專利名稱：：癌癥成像和治療的制作方法癌癥成像和治療本發(fā)明涉及癌癥的成像和治療。特別是，盡管不唯一地，涉及適于放射性核素耙向至表達(dá)趨化因子受體CXCR4的細(xì)胞的組合物，以達(dá)到組合物的成^f象和治療的目的。早期評估肺瘤的轉(zhuǎn)移潛能和轉(zhuǎn)移擴(kuò)散的方法是治療預(yù)測和控制的有價值的工具。最近，認(rèn)為趨化因子受體CXCR4在轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用(Miiller等人Nature410(2001)50)。在各種胂瘤中，例如乳腺癌和前列腺癌，發(fā)現(xiàn)CXCR4在腫瘤細(xì)胞歸巢期間發(fā)揮主要作用，并且在原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶中均表達(dá)。人PNAS.91(1994)2305)。CXCR4肽類拮抗劑包括CPCR4(也稱FC131，并且具有環(huán)[D畫Tyr-Arg-Arg-Nal-Gly]序歹'J)(見FujiiN.等人，Angew.Chem.Int.Ed42(2003)3251)。CXCR4是HIV-1和HIV-2的共受體，能使病毒進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。EP1541585描述了用于組織學(xué)研究的放射標(biāo)記的SDF-la。本文件還公開了許多CXCR4的相對龐大(bulky)的合成肽拮抗劑。WO2004/087608公開了用生物素標(biāo)記的CXCR4拮抗劑。這種化合物的檢測要求加入第二種、帶有鏈霉抗生物素蛋白的受體化合物。在WO2004/087608中舉例說明的拮抗劑是通過在4位和13位的Cys殘基之間的二硫鍵環(huán)化的14個氨基酸的肽。Arg-Arg模體(motif)出現(xiàn)在l位和2位，即在環(huán)部分外。至今，使用CXCR4拮抗劑(肽和非肽)的研究基本上限制于作為轉(zhuǎn)移過程或HIV感染的抑制劑。因此，本發(fā)明首先提供了化合物或其藥學(xué)可接受鹽或酯，包含趨化因子受體的配體和可4企測的標(biāo)記，配體有CXCR4受體結(jié)合親和力，該親和力以IC50表示，在125I-CPCR4存在下測定的IC50為250nM或更低濃度，其中配體包含在環(huán)狀部分中有B-Arg或B-(Me)Arg模體的環(huán)寡肽部分，并且其中B是堿性氨基酸、其衍生物、或苯丙氨酸，條件是當(dāng)B是堿性氨基酸的Na-曱基衍生物時，纟莫體是B-Arg。在特定實施方案中，CXCR4配體優(yōu)選是合成的。現(xiàn)在優(yōu)選的是配體結(jié)10合至CXCR4的親和力(IC50)為200nM或更低，更優(yōu)選地100nM或更低，并且最優(yōu)選地50nM或更低。術(shù)語'IC50，指減少放射標(biāo)記參照肽^I-CPCR4至表達(dá)CXCR4的細(xì)胞的結(jié)合到最大結(jié)合的50。/。的檢測化合物濃度。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可確定給定化合物的IC50，并且下面描述了IC50的確定方法。本發(fā)明的化合物可結(jié)合至CXCR4受體，而不激活該受體(即，拮抗劑性質(zhì))?；蛘撸景l(fā)明的化合物可與內(nèi)源性配體竟?fàn)幨荏w，但更低程度地激活受體(即，部分激動劑性質(zhì))。或者，本發(fā)明的化合物可結(jié)合至CXCR4受體并減少隨后的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)至基線下，非激活水平(即負(fù)效應(yīng)，或反相激動劑性質(zhì))。在特定優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的化合物結(jié)合至CXCR4受體而不激活受體。在其他優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的化合物不包含具有完全的CXCR4激動劑性質(zhì)的配體。如本文所使用的，表述'(Me)Xaa，指氨基酸的N"-曱基衍生物。表述'Xaa(取代基)，指氨基酸側(cè)鏈衍生為指明的取代基。表述'Xaa/(Me)Xaa，指所述氨基酸可為非曱基化或可帶有N"-曱基基團(tuán)。本文使用的氨基酸縮寫指各個氨基酸的L-對映異構(gòu)體，除非使用表述'D-Xaa，，在這種情況下指D對映異構(gòu)體。本文使用的術(shù)語'堿性氨基酸，指天然產(chǎn)生或合成(優(yōu)選天然產(chǎn)生)的氨基酸，具有可接受質(zhì)子的側(cè)鏈，并且正常生理情況下為帶正電的。因此，磁<性氨基酸包括賴氨酸、精氨酸、瓜氨酸、鳥氨酸、組氨酸、Dap(2,3-二氨基丙酸)和Dab(2，4-二氨基丁酸)。優(yōu)選的堿性氨基酸是賴氨酸、精氨酸、瓜氨酸、鳥氨酸和組氨酸，更優(yōu)選的是精氨酸和鳥氨酸。針?；衔镆愿哂H和力和特異性結(jié)合至它們的結(jié)合位點，并允許穩(wěn)定成像(通過各種方法)，并由此清晰描畫體內(nèi)CXCR4陽性腫瘤(和任何伴隨的轉(zhuǎn)移)的輪廓。這種新一類的探針/示蹤劑可提供用于腫瘤轉(zhuǎn)移潛能研究，和轉(zhuǎn)移過程的早期成像，以及潛在的放射性核素治療的具有高度價值的工具?？蓹z測標(biāo)記優(yōu)選選自熒光部分、磁性或順磁性部分、或放射性核素。對于許多應(yīng)用，放射性核素(mdionuclides)是優(yōu)選的。不用加入其他試劑，標(biāo)記是可檢測的，通過來自標(biāo)記本身的可檢測的電磁輻射或其他核輻射的輸出而檢測，或由于標(biāo)記的磁性或順磁性而檢測。環(huán)寡肽部分優(yōu)選包含20個氨基酸殘基或更少，更優(yōu)選地包含9個殘基或更少。在優(yōu)選的實施方案中，環(huán)寡肽是五肽。環(huán)寡肽優(yōu)選通過肽鍵環(huán)化，可在N和C末端之間環(huán)化，或當(dāng)出現(xiàn)兩個半胱氨酸殘基時，可通過兩個半胱氨酸殘基之間的二碌J建環(huán)化?；衔锟砂h(huán)寡肽部分和可4企測標(biāo)記以外的其他部分。因此，可附加其他的肽序列，或基團(tuán)，所述肽序列或基團(tuán)可改變化合物的藥物代謝動力學(xué)和/或理化性質(zhì)(例如親水基團(tuán)，例如糖或聚乙二醇側(cè)鏈)。配體可包含除環(huán)寡肽部分的其他成分?；蛘?，配體可由環(huán)寡肽部分組成。在特定優(yōu)選的實施方案中，環(huán)寡肽部分具有序列環(huán)[D-Tyr/(Me)D-Tyr-B-Arg/(Me)Arg誦Z-(Ala)n-X]其中B如上所定義；Z是在其側(cè)鏈上包含芳香族基團(tuán)的氨基酸；n是l或0，條件是只有當(dāng)在環(huán)部分中的前4個氨基酸序列是D畫Tyr/(Me)D-Tyr-Arg-Arg-Nal時，n是l,其中Nal是L-3-(2-萘基)丙氨酸，；并且X選自Gly、(Me)Gly、Ala、Dap、Dap(FP)((N-氟丙?；?-二氨基丙酸)、Dab、Dab(FP)((N-氟丙?；?-二氨基丁酸)、Dab(FB)((N-氟苯曱?；?-二氨基丁酸)和Dap(FB)((N-氟苯曱?；?-二氨基丙酸)。Z可選自Nal、Dap(FB)、AMS(FB)(氨氧基絲氨酸(O-氨基絲氨酸)和4-氟苯曱醛的肟)，并且當(dāng)B是(Me)Arg、(Me)Nal時，Z優(yōu)選Nal。X優(yōu)選選自Gly、(Me)Gly、Ala、Dap(二氨基丙酸)和Dap(FP)((N-氟丙?；?-二氨基丙酸)。X優(yōu)選Gly或Dap(FP)。B優(yōu)選堿性氨基酸。堿性氨基S交優(yōu)選選自Arg、Orn、D-Orn、Cit和His,或其N-取代衍生物。最優(yōu)選地，B是Arg或Orn。烏氨酸殘基給予含氨基側(cè)鏈的優(yōu)點，含氨基側(cè)鏈相對衍生物更直(straightforward)。在一些實施方案中，B可被Me基團(tuán)在NaN-取代。優(yōu)選的，在環(huán)寡肽部分中不超過一個殘基被Me基團(tuán)在N"-取代。當(dāng)B是Orn或D-Orn時，鳥氨酸殘基可被一個或兩個基團(tuán)在N6端取代，所述基團(tuán)選自氟苯曱酰基(FB)、氟丙酰基(FP)、乙酰基(Ac)、氨基(amido)(Am)(即形成脲類部分)、曱基(Me)、l-萘基曱基(Nl)、2-萘基曱基(N2)、千基(Bz)和?；g隔部分(spacermoieties)。優(yōu)選的，?；g隔部分是包含1-14個碳的碳鏈的?；鶊F(tuán)，任選的，被雜原子間斷(interrupted)，并且優(yōu)選地，在其12遠(yuǎn)離鳥氨酸N5端的末端具有親核功能基團(tuán)。親核功能基團(tuán)，例如，是氨基或羥基基團(tuán)。該基團(tuán)能使其它部分加至間隔的末端，間隔的目的是使任何其他基團(tuán)對環(huán)寡肽的CXCR4結(jié)合能力的影響最小化。?；g隔部分可選自氨基己?；?Ahx)、三甘醇氨基?；?TGAS，W-COCH2(OCH2CH2)2NH2)、(Ahx)2、(Ahx)3、(TGAS)2和(TGAS)3。當(dāng)出現(xiàn)這些間隔的多聚體時，重復(fù)單元通過酰胺鍵結(jié)合在一起?，F(xiàn)在優(yōu)選的間隔基團(tuán)是Ahx、TGAS、(Ahx)3、(TGAS)2和(TGAS)3。當(dāng)B是Lys、Dap或Dab時，還可使用包含?；g隔部分的鳥氨酸取代基。在這種情況下，間隔部分優(yōu)選在其遠(yuǎn)離寡肽連接點的末端(即，當(dāng)B是Lys時，N^端)有親核功能基團(tuán)。在特定實施方案中，B是Orn或D-Orn,優(yōu)選D-Orn，在N。被Me基團(tuán)取代。當(dāng)B是Orn，可在N5被FB、FP、Ac、Am、Nl、N2、Me和Nl、Me和N2、Bz、Bz和FB、Bz和FP、Me和FB、Me和FP、或Me所取代。然而在其他實施方案中，B是Om或D-Om，優(yōu)選D-Orn，在NS被FB、FP、Me和FB、或Me和FP取代，并且任選的，在N"被Me基團(tuán)取代。在這種情況下，優(yōu)選的取代基是FB，以及Me和FB，任選與Na取代的Me基團(tuán)連接。環(huán)寡肽部分可有序列環(huán)[D-Tyr-B-Arg-Z-X]，其中B、Z和X選自上面列出的可選基團(tuán)，條件是在所述的序列中不多于一個的殘基是N、曱基化的。在這種實施方案中，優(yōu)選地，B是Arg?；蛘攮h(huán)寡肽部分可具有序列環(huán)[D-Tyr/(Me)D-Tyr-B-Arg/(Me)Arg-Z-X]，其中Z和X選自上面列出的可選基團(tuán)，并且其中B選自Arg、(Me)Arg、Orn、Cit、Om(FB)、Orn(FP)、Orn(Ac)、Orn(Am)、Orn(Nl)、Orn(N2)、Om(Me、Nl)、Orn(Me、N2)、Orn(Me)、Orn(Bz)、Orn(Bz，F(xiàn)B)、Orn(Ahx)、Orn(Ahx2)、Om(Ahx3)、Orn(TGAS)、Om(TGAS2)、Orn(TGAS3)、Orn(Me，F(xiàn)B)、D-Orn(FB)、(Me)D陽Orn(FB)、(Me)D-Orn(Me，F(xiàn)B)、His和Phe，條件是在所述的序列中不多于一個的殘基是N"-曱基化的。在這種實施方案種，第一個殘基優(yōu)選D-Tyr。并且在這種實施方案中，Z優(yōu)選Nal。并且在這種實施方案中，X優(yōu)選Gly。并且在這種實施方案中，第三個殘基優(yōu)選Arg。在特別優(yōu)選的實施方案中，環(huán)寡肽部分具有選自下列的序列環(huán)[D-Tyr畫Arg-Arg-Nal-Gly]環(huán)[D-Tyr-(Me)Arg-Arg-Nal-Gly]i3D-Tyr-Arg-(Me)Arg-Nal-Gly3^D-Tyr-Arg-Arg-Nal-(Me)Gly窮D-Tyr-Om-Arg-Nal-Gly努D-Tyr-Cit-Arg-Nal-Gly〕努D-Tyr-Arg-Arg-Nal-Ala-Gly努D-Tyr-Arg—Arg-Nal-Ala—Alai^D-Tyr-(Me)Arg-Arg-Nal-(Me)Gly努D-Tyr-(Me)Arg-Arg-(Me)Nal-Gly突(Me)D-Tyr-Arg-Arg-Nal-Ala-Gly努(Me)D-Tyr-Arg-Arg-Nal-Gly〕教D-Tyr-om(FB)-Arg-Nal-Gly〕努D-Tyr-om(FP)-Arg-Nal-Gly努D-Tyr-om(AC)-Arg-Nal-Gly〕努D-Tyr-om(Am)-Arg-Nal-Gly〕窮D-Tyr-Arg-Arg-Nal-Dap(FP)努D-Tyr-om(Nl)-Arg-Nal-Gly〕窮D-Tyr-om(N2)-Arg-Nal-Gly〕^-D-Tyr-om(Me,Nl)-Arg-Nal-Gly〕努D-Tyr-om(Me,N2)-Arg-Nal-Gly〕努D-Tyr-om(Me)-Arg-Nal-Gly努D-Tyr-om(BZ)-Arg-Nal-Gly〕窮D-Tyr-om(BZ,FB)-Arg-Nal-Gly〕3^D-Tyr-om(Ahx)-Arg-Nal-Gly^D-Tyr-om(Ahx3)-Arg-Nal-Gly〕JTAD-Tyr-om(TGAS)-Arg-Nal-Gly33D-Tyr-om(TGAS2)-Arg-Nal-Glyi^D-Tyr-om(TGAS3)-Arg-Nal-GlyWTAD-Tyr-om(Me,FB)-Arg-Nal-Gly〕aD-Tyr-D-om(FB)-Arg-Nal-Gly努D-Tyr-(Me)D6m(FB)-Arg-Nal-Gly^D-Tyr-(Me)D6m(Me,FB)-Arg-Nal-Gly〕環(huán)[D-Tyr-His-Arg-Nal-Gly]環(huán)[D-Tyr-Phe-Arg-Nal畫Gly]更優(yōu)選的寡肽部分具有下列序列環(huán)[D陽Tyr-Arg-Arg畫Nal-Gly]環(huán)[D-Tyr-(Me)Arg畫Arg-Nal-Gly]^[D-Tyr畫Arg畫(Me)Arg隱Nal-Gly]環(huán)[D一Tyr-Orn畫Arg-Nal畫Gly]環(huán)[D畫Tyr-Cit-Arg-Nal-Gly]環(huán)[D匿Tyr-Orn(FB)-Arg-Nal-Gly]環(huán)[D隱Tyr-Orn(FP)-Arg-Nal-Gly]環(huán)[D畫Tyr-Orn(Ac)-Arg-Nal隱Gly]環(huán)[D畫Tyr畫Orn(Am)-Arg-Nal-Gly]環(huán)[D-Tyr-Orn(Nl)-Arg-Nal-Gly]環(huán)[D-Tyr-Orn(N2)-Arg-Nal-Gly]環(huán)[D-Tyr-Om(Me,Nl)-Arg畫Nal-Gly]環(huán)[D一Tyr國Orn(Me,N2)-Arg隱Nal-Gly]環(huán)[D-Tyr-(Me)D-Orn(FB)-Arg-Nal-Gly]環(huán)[D-Tyr-His-Arg-Nal-Gly]特別優(yōu)選的寡肽部分具有選自下列的序列環(huán)[D-Tyr畫Orn畫Arg-Nal畫Gly]環(huán)[D-Tyr誦Orn(FB)畫Arg-Nal漏Gly]環(huán)[D-Tyr-(Me)D-Orn(FB)-Arg-Nal-Gly]在優(yōu)選的實施方案中，標(biāo)記是放射標(biāo)記。標(biāo)記可直接與配體共價結(jié)合，或可通過絡(luò)合劑的方法連接(例如，在金屬放射標(biāo)記的情況下)，所述絡(luò)合劑共價結(jié)合至配體。當(dāng)使用間隔基團(tuán)時，如上所述，絡(luò)合劑可通過間隔遠(yuǎn)端的親核基團(tuán)結(jié)合。促進(jìn)配體和標(biāo)記之間的間接結(jié)合的其他中間基團(tuán)對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員是顯而易見的。環(huán)五肽，環(huán)(D-Tyr-Arg-Arg-Nal-Gly)(也稱CPCR4或FC131)以高親和力結(jié)合于CXCR4。放射標(biāo)記也相對容易，例如通過使用碘放射性核素，結(jié)合至酪氨酸殘基。在初步的動物研究中，在CXCR4+腫瘤中，與對照腫瘤相比，放射標(biāo)記的CPCR4表現(xiàn)出約10倍的蓄積增加。CPCR4的藥物代謝動力學(xué)和其他性質(zhì)可通過氨基酸殘基的修飾改變。在得到的六肽中，特別是Arg殘基的N-曱基化、其他陽離子氨基酸(例如鳥氨酸)替代Arg1、在Nal和Gly之間Ala的插入，和Tyr的N-曱基化均導(dǎo)致修飾的CXCR4拮抗劑保持有用的對受體的親和力。優(yōu)選的，化合物不包含抗體或其片段作為化合物結(jié)構(gòu)部分。在一些本發(fā)明的化合物中，放射標(biāo)記可選自18F、123I、1241和1251。當(dāng)化合物用于體內(nèi)單光子發(fā)射計算機(jī)斷層顯像(SPECT)研究時，1231特別有用。1251是化合物的體外或離體(exvivo)使用所優(yōu)選的。"F和1241在使用正電子發(fā)射斷層攝影(PET)成像的體內(nèi)研究中特別有用。當(dāng)本發(fā)明的化合物包含一個或多個Dap(FB)、Dap(FP)、Dab(FB)、Dab(FP)、FB或FP基團(tuán)時，氟取代基可為18F。這表現(xiàn)出放射標(biāo)記這些化合物的傳統(tǒng)方法。在這種類型的優(yōu)選的化合物中，18F出現(xiàn)在Om或D-Orn的N端的FB或FP取代基上?；蛘撸派錁?biāo)記可選自211At、225Ac、川Bi和^Bi。這些放射性核素均是相對低范圍的a-發(fā)射體(emitters)，允許本發(fā)明的化合物用于靶向的放射治療。低范圍發(fā)射為轉(zhuǎn)移灶提供了更安全的放射治療方法。對于使用本發(fā)明化合物的原發(fā)性腫瘤的放射治療，可優(yōu)選使用有較長范圍發(fā)射的放射性核素，并且因此，在這種情況下，放射標(biāo)記可選自低和較高范圍的e-發(fā)射體，例如分別是1771^或9Gy,^Re和1311。一般而言，根據(jù)本發(fā)明，所使用的有用的診斷同位素(用于基于PET和SPECT的檢測和成像)包括18F、47Sc、51Cr、52Fe、52mMn、56Ni、57Ni、62Cu、64Cu、67Ga、68Ga、72As、75Br、76Br、77Br、82Br、89Zr、94mTc、97Ru、99mTc、mIn、123I、124I、131I、191Pt、197Hg、201T1、203Pb、110mIn120I一般而言，根據(jù)本發(fā)明，所使用的有用的治療同位素包括32P、67Cu、77As、9。Y、"Mo、103Ru、105Rh、109Pd、mAg、114mIn、117mSn、121Sn、127Te、131I、140La、140Nd、142Pr、143Pr、149Tb、149Pm、151Pm、153Sm、159Gd、161Tb、166Ho、166Dy、169Er、169Yb、172Tm、175Yb、177Lu、186Re、188Re、198Au、199Au、211At、211Bi、212Bi、213Bi、225Ac。在一些本發(fā)明化合物中，放射標(biāo)記通過在有機(jī)絡(luò)合劑和放射性核素之間形成絡(luò)合物的方法與配體結(jié)合，絡(luò)合物以不^坡壞配體在CXCR4受體上的結(jié)合性質(zhì)的方式結(jié)合于配體。在這種實施方案中，絡(luò)合劑優(yōu)選共價結(jié)合于配體，16同時放射標(biāo)記可共價或非共價地與絡(luò)合劑結(jié)合。絡(luò)合劑的使用擴(kuò)大了放射性核素的范圍，所述放射性核素可結(jié)合于本發(fā)明的化合物。優(yōu)選的絡(luò)合劑包括DOTA(1,4,7，10-四氮雜環(huán)十二烷-風(fēng)^1'，,>1"-四乙酸)和其書t生物、TETA(1，4，8，11-四氮雜環(huán)十四烷-1，4，8，11-四乙酸)、DTPA(二乙烯三胺五乙酸)和HYNIC(肼基煙酰胺(hydrazinonicotinamide))。絡(luò)合劑可與本發(fā)明的環(huán)寡肽氨基酸的合適的側(cè)鏈結(jié)合，或結(jié)合于連接基團(tuán)，所述連接基團(tuán)與本發(fā)明的環(huán)寡肽氨基酸的合適的側(cè)鏈結(jié)合，即從而使對化合物的CXCR4結(jié)合性質(zhì)的破壞最小化?；蛘?，可采用插入間隔基團(tuán)，如上所述。也可能通過加入一個或多個親水部分(例如碳水化合物(carbohydrates)或聚乙二醇鏈)修飾本發(fā)明的化合物。這種修飾可用于改善化合物在體內(nèi)的藥物代謝動力學(xué)。例如希望本發(fā)明的碳水化合物修飾的肽類化合物表現(xiàn)出肝攝取的減少，并且因此，與親脂性肽比較，應(yīng)該多少表現(xiàn)出給藥后血清除和主要的腎排泄的延遲。這導(dǎo)致圖像的產(chǎn)生，所述圖像在給藥后立刻獲得，并且希望CXCR4陽性和CXCR4陰性組織之間的反差更大。根據(jù)本發(fā)明的第二方面，本發(fā)明提供了化合物，或其藥學(xué)可接受鹽或酉旨，包含細(xì)胞毒部分和趨化因子受體CXCR4的配體，該配體有CXCR4受體結(jié)合親和力，該親和力以IC50表示，在^I-CPCR4存在下測定的IC50為250nM或更低濃度，其中該配體包含在環(huán)狀部分中有B-Arg或B-(Me)Arg^^莫體的環(huán)寡肽部分，并且其中B是堿性氨基酸、其衍生物、或苯丙氨酸，條件是當(dāng)B是堿性氨基酸的Na-曱基衍生物時，模體是B-Arg。本發(fā)明第一方面的化合物的任選和優(yōu)選特征也適當(dāng)?shù)乩斫鉃榈诙矫婊衔锏膬?yōu)選的特征。特別的，細(xì)胞毒部分可直接與配體結(jié)合，或可通過間隔基團(tuán)結(jié)合。本發(fā)明此方面的化合物可用于具有轉(zhuǎn)移潛能的胂瘤和它們伴隨的轉(zhuǎn)移灶的靶向化學(xué)療法，這是由于這些組織中CXCR4相對高表達(dá)。優(yōu)選的細(xì)胞毒部分可選自通常用于腫瘤相關(guān)化學(xué)療法的任何細(xì)胞毒化合物。根據(jù)本發(fā)明的第三方面，本發(fā)明提供了化合物，或其藥學(xué)可接受鹽或酯，包含趨化因子受體CXCR4的配體，該配體有CXCR4受體結(jié)合親和力，該親和力以IC50表示，在^I-CPCR4存在下測定的IC50為250nM或更低濃度，其中該配體包含在環(huán)狀部分中有B-Arg或B-(Me)Arg才莫體的環(huán)寡肽部分，并且其中B是堿性氨基酸、其衍生物、或苯丙氨酸，條件是當(dāng)B是堿性氨基酸的Na-17甲基衍生物時，模體是B-Arg,并且條件是環(huán)寡肽部分沒有環(huán)[D-Tyr-Arg-Arg誦Nal畫Gly]序列，也沒有環(huán)[D畫Tyr-Om誦Arg畫Nal畫Gly]序列。本發(fā)明第三方面的化合物用于診斷和成像的標(biāo)記。它們還可與細(xì)胞毒部分偶聯(lián)，用于靶向的CXCR4陽性腫瘤的化學(xué)療法。此外，它們自身也可用于化學(xué)療法，因為它們具有對CXCR4受體的拮抗劑性質(zhì)。本發(fā)明第一方面的化合物的任選和優(yōu)選特征也適當(dāng)?shù)乩斫鉃榈谌矫婊衔锏膬?yōu)選的特征。根據(jù)本發(fā)明的第四方面，本發(fā)明提供了化合物，或其藥學(xué)可接受鹽或酉旨，包含趨化因子受體CXCR4的配體，其中該配體包含具有下列序列的環(huán)寡肽部分環(huán)[D-Tyr/(Me)D-Tyr-B-Arg/(Me)Arg-Z-(Ala)n-X]其中B如上所定義；Z為在其側(cè)鏈上包含芳香族基團(tuán)的氨基酸；n是l或0;并且X選自Gly、(Me)Gly、Ala、Dap、Dap(FP)、Dab、Dab(FP)、Dab(FB)和Dap(FB)，化合物任選地包含可檢測標(biāo)記，條件是當(dāng)化合物不包含可檢測標(biāo)記時，環(huán)寡肽部分沒有環(huán)[D-Tyr-Arg-Arg-Nal-Gly]序列，也沒有環(huán)[D-Tyr-Om畫Arg曙Nal-Gly]序列。在此第四方面中，Z可選自Nal、Dap(FB)、AMS(FB)和(Me)Nal。Z優(yōu)選Nal。優(yōu)選的，只有當(dāng)環(huán)部分中的前4個氨基酸序列是D-Tyr/(Me)D-Tyr-Arg-Arg-Nal時，n是l。優(yōu)選的，只有當(dāng)B是Me(Arg)時，Z是Me(Nal)。本發(fā)明的其他的第一、第二和第三方面的優(yōu)選和任選特征也適當(dāng)?shù)剡m用于第四方面。特別的，當(dāng)B是Orn或D-Orn時，鳥氨酸殘基可在N5端被一個或兩個基團(tuán)取代，所述基團(tuán)選自氟苯曱?；?FB)、氟丙?；?FP)、乙?；?Ac)、椋櫚?；?Palm;例如，以形成環(huán)[D-Tyr-Orn(Palm)-Arg-Nal-Gly]肽)、氨基(Am)(即，以形成脲類部分)、甲基(Me)、1-萘基甲基(Nl)、2-萘基曱基(N2)、節(jié)基(Bz)和?；g隔部分。優(yōu)選的，?；g隔部分是包含1-16個碳的碳鏈的?；鶊F(tuán)，更優(yōu)選地包含1-14個碳，任選地被雜原子間斷，并且優(yōu)選地在遠(yuǎn)離鳥氨酸NS端的末端具有親核功能基團(tuán)。該親核功能基團(tuán)，例如，是氨基或羥基基團(tuán)。這種基團(tuán)使其它部分可以加入至間隔的末端，間隔的目的是使任何其他基團(tuán)對環(huán)寡肽的CXCR4結(jié)合能力的影響最小化。酰18基間隔部分可選自氨基己?；?Ahx)、三甘醇氨基?；?TGAS，即-COCH2(OCH2CH2)2NH2)、(Ahx)2、(Ahx)3、(TGAS)2和(TGAS)3。當(dāng)出現(xiàn)這些間隔的多聚體時，重復(fù)單元通過酰胺鍵結(jié)合在一起?，F(xiàn)在優(yōu)選的間隔基團(tuán)是Ahx、TGAS、(Ahx)3、(TGAS)2和(TGAS)3.當(dāng)B是Lys、Dap或Dab時，還可采用包含?；g隔部分的鳥氨酸取代基。在這種情況下，間隔部分優(yōu)選在其遠(yuǎn)離寡肽連接點的末端(即，當(dāng)B是Lys時，NE端)有親核功能基團(tuán)。根據(jù)本發(fā)明的第五方面，本發(fā)明提供了藥物組合物，包括上述第一、第二、第三或第四方面的本發(fā)明的化合物，以及一種或多種藥學(xué)可接受賦形劑。優(yōu)選的，組合物適合于注射。本發(fā)明的藥物組合物包括本發(fā)明的任何化合物，或其藥學(xué)可接受鹽或酯，以及任何藥學(xué)可接受載體、佐劑或溶i某(vehicle)。藥學(xué)可接受載體、佐劑和溶媒可在本發(fā)明的藥物組合物中使用，根據(jù)預(yù)期的制劑和給藥途徑，包括但不局限于，離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、血清蛋白質(zhì)例如人血清白蛋白、緩沖劑例如磷酸鹽、甘油、山梨酸、山梨酸鉀，飽和植物脂肪酸部分甘油酯混合物、水、鹽或電解質(zhì)，例如硫酸魚精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠體硅、三硅酸鎂、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素類物質(zhì)、聚乙二醇、羧曱基纖維素納、聚丙烯酸酯、蠟(waxes)、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。本發(fā)明的藥物組合物可口服、胃腸外、吸入噴霧劑、直腸、鼻、頰(buccally)、陰道或通過植入儲庫給藥。如上所述，胃腸外給藥是優(yōu)選的。本發(fā)明的藥物組合物可包含任何傳統(tǒng)的非毒性藥學(xué)可接受載體、佐劑或溶媒。本文所用術(shù)語胃腸外包括皮下、皮內(nèi)、靜脈、肌肉、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸骨內(nèi)、腱鞘內(nèi)、疾病部位內(nèi)(intralesional)和顱內(nèi)注射或灌注技術(shù)。對于大多數(shù)施用，可用靜脈或疾病部位內(nèi)(例如瘤內(nèi))注射。藥物組合物可為滅菌注射劑的形式，例如，為滅菌注射水性或油性混懸液。這種混懸液可根據(jù)本領(lǐng)域已知的技術(shù)使用合適的分散或潤濕劑(例如，Tween80)和助懸劑配制。滅菌注射劑也可為在非毒性的胃腸外可接受的稀釋劑或溶劑中的滅菌注射溶液或混懸液，例如為l,3-丁二醇中的溶液。在可接受的溶i某和溶劑(vehicleandsolvents)中，可使用的有甘露醇溶液、水、林格溶液和等滲氯化鈉溶液。此外，傳統(tǒng)使用滅菌的不揮發(fā)性油作為溶劑或混懸基質(zhì)。為了這個目的，可使用任何溫和的不揮發(fā)性油，包括合成的單或二甘油酯。脂肪酸，例如油酸和其甘油酯衍生物在注射劑的制備中是有用的，天然的藥學(xué)可接受油，例如橄欖油或蓖麻油，尤其是它們的聚氧乙烯酯形式也是有用的。這些油溶液或混懸液還可包含長鏈的醇稀釋劑或*劑，例如Ph.Helv或相似的醇。本發(fā)明的藥物組合物可以任何口服可接受的劑形口服給藥，所述劑形包括，但不限制于，膠嚢、片劑以及水性混懸液和溶液。在口服使用的片劑情況下，通常使用的載體包括乳糖和玉米淀粉。還通常加入潤滑劑，例如硬脂酸鎂。對于膠嚢形式的口服給藥，有用的稀釋劑包括乳糖和干燥的玉米淀粉。當(dāng)口服給藥水性混懸液時，活性成分與乳化劑和助懸劑混合。如果需要，可加入特定的增甜劑和/或調(diào)味劑和/或著色劑。本發(fā)明的藥物組合物還可以纟全劑形式直腸給藥。這些組合物可通過與合適的無刺激性的賦形劑混合而制備，所述賦形劑在室溫是固體，但在直腸溫度下是液體，并因此在直腸中溶解，釋放活性成分。這種材料包括，但不限制于，可可脂、蜂蠟和聚乙二醇。本發(fā)明的藥物組合物可通過鼻氣霧劑或吸入劑給藥。這種組合物根據(jù)藥物制劑領(lǐng)域已知的技術(shù)制備，并且可使用本領(lǐng)域已知的千基醇或其他合適的防腐劑、增加生物利用度的吸收促進(jìn)劑、氟碳化合物和/或其他溶解或分散劑制備為鹽;容液。另一方面，本發(fā)明提供了根據(jù)上述本發(fā)明的第一方面的化合物合成的方法，方法包括在一定條件下將配體與可檢測標(biāo)記源處理，以便可檢測標(biāo)記或在有機(jī)絡(luò)合劑和標(biāo)記的絡(luò)合物與配體的結(jié)合。然而在另一方面，本發(fā)明提供了根據(jù)上述本發(fā)明的第二方面的化合物合成的方法，方法包括在一定條件下將配體與細(xì)胞毒部分源處理，以便細(xì)胞毒部分直接或間接地與配體結(jié)合。本發(fā)明還提供了上述根據(jù)本發(fā)明的化合物，用于治療或診斷。在相關(guān)方面中，本發(fā)明還提供了上述根據(jù)本發(fā)明的化合物在制備用于治療腫瘤病癥的藥物中的用途。通過靶向合適的放射性核素或細(xì)胞毒成分至具有CXCR4受體的組織，對具轉(zhuǎn)移潛能瘤提供相對選擇性的化學(xué)療法應(yīng)當(dāng)是可能的。這些肺瘤引起的任何轉(zhuǎn)移灶或循環(huán)腫瘤(circulatingtumor)細(xì)胞也應(yīng)被耙向的放射性核素或細(xì)胞毒成分所靶向。另一方面，本發(fā)明提供了與本發(fā)明第一方面相關(guān)的上述化合物的在制備腫瘤病癥的診斷成像的藥物中的用途。在本發(fā)明此方面優(yōu)選的的實施方案中，腫瘤具有或懷疑具有轉(zhuǎn)移潛能。在特定實施方案中，腫瘤病癥可為乳腺癌或前列&泉癌。如上所述，本發(fā)明第一方面的化合物對具有CXCR4受體并因此具有轉(zhuǎn)移潛能的細(xì)胞的選擇性檢測和成像是非常有用的?；衔锟赏ㄟ^常規(guī)方法給藥(例如，靜脈注射)并且患者圖像可在短時間內(nèi)獲得，通過該階段(stage),具有相對高表達(dá)CXCR4的組織將表現(xiàn)出本發(fā)明可檢測化合物的相對濃度。在相關(guān)方面，本發(fā)明還提供了胂瘤組織的成像方法，方法包括向有(或懷疑有)腫瘤的受試者給藥根據(jù)本發(fā)明第一方面的化合物，并檢測體內(nèi)分布后的化合物。所述成像方法優(yōu)選包括在檢測步驟后，被檢測的分布的化合物的圖像產(chǎn)生的步驟。當(dāng)標(biāo)記是放射性核素時，檢測步驟特別可使用PET或單光子發(fā)射計算機(jī)斷層顯像(SPECT)進(jìn)行。當(dāng)使用磁或順磁標(biāo)記時，優(yōu)選磁共振成像。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了確定腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移潛能的方法，方法包括將所述細(xì)胞與根據(jù)本發(fā)明第一方面的化合物，或上述組合物接觸，以便使化合物結(jié)合至細(xì)胞表面的CXCR4受體，從細(xì)胞附近去除未結(jié)合的化合物，并確定結(jié)合至細(xì)胞的化合物的存在和/或化合物的量。所述確定細(xì)胞轉(zhuǎn)移潛能的方法可在體內(nèi)或體外進(jìn)行(即，使用從患者移出的細(xì)胞或組織樣本)。當(dāng)使用根據(jù)本發(fā)明第一方面的化合物進(jìn)行確定細(xì)胞轉(zhuǎn)移潛能的方法，標(biāo)記是放射性核素時，成像或結(jié)合化合物的出現(xiàn)和/或量的確定可特別地使用PET或單光子發(fā)射計算機(jī)斷層顯像(SPECT)進(jìn)行。當(dāng)使用磁或順磁標(biāo)記時，優(yōu)選》茲共振成像。其他用于本發(fā)明化合物的可檢測標(biāo)記包括熒光成分(例如綠色熒光蛋白(GFP)，羅丹明)。另一方面，本發(fā)明還提供了受試者肺瘤病癥治療的方法，所述腫瘤具有，或懷疑具有轉(zhuǎn)移潛能，所述方法包括給藥受試者根據(jù)本發(fā)明的化合物，或上述組合物。在一些實施方案中，腫瘤病癥可為乳腺癌或前列腺癌?，F(xiàn)在通過例子，參照下列附圖，更詳細(xì)地描述本發(fā)明圖1表示體外轉(zhuǎn)染編碼CXCR4的載體和GFP報告基因的細(xì)胞的熒光激活細(xì)胞分選CFACS;)結(jié)果；圖2a和2b(和表格)說明在Jurkat細(xì)胞中，^I-CPCR4在CXCR4上的結(jié)合參數(shù)的確定，和(圖2b)其與^I-SDF-la的比較。圖3(和表格)說明^I-CPCR4在棵鼠靜脈注射后的生物分布；和圖4表示放射標(biāo)記的CPCR4在帶有CXCR4陽性和陰性腫瘤的小鼠中分布的PET/SPECT圖像。實施例l-放射標(biāo)記的CPCR4的SPECT/PET成像1.1概述1.1.1材料和方法腫瘤轉(zhuǎn)移潛能的早期評價方法對于治療的預(yù)測和控制是有價值的工具。近年來，認(rèn)為趨化因子受體CXCR4在轉(zhuǎn)移中發(fā)揮主要作用。在各種腫瘤中，例如在乳腺癌和前列腺癌中，已發(fā)現(xiàn)CXCR4在腫瘤細(xì)胞歸巢期間發(fā)揮主要作用，并且在原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶中均有表達(dá)。此研究的目的是開發(fā)新的放射標(biāo)記的探針，通過SPECT和PET成像，用于CXCR4在腫瘤和轉(zhuǎn)移灶上的表達(dá)的體內(nèi)成像。將CPCR4，即環(huán)肽(環(huán)(D-Tyr-Arg-Arg-Nal-Gly),在表達(dá)CXCR4的Jurkat細(xì)胞中的結(jié)合測定中放射標(biāo)記并且進(jìn)行評價。成瘤纖維肉瘤(tumorigenicfibrosarcoma)細(xì)胞株CMS5通過逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)，用于穩(wěn)定表達(dá)CXCR4/GFP,并具有熒光活化細(xì)胞分選(FACS)和放射性配體結(jié)合測定特征。生物分布研究和SPECT/PET成像在CMS5/CXCR4+小鼠中進(jìn)行。腫瘤進(jìn)一步通過放射自顯影、IHC和GFP熒光分析。l丄2結(jié)果和結(jié)論放射標(biāo)記的CPCR4以高親和力(Ko:0.4±0.1磁)和特異性(>90%)以拮抗的方式結(jié)合至內(nèi)源性表達(dá)CXCR4的Jurkat細(xì)胞和表達(dá)轉(zhuǎn)導(dǎo)的CXCR4/GFP的CMS5細(xì)胞。發(fā)現(xiàn)0^85/€乂014+-纖維肉瘤是可靠的小鼠CXCR4腫瘤模型，經(jīng)放射自顯影、免疫組織化學(xué)(IHC)和GFP熒光確認(rèn)。靜脈注射的放射標(biāo)記的CPCR4的生物分布研究表明注射后1小時，在CMS5/CXCR4+腫瘤中為5.5±1.5y。ID/克(注射劑量/克)，在CMSS/CXCR4-對照中為0.6士0.2。/。ID/克。除了快速的血液清除率和低的背景蓄積(<1.0%10/克)，發(fā)現(xiàn)較高的示蹤攝取發(fā)生在肝中(19.5士2.8o/oID/克)、小腸中(17.2士2.9。/。ID/克)和腎中(12.2士2.3%ID/22克)。使用小鼠的CPCR4-SPECT和動物PET成像，可清晰描畫CXCR4+腫瘤，然而在相同的動物中對于CXCR4-對照，沒有可見的活性蓄積。在此研究中，我們成功地開發(fā)了第一個用于體內(nèi)靶向CXCR4趨化因子受體的放射標(biāo)記探針。示蹤物以高親和力和特異性以拮抗方式結(jié)合至結(jié)合位點，并使體內(nèi)0乂014+腫瘤清晰描畫。我們期望這種新類型的示蹤劑將成為對腫瘤轉(zhuǎn)移潛能和轉(zhuǎn)移過程早期成像和放射性核素治療的研究非常有前景的探針。1.2實施例l詳述1.2.1材津牛和方法1.2.1.1肽合成和》文射標(biāo)記通過使用標(biāo)準(zhǔn)的固相肽合成方法，根據(jù)Fmoc(9-藥甲氧羰基)法合成肽。Fmoc氨基酸Fmoc隱Arg(Pbf)、Fmoc-D-Tyr(tBu)和Fmoc陽Gly購自Novabiochem(BadSoden,德、國)，F(xiàn)moc-2-萘基丙氨酸購自Bachem(Bubendorf,瑞士)。在TCP(三苯曱基氯聚苯乙烯)樹脂上手動完成肽的合成。O-(lH-苯并三唑-l-基)-N，N，N，，N，-四曱基脲镎四氟硼酸鹽(TBTU)和疊氮磷酸二苯酯(DPPA)分別購自Alexis和Aldrich(Steinheim,德國)。1odoGen(l，3，4，6畫四氯-3R,6R-二苯基甘脲)購自Pierce(Rockford，IL，美國)，碘化鈉-125購自Hartmann陽AnalyticGmbH(Braunschweig,德、國)，石典4匕4內(nèi)一123購自AmershamHealth(Eindhoven,荷蘭)。碘化鈉-124由W.Brandau教授惠贈(Essen,德國)。所有其他試劑購自Merck(Darmstadt,德國)或Sigma-Aldrich(Taufkirchen,德國)。除非特別說明，使用的溶劑沒有進(jìn)一步純化。環(huán)五肽CPCR4和其衍生物的合成按最近的描述進(jìn)行，有微小修改。[1，2]簡言之，在Fmoc-Gly-OH連接至TCP樹脂后，剩余的氨基酸分別在使用TBTU活化后偶聯(lián)，并隨后通過使用20%的哌，定的DMF溶液對Fmoc基團(tuán)脫保護(hù)。在肽鏈裝配后，樹脂結(jié)合的肽使用乙酸、2,2,2-三氟乙醇和二氯曱烷(2:2:6)的混合物在室溫下處理2小時。之后過濾樹脂，并使用裂解混合物清洗兩次。合并的濾液在石油醚存在下在真空中蒸發(fā)。為了環(huán)化側(cè)鏈，保護(hù)肽以2.5mM的濃度溶解在DMF中。在-40。C,加入5當(dāng)量NaHC03和3當(dāng)量DPPA,溶液攪拌過夜同時溫至室溫。在過濾固體NaHC03后，真空蒸發(fā)DMF。殘留物用水研磨，過濾并用水和乙醚清洗。完全保護(hù)的環(huán)肽使用95%的TFA和5%的水的溶液在室溫處理2小時。去保護(hù)的肽>^人冰冷卻的乙醚中沉淀出，并在5。C離心。對于非;故射性^典化的參照肽的合成，如前所述合成氨基酸結(jié)構(gòu)單元(buildingblock)Fmoc-D-3-碘-Tyr-OH。[2]對于這種氨基酸的摻入和隨后的肽環(huán)化，使用PyBOP(六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基轔)/可力丁(colidine)活化。之后凍干并使用制備RP-HPLC純化粗環(huán)肽。最后，通過分析HPLC和HPLC-ESI/MS在來自Finnigan的LCQLC-MS系統(tǒng)(Bremen，德國)上，使用Hewlett-Packard1100HPLC系統(tǒng)表征該肽。肽合成的其他細(xì)節(jié)如下材津+和方法概述所有的市售化學(xué)試劑均沒有經(jīng)過進(jìn)一步純化而使用。工業(yè)溶劑(Technicalsolvents)在使用前蒸餾。三苯曱基樹脂購自PepChem，氨基酸衍生物購自IrisBiotechGmbH、NovaBiochem、Merck、Bachem、Neosystem、Aldrich,而所有其他的化學(xué)試劑如沒有另外說明，均購自Aldrich、Fluka或Merck。NMP(N-曱基吡咯烷酮)購自BASF,并且沒有經(jīng)過進(jìn)一步蒸餾而使用。無水的溶劑購自Aldrich、Fluka或Merck。在氬氣條件下用氬化鈣蒸餾得到無水的二氯曱烷，并過4A分子篩。用于RP-HPLC的水通過0.22微米的濾器過濾(Millipore,Millipak40)。RP-HPLC分析使用OmnicromYMC柱(4.6毫米x250毫米，5微米C18，1毫升/分鐘)進(jìn)行。洗脫劑為從水(0.1%TFA)至乙腈(0.1%TFA)的線性梯度，洗脫30分鐘(10%至100%、10%至60%和20%至50%)，并在220nm和254nm檢測。使用有乙腈的梯度洗脫，分析RP-HPLC的保留時間以分鐘給出。半制備RP-HPLC在安裝高壓模塊125、UV檢測166的BeckmanSystemGold上完成，并使用OmnicromODS-ACI8(120A，5微米，250毫米x20毫米)柱與上述相同溶劑組合。NMR譜在BmkerAvance250或BrukerDMX500在298K記錄?；瘜W(xué)位移在相對于使用的溶劑信號的S標(biāo)尺上以ppm報告。"C-NMR-譜使用'H-寬帶去偶記錄。脈沖程序取自Bruker程序庫或由發(fā)明者開發(fā)。樣品在直徑為5mm的核磁管中使用0.5ml的氘代溶劑制備。獲得的譜圖在PC平臺上使用BrukerTOPSPIN1.3專欠件處理。24ESI質(zhì)諳在FinniganLCQ組合Agilent/HP1100RP-HPLC系統(tǒng)上記錄，使用OmnicromYMCODS-AC18柱(120A，3微米，125毫米x2毫米)，流速0.2毫升/分鐘。洗脫劑為線性梯度(10%至100%乙腈)從水至含有有0.1%曱酸的乙腈，經(jīng)20分鐘，在220nm^r測。加載TCP-樹脂(一般方法)使用TCP-樹脂(l毫摩爾/克)，隨后使用標(biāo)準(zhǔn)Fmoc-方法進(jìn)行肽的合成[13]。使用在無水DCMPmL)中的DIEA(二異丙基乙胺)(2.5^.),在室溫經(jīng)1小時將Fmoc-Xaa-OH(1.2eq.)連接至TCP樹脂。通過加入MeOH、D正A(5:1;v:v)的溶液，經(jīng)15分鐘，使剩余的三苯曱基氯基團(tuán)封端(capped)。過濾樹脂，并使用DCM(5x)和MeOH(3x)充分清洗。加載能力由真空下干燥樹脂后的樹脂重量確定，在0.4-0.9毫摩爾/克的范圍內(nèi)。Fmoc去保護(hù)(一般方法)樹月旨-結(jié)合的Fmoc肽使用20%咪咬的NMP溶液(v/v)處理10分鐘，并且第二次處理5分鐘。樹脂使用NMP清洗(5x)。TBTU/HOBt偶聯(lián)(一般方法)向樹月旨-結(jié)合的游離胺肽(aminepeptide)中加入Fmoc-Xaa-OH(2叫.)、TBTU(2eq.)、HOBt(羥基苯并三唑)(2叫.)、D正A(5.2eq.)在NMP中的溶液，并在室溫振蕩60分鐘，用NMP(5x)清洗。鄰-硝基M酰基(o-Ns)保護(hù)使用優(yōu)化方法進(jìn)行N-烷基化[14]。向樹脂-結(jié)合游離胺肽中加入鄰-硝基苯磺酰氯(o-Ns-Cl)(5eq.)和可力丁(10eq.)在NMP中的溶液，并在室溫振蕩15分鐘，樹脂用NMP(3x)和無水的THF(3x)清洗。在Mitsunobu^H"下的N-烷基化向樹脂-結(jié)合的o-Ns-保護(hù)肽中加入三苯基膦(5叫.)，DIAD(偶氮二甲酸二異丙酯)(5eq.)和乙醇(10叫.)在無水THF中的溶液，并在室溫振蕩10分鐘。過濾掉樹脂。該樹脂并用無水的THF(3x)和NMP(3x)清洗。o-Ns去保護(hù)對于o-Ns去保護(hù)，樹脂-結(jié)合的N-烷基-N-o-Ns-肽使用巰基乙醇(10eq.)和DBU(5eq.)在NMP中的溶液處理5分鐘。重復(fù)一次去保護(hù)步驟，并使用NMP(5x)清洗樹脂。HATU/HOAt偶聯(lián)(一般方法)25向樹脂-結(jié)合的Na-曱基胺游離肽中加入Fmoc-Xaa-OH(2叫.)、HATU(2eq.)、HOAt(羥基偶氮苯并三氮唑)(2eq.)、D正A(4eq.)在NMP中的溶液，在室溫振蕩3小時，并使用NMP(5x)清洗。Alloc去保護(hù)向樹脂-結(jié)合的Alloc(烯丙氧基羰基)肽中加入Pd(PPh3)4(0,125叫.)的無水DCM(0.5毫升/克樹脂)溶液，隨后加入苯基硅烷(phenylsilan)的無水DCM(0.5毫升/克樹脂)，并振蕩1小時。樹脂使用DCM清洗5次。肽斷裂為了從樹脂上完全斷裂肽，肽使用DCM和HFIP(4:1;v:v)的溶液在室溫處理3次，l個半小時，并在減壓條件下蒸發(fā)溶劑。環(huán)化在室溫下向lmM的肽和NaHC03(5叫.)溶液中加入DPPA(疊氮化磷酸二苯酯)(3叫,)，并攪拌過夜，或直至通過ESI-MS不能觀察到線性肽。在減壓條件下，溶劑蒸發(fā)至較小體積，并且肽在飽和的NaCl溶液中沉淀，并在HPLC級水中清洗兩次。酸敏感側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)的去除在室溫下，環(huán)化的肽在TFA、水和TIPS(三異丙基曱硅烷)(95:2.5:2.5)溶液中攪拌l小時，或直至通過ESI-MS觀察不到更多的被保護(hù)肽，并且環(huán)化肽在乙醚中沉淀，并清洗兩次或多次。溶液中的g化為了將鳥氨酸側(cè)鏈?；?，環(huán)化和完全去保護(hù)的肽與在DMF中的TBTU(1eq)和對應(yīng)的酸(leq)攪拌15分鐘。溶液直接注射進(jìn)入HPLC進(jìn)行純化。絲酸合成N、Alloc-NE-Boc-L-鳥氨酸N、Boc-L-鳥氨酸(1.00克，4.3毫摩爾)溶解在Na2C03(1.14克，10.75毫摩爾)的水和THF(50毫升，1:1,v/v)的溶液中。在加入氯曱酸烯丙酯(0.46毫升，4.3毫摩爾)后，溶液攪拌1.5小時。在減壓條件下蒸發(fā)THF，水相用乙醚(lx50毫升)清洗，用濃HC1酸化至pH值為1,產(chǎn)物用EtOAc(3x50毫升)萃取。干燥(Na2S04)、過濾、濃縮并在真空中干燥合并的有機(jī)層，得到無色、有粘性的油，為十分純的產(chǎn)物(1.20克，90%)。NMR(250MHz，DMSO-d6):512.52(s,1H，OH)，7.49(d，7.72Hz，1H，NHa)，6.78(t，5.05Hz,1H:26NH"，5.91(brm，1H,CHAUoc)，5.30(dd,17.15Hz,1.69Hz,HAllocTerml)，5.19(dd,10.17Hz,1.68Hz,HAllocTerm2、)，4.48(m，2H,CH,10",3.91(brm，1H，Ha),2.91(m，2H，Hp)，1.81-1.40(brm，4H，IT，H5)，1.38(s，9H，HBoc).13CNMR(250MHz,DMSO-d6):174.4，156.5,156.1，134.1，117.4，77.9，65.1，60.2，54.1,28.8,26.7,14.6.RP-HPLC:16，7分鐘。Na-Alloc-N、Fmoc-L-鳥氨酸N^Alloc-Ne-Boc-L-鳥氨酸(L20克，3.87毫摩爾)溶解在DCM(10毫升)中，并緩'隄加入TFA(5毫升)。在攪拌45分鐘后，蒸發(fā)液體。將粗產(chǎn)物溶解在Na2CO3(1.02克，9.68毫摩爾)的水和THF(40毫升，1:1，v/v)溶液中。在加入Fmoc-N-氧基琥珀酰亞胺(1.31克，3.87毫摩爾)后，溶液攪拌1.5小時。在減壓條件下蒸發(fā)THF，并且水相用乙醚(lx50mL)清洗，用濃HC1酸化至pH值為1,并且產(chǎn)物用EtOAc(3x50毫升)萃取。干燥(Na2S04)、過濾、濃縮并在真空中干燥合并的有機(jī)層，獲得無色固體，為十分純的產(chǎn)物(1.65g,97%)。'HNMR(250MHz，DMSO-d6):S12.52(s，1H，OH)，7.49(d，7.72Hz,1H，NHa)，6.78(t，5.05Hz,1H，NHE),5.91(brm，1H，CHAlloc)，5.30(dd,17.15Hz,1.69Hz，HAllocTerml),5.19(dd,10.17Hz,1.68Hz，HAllocTerm2)，4.48(m，2H，CH2A"。C)，3.91(brm,1H,Ha),2.91(m,2H，Hp),1.81-1.40(brm，4H,H7，Hs),1.38(s，9H,HBoc).13CNMR(250MHz,DMSO-d6):174.4，156.5，156.1，134.1，117.4，77.9，65.1,60.2,54.1，28.8，26.7,14.6.RP-HPLC:21,9分鐘。反應(yīng)路線見下:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>1.2丄2肽的放射性碘標(biāo)記CPCR4使用Iodogen方法用1231-、1241-或1251-碘化物標(biāo)記。[2]0.2毫克的肽溶解在250微升的磷酸緩沖鹽溶液(PBS，pH7.4)中。此溶液力。入包被150微克Iodogen的Eppendorf杯，并與放射性碘化物溶液合并。在室溫15分鐘后，溶液從固體氧化試劑中移出。使用梯度RP-HPLC純化。放射化學(xué)純度通常>95%。對于動物實驗，包含放射標(biāo)記的肽的部分用水稀釋，并結(jié)合至Sep-PakC18柱。之后使用水清洗柱，并且用曱醇洗脫放射標(biāo)記的肽。之后在真空去除曱醇，殘留物在PBS(pH7.4)中溶解并稀釋。為了在4。C儲存，溶液用包含20%乙醇的0.1%的三氟乙酸的水溶液酸化。1.2.1.3親脂性對于親脂性的確定，在500微升PBS(pH7.4)中的0.4-2.7^Ci的I25I-CPCR4與500微升的辛醇混合，并且劇烈渦旋。在離心從而定量地相分離后，每相分出IOO微升，并在Y計數(shù)器中確定放射活性。一式三份進(jìn)行實驗，獨立重復(fù)兩次。1.2.1.4細(xì)胞抹和組織培養(yǎng)鼠纖維肉瘤細(xì)胞株CMS5[3]和人293T細(xì)胞林[4](由R.Willemsen友情提供,DepartmentofClinicalandTumourImmunology,DanieldenHoedCancerCenter,Rotterdam,荷蘭)均在補(bǔ)充10%(v/v)的胎牛血清(PAA,Linz,奧地利)和1%(v/v)的L-谷氨酰胺的Dulbeccos氏改良的Eagle氏培養(yǎng)基中培養(yǎng)。T-淋巴細(xì)胞Jurkat細(xì)胞林(ATCC)保持在補(bǔ)充10%(v/v)的胎牛血清(FCS)和1%(v/v)的L-谷氨酰胺的RPMI1640培養(yǎng)基中。除非另外說明，培養(yǎng)基和補(bǔ)充劑購自Biochrom(Berlin，德國)。1.2.1.5逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建和靶細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)編碼增強(qiáng)焚光蛋白的cDNA通過TVcoI5hJ酶切從pEGFP(BDBiosciencesClontech，德國)中切出，使用Klenow酶形成平頭末端(bluntended),并插入pIRESneo3(BDBiosciencesClontech,德國)的唯一5"wal位點，以獲得pIRESeGFPneo3。在下一步中，攜帶IRES-eGF的Notl片^殳克隆進(jìn)入pBullet的位點(Schaft等人2003)，以獲得pBulletIRESeGFP。分離攜帶人趨化因子受體類型4(CXCR4)cDNA(由B.Moser,Bern友情提供)的pcDNA3CXCR4[5]的1292bp的HindIIIXbal片段，并在使用Klenow酶使所有位點形成平頭末端后，將片段克隆進(jìn)入逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pBulletIRESeGFP的5awHI位點。獲得的載體為pBulletCXCR4-IRES-eGFP。通過瞬時轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞和轉(zhuǎn)導(dǎo)CMS5細(xì)胞產(chǎn)生逆轉(zhuǎn)錄病毒的描述見他處。[6]1.2.1.6FACS分選和分析器(BectonDickinsonFACSVantage,Heidelberg,德國)，使用在488nm激發(fā)能為40mW的氬氣激光束(Spectra-physics)和CellQuest軟件分析。EGFP的表達(dá)使用FL1(530/30nm)濾光片(filter)直接測量。死亡細(xì)胞通過向細(xì)胞加入碘化丙啶確定，并且使用FL2585/42nm濾光片測定焚光。死亡細(xì)胞百分率常S0.2%。通過分選FL1的最小熒光為20的CXCR4-EGFP-共-表達(dá)細(xì)胞，富集(enrich)表達(dá)CXCR4的CMS5細(xì)胞群。使用具有人CXCR4特異性的藻紅蛋白(PE)-標(biāo)記的單克隆大鼠抗體(1D9，BDBiosciencesPharmingen,Heidelberg,德國)，測定CXCR4在胰蛋白酶作用的細(xì)胞表面上的表達(dá)。胰蛋白酶作用的細(xì)胞使用FACS緩沖液清洗(PBS，0.5%FCS)，并且在黑暗中4。C使用0.5微克的抗體對1x106個細(xì)胞染色30分鐘。使用水冷的FACS緩沖液充分清洗細(xì)胞，并通過流式細(xì)胞儀分析。非特異性染色通過PE-綴合的大鼠IgG2b,K(BDBiosciencesPharmingen,Heidelberg,德國)測定。在細(xì)胞表面CXCR4的4全測在與EGFP相同的樣品中進(jìn)行，并使用575/26nm濾光片(FL2)檢測。CXCR-4染色對EGFP熒光(FL1)作圖。標(biāo)示的細(xì)胞(indicatedcell)重懸浮于補(bǔ)充0.5。/。牛血清白蛋白(BSA)(Sigma，Taufkirchen,德國)的培養(yǎng)基中，與重組的人100nMSDF-1(R&DSystems,Wiesbaden,德國)在37。C孵育1小時(適用之前公開的方法)[7，8];對照物與稀釋劑(PBS/0.1Q/。BSA)—起孵育。樣品立即轉(zhuǎn)移至冰上，以避免進(jìn)一步的細(xì)胞內(nèi)化(internalization)作用，離心，使用PBS/0.5%BSA清洗，并如前所示進(jìn)行CXCR4的FACS染色。1.2.1.7受體結(jié)合測定將細(xì)胞重懸浮在PBS/0.2%BSA中用于受體結(jié)合測定。包含400,000個細(xì)胞(Jurkat，CMS5)或200,000個細(xì)胞(CMS5/CXCR4)的總共200孩i升的混懸液與25微升的示蹤物溶液(包含3.1kBq，約O.lnM)和不同濃度的25微升的稀釋劑或竟?fàn)巹┮黄鸱跤?。使?25I-CPCR4作為示蹤物來確定IQ。值。SDF-la購自R&DSystems(Wiesbaden,德國)，并且125I-SDF-la購自29Perkin-Elmer(Boston,MA，USA)。對于飽和曲線，將示蹤物濃度從5至500pM變化，而非特異性結(jié)合在ljaM的冷的CPCR4存在下確定。在室溫振蕩2小時后，通過在700xg，4°C離心4分鐘終止孵育。細(xì)胞團(tuán)使用冷的PBS清洗1次，隨后第二次離心，或使用酸性清洗緩沖液(20mM的NaOAc,pH5.0)清洗兩次用于細(xì)胞內(nèi)化作用研究。通過使用Y計數(shù)器確定細(xì)胞結(jié)合放射性。實驗重復(fù)2-3次，一式兩份或三份。結(jié)合曲線的ICso值通過非線性回歸在基于一位或雙位竟?fàn)幍哪Ｐ蜕鲜褂肞rism3.0(GraphPad軟件，Inc,SanDiego)計算。KD和Bmax值通過非線性回歸使用Prism3.0根據(jù)制造商方法確定。1.2.1.8體內(nèi)研究在動物實驗中，對雌性Swissnu/nu小鼠(CharlesRiver,法國)皮下注射親代的CMS5細(xì)胞和轉(zhuǎn)導(dǎo)的CMS5/CXCR4細(xì)胞。因此，對于每只小鼠，將1.5xl06個CMS5細(xì)胞和2xl06個CMS5/CXCR4細(xì)胞分別在75微升PBS中重懸，并與相同體積的Matrigel-MatrixHC(BDBiosciences,Heidelberg,德國)根據(jù)制造商方法混合。隨后，將細(xì)胞混懸液分別在每只小鼠肩部接種。在腫瘤生長14-16天后，小鼠用于成像和生物分布研究。所有動物實驗經(jīng)地方當(dāng)局批準(zhǔn)，并符合才幾構(gòu)制度(institutionguidelines)。1.2.1.9生物分布研究370kBq(10iiCi)的1251-標(biāo)記的CPCR4尾靜脈注射進(jìn)入攜帶肺瘤小鼠。在示蹤物注射30、60和120分鐘后處死動物并解剖。取出感興趣的器官，并使用來自Wallac(Turku，芬蘭)1480Wizard3y計數(shù)器在稱重的組織樣品中測定放射性。結(jié)果以每克組織重量的注射劑量百分?jǐn)?shù)(。/。ID/g)表示。每個值代表4至6只動物的平均值。1.2.2結(jié)果1.2.2.1CPCR4-合成和放射標(biāo)記CPCR4，表現(xiàn)出高的CXCR4受體親和力和選擇性的環(huán)五肽環(huán)(D-Tyr-Arg-Arg-Nal-Gly)的合成通過使用標(biāo)準(zhǔn)Fmoc固相肽合成方法，在酸敏感的三苯曱基氯樹脂上如前所述進(jìn)行。[1，2]通過N-烷基化的其他修飾使用經(jīng)Fukuyama-Mitsunobu反應(yīng)用于N-曱基化的改良方法完成。[14]在肽鏈裝配側(cè)鏈后，被保護(hù)的肽從樹脂切割，并使用DPPA方法環(huán)化。[2]在去除所有的保護(hù)基團(tuán)后，粗提的環(huán)五肽進(jìn)一步通過制備HPLC純化。分析HPLC和HPLC/ESI-MS分析_〖正明肽的均一性和同源性。在CPCR4的Tyr側(cè)鏈上的放射標(biāo)記使用Iodogen方法用1231-或1251-碘化物進(jìn)行，并且隨后的未標(biāo)記前體的分離使用HPLC進(jìn)行。使用的HPLC條件使放射性碘化肽從未標(biāo)記前體和副產(chǎn)物的非常有效的分離，因此導(dǎo)致了高的放射化學(xué)純度(>99%)和特異性活性。標(biāo)記肽的特異性活性看作是用于標(biāo)記的放射性碘的活性(對于1251，>2000Ci/mmo1，對于1231，>5000Ci/mmo1)。而放射性碘化物的摻入通常>95%，在HPLC純化生物相容性配制(biocompatibleformulation)后，整個1231-和1251-標(biāo)記肽的放射化學(xué)產(chǎn)率在50%的范圍內(nèi)。在在PBS中生物相容性配制后，125I-CPCR4的親脂性以辛醇/水(PBS)分配系數(shù)確定。獲得logP值為-0.04(±0.01)。1.2.2.2CXCR4-載體構(gòu)建和病毒感染小鼠纖維肉瘤細(xì)胞抹CMS5經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)CXCR4-IRES-eGFP。通過FACS分析確定在細(xì)胞庫中70-80%的逆轉(zhuǎn)錄病毒CXCR4-轉(zhuǎn)導(dǎo)的CMS5細(xì)胞是eGFP-表達(dá)陽性的，平均焚光強(qiáng)度為130。生長曲線和存活測定(XTT)表明兩種細(xì)胞;f朱具有相似的體外生長動力學(xué)(數(shù)據(jù)未顯示)。當(dāng)CMS5細(xì)胞和CMS5/CXCR4細(xì)胞被人CXCR染色時，CMS5表現(xiàn)出2.2%的背景染色，而CMS5/CXCR4細(xì)胞的人CXCR4染色陽性為61.6%,表現(xiàn)出平均熒光強(qiáng)度為66,并且57.9%的細(xì)胞對CXCR4和eGFP均為陽性。(圖1)通過重復(fù)的FACS分析表明細(xì)胞株隨時間推移穩(wěn)定(數(shù)據(jù)未顯示)。1.2.2.3受體結(jié)合研究125I-CPCR4作為新的CXCR4-放射性配體的合適性首先在Jurkat細(xì)胞上檢測，Jurkat細(xì)胞內(nèi)源性地表達(dá)CXCR4受體[9,10]，并且隨后在逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)以表達(dá)CXCR4的CMS5/CXCR4細(xì)胞上檢測。對于兩種細(xì)胞林，使用125I-SDF-la(50-70%)和125I-CPCR4(>90%)均發(fā)現(xiàn)可重現(xiàn)的高特異性結(jié)合。在親代的CMS5細(xì)胞中，兩種示蹤劑均表現(xiàn)出在與Jurkat和轉(zhuǎn)導(dǎo)的CMS5/CXCR4細(xì)胞的非特異結(jié)合范圍內(nèi)的可忽略的結(jié)合。從飽和結(jié)合曲線，獲得了兩種細(xì)胞株在低于納摩爾范圍內(nèi)(sub-naomolar)(0.3至0.4nM)幾乎相同的Ko值，表明125I-CPCR4對CXCR4受體的高親和力。(圖2和相關(guān)表A)此外，確定了大量的125I-CPCR4結(jié)合位點(Bmax)。而對于Jurkat細(xì)胞，Bmax值更加依賴于來源(origin),并且隨培養(yǎng)條件改變更大，CMS5/CXCR4細(xì)胞的結(jié)合位點數(shù)量(Bmax)恒定并且有更好的重復(fù)性(23士6fmo1受體蛋白)。125I-CPCR4作為新的放射性配體，不同的CXCR4選擇性配體的親和力情況在竟?fàn)幮苑派湫耘潴w結(jié)合測定中確定。(圖2,表B)對于SDF-la,發(fā)現(xiàn)CPCR4和它的非放射性碘化的參照化合物Iodo-CPCR4，用125I-CPCR4或^I-SDF-la發(fā)現(xiàn)在CXCR4受體上有高親和力，ICso值為納摩爾級。與SDF-1和環(huán)五肽相比，CXCR4選擇性的bicyclamAMD3100表現(xiàn)出與兩種示蹤劑均較小的親和力。根據(jù)示蹤物和竟?fàn)巹?，如之前所報道地監(jiān)測兩個CXCR4結(jié)合位點。[9]為了分析結(jié)合曲線，按要求使用一位(onesite)和雙位(two-sites)竟?fàn)幥€擬合。獲得的高和低親和力的結(jié)合位點指定為(1)和(2)。(圖2，表B)。125I-CPCR4在CXCR4受體結(jié)合后，受體的細(xì)胞內(nèi)化作用在使用酸性緩沖液(pH5.0)的兩個短暫清洗步驟后分析。此后，大部分示蹤物可從受體釋放(>80%)。這表明沒有如受體拮抗劑的受體的細(xì)胞內(nèi)化作用發(fā)生(數(shù)據(jù)未顯示)。1.2.2.4受體功能性為了確定人CXCR4在小鼠細(xì)胞中是否是有功能的，細(xì)胞與人SDF-la預(yù)孵育，表面CXCR4染色，并且隨后進(jìn)行FACS分析。在與人SDF-la預(yù)孵育后，54.7%的CMS5/CXCR4細(xì)胞CXCR4染色陽性，與之相比，79.2%的對照處理細(xì)胞染色陽性，表明在鼠CMS5細(xì)胞中的人受體的功能性。在SDF-la存在時，在CMS5細(xì)胞中CXCR4-背景染色從7.9%減少至2.7%。Jurkat細(xì)胞作為陽性對照，并且沒有表現(xiàn)出陽性細(xì)胞％的減少，但平均熒光強(qiáng)度從385.4下降至155.4。在CMS5/CXCR4細(xì)胞中，平均焚光強(qiáng)度從假處理細(xì)胞的209.0下降至SFD-la處理細(xì)胞的80.5。這表明Jurkat細(xì)胞確實包含比CMS5/CXCR4細(xì)月包更多的CXCR4受體。1.2.2.5體內(nèi)研究125I-CPCR4的生物分布和肺瘤蓄積在攜帶CMS5和CMS5/CXCR4腫瘤的棵鼠注射后30、60和120分鐘后測定。在注射后60分鐘125I-CPCR4在CMS5/CXCR4腫瘤中達(dá)到最高的腫瘤蓄積，注射劑量/克的5.5(±1.5)%(%ID/g),而親代的CMS5腫瘤此時但J見察到0.6(±0.2)%ID/g。在注射30分鐘后，125I-CPCR4表現(xiàn)出在CMS5/CXCR4腫瘤中的蓄積為4.7(±1.3)%ID/g,在注射120分鐘后，為3.8(±1.4)%ID/g。對于所有時間點，更高的示蹤物蓄積僅在肝、小腸和腎中觀察到。其他器官表現(xiàn)出僅有非常低的背景蓄積。然而，在肝中，125I-CPCR4的蓄積隨時間減少，從注射30分鐘后27.7(±4.9)%ID/g減少至注射120分鐘后15.0(±1.8)%ID/g,示蹤物在小腸中的蓄積輕孩史減少，32從注射30分鐘后16.0(±4.7)%ID/g可減少至注射120分鐘后19.2(±4.5)%ID/g，說明在這些器官中的代謝過程。注射60分鐘后在腎中的示蹤物蓄積表現(xiàn)出峰，12.2(±2.3)%ID/g，并在注射120分鐘后減少至8.2(±l.l)%ID/g。(圖3和表)圖4表明放射性石爽化-CPCR4在攜帶CXCR4-陽性(CMS5/CXCR4)和陰性(CMS5對照)腫瘤的小鼠中分布的PET/SPECT結(jié)果。由于兩種類型腫瘤的CPCR4攝取的區(qū)別，可觀察到清晰的CPCR4攝取描述圖。MRI結(jié)果用于比較。甚至在注射后25小時，CXCR4陽性腫瘤可被PET識別。利用PET使用"f-標(biāo)記的放射性配體和利用y照相機(jī)使用1231-標(biāo)記可獲得相似的結(jié)果。相似的，在使用微成像儀的腫瘤冷凍切片的體外分析中，在陽性和陰性腫瘤之間可見放射的顯著不同。實施例2-用于靶向CXCR4趨化因子受體表達(dá)的環(huán)肽的開發(fā)幾種疾病如HIV-1感染、癌癥轉(zhuǎn)移、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和慢性淋巴細(xì)胞性B細(xì)胞白血病與CXCR4趨化因子受體和其天然配體(naturalligand)的相互作用相關(guān)，所述配體是包含蛋白基質(zhì)細(xì)胞(proteinstromalcell)衍生因子-la(SDF-la)的68個氨基酸[11]。一種對于這種疾病的治療策略可為用小CXCR4拮抗劑阻斷CXCR4和SDF-la之間的相互作用。此外，使用合適的放射性同位素對合適化合物的放射標(biāo)記可提供用于經(jīng)PET的CXCR4體內(nèi)表達(dá)成像的試劑。之前Fujii等人對CXCR4拮抗劑的研究導(dǎo)致高親和力的具有環(huán)[Gly-D-Tyr-Arg-Arg-Nal]序列的環(huán)五肽CPCR4[1]。為了進(jìn)一步改善此結(jié)構(gòu)，考慮放射標(biāo)記的代謝穩(wěn)定性、生物利用度、構(gòu)象穩(wěn)定性和化學(xué)多樣性方面，選擇了不同的方法。首先，進(jìn)行骨架酰胺的N-曱基篩選以影響構(gòu)象自由度并增加代謝穩(wěn)定性和生物利用度。精氨酸殘基的Na-曱基化產(chǎn)生具有有用的親和力的肽(ICso值分別為23nM(N-Me)的Arg3和31nM(N-Me)Arg4，根據(jù)如前圖中Arg殘基在序列中的位置編號)，而其它氨基酸的>1-曱基化顯著地降低親和力(1(:50>100nM)。通過鳥氨酸替代Arg3，親和力大部分保留[12]。Orn的5氨基基團(tuán)可通過包含短期同位素的放射標(biāo)記基團(tuán)烷基化或?；４送?，可降低兩個胍基的高堿性，從而改善生物利用度。第一個鳥氨酸-酰基化衍生物表明IC50值在11和35nM之間，可用于體內(nèi)PET成像的小CXCR4拮抗劑的第一次"F-放射標(biāo)記。下組表明使用包含Om環(huán)五肽的結(jié)果，其中Orn分別被FB、FP、Ac和Am在5-N取代。各種CXCR4拮抗劑的親和力"土2nM35土13nM29±1涵35土7nM5±1nM9土0.1nM用Na-單曱基化環(huán)五肽的結(jié)合測定(Na-曱基篩選)結(jié)果見下表1(注在下表中，具有IC5Ji〉250nM的肽，并因此沒有落入本發(fā)明的第一至第三方面，纟皮用于比較，并用*在1(^5()值后標(biāo)注)表l編碼序列IC50[nM]計算的質(zhì)量觀察的m/z(m+H)CPCR4*環(huán)[D-Tyr畫Arg-Arg-Nal層Gly]4OD1環(huán)[D-Tyr-(Me)Arg-Arg-Nal-Gly]23743.39744.7OD3環(huán)[D-Tyr-Arg-(Me)Arg-Nal-Gly]31743.39744.7OD5環(huán)[D-Tyr-Arg-Arg-(Me)Nal-Gly]894*743.39744.7OD7環(huán)[D-Tyr-Arg-Arg-Nal-(Me)Gly]136743.39744.6OD9環(huán)[(Me)D-Tyr-Arg-Arg-Nal-Gly]247743.39744.7OD1(環(huán)[D-Tyr-(Me)Arg-Arg-Nal-Gly])的結(jié)構(gòu)如下所示:GlyID-TyrIA〖gA[gNal'GlyID-TyrIOrrtIA卩.NalNH，34編碼序列IC50[iiM計算的質(zhì)量觀察的m/z(m+H)OD11環(huán)[(Me)Arg-Nal-Gly-(Me)D畫Tyr-Arg]>1000*757.4758.7OD12環(huán)[(Me)Arg-(Me)Nal-Gly-D-Tyr-Arg]>1000*757.4758.6OD13環(huán)[Arg-Nal-(Me)Gly-(Me)D-Tyr-Arg]>1000*757.4758.7OD14環(huán)[Arg-(Me)Nal-Gly-(Me)D-Tyr-Arg]>1000*757.4758.6OD15環(huán)[Arg-Nal-(Me)Gly-D-Tyr-(Me)Arg]300-400*757.4758.8OD16環(huán)[Arg-Nal-Gly-(Me)D-Tyr畫(Me)Arg]~畫0*757.4758.8OD18環(huán)[Arg-(Me)Nal-(Me)Gly-D-Tyr-Arg]>1000*757.4758.8OD19環(huán)[(Me)Arg-Nal-(Me)Gly-D-Tyr-Arg]>1000*757.4758.9OD20環(huán)[Arg畫(Me)Nal扁Gly隱D畫Tyr畫(Me)Arg]100-200757.4758.7OD21環(huán)[(Me)Arg-Nal陽Gly-D畫Tyr畫(Me)Arg]>1000*757.4758.6n2NH從這些結(jié)果可看出當(dāng)Arg殘基被曱基化時，親和力僅降低5-10。當(dāng)其它殘基被曱基化時，親和力有更大降低。對應(yīng)于Na-二曱基化五肽的結(jié)果見下(表2),表明這種修飾的親和力的進(jìn)一步降低表22H\、\\Arg被鳥氨酸或瓜氨酸替代的五肽的結(jié)合測定結(jié)果，見下表3:表3編碼序列IC50[nM計算的質(zhì)量觀察的m/z(m+H)OD23環(huán)[Nal-Gly-D-Tyr-Orn-Orn]>1000*645.33646.5OD24環(huán)[Nal-Gly-D畫Tyr-Arg陽Orn]~1000*687.35688.6OD25環(huán)[Nal-Gly誦D-Tyr隱Orn-Arg]9±0.1687.35688.4OD26環(huán)[Nal-Gly-D畫Tyr-Cit-Cit]>幽0*731.34732.6OD27環(huán)[Nal畫Gly-D畫Tyr-Cit隱Arg]35±7730.36731.6OD28環(huán)[Nal畫Gly畫D-Tyr-Arg畫Cit]>1000*730.36731.7表3的結(jié)果表明在環(huán)五肽中的第一個Arg殘基可被陽離子殘基，例如鳥氨酸替代，而沒有顯著的親和力的降低。在評估摻入含"F-輔基的側(cè)鏈-?；镍B氨酸衍生物中，發(fā)現(xiàn)氟苯曱?；苌锉憩F(xiàn)出最高的親和力(1lnM-見上組)。該化合物表現(xiàn)出相對高的親脂性(LogP1.06)。也制備了許多其它的Om-NS和/或Orn-Na-修飾的五肽，包括一系列的具有Ns間隔部分的衍生物。CXCR4結(jié)合結(jié)果見表4。表4序列IC50nM計算的質(zhì)量觀察的m/z(m+H)環(huán)[D-Tyr陽Orn(Me)畫Arg-Nal-Gly]105±7701.36702.7環(huán)[D-Tyr-Orn(Bz)-Arg-Nal-Gly]155±63777.4778.6環(huán)[D-Tyr-Om(Nl)-Arg-Nal-Gly]40±3827.41828,6環(huán)[D-Tyr-Om(N2)-Arg-Nal-Gly]49±1827.41828.7環(huán)[D-Tyr陽Om(Me,Nl)畫Arg-Nal-Gly]39,7841.43842.7環(huán)[D-Tyr-Orn(Me,N2)-Arg-Nal-Gly]34.2841.43842.7環(huán)[D-Tyr-Orn(FB)匿Arg掘-Gly]11±2809.37810.6環(huán)[D-Tyr-Orn(Bz,FB)-Arg掘-Gly]100899.41進(jìn)7環(huán)[D畫Tyr誦Om(Me,FB)畫Arg-Nal誦Gly]78±25823.38824.636<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>此外，制備一系列含有D-Orn衍生物的五肽和其中B是His或Phe的五肽，CXCR4-結(jié)合結(jié)果見表5。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>斗企測其中Ala或相似殘基插入鏈中的多個環(huán)六肽對CXCR4的親和力。結(jié)果見表6(注意-Dap(FP)是(N-氟丙?；?-二氨基丙酸)表6<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>表6的結(jié)果表明Ala可插入Nal和Gly之間，和/或Gly可被Ala替代，伴隨僅輕度的親和力降低。其它殘基在此位置的插入，或在表6中的任何殘基在其它位置的插入，不能很好耐受。用一系列的環(huán)六肽進(jìn)行進(jìn)一步的Na-曱基篩選(scan)(N-單-、二-和三曱基化)，見表7:表7<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>這些結(jié)果表明在環(huán)六肽的Na-曱基化后親和力顯著下降，盡管N-曱基-D-Tyr六肽沒有如大多數(shù)其它衍生物那樣親和力顯著下降。為了使用于標(biāo)記的輔基的連接有更大的靈活性，通過在CPCR4中用Gly殘基替代Dap研究氨基基團(tuán)的引入。結(jié)果(表8)表明在這種替代后僅有輕度的親和力的降低(注-FP:2-氟丙?；?；FB:4-氟苯曱?；?。表8<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>本文描述的CPCR4和其它肽的其它可能的修飾包括使用其它的含氟芳香部分對Nal的取代，作為對應(yīng)于"F-標(biāo)記的化合物的類似物。例如<formula>formulaseeoriginaldocumentpage40</formula>AMS(FB)是氨氧基-絲氨酸部分和4-氟苯曱醛的肟。對于開發(fā)熒光CXCR4配體，可用熒光Dap衍生物，例如Dap(NBD)(NBD是7-硝基-l，2,3-苯并^二唑)，取代Nal。這種衍生物表現(xiàn)出與CPCR4相比親和力的降低，盡管FACS分析的結(jié)果表明這種配體仍可適于通過這種技術(shù)的CXCR4表達(dá)的研究。實施例3-使用肽類(p印tide-based)PET探針和生物發(fā)光進(jìn)行的CXCR4趨化因子受體表達(dá)多模態(tài)分子成像趨化因子受體CXCR4和其內(nèi)源性配體SDF-la是腫瘤細(xì)胞在轉(zhuǎn)移和器官特異性歸巢中的重要因素。為了靶向體內(nèi)CXCR4的表達(dá)，我們開發(fā)了放射標(biāo)記的環(huán)肽，CPCR4。^I-CPCR4是第一個PET成傳4笨針，所述4果針高親和力地與CXCR4結(jié)合(Kr^0.4nM)，表現(xiàn)出在體內(nèi)表達(dá)CXCR4的胂瘤中的高蓄積(注射后1小時5.5。/。ID/克)，并且可清晰描繪CXCR4陽性腫瘤。為了使腫瘤發(fā)展與受體表達(dá)相關(guān)，并為了通過多模態(tài)性(生物發(fā)光和核)成像，使用非放射標(biāo)記的探針監(jiān)測可能的治療介入，已使用螢光素酶(luc)轉(zhuǎn)導(dǎo)腫瘤細(xì)胞。構(gòu)建包含CXCR4和luc或作為對照的僅有l(wèi)uc或eGFP基因的慢病毒載體(Lentiviralvectors)。這些載體成功用于鼠CMS5纖維肉瘤細(xì)胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。在放射性配體結(jié)合測定和FACS研究中研究CXCR4在CMS5/CXCR4/luc細(xì)胞上的表面表達(dá)。luc的CPCR4-結(jié)合的高親和力和特異性，以及功能性表達(dá)在細(xì)胞測定中確定。給棵鼠皮下注射轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞9利用H-PET使用放射標(biāo)記的CPCR4和生物發(fā)光(luc)/熒光(eGFP)成像分析動物。體外分析通過放射自顯影、生物發(fā)光測定和免疫組織化學(xué)進(jìn)行。為了更好的理解CPCR4-結(jié)合，并為了設(shè)計藥物代謝動力學(xué)改善的配體，開發(fā)了新提出的CXCR4受體模型，并且現(xiàn)在通過研究CXCR4受體突變進(jìn)行確認(rèn)。根據(jù)此計算機(jī)模型，進(jìn)行CPCR4-衍生物的構(gòu)效關(guān)系研究以優(yōu)化示蹤物和其它標(biāo)記選擇的研究。總之，該方法使CXCR4表達(dá)在體內(nèi)成像，并開發(fā)增強(qiáng)成像探針，所述增強(qiáng)成像探針用于個體化治療的肺瘤的轉(zhuǎn)移潛能和CXCR4表達(dá)的確定的非侵入研究。實施例4-CXCR4-結(jié)合的環(huán)寡肽和螯合劑的扼合物的制備本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可容易地制備由本發(fā)明的環(huán)寡肽、合適的間隔部分(優(yōu)選本文所述的連接部分之一)，和螯合劑或適合放射金屬絡(luò)合的其它部分組成的構(gòu)成物(construct)或軛合物。通常，如近年來在許多出版物中所述，例如，DOTA,與帶有連接基、完全被保護(hù)的寡肽偶聯(lián)，可使用標(biāo)準(zhǔn)激活方法使用三保護(hù)的(例如，三叔丁基保護(hù))DOTA,或使用預(yù)激活的DOTA類，例如DOTA的單-、二-、三-或四N-琥珀酰亞胺基酯或4-硝基苯基酯?；蛘?，可^f吏用標(biāo)準(zhǔn)肽偶聯(lián)條件，以達(dá)到該目的。相似的，其它螯合劑/絡(luò)合部分，例如TETA或DTPA，可被偶聯(lián)。DTPA也可使用環(huán)雙酸酐(cyclicbis-anhydride)偶聯(lián)。明顯的，螯合劑也可以與間隔物(spacer)預(yù)偶聯(lián)，因此導(dǎo)致在最終步驟中形成肽-間隔物鍵。該偶聯(lián)也可以由本領(lǐng)域^支術(shù)人員使用在it射藥物領(lǐng)域建立的詳細(xì)描述的偶聯(lián)方法實現(xiàn)。其它偶聯(lián)途徑，例如將或腙的形成，以及其它選擇的方法，例如碌^醇和馬來酰亞胺的反應(yīng)，可以用于實現(xiàn)相似的結(jié)果。上述實施例是為了說明本發(fā)明的具體實施方案，而不是為了限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的范圍由所附的權(quán)利要求書限定。本文引用的所有文件在本文中整個引入作為參考。參考文獻(xiàn)1.Fujii，N,，等人,Molecular-sizereductionofapotentCXCR4-chemokineantagonistusingorthogonalcombinationofconformation-andsequence-basedlibraries.AngewChemIntEdEngl,2003.42(28):p.3251-3.2.Haubner，R.,等人,Radiolabeledalpha(v)beta3integrinantagonists:anewclassoftracersfortumortargeting.JNuclMed,1999.40(6》p.1061-71.3.Gansbacher，B.，等人,Retroviralvector-mediatedgamma匿interferongenetransferintotumorcellsgeneratespotentandlonglastingantitumorimmunity.CancerRes,1990.50(24):p.7820-5.4.DuBridge，R.B.,等人，AnalysisofmutationinhumancellsbyusinganEpstein-Barrvirusshuttlesystem.MolCellBiol,1987.7(1):p.379-87.5.Loetscher，M.,等人,Cloningofahumanseven-transmembranedomainreceptor,LESTR，thatishighlyexpressedinleukocytes.JBiolChem,1994.269(1):p.232-7.6.Anton,M.,等人,Useofthenorepinephrinetransporterasareportergenefornon-invasiveimagingofgeneticallymodifiedcells.JGeneMed,2004.6(1):p.119-26.7.Fan,G.H.，等人，Hsc/Hsp70interactingprotein(hip)associateswithCXCR2andregulatesthereceptorsignalingandtrafficking.JBiolChem,2002.277(8):p.6590-7.8.Forster，R.，等人,IntracellularandsurfaceexpressionoftheHIV-1coreceptorCXCR4/ftisinonvariousleukocytesubsets:rapidinternalizationandrecyclinguponactivation.JImmunol,1998.160(3》p.1522-31.9.Gupta,S.K.,等人，PharmacologicalevidenceforcomplexandmultiplesiteinteractionofCXCR4withSDF-1alpha:implicationsfordevelopmentofselectiveCXCR4antagonists.ImmunolLett,2001.78(1):p.29-34.10.Hesselgesser,J.,等人，IdentificationandcharacterizationoftheCXCR4chemokinereceptorinhumanTcelllines:ligandbinding,biologicalactivity,andHIV-linfectivity.JImmunol,1998.160(2):p.877-83.11.Balkwill,F.,NatureReviews,2004,4:p.540-55012.TamamumH等人，JMedChem,2005,48:p.3280-913FieldsGB,NobleRL.Solidphasepeptidesynthesisutilizing9-fluorenylmethoxycarbonylaminoacids.Int.J.Pept.ProteinRes.1990,.35:p.161-214.14BironE，ChatterjeeJ,KesslerH.OptimizedSelectiveiV-MethylationofPeptidesonSolidSupport.J.PeptideSci.2006;12:p.213-219.權(quán)利要求1.化合物，或其藥學(xué)可接受鹽或酯，其包含趨化因子受體CXCR4的配體和可檢測標(biāo)記，所述配體對CXCR4受體具有結(jié)合親和力，該親和力以IC50表示，在125I-CPCR4存在下測定的IC50為250nM或更低濃度，其中配體包含在環(huán)狀部分中有B-Arg或B-(Me)Arg模體的環(huán)寡肽部分，并且其中B是堿性氨基酸、其衍生物、或苯丙氨酸，條件是當(dāng)B是堿性氨基酸的Nα-甲基衍生物時，模體是B-Arg。2.根據(jù)權(quán)利要求l的化合物，其中所述環(huán)寡肽部分具有序列環(huán)[D畫Tyr/(Me)D畫Tyr-B-Arg/(Me)Arg-Z畫(Ala)n-X]其中B如權(quán)利要求1所定義；Z為在其側(cè)鏈中含有芳香基團(tuán)的氨基酸；n為1或0，條件是僅當(dāng)環(huán)部分序列中的前4個氨基酸為D-Tyr/(Me)D-Tyr-Arg-Arg-Nal時，n為1，其中Nal為L-3-(2-萘基)丙氨酸；且X選自Gly、(Me)Gly、Ala、Dap(二氨基丙酸)、Dap(FP)((N-氟丙?；?-二氨基丙酸)、Dab(二氨基丁酸)、Dab(FP)((N-氟丙?；?-二氨基丁酸)、Dab(FB)((N-氟苯曱?；?-二氨基丁酸)和Dap(FB)((N-氟苯曱?；?-二氨基丙酸)。3.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中Z選自Nal、Dap(FB)或AMS(FB)(氨氧基絲氨酸和4-氟苯曱醛的肟)。4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項的化合物，其中B選自Arg、Orn、D-Orn、Cit和His,或它們的N-取代衍生物。5.根據(jù)上述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中B被曱基在N"-取代。6.根據(jù)權(quán)利要求2-5中任一項的化合物，其中B為Orn或D-Om，該烏氨酸殘基在N5被1個或2個下述基團(tuán)取代，所述基團(tuán)選自氟苯曱?；?FB)、氟丙?；?FP)、乙酰基(Ac)、氨基(Am)、Me、1-萘基曱基(Nl)、2-萘基曱基(N2)、千基(Bz)和酰基間隔部分，其中所述酰基間隔部分為含有l(wèi)-14個碳原子的碳鏈的?；?，任選被雜原子間斷，且在遠(yuǎn)離鳥氨酸N5的末端具有親核功能基團(tuán)。7.根據(jù)權(quán)利要求6的化合物，其中所述?；g隔部分選自氨基己酰基(Ahx)、三甘醇氨基?；?TGAS)、(Ahx)2、(Ahx)3、(TGAS)2和(TGAS)3。8.根據(jù)權(quán)利要求6的化合物，其中B為在Na被曱基取代的D-Om。9.根據(jù)權(quán)利要求6的化合物，其中B為在N5被下述基團(tuán)取代的Orn:FB、FP、Ac、Am、Nl、N2、Me和Nl、Me和N2、Bz、Bz和FB、Bz和FP、Me和FB、Me和FP、或Me.10.根據(jù)權(quán)利要求6的化合物，其中B為在NS被下述基團(tuán)取代的D-Orn:FB、FP、Me和FB、或Me和FP，JH壬選在N^皮Me取。11.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項的化合物，其中所述環(huán)寡肽部分具有序列環(huán)[D-Tyr-B-Arg-Z-X],其中B、Z和X如權(quán)利要求2中所定義，條件是在所述序列中不超過1個殘基可以被Na-曱基化。12.根據(jù)權(quán)利要求11的化合物，其中B為Arg。13.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項的化合物，其中所述環(huán)寡肽部分具有序列環(huán)[D-Tyr/(Me)D-Tyr-B-Arg/(Me)Arg-Z-X]，其中Z和X如權(quán)利要求2中所定義，且其中B選自Arg、(Me)Arg、Orn、Cit、Orn(FB)、Orn(FP)、Orn(Ac)、Om(Am)、Orn(Nl)、Orn(N2)、Orn(Me、Nl)、Orn(Me、N2)、Orn(Me)、Orn(Bz)、Om(Bz,FB)、Orn(Ahx)、Orn(Ahx2)、Orn(Ahx3)、Orn(TGAS)、Orn(TGAS2)、Orn(TGAS3)、Orn(Me,FB)、D畫Orn(FB)、(Me)D-Orn(FB)、(Me)D-Orn(Me,FB)、His和Phe,條件是在所述序列中不超過1個殘基可以被N、甲基化。14.根據(jù)權(quán)利要求13的化合物，其中所述第一個殘基為D-Tyr。15.根據(jù)權(quán)利要求13或14的化合物，其中所述第三個殘基為Arg。16.根據(jù)權(quán)利要求11-14中任一項的化合物，其中Z為Nal。17.根據(jù)權(quán)利要求11-15中任一項的化合物，其中X為Gly。18.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項的化合物，其中所述環(huán)寡肽部分具有選自下述的序列環(huán)[D畫Tyr-Arg畫Arg漏Nal畫Gly]環(huán)[D匿Tyr-(Me)Arg-Arg-Nal-Gly]環(huán)[D-Tyr-Arg-(Me)Arg-Nal-Gly]環(huán)[D國Tyr-Arg畫Arg畫Nal-(Me)Gly]環(huán)[D-Tyr■Orn-Arg-Nal-Gly]XIO--Sjv-(a^3w)日9aos)-j^L-a法XIO-fn--(s￥o-a(，)-,&ra，KfXIO-FN-(〔svol)日o,.&ra，irfXIO,I。N-ay-(gj)so-J^L-G〕嫁19.根據(jù)權(quán)利要求18的化合物，其中所述環(huán)寡肽部分具有選自下述的序列環(huán)[D-Tyr-Arg-Arg畫Nal-Gly]環(huán)[D-Tyr曙(Me)Arg-Arg-Nal-Gly]環(huán)[D-Tyr畫Arg-(Me)Arg-Nal-Gly]環(huán)[D-Tyr-Om-Arg-Nal隱Gly]環(huán)[D-Tyr-Cit-Arg畫Nal-Gly]環(huán)[D-Tyr-Orn(FB)陽Arg畫Nal-Gly]W[D匿Tyr畫Orn(FP)畫Arg畫Nal畫Gly]環(huán)[D-Tyr-Orn(Ac)-Arg-Nal-Gly]環(huán)[D-Tyr-Om(Am)-Arg畫Nal-Gly]環(huán)[D-Tyr-Orn(Nl)畫Arg-Nal-Gly]環(huán)[D-Tyr陽Om(N2)-Arg-Nal-Gly]環(huán)[D畫Tyr-Om(Me,Nl)-Arg-Nal匿Gly]環(huán)[D-Tyr-Om(Me,N2)-Arg畫Nal畫Gly]環(huán)[D-Tyr-(Me)D-Orn(FB)-Arg-Nal-Gly]環(huán)[D-Tyr-His-Arg-Nal-Gly]20.根據(jù)權(quán)利要求19的化合物，其中所述環(huán)寡肽部分具有選自下述的序列環(huán)[D-Tyr畫Om-Arg一Nal畫Gly]環(huán)[D-Tyr-Orn(FB)-Arg-Nal-Gly]環(huán)[D-Tyr-(Me)D-Om(FB)-Arg-Nal-Gly]21.根據(jù)上述任一項的化合物，其中所述配體由環(huán)寡肽部分組成。22.根據(jù)上述任一項的化合物，其中所述標(biāo)記為放射標(biāo)記。23.根據(jù)權(quán)利要求22的化合物，其中所述化合物包含1個或多個Dap(FB)、Dap(FP)、FB或FP基團(tuán)，且1個氟取代基為18F。24.根據(jù)權(quán)利要求23的化合物，其中所述18F存在于Orn或D-Orn的N5處的FB或FP取代基上。25.根據(jù)權(quán)利要求22的化合物，該化合物具有選自下述的放射標(biāo)記18F、47Sc、51Cr、52Fe、52mMn、56Ni、57Ni、62Cu、64Cu、67Ga、68Ga、72As、75Br、76Br、77Br、82Br、89Zr、94mTc、97Ru、99mTc、mIn、123I、124I、125I、131I、191Pt、197Hg、201T1、203Pb、110mIn、120I。26.根據(jù)權(quán)利要求22的化合物，該化合物具有放射標(biāo)記，所述放射標(biāo)記通過有機(jī)絡(luò)合劑和放射性核素的絡(luò)合物連接到配體，所述絡(luò)合物以不破壞該配體與CXCR4受體的結(jié)合性質(zhì)的方式與配體相連。27.根據(jù)權(quán)利要求26的化合物，其中所述絡(luò)合劑通過間隔基團(tuán)與配體相連。28.根據(jù)權(quán)利要求22的化合物，其中所述放射標(biāo)記選自32P、67Cu、77As、90Y、"Mo、103Ru、105Rh、109Pd、川Ag、，14mIn、117mSn、121Sn、127Te、131I、140La、"°Nd、142Pr、143Pr、149Tb、149Pm、15lPm、I53Sm、159Gd、161Tb、166Ho、166Dy、169Er、169Yb、172Tm、175Yb、177Lu、186Re、188Re、198Au、199Au、211At、211Bi、212Bi、213Bi、225Ac。29.根據(jù)權(quán)利要求22的化合物，其中所述放射標(biāo)記選自WY、188Re和131I'30.化合物，或其藥學(xué)可接受鹽或酯，包含細(xì)胞毒部分和趨化因子受體CXCR4的配體，所述配體具有對于CXCR4受體的結(jié)合親和力，該親和力以IC50表示，在125I-CPCR4存在下測定的IC50為250nM或更低濃度，其中配體包含在環(huán)狀部分中有B-Arg或B-(Me)Arg模體的環(huán)寡肽部分，并且其中B是堿性氨基酸、其衍生物、或苯丙氨酸，條件是當(dāng)B是堿性氨基酸的Na-曱基衍生物時，模體是B-Arg。31.根據(jù)權(quán)利要求30的化合物，其中所述環(huán)寡肽部分具有序列環(huán)[D-Tyr/(Me)D-Tyr-B-Arg/(Me)Arg隱Z-(Ala)n-X]其中B為堿性氨基酸、其衍生物，或苯丙氨酸，條件是當(dāng)B為堿性氨基酸的N"-曱基衍生物，或其藥學(xué)可接受鹽或酯時，模體為B-Arg;Z為在其側(cè)鏈中含有芳香基團(tuán)的氨基酸；n為1或0，條件是僅當(dāng)環(huán)部分序列中的前4個氨基酸為D-Tyr/(Me)D-Tyr-Arg-Arg-Nal時，n為l;且X選自Gly、(Me)Gly、Ala、Dap(二氨基丙酸)、Dap(FP)((N-氟丙?；?-二氨基丙酸)、Dab(二氨基丁酸)、Dab(FP)((N-氟丙?；?-二氨基丁酸)、Dab(FB)((N-氟苯曱酰基)-二氨基丁酸)和Dap(FB)((N-氟苯曱?；?-二氨基丙酸)。32.根據(jù)權(quán)利要求31的化合物，其中Z選自Nal(L-3-(2-萘基)丙氨酸),Dap(FB)或AMS(FB)。33.化合物，或其藥學(xué)可接受鹽或酯，包含趨化因子受體CXCR4的配體，所述配體具有對于CXCR4受體的結(jié)合親和力，該親和力以IC50表示，在125I-CPCR4存在下測定的IC50為250nM或更4氐濃度，其中配體包含在環(huán)狀部分中有B-Arg或B-(Me)Arg模體的環(huán)寡肽部分，并且其中B是堿性氨基酸、其衍生物、或苯丙氨酸，條件是當(dāng)B是石威性氨基酸的Na-曱基衍生物時，模體是B-Arg,且條件是寡肽部分不具有環(huán)[D-Tyr-Arg-Arg-Nal-Gly]序列，也不具有環(huán)[D-Tyr-Om-Arg-Nal-Gly]序列。34.根據(jù)權(quán)利要求33的化合物，所述配體包含環(huán)寡肽部分序列環(huán)[D畫Tyr/(Me)D-Tyr-B-Arg/(Me)Arg畫Z-(Ala)n-X]其中B如權(quán)利要求33中所限定；Z為在其側(cè)鏈中含有芳香基團(tuán)的氨基酸；n為1或0,條件是僅當(dāng)環(huán)部分序列中的前4個氨基酸為D-Tyr/(Me)D-Tyr-Arg-Arg-Nal時，n為1;且X選自Gly、(Me)Gly、Ala、Dap(二氨基丙酸)、Dap(FP)((N-氟丙酰基)-二氨基丙酸)、Dab(二氨基丁酸)、Dab(FP)((N-氟丙?；?-二氨基丁酸)、Dab(FB)((N-氟苯甲?；?-二氨基丁酸)和Dap(FB)((N-氟苯曱酰基)-二氨基丙酸)。35.根據(jù)權(quán)利要求34的化合物，其中Z選自Nal(L-3-0萘基)丙氨酸)、Dap(FB)或AMS(FB)。36.根據(jù)上述權(quán)利要求中任一項的化合物，其通過連接l個或多個親水部分而纟皮修飾。37.藥物組合物，其包含上述權(quán)利要求中任一項的化合物，以及一種或多種藥學(xué)可接受賦形劑。38.根據(jù)權(quán)利要求37的的組合物，其適合注射。39.合成權(quán)利要求1的化合物的方法，所述方法包括在下述條件下用放射性核素源處理所述配體，所述條件為使得放射性核素，或有機(jī)絡(luò)合劑和放射性核素之間的絡(luò)合物與配體相連。40.根據(jù)權(quán)利要求1-36中任一項的化合物，其用于治療或診斷。41.根據(jù)權(quán)利要求1-36中任一項的化合物在制備用于治療腫瘤病癥的藥物中的用途。42.根據(jù)權(quán)利要求1-29中任一項的化合物在制備用于腫瘤病癥診斷成像的藥物中的用途。43.根據(jù)權(quán)利要求41或權(quán)利要求42的用途，其中所述腫瘤已經(jīng)具有轉(zhuǎn)移潛能或被懷疑具有轉(zhuǎn)移潛能。44.根據(jù)權(quán)利要求41-43中任一項的用途，其中所述腫瘤病癥為乳腺癌或前列腺癌。45.成像肺瘤的組織的方法，所述方法包括向具有腫瘤或被懷疑具有腫瘤的受試者給藥根據(jù)權(quán)利要求1-29的化合物，和根據(jù)其體內(nèi)分布檢測該化合物。46.根據(jù)權(quán)利要求45的方法，還包括在檢測步驟之后生成被檢測的化合物的圖像的步驟。47.檢測腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移潛能的方法，該方法包括將細(xì)胞暴露于權(quán)利要求1-29中任一項的化合物，使得化合物結(jié)合至細(xì)胞表面的CXCR4受體，從細(xì)胞附近移除未結(jié)合的化合物，和檢測結(jié)合至細(xì)胞的化合物的存在和/或含量。48.根據(jù)權(quán)利要求47的方法，其中所述細(xì)胞從腫瘤移出，并在體外暴露于化合物。49.根據(jù)權(quán)利要求45-47中任一項的方法，其中當(dāng)標(biāo)記包含放射性核素時，所述成像，或結(jié)合化合物的存在和/或量的測定使用PET或SPECT進(jìn)行。50.治療受試者腫瘤病癥的方法，所述腫瘤具有轉(zhuǎn)移潛能，或被懷疑具有轉(zhuǎn)移潛能，所述方法包括向所述受試者給藥權(quán)利要求1-36中任一項的化合物。51.根據(jù)權(quán)利要求45-50中任一項的方法，其中所述腫瘤病癥為乳腺癌或前列腺癌。52.根據(jù)權(quán)利要求1-29中任一項的化合物的合成方法，所述方法包括在下述條件下用可檢測標(biāo)記源處理所述配體，所述條件為使得可#企測標(biāo)記，或有機(jī)絡(luò)合劑和所述標(biāo)記的絡(luò)合物與配體結(jié)合。53.根據(jù)權(quán)利要求30-32中任一項的化合物的合成方法，所述方法包括在下述條件下用細(xì)胞毒部分源處理所述配體，所述條件為使得細(xì)胞毒部分直接或間接與配體結(jié)合。54.化合物，或其藥學(xué)可接受鹽或酯，包含趨化因子受體CXCR4的西己體，其中所述配體包含具有下述序列的環(huán)寡肽部分<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>其中B如權(quán)利要求1中所限定；Z為在其側(cè)鏈中含有芳香基團(tuán)的氨基酸；n為1或0;且X選自Gly、(Me)Gly、Ala、Dap(二氨基丙酸)、Dap(FP)((N-氟丙?；?-二氨基丙酸)、Dab(二氨基丁酸)、Dab(FP)((N-氟丙?；?-二氨基丁酸)、Dab(FB)((N-氟苯曱?；?-二氨基丁酸)和Dap(FB)((N-氟苯曱?；?-二氨基丙酸)，所述化合物任選包含可檢測標(biāo)記，條件是當(dāng)所述化合物不含可檢測標(biāo)記時，所述環(huán)寡肽部分不具有環(huán)[D-Tyr-Arg-Arg-Nal-Gly]序列，也不具有環(huán)[D-Tyr-Om畫Arg-Nal隱Gly]序列。全文摘要化合物或其藥學(xué)可接受鹽或酯，包含趨化因子受體CXCR4的配體和可檢測標(biāo)記，配體有CXCR4受體親和力，該親和力以IC₅₀表示，在¹²⁵I-CPCR4存在下測定的IC₅₀為250nM或更低濃度，其中配體包含在環(huán)狀部分中有B-Arg或B-(Me)Arg的環(huán)寡肽部分，并且其中B是堿性氨基酸、其衍生物、或苯丙氨酸，條件是當(dāng)B是堿性氨基酸的N-甲基衍生物時，模體是B-Arg。在優(yōu)選的實施方案中，環(huán)寡肽部分的序列是環(huán)[D-Tyr/(Me)D-Tyr-B-Arg/(Me)Arg-Z-(Ala)n-X]，其中B如上所定義；Z氨基酸在其側(cè)鏈上包含芳香族基團(tuán)；n是1或0，條件是只有當(dāng)在環(huán)部分中的前4個氨基酸序列是D-Tyr/(Me)D-Tyr-Arg-Arg-Nal時，n是1，其中Nal是L-3-(2-萘基)丙氨酸；并且，X選自Gly、(Me)Gly、Ala、Dap(二氨基丙酸)、Dap(FP)((N-氟丙?；?-二氨基丙酸)、Dab(二氨基丁酸)、Dab(FP)((N-氟丙?；?-二氨基丁酸)、Dab(FB)((N-氟苯甲?；?-二氨基丁酸)和Dap(FB)((N-氟苯甲酰基)-二氨基丙酸)?；衔锟捎糜谠\斷成像和/或治療目的。文檔編號C07K7/00GK101454340SQ200780006969公開日2009年6月10日申請日期2007年2月27日優(yōu)先權(quán)日2006年2月27日發(fā)明者伯克哈特·勞弗,奧利弗·戴默,漢斯·J·韋斯特,諾曼·科格林,霍斯特·凱斯勒,馬庫斯·施韋格,馬蒂娜·安東申請人:慕尼黑科技大學(xué)