專利名稱：：使用紫杉烷和13-脫氧蒽環(huán)霉素的組合的抗癌治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本揭示案涉及通過投與諸如太平洋紫杉醇(paclitaxd)或多烯紫杉醇(docetaxel)的紫杉烷和13-脫氧蒽環(huán)霉素進(jìn)行的抗癌治療。本揭示案使得有可能實(shí)現(xiàn)增強(qiáng)的抗癌作用，而無累積的不可逆心臟毒性。本揭示案也涉及包含紫杉烷和13-脫氧蒽環(huán)霉素的組合物。
背景技術(shù)：
：最為大眾所熟知的蒽環(huán)霉素抗癌藥物是阿霉素(doxorubicin)和道諾霉素(daunorubidn)，其含有13-酮基。美國專利第3，5卯，028號(hào)中所揭示的阿霉素具有廣泛抗癌效用且用于治療白血病、淋巴瘤和實(shí)體腫瘤。美國專利第3,616,242號(hào)中所揭示的道諾霉素適用于治療急性白血病。然而，這些藥物的效用受心臟毒性的嚴(yán)重副作用限制，以致可給予患者的藥物的總量不能超過550mg/M2(伊.阿凍福拉克(E.A.Lefmk)等人，癌癥(Cancer)，32:302,1973)。甚至在所推薦的最大總累積劑量(430-650mg/M2)下或在接近所述劑量時(shí)，60%的患者出現(xiàn)明顯且持續(xù)的心臟功能異常且14%的患者顯現(xiàn)充血性心力衰竭(阿'爵士達(dá)勒(A.Dresdale)等人，癌癥(Cancer),52:51,1983)。因此，雖然這些藥物適用于抑制癌腫瘤生長，但患者也可能因藥物的嚴(yán)重心臟毒性副作用而死于充血性心力衰竭。也發(fā)現(xiàn)這些蒽環(huán)霉素的心臟毒性是由于13-酮基部分代謝性還原為13-二氫醇代謝物而產(chǎn)生(皮'斯'穆士林(P.S.Mushlin)等人，聯(lián)邦學(xué)報(bào)(Fed.Proc)，45:809,1986)。在阿霉素完全未代謝為13-二氫醇代謝物(阿霉素醇(doxorubicinol))的測試系統(tǒng)中，未觀察到顯著心臟毒性作用(皮.斯.穆士林(P.S.Mushlin)等人，聯(lián)邦學(xué)報(bào)(Fed.Proc),44:1274,1985;里'迪'奧爾森(R.D.Olson)等人，聯(lián)邦學(xué)報(bào)(Fed.Proc)，45:809，1986)。相反，在這些相同測試系統(tǒng)中，13-二氫代謝物阿霉素醇和道諾霉素醇(daunorubicinol)在相對較低的濃度下產(chǎn)生心臟毒性(l-2微克/毫升，里.迪.奧爾森(R.D.Olson)等人，美國癌癥研究學(xué)會(huì)學(xué)報(bào)(Proceed.Am.Assoc.CancerRes.)，26:227,1985;里.迪.奧爾森(R.D.Olson)等人，美國癌癥研究學(xué)會(huì)學(xué)報(bào)(Proceed.Am.Assoc.CancerRes.)，28:441，1987)。如果使阿霉素保留在測試系統(tǒng)中，那么即使很短的時(shí)間，也會(huì)發(fā)生特定代謝轉(zhuǎn)化且形成足量13-二氫代謝物，以致開始顯現(xiàn)心臟毒性(利.羅西尼(L.Rossini)等人，毒理學(xué)文獻(xiàn)增刊(Arch.Toxicol.Suppl.)，9:474，1986;米'戴爾'托卡(M.DelTocca)等人，醫(yī)藥研究與交流(Pharmacol.Res.Commun.),17:1073,1985)。因此，已積累確實(shí)證據(jù)證明諸如阿霉素和道諾霉素的藥物的心臟毒性是由其13-二氫代謝物產(chǎn)生的強(qiáng)心臟毒性作用所引起的(皮.穆士林(P.Mushlin)等人，美國實(shí)驗(yàn)生物科學(xué)家聯(lián)合會(huì)雜志(FASEBJournal)，2:A1133,1988;里.布?？?R.Boucek)等人，生物化學(xué)雜志(J.Biol.Chem.)，262:15851,1987;以及里.奧爾森(R.Olson)等人，美國科學(xué)院院報(bào)(Proc.NatlAcad.Sci.)，85:3585,1988;福里斯特.吉.利(ForrestGL)等人，癌癥研究(CancerRes),60:5158,2000)。已知阿霉素與諸如太平洋紫杉醇的紫杉烷的組合與僅任一種藥物相比對乳癌產(chǎn)生增強(qiáng)的抗癌作用。僅阿霉素對乳癌的抗癌反應(yīng)率為35-50%。僅太平洋紫杉醇，反應(yīng)率為32-62%。然而，這兩種藥物的組合可產(chǎn)生83-94%的反應(yīng)率(吉安尼.利(GianniL)等人，臨床腫瘤學(xué)雜志(JClinOncol.)13:2688,1995;多姆貝諾斯奇'皮(Dombernowsk,P)等人，腫瘤學(xué)論文集(SeminarsinOncology)，23:23,1996)。令人遺憾地，太平洋紫杉醇和阿霉素的組合會(huì)在18-20%的患者中引起臨床充血性心力衰竭(吉安尼.利(GianniL)等人，臨床腫瘤學(xué)雜志(JClinOncol.)，13:2688，1995;以及多姆貝諾斯奇-皮(Dombernowsk,P)等人，月中瘤學(xué)論文集(SeminarsinOncology),23:23,1996)。太平洋紫杉醇增強(qiáng)阿霉素的心臟毒性，這限制或排除蒽環(huán)霉素與紫杉烷的組合使用。充血性心力衰竭的發(fā)病率可通過降低阿霉素的劑量而受到限制(左達(dá)奴.斯.赫(GiordanoSH)等人，臨床癌癥研究(ClinCancerRes)，8:3360,2002)，但由此組合的功效也會(huì)降低(斯巴拉奴.杰.阿(SparanoJA)等人，臨床腫瘤學(xué)雜志(JCinOncol)，17:3828,1999;瓦勒羅.凡(ValeroV),等人，腫瘤學(xué)論文集(SemiOncol),28:15.2001)。另外，如左心室射血分?jǐn)?shù)的減小所證明，即使低劑量阿霉素與太平洋紫杉醇的組合也會(huì)引起心臟毒性(斯巴拉奴.杰.阿(SparanoJA)等人，臨床腫瘤學(xué)雜志(JCinOncol),17:3828,1999)。
發(fā)明內(nèi)容本揭示案克服現(xiàn)有技術(shù)的問題且提供包含使用某些蒽環(huán)霉素的抗癌組合療法，所述蒽環(huán)霉素在與紫杉烷組合時(shí)不會(huì)產(chǎn)生或至少顯著降低心臟毒性且避免不可接受的充血性心力衰竭風(fēng)險(xiǎn)。這與現(xiàn)有療法相比又提供包括乳癌的癌癥的治療的顯著改良。本揭示案涉及一種治療癌癥的方法，所述方法包含向有需要的哺乳動(dòng)物(包括人類)投與治療有效量的具有下式的13-脫氧蒽環(huán)霉素:OHRf其中R,、R2和R3各自獨(dú)立地為H或OH;R4為H、OH、烷基或O-烷基；Rs為O或NH;且R6為糖部分；其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽、其前藥和混合物；以及治療有效量的紫杉垸。在執(zhí)行本揭示案的方法時(shí)，13-脫氧蒽環(huán)霉素和紫杉烷可同時(shí)、以任一順序分開、以任一順序相繼或以任一順序連續(xù)投與以提供抗癌作用。本揭示案的另一方面涉及提供適用于治療癌癥的抗癌、抗腫瘤和/或抗贅生作用的組合物。本揭示案的組合物包含由式X表示的13-脫氧蒽環(huán)霉素化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>其中R,、R2和R3各自獨(dú)立地為H或OH;R4為H、OH、烷基或O-烷基；Rs為O或NH;且R6為糖部分，其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽和其前藥；以及紫杉垸化合物，諸如太平洋紫杉醇或多烯紫杉醇。根據(jù)下文實(shí)施方式，本揭示案的其他目標(biāo)和優(yōu)點(diǎn)對所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員來說將變得顯而易見，其中僅簡單地以說明最佳模式的方式展示和描述優(yōu)選實(shí)施例。應(yīng)認(rèn)識(shí)到，在不脫離本揭示案的情況下，本揭示案能夠進(jìn)行其他和不同實(shí)施例，且其數(shù)個(gè)細(xì)節(jié)能夠在多個(gè)明顯的方面進(jìn)行修改。因此，本說明書在本質(zhì)上被視為說明性的而不是限制性的。圖1和2說明單獨(dú)太平洋紫杉醇和在IC30濃度的根據(jù)本揭示案的阿霉素、道諾霉素或13-脫氧蒽環(huán)霉素化合物存在下太平洋紫杉醇抑制MCF-7細(xì)胞生長的劑量-反應(yīng)關(guān)系。圖3和4說明單獨(dú)太平洋紫杉醇和在IC10濃度的根據(jù)本揭示案的阿霉素、道諾霉素或13-脫氧蒽環(huán)霉素化合物存在下太平洋紫杉醇抑制P388鼠類白血病細(xì)胞生長的劑量-反應(yīng)關(guān)系。具體實(shí)施例方式雖然下文說明書詳述本揭示案的某些實(shí)施例，但應(yīng)理解本揭示案在其應(yīng)用方面不受隨附實(shí)例和實(shí)驗(yàn)中所述的化合物的組合物和組合的細(xì)節(jié)限制，因?yàn)楸窘沂景改軌蜻M(jìn)行其他實(shí)施例且能夠以不同方式實(shí)施。根據(jù)本揭示案所采用的13-脫氧蒽環(huán)霉素化合物具有下式X:其中R!、R2和R3各自獨(dú)立地為H或OH;R4為H、OH、烷基或O-垸基；R5為O或NH;且R6為糖部分；其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽和其前藥。更典型的糖部分是道諾糖胺(daunosamine)、表道諾糖胺(epi-daunosamine)或鼠李糖烯(rhamnal)糖。更典型的13-脫氧化合物是13-脫氧阿霉素(13-deoxydoxorubicin)、13-脫氧道諾霉素(13-deoxydau匿ubicin)、13-脫氧洋紅霉素(13-deoxycarminomycin)、13-脫氧表阿霉素(13-deoxyepirubicin)、13-脫氧伊達(dá)比星(13-deoxyidarubicin)、13-脫氧脂質(zhì)體蒽環(huán)霉素(13-deoxyannamycin)和其5-亞氨基類似物。根據(jù)本揭示案的組合療法進(jìn)一步包含采用紫杉垸。更典型的紫杉烷是太平洋紫杉醇和多烯紫杉醇；其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽和其前藥。根據(jù)本揭示案的化合物可在羥基或氨基官能團(tuán)處使用垸氧基、氨基酸等基團(tuán)作為前藥形成部分而形成前藥。舉例來說，4位置處的羥基甲基可形成單、二或三磷酸酯且這些磷酸酯又可形成前藥。羥基和羥基甲基可轉(zhuǎn)化為-OCH2P(0)(OH)2和膦酸酯的前藥。羥基甲基的氧原子可轉(zhuǎn)化為CH2，且接著轉(zhuǎn)化為CH2P(0)(OH)2和前藥。具有多個(gè)氮官能團(tuán)(氨基、羥基氨基、酰胺等)的化合物的前藥形式可包括以下類型的衍生物，其中R基團(tuán)可各自獨(dú)立地為氫、經(jīng)取代或未經(jīng)取代的如先前所定義的垸基、芳基、烯基、炔基、雜環(huán)、烷基芳基、芳烷基、芳烯基、芳炔基、環(huán)烷基或環(huán)烯基。(a)羧酰胺，-NHC(O)R;(b)氨基甲酸酯，-NHC(O)OR;(c)氨基甲酸(酰氧基)烷基酯，NHC(O)OROC(O)R;(d)烯胺，陽NHCR(二CHC02R)或-NHCR(-CHCONR2);(e)席夫堿(SchiffBase),-N=CR2;(f)曼尼希堿(MannichBase)(由碳二亞胺化合物獲得)，RCONHCH2NR2。所述前藥衍生物的制備論述于多個(gè)文獻(xiàn)源(實(shí)例為亞歷山大(Alexander)等人，藥物化學(xué)雜志(J.Med.Chem.)，1988,31,318;阿力格斯.馬丁(Aligas-Martin)等人，PCTWOpp/41531,第30頁)中。在制備這些衍生物時(shí)轉(zhuǎn)化的氮官能團(tuán)是本揭示案化合物的一個(gè)(或一個(gè)以上)氮原子。本揭示案的具羧基化合物的前藥形式包括酯(-C02R)，其中R基團(tuán)對應(yīng)于在身體內(nèi)通過酶促或水解過程進(jìn)行的釋放將在醫(yī)藥學(xué)上可接受的水平下的任何醇。由本揭示案的羧酸形式衍生的另一前藥可為由布多(Bodor)^A，藥物化學(xué)雜志(J.Med.Chem.),1980，a，469所述的結(jié)構(gòu)的季鹽類型的鹽包括由醫(yī)藥學(xué)上可接受的無機(jī)或有機(jī)酸衍生的鹽。合適的酸的實(shí)例包括鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、反丁烯二酸、順丁烯二酸、磷酸、乙醇酸、乳酸、水楊酸、丁二酸、甲苯對磺酸、酒石酸、乙酸、檸檬酸、甲垸磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、萘-2-磺酸、三氟乙酸和苯磺酸。由適當(dāng)?shù)膲A衍生的鹽包括諸如鈉的堿金屬和氨。最近，己發(fā)現(xiàn)阿霉素、道諾霉素或其他類似蒽環(huán)霉素的13-脫氧形式不會(huì)代謝轉(zhuǎn)化為心臟毒性13-二氫形式，且因此并無累積的不可逆心臟毒性。尤其，參見WO99/08687、美國專禾ij5,948,896和5,942,605以及PCT/US99/04704，其揭示內(nèi)容以引用的方式并入本文中。迄今，尚未知曉所述蒽環(huán)霉素抗癌劑與紫杉烷的組合是否將具有增強(qiáng)或甚至協(xié)同抗癌作用。按照這些方法，單獨(dú)太平洋紫杉醇抑制MCF-7人類乳腺腫瘤細(xì)胞生長的IC50為221nM。在弱生長抑制性濃度的本揭示案的13-脫氧蒽環(huán)霉素存在下，太平洋紫杉醇的IC50降低到0.55-11iiM。雖然僅太平洋紫杉醇對P388鼠類白血病細(xì)胞生長不具有抑制活性，但在弱生長抑制性濃度的13-脫氧蒽環(huán)霉素存在下，太平洋紫杉醇的IC50為13-20nM。在非癌性大鼠衍生的H9c2細(xì)胞中，太平洋紫杉醇的弱生長抑制性濃度(IC10)使13-脫氧阿霉素的IC50從700nM降低到400nM，使13-脫氧-5-亞氨基阿霉素的IC50從1500nM降低到210nM，但并不降低阿霉素的IC50，其仍維持原來的210nM。本揭示案的13-脫氧蒽環(huán)霉素在與紫杉烷組合時(shí)產(chǎn)生增強(qiáng)的高效抗癌、抗腫瘤和/或抗贅生作用。本揭示案使得低劑量的具有本揭示案的化學(xué)式的13-脫氧蒽環(huán)霉素有可能增強(qiáng)紫杉烷的抗癌、抗腫瘤和/或抗贅生功效。此外，根據(jù)本揭示案的包含紫杉烷和13-脫氧蒽環(huán)霉素的組合物并無心臟毒性或心臟毒性顯著降低。本揭示案在使用紫杉烷和13-脫氧蒽環(huán)霉素的組合時(shí)與各藥物單獨(dú)使用時(shí)所需的劑量相比可在降低的劑量下提供有效治療。此外，使用紫杉烷與13-脫氧蒽環(huán)霉素的組合與單獨(dú)使用各藥物時(shí)相比可提供更安全且毒性更小的治療。重要的是，請注意13-脫氧蒽環(huán)霉素和紫杉垸可同時(shí)、分開或連續(xù)使用。另外，采用13-脫氧蒽環(huán)霉素和紫杉垸的組合的本揭示案的治療展現(xiàn)適用于各種類型的治療癌癥、贅瘤或腫瘤的療法的抗癌、抗腫瘤和/或抗贅生功效，所述癌癥、贅瘤或腫瘤包括白血病、黑色素瘤、肝腫瘤、乳房腫瘤、卵巢腫瘤、前列腺腫瘤、胃腫瘤、胰腺腫瘤、肺腫瘤、腎腫瘤、結(jié)腸腫瘤和中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤。本揭示案的治療提供一種抑止哺乳動(dòng)物(包括人類)的癌癥、腫瘤和/或贅瘤的生長的方法。根據(jù)本揭示案的組分的典型組合物、組合、混合物或制劑是式X化合物與太平洋紫杉醇或多烯紫杉醇的組合。更典型的組合物、組合、混合物或制劑是選自由以下各物組成的群組的13-脫氧蒽環(huán)霉素與太平洋紫杉醇或多烯紫杉醇的組合13-脫氧阿霉素、13-脫氧道諾霉素、13-脫氧表阿霉素、13-脫氧伊達(dá)比星、13-脫氧脂質(zhì)體蒽環(huán)霉素、13-脫氧洋紅霉素、13-脫氧氨柔比星和其5-亞氨基類似物。所述組合物、組合、混合物或制劑的組分可同時(shí)、分開、相繼或連續(xù)投與患者。所述組分可以醫(yī)學(xué)上可接受的任何可接受的方式投與患者，包括經(jīng)口、腸外、局部或植入。經(jīng)口投藥包括投與呈片劑、膠囊、含片、懸浮液、溶液、乳液、散劑、糊漿和其類似物形式的組合物、組合、混合物或制劑的組分。優(yōu)選投藥途徑為腸外。投與組分的實(shí)際方法和順序可根據(jù)所利用的式X的13-脫氧蒽環(huán)霉素的特定醫(yī)藥配方、所利用的紫杉烷的特定醫(yī)藥配方、所治療的特定癌癥、所治療的疾病狀態(tài)的嚴(yán)重程度和所治療的特定患者而變化。投與組分的劑量范圍可隨患者的年齡、健康狀況、性別和疾病程度而變化且可由所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員確定。本揭示案的醫(yī)藥組合物包含在醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑或賦形劑中與紫杉垸混合在一起的式X的13-脫氧蒽環(huán)霉素。本揭示案的這些醫(yī)藥組合物適用于抗癌療法。醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑或賦形劑為調(diào)配化合物呈醫(yī)藥組合物、組合、混合物和制劑形式的領(lǐng)域的一般技術(shù)人員所熟知。醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑是指一種或一種以上適于向包括人類的哺乳動(dòng)物投與的相容性固體或液體填充劑、稀釋劑或包裹物質(zhì)。適于腸外投藥的醫(yī)藥組合物、組合、混合物和制劑是調(diào)配為可為可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌溶液或懸浮液的無菌形式。醫(yī)藥組合物中所含的活性成分的量可視諸如投藥途徑和媒劑的許多因素而十分廣泛地變化。在本發(fā)明中，醫(yī)藥組合物可含有約0.1mg至1000mg的式X的13-脫氧蒽環(huán)霉素和約0.1mg至1000mg的紫杉烷。在本揭示案的方法中，向有需要的患者投與每平方米體表面積約0.1mg至每平方米體表面積約1000mg、更通常每平方米體表面積約10mg至每平方米體表面積約500mg的劑量的式X的13-脫氧蒽環(huán)霉素，且更通常通過腸外投藥途徑投與。向有需要的患者投與約0.1mg/m2至約1000mg/m2、更通常約10mg/m2至約500mg/m2的劑量的本揭示案的紫杉烷，且更通常通過腸外投藥途徑投與。13-脫氧蒽環(huán)霉素和紫杉烷可以單一組合物、組合、混合物或制劑形式一起投與，或可以任一順序分開、以任一順序相繼或以任一順序連續(xù)投與。當(dāng)并未一起投與時(shí)，通常在投與第一種化合物72小時(shí)內(nèi)投與第二種化合物。部分歸因于紫杉烷與13-脫氧蒽環(huán)霉素之間的協(xié)同作用，式X的13-脫氧蒽環(huán)霉素顯著增加紫杉烷的抗癌治療作用而不增加毒性。可根據(jù)需要頻繁投與紫杉烷和13-脫氧蒽環(huán)霉素的劑量。投藥的實(shí)際方法和順序應(yīng)根據(jù)特定配方、組合物、組合、混合物或制劑、所治療的特定癌癥和所治療的特定患者而變化。本揭示案的13-脫氧蒽環(huán)霉素與紫杉烷的組合的增強(qiáng)作用以舉例的方式展示于下文測試中，其打算說明本揭示案而不是限制本揭示案。13-脫氧蒽環(huán)霉素的抗癌作用關(guān)于抗癌活性，在鼠類白血病模型中利用注射有P388細(xì)胞(小鼠衍生的白血病癌細(xì)胞)的CD2F1小鼠測試阿霉素(化合物I)、13-脫氧阿霉素(化合物n)和5-亞氨基-13-脫氧阿霉素(化合物in)的活體內(nèi)抗癌活性。用100萬個(gè)P388細(xì)胞腹膜內(nèi)(ip)注射各組的CD2F1小鼠。每組10只小鼠。在阿霉素組中，在研究的第l-9天連續(xù)腹膜內(nèi)投與0.8mg/kg，歷時(shí)9天。腹膜內(nèi)投與1.6mg/kg13-脫氧阿霉素且以與阿霉素相同的方式腹膜內(nèi)投與3.2mg/kg5-亞氨基-13-脫氧阿霉素。用媒劑注射對照組。計(jì)算各組的中值存活時(shí)間。以存活延長量(治療組的中值存活除以對照組的中值存活時(shí)間，再乘以IOO，T/C%)表示化合物的活性。結(jié)果展示于表1中。阿霉素產(chǎn)生如所示的中值存活時(shí)間顯著增加147%的抗腫瘤作用。13-脫氧阿霉素和5-亞氨基-13-脫氧阿霉素也產(chǎn)生中值存活時(shí)間的顯著增加，但與阿霉素并無顯著不同。這些研究的結(jié)果證明13-脫氧蒽環(huán)霉素即使在不同劑量下也具有類似于阿霉素的抗癌功效。表1阿霉素和13-脫氧蒽環(huán)霉素在患有P388鼠類白血病的小鼠中的抗癌作用(T/C=經(jīng)治療小鼠的中值存活時(shí)間除以對照小鼠的中值存活時(shí)間X100;n=10)組劑量中值存活時(shí)間T/C%(毫克/公斤沃)(天)對照019100阿霉素(I)0.828147*化合物II1.627142*化合物III3.227142*11*相對于對照，p<.05。13-脫氧蒽環(huán)霉素的心臟毒性評(píng)估將24只齡期匹配的重3.0kg的新西蘭白兔(NewZealandwhiterabbit)隨機(jī)分為四組(N=6只兔子/組)。長期用阿霉素、13-脫氧阿霉素(11)、5-亞氨基-13-脫氧阿霉素(III)或媒劑(0.9%NaCl)治療各組。每周兩次向耳靜脈中靜脈內(nèi)投與各劑量的藥物或媒劑。每周獲得血清和血液樣品且每周或每隔一周執(zhí)行M-模式心臟超聲波以獲得左心室縮短分?jǐn)?shù)(leftventricularfractionalshortening,LVFS)，從而評(píng)定心臟功能。每日測量食物消耗且每周測量體重。給對照兔子喂食與用阿霉素治療的兔子相同量的食物(成對喂食)。在處死時(shí)，獲得頂部和左心室游離壁樣品且將其保存在10%緩沖福爾馬林(formalin)中以進(jìn)行組織學(xué)評(píng)分和經(jīng)由光學(xué)顯微術(shù)分析。也獲得左心室組織樣品以評(píng)定蒽環(huán)霉素和代謝物的心臟含量；當(dāng)兔子變得具有心臟毒性(LVFS<30呢或LVFS降低10%單位，即從42呢降低至32呢LVFS)、展現(xiàn)危急生命或虛弱性毒性(即，重度骨髓抑制或粘膜炎)或研究開始后13周時(shí)，將其處死。13-脫氧阿霉素的最佳抗腫瘤劑量約為阿霉素劑量的兩倍，而5-亞氨基-13-脫氧阿霉素的劑量高達(dá)阿霉素最佳劑量的7倍。因此，13-脫氧阿霉素和5-亞氨基-13-脫氧道諾霉素的劑量為阿霉素的累積心臟毒性劑量(17.5mg/kg)的兩倍(13-脫氧阿霉素)和7倍(5-亞氨基-13-脫氧阿霉素)。每周兩次投與1.25mg/kg阿霉素歷時(shí)7周(累積劑量為17.5mg/kg)，每周兩次投與2mg/kg13-脫氧阿霉素歷時(shí)10周(累積劑量為40mg/kg)且每周兩次投與5mg/kg5-亞氨基-13-脫氧阿霉素歷時(shí)12周(累積劑量為120mg/kg)。在處死時(shí)，移出心臟且從心臟、心室頂部和左心室游離壁對兩種類型的組織取樣且將其保存在10%福爾馬林中。準(zhǔn)備對各組織進(jìn)行二種不同的染色H&E、甲苯胺藍(lán)和三色(trichcrome)。使用比林漢姆標(biāo)度(Billinghamscale)的修改對組織評(píng)分(盲性)。評(píng)分標(biāo)度為0-4，其中=<10%細(xì)胞或組織病變，0;10%-19%細(xì)胞或組織病變，1;20%-29%細(xì)胞或組織病變，2;30%-39%細(xì)胞或組織病變，3;40%或40%以上細(xì)胞或組織病變，4。單獨(dú)分析心室頂部和左心室游離壁。各得到單核浸潤、纖維化和細(xì)胞質(zhì)空泡形成的評(píng)分。因此，各兔子具有6個(gè)評(píng)分，頂部3個(gè)(單核浸潤、纖維化和細(xì)胞質(zhì)空泡形成)和左心室游離壁3個(gè)(單核浸潤、纖維化和細(xì)胞質(zhì)空泡形成)。通過觀察所有三種染色獲得各評(píng)分。對各兔子的6個(gè)評(píng)分求平均值以給予各兔子總的單一評(píng)分，且接著對各治療組求平均值。另外，在處死時(shí)分離左心房，將其分成兩半，且對兩半都進(jìn)行研究以評(píng)定組織浴中的活體外心臟功能，其中在整個(gè)研究過程中，后負(fù)荷和前負(fù)荷保持恒定。以應(yīng)答由經(jīng)由位于各肌肉制劑底部的點(diǎn)狀電極產(chǎn)生的電刺激所誘導(dǎo)的收縮的最大力收縮率(maximumrateofforcedevelopment,dF/dt)衡量心肌收縮力。這些研究的結(jié)果呈示于表2中。與媒劑對照組相比且與其它兩個(gè)治療組相比，阿霉素產(chǎn)生統(tǒng)計(jì)上顯著的左心室縮短分?jǐn)?shù)(fs%)降低。化合物ii和in不改變左心室縮短分?jǐn)?shù)。與媒劑對照組相比，所有三種藥物同等程度地降低紅細(xì)胞壓積(hematocrits與媒劑對照組相比且與其它兩個(gè)治療組相比，阿霉素顯著降低在處死時(shí)獲得且在活體外測量的經(jīng)分離心房的心肌收縮性(dF/dt)?；衔颕I和III不改變心肌收縮性。類似地，與媒劑對照組相比且與其它兩個(gè)治療組相比，阿霉素顯著增加組織病理學(xué)病變，且化合物II和III不產(chǎn)生組織病理學(xué)病變。這些結(jié)果展示阿霉素在慢性給藥期間在兔子中產(chǎn)生嚴(yán)重的心臟毒性，但化合物II和III在這一模型中在與阿霉素所使用的劑量可相當(dāng)?shù)膭┝肯聼o心臟毒性。認(rèn)為化合物II和III無心臟毒性是歸因于無13-酮基且不形成醇代謝物。太平洋紫杉醇與13-脫氧蒽環(huán)霉素的組合活體外測量阿霉素(1)、13-脫氧阿霉素(11)、5-亞氨基-13-脫氧阿霉素(III)、道諾霉素(IV)、13-脫氧道諾霉素(V)和5-亞氨基-13-脫氧道諾霉素(VI)對MCF-7人類乳腺腫瘤細(xì)胞和P388鼠類白血病細(xì)胞的生長的抑制效應(yīng)。利用根據(jù)美國典型微生物菌種保藏中心(AmericanTypeCultureCollection,ATCC)方案的方案，培養(yǎng)并維持用于這些研究的MCF-7和P388細(xì)胞系。MCF-7培養(yǎng)基為伊氏最低要求培養(yǎng)基(EMEM，EagleMinimumEssentialMedium;ATCC)且P388培養(yǎng)基為杜氏改良伊氏培養(yǎng)基(Dulbecco'smodifiedEagle'smedium,DMEM，ATCC)。MCF-7和P388的工作培養(yǎng)基(workingmedia)是通過向450mlEMEM培養(yǎng)基(MCF-7)或DMEM(P388)中添加50ml胎牛血清(FBS，MCF-7)或50ml馬血清(ATCC，P388)而制備的。也向DMEM(P388)中添加4.5g/L葡萄糖(西格瑪(Sigma))。向MCF-7和P388工作培養(yǎng)基中添加5ml青霉素/鏈霉素(P/S，吉布可(Gibco))。使細(xì)胞在37。C下在5%C02中生長1周，且添加25ml新制培養(yǎng)基。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1-2><106個(gè)細(xì)胞/毫升時(shí)，通過轉(zhuǎn)移到含有新制培養(yǎng)基的新燒瓶中使細(xì)胞傳代。表2長期用13-脫氧蒽環(huán)霉素治療的兔子中不存在心臟毒性作用(值是平均值士SE，n=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>相對于對照，p<.05;+相對于化合物1和IIp<.05;前=治療前，后=治療后。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>在培育箱中5-10分鐘以有助于分散。添加10ml完全生長培養(yǎng)基，將其直接傾析于50ml試管中，然后在200Xg下離心10分鐘。通過將培養(yǎng)基直接傾析于50ml試管中并在200Xg下離心10分鐘來收集P388細(xì)胞。使小球(MCF-7和P388)再懸浮5ml中且通過使細(xì)胞緩慢通過安裝于注射器上的18g針擠出來分散細(xì)胞。使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)細(xì)胞并用培養(yǎng)基將其稀釋到150,000個(gè)細(xì)胞慮升。將經(jīng)稀釋細(xì)胞移液到96孔板中，濃度為15,000個(gè)細(xì)胞/孔，100^。覆蓋各板且在37。C下培育48小時(shí)。在細(xì)胞特異性無血清培養(yǎng)基中制備蒽環(huán)霉素和太平洋紫杉醇的稀釋液。向50pl等分試樣的所有孔中添加適當(dāng)濃度的藥物且使細(xì)胞在藥物(蒽環(huán)霉素/太平洋紫杉醇)存在下生長24小時(shí)。將氚化胸腺嘧啶(ICN)稀釋于無血清細(xì)胞特異性培養(yǎng)基中，濃度為1pCi/50^。用50ial含氖化胸腺嘧啶的培養(yǎng)基的等分試樣激發(fā)用于分析的所有孔。暴露于同位素4小時(shí)后，通過用去離子水低滲溶解細(xì)胞且使用布蘭德爾(Brandel)細(xì)胞收集器在華特門(Whatman)GF-C過濾器上收集細(xì)胞內(nèi)容物來測量DNA中的氚化胸腺嘧啶并入。在收集MCF-7細(xì)胞之前，抽吸培養(yǎng)基，向各孔中添加150^L0.25呢胰蛋白酶-EDTA以分離細(xì)胞。使過濾器干燥，將其放置在含有5ml閃爍混合物的7ml閃爍管中且在閃爍計(jì)數(shù)器中計(jì)數(shù)。在初步實(shí)驗(yàn)中，確定將對MCF-7細(xì)胞產(chǎn)生30%生長抑制的蒽環(huán)霉素的濃度(抑制性濃度30，IC30)和對P388細(xì)胞產(chǎn)生10%生長抑制的蒽環(huán)霉素的濃度(ICIO)。結(jié)果展示于表3和表4中。表3抑制MCF-7人類乳腺腫瘤細(xì)胞生長的阿霉素、道諾霉素和13-脫氧蒽環(huán)霉素的IC30IC30(nM)阿霉素(I)100化合物II450化合物in750道諾霉素(IV)750化合物v645化合物VI875表4抑制P38S鼠類白血病細(xì)胞生長的阿霉素、道諾霉素和13-脫氧蒽環(huán)霉素的IC10IC10(nM)阿霉素(I)250化合物II1100化合物in3500道諾霉素(IV)300化合物v700化合物VI1700單獨(dú)太平洋紫杉醇和在iC30濃度的阿霉素、道諾霉素或化合物n、ni、v或vi存在下太平洋紫杉醇抑制MCF-7細(xì)胞生長的劑量-反應(yīng)關(guān)系展示于圖l和2中。由這些劑量-反應(yīng)曲線，計(jì)算太平洋紫杉醇的IC50，且將其呈示于表5中。表5在IC30濃度的阿霉素、道諾霉素或13-脫氧蒽環(huán)霉素存在下太平洋紫杉醇抑制MCF-7人類乳腺腫瘤細(xì)胞生長的IC50(nM)。值是平均值+標(biāo)準(zhǔn)誤差，n=3太平洋紫杉醇的IC50(nM)太平洋紫杉醇221±8太平洋紫杉醇+阿霉素(I)78±6*太平洋紫杉醇+化合物IIll±9*'x太平洋紫杉醇+化合物IIIl±0*'x太平洋紫杉醇+道諾霉素(IV)0.6±0*'x太平洋紫杉醇+化合物v0.55±0*'x太平洋紫杉醇+化合物VI0.75*'x*相對于太平洋紫杉醇p<.05;x相對于太平洋紫杉醇+道諾霉素p<.05。阿霉素使太平洋紫杉醇的癌癥生長抑制效價(jià)產(chǎn)生2.8倍的增加?；衔颕I產(chǎn)生20倍增加且化合物III產(chǎn)生220倍增加。道諾霉素和化合物V和VI使太平洋紫杉醇的生長抑制效價(jià)產(chǎn)生295至400倍增加。與其它化合物相比，阿霉素是太平洋紫杉醇的癌癥生長抑制效價(jià)的相對較弱的增效劑。單獨(dú)太平洋紫杉醇和在IC10濃度的阿霉素、道諾霉素或化合物II、III、V或VI存在下太平洋紫杉醇抑制P388鼠類白血病細(xì)胞生長的劑量-反應(yīng)關(guān)系展示于圖3和4中。由這些劑量-反應(yīng)曲線，計(jì)算太平洋紫杉醇的IC60，且將其呈示于表6中。表6在IC10濃度的阿霉素、道諾霉素或13-脫氧蒽環(huán)霉素存在下太平洋紫杉醇抑制P388鼠類白血病細(xì)胞生長的IC50(nM)。值是平均值+標(biāo)準(zhǔn)誤差，n=3太平洋紫杉醇的IC50(nM)太平洋紫杉醇失活太平洋紫杉醇+阿霉素(I)16±0.58太平洋紫杉醇+化合物II16±0.50太平洋紫杉醇+化合物III20±0.67太平洋紫杉醇+道諾霉素(IV)916±83*太平洋紫杉醇+化合物V13±0太平洋紫杉醇+化合物VI14±0.83*相對于化合物1、II、IV、V和VI，p<.05。單獨(dú)太平洋紫杉醇針對P388細(xì)胞失活，從而不對生長產(chǎn)生抑制。然而，在蒽環(huán)霉素存在下，太平洋紫杉醇成為生長的有效抑制劑。在除道諾霉素以外的所有蒽環(huán)霉素存在下，太平洋紫杉醇的效價(jià)在低納摩爾濃度范圍內(nèi)，而道諾霉素的效價(jià)在高納摩爾濃度范圍內(nèi)。當(dāng)投與兩種藥物的組合的藥理學(xué)作用超過分開投與兩種藥物的疊加效應(yīng)時(shí)，發(fā)生增強(qiáng)效應(yīng)。舉例來說，假定第一種藥物產(chǎn)生30%反應(yīng)的劑量是100個(gè)單位且第二種藥物產(chǎn)生30%反應(yīng)的劑量是IO個(gè)單位。如果100個(gè)單位的第一種藥物加IO個(gè)單位的第二種藥物產(chǎn)生60%反應(yīng)，那么這兩種藥物之間存在疊加效應(yīng)。然而，如果100個(gè)單位的第一種藥物加10個(gè)單位的第二種藥物產(chǎn)生90%反應(yīng)，那么這兩種藥物之間存在協(xié)同或超疊加效應(yīng)。在僅抑制30%生長的濃度的具有本發(fā)明化學(xué)式的13-脫氧蒽環(huán)霉素存在下，對MCF7細(xì)胞不產(chǎn)生生長抑制效應(yīng)的濃度(1至50nM)的太平洋紫杉醇將產(chǎn)生50%至95%生長抑制。同樣地，在僅抑制10%生長的濃度的具有本揭示案化學(xué)式的13-脫氧蒽環(huán)霉素存在下，在高達(dá)2000nM的濃度下不對P388細(xì)胞產(chǎn)生生長抑制效應(yīng)的太平洋紫杉醇將產(chǎn)生65%至95%的生長抑制。因此，本揭示案的13-脫氧蒽環(huán)霉素與太平洋紫杉醇以增強(qiáng)方式或協(xié)同作用以產(chǎn)生對抑止癌細(xì)胞生長高度有效的組合物、組合、混合物或制劑。前述說明書局限于本揭示案的特定實(shí)施例。然而，將明顯看出，為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的某些或所有優(yōu)點(diǎn)且在不脫離本發(fā)明精神和范疇的情況下，所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員可對本揭示案的所揭示實(shí)施例進(jìn)行改動(dòng)和修改。舉例來說，在非癌性大鼠衍生的H9c2細(xì)胞中，太平洋紫杉醇的弱生長抑制性濃度(IC10)使13-脫氧阿霉素的IC50從700nM降低到400nM，使13-脫氧-5-亞氨基阿霉素的IC50從1500nM降低到210nM，但不降低阿霉素的IC50，其仍維持原來的210nM。因此，紫杉烷增加13-脫氧蒽環(huán)霉素的效價(jià)。對所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員來說顯而易見的臨床療法中通常所碰到的各種條件和參數(shù)的合適的修改和改編在本揭示案的范疇內(nèi)。前述說明書說明和描述本揭示案。另外，本揭示案僅展示和描述優(yōu)選實(shí)施例，但如以上所提及，應(yīng)了解，在本文中所表達(dá)的、與上述教示和/或相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)或知識(shí)相稱的本發(fā)明概念的范圍內(nèi)，本揭示案能夠在不同其它組合、修改和環(huán)境中使用且能夠變化或修改。上文所述的實(shí)施例進(jìn)一步打算解釋申請者已知的最佳實(shí)施方式且使得所屬領(lǐng)域的其它技術(shù)人員能夠以這些或其它實(shí)施例且以特定應(yīng)用和其用途所需的不同修改來利用本揭示案。因此，本說明書不打算將本發(fā)明局限于本文中所揭示的形式。同時(shí)，打算解釋附加權(quán)利要求書以包括替代實(shí)施例。在本說明書中所引用的所有公開案和專利申請案以引用的方式并入本文中，且在任何情況下，程度就如同各個(gè)別公開案或?qū)＠暾埌柑囟ú€(gè)別地以引用的方式并入一樣。權(quán)利要求1.一種抗癌組合物，其包含a)具有下式的13-脫氧蒽環(huán)霉素其中R1、R2和R3各自獨(dú)立地為H或OH；R4為H、OH、烷基或O-烷基；R5為O或NH；且R6為糖部分，其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽和其前藥；和b)紫杉烷。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述13-脫氧蒽環(huán)霉素選自由以下各物組成的群組13-脫氧阿霉素(13-deoxydoxorubicin)、13-脫氧道諾霉素(13-d飄ydau匿ubicin)、13-脫氧洋紅霉素(13-deoxycarminomycin)、13-脫氧表阿霉素(13-deoxyepirubicin)、13-脫氧伊達(dá)比星(13-deoxyidarubicin)、13-脫氧脂質(zhì)體蒽環(huán)霉素(13-deoxyannamycin)、13-脫氧氨柔比星(13-deoxyamrubicin)和其5-亞氨基類似物，且所述紫杉烷為太平洋紫杉醇或多烯紫杉醇(docetaxel)。3.—種醫(yī)藥組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物和醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑或賦形劑。4.一種醫(yī)藥組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物和醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑或賦形劑。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述糖部分為道諾糖胺(daunosamine)、表道諾糖胺(epidaunosamine)或鼠李糖烯(rhamnal)糖。6.—種治療癌癥的方法，其包含向有需要的哺乳動(dòng)物投與治療有效量的具有下式的13-脫氧蒽環(huán)霉素其中R卜R2和R3各自獨(dú)立地為H或OH;R4為H、OH、烷基或O-烷基；Rs為O或NH;且R6為糖部分；其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽和其前藥;和治療有效量的紫杉烷。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述糖部分為道諾糖胺、表道諾糖胺或鼠李糖烯糖。8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述13-脫氧蒽環(huán)霉素選自由以下各物組成的群組13-脫氧阿霉素、13-脫氧道諾霉素、13-脫氧洋紅霉素、13-脫氧表阿霉素、13-脫氧伊達(dá)比星、13-脫氧脂質(zhì)體蒽環(huán)霉素、13-脫氧氨柔比星和其5-亞氨基類似物，且所述紫杉烷為太平洋紫杉醇或多烯紫杉醇。9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述13-脫氧蒽環(huán)霉素和所述紫杉烷同時(shí)、以任一順序分開、以任一順序相繼或以任一順序連續(xù)投與以提供抗癌作用。全文摘要可同時(shí)、分開、相繼或連續(xù)向患者投與13-脫氧蒽環(huán)霉素和紫杉烷以產(chǎn)生治療抗癌作用，其中與僅投與等效量的任一化合物相比，毒性和副作用分布有所降低。也提供產(chǎn)生有效抗癌治療作用的13-脫氧蒽環(huán)霉素和紫杉烷的組合物或制劑。文檔編號(hào)A61K9/14GK101426509SQ200780014343公開日2009年5月6日申請日期2007年4月23日優(yōu)先權(quán)日2006年4月21日發(fā)明者杰拉爾德·M·沃爾什,理查德·D·奧爾森申請人:杰姆制藥公司