RT和抗腫瘤藥的核苷類似物的治療方面之外，本發(fā)明還提供了用于檢測表達端粒末端轉(zhuǎn)移酶或L1RT的病理增殖細胞的診斷方法和試劑盒。下文將更詳細地描述本發(fā)明的這些或其他方面。在整個公開中，所有的技術(shù)和科學術(shù)語具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員所通常理解的相同的意思，除非另外定義。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及用于在增殖細胞中縮短端粒的方法和組合物。本發(fā)明還涉及用于抑制增殖細胞生長的方法和組合物。端粒的縮短或細胞生長的抑制在這些細胞中對端粒維持機制的干擾，更特別地伴隨有對這些細胞中反轉(zhuǎn)錄酶(RT)活性的干擾來完成?；衔锏慕M合被用于這些目的。這些化合物縮短端?；蛴绊懚肆＞S持，并從而影響病理性增殖細胞(例如，癌細胞)的生長性質(zhì)和/或?qū)е滤劳?。端粒在允許線形染色體DNA末端被完全復制而在每個鏈的5'端處無末端堿基損失中發(fā)揮作用。永生細胞和快速增殖細胞利用RT來把端粒的DNA重復TTAGGG添加至染色體末端。抑制RT能導致增殖細胞不能夠增加端粒，因此它們將最終停止進一步分裂。用于本發(fā)明的化合物組合將在癌細胞中影響端粒維持或誘導端?？s短、G2/M停滯和/或大量的細胞調(diào)亡。對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說很明顯，這種用于影響端粒維持和抑制細胞增殖能力的方法可用于治療與細胞增殖相關(guān)的病況例如癌癥，或治療生殖語系細胞，其可用于避孕的目的。如上所述，對于癌細胞，已知端粒末端轉(zhuǎn)移酶的活性涉及端粒維持和細胞永生，并且癌細胞可以是端粒末端轉(zhuǎn)移酶陽性的或端粒末端轉(zhuǎn)移酶陰性的。在本領(lǐng)域中還已知端粒末端轉(zhuǎn)移酶陰性癌細胞通過端粒延長的替代機制(ALT)來維持它們的端粒和永生。最近，已經(jīng)報道說LI(LINE-1)逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子反轉(zhuǎn)錄酶(L1RT)與延長相關(guān)，因此與端粒末端轉(zhuǎn)移酶陰性癌細胞中的端粒維持有關(guān)(見W02005/069880)。因此，L1RT是端粒末端轉(zhuǎn)移酶陰性癌細胞中的端粒延長替代機制之一。這些報告說明，細胞的永生化包括端粒末端轉(zhuǎn)移酶陽性細胞中的端粒末端轉(zhuǎn)移酶(例如，hTERT)和端粒末端轉(zhuǎn)移酶陰性細胞中的L1RT的活化。集中于端粒末端轉(zhuǎn)移酶或L1RT的靶向治療可以顯著地減少癌細胞的生長或腫瘤生長，并因此在某種程度上可以是有效的。然而，迄今為止，還沒有被明確確認為是端粒末端轉(zhuǎn)移酶抑制劑或L1RT抑制劑的藥物在人類患者中作為抗癌劑進行測試。目前在癌癥治療中的一個主要挑戰(zhàn)是有效地治療給定癌癥。大量的努力旨在尋找對癌癥越來越有效的治療。據(jù)此精神，本發(fā)明人目前發(fā)現(xiàn)，由于癌細胞切換端粒維持機制或激活給定端粒維持機制的能力，針對端粒末端轉(zhuǎn)移酶或L1RT的耙向治療不足以有效地治療給定癌癥。切換或激活可以是自發(fā)的、由進行中的靶向到特定端粒維持機制的癌癥治療所誘導和/或是由于另外的基因組不穩(wěn)定性。例如，使用L1RT抑制劑的癌癥治療可以抑制該酶的活性，并且這種抑制可以初始停滯癌細胞的生長。然而，如同能從本發(fā)明公開中發(fā)現(xiàn)的，癌細胞能依靠或激活其他端粒維持機制并開始以不受控制的方式增殖。這有些類似于在傳統(tǒng)癌癥治療中遇到的抗藥性。在本發(fā)明中，癌細胞生長的抑制是通過使用能夠影響這些細胞的生長性質(zhì)和/或?qū)е滤劳龌衔锏慕M合來實現(xiàn)的。盡管不希望被理論所限制，但相信對由癌細胞激活的超過一種端粒維持機制(TMM)的同時抑制經(jīng)常能有效的用于治療任意癌癥。所述化合物特定干擾幾個在癌細胞中可見的反轉(zhuǎn)錄酶(RT)分子的活性或表達，并且從而對許多種惡性腫瘤的預防或治療有用。這些RT包括端粒末端轉(zhuǎn)移酶和Ll(LINE-1)逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子編碼的反轉(zhuǎn)錄酶(L1RT)。另外，據(jù)信癌細胞可以激活用于延長端粒的非L1RT反轉(zhuǎn)錄酶(ALT的一種)。非L1RT包括長末端重復(LTR)逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子編碼的反轉(zhuǎn)錄酶(或LTRRT)和逆轉(zhuǎn)錄病毒來源的RT，其對癌細胞可以是內(nèi)源性的或外源性的。用于本發(fā)明的化合物的組合，其通過干擾一種或多種RT,在癌細胞中影響端粒維持或誘導端?？s短、G2/M停滯(在本文中也指G2停滯)和/或大量的細胞調(diào)亡。特別是，本發(fā)明的化合物能提供一種預防或治療惡性腫瘤的高度普遍的方法，如同通過它們抑制端粒末端轉(zhuǎn)移酶陽性和端粒末端轉(zhuǎn)移酶陰性人腫瘤細胞系兩者和表達幾種RT的腫瘤的能力所證明的。更重要地，在本發(fā)明中描述的抑制劑在腫瘤細胞系中而不是在正常細胞中，于細胞分裂期間誘導端粒減少。還可以預料所述抑制劑在它們建議使用的RT抑制濃度時，在正常細胞中不顯示明顯的細胞毒性作用。因此，所述抑制劑能有效的提供選擇性靶向惡性腫瘤細胞的治療，因此有效地避免通常與細胞毒性化學治療試劑相關(guān)的許多不希望的副作用。因此，使用本發(fā)明化合物組合的癌癥治療能被稱為是一種基于組合的分子靶向癌癥治療。利用所述組合來影響端粒維持或誘導端粒縮短的治療在本文中指端?？s短治療或基礎(chǔ)治療(backgroundtherapy)。這種分子靶向癌癥治療能與一種或多種已知的其他抗癌治療結(jié)合，其中包括細胞毒化學治療、生物治療、光動力學治療和放射治療，并被用作有效的癌癥治療。影響端粒維持(或端?？s短)的化合物組合意指TERT(也指端粒末端轉(zhuǎn)移酶)抑制劑和L1RT抑制劑的組合(指雙雞尾酒的組合)或者端粒末端轉(zhuǎn)移酶RT抑制劑、L1RT抑制劑和非L1RT抑制劑的組合(指三雞尾酒組合)。通過施用雙雞尾酒或三雞尾酒的治療在本文中指基礎(chǔ)治療。用作本發(fā)明化合物組合的一部分的抑制劑或拮抗劑是如下抑制劑或拮抗劑，其能(1)特異地與給定的RT相互作用或結(jié)合(在該酶的mRNA或蛋白質(zhì)或模板RNA)以抑制RT的表達或活性和/或(2)并入端粒的DNA重復中，從而在細胞中影響端粒維持或端粒長度。例如，對應(yīng)于在端粒重復序列TTAGGG中的一個或多個核苷酸的核苷類似物，能合并入延長的端粒并影響端粒維持或當細胞經(jīng)過幾輪細胞增殖過程時侵蝕端粒長度。抑制劑可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的小分子、肽、顯性陰性突變體蛋白質(zhì)、抗體、或抗體片段、和核酸結(jié)構(gòu)、反義結(jié)構(gòu)、對應(yīng)于在選定RT中確定的目標區(qū)的dsRNA、寡核苷酸中的任意一種。所使用的抑制劑將產(chǎn)生對RT或給定RT的抑制。在本文中使用時，術(shù)語"RT的抑制"是指反轉(zhuǎn)錄酶類的端粒末端轉(zhuǎn)移酶、L1RT和/或非L1RT的直接可測量的抑制，如所顯示的例如，通過4吏用SpeddingG.1996，JMolRecognit.，9(5-6):499-502描述的非放射性分析系統(tǒng)所表明的，或根據(jù)在所有細胞中平均端粒長度的減少，其如同通過使用Wegeetal.，2003,SYBRGreenreal-timetelomericrepeatamplificationprotocolfortherapidquantificationoftelomeraseactivity,NucleicAcidsRes.31(2):E3-3所描述的TRAP分析所表明的，或單個端粒的侵蝕(見LansdorpPM，Heterogeneityintelomerelengthofhumanchromosomes,HumMolGenet.,1996，5(5):685-91)或在單個細胞中的使用在公開文獻中描述的FISH分析(見HultdinMetal.，1998，Telomereanalysisbyfluorescenceinsituhybridizationandflowcytometry,NucleicAcidsRes.，26(16):3651-3656)。同樣地，本領(lǐng)域技術(shù)人員知道怎樣確定特定的雞尾酒是否已經(jīng)在細胞中誘導了端粒縮短。例如，可以進行末端限制性片段(TRF)分析》其中通過使用對某些序列特異的限制酶消化來分析來自腫瘤細胞的DNA。這種分析的一個實例描述在VaziriH，1993,LossoftelomericDNAduringagingofnormalandtrisomy21humanlymphocytes,AmJHumGenet.，52(4):661-7中。例如，在DNA消化之后，進行凝膠電泳以根據(jù)大小來分離限制性片段。然后，用對端粒序列特異的核酸探針來探測分離的片段，以確定在樣品中包含細胞端粒DNA的末端片段的長度。通過測量端粒DNA的長度，能估計給定的雞尾酒是否誘導了端?？s短并應(yīng)當施用多長的雞尾酒。另外，在治療期間，可以測試細胞以確定在進行的細胞分裂中是否發(fā)生了端粒長度的降低，來證明治療的效力。最近，已經(jīng)報道了新開發(fā)的納米傳感器用于快速篩選反轉(zhuǎn)錄酶(端津立末端轉(zhuǎn)移酶)的用途(Grimmetal.，2004，CancerResearch64:639-643)。所述技術(shù)利用磁性納米微粒，一旦與端粒末端轉(zhuǎn)移酶合成的TTAGGG重復相退火，使切換它們的磁狀態(tài)，通過磁性讀出器能容易地檢測到該現(xiàn)象。通過磁共振成象對這種技術(shù)進行高通量改造據(jù)報道允許在數(shù)十分鐘內(nèi)以超高敏感性處理數(shù)百樣品，并定量反轉(zhuǎn)錄酶的活性?？傊@些研究建立了用于快速檢測在生物樣品內(nèi)(包括肺瘤細胞和組織)的反轉(zhuǎn)錄酶活性和定量治療性抑制的分析法和工具。本質(zhì)上，在本發(fā)明中，所述抑制劑被用于抑制細胞的生長。例如，當患者被施用給定的抑制劑組合時，它們通過影響端粒維持或通過引起進行性端?？s短、在細胞中的細胞周期停滯和/或細胞的大量細胞調(diào)亡來抑制癌細胞的生長。據(jù)信與雙雞尾酒組合相比三雞尾酒組合在抑制癌細胞生長中更有效，因為，如在本文中證明的，通過添加形成三雞尾酒組合的抑制劑，能抑制在雙雞尾酒組合的情況下持續(xù)增殖的細胞。優(yōu)選的端粒末端轉(zhuǎn)移酶抑制劑是核苷類似物。實際上，核苷類似物是被證明對抗病毒感染有效的第一等化合物之一。阿昔洛韋被廣泛的用在皰瘆感染的治療中。第一批被批準的四種抗艾滋病病毒藥，AZT、ddl、ddC和D4T，也是核苷類似物。這些核苷類似物被漸進地磷酸化為5'-三磷酸，然后其在反轉(zhuǎn)錄酶(RT)反應(yīng)中充當鏈終止劑。在本發(fā)明中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，某些新的胸腺嘧啶和腺嘌呤衍生物能與脫氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)的特定結(jié)構(gòu)相互作用。例如，這些衍生物能合并到增殖細胞內(nèi)的端粒重復中，從而干擾端粒維持。對于癌細胞的治療，端粒末端轉(zhuǎn)移酶是高度吸引人的靼位。因此，從治療的觀點來看，本發(fā)明化合物的一個優(yōu)點，是在病理性的增殖細胞中阻斷端粒末端轉(zhuǎn)移酶的活性。因此，在一個方面，本發(fā)明提供了組合物和方法，其包括使用能夠在端粒末端轉(zhuǎn)移酶陽性細胞中干擾端粒延長的無環(huán)核苷類似物。本發(fā)明的一些具體實施方案中設(shè)計的無環(huán)核苷類似物具有嘌呤(或嘧夂)骨架和尾部(例如，9-(1，3-二羥基-2-丙氧基甲基基團))，但缺少幾基環(huán)狀環(huán)(戊糖)。在一些具體實施方式中，本發(fā)明嘧啶骨架和尾部(例如，9-(1，3-二羥基-2-丙氧基甲基基團))，但缺少羥基環(huán)狀環(huán)(戊糖)。在一些具體實施方式中，本發(fā)明的噤呤基核苷類似物在鳥嘌呤骨架的第二位缺少冊2基團。許多無環(huán)核苷類似物在本領(lǐng)域中是已知的。例如，它們是阿昔洛韋、更昔洛韋、噴昔洛韋和相應(yīng)的前體藥物，即，分別為伐昔洛韋、纈更昔洛韋和泛昔洛韋。阿昔洛韋12通過模仿細胞DNA成分，鳥嘌呤，來起作用。即是DNA的AT-CG中的"G"。阿昔洛韋(9-[2(氯甲氧基)-甲基]鳥嘌呤)，盡管結(jié)構(gòu)類似于"G"，失去了它的尾部-羥基"環(huán)狀"環(huán)(戊糖)，因此它是"無環(huán)的"。更昔洛韋和噴昔洛韋也是"無環(huán)的"，因為它們也缺少羥基環(huán)狀環(huán)。在本發(fā)明的具體實施方式中，本發(fā)明無環(huán)核苷類似物的尾部有至少一個羥基，其模仿核苷的2'-脫氧核糖部分的3'-和5'-羥基基團。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的無環(huán)核苷類似物并在臨床可接受的劑量顯示出抗端粒末端轉(zhuǎn)移酶和抗腫瘤藥性質(zhì)并只顯示出臨床可接受毒性程度。本發(fā)明的化合物符合預期的目的，就是說，其在癌細胞內(nèi)通過合并入延長的端粒中與DM相互作用，并從而顯示出端粒末端轉(zhuǎn)移酶抑制活性，其是無環(huán)核苷類似物，所述無環(huán)核苷類似物是端粒末端轉(zhuǎn)移酶抑制劑并具有對上述端粒末端轉(zhuǎn)移酶的專一性。優(yōu)選的本發(fā)明無環(huán)核苷類似物對應(yīng)以下分子式，及它們藥學上可接受的鹽或其酯例如，分子式(I)或(II)的無環(huán)核苷類似物，具有在胸腺嘧啶1-位或在腺噪呤的9-位取代的尾部(即，2-羥基乙氧基甲基)，有在端粒延長上非常特異的作用機理。它們是特異的抑制劑，因為這些化合物至少在特定的臨床可接受的濃度抑制端粒末端轉(zhuǎn)移酶調(diào)節(jié)的端粒延長而不抑制Ll(LINE-1)逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子反轉(zhuǎn)錄酶(L1RT)調(diào)節(jié)的端粒延長。本質(zhì)上，本發(fā)明的化合物是鏈終止劑。術(shù)語"鏈終止劑"是指核苷類似物，其作為用于核酸聚合酶的底物，但一旦合并到生長中的聚核酸鏈的末端上，類似物本身不能作為用于后續(xù)核苷酸殘基附著的底物。因此，由于它們合并入細胞和病毒的DNA和RM的特定結(jié)構(gòu)從而千擾細胞的酶(例如，端粒末端轉(zhuǎn)移酶)和病毒的酶的能力，本發(fā)明的化合物(鏈終止劑)能被治療性地用作抗癌劑、抗病毒劑、抗生素、抗精神病劑、止痛劑、抗炎劑、抗高血壓劑。本發(fā)明的化合物能以旋光體的形式存在，即，它們有旋轉(zhuǎn)平面偏振光的平面的能力。它們包括d和1或(+)和(-)型(包括立體異構(gòu)體、對映體或?qū)τ丑w混合物)。對于使用(R)或(S)的情況，是根據(jù)整個化合物的情況而不是在取代基自身的情況命名取代基的絕對構(gòu)型。本發(fā)明也包括前體藥物。根據(jù)本發(fā)明，前體藥物是一種其中作為活性藥物的母體藥物(例如SNI)被化學轉(zhuǎn)化為本身無活性的衍生物，其在抵達作用位點之前或之后在生理環(huán)境內(nèi)(在身體內(nèi))借助于化學的或酶促的作用被轉(zhuǎn)變?yōu)槟阁w藥物。換句話說，本發(fā)明化合物的衍生物是前體藥物，其具有化學上或代謝上可分裂的基團并在生理條件下變成在體內(nèi)有藥學活性的本發(fā)明化合物。因此，前體藥物的制備包括把活性藥物轉(zhuǎn)變成非活性形式的方法。這些方法對本領(lǐng)域人員來說是熟知的。根據(jù)本發(fā)明的前體藥物是栽體連接的前體藥物而不是生物前體。所述載體連接前體藥物能由活性分子與轉(zhuǎn)運部分的暫時性鍵合產(chǎn)生。這些前體藥物與根源活性藥物相比是較少活性的或無活性的。所述運載部分，其不被限制到任意特定的化合物或基團，將針對它的無毒性和它的確?；钚猿煞忠杂行У膭恿W釋放的能力來選擇。例如，如本領(lǐng)域技術(shù)人員所知，能通過形成活性藥物的酯、半酯、硝酸酯、酰胺、碳酸酯、氨基甲酸酯、亞胺或用偶氮、糖苷、肽和醚官能團功能化處理藥物或使用聚合物等等來制備前體藥物。制備前體藥物以通過增加吸收和分布以及減少毒性和增加藥物藥理作用的持續(xù)時間，來改變藥物的藥代動力學、改善藥物的生物利用率。在前體藥物的設(shè)計中，能考慮多種因素，例如在載體和藥物之間的鍵通常是共價鍵，與活性母體相比前體藥物是無活性或較少活性的，前體藥物是藥物的可逆的或生物可逆的衍生物和當釋放時栽體部分是無毒的和無活性的。在一個具體實施方式中，通過形成活性藥物的酯(例如，纈氨酸酯)或分子式I至VI的化合物來制備前體藥物。載體部分(例如，纈氨酸)能被添加到目的化合物的尾部。這些纈氨酸酯化合物，當被體外或體內(nèi)施用到細胞時，轉(zhuǎn)變?yōu)榛钚曰衔铮涫欠肿邮?I)和(VI)中的任一個。在本發(fā)明中，已經(jīng)顯示(參看下文的實施例)無環(huán)核苷類似物能在哺乳動物細胞中靶向端粒末端轉(zhuǎn)移酶并影響端粒延長(或損害端粒)。為了在哺乳動物細胞中靶向L1RT或其他非端粒末端轉(zhuǎn)移酶并影響端粒延長(或損害端粒)，使用包括阿昔洛韋、更昔洛韋、噴昔洛韋和/或分子式I至VI的化合物或相應(yīng)前體藥物(例如，纈氨酸酯，即，活性藥物的伐昔洛韋、纈更昔洛韋和泛昔洛韋酯)和/或其他核苷類似物例如AZT和ddl中任意的無環(huán)核苷類似物。核苷類似物例如阿昔洛韋、更昔洛韋、噴昔洛韋和相應(yīng)前體藥物，即，伐昔洛韋、纈更昔洛韋和泛昔洛韋，都被批準在臨床上用作抗病毒藥。例如，阿昔洛韋、更昔洛韋、噴昔洛韋和相應(yīng)前體藥物是眾所周知的用于治療或減輕皰滲病毒或/和CMV感染的藥物，它們在腫瘤疾病治療中的用途是未知的。噴昔洛韋被用在人的口唇和面部上來治療由單純皰滲病毒引起的唇皰滲(coldsore)。在本領(lǐng)域還已知對于這些核苷類似物的靶酶是DNA聚合酶。它們的化學結(jié)構(gòu)和用于對抗病毒感染的劑量方案是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。據(jù)信核苷類似物一旦進入增殖細胞，將被磷酸化(例如，二和三磷酸類型)并與端粒末端轉(zhuǎn)移酶反應(yīng)的天然底物(例如，dGTP)竟爭。所述磷酸化類似物能抑制天然底物合并入生長中的端粒DNA鏈中，或自己能被合并入DNA中，從而干擾端粒末端轉(zhuǎn)移酶或L1RT調(diào)節(jié)的，合活性，其最終導致鏈延長的終止。本質(zhì)上，這些核普類似物，通過終止鏈的延長，損害端粒DNA，縮短端粒和導致細胞調(diào)亡。與正常細胞相比對快速生長細胞(例如腫瘤)的端粒的損害更加有害。與現(xiàn)有技術(shù)已知的核苷類似物例如AZT相比，本發(fā)明的核苷類似物是端粒延長更有效并是端粒延長的選擇性抑制劑；與核苷類似物例如AZT相比，臨床可接受的劑量足以實現(xiàn)端粒長度的減少和端粒末端轉(zhuǎn)移酶陽性細胞的細胞凋亡或死亡。其他端粒末端轉(zhuǎn)移酶抑制劑可以是化學試劑例如2，6-二氨基-蒽醌和羰花青染料、3，3'-二乙基惡二羰花青(D0DC)(和其他端粒DM相互作用試劑)、端粒末端轉(zhuǎn)移酶模板拮抗劑(例如，覆蓋端粒末端轉(zhuǎn)移酶中RNA模板區(qū)域的反義寡核苷酸；特別地，例如，脂質(zhì)綴合的硫代氨基磷酸酯，N3'-P5、與包含在RT的RNA組件中的模板序列互補的寡核苷酸序列)、針對端粒末端轉(zhuǎn)移酶RNA的反義結(jié)構(gòu)、直接針對端粒末端轉(zhuǎn)移酶RNA的序列特異性的肽-核酸。對于本發(fā)明來說，盡管在先公開涉及到AZT作為端粒末端轉(zhuǎn)移酶抑制劑，但AZT不是端粒末端轉(zhuǎn)移酶抑制劑。在優(yōu)選具體實施方式中，待抑制的端粒末端轉(zhuǎn)移酶是哺乳動物端粒末端轉(zhuǎn)移酶，例如人端粒末端轉(zhuǎn)移酶。優(yōu)選的L1RT抑制劑是核苷類似物AZT、阿昔洛韋、更昔洛韋、噴昔洛韋和它們的前體藥物。優(yōu)選的前體藥物是伐昔洛韋、纈更昔洛韋和泛昔洛韋。其他的L1RT抑制劑可以是反義結(jié)構(gòu)和寡核苷酸(見W02005/069880，其公開在此通過參考引入本文)。例如，能使用相應(yīng)于人Ll逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子(GenBankGI:5070620)的核苷酸1987-2800的反義序列。核酸殘基的序列或所述核酸殘基更長序列的一部分的核苷酸能被用作寡核苷酸。它們包括，例如，5，-CCAGAGATTCTGGTATGTGGTGTCTTTGTT-3',5'-CTTTCTCTTGTAGGCATTTAGTGCTATAAA-3，，5'-CTCTTGCTTTTCTAGTTCTTTTAATTGTGA-3，，5，-CTTCAGTTCTGCTCTGATTTTAGTTATTTC-3，，和5'-TCCTGCTTTCTCTTGTAGGCA-3，。優(yōu)選的非TERT和非L1RT抑制劑是核苷類似物AZT和ddl。其他的非TERT和非L1RT抑制劑可以是反義結(jié)構(gòu)和寡核苷酸。在優(yōu)選具體實施方式中，待抑制的非L1RT是人非LlRT和/或逆轉(zhuǎn)錄病毒來源的非L1RT。已經(jīng)在先公開了本發(fā)明的許多抑制劑和制造它們的方法。例如，通過在美國專利5，011，774公開的方法合成化合物ddl和在美國專利5，075，445中公開的噴昔洛韋。優(yōu)選的雙雞尾酒是AZT和ACV或噴昔洛韋(PCV)的組合。優(yōu)選的三雞尾酒是AZT和無環(huán)核苷類似物和ddl的組合，然而更優(yōu)選的三雞尾酒是AZT和ACV或其前體藥物和ddl。優(yōu)選的用于治療NSCLC(例如，SK-LU-1細胞，這種細胞^皮i人為是同時端粒末端轉(zhuǎn)移酶陰性和L1RT陰性的)的三雞尾酒是AZT和PCV和ddI。本發(fā)明描述的化合物組合在細胞抽提物中、在培養(yǎng)細胞中和在體內(nèi)抑制反轉(zhuǎn)錄酶。使用本發(fā)明的雙雞尾酒抑制癌細胞生長的方法不包括與病毒相關(guān)癌癥(例如，卡波西肉瘤)的治療，其中所述癌癥的發(fā)生與病毒的感染有關(guān)，所述病毒選自皰滲病毒、腺病毒(21)、多形瘤病毒、乳頭瘤病毒(HPV)、埃-巴二氏病毒、肝炎DNA病毒(HBV或HCV)。在本發(fā)明中，術(shù)語"處理"或"治療"意指包括增殖細胞，特別是不適當?shù)鼗虿±淼卦鲋臣毎蛴郎毎模r或疾病的體外、離體或在患者中的任意治療，或者其意指癌癥的治療。骨髓凈化是一種離體的治療的實例。該術(shù)語包括抑制病況或疾病(例如，停滯其發(fā)展)或減輕病況或疾病(例如，引起退化)或延遲增殖細胞的生長或誘導細胞凋亡或程序化細胞死亡。意欲通過本發(fā)明的方法治療的一些病況包括良性的(即，非癌的)、惡性前的和惡性的(即，癌)腫瘤。在本文中使用術(shù)語"異常哺乳動物細胞增殖"意指一種病況或病癥，其中與它們的正常組織對應(yīng)物相比細胞的局部區(qū)域(例如，腫瘤)顯示出異常(例如，增加)的分裂速率。在本文中使用的以異常哺乳動物細胞增殖為特征的病況包括但不限于包含有由良性、惡性前或惡性特性的實體瘤團塊的病況。實際上，正常細胞有時變成不適當?shù)貧獠±硇缘卦鲋臣毎蛴郎毎?例如，由于p53缺失或突變)，并獨立于細胞的正常調(diào)節(jié)機制來繁殖。這些細胞被認為是不適當?shù)鼗虿±淼卦鲋臣毎蛴郎毎?，因為由于細胞成分的活動，如上述的反轉(zhuǎn)錄酶，它們脫離了正常細胞的表現(xiàn)型。當然，在本文中使用的術(shù)語"不適當?shù)卦鲋臣毎?可以是良性的高增殖細胞，但除非另有說明這些細胞意指惡性的高增殖細胞，其是多種腫瘤和癌的特征，其中包括胃癌、骨肉瘤、肺癌、胰腺癌、腎上腺皮質(zhì)癌或黑素瘤、脂肪癌、乳腺癌、卵巢癌、子宮頸癌、皮膚癌、結(jié)締組織癌、子宮癌、肛門與生殖器癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌、視網(wǎng)膜癌、血液和淋巴癌、腎癌、膀胱癌、結(jié)腸癌和前列腺癌。術(shù)語"處理"或"治療"在患者或哺乳動物或人中的癌包括以下一個或多個誘導細胞凋亡或抑制癌的生長，即，停滯它的生長、預防癌的擴散，即，防止轉(zhuǎn)移、減輕癌癥，即，引起癌的退化、預防癌的復發(fā)和緩和癌的癥狀(例如，通過在沒有顯著癌進展的情況下暫停細胞毒治療來改善這種治療的副作用)。術(shù)語"抑制癌細胞生長"或"細胞生長的抑制"也可以指減少或防止細胞分裂。因此，在一個方面，本發(fā)明是發(fā)現(xiàn)，雙雞尾酒或三雞尾酒當以有效影響端粒維持的數(shù)量施用患者時，能縮短在腫瘤中的端粒長度。本發(fā)明的這個方面包括干擾患有端粒維持調(diào)節(jié)的病況或疾病的患者(或患者)，優(yōu)選為人，的端粒維持。因此，根據(jù)本發(fā)明的這個方面，提供了一種治療方法和用于治療端粒維持調(diào)節(jié)的病況或疾病的藥物組合物。治療包括向需要這種治療的患者施用藥學組合物，所述藥學組合物包括藥學栽體和治療有效量的在本發(fā)明組合中的各種化合物，即治療有效量的雙雞尾酒或三雞尾酒。對于雙和三雞尾酒，應(yīng)注意到本發(fā)明的化合物組合能以任一以下合適的形態(tài)存在(i)作為單獨的化合物或組成部分(例如，在三雞尾酒的情況下是至少三個不同的片劑)，包括至少一個單獨組分是藥學上可接受鹽的形態(tài)，或(ii)單獨的化合物組合成一個組成部分(例如，一個片劑包含三雞尾酒的至少三個不同的抑制劑)，包含該組合化合物的藥學上可接受的鹽(即，該組合的鹽)或(iii)在三雞尾酒的情況下是兩個不同的組成部分，包括它們藥學上的鹽。此外，當實施本發(fā)明的方法時，組合的單獨組成部分能在治療過程中的不同時間分別施用或以分開或單一組合的形式同時施用。例如，在二個組成部分的組合中(即，雙雞尾酒)，其是TERT的抑制劑和L1RT的抑制劑，用L1RT抑制劑的治療可以與用TERT抑制劑的治療之前，隨后或同時開始。同樣地，用三雞尾酒組合的治療可以是同時的、交替的或既同時又交替的。因此，認為本發(fā)明包含所有這些同時或交替的治療方案，并且也如此解幹術(shù)語"施用"或"施用"。影響端粒維持(或端?？s短)的化合物組合意指TERT(也指端粒末端轉(zhuǎn)移酶)抑制劑和L1RT抑制劑的組合(指雙雞尾酒的組合)或者端粒末端轉(zhuǎn)移酶RT抑制劑、L1RT抑制劑和非L1RT抑制劑的組合(指三雞尾酒組合)。通過施用雙雞尾酒或三雞尾酒的治療在本文中指基礎(chǔ)治療。在本文中使用時，患者意指哺乳動物，包括人、非人靈長類動物、狗、貓、綿羊、山羊、馬、奶牛、豬和其他獸醫(yī)學關(guān)注的非人哺乳動物。"治療有效量"意指化合物、化合物組合或組合物、雙雞尾酒或三雞尾酒的數(shù)量，當施用到哺乳動物，尤其是人用于誘導細胞凋亡或者治療或預防癌時，其足夠影響對癌的治療。"有效量"是化合物、化合物組合、雙雞尾酒或三雞尾酒的數(shù)量，其在測定中與未處理細胞內(nèi)的水平相比，在癌細胞內(nèi)有效的可再現(xiàn)地誘導端?？s短、G2停滯和/或大量的細胞凋亡。"有效量"還意指化合物、化合物組合、雙雞尾酒或三雞尾酒的數(shù)量，其將降低、減少、抑制或換句話說中止癌細胞的生長。在另一方面，本發(fā)明涉及通過把雙或三雞尾酒與細胞接觸，來抑制病理性增殖細胞例如腫瘤細胞的方法。通常，該方法包括把一定數(shù)量的能有效減少或抑制細胞增殖、或誘導程序細胞死亡的雙或三雞尾酒與病理性增殖細胞(例如，癌細胞)接觸的步驟。本方法能在培養(yǎng)細胞上進行，例如，體外或離體，或能在存在于患者體內(nèi)的細胞上進行，例如作為體內(nèi)治療方案的一部分。治療方案可以在需要這種治療的人或其他動物患者上進行。在本發(fā)明中公開的基礎(chǔ)治療的治療專一性顯示出了對細胞毒抗癌劑的傳統(tǒng)高毒性方案，例如傳統(tǒng)細胞毒化學治療或者甚至DNA損害治療，的有前途的替代。從上可知，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易的理解，本發(fā)明的抑制劑的組合和方法在某些情況下可以用于替代現(xiàn)存的外科步驟或藥物治療，盡管大多數(shù)情況下本發(fā)明是用于改進效力和/或改善用于治療這種病況的現(xiàn)有治療的毒性影響。特別地，應(yīng)用本發(fā)明的方法中的抑制劑組合能通過選擇性的敏化或增加異常增殖細胞(例如，腫瘤細胞)對各種DNA損害劑的敏感性，來改進效力和/或改善現(xiàn)有治療的有毒影響。因此，本文描述的基礎(chǔ)治療可以與其他抗癌治療結(jié)合并用于治療患者。例如，選擇的基礎(chǔ)治療可以與另一種抗增殖(例如，抗癌)治療結(jié)合來施用至患者。在本文中使用時，"與另一種或多種抗增殖治療結(jié)合"意指所述基礎(chǔ)治療可以在另一種或多種抗增殖治療之前、期間或之后施用。合適的抗癌治療包括移除腫瘤團塊的外科手術(shù)步驟或DNA損害治療(在下文更詳細的描述)，所述DNA損害治療包括局部放射。因此，另一種抗增殖治療可以在用本發(fā)明的抑制劑組合治療之前、同時或之后施用。在施用不同治療之間也可以有幾個小時、幾天和某些情況下幾星期的延遲，因此所述基礎(chǔ)治療可以在另一種治療之前或之后施用。舉例來說，所述基礎(chǔ)治療可以與用于移除異常增殖細胞團塊的外科手術(shù)結(jié)合來施用。用于治療胃-腸腫瘤病況的外科方法包括腹內(nèi)的手術(shù)例如結(jié)腸全部切除術(shù)和胃切除術(shù)。在這些具體實施方式中，基礎(chǔ)治療的化合物可以通過連續(xù)輸注或單一推注來施用。在手術(shù)期間或之后馬上的治療可以包括用在藥學上可接受載體中的抑制劑的藥物制劑在腫瘤切除位點的灌洗、浸泡或灌流。在某些具體實施方式中，在手術(shù)的時候和在手術(shù)之后施用抑制劑的組合，以抑制轉(zhuǎn)移性病灶的形成和發(fā)展。藥劑的施用可以在移除腫瘤團塊的外科步驟之后持續(xù)幾小時、幾天、幾星期、或在有些情況下幾個月。如同已經(jīng)描述的，雖然所述基礎(chǔ)治療可以獨立使用，但這種治療也可以與DNA損害處理或治療結(jié)合，用于產(chǎn)生與單獨DNA損害處理或治療相比更大的治療效果。這是因為停滯在細胞周期G2/M期的細胞通常對DNA損害處理或治療是非常敏感的。DNA損害處理或治療包括遺傳毒性化學治療(用遺傳毒性藥物)、放射治療(用伽馬放射、X射線、放射性同位素等等)和/或光動力學治療(例如，用5-氨基乙酰丙酸)。損害DNA的藥劑已經(jīng)被本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，并且被廣泛用于治療贅生物的臨床配置中。例如，遺傳毒性藥物是影響核酸并改變它們功能的化學治療藥物。這些藥物可以直接與DNA結(jié)合或者它們可以通過影響涉及DNA復制中的酶來間接導致DNA損害?？焖俜至鸭毎麑z傳毒性藥物特別敏感，因為它們是活躍地合成新的DNA。如果對細胞的DNA產(chǎn)生了足夠的損害，通常將遭受細胞凋亡，相當于細胞自殺。所述遺傳毒性化學治療包括(1)烷化劑使用的第一類化學治療藥物。這些藥物修飾DM的堿基，千擾DNA復制和轉(zhuǎn)錄并導致突變；(2)插入劑這些藥物把它們自己嵌入到在DNA雙螺旋內(nèi)的核苷酸之間的空隙內(nèi)。它們干擾轉(zhuǎn)錄、復制并誘導突變；和(3)酶抑制劑這些藥物抑制包含在DNA復制中的關(guān)鍵酶，例如拓樸異構(gòu)酶，誘導DNA損害。已經(jīng)開發(fā)了許多這種試劑，特別有益的是已經(jīng)經(jīng)受了廣泛臨床試驗和易于獲得的試劑。試劑5-氟尿嘧啶(5-FU)(或相關(guān)試劑卡培他濱)是一種這樣的試劑，其優(yōu)先被贅生組織利用，使其特別可用于靼向贅生性細胞。因此，盡管相當有毒，5-氟尿嘧啶，可用許多載體來應(yīng)用，包括局部和甚至靜脈內(nèi)施用。鉑化合物順鉑也被廣泛用于治療癌癥，臨床應(yīng)用中使用的有效劑量是20mg/m2，每三星期5天，共三個療程。順鉑不被口服吸收，并因此必須通過靜脈內(nèi)、皮下、瘤內(nèi)或腹膜內(nèi)注射來遞送。其他設(shè)想在本發(fā)明中使用的DNA損害劑包括卡培他濱(乂610(1&)、環(huán)磷酰胺、奧沙利鉑、白消安、卡鉑、亞硝脲氮芥、苯丁酸氮芥、多柔比星、柔紅霉素、表柔比星、依托泊苷、伊達比星、替莫唑胺、異環(huán)磷酰胺、洛莫司汀、達卡巴溱、氮芥、苯丙氨酸氮芥、絲裂霉素C、米托蒽醌、依立替康和托泊替康等等。這些藥物被用于治療各種實體癌和血細胞癌。使用任一這些藥物的治療目的是在癌細胞中誘導DNA損害。如果DNA損害足夠嚴重，將誘導細胞經(jīng)歷細胞凋亡，相當于細胞自殺。然而，所述DNA損害劑既影響正常細胞也影響癌細胞。藥物作用的選擇性是基于快速分裂細胞，例如癌細胞對損害DNA來治療的敏感性。作用方式也解釋了用這些藥物治療的許多副作用。但是，分裂中的非癌細胞，例如沿腸排列的細胞或在骨髓中的千細胞，也由于所述藥物與非癌細胞DNA的非特異相互作用(其可以是直接的或間接的相互作用)經(jīng)常隨癌細胞一起被殺死。除細胞毒性(細胞毒素)之外，這些藥物也是誘變的(引起突變)和致癌的(引起癌)。用這些藥物的治療伴隨有繼發(fā)癌的風險，例如白血病，或許是由于對進行DM損害治療的抗性的產(chǎn)生。此外，暴露于微亞致死濃度的化學治療劑的癌細胞將經(jīng)常產(chǎn)生對這種試劑的抗性，并經(jīng)常是對幾個其他遺傳毒性試劑的交叉抗性。對給定遺傳毒性治療有抗性的患者由于抗性細胞是非控制的生長，經(jīng)常只有非常短的存活時間。如上所述，經(jīng)由TERT和/或其他RT的端粒維持的不受控制生長或增殖是癌細胞的標志。由于用于基礎(chǔ)治療的化合物或化合物的組合影響端粒維持，雙或三雞尾酒僅在不受控制增殖的細胞或癌細胞中選擇性地損害端粒DNA和誘導進行性的端?？s短。由于雙或三雞尾酒的這種選擇性，可以實現(xiàn)相對于它們針對非惡性細胞的毒性的寬的治療指數(shù)，。相反，由用于DNA損害治療的藥物所誘導的DNA損害在開始時不局限于端粒DNA和因此是非特異的。在那一點上，來自用于DNA損害治療的試劑的DNA損害是更寬的并且，如上所述，與許多副作用和產(chǎn)生白血病的風險相關(guān)。本領(lǐng)域中已知白血病是骨髓(其是不同類型血細胞紅細胞、白細胞和血小板，的制造廠)和血液的癌。特別地，白血病是惡性的癌并且其特征在于不受控制的血細胞(例如，白血球)增殖。不管疳癥是產(chǎn)生自原發(fā)癌或繼發(fā)癌，據(jù)信雙和三雞尾酒將在對白血病的斗爭中將是非常寶貴的角色和/或伙伴。通過損害端粒DNA和誘導G2停滯，甚至在長時間膝露于雞尾酒之后，雞尾酒也將保持它們對抗所有惡性細胞(白血病的和非白血病的細胞)的效力。換句話說，由于對進行DNA損害劑產(chǎn)生抗性能夠另外逃脫的惡性細胞，保留了對端粒DNA損害和G2停滯的易損性，和最終在雙或三雞尾酒中死亡。因此，在本發(fā)明的另一個方面，提供了一個使腫瘤細胞對DNA損害治療敏感的方法。這種方法包括施用敏化有效量的雙雞尾酒或三雞尾酒組合，并在DNA損害治療之前或期間敏化腫瘤細胞。致敏有效量是有效誘導G2/M期停滯的數(shù)量。優(yōu)選，首先施用基礎(chǔ)治療，把腫瘤細胞暴露至雙雞尾酒或三雞尾酒至少幾個增殖循環(huán)周期，并且更優(yōu)選至少14天的增殖。然后，施用除基礎(chǔ)治療之外DNA損害治療一段持續(xù)時間(例如，直至DM損害治療顯現(xiàn)了臨床不利的毒性作用或剛好在這種階段之前)，并且根據(jù)治療醫(yī)師的評價中止或撤消DNA損害治療。基礎(chǔ)治療的施用可以先于DNA損害治療的至少一個(例如遺傳毒性化學治療劑、生物治療劑或放射治療的一個劑量的施用)僅僅幾分鐘(例如，在同一天或在同一治療訪視期間)至多至幾個星期，例如從一至五個星期，例如一至三個星期。備選的優(yōu)選方法是在施用DNA損害方式期間施用基礎(chǔ)治療。這當然是如下狀況，患者為已經(jīng)進行了DNA損害治療，但需要基礎(chǔ)治療以誘導G2/M期停滯并從而敏化病理性增殖細胞(例如，肺瘤細胞)。不論哪一種情況，優(yōu)選在DNA損害方案終止后繼續(xù)進行選擇的基礎(chǔ)治療，并且其繼續(xù)至少幾個星期、月、年或更長。在臨床配置中，如果癌復發(fā)或被證明對其他治療是難治的，基礎(chǔ)治療將基本上允許治療醫(yī)師有效地與患者的癌斗爭。尤其是本發(fā)明的雞尾酒組合對患者有最小或沒有毒性，因此它提供了良好的風險收益率。例如，低量的抑制RT的雙和三雞尾酒核苷類似物(AZT和ACV或AZT、ACV/PCV和ddl)，對患者是最低限度的或沒有毒性的，并且提供了很好的風險收益率。在患者(例如，人)上把連續(xù)基礎(chǔ)治療引入DNA損害治療的上述策略不僅允許更短的DNA損害治療持續(xù)時間而且允許施用更低劑量的臨床認可的細胞毒性試劑，因此減少了在患者中誘導的不良事件，例如人癌患者。例如，卡培他濱(Xeloda)單一療法的臨床相關(guān)不良事件在本領(lǐng)域中是已知的。它們包括手-足綜合癥(hand-and-footsyndrome)、心臟毒性、口腔炎、腹瀉、惡心、嘔吐、中性白細胞減少、電解質(zhì)不平衡神經(jīng)毒性和高膽紅素血癥。然而，在存在基礎(chǔ)治療(其能有效誘導程序細胞死亡通過G2/M期停滯)的情況下，能夠減少這種細胞毒性試劑的原始規(guī)定治療劑量并增強它們對致敏細胞的效力，從而實質(zhì)上提供改善的治療。作為最終結(jié)果，隨著施用基礎(chǔ)治療，在人癌患者中可以預期有，DNA損害治療的毒性的改善(簡單地通過能夠暫停或減少細胞毒性試劑的有毒劑量)，增強的胂瘤縮小，延遲的紳瘤生長和/或癌的清除和延長的存活時間。當然，如同上所述，也可以在非外科治療之外或替代非外科治療來進行腫瘤的外科切除。藥物雞尾酒也能用于預防疾病在動物內(nèi)的發(fā)生，或者能被用于減少癌的發(fā)病率，所述動物是對疾病易感的，但還沒有經(jīng)歷或顯示疾病的癥狀。因此，在另一個方面，本發(fā)明公開一種在患者中預防癌的方法，其通過識別傾向于患癌癥和/或藏匿有能夠變成惡性腫瘤的細胞的患者，這兩者通過傳統(tǒng)方法(身體檢查)是難以檢測的。所述方法包括向患者施用基礎(chǔ)治療，以便獲得對癌生成的預防。作為實例，某些傳統(tǒng)的檢測胂瘤的方法是物理方法(例如，觸診)、病理方法(例如，血尿或血便)、或成像方法(例如，X射線、CAT掃描、PET掃描、超聲波掃描圖)。通過監(jiān)測生物標記物或遺傳缺陷也可以實現(xiàn)對可能具有癌癥或隱藏不可檢測癌細胞的患者的識別。例如，本領(lǐng)域已知，野生型p53(wt-p53)功能的缺失通常導致不可控制的細胞循環(huán)和復制、無效DNA修復、選擇性的生長優(yōu)勢和，因此，胂瘤形成。事實上，已經(jīng)報道了，在超過50%的腫瘤中p53基因是突變的。作為另一個實例，目前沒有可檢測的腫瘤的女性患者，在BRCA1或BRCA2基因中可能具有突變，顯示了強的產(chǎn)生乳腺或卵巢癌的傾向。類似地，對于乳腺癌，已經(jīng)在唾液分泌中發(fā)現(xiàn)了生物標記物，腫瘤抑制因子癌基因蛋白53、癌基因c-erbB-2和它們的組合。另一個實例，其中報道了分子標記物位于肺癌。包括小細胞肺癌和非小細胞肺癌(NSCLC)(腺癌、扁平細胞肺癌和大細胞癌)的肺癌是世界上癌癥死亡的主要原因之一。NSCLC占肺惡性肺瘤的幾乎80%，并且它與不良預后相關(guān)。在本領(lǐng)域中已知肺癌是由于細胞中分子的改變，導致控制正常細胞生長、分化和細胞凋亡的通路反常。在這些疾病中，發(fā)現(xiàn)各種基因例如原癌基因和肺瘤抑制基因突變或具有異常的表達模式。實際上，已經(jīng)報道了在肺癌細胞中由Rb2/pl30調(diào)節(jié)的一組分子特征。所述分子特征包括一個或多個以下基因的表達產(chǎn)物B-MYB、PCSK7、STK15、ELK1、NOU、MAGEA3/6、P腿、CCND1、CDR2和RAF1，它們都被RB2/p130所介導。因此，在各種組織樣品中識別分子特征或標記物的技術(shù)可以提供用于評定患者中腫瘤發(fā)生的可能性。用如上所述給定基礎(chǔ)治療伴有或不伴有細胞毒性試劑對這種患者的治療有效地預防癌癥。本發(fā)明包括基于端粒末端轉(zhuǎn)移酶抑制劑的癌癥治療用于多種腫瘤和癌的用途，所述腫瘤和癌侵襲皮膚、結(jié)締組織、脂肪、乳腺、肺小細胞肺癌和非小細胞肺癌(NSCLC)、胃(胃癌)、胰腺、卵巢、子宮頸、子宮、腎、膀胱、結(jié)腸、前列腺、肛門與生殖器、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)、視網(wǎng)膜以及血液和淋巴(由在前體T細胞、前體B細胞、發(fā)生中心細胞(germinalcentercell)、激活的T細胞或里德-斯特恩置記載的許多癌。雖然用于上述指明的用途和適應(yīng)癥的化合物可以單獨施用，但優(yōu)選以藥學制劑形式存在。特別是在某些預期按照管理原則進行臨床應(yīng)用的情況下，就有必要制備適合于目標應(yīng)用的形式的藥物組合物或藥物的制劑。通常，這將伴有制備組合物，所述組合物是基本上沒有熱原和其他可能對人或動物有害的雜質(zhì)。供本發(fā)明使用的抑制劑可以溶于水(優(yōu)選無菌飲用水)中或者藥學或藥理學可接受的載體。術(shù)語"藥學或藥理學可接受的"是指當施用至動物或人時，不產(chǎn)生有害、過敏或其他不良反應(yīng)的載體和組合物。其包括任意和所有溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗菌劑和抗真菌劑、等滲和吸收延遲試劑等等。這些介質(zhì)和試劑對藥學活性物質(zhì)的用途是本領(lǐng)域所熟知的。在雙雞尾酒組合中，如上所述，至少有一個端粒末端轉(zhuǎn)移酶抑制劑和不同于端粒末端轉(zhuǎn)移酶抑制劑的L1RT抑制劑。所述抑制劑可以共同在單一的組合物或藥理學制劑中，或者分別在兩個不同的組合物或制劑中。在三雞尾酒組合中，至少有一個端粒末端轉(zhuǎn)移酶抑制劑、不同于端粒末端轉(zhuǎn)移酶抑制劑的L1RT抑制劑和不同于端粒末端轉(zhuǎn)移酶和L1RT抑制劑的非L1RT抑制劑。這些抑制劑也可以共同在單一的組合物或制劑中，或者在三個不同的組合物或制劑中。這些藥學組合物可以是任意合適的形式，包括口服施用混懸液或片劑；鼻噴霧；無菌可注射制劑的形式，例如，作為無菌可注射水溶液或油質(zhì)混懸液或栓劑。根據(jù)本發(fā)明化合物和組合物將被通過任意常規(guī)和合適的途徑施用，只要通過這個途徑可以達到靶組織。這包括經(jīng)口、經(jīng)鼻、口腔或局部。任選的，施用可以是通過常位的、皮內(nèi)的、皮下的、肌肉的、腹膜內(nèi)的或靜脈內(nèi)的注射。在某些具體實施方式中，所述化合物或組合物可以以全身性的方式施用，通過施用途徑例如，但不限于，經(jīng)口、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)和腹膜內(nèi)施用。全身性施用途徑可以是優(yōu)選的，例如，如果已知或懷疑受試者具有轉(zhuǎn)移性的病灶時。以這種方法，腫瘤位點，不管是原發(fā)或繼發(fā)，都可以接受該試劑。在其他具體實施方式中，以持續(xù)釋放制劑的形式施用所述化合物或組合物，以便避免對患者的重復施用和不便。各種形式的持續(xù)釋放微球或微膠嚢也是可用的，或者被開發(fā)為用于快速擴展類的肽和非肽類治療或藥理試劑的遞送系統(tǒng)。例如，在抗腫瘤藥物、肽和簡單堿性化合物例如甲硫噠溱和甲哌噻庚酮的施用中，持續(xù)釋放微球或微膠嚢是已知的，其利用生物可降解的聚合物材料。此外，例如，近年來，已經(jīng)報道了各種可注射長效制劑(depotformulation)，其中治療藥物包裹在由生物可降解的聚合物制成的微球中并從微球緩慢釋放(美國專利5，478，564、5,540,973、5，609，886、5,876,761、5688530、5631020、5631021和5716640)。實際上，GnRH類似物(激動劑和拮抗劑)的長效可注射的長效制劑正在被使用和/或試驗用于各種病理和生理病況的治療，所述病況在哺乳動物中，特別是在人中(Kostanskietal.，2001，BMCCancer,1:18-24)。所述治療尤其是用于處理性激素依賴疾病例如前列腺癌和子宮內(nèi)膜異位癥并用于雄性可育性的控制。因此，通過使用包含生物可降解的生物相容聚合物的組合物，能實現(xiàn)本發(fā)明中描述的化合物或雞尾酒在動物中的穩(wěn)定釋放。在所有這些聚合物組合物之后的一個明顯的目標是，與配制為其中沒有使用聚合物的溶液時相比，目的生物活性藥物(例如，肽或蛋白質(zhì))能以較少的頻率施用，有時以更低的整體劑量。長期持續(xù)釋放制劑或植入物的使用可能特別適合于慢性病況的治療，例如懷疑存在休眠的轉(zhuǎn)移。在本文中使用時，長期的釋放意指制造和安排制劑或植入物，以釋放治療水平的如上所述的雙或三雞尾酒至少30天、至少60天和更優(yōu)選幾個月。在向受試者施用本發(fā)明化合物中，可以選擇服藥數(shù)量、服藥方案、施用途徑等等以便影響這些化合物的其他已知活性。例如，可以如本文描述地選擇數(shù)量、服藥方案和施用途徑從而提供用于抑制細胞增殖的治療有效水平。然而，根據(jù)發(fā)明的某些具體實施方式，局部使用所述化合物或組合物。在某些具體實施方式中，將所述化合物或組合物靶向至腫瘤。這能通過特定的施用方式來實現(xiàn)。例如，容易接近的腫瘤例如乳腺或前列腺腫瘤可以通過直接的針刺注射來靶向到病灶位點?？梢酝ㄟ^使用作為施用途徑的吸入來靶向肺腫瘤。可以在全身性的或局部的遞送中使用吸入。優(yōu)選的途徑是直接腫瘤內(nèi)注射，注射入腫瘤維管結(jié)構(gòu)或相對于腫瘤位點局部的或區(qū)域的施用。用于本發(fā)明方法中的化合物能在每個化合物的特定劑量范圍內(nèi)施用至哺乳動物(例如，人)。當使用反義寡核苷酸作為RT的抑制劑時，它們可以以5-50|nM的劑量施用，優(yōu)選30|nM的2'氧-曱基RNA或10pM的反義寡核香酸(Pittsetal.，Inhibitionofh畫ntelomeraseby2'-O-methy卜RNA，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,95:11549-11554，1998),10的硫代磷酸寡核苷酸或10的六聚體硫代磷酸寡核芬酸，其中三個堿基的對被九-碳亞磷酰胺隔離物分離(Mataetal.，AhexamericphosphorothioateoligonucleotidetelomeraseinhibitorarrestsgrowthofBurkitt'slymphomacellsinvitroandinvivo.Toxicol.Appl.Pharmacol.,144:189—197，1997;Pageetal.，Thecytotoxiceffectsofsingle-strandedtelomeremimicson0MA-BL1cells.Exp.CellRes.,252:41-49，1999)?？梢允褂眯》肿右种苿㏑T例如二氨基蒽醌衍生物，例如，以10(Perryetal.，1998，1,4-and2,6-Disubstitutedamidoanthracene—9，lO—dionederivativesasinhibitorsofhumantelomerase.J.Med.Chem.，41:3253-3260)。例如，當使用核苷類似物作為RT抑制劑時，核苷類似物或其藥學上可接受的鹽可以通過任意合適的途徑施用(例如，經(jīng)口或腸道外)，劑量范圍在大約10mg和大約4000mg每日之間，每日分一至四次施用。一個優(yōu)選的劑量范圍是在每8小時大約200mg和大約1200mg之間。然而，通常，合適的有效劑量是在O.l至250mg每千克受試者體重每日范圍內(nèi)，優(yōu)選在1至100mg每千克體重每日范圍內(nèi)和最優(yōu)選在5至2Omg每千克受試者體重每日范圍內(nèi)；最優(yōu)劑量是大約10mg每千克體重每日。期望的劑量優(yōu)選在一天中合適的間隔以二、三、四或更多亞劑量施用。這些亞劑量可以在單位劑量形式施用，例如，包含IO至1000mg。例如，阿昔洛韋或其前體藥物，Valtrex,的一個優(yōu)選劑量范圍是100至400mg活性成分每單位劑量形式。本領(lǐng)域技術(shù)人員易于理解前體藥物的不同劑量形式可以使用不同的劑量范圍，所述劑量范圍通常通過測定代謝產(chǎn)物的血藥水平濃度來確定(例如，阿昔洛韋，如果前體藥物是Valtrex)。類似地，對于更昔洛韋或其前體藥物Valcyte⑧的口服劑型，例如，治療有效量可以從大約1至250mg每Kg體重每日的范圍內(nèi)變化，優(yōu)選大約7至100mg/Kg體重每日。因此，對于70Kg的人，治療有效量是從大約70mg/天至大約7g/天，優(yōu)選大約500mg/天至大約5g/天。噴昔洛韋和其前體藥物，泛昔洛韋，的有效劑量通常在從1.0至20mg/kg體重每日的范圍內(nèi)，或更經(jīng)常2.0至10mg/kg每日。AZT(疊氮胸苷)的一個優(yōu)選劑量范圍是在每8小時大約50mg和大約600mg之間。ddl的一個優(yōu)選劑量范圍是在每日兩次大約10mg和大約500mg之間。遺傳毒性化學治療劑的劑量是廠家為給定疾病治療推薦的那些。如上所述各種RT抑制劑(包括阿昔洛韋，Valtrex,更昔洛韋，Valcyte,泛昔洛韋，Retrovir-AZT或疊氮胸苷-和去羥肌苷，Xeloda,順4白，等等)的劑量和用藥的更多細節(jié)，能在Physician'sDeskReference,PDR，58thEdition,2004中找到，其內(nèi)容通過參考引入本文。本發(fā)明還包括各種動物模型的用途。通過生長或分離表達端粒末端轉(zhuǎn)移酶的細胞系，可以在各種實驗動物中形成疾病模型。這些模型可以采用皮下的、常位的或全身性的施用細胞來模仿各種疾病狀態(tài)。例如，將HeLa細胞系皮下注射到棵鼠中，以獲得端粒末端轉(zhuǎn)移酶陽性腫瘤。所得腫瘤在端粒重復擴增方案(TRAP)分析中顯示端粒末端轉(zhuǎn)移酶活性。這種模型提供了一種用于檢驗核苷類似物單獨和組合的載體。通常，可以以描述的方式測量細胞中端粒末端轉(zhuǎn)移酶活性或L1RT活性的水平，例如，在申請人于2005年3月25日提交的名稱為"ModulationOfTelomereLengthInTelomerasePositiveCellsForCancerTherapy"的美國專利申請60/655，105和于2005年1月18日提交的名稱為"ModulationOfLine-1ReverseTranscriptase"的國際專利申請PCT/US05/001319中描述的，其專利申請通過參考引入本文。也可以通過任意其他現(xiàn)存的方法或等價的方法來測量細胞中端粒末端轉(zhuǎn)移酶活性(或L1RT活性)的水平。端粒末端轉(zhuǎn)移酶活性或L1RT活性的"提高的水平"意指，與患者或個體中的正常細胞相比，或與沒有患有所述病況的其他患者或個體中的正常細胞相比，在特定細胞中的端粒末端轉(zhuǎn)移醉活性或L1RT活性的絕對水平被提高。所述病況的實例包括癌癥病況，或與不是正常存在與個體中的細胞的存在相關(guān)的狀況?；衔镌隗w內(nèi)有效性的測定包括各種不同的標準，包括但不限于，存活、肺瘤退化、停滯或延緩肺瘤的進展、消除腫瘤和抑制或預防轉(zhuǎn)移。用測試化合物對動物的治療將包括將所述化合物或組合物以合適的形式施用動物。本發(fā)明的藥物組合物、抑制或?qū)顾幬锬芤愿鞣N途徑施用，包括但不限于，經(jīng)口、腸胃外、經(jīng)鼻、口腔、直腸、陰道或局部。備選的，施用可以是通過氣管內(nèi)滴注法、支氣管滴注法、皮內(nèi)的、皮下的、肌肉內(nèi)的、腹膜內(nèi)的或靜脈內(nèi)的注射。特別預期的是全身性靜脈內(nèi)注射、經(jīng)過血液或淋巴供給的區(qū)域施用和腫瘤內(nèi)注射。本發(fā)明的無環(huán)核苷類似物和/或本發(fā)明的組合物(所述組合物包括現(xiàn)有技術(shù)已知的無環(huán)和非無環(huán)的核苷類似物)在許多方面中都是重要的。它們被用作選擇性的抑制劑并用于對細胞施加選擇性壓力，以轉(zhuǎn)換端粒延長機制。它們在用于治療端粒末端轉(zhuǎn)移酶/LlRT相關(guān)癌癥的方案中是重要的，不管是獨自或與對癌癥治療領(lǐng)域技術(shù)人員來說已知的化學和/或放射治療方案結(jié)合來施用。備選的，通過簡單地降低端粒末端轉(zhuǎn)移酶或L1RT的活性，這些組合物將有助于選擇性地誘導癌細胞大量細胞凋亡。所述核苷類似物可以在生理學或藥學可接受載體中施用至宿主，用于治療增殖性疾病等等。藥學上可接受的載體部分地由被施用的特定組合物和用于施用所述組合物的特定方法來確定。在本發(fā)明的一個方面，提供了用于在哺乳動物中預防或治療由不適當或病理性增殖細胞或永生細胞存在而引起的病癥的方法。不適當或病理增殖細胞或永生細胞獨立于細胞的正常調(diào)節(jié)機制而的存在和再生。這些細胞是病理性的，因為它們由于細胞元素，即端粒末端轉(zhuǎn)移酶，的活性而脫離了正常細胞。當然，本文使用的不適當增殖細胞可以是良性高增殖細胞，但除非另有說明，這些細胞是指惡性高增殖細胞例如所有類型的癌細胞包括，例如，骨肉瘤、乳腺癌、卵巢癌肺癌、腎上腺皮質(zhì)癌或黑素瘤。在本發(fā)明的一個具體實施方式中，轉(zhuǎn)移后淋巴組織增生疾病(PTLD)，作為一種血液癌，從本文預期的范圍中排除。特別地，提供了用于預防或治療人腫瘤的方法，所述腫瘤的特征在于表達端粒末端轉(zhuǎn)移酶。根據(jù)本發(fā)明，所述病癥的預防或治療是通過利用本發(fā)明的無環(huán)核苷類似物(端粒末端轉(zhuǎn)移酶的抑制劑或拮抗劑)來實現(xiàn)的。在發(fā)明的具體實施方式中，用于本發(fā)明的抑制劑或拮抗劑是直接與負責端粒延長的端粒末端轉(zhuǎn)移酶相互作用以抑制其活性的那些無環(huán)核苷類似物，和/或被合并入端粒，并因此抑制端粒進一步延長，盡管有功能性端粒末端轉(zhuǎn)移酶的那些無環(huán)核苷類似物，從而抑制表達端粒末端轉(zhuǎn)移酶的細胞的生長。因此，所述端粒末端轉(zhuǎn)移酶的抑制劑或拮抗劑被用于抑制細胞的生長。例如，當向患者施用所述端粒末端轉(zhuǎn)移酶的抑制劑或拮抗劑時，它們導致進行性的端?？s短、細胞中的細胞周期停滯和/或表達端粒末端轉(zhuǎn)移酶細胞的大量細胞凋亡。在本發(fā)明中，術(shù)語"抑制生長，，或"生長的抑制"也指減少或防止細胞分裂。根據(jù)本發(fā)明，表達端粒末端轉(zhuǎn)移酶細胞的生長抑制可以是大約100%或更低，但不是0%。例如，與對照細胞(對照細胞表達端粒末端轉(zhuǎn)移酶，但不用抑制劑或拮抗劑處理)相比，所述抑制可以是從大約10%至大約100%,優(yōu)選至少大約25%，和更優(yōu)選至少大約50%，更優(yōu)選至少大約90%、95%或準確地100%。能通過本領(lǐng)域任何已知的方法來測量所述生長的抑制。例如，將被處理藥品中活細胞的數(shù)目與對照樣品中活細胞的數(shù)目相比，在與活體染料孵化后測定。另外，當被注入動物宿主時，生長抑制可以通過體內(nèi)或體外檢測細胞增殖減少的分析方法，例如氖化氬摻入分析(tritiatedhydrogenincorporationassays)、BdU摻入分析、MTT分析、形成病灶能力、錨定依賴性或永生的缺失、腫瘤特定標記物的缺失、和/或不能形成或抑制腫瘤能力的改變來測量(Dorafsharetal.，2003，JSurgRes.，114:179-186;Yangetal.,2004,ActaPharmacolSin.，25:68-75)。在人體中，從單一的永生細胞或少數(shù)這種細胞至癌瘤的發(fā)育過程花費幾個月至幾年的時間。然而，通過實行本發(fā)明可以預防癌癥，因為用包含一個或多個無環(huán)核苷類似物處理的腫瘤發(fā)生細胞，在它們有機會生長為腫瘤之前喪失了它們的增殖潛能。此外，向高危群體周期性預防性施用所述抑制劑或拮抗劑以在臨床表現(xiàn)出癌癥之前阻遏肺瘤產(chǎn)生，將顯著地有效減少新的癌癥病例的比率。將所述核苷化合物單獨或與不同的類似物組合施用，并且通過任意施用途徑，包括口服施用。無環(huán)核苷類似物SN1、SN2是優(yōu)選的核苷類似物并且SN1是最優(yōu)選的一個。在現(xiàn)有技術(shù)已知的無環(huán)核苷類似物中，ACV、GCV或它們的L-纈氨酸酯纈更昔洛韋(V-GCV)和伐昔洛韋(V-ACV)是優(yōu)選的核苷類似物。它們都是市場上可買到的，并且已經(jīng)在許多專利和出版物中描述了所述制劑。應(yīng)當選擇性靶向有端粒末端轉(zhuǎn)移酶和/或L1RT活性的細胞，因為這些細胞依賴于端粒末端轉(zhuǎn)移酶和/或L1RT來延長或維持端粒，并且端粒的延長或維持需要所述核苷和/或它們的類似物與端粒末端轉(zhuǎn)移酶或L1RT的相互作用。至于希望任意特定靶向藥物用于遞送所述類似物以發(fā)揮抗癌作用的程度，在在本文中設(shè)想了分子式(I)至(VI)、PCV或ACV或GCV和/或其他類似物的靶向化合物的使用。因此，在某些具體實施方式中，藥學組合物可以具有活性化合物，在這種情況下，為分子式(I)至(VI)、PCV、ACV和GCV的任一化合物，其已經(jīng)綴合到耙向試劑(例如，肽)上用于特異遞送至特定的靶細胞或至細胞內(nèi)的核部分。通過本領(lǐng)域技術(shù)人員進行的常規(guī)試驗來確定端粒末端轉(zhuǎn)移酶和L1RT的給定抑制劑或拮抗劑的劑量。在向患者施用之前，在標準實驗動物模型中展示所述效力。在這方面，能使用本領(lǐng)域已知的任意端粒末端轉(zhuǎn)移酶誘導的癌的動物才莫型。(Hahnetal.，1999，NatureMedicine,5(10):1164-1170;Yeageretal.，1999，CancerResearch:59(17):4175-4179)。用本發(fā)明方法治療的受試者或患者優(yōu)選是人，并且是胎兒、孩子或成人。其他被治療的哺乳動物是小鼠、大鼠、兔、猴子和豬。所述無環(huán)核香類似物，即本發(fā)明的抑制劑或拮抗劑能單獨使用或與其他化學治療結(jié)合使用。例如，端粒末端轉(zhuǎn)移酶誘導的癌的治療可以與化學和/或放射治療結(jié)合，以治療由端粒末端轉(zhuǎn)移酶或其它因素誘導的癌。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的化學治療劑的實例包括，但不限于，抗癌藥例如博萊霉素、絲裂霉素、氮芥、苯丁酸氮芥、5-氟尿嘧啶(5-FU)、5-氟脲嘧啶脫氧核苷(5-FUdR)、氨甲蝶呤(MTX)、秋水仙堿和己烯雌酚(DES)。為了進行組合治療，可以簡單地以有效在動物或患者內(nèi)產(chǎn)生它們的組合的抗癌作用的方式向動物施用與另一個抗癌藥物(化學或放射)組合的本發(fā)明抑制劑組分。因此，以在耙細胞區(qū)域中引起它們的組合存在的有效數(shù)量和有效的時間段來提供所述試劑。為了實現(xiàn)這個目標，同時施用所述試劑，和在化學治療劑的情況下，或者在單一組合物中或者作為兩個不同的組合物使用不同的施用途徑施用所述試劑。備選的，所述兩種治療可以彼此在先、或在后，通過彼此，例如，間隔幾分鐘至幾小時或幾天。舉例來說，但不是限制，用于全身應(yīng)用的GCV的平均每日劑量可以是對于成人100mg/kg每日，對于小鼠和嬰兒是50mg/kg每日。依賴于被治療的受試者的病況可以對劑量進行某些改變。負責施用的醫(yī)師能確定對于個體患者的合適劑量，并取決于多種因素，例如，就診患者的年齡、病況、病史等等。因此，本發(fā)明的方法可用于與端粒末端轉(zhuǎn)移酶誘導的細胞病理增殖有關(guān)的病況和疾病的治療應(yīng)用中。從本發(fā)明的治療應(yīng)用中獲益的疾病包括以細胞高增殖為特征的所有疾病包括，例如，實體瘤和白血病、以及非癌病況。進一步設(shè)想本發(fā)明的方法不但在體內(nèi)環(huán)境而且在離體環(huán)境中用于抑制癌細胞生長的。本發(fā)明方法特別可用于抑制離體病理性增殖人細胞的生長，包括但不限于，人癌細胞-骨肉瘤、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、腎上腺皮質(zhì)癌或黑素瘤。本發(fā)明提供用于識別由于細胞中端粒末端轉(zhuǎn)移酶表達的不適當?shù)?、病理性的或異常的增殖細胞的方法和試劑盒。所述方法能用作一種篩選方法，所述篩選方法通過測定在來自患者的組織中端粒末端轉(zhuǎn)移酶表達的存在(和/或水平)來幫助診斷在患者中癌細胞或腫瘤的存在，升高水平的端粒末端轉(zhuǎn)移酶表達的存在是在患者中癌細胞或病理性細胞增殖的指示。例如，通過癌瘤樣品在本發(fā)明無環(huán)核苷類似物存在的情況下不能增殖來診斷癌瘤樣品。所述診斷可以進一步包括端粒末端轉(zhuǎn)移酶特異mRNA表達的檢測，其通過各種方法來測量，包括但不限于，使用核酸的雜交、Northern印跡法、原位雜交、RM微陣列、RNA保護分析(RNAprotectionassay)、RT-PCR、實時RT-PCR,或者端粒末端轉(zhuǎn)移酶催化亞單位編碼蛋白質(zhì)的存在，其通過各種方法來測量，包括但不限于，Western印跡法、免測沉淀法或免疫組織化學或端粒末端轉(zhuǎn)移酶的酶活性(TRAP分析和其改良4，26，27)。在優(yōu)選的具體實施方式中，直接端粒末端轉(zhuǎn)移酶催化亞單位RNA的核酸探針能用于檢測在進行快速增殖的組織中端粒末端轉(zhuǎn)移酶催化亞單位RMmRNA水平的存在和/或增加，所述組織例如原發(fā)癌細胞，包括人骨肉瘤、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、腎上腺皮質(zhì)癌或黑素瘤。因此，本發(fā)明提供了使用核酸探針以檢測和鑒定病理性增殖細胞，包括癌細胞，的方法，所述核酸探針是與端粒末端轉(zhuǎn)移酶的子序列互補的。例如，用于鑒定病理性增殖細胞的方法包括直接針對hTERTmRNA或LIRTmRNA的核酸探針，以比較在試驗細胞中hTERTmRNA或LIRTmRNA的表達水平和在對照細胞中的hTERTmRNA或LlRTmRNA的表達水平。當觀察到如同對照細胞中的hTERT或L1RT表達水平時，試驗細胞被鑒定為病理性增殖細胞。然而，用于本發(fā)明方法的核酸探針也可以與人、小鼠或其他哺乳動物的hTERTmRNA或LlRTmRNA序列基本上互補。在所述核酸探針中產(chǎn)生不會影響該探針在病理增殖細胞(例如，癌細胞)中有效檢測hTERTmRNA或LlRTmRNA能力的替換，對本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的，并且因此，這種替換也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。用于本發(fā)明方法的核酸探針可以是DNA探針，或改良探針例如肽核酸探針、硫代磷酸探針或2'-0甲基探針。所述核酸探針的長度從大約8或10至50個核普酸，優(yōu)選從大約15至25個核苷長的。本發(fā)明的方法可以容易的在來自人、哺乳動物或其他脊推動物的細胞抽提物、培養(yǎng)細胞或組織樣品中進行。本發(fā)明的方法用于在體外細胞、細胞培養(yǎng)物和人細胞和組織中，檢測由于端粒末端轉(zhuǎn)移酶表達引起的不適當?shù)?、病理地或異常增殖的細胞，例如實體瘤和癌(例如，人骨肉瘤、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、腎上腺皮質(zhì)癌或黑素瘤)。本發(fā)明還提供了用于檢測和/或抑制高增殖細胞或癌細胞的試劑盒。所述試劑盒能具有分子式(I)至(VI)的化合物，和任選地PCV、ACV、GCV、纈更昔洛韋、伐昔洛韋或其他無環(huán)核苷類似物，和/或具有與hTERTmRNA或LlRTmRNA的子序列完全或基本上互補的核酸探針。本發(fā)明的藥物組合物、抑制或拮抗藥物能以各種途徑施用，包括經(jīng)口、局部、腸胃外例如皮下地、腹膜內(nèi)、通過病毒感染、血管內(nèi)等等。依賴于引入的方式，所述化合物能以多種方法配制。適合于口服施用的制劑可以是液體溶液。適合于腸胃外施用(例如，通過關(guān)節(jié)內(nèi)的、心室內(nèi)的、鼻內(nèi)的、靜脈內(nèi)的、肌肉內(nèi)的、皮內(nèi)的、腹膜內(nèi)的和皮下的途徑)的制劑包括含水的和無水的、等滲無菌注射溶液。在本發(fā)明的實施中，例如通過靜脈內(nèi)輸注、經(jīng)口、局部、腸道外或腹膜內(nèi)施用組合物。口服和腸胃外施用是優(yōu)選的施用方法。用于制劑和施用的技術(shù)是本領(lǐng)域常規(guī)的和更多的細節(jié)可以見于，例如，Remington"PharmaceuticalSciences(2000)，GennaroAR(ed)，20thedition，MaackPublishingCompany,Easton，PA中。治療有效量或藥理學有效量是本領(lǐng)域中熟知的短語并且是指有效產(chǎn)生期望藥理結(jié)果的試劑數(shù)量。例如，治療有效量是足以在患者中隨著時間產(chǎn)生有益治療性反應(yīng)的數(shù)量(即，治療疾病或病況或者改善患者中被治療疾病的癥狀)。實際施用的數(shù)量依賴于治療所應(yīng)用的個體，并且優(yōu)選是優(yōu)化數(shù)量，以便獲得期望的效果而沒有顯著的副作用。如同在下文詳細描述的，也通過特定抑制劑或拮抗劑的效力和患者的病況、以及待治療患者的體重或體表面積確定所述劑量。也通過伴隨著施用的任意有害副作用的存在、性質(zhì)和程度來確定劑量的大小，例如，施用至特定患者的特定試劑、載體或轉(zhuǎn)導細胞類型。使用數(shù)據(jù)容易地確定能夠預防、抑制或減少端粒末端轉(zhuǎn)移酶/LlRT調(diào)節(jié)癌的發(fā)病率的試劑的治療有效劑量，所述數(shù)據(jù)是來源于本文公開的細胞培養(yǎng)物分析和/或利用動物模型的體內(nèi)分析。所述動物模型還能被用于評價人中適當?shù)膭┝糠秶褪┯猛緩健Ｔ诒晦D(zhuǎn)移到臨床環(huán)境之前，具有人來源實體腫瘤的實驗動物(或本領(lǐng)域接受的動物模型)經(jīng)常被用于優(yōu)化合適的治療劑量。已知這種模型在預測有效抗癌策略中是非?？煽康?。例如，具有實體瘤的小鼠或本領(lǐng)域接受的小鼠模型廣泛用于臨床前試驗中，以確定治療試劑的工作范圍，所述工作范圍產(chǎn)生有益的抗腫瘤作用而只有最小的毒性。由于在本領(lǐng)域接受的模型中已經(jīng)證明了安全性，至少對于本文舉例說明的核苷類似物，本發(fā)明的臨床前試驗更是常規(guī)實驗。利用測量腫瘤形成(進展)抑制、腫瘤退化或轉(zhuǎn)移等等的分析來預測體內(nèi)效力。下文描述了利用棵鼠皮下的由人HeLa癌細胞系長成的腫瘤(即，承載異種移植的小鼠)作為癌模型對分子式(I)至(VI)的化合物、ACV、PCV和/或GCV的抗腫瘤效力的示例性體內(nèi)分析。體內(nèi)分析中需要的人癌細胞的制備，例如，以如下方式通過公共來源獲得端粒末端轉(zhuǎn)移酶陽性HeLa人細胞系和端粒末端轉(zhuǎn)移酶陰性U-20S人細胞系。細胞被維持在補充有10%胎牛血清的D-MEM介質(zhì)中，在37°C的5%C02的濕潤空氣中。為了體內(nèi)分析，合適的宿主，例如，獲得大約5-7星期大的棵鼠(nu/nu)并養(yǎng)殖在無病原體的條件下。大致的，將包含在200ul無血清介質(zhì)中的lx106HeLa細胞(和/或U-2OS細胞)遞送給所有的動物，所有動物通過脅腹的皮下注射(s.cf)用曱氧氟烷短暫地麻醉。然后將小鼠分為實驗組和對照組。適當濃度的分子式(I)至(VI)的化合物、ACV、PCV和/或GCV用于腫瘤生長進展或退化分析。在一個具體實施方式中，評估皮下注射肺瘤生長的破壞或產(chǎn)生的時間而不是形成腫瘤的尺寸的下降。在這個具體實施方式中，從第零天開始，實驗組中的小鼠接受在不限量飲用水中的更昔洛韋。更昔洛韋在水中的濃度是2mg/ml。每隔3天供給更昔洛韋的新鮮溶液。對照組中的小鼠僅接受飲用水。每2-3天測量腫瘤。當腫瘤超過lcm3時，處死小鼠。用公式4/3:r計算腫瘤的體積，其中r是腫瘤的半徑。對照組中所有的小鼠將產(chǎn)生腫瘤而實驗組中所有的小鼠保持無腫瘤。在另一個具體實施方式中，本發(fā)明的試劑和方法用于促進在具有免疫能力的攜帶有前-形成腫瘤的動物中的體內(nèi)腫瘤退化；即本發(fā)明的試劑用于治療有前-存在腫瘤的動物。在這種情況下，將106個小鼠hapatomaMH-22細胞或類似物被在C3HA小鼠的肋腹側(cè)皮下注射以產(chǎn)生腫瘤。一旦胂瘤細胞注入后形成腫瘤，實驗組的小鼠被在不限量飲用水中施用包含泛昔洛韋口服溶液的組合物，而對照組的小鼠接受沒有藥物的相同組合物(例如，蒸餾水)。每2-3天監(jiān)測肺瘤的生長。當向這些具有腫瘤動物施用大約30天的分子式(I)至(VI)的任一化合物時，可以觀察到延遲的腫瘤生長。在對照組中沒有觀察到腫瘤細胞的這種抑制。在開始治療后幾星期，只有用包含至少一個分子式(I)至(VI)的化合物的組合物治療的動物，在很多具有胂瘤動物中顯示出完全的腫瘤退化。在另一個具體實施方式中，也使用定性細胞凋亡的促進的體內(nèi)分析。在這個具體實施方式中，對用所述治療性組合物治療的承受異種移植的動物可以檢查細胞凋亡病灶的存在，并與未治療的承受異種移植的動物比較。在治療動物的腫瘤中發(fā)現(xiàn)的細胞調(diào)亡病灶的程度提供了一種對所述組合物治療效力的指示。在用于治療人端粒末端轉(zhuǎn)移酶調(diào)節(jié)的癌(早期腫瘤和血管化腫瘤兩者)的藥物的合適劑量的設(shè)計中，可以容易的從本文描述的動物研究中外推，以便得到用于臨床施用的合適劑量。為了實現(xiàn)這種轉(zhuǎn)換，就要根據(jù)試驗動物單位質(zhì)量施用的藥物質(zhì)量并，優(yōu)選，根椐在試驗動物和人類患者之間體表面積的差異。所有這種計算對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是熟知和常規(guī)的。因此，治療有效劑量的測定是在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力之內(nèi)的。例如，在細胞培養(yǎng)物分析和小鼠研究中得到分子式(I)至(VI)的化合物的成功劑量，并基于質(zhì)量和表面積應(yīng)用標準的計算，用于成人患者的有效劑量將是在每患者每天大約1000mg和大約6000mg的分子式(I)至(VI)的化合物之間，并且優(yōu)選每患者每天大約500mg和大約1000mg之間。因此，利用這種信息，在本文中設(shè)想的，用于人類施用的治療劑(例如，SN1、SN2、阿昔洛韋、更昔洛韋、噴昔洛韋和相應(yīng)前體藥物，即，纈昔洛韋、纈更昔洛韋和泛昔洛韋)的低劑量可以是大約l、5、10、20、25或大約30mg左右每患者每日；用于人類施用的治療劑的高劑量可以是大約250、300、400、450、500或大約600mg左右每患者每日。有用的中間劑量可以是從大約40至大約200mg左右每患者的范圍。盡管給出了這些范圍，應(yīng)當認識到本文給出的給定參數(shù)和詳述指導在活性或優(yōu)選范圍內(nèi)的進一步變化也包含在本發(fā)明之內(nèi)。本發(fā)明治療方案的意圖通常是產(chǎn)生顯著的抗腫瘤作用，同時仍保持劑量低于與不能接受的毒性相關(guān)的水平。除了改變劑量本身之外，也可以調(diào)整施用方案以優(yōu)化治療策略。目前優(yōu)選的治療策略是施用在大約1-500mg之間，和優(yōu)選在大約10-100mg之間的端粒末端轉(zhuǎn)移酶抑制劑或拮抗劑或包含這些藥物的治療性雞尾酒，這是在大約60天的時間內(nèi)大約4次。例如，在大約第l天、第3或4天和第6或7天服用。施用可以通過單一或多個劑量來完成，口服或例如，通過直接施用到實體腫瘤的位點或以緩釋劑型形式。負責施用的醫(yī)師，根據(jù)本發(fā)明的公開，能確定對于個體患者的合適的劑量、施用形式和途徑。這種優(yōu)化和調(diào)整在本領(lǐng)域內(nèi)是常規(guī)進行的和決沒有導致過度數(shù)量的試驗。在特定劑量本身的施用中，優(yōu)選依據(jù)人類患者全身性應(yīng)用的無菌、致熱原性、純凈和一般安全性的管理標準提供藥學可接受的組合物。當然，在治療之前和治療后一至幾個月間隔，進行身體檢查、腫瘤測量和實驗室檢查，并且本領(lǐng)域技術(shù)人員知道怎樣進行這種常規(guī)步驟。通過任何可接受的測量來定義臨床反應(yīng)。例如，完全有效可以定義為在治療后給定時期內(nèi)所有可測量腫瘤的消失。然而，應(yīng)當理解，對于任意特異患者的特定劑量水平和服藥頻率可以改變，并依賴于各種因素，包括所使用的特定化合物的活性、新陳代謝的穩(wěn)定性和該化合物起作用的長度、年齡、體重、一般健康情況、性別、飲食、施用的方式和時間、排泄比率、藥物的組合、特異病況的嚴重性和患者經(jīng)歷的治療。其最終是由值班醫(yī)師或獸醫(yī)來判斷。實施例提供下述實施例以說明本發(fā)明的優(yōu)選方案，但是當然，不應(yīng)看作以任何方式限定本發(fā)明的范圍。使用傳統(tǒng)技術(shù)來進行下述實施例，除非另外詳細描寫，所述傳統(tǒng)技術(shù)對本領(lǐng)域技術(shù)人員是眾所周知和常規(guī)的。此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當理解在實施例中公開的技術(shù)顯示了是發(fā)明人發(fā)現(xiàn)的技術(shù)，以便在實施本發(fā)明中較好發(fā)揮作用，并因此被認為構(gòu)成優(yōu)選的實踐方式。然而，根據(jù)本發(fā)明的公開，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當理解在公開的特定具體實施方式中可以作許多改變，和在不偏離本發(fā)明精神和范圍的基礎(chǔ)上仍然獲得類似或相似的結(jié)果。實施例1.通過無環(huán)核苷類似物三磷酸鹽體外直接抑制端粒末端轉(zhuǎn)移酶如所述的生物合成和分離無環(huán)類似物三磷酸鹽(AgbariaRWa/.Biosyntheticganciclovirtriphosphate:itsisolationandcharacterizationfromganciclovir-treatedherpessimplexthymidinekinase—transducedmurinecells,汐/oc力e/z/5/o;力ysCo邁邁z//2.2001，289:525-30)。簡短的，用90mM的ACV,或45mM的GCV，或45mM的PCV培養(yǎng)107個U-2OS細胞48小時。細胞用PBS洗滌并通過胰蛋白酶化來收集。在離心后，用60%甲醇提取細胞沉淀。在95。C加熱所述提取物2分鐘，接著在真空下蒸發(fā)。將干燥沉淀溶于100pl的PCR級水中。如上所述進行利用HeLa細胞提取物的實時TRAP分析。為表明無環(huán)核苷類似物三磷酸鹽主要的混合物對端粒末端轉(zhuǎn)移酶直接抑制，對于TRAP分析補充了5jil的來自無環(huán)核苷治療U-2OS細胞的粗提物。因此，其證明在這個條件下酸PCV-TP、三磷酸GCV和ACV-TP從10至100倍直接地抑制端粒末端轉(zhuǎn)移酶。實施例2.在端粒末端轉(zhuǎn)移酶陰性ALT細胞和端粒末端轉(zhuǎn)移酶陽性細胞中對端?？s短、G2停滯和細胞調(diào)亡的誘導(a)在AZT治療或更昔洛韋治療后，在端粒末端轉(zhuǎn)移酶陰性ALT細胞中對端粒縮短、G2停滯和細胞凋亡的誘導按如下方式進行為在兩個細胞系(U-20S和Saos-2骨肉瘤)中檢測LI特異的RNA，據(jù)報道所述細胞系被報道為通過ALT來維持端粒，通過斑點印跡法用LI逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子特異探針來分析總mRNA。報道的端粒末端轉(zhuǎn)移酶陽性細胞系(HEC-1和HeLa)用作對照。在這個試驗中，兩種ALT細胞系(U-2OS和Saos-2骨肉瘤)都是陽性的。如前才艮道的，HEC-l細胞是完全陰性的，在HeLa細胞中僅有痕量Ll轉(zhuǎn)錄物。用治療濃度的AZT處理所述ALT細胞系，以確定滑動端粒DNA合成能被AZT-TP抑制，和從而誘導端?？s短。通過流式細胞計用端粒特異肽核酸(PNA)探針來測量在AZT處理和未處理細胞系中的端粒長度。為確定細胞周期分布，細胞用碘化丙咬(PI)染色。在AZT處理14天后，兩種ALT細胞系顯示了端?？s短、大量細胞凋亡和G2停滯。為了確證AZT誘導的端粒縮短對于ALT細胞的專一性，在相同條件下用AZT處理已知對于端粒末端轉(zhuǎn)移酶是陽性的HeLa細胞系。選定濃度下的AZT在HeLa細胞中對端粒長度或細胞周期分布沒有影響。為表明端?？s短和在DM合成比率、動態(tài)中的改變，將U-2OS細胞用AZT處理不同量的時間，并同時通過流式細胞計來分析。通過加入5-溴脫氧尿核苷(BdU)來確定DM合成比率。結(jié)果顯示進行性的端?？s短和DNA合成的下降。重要的是注意，在細胞周期分布、DM合成和端粒長度中的改變是快速的，并且僅在AZT治療10天之后就能凈皮檢測到。同時，PI染色表明與未處理細胞相比，在治療后期AZT治療的細胞中更高的DNA含量。這種事實的合理解釋是短端粒誘導的染色體端到端連接。在AZT治療的ALT細胞中細胞凋亡的誘導似乎是單獨p53，因為U-2OS和Saos-2代表？53+/+和？53-/-癌細胞系兩者。分別地，也用治療濃度的鳥嘌呤類似物，更昔洛韋(GCV)處理U-2OS細胞，以表明滑動端粒DNA合成能被GCV-TP所抑制，并能誘導端粒縮短。通過流式細胞計用如上所述的端粒特異PM探針來測量在未處理和更昔洛韋處理細胞中的端粒長度。為確定細胞周期分布，細胞用碘化丙啶(pi)染色。在用o.3mg/ml濃度的GCV處理14天之后，U-2OS細胞顯示了端?？s短、大量的細胞凋亡(程序細胞死亡)和G2停滯。(b)在端粒末端轉(zhuǎn)移酶陽性癌細胞中更昔洛韋(GCV)和阿昔洛韋(ACV)治療之后端?？s短、G2停滯和細胞調(diào)亡的誘導按如下方式進行。為檢測在兩種細胞系(Hela和NuTu-19)中端粒末端轉(zhuǎn)移酶特異活性，進行實時TRAP分析行。報道的端粒末端轉(zhuǎn)移酶陽性細胞系(HeLa)用于比較。在這種試驗中兩種細胞系都是陽性的。用治療濃度的GCV(1.5nM)或ACV(3.0pM)處理端粒末端轉(zhuǎn)移酶陽性細胞系，以表明在細胞內(nèi)抑制所述端粒的DNA合成，從而誘導端粒縮短。通過流式細胞計用端粒特定肽核酸(PNA)探針來測量在更昔洛韋和阿昔洛韋處理和未處理的細胞系中的端粒長度。為確定細胞周期分布，細胞用碘化丙啶(PI)染色。在兩種處理14天后，兩種細胞系顯示了端?？s短、大量細胞凋亡和G2停滯。為表明在細胞周期分布中的改變，用更昔洛韋或阿昔洛韋處理HeLa和NuTu-9細胞14天，用PI染色，并同時通過流式細胞計來分析。結(jié)果展示了細胞周期的G2停滯。重要的是注意，改變是快速的并僅在阿昔洛韋處理14天之后就能被檢測到。相反，在端粒末端轉(zhuǎn)移酶陽性細胞，HeLa和NuTu-19中，核苷類似物，AZT對端粒長度或細胞周期分布無作用，甚至在升高的濃度例如，100^M。同時，PI染色表明了與未處理細胞相比，在治療后期GCV或ACV處理的細胞中更高的DNA含量。這種事實的合理解釋是短暫的端粒誘導的染色體端到端連接。細胞系的來源是子宮頸(HeLa)和卵巢上皮(NuTu-19)。在37°C的5°/。的C02濕潤空氣內(nèi)，在補充有10%胎牛血清的D-MEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞。對于用GCV處理的細胞，向培養(yǎng)基補充1.5的GCV(Cymevene，Hoffman-LaRoche)。對于用ACV處理的細胞，向培養(yǎng)基補充3pM的阿昔洛韋(Acyclovir,TEVAPharm.Ind.Ltd,Israel)。實時TRAP分析按(Wegeetal.，SYBRGreenreal-timetelomericrepeatamplificationprotocolfortherapidquantificationoftelomeraseactivity.iVi;c/e/cJc2"es.2003;31(2):E3-3)所述的進行。對于用流式細胞計的端粒長度測量，細胞用綴合((:加3PNA探針的端粒特異FITC(AppliedBiosystems)染色,并用0.06jag/mlPI反相染色，如(Rufer，N.，Dragowska，W.，ThornburyG.，Roosnek，E.，LansdorpP.M.Telomerelengthdynamicsinhumanlymphocytesubpopulationsweremeasuredbyflowcytometry.丑/o"c力/7oA16,743-747(1998))所述。因此，本文已經(jīng)證明，在廣泛地可接受模型系統(tǒng)中，核苷類似物GCV和ACV明顯地阻斷端粒末端轉(zhuǎn)移酶陽性癌。(c)在端粒末端轉(zhuǎn)移酶陽性癌細胞中阿昔洛韋(ACV)更昔洛韋(GCV)和噴昔洛韋(PCV)治療之后端?？s短、G2停滯和細胞凋亡的誘導按如下方式進行。使用端粒末端轉(zhuǎn)移酶陽性(HeLa)和端粒末端轉(zhuǎn)移酶陰性(U-20S)兩種細胞系。進行合適的分析，以檢測和證實在這些細胞中端粒末端轉(zhuǎn)移酶/LlRT的特異活性。用治療濃度的ACV(3.0^M)、GCV(1.5HM)或PCV(1.5pM)處理所述細胞系，以表明端粒DNA合成在細胞內(nèi)被抑制，并從而誘導端?？s短。通過流式細胞計用端粒特異肽核酸(PNA)探針來測量在ACV、GCV和PCV處理和未處理的細胞系中的端粒長度。為確定細胞周期分布，細胞用碘化丙啶(PI)染色。在處理10和14天后，兩種細胞系顯示了端?？s短、大量細胞凋亡和G2停滯。為表明在細胞周期分布中的改變，用ACV、GCV或PCV處理eLa和U-20S細胞14天，用PI染色，并同時通過流式細胞計來分析。結(jié)果展示了細胞周期的G2停滯。重要的是注意，改變是快速的并僅在ACV處理幾天之后就能被檢測到。用于這個研究中的U-20S(骨肉瘤)和HeLa(子宮頸)細胞系是獲得自美國典型培養(yǎng)物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection)(Rockville，MD)。在補充有10%胎牛血清的D-MEM介質(zhì)中，在37°C的5。/。C02的濕潤空氣中培養(yǎng)細胞。對于用ACV處理的細胞中，向培養(yǎng)基補充3pM的阿昔洛韋(acyclovir,TEVAPharm.Ind.Ltd,Israel).對于用GCV處理的細胞，向培養(yǎng)基補充1.5的GCV(Cymevene，Hoffman-LaRoche)。對于用PCV處理的細胞，向培養(yǎng)基補充1.5的PCV(penciclovir，Merck&Co.)。實時TRAP分析按(Wegeetal.，SYBRGreenreal-timetelomericrepeatamplificationprotocolfortherapidquantificationoftelomeraseactivity.jVwc7e/c2003;31(2):E3-3)所述的進行。對于用流式細胞計的端粒長度測量，細胞用綴合(C3TA2)3PNA探針端粒特異FITC(AppliedBiosystems)染色，并用0.06pg/mlPI反相染色，如(Rufer，N.，Dragowska，W.，ThornburyG.，Roosnek，E.，LansdorpP.M.Telomerelengthdynamicsinhumanlymphocytesubpopulationsweremeasuredbyflowcytometry."/"e由o/.16,743-747(1998))所述。因此，本文已經(jīng)證明，核苷類似物阿昔洛韋、更昔洛韋和PCV清楚的導致端粒長度的降低。實施例3.端粒末端轉(zhuǎn)移酶陰性(ALT)腫瘤產(chǎn)生的預防(a)注射了U-20S/RAS細胞的棵鼠Crll:CDl-/nu小鼠購買白CharlesRiverLaboratories,CharlesRiverDeutschlandGmbH(23.12.2004)?？偣?2只棵鼠皮下注射6x105U-20S/RAS細胞。將這些小鼠分為實驗和對照組。實驗組的小鼠從第一天開始就接受在飲用水中的AZT(lmg/ml)。在對照組中，小鼠產(chǎn)生腫瘤(在腫瘤細胞注射后，在N1中為第26天；在N2中為第34天和在N3中為第41天)。處死所用沒有腫瘤的小鼠。產(chǎn)生腫瘤的對照組的一只小鼠，首先在腫瘤細胞注射后的第51天被處死。機械性分離腫瘤組織以產(chǎn)生細胞混懸液。將大約2000萬個細胞接種到補充有10%FCS的McCoy，s5A培養(yǎng)基中。將所述組織培養(yǎng)細胞用于進一步的分析。對照組中有肺瘤的兩小鼠從第52天開始接受在飲用水中的AZT(lmg/ml)。一只小鼠在第80天死亡。第二只在肺瘤細胞注射后第110天被處死。收集腫瘤組織并儲存在-80。C用于進一步的分析。1.在對照組中六只小鼠中的三只產(chǎn)生了ALT腫瘤。AZT處理組中沒有小鼠產(chǎn)生腫瘤。2.從ALT胂瘤產(chǎn)生的組織培養(yǎng)是端粒末端轉(zhuǎn)移酶陽性的。其表明在端粒末端轉(zhuǎn)移酶陰性胂瘤內(nèi)，某些細胞自發(fā)地激活端粒末端轉(zhuǎn)移酵。3.用AZT處理并有ALT腫瘤的小鼠顯示出了腫瘤生長減緩。(b)注射了HeLa細胞的棵鼠對棵鼠皮下注射Hela細胞(3x105)，以表明在體內(nèi)對端粒末端轉(zhuǎn)移酶陽性肺瘤的治療和產(chǎn)生的預防。實驗組從第0天接受在飲用水中的纈更昔洛韋。人癌HeLa細胞培養(yǎng)物是購買自ATCC。全部12只CDl/-nu和12只NMRiI/-nu棵鼠都購買自CharlesRiverLaboratories,CharlesRiverDeutschlandGmbH。這些棵鼠皮下注射3xl(^個HeLa細胞。實驗組中的小鼠(每林6只小鼠)從第0天接受在飲用水中的Valcyte(val-ganciclovir)(1mg/ml)。在對照和治療組中的所有小鼠都產(chǎn)生了腫瘤。在大約14天內(nèi)，所有小鼠都產(chǎn)生了腫瘤。治療組的一只小鼠中的腫瘤開始退化，并在大約第30天，這個肺瘤被使用Valcyte⑧的單一療法清除了。治療組中的其他小鼠顯示了腫瘤生長的減緩。實施例4.端粒維持的ALT機制向依賴端粒末端轉(zhuǎn)移酶才;u制的切換在U2-OS細胞和HeU細胞中檢驗在本文中描述的AZT對生長細胞周期和端粒的作用。U2-0S細胞，其是端粒末端轉(zhuǎn)移酶陰性的，表達L1RT,而Hela細胞，其是端粒末端轉(zhuǎn)移酶陽性的，表達端粒末端轉(zhuǎn)移酶。(a)體外分析用0.2的AZT培養(yǎng)U-2OS細胞22天。通過flow-FISH用端粒特異PNA探針來分析活躍生長的克隆，并在實時TRAP分析中使用Hela細胞作為陽性對照。分析的活躍生長克隆在DNA含量和端粒長度方面不同于親本細胞。并且所有的分離活躍生長克隆在TRAP分析中，是端粒末端轉(zhuǎn)移酶陽性的。(b)體內(nèi)分析處死來自對照未處理組的從改良人U-2OS骨肉瘤產(chǎn)生腫瘤的棵鼠。被機械性分離腫瘤組織為細胞混懸液。將2000萬個細胞接種到補充有10°/。FCS的McCoy's5A培養(yǎng)基中。少數(shù)細胞附著到塑料表面，產(chǎn)生了組織培養(yǎng)物，其在實時TRAP分析中用Hela細胞作為陽性對照進行分析。通過RT-PCR證明產(chǎn)生的組織培養(yǎng)物的人來源。使用選擇性引物來表明人GAPDHmRNA的存在和鼠GAPDHmRNA的缺失。結(jié)果清楚地顯示，從ALT腫瘤產(chǎn)生的組織培養(yǎng)物是端粒末端轉(zhuǎn)移酶陽性的。其表明在端粒末端轉(zhuǎn)移酶陰性腫瘤內(nèi)，某些細胞自發(fā)地激活端粒末端轉(zhuǎn)移酶。換句話說，使用AZT對端粒末端轉(zhuǎn)移酶陰性癌細胞的治療允許選擇陽性細胞，并且癌能復發(fā)。實施例5.在施用雙雞尾酒，纈更昔洛韋和疊氮胸苷(AZT)或伐昔洛韋和Retrovir⑧后小鼠中腫瘤尺寸減少的驗證本實施例示例說明了在小鼠模型中雙雞尾酒的抗腫瘤活性和效力。(a)使用纈更昔洛韋和疊氮胸苷(AZT)組合的體內(nèi)分析人癌HeLa細胞培養(yǎng)物是購買自ATCC。全部24只CD1/-nu棵鼠都購買自CharlesRiverLaboratories,CharlesRiverDeutschlandGmbH。對這些小鼠皮下注射1x105個HeLa細胞。通過測量腫瘤的最大和最小直徑來確定肺瘤體積。使用公式V-4/371RraaxxRj進行計算，其中R,-腫瘤最大直徑的v^,和FLr腫瘤最小直徑的^。對棵鼠皮下注射lx105個HeLa細胞。在注射后第35天所有小鼠都產(chǎn)生了腫瘤，在這時對治療組的12只小鼠施用雙雞尾酒Valcyte⑧和Retrovir,每個濃度為在飲用水中l(wèi)mg/ml。在20天的雙雞尾酒治療后，對12只處理小鼠中待6只小鼠施用三雞尾酒(Valcyte⑧+Retrovir⑧+ddl)額夕卜21天，以在飲用7^中每個1mg/ml的劑量(見下文的實施例7)，并且僅6只小鼠繼續(xù)接受雙雞尾酒另外21天，這時對所有注射了Hela細胞的小鼠測量腫瘤。在保留的12只注射了Hela細胞但迄今未用任意雞尾酒或抗癌劑治療的小鼠中，6只養(yǎng)殖作為試驗剩余持續(xù)時間的對照。其他6只在注射Hela細胞后被用Xeloda⑧治療67天(見下文的實施例7)。來自雙雞尾酒治療組的小鼠顯示了50%的存活率。治療和未治療小鼠的肺瘤體積于本實施例的表格中。與未治療組相比，一只小鼠顯示了99.3%的肺瘤尺寸減小。與未治療組相比，一只小鼠顯示了98.9%的腫瘤尺寸減小，并且與未治療組相比一只小鼠顯示了95.8%的腫瘤尺寸減小。實施例5的表格-在雙雞尾酒治療后棵鼠中的腫瘤退化治療小鼠的編號*在注射Hela細胞后第75天棵鼠中的腫瘤體積(mm3)纈更昔洛韋+疊氮胸苷20小鼠114.1天小鼠223.6小鼠391.7未治療的對照42178.0(平均值)*所有用纈更昔洛韋(Valcyte)和Retrovir⑧治療的小鼠都顯示了毒性癥狀，也許是由于Valcyte和Retrovir⑧組合的不相容，在本領(lǐng)域中已知這種組合在某些病例中誘導嚴重的毒性。Valcyte和Retrovir⑧組合的部分或全部副作用能通過使用已知的防護劑和支持療法來抵消，但在本試驗的小鼠中沒有使用。(b)使用伐昔洛韋和疊氮胸苷(AZT)組合的體內(nèi)分析小鼠肝癌MH22A購買自細胞學研究所得組織培養(yǎng)物保藏中心(thetissueculturecollectionoftheInstituteofCytology)(RussianAcademyofMedicalScience,Petersburg,Russia)。將冷凍細胞解凍，轉(zhuǎn)移至補充有10。/。胎牛血清的培養(yǎng)基MEM。在37°C的5%C(U顯潤空氣中培養(yǎng)細胞。為測定MH22A細胞的端粒末端轉(zhuǎn)移酶狀態(tài)，如上所述在實時TRAP分析中使用Hela細胞作為陽性對照進行分析這些細胞。結(jié)果清楚地顯示MH22A細胞是端粒末端轉(zhuǎn)移酶陽性的。八個星期大的雄性C3HA自交小鼠購買自LaboratoryAnimalsBreadingFacilityofRussianAcademyofMedicalScience(Rappalovo，Leningradregion)。將大約2xl05個MH22a細胞皮下注射入35只小鼠的背側(cè)。在注射之后，將小鼠隨機分為不同的實驗組。(a)—組7只小鼠從第0天開始接受伐昔洛韋(Valtrex,GlaxoSmithKline)，濃度為在飲用水中1mg/ml。在第30天，小鼠開始接受在飲用水中的1mg/ml伐昔洛韋、1mg/mlAZT和1mg/ml的Xeloda⑧的混合物。(b)—組7只小鼠從第0天開始接受在飲用水中的1mg/ml伐昔洛韋和lmg/mlAZT(RetrovirI.V.，GlaxoSmithKline)的混合物。(c)一組7只先前沒有治療的小鼠從第14天開始接受在飲用水中的1mg/ml伐昔洛韋和1mg/ml的AZT的混合物。(d)—組7只先前沒有治療的小鼠從第16天開始接受在飲用水中的1mg/ml伐昔洛韋和1mg/m的1AZT的混合物。從30天之后，小鼠開始接受在飲用水中的1mg/ml伐昔洛韋、1mg/mlAZT和1mg/ml的Xeloda⑧的混合物。(e)—組7只未治療的小鼠作為陽性對照。所有對照組的小鼠在第14天已經(jīng)產(chǎn)生直徑5-8mm的腫瘤。在實驗的笫17天，接受了Valcyte和AZT組合的組中的5只小鼠沒有腫瘤。相同組的兩只小鼠具有直徑為3mm的肺瘤。來自另一個組的所有小鼠已經(jīng)產(chǎn)生了平均直徑10mm的腫瘤。在試驗的第45天，從第O天單獨接受伐昔洛韋的7只小鼠和從第16天接受Valtrex和Retrovir⑧組合的7只小鼠開始在飲用水中接受Xeloda⑧，濃度為1mg/ml。在試驗的第60天，從第0天接受Valtrex⑧和Retrovir⑧組合的7只小鼠中的四只保持無腫瘤。在所有其他治療組中，僅兩只小鼠保持無腫瘤。所有的對照小鼠具有比治療組尺寸更大的腫瘤。在試驗的第75天，對照和治療組中的小鼠開始死亡。在試驗的第85天，在對照未治療組中所有小鼠都死亡了。預防組中只有四只小鼠(從第0天Valtrex和Retrovir)和各個治療組中的兩只小鼠(從第0天Valtrex⑧和從第45天Xeloda,從第16天Valtrex和Retrovir和從第45天Xeloda、從第14天Valtrex⑧和Retrovir)存活且無腫瘤。在這個時間點，所有的治療都祐:停止。在試驗的150天，預防組中的四只小鼠和各個治療組中的兩只小鼠仍然存活和無肺瘤的。實施例6.在暴露于三雞尾酒，阿昔洛韋+AZT+ddl，的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的培養(yǎng)細胞內(nèi)端?？s短的驗證用AZT和ACV對端粒末端轉(zhuǎn)移酶陰性ALT細胞(U-2OS)治療28天允許選擇對兩種藥物都有抗性的增殖細胞。這些被選擇的細胞用AZT、ACV和0.01mg/L的ddl組合的治療i秀導進^f亍性的端?？s短和細胞凋亡。實施例7.在施用雙雞尾酒Valcyte⑧和Retrovir或Valtrex和Retrovir⑧后，小鼠中腫瘤尺寸減小的驗證這個實施例示例說明三雞尾酒通過選擇性的增加小鼠模型中肺瘤細胞的敏感性增強DNA損害化學治療劑的效力的潛能。如同在上文實施例5中提及的，全部6只小鼠，在20天的雙雞尾酒治療后，再施用三雞尾酒(Valcyte+Retrovir+ddI，在飲用水中劑量分別為1mg/ml)額外的21天。在14天的三雞尾酒治療后，將濃度為1mg/ml的Xeloda⑧添加到所述三雞尾酒中。6只先前沒有用任意藥物治療的小鼠在注射Hela細胞后第67天用在飲用水中濃度為1mg/ml的Xeloda⑧治療。在注射Hela細胞后第75天，采集所有小鼠腫瘤測量數(shù)據(jù)。來自對照未治療和僅用Xeloda⑧治療組的小鼠顯示了66%的存活率。與未治療對照組相比，僅用Xeloda⑧治療組小鼠的腫瘤平均尺寸要小17%。用三雞尾酒和Xeloda⑧組合治療的小鼠顯示了100%的存活率。治療和未治療小鼠的腫瘤體積在本實施例的表格中。組內(nèi)6只小鼠中的兩只，肺瘤完全消失。在其余的四只小鼠中，胂瘤僅能通過觸診確定。對于腫瘤減小，與僅有Xeloda⑧治療的組相比，兩只小鼠顯示了99.8%的腫瘤減小。與僅有Xeloda⑧治療的組相比，一只小鼠顯示了98.2%的腫瘤尺寸減小。與僅有Xeloda⑧治療的組相比，一只小鼠顯示了90，0。/。的腫瘤尺寸減小。實施例7的表格-在用雞尾酒和遺傳毒性試劑組合治療后棵鼠中腫瘤的退化/消失<table>tableseeoriginaldocumentpage59</column></row><table>*所有用Valcyte和Retrovir⑧治療的小鼠都顯示了毒性癥狀，也許是由于Valcyte和Retrovir⑧組合的不相容，在本領(lǐng)域中已知這種組合在某些病例中資導嚴重的毒性。Valcyte和Retrovir⑧組合的部分或全部副作用能通過使用已知的防護劑和支持療法來抵消，但在本試驗的小鼠中沒有使用。實施例8.使用有遺傳毒性化學治療干擾的細胞毒腫瘤治療(基礎(chǔ)治療)對人類患者的治療這個實施例示例說明了引入DNA損害遺傳毒性化學治療的基礎(chǔ)治療(使用雙或三雞尾酒)在人類患者中的治療效力。所述患者是女性，65歲，被診斷為不能手術(shù)的胃癌，如下更全面的描述該患者，在胃痛、重量減輕、惡心和嘔吐的不適后，被診斷為擴散浸潤胃癌，Ascitis的等級IV。作為診斷的一部分，臨床、放射和外科步驟的組合。這些評價有助于定義這個患者癌的階段，并揭供對預后的了解和對于治療計劃的良好基礎(chǔ)。更具體地說，作為初步檢查的一部分，對該患者上進行纖維胃鏡檢查術(shù)。在此初步檢查期間，發(fā)現(xiàn)患者的胃變形、僵硬并在注氣時相對不可擴張。并且，在胃的上三分之二處，檢測到失血組織。胃竇沒有任何病變。從胃組織進行多位活組織檢查。依據(jù)組織分析，發(fā)現(xiàn)該患者具有較低分化等級的胃腺癌。使用反差的胃的X射線檢查揭示出以下臨床特征從胃的賁門下部分開始至胃的下三分之一，胃壁是僵硬的。胃在中間的三分之一的直徑是2.5厘米。胃小彎上的腫瘤的長度是7厘米，和在胃大彎上是從ll至12厘米。在胃大彎的中間，也檢測到了潰瘍。胃竇和十二指腸沒有任何病變。也進行了診斷性腹腔鏡檢查。其揭示了壁腹膜和臟腹膜的總癌變數(shù)。發(fā)現(xiàn)癌是不能手術(shù)的。該患者用基礎(chǔ)治療預治療30天，繼之以引入了Xeloda⑧治療的基礎(chǔ)治療53天，如下文更詳細的描述(a)基礎(chǔ)治療1片Retrovir(AZT)300mg和1片Zovirax(阿昔洛韋，GlaxoWellcome),400mg/Valcyte(纈更昔洛韋)450mg/Valtrex(纈氨酸-ACV)500mg全部每日兩次。在基礎(chǔ)治療的83天期間使用不同的無環(huán)核苷類似物，原因是與市場可購得相關(guān)?；A(chǔ)治療初始是用阿昔洛韋，其被使用9天，繼之以Valcyte30天并然后繼續(xù)在剩余的治療期間用Valtrex⑧。這些藥物在攝入食物之前2小時或之后2小時口服施用。所述基礎(chǔ)治療持續(xù)11.9星期。(b)DNA損害治療從所述基礎(chǔ)治療的第31天，Xeloda⑧與所述基礎(chǔ)治療藥物一起以4片500mg(2g)每日兩次(即，一天共4g)的劑量口服施用。用Xeloda⑧的干擾由三個Xeloda⑧過程組成，第一療程9天，繼之以14天的休息，然后第二療程7天，繼之以14天的休息，和然后最后一個療程是10天。在整個這個時期內(nèi)維持所述基礎(chǔ)治療。在上述癌治療停止后大約4星期內(nèi)，進行剖腹術(shù)。在腹腔中發(fā)現(xiàn)了大約2升腹水(asceticfluid)。然而，沒有檢測到腹膜癌變的跡象。肝和膈膜沒有病變。在觸診中胃壁是僵硬的。然而，胃漿膜沒有病態(tài)跡象。通過常規(guī)臨床和圖像檢查按時的監(jiān)測所述患者超過一年。這些檢查證實疾病的陽性動態(tài)是穩(wěn)定的或在控制之下。使用Xeloda⑧的遺傳毒性化學治療在該患者中引起毒性，因此，不能無限期的施用直到患者獲得完全的反應(yīng)。相反，在患者中維持的作為基礎(chǔ)治療的雙雞尾酒和三雞尾酒組分的數(shù)量在維持期間對患者或者是最低毒性的或者是無毒的?？梢蚤L期施用給定的雞尾酒藥物并對抗癌癥，而不用擔心在中止Xeloda⑧治療期間腫瘤的再生。因此，；f艮顯然，能夠影響腫瘤細胞中端粒維持或誘導端?？s短、G2/M停滯和/或大量細胞凋亡的基礎(chǔ)治療，提供了預防胂瘤生長和存活率優(yōu)勢的良好的風險-效益比。簡而言之，沒有接受本文所公開的基礎(chǔ)治療的患者的癌癥處于急性期?；加胁荒苁中g(shù)胃癌的患者對治療的反應(yīng)確實是使人驚訝的，因為對不能手術(shù)胃癌的良好反應(yīng)是非常罕見的。雖然在本文提供了用包含核普類似物的三雞尾酒和使用本公開的治療方案來成功治療胃癌的人類患者的數(shù)據(jù)，應(yīng)當理解與本發(fā)明的抑制劑組合的常規(guī)改良的治療方案能用于其他形式癌的治療，例如黑素瘤、NSCLC、腎細胞癌及其他本領(lǐng)域已知的癌，并在此舉例說明。此外，本發(fā)明提供了在所有類型癌的治療中的改良，所述癌能用包含遺傳毒性化學治療劑的DNA損害癌治療劑來治療，因為通過使用本發(fā)明的施用方案，與現(xiàn)有技術(shù)用于施用抗贅生物有效數(shù)量或劑量的DM損害劑的相應(yīng)方案相比有更低的毒性和/或需要更少的時間。實施例9.本發(fā)明無環(huán)核苷類似物和前體藥物的制備按照在核苷和核苷酸化學實踐中公認的合成方法來制備本發(fā)明的無環(huán)核香類似物。本發(fā)明化合物制備中使用的合成方法的說明參考下文"ChemistryofNucleosidesandNucleotides,，，LB.Townsend，ed.，Vols.13，PlenumPress,1988，其在此通過參考全部引入本文。根據(jù)下述實施例詳述的步驟來制備本發(fā)明分子式I-IV的無環(huán)核苷類似物。實施例不是意圖以任何方式限定本發(fā)明的范圍，并且對它們將不做此解釋。核普和核苷酸合成領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，以下將苯基氰(200ml)和重蒸鎦的乙烷-1，2-二醇(600ml)(防止有水分；NaOH)回流，直至停止放出氨氣(3天)，然后冷卻。添加水(4000ml)并用醚(3x200ml)提取析出的油。在干燥和除去溶合物。除非另作說明，所有的溫度都是攝氏度。U)分子式(I)或SN1的合成2-羥乙基苯甲酸酉旨。劑后，在減壓下通過實驗室塔精餾殘渣。這種精餾產(chǎn)生241g(74%)的2-羥乙基苯甲酸酯，沸程160-162C(14mm)。2-(氯甲氧基)苯甲酸乙酯。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage63</formula>干HC1氣體在O匸攪拌3h,通過在200ml的干C2H4CD40g(0.44mol)的多聚曱醛內(nèi)的50g(0.3mo1)2-羥乙基苯甲酸酯的混合物。溶液被在CaCh上干燥18h，過濾，并在真空下蒸發(fā)。將殘留的油蒸餾，產(chǎn)生52.5g(93。/。)的2-(氯甲氧基)苯甲酸乙酯，bpl26-129X:(0.5mm)。l-[[2-(苯甲羧基)乙氧基]甲基]-5-甲基尿嘧啶。6.30g(50mmo1)胸腺嘧啶、100ml六甲基二硅氮烷和1ml的三甲基甲硅烷基氯化物的混合物在氮氣下攪拌回流20h。產(chǎn)出溶液在真空下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)為油。向50ml二氯甲烷中的殘留油添加10.60g(49.4mmol)的2-(氯甲氧基)苯甲酸乙酯。溶液在冰上冷卻，并快速滴加在50ml的二氯曱烷中的11ml(80mmol)三乙胺。產(chǎn)出溶液在環(huán)境溫度下攪拌7化。將反應(yīng)物傾倒入300ml含水(1:1)乙醇溶液中，并在分液漏斗中振搖。產(chǎn)出混合物用500ml水稀釋。有機層分離、過濾并在真空中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。在包含少量EtOAc的環(huán)己烷條件下結(jié)晶殘渣得到9.29g(61%);mp94-99C，其包含一些雜質(zhì)。從EtOAc再結(jié)晶幾次得到純物質(zhì)得到4.60g(30%);mpl15-116t:。NMR(500MHz,DMS0—d6)5，1.77(s，3H)3.87(t，2H)，4.39(t，2H)5.13(s，2H)，7.44-7,98(2t+d，5H)，11.16(s，1H)。1-[(2-羥乙氧基)甲基]-5-甲基尿嘧啶。將0.870g(2,86mmol)1-[[2-(苯甲羧基)乙氧基]甲基]-5-曱基尿嘧啶和20ml的40y。含水甲胺的溶液在50'C的水浴上加熱3h。將反應(yīng)物冷卻并在真空中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。殘留漿用乙醚研磨，以得r]"f卞其用EtOAc消化以移除N-曱基苯甲酰胺。收集白色固體并用Et20清洗得到0.495g(86%);mpl38-140X:。從乙酸乙酯再結(jié)晶^到分析純的物質(zhì)得到0.375g(65%);mpl39-140。C。NMR(500MHz,DMSO-d6)5，1.81(s，3H)，3.52(s，4H)，4.37(brs，1H)，5.07(s，2H)，7.41(s，1H)，11.06(s，1H).(b)分子式(II)或SN2的合成9-[(2-(苯甲羧基)乙氧基)曱基]-腺嘌呤。o在石蠟中60%分散氫化鈉，(3.26g，82mmol)用己烷洗滌(3x100ml)，然后在OX:懸浮于DMF(250ml)中。在攪拌下向此溶液緩慢加入腺嘌呤(10.0g，74mmol)。在添加完成后，將反應(yīng)混合物加熱至室溫并攪拌2h，然后在持續(xù)攪拌下添加2-(氯甲氧基)苯甲酸乙酯(24g，1.5eq.)超過3h。反應(yīng)混合物在室溫下再攪拌24h，然后溶液被濃縮為糊。添加水(100ml)，采集沉淀，并從1-丁醇再結(jié)晶，以得到標題的酯(8.lg,35%)。NMR(500MHz，DMS0-cU5，3.91(t，2H)，4.37(t，2H)，5.64(s,1H)，6.93(br.s，2H)，7.44-7.89(2t+d，5H)，8.118(s，1H)，8.123(s，1H).9-[(2-羥乙氧基)曱基]-腺嘌呤'CH3NH2,H2〇50。C'3hHO、^jh2，N將1.2g(3.83mmol)的9-[[2-(苯甲羧基)乙氧基]甲基]-腺嘌呤和20ml40°/。含水甲胺的溶液在50'C的水浴上加熱3h。將反應(yīng)物冷卻并在真空中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。殘留漿用Et20研磨，以得到固體，其用Et20消化以移除N-甲基苯甲酰胺。收集白色固體并用乙醚洗滌得到0.672g(84%)。從1-丁醇再結(jié)晶得到分析純物質(zhì)得到0.600g(75%)。NMR(500MHz，DMSO-d6)5，3.51(t，2H)，3.55(t，2H)，4.44(s，1H)，5.59(s，2H)，6.89(br.s，2H)，8.12(s，2H).(c)分子式(III)或SN3的合成1，3-二-0-苯曱基甘油。將氫氧化鈉(lOOg，2.5mol)的水(200mL)溶液以添加到苯甲醇(400g，3.9mol)中超過10min。將混合物冷卻至25X:，然后在快速攪拌下超過30min添加表氯醇(lOOg，1.08mol)。繼續(xù)強烈攪拌16h。然后用水(lOOOmL)稀釋該混合物，并用甲苯(3x500mL)提取。甲苯提取物用水(500mL)洗滌，在Na2S04上干燥并蒸發(fā)為油，其被蒸餾以得到150g(50%)的1,3-二-0-苯甲基甘油，bpl55C(0.5mm)。2-0-氯甲基，1，3-二—0—苯甲基甘油〇-〇--OH(CH2〇)n,HCI!氣體0。C,3h〇'o.-CI將氯化氫氣體(通過濃縮的H2S0,干燥)在0°C通氣進入多聚曱醛(32g,0.8mol)和1，3-二-0-苯甲基甘油(100g，0.37mol)在二氯甲烷(lOOOmL)內(nèi)的攪拌混合物中，直至所有的固體被溶解(3h)。產(chǎn)物溶液在0匸儲存16h，在MgS04上干燥，然后蒸發(fā)得到作為非常不穩(wěn)定透明油的2-0-氯曱,基，1,3-二-0-苯曱>基甘油。1-[U，3-二千氧基-2-丙氧基)曱基]-5-甲基尿嘧啶。將20g(159mmol)胸腺嘧咬、100ml六甲基二硅氮烷和1ml的三甲基硅烷基氯化物的混合物在氮氣下攪拌回流20h。將產(chǎn)出溶液在真空下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到油。向300ml二氯甲烷中的殘留油中添加56g(175mmol)的2-0-氯甲基，1，3-二-0-苯曱基甘油。將溶液在冰上冷卻，并快速滴加在60ml的二氯甲烷中的33ml(240mmol)三乙胺中。產(chǎn)出溶液被在環(huán)境溫度下攪拌72h。將反應(yīng)物傾倒入500ml含水(1:1)乙醇溶液中，并在分液漏斗中振搖。用500ml水稀釋產(chǎn)出混合物。有機層分離、過濾并在真空中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。殘留物在包含少量EtOAc的己烷條件下結(jié)晶。從EtOAc再結(jié)晶幾次得到純物質(zhì)得到17.6g(27%);mp96-98°C。NMR(500MHz,DMS0-d6)5，1.74(s，3H),3.51(m，4H),3.99On,1H)，4.48(s，4H)，5.17(s，2H)，7.26(s，10H)，7.53(s,1H)，11.12(s，1H).l-[(1，3-二羥-2-丙氧基)曱基]-5-曱基尿嘧啶。將1-[(1，3-二千氧基-2-丙氧基)曱基]-5-曱基尿嘧啶(30g，73mmol)、在碳上的20%氬氧化4巴(Pearlman's催化劑)(1000mg)、環(huán)己烯(400mL)、和乙醇(200mL)的混合物被在氮氣下加熱回流。在8和24h后，添加額外的催化劑(250mg)。在36h后，將該溶液冷卻至室溫并過濾。蒸發(fā)濾液，并用苯(100mL)研磨殘留物得到14g(83%)的粗l-[(1,3-二羥-2-丙氧基)甲基]-5-甲基尿嘧啶。從l-丁醇再結(jié)晶得到純物質(zhì)mpl56-157C。腿(500MHz，DMSO-d6)5，1.81(s，3H)，3.37(m，2H)，3.44(m，2H)，3.53(m，1H)，4.33(br.s，2H)，5.15(s，2H)，7.45(s，1H)，11.09(s,1H).(d)分子式(IV)或SN4的合成9-[(1，3-二爺氧基-2-丙氧基)甲基]-腺嘌呤。在石蠟中60%分散的氫化鈉(6.2g,l56mmol)用己烷洗滌(3x100ml)，然后在O'C懸浮在DMF(500ml)中。在攪拌下向此溶液緩慢加入腺嘌呤(19g,141mmol)。添加完成后，將反應(yīng)混合物加熱至室溫并攪拌2h，然后在持續(xù)攪拌下以超過2h添加2-O-氯甲基，1，3-二-0-苯甲基甘油(68g，1.5eq.)。反應(yīng)混合物被在室溫下再攪拌24h,然后濃縮該溶液。添加水(400ml)和收集沉淀物，并從EtOAc再結(jié)晶。從EtOAc再結(jié)晶幾次得到17.2g(29%)的9-[(1，3-二千氧基-2-丙氧基)曱基]-腺噤呤。■(50(U〖Hz,DMS0-d6)5，3.45(m，211),3.50(m，211)，4.1G(m，1H)，4.42(s，4H)，5.68(s，2H)，6.93(br.s，2H)，7.21(m，5H)，7.27(m，5H)，8.08(s，1H),8.13(s，1H).9-[(1，3-二羥-2-丙氧基)甲基]-腺噪呤,NH2NH20-0-Pearhian's催化劑，環(huán)己烯，C2H5OH回流48hHO'HO-將9-[(1，3-二爺氧基-2-丙氧基)甲基]-腺嘌呤(35g，83mmol)、在碳上的20°/。氫氧化鈀(Pearlman's催化劑)(1000mg)、環(huán)己烯(400mL)和乙醇(200mL)的混合物在氮氣下加熱回流。在16和36h后，添加額外的催化劑(250mg)。在48h后，將溶液冷卻至室溫并過濾。蒸發(fā)濾液，并用甲苯(IOOmL)研磨殘留物得到14g(83%)的粗9-[(1，3-二羥-2-丙氧基)甲基]-腺噤呤。從1-丁醇再結(jié)晶得到13g的純物質(zhì)。NMR(500MHz,DMS0-d6)5，3.36(m，2H)，3.45(m，2H)，3.61(m，1H)，4.43(br.s，2H)，5.69(s，2H)，6.98(br.s，1H)，8.15(s,1H)，8.18(s，1H)。(e)分子式(V)或SN5的合成三乙基1，1，2-乙烷三羧酸酯。CH3--^\,〇b《NaOEt,Et〇H〉+CI~\,—CH3------〇一乂回流，4hCH3~7、0OCH3""~\b-《o—乂^~oCH,~7〇O''金屬鈉(23g，lmol)在攪拌下溶于無水乙醇(0.5L)中，然后以超過10分鐘添加丙二酸二乙5旨(153ml,1mcl)。然后滴加氯乙酸乙酯(117g,0.95mol)到攪拌的混合物。在添加完成后，將反應(yīng)混合物加熱回流4小時，然后傾倒入2L的水中并用醚提取(3x500mL)。將醚部分合并，在MgS0h上干燥，過濾和蒸發(fā)得到油。其被真空蒸餾得到197g(84%)的三乙基1，1，2-乙烷三羧酸酯。2-(羥甲基)丁烷-1,4-二醇。t-BuOH，MeOH,NaBH4)~A/~CH3~-—^^回流.'4hCH3~/OO向在900mL無水叔丁醇中的100mL三乙基l，1，2-乙烷三羧酸酯U08g，0.44mol)和50g氫化硼鈉的回流溶液中，以超過150分鐘滴加IOOmL的甲醇。將產(chǎn)物溶液再回流90分鐘，然后冷卻至10匸。在強烈攪拌下小心添加10%鹽酸以中和該溶液。過濾溶液并用300mL的無水乙醇洗滌無機殘留物。合并有機溶液并在真空中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。用400mL無水乙醇提取殘留物并過濾溶液。在減壓(0.5mm)下移除溶劑以得到48g(92%)的2-(羥甲基)丁烷-1,4-二辨的祐的透明油。5-(2-羥乙基)-2，2-二曱基-l，3-二氧六環(huán)向在200ml無水THF中的2-(羥曱基)丁烷-1，4-二醇(48g，0.4mol)和2，2-二甲氧基丙烷(55g，0.45mol)的溶液中添加3g對-甲苯磺酸一水化物。將溶液在室溫下攪拌60分鐘，然后通過添加三乙胺來中和。過濾溶液并在減壓下蒸發(fā)。將殘留物溶于1000ml的二乙醚，過濾并再蒸發(fā)。產(chǎn)生對混合物由47%5-(2-羥乙基)-2,2-二甲基-1，3-二氧六環(huán)、21%七-元環(huán)縮酮及其他產(chǎn)物組成(基于GCMS數(shù)據(jù))。殘留物通過柱層析純化，在硅膠上用l-氯丁烷、氯仿和氯仿甲醇混合物(25:1)洗脫，以得到24g(38%)的5-(2-羥乙基)-2,2-二甲基-1，3-二氧六環(huán)的無色液體。5-(2-溴乙基)-2，2-二甲基-1，3-二惡烷。H3CP-H3Cb--CBr4,P(Ph)3,DMFA-OH0°C,1h將在500mlN，N-二甲基甲酰胺中的24g(0.15mol)的5-(2-羥乙基)-2，2-二甲基-1，3-二惡烷和76g(0.23mol)四溴化碳的溶液，放置在水浴(0-+5。C)中，并快速攪拌同時添加60g(0.23mol)三苯基膦。攪拌該溶液1小時。然后用飽和碳酸氫鈉水溶液(200ml)稀釋該溶液，然后用水(300ml)稀釋并用己烷提取(3x200ml)。合并的有機層在硫酸鎂上干燥，過濾和在減壓下移除溶劑。殘留物被放置在真空下(0.5mm)，通緩慢流動的干燥氬氣2小時以移除三溴曱烷。殘留物被溶于己烷。過濾該溶液并移除溶劑以得到26g(81%)的5-(2-溴乙基)-2,2-二曱基-1，3-二惡烷的透明無色液體。l-[2-(2，2-二甲基-1，3-二惡烷-5-基)-乙基]-5-曱基尿嘧啶。將6.3g(50mmol)胸腺嘧啶、100ml六甲基二硅氮烷和1ml的三甲基曱硅烷基氯化物的混合物在氣氣下攪拌回流20小時。將產(chǎn)出溶液在真空下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)為油。向在50ml二氯甲烷中的殘留油中添加llg(5011111101)的5-(2-溴乙基)-2，2-二甲基-1，3-二惡烷。將溶液在冰上冷卻，并快速滴加在50ml的二氯甲烷中的llml(80mmo1)三乙胺重。在環(huán)境溫度下攪拌產(chǎn)出溶液72小時。將反應(yīng)物傾倒入300ml含水(l:l)乙醇溶液中，并在分液漏斗中振搖。用500ml水稀釋產(chǎn)出混合物。將有機層分離、過濾并在真空中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。在含有部分乙酸乙酯的環(huán)己烷中結(jié)晶殘留物得到7.3g(54%)，其包含部分雜質(zhì)。從乙酸乙酯再結(jié)晶幾次得到純的1-[2-(,二甲基-1,3-二惡烷-5-基)-乙基]-5-曱基尿嘧啶得到6.lg(45%)。LCMS純度-98.4%1-[4-羥基-3-(羥曱基)丁-l-基]-5-甲基尿嘧啶。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage72</formula>將在30mL的2M鹽酸中的6.1g(23mmol)(1-[2-(2，2-二曱基-1,3-二惡烷-5-基)-乙基]—5-曱基尿嘧啶溶液加熱回流90分鐘。通過添加NaOH水溶液(10%)中和該溶液，然后冷卻至10。C。過濾該溶液，并用水洗滌固體以得到3.5g(67%)的1-[4-羥基-3-(羥甲基)-1-丁基]-5-甲基尿嘧啶。LCMS純度-97.2%。(f)分子式(VI)或SN6的合成9一[2-(2，2-二甲基一l，3-二惡烷-5-基)一乙基]一腺嘌呤。將在石蠟中60。/。分散的氫化鈉(1.67g，42腿ol)用己烷洗滌(3x50mL)，然后在O'C懸浮在150mL無水DMF中。在攪拌下向此溶液緩慢加入腺嘌呤(5.Og，37mmo1)。在添加完成后，將反應(yīng)混合物加熱至室溫并攪拌二小時，然后在持續(xù)攪拌下以超過三個小時添加12.4g(56mmol，1.5eq.)的5-(2-溴乙基)-2，2-二甲基-1，3-二惡烷。在室溫下在攪拌反應(yīng)混合物24小時，然后將該溶液減壓濃縮為糊。添加水(100mL)和收集沉淀物，并從l-丙醇結(jié)晶，以得到9-[2(2，2-二甲基-1，3-二惡烷-5-基)-乙基]-腺嘌呤(4.8g，46%)。再結(jié)晶后LCMS純度為-98.1%。9-[4-羥基-3-(羥曱基)丁-l-基]-腺嘌呤。將在20ml的2M鹽酸中的4.3g(15.5mmol)9-[2-(2，2-二甲基-1，3-二惡烷-5-基)-乙基]-腺噪呤溶液加熱回流90分鐘。通過添加NaOH水溶液(10%)中和該溶液，然后冷卻至10X:。過濾該溶液，用水洗滌固體以得到2.6g(71%)的9-[4-羥基-3-(羥甲基)丁-l-基]-腺嘌呤。LCMS純度-97.7。/"(g)SN1的纈氨酸酯(VSN1)的合成2-[(5-甲基尿嘧啶-l-基)甲氧基]-乙基N-[(爺氧,)幾募1-/,-纈氨酸酯。CBZ-L纈氨酸DMAP，DCC，DMFCH3O將3g的1-[(2-羥乙氧基)甲基]-5-甲基尿嘧啶和200ml無水二甲基甲酰胺的混合物加熱至60X:，得到溶液。將4g的N-[(節(jié)氧基)羰基]-Z-纈氨酸、400mg的4-二甲基氨基吡啶和4g的二環(huán)己基碳二亞胺添加到該熱溶液中。使產(chǎn)物溶液冷卻至室溫并攪拌16小時。向反應(yīng)混合物中再次補充另一份N-[(千氧基)羰基]-Z-纈氨酸、4-二曱基氨基吡啶和二環(huán)己基碳二亞胺，并在室溫下攪拌兩天。過濾該混懸液，在減壓下濃縮無色濾液，并將殘留物溶于甲醇/二氯甲烷并通過快速色語法，在硅膠上純化，用10°/。甲醇/二氯甲烷洗脫以獲得2-[(5-甲基尿嘧啶-l-基)甲氧基]-乙基N-[(芐氧基)羰基〗—Z-纈氨酸酯，為5.5g(85%)的白色固體。2-[(5-甲基尿嘧啶-l-基)甲氧基]-乙基Z-纈氨酸酯鹽酸鹽一水化物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage75</formula>將4g的2-[(5-甲基尿嘧啶-l-基)甲氧基]-乙基N-[(芐氧基)羰基]-纈氨酸酯、500mg在碳上的5%鈀、100ml甲醇、100mlTHF和10ml的0.5M含水HCI溶液的混合物在5atm的&下振搖4小時。將反應(yīng)混合物過濾并濃縮和干燥濾液，以得到標題的化合物，為白色固體。從含水乙醇(l:3)結(jié)晶固體，得到1.92g(62%)2-[(5-曱基尿嘧啶-l-基)甲氧基]-乙基丄-纈氨酸酯鹽酸鹽一水化物5為白色粉末。腿(500MHz，DMS0-d6)5，0.96(d，3H)，1.02(d，3H)，1.79(s，3H)，2.21(m，1H)，3.22(m，3H)，4.25-4.34(m，2H)，5.09(s，2H)，7.52(s，1H)，8.68(brs，3H)，11.23(s，1H).(h)SN2的纈氨酸酯(VSN2)的合成2-[(腺嘌呤-9-基)甲氧基]-乙基N-[(芐氧基)羰基]-Z-纈氨酸酯,<formula>formulaseeoriginaldocumentpage76</formula>將4g的9-[(2-羥乙氧基)甲基]-腺嘌呤和200ml無水二甲基曱酰胺的混合物加熱到得到溶液。將5g的N-[(節(jié)氧基)羰基]-Z-纈氨酸、500mg的4-二甲基氨基吡啶和5g的二環(huán)己基碳二亞胺添加到該熱溶液中。使產(chǎn)物溶液冷卻至室溫并攪拌16小時。向反應(yīng)混合物中再次補充另一份N-[(節(jié)氧基)羰基]一丄-纈氨酸、4-二甲基氨基吡啶和二環(huán)己基碳二亞胺，并在室溫下攪拌24小時。過濾該混懸液，在減壓下濃縮無色濾液，并將殘留物溶于二氯甲烷并通過快速色語法，在硅膠上純化，用二氯甲烷洗脫以獲得2-[(腺嘌呤-9-基)甲氧基]-乙基氮-[(節(jié)氧基)羰基]-Z-纈氨酸酯，為6.7g(79%)的白色固態(tài)。2-[(腺嘌呤-9-基)甲氧基]-乙基L-纈氨酸酯鹽酸鹽一水化物。將&的2-[(腺嘌呤-9-基)甲氧基]-乙基N-[(芐氧基)羰基]-:-纈氨酸酯、700mg在碳上的5°/。鈀、130ml甲醇、130mlTHF和20ml的0.5M含水HCI溶液的混合物在5atm的&下振搖8小時。將反應(yīng)混合物過濾并濃縮和干燥濾液，以得到標題的化合物，為白色固體。從乙醇中結(jié)晶固體，得到2.24g(58%)2-[(腺噪呤-9-基)甲氧基]-乙基Z-纈氨酸酯鹽酸鹽一水化物，為白色粉末。NMR(500MHz，DMSO-d6)5，0.91(d，3H)，0.95(d，3H)，2.18(m，1H)，3.68(s，2H)，3.81(br.s，2H)，4.26(m，2H)，5.72(s，2H)，8.55(s，1H)，8.71-8.77(m，3H)，9,03(br.s，1H)，9.68(br.s，1H)實施例10.涉及SN化合物的生物分析(a)細胞毒性分析使用本領(lǐng)域熟知的藥理學模型，即MTT-微孔板四唑細胞毒性分析，來確定本發(fā)明化合物的細胞毒性作用。特別地，使用在Mosmann，1983,Rapidcolorimetricassayforcellulargrowthandsurvival:applicationtoproliferationandcytotoxicityassays,JImmunolMethods,65:55-63描述的MTT分析步驟來進行細胞毒性分析。簡要地說，通過使用以在200mL的生長培養(yǎng)基中104個MDCK(ATCC)細胞/孔放置的96-孔微孔板，來進行該分析。為了測定ICw將細胞連續(xù)兩天暴露給不同濃度的SN1，SN2，SN3，SN4和SN1的纈氨酸酯。在第二天結(jié)束時進行MTT分析。每個分析都使用不含有任意藥物的對照來進行。所有分析都在3個重復的孔甲進行至少2次。如下計算IC5。細胞毒劑量(微克/毫升)SN1-750SN2-750SN3->1000SN4->1000VSN1->1000.(b)體外分析在端粒末端轉(zhuǎn)移酶陽性癌細胞中對端?？s短、G2停滯和細胞調(diào)亡的誘導按如下方式進行。使用端粒末端轉(zhuǎn)移酶陽性(HeLa)和端粒末端轉(zhuǎn)移酶陰性(U-2OS)兩種細胞系。進行合適的分析，以檢測和證實在這些細胞中的端粒末端轉(zhuǎn)移酶/LlRT特異活性。用治療濃度的SN1(1.5nM)或SN2(1.5nM)處理所述細胞系，以證明在該細胞內(nèi)的端粒DNA合成被抑制，并從而誘導端?？s短。通過流式細胞計用端粒特異肽核酸(PNA)探針來測量在SN1或SN2處理和未處理的細胞系中的端粒長度。為確定細胞周期分布，細胞用碘化丙啶(PI)染色。在治療14天后，Hela細胞顯示了端?？s短、大量的細胞凋亡和G2停滯(圖7A)，而細胞(U-20S)沒有(圖7B)。為表明在細胞周期分布中的改變，對HeLa和U-20S細胞分別用SN1和SN2處理14天，用PI染色，并同時通過流式細胞計來分析。結(jié)果展示了細胞周期的G2停滯。這個研究中使用的U-20S(骨肉瘤)和HeLa(子宮頸)細胞系是獲得自美國典型培養(yǎng)物保藏中心(AmericanTypeCult"^Collection)(Rockvi1le，MD)。將細胞培養(yǎng)在補充有10%胎牛血清的D-MEM培養(yǎng)基，在37°C的5%002的濕潤空氣中。對于用SN1或SN2的細胞治療，向培養(yǎng)基中補充1.5jiM的SN1或SN2。實時TRAP分析按所述的進行(Wegeetal.，SYBRGreenreal—timetelomericrepeatamplificationprotocolfortherapidquantificationoftelomeraseactivity,^c/e/cJc/c^/7.2003;31(2):E3-3)。對于通過流式細胞計的端粒長度測量，將細胞用綴合結(jié)合的(C3TA2)3PNA探針的端粒特異的FITC(AppliedBiosystems)染色，并用0.06(ig/mlPI反相染色，如(Rufer，N.，Dragowska，W.，ThornburyG.，Roosnek，E.，LansdorpP.M.Telomereltmgi;hdynamicsinhumanlymphocytesubpopulationsweremeasuredbyflowcytometry.tV".A/"ec細7.16，743-747(1998))所述。因此，本文已經(jīng)證明，核香類似物SN1和SN2導致端粒末端轉(zhuǎn)移酶陽性細胞中的端粒長度降低。然而，有益的抑制化合物不以任何實上，可以證明，按照本發(fā)明設(shè)計和合成的最有益藥理化合物是第二代衍生物或進一步化學修飾的無環(huán)核苷類似物。(c)體內(nèi)分析:使用與AZT和ddI組合的分子式(I)或(II)的化合物的體內(nèi)分析按如下方式進行小鼠肝癌MH22A購買自細胞學研究所的組織培養(yǎng)物保藏中心(thetissueculturecollectionoftheInstituteofCytology)(RussianAcademyofMedicalScience,Petersburg,Russia)。冷凍細胞解凍，轉(zhuǎn)移至補充有10。/。胎牛血清的培養(yǎng)基MEM中。將細胞培養(yǎng)在37°C的5%C02的濕潤空氣中。為確定MH22A細胞的端粒末端轉(zhuǎn)移酶狀態(tài)，如上所述在實時TRAP分析中使用Hela細胞作為陽性對照分析這些細胞。結(jié)果清楚地顯示MH22A細胞是端粒末端轉(zhuǎn)移酶陽性的。八個星期大的雄性C3HA自交小鼠(免疫活性小鼠)購買自LaboratoryAnimalsBreadingFacilityofRussianAcademyofMedicalScience(Rappalovo，Leningradregion)。將大約2xl05個的MH22a細胞皮下注射到80只小鼠的背側(cè)。在注射兩星期后，選棒66只顯示了活躍生長腫瘤(直徑2mm至lcm)的小鼠，并隨機分為不同的實驗組，如下所述對照組-18只小鼠SN-1(0.5mg/ml)+AZT(0.05mg/ml)+ddl(0.033mg/ml)-10只小鼠SN-2(0.5mg/ml)+AZT(0.05mg/ml)+ddl(0.033mg/ml)-10只小鼠Valtrex(0.083mg/ml)+AZT(0.05mg/ml)+ddl(0.033mg/ml)-20小鼠Valtrex(由GlaxoSmithKline制造)是阿昔洛韋的前體藥物，所述阿昔洛韋是無環(huán)核苷類似物。去羥肌苷(ddl)和AZT是非無環(huán)核苷類似物。將所述藥物以如上所述濃度的藥物在飲用水中施用至小鼠。飲用水或所述藥物溶液的消耗量是大約4ml每小鼠每日。在所有的組中，除Valtrex+AZT+DDI組的小鼠之外，小鼠都死于進行性的腫瘤(直徑2.0cm-2.5cm)。在20只小鼠的這個組中，僅5只產(chǎn)生了尺寸上與對照組可比的腫瘤，7只沒有腫瘤，8只有最大僅為lcm的小肺瘤。這個組也有部分小鼠在治療過程中死亡。部分死亡率可以歸因于免疫反應(yīng)，因為用于實驗的小鼠是具有免疫能力的。在用核苷類似物的不同聯(lián)合治療后5星期內(nèi)記錄以下結(jié)果。對照組:對照組沒有接受核苷類似物。因此，所有的小鼠都死亡了，在死亡的時候，腫瘤直徑為3.Ocm-3.5cm。SN-1+AZT+ddl:共有5只小鼠存活，其中3只沒有腫瘤。其余兩只小鼠中的腫瘤分別是0.7cm和3.5cm。SN-2+AZT+ddl:共有7只小鼠存活，其中2只沒有腫瘤。W只小鼠中腫瘤直徑是3.0cm至3.5cm，而在剩余的一只小鼠中的腫瘤直徑是1.0cm。Valtrex+AZT+ddl:共有5只小鼠存活，其中3只沒有腫瘤。其余兩只小鼠中的腫瘤分別是1.0cm和0.5cm。在這個組中，共15只小鼠死亡，其中5只死于腫瘤生長，其余10只小鼠死亡時有小腫瘤或無腫瘤。使用分子式(I)至(IV)的化合物以及分子式I和II的纈氨酸酯分別在具有其他核苷類似物的三雞尾酒中，和與AZT和ddl組合治療腫瘤的體內(nèi)分析按如下方式進行8-10個星期大的雄性C3HA自交小鼠(免疫活性小鼠)購買自LaboratoryAnimalsBreadingFacilityofRussianAcademyofMedicalScience(Rappalovo,Leningradregion)。將3xl05個MH22a細胞皮下注射到200只小鼠的背側(cè)。注射10天后，選擇具有發(fā)展的肺瘤(14.15mm"的小鼠(使用公式兀/6D歸xDmin2計算腫瘤體積)，并隨機分為不同的實驗組，如下所述雞尾酒1-伐昔洛韋(0.166mg/ml)+AZT(0.1mg/ml)+ddl(0.066mg/ml)-40只小鼠；雞尾酒2-SN-1(1mg/ml)+AZT(0.1mg/ml)+ddl(0.066mg/ml)-10只小鼠；雞尾酒3-SN-3(1mg/ml)+AZT(0.1mg/ml)+ddl(0.066mg/ml)-10只小鼠;雞尾酒4-SN-4(1mg/ml)+AZT(0.1mg/ml)+ddl(0.066mg/ml)-10只小鼠；雞尾酒5-纈氨酸-SN-l(0.166mg/ml)+AZT(0.1mg/ml)+ddl(0.066mg/ml)一20只小鼠；和雞尾酒6-纈氨酸-SN-2(0.166mg/ml)+AZT(0.1mg/ml)+ddl(0.066mg/ml)一20只小鼠；和對照組-在飲用水中的卡培他濱(Xeloda)(lmg/ml)-8只小鼠。伐昔洛韋(由GlaxoSmithKline制造的Valtrex)是阿昔洛韋的前體藥物，所述阿昔洛韋是無環(huán)核苷類似物。去羥肌普(ddl)和AZT是非無環(huán)核苷類似物。將所述藥物以如上所述濃度在飲用水中施用至小鼠。在雞尾酒治療后兩星期，將Xeloda(1mg/ml)添加到各個雞尾酒中，并繼續(xù)剩余的試驗期。在對照組中，小鼠僅用在飲用水中的Xeloda(lmg/ml)治療，并且這種治療的開始時間與在雞尾酒組中Xeloda⑧治療的時間相同。飲用水或所述藥物溶液的消耗量是平均2.5ml每小鼠每日。在用所述藥物的治療開始后連續(xù)四個星期，每星期計算在每個被注射的小鼠中的腫瘤體積(mm3)，使用公式7t/6DmaxDmin2。在所有的實驗組中，除用SN4組合的組之外，小鼠都死于進行性的腫瘤。記錄在用如上所述的雞尾酒1-6和Xeloda⑧治療后4星期內(nèi)的結(jié)果。實施例10，表1.體內(nèi)治療的效力在飲用水中治療小鼠的無腫瘤的數(shù)在4星期的在4星期的的藥物數(shù)量量治療后顯示治療期間內(nèi)肺瘤的數(shù)量死亡的數(shù)量雞尾酒14082210雞尾酒210181雞尾酒310145雞尾酒410370雞尾酒520497雞尾酒6203107Xeloda8062實施例10，表2.在用實施例10表l中指明的各種藥物治療后在試驗期結(jié)束時小鼠內(nèi)的腫瘤體積形態(tài)。僅來自實施例10表l中的具有肺瘤的小鼠的測量數(shù)據(jù)被歸入了本表格。小鼠雞尾酒1雞尾酒2雞尾酒3雞尾酒4雞尾酒雞尾酒6Xeloda10.52433.54105611510.1310.524115220.524154117691438176891.72146365.54244235835652004115141924524503058563786214233966288905.54240214248216288623587126845124104853104807241573369210307948538339683693904710193594659683161035941509111術(shù)512419213419214——4351154540165240175450185580<table>tableseeoriginaldocumentpage83</column></row><table>在說明書中提及的所有出版物、專利和專利申請顯示了本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員的水平。所有出版物、專利和專利申請都通過參考引入本文，如同各個單獨的出版物或?qū)＠暾埍惶囟ǖ睾头謩e地指明通過參考引入本文一樣。前述說明書教導了本發(fā)明的原理，與優(yōu)選實施方式的描述一起，并且與用于示例說明的實施例一起，使本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠制造和使用本發(fā)明。對這些具體實施方式的各種改良對本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的，并且在本文中定義的一般原理可以應(yīng)用到其他具體實施方式而不需要使用創(chuàng)造性能力。因此，不旨在將本發(fā)明限制到本文顯示的具體實施方式，而符合按照本文公開的原理和新技術(shù)特征以及下文權(quán)利要求及其等效的最寬范圍。權(quán)利要求1、一種治療的方法，包括施用基礎(chǔ)治療。2、如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的治療是患者中癌癥的治療。3、如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述患者是人。4、如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述的基礎(chǔ)治療包括施用在藥學上可接受載體中的治療有效量的三雞尾酒。5、如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述三雞尾酒包括無環(huán)核苷類似物。6、如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述無環(huán)核苷類似物是阿昔洛韋或其前體藥物。7、如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述無環(huán)核苷類似物是更昔洛韋或其前體藥物。8、如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述無環(huán)核苷類似物是噴昔洛韋或其前體藥物。9、如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述三雞尾酒包括疊氮基-2，，3，-二脫氧胸腺嘧啶核苷(AZT)。10、如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述三雞尾酒包括2，，3，-雙去氧肌苷(ddl)。11、如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述三雞尾酒是全身性施用的。12、如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述三雞尾酒是局部施用的。13、如權(quán)利要求l所述的方法，其還包括與另一種抗增殖治療組合施用基礎(chǔ)治療。14、如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述另一種抗增殖治療是DNA損害治療。15、如權(quán)利要求14所述的方法，其中所述DNA損害治療是遺傳毒性化學治療、放射治療和光動力學治療中的至少一種。16、如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述遺傳毒性化學治療包括施用為治療癌癥開發(fā)的抗癌劑，其中抗癌劑選自環(huán)磷酰胺、卡培他濱、紫杉醇、順鉑、卡鉑、喜樹堿和多柔比星。17、如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述基礎(chǔ)治療與用于移除異常增殖細胞團塊的手術(shù)組合施用。18、如權(quán)利要求13所述的方法，其中將所述基礎(chǔ)治療施用到已經(jīng)接受了移除異常增殖細胞團塊手術(shù)的患者。19、如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述癌為實體瘤。20、如權(quán)利要求19所述的方法，其中所述腫瘤選自胃癌、非小細胞肺癌、前列腺癌、胰腺癌、腎癌、結(jié)腸癌、卵巢癌和黑素瘤。21、一種使哺乳動物對另一種抗癌治療或另一種抗增殖治療敏感的方法，包括施用在藥學可接受載體中的致敏有效量的雙雞尾酒或三雞尾酒。22、如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述哺乳動物是人。23、如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述另一種抗癌治療或另一種抗增殖治療是選自遺傳毒性化學治療、放射治療和光動力學治療中的一種或多種。24、如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述另一種抗癌治療包括放射治療。25、如權(quán)利要求24所述的方法，其中所述另一種抗癌治療是放射治療。26、如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述另一種抗癌治療是施用5-氟尿嘧啶(5-FU)、環(huán)磷酰胺、順鉑、奧沙利鉑、卡培他濱、白消安、卡鉑、亞硝脲氮芥、苯丁酸氮芥、多柔比星、柔紅霉素、表柔比星、依托泊苷、伊達比星、替莫唑胺、異環(huán)磷酰胺、洛莫司汀、達卡巴嗪、氮芥、苯丙氨酸氮芥、絲裂霉素C、米托蒽醌、依立替康和托泊替康中的一個或多個。27、如權(quán)利要求26所述的方法，其中所述另一種抗癌治療是施用環(huán)磷酰胺、卡柏或卡培他濱。28、如權(quán)利要求27所述的方法，其中所述另一種抗癌治療是施用環(huán)磷酰胺、卡鉑或卡培他濱作為單一治療。29、如權(quán)利要求28所述的方法，其中環(huán)磷酰胺、卡鉑或卡培他濱的服藥是以大約1-5星期的間隔。30、如權(quán)利要求29所述的方法，其中所述的服藥是以大約2、3或4星期的間隔。31、一種在哺乳動物中改善另一種抗癌治療或另一種抗增殖治療的副作用的方法，包括在一段時期內(nèi)施用在藥學上可接受載體中的致敏有效量的雙雞尾酒或三雞尾酒，期間停止所述的另一種治療足夠使哺乳動物恢復或矯正副作用的時間。32、如權(quán)利要求31所述的方法，其中所述另一種抗癌治療或另一種抗增殖治療是以所述另一種治療的初始劑量的大約10-75%重新開始。33、如權(quán)利要求32所述的方法，其中所述哺乳動物是人。34、一種治療癌癥的方法，包括向患者施用基礎(chǔ)治療，其中所述治療包括施用與另一種抗增殖治療組合的治療有效量的三雞尾酒。35、一種用于治療具有以異常哺乳動物細胞增殖為特征的病況的患者的方法，包括向需要這種治療的患者施用抑制所述增殖有效量的雙雞尾酒或三雞尾酒，并且其中所述病況的特征還在于與正常細胞相比，異常增殖細胞在連續(xù)的細胞分裂中顯示出端粒維持。36、一種在需要這種治療的哺乳動物的細胞內(nèi)抑制一種或多種反轉(zhuǎn)錄酶的方法，包括向哺乳動物施用在藥學可接受載體中的有效量的雙雞尾酒或三雞尾酒。37、一種在由此需要的哺乳動物內(nèi)誘導腫瘤細胞凋亡的方法，包括向哺乳動物施用在藥學可接受載體中的治療有效量的雙雞尾酒或三雞尾酒。38、如權(quán)利要求37所述的方法，其中所述雙或三雞尾酒包括無環(huán)核苷類似物和疊氮基-2，，3，-二脫氧胸腺嘧啶核苷(AZT)。39、如權(quán)利要求37所述的方法，其中所述三雞尾酒還包括2，，3，-雙去氧肌苷(ddl)。40、一種用于在癌細胞內(nèi)誘導細胞凋亡的方法，包括將腫瘤細胞與在藥學上可接受載體中的三雞尾酒相接觸，以便產(chǎn)生對細胞凋亡的誘導。41、如權(quán)利要求40所述的方法，其中所述三雞尾酒包括無環(huán)核苷類似物和疊氮基-2，，3，-二脫氧胸腺嘧啶核普(AZT)。42、如權(quán)利要求40所述的方法，其中所述三雞尾酒包括2，，3，—雙去氧肌苷(ddl)。43、一種化合物的組合，包括有效量的第一核苷類似物或其前體藥物，其是端粒末端轉(zhuǎn)移酶反轉(zhuǎn)錄酶(TERT)抑制劑，第二核苷類似物或其前體藥物，其是Line-1逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子編碼的反轉(zhuǎn)錄酶(L1RT)抑制劑，和備選地第三核苷類似物，其是反轉(zhuǎn)錄酶(RT)抑制劑，所述RT是非TERT和非L1RT的，其中所述第二核苷類似物或其前體藥物與所述第一核苷類似物或其前體藥物不相同，其中所述第三核苷類似物或其前體藥物與所迷第一和第二核苷類似物或其前體藥物不相同。44、如權(quán)利要求43所述的組合，其中所述第一、第二和第三核苷類似物或其相應(yīng)前體藥物是三個獨立藥學組合物的形式或單一藥物組合物的形式。45、如權(quán)利要求44所述的組合，其中所述第一核苷類似物是無環(huán)核苷類似物或其前體藥物，其中所述第二核苷類似物是無環(huán)核苷類似物或其前體藥物或疊氮基-2，，3，-二脫氧胸腺嘧啶核苷(AZT)或AZT的前體藥物，其中所述第三核苷類似物是2，，3，-雙去氧肌苷(ddl)。46、一種治療患有癌癥的人類患者的方法，包括向人類患者施用如權(quán)利要求45所述的組合。47、如權(quán)利要求46所述的方法，其中所述第一核苷是阿昔洛韋或阿昔洛韋的前體藥物或更昔洛韋的前體藥物而所述第二核苷類似物是AZT。48、如權(quán)利要求47所述的方法，其中所施用的組合是雙雞尾酒或三雞尾酒。49、如權(quán)利要求48所述的方法，還包括施用與遺傳毒性化學治療組合的雙雞尾酒或三雞尾酒。50、如權(quán)利要求49所述的方法，其中所述遺傳毒性化學治療包括施用為治療癌癥開發(fā)的抗癌劑，其中所述抗癌劑選自環(huán)磷酰胺、卡培他濱或卡鉑。51、如權(quán)利要求50所述的方法，其中所述抗癌劑的服藥是以大約l-5星期的間隔。52、如權(quán)利要求51所述的方法，其中所述的服藥是以大約2、3或4星期的間隔。53、如權(quán)利要求52所述的方法，其中所述腫瘤選自胃癌、非小細胞肺癌、前列腺癌、胰腺癌、腎癌、結(jié)腸癌、卵巢癌和黑素瘤。54、一種醫(yī)藥學雞尾酒，包括在藥學上可接受載體中的組合的治療有效量的無環(huán)核苷類似物或其前體藥物；疊氮基-2，，3，-二脫氧胸腺嘧啶核苷(AZT);和2，，3，-雙去氧肌苷(ddl)。55、一種選自分子式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)和(VI)的分子式或其生理上可接受的鹽、光學異構(gòu)體或前體藥物的胸腺嘧啶或腺嘌呤衍生物。56、如權(quán)利要求55所述的衍生物，其是1-(2-羥基乙氧基曱基)胸腺嘧啶。57、如權(quán)利要求55所述的衍生物，其是9-(2-羥基乙氧基甲基)腺嘌呤。58、如權(quán)利要求55、56或57任一項所述的衍生物，為其光學異構(gòu)體的形式。59、如權(quán)利要求55、56或57任一項所述的衍生物，為其生理上可接受鹽的形式。60、如權(quán)利要求59所述的衍生物，為其鈉鹽或鹽酸鹽的形式。61、一種藥物制劑，包括作為活性成分的分子式(I)、(11)、(III)、(IV)、(V)或(VI)的化合物或其生理上可接受的鹽或光學異構(gòu)體；連同藥學上可接受的載體。62、如權(quán)利要求61所述的藥物制劑，經(jīng)設(shè)計為用于全身性施用。63、如權(quán)利要求62所述的藥物制劑，經(jīng)設(shè)計為用于局部施用。64、一種用于治療在需要治療的動物或人宿主中癌癥的方法，包括施用治療有效量的組合物，所述組合物包含作為活性成分的分子式(I)、(11)、(III)、(IV)、(V)或(VI)的化合物，或其生理上可接受的鹽或光學異構(gòu)體；連同在藥學上可接受載體中的AZT和去羥肌苷。65、如權(quán)利要求64所述的方法，包括施用治療有效量的分子式I或其生理上可接受的鹽。66、如權(quán)利要求64所述的方法，包括施用治療有效量的分子式II或其生理上可接受的鹽。67、如權(quán)利要求64所述的方法，其中所述組合物包含單位劑量形式的選自AZT和去羥肌苷的至少一種其他核苷類似物。68、如權(quán)利要求64所述的方法，還包括施用治療有效量的組合物，所述組合物除核苷類似物以外還包含抗癌劑。69、如權(quán)利要求68所述的方法，其中所述抗癌劑選自環(huán)磷酰胺、卡培他濱、紫杉醇、順鉑、卡鉑、喜樹堿和多柔比星。70、如權(quán)利要求64-69任一所述的方法，其中癌為實體瘤。71、如權(quán)利要求70所述的方法，其中所述胂瘤選自胃癌、非小細胞肺癌、前列腺癌、胰腺癌、腎癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、白血病和黑72、一種在由此需要的哺乳動物中誘導腫瘤細胞凋亡的方法，包括向哺乳動物施用治療有效量的分子式(I)、(11)、(III)、(IV)、(V)或(VI)的化合物或其生理上可接受的鹽或光學異構(gòu)體；備選地連同在藥學上可接受的載體中的AZT和去羥肌苷；和施用另一種抗癌核苷類似物和，備選地連同抗癌劑。73、如權(quán)利要求72所述的方法，其中分子式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)的化合物，和另一種抗癌核苷類似物和抗癌劑是作為雞尾酒的形式來施用的。74、如權(quán)利要求72所述的方法，其中分子式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)的化合物，和另一種抗癌核苷類似物和抗癌劑是作為獨立單位劑量形式來施用的。75、如權(quán)利要求72-74任一項所述的方法，其中所述抗癌劑選自環(huán)磷酰胺、卡培他濱、紫杉醇、順鉑、卡鉑、喜樹堿和多柔比星。全文摘要公開了核苷化學化合物，其與脫氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)的特定結(jié)構(gòu)相互作用。所述化合物干擾端粒末端轉(zhuǎn)移酶和反轉(zhuǎn)錄酶的活性，并可以用作抗病毒、抗菌和抗癌劑。還公開了治療或預防患者中癌的方法，包括施用治療有效量的組合物，所述組合物具有患者的細胞內(nèi)表達的反轉(zhuǎn)錄酶(RT)的抑制劑或拮抗劑。還公開了使用核苷類似物和其他RT抑制劑連同DNA損害劑例，如遺傳毒性試劑或放射或光動力學治療或這些的組合用于各種癌癥的治療的方法。文檔編號A61K31/7072GK101443021SQ200780017408公開日2009年5月27日申請日期2007年3月14日優(yōu)先權(quán)日2006年3月14日發(fā)明者I·E·博達瑞夫申請人:Alt解決方案公司