專利名稱：枳實(shí)總黃酮提取物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種中藥枳實(shí)的總黃酮提取物及制備方法、質(zhì)量控制方法及其在醫(yī)藥和保健食品領(lǐng)域的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
枳實(shí)為常用中藥，來(lái)源于蕓香科酸橙Citrus aurantium L.及其變種或甜橙Citrus sinensis Osbeck的干燥幼果。傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論認(rèn)為枳實(shí)具有破氣消積，化痰散痞的功效，用于積滯內(nèi)停，痞滿脹痛，瀉痢后重，大便不通，痰滯氣阻胸痹，結(jié)胸，胃下垂，脫肛，子宮脫垂?，F(xiàn)代藥理研究表明枳實(shí)具有增強(qiáng)心肌收縮力，減慢心率和增加心血輸出量，增加冠脈流量，增加腎血流量，改善末梢微循環(huán)，加強(qiáng)平滑肌的收縮強(qiáng)度和收縮持續(xù)時(shí)間，誘發(fā)肌條的節(jié)律性收縮活動(dòng)或加強(qiáng)原有自發(fā)性收縮肌條的收縮力及收縮頻率，以及一定程度的鎮(zhèn)痛和中樞抑制作用，臨床廣泛應(yīng)用于胃腸道疾病及心血管疾患方面的治療。枳實(shí)中主要含有黃酮類、生物堿類、揮發(fā)油類成分，藥理研究表明黃酮類成分為其主要活性成分。目前，僅見在發(fā)明專利號(hào)為200410077903.6的專利文獻(xiàn)中公開了枳實(shí)黃酮類有效部位的制備方法，但是該專利所公開的制備方法較為復(fù)雜，不利用工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。本發(fā)明專利采用大孔吸附樹脂分離富集技術(shù)制備枳實(shí)總黃酮提取物，方法簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便，利于工業(yè)生產(chǎn)，且枳實(shí)總黃酮提取物中黃酮含量較高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種枳實(shí)總黃酮提取物及其制備方法。
本發(fā)明提出的枳實(shí)總黃酮提取物，是從中藥枳實(shí)中提取的含有多種黃酮類活性成分的組合，其中主要化合物結(jié)構(gòu)如下


本發(fā)明所述原料枳實(shí)，來(lái)源于蕓香科植物酸橙及其變種或甜橙。作為提取枳實(shí)總黃酮的原材料，可以是這些植物的莖、葉、花穗、果實(shí)、地下根莖及根等任一部位或全部植株，其中優(yōu)選的藥材部位為這些植物的干燥幼果。上述所述的枳實(shí)包括未經(jīng)處理任何炮制的原藥材及飲片，還包括經(jīng)過各種炮制品，如麩炒枳實(shí)、燙枳實(shí)等。
本發(fā)明所述的枳實(shí)總黃酮提取物，是指從上述任一植物的任何部位提取得到的，包含多種黃酮類活性成分的組合物，其中優(yōu)選的是從Citrus aurantium L.干燥幼果中提取制備得到的，含有多種黃酮類活性成分的組合物。這些黃酮類成分主要包括柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷及其衍生物等。
作為枳實(shí)總黃酮提取物，其中各種黃酮類成分百分含量的總和為5～100％(w/w)，其中優(yōu)選的為50～100％(w/w)。
在本發(fā)明所述的枳實(shí)總黃酮提取物所涵蓋的各種黃酮類活性成分之中，最主要的是柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷、柚皮蕓香苷等成分。作為枳實(shí)總黃酮提取物，柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷三種成分的含量占全部總黃酮含量的5～100％(w/w)。
本發(fā)明所述的枳實(shí)總黃酮提取物，可以與某些堿(如氫氧化鈉、氫氧化鉀等)以及金屬鹽(如碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸鈣、醋酸鈉、醋酸鋅等)，形成金屬鹽類衍生物。這些衍生物具有與上述枳實(shí)總黃酮提取物相同或相近的藥理活性和用途。
本發(fā)明所述的枳實(shí)總黃酮提取物，還可以與鐵、鋁、鋅、銅、鋇、鉻、鍶等金屬離子形成金屬絡(luò)合物。這些金屬絡(luò)合物不僅具有與上述枳實(shí)總黃酮提取物相同或相近的藥理活性或用途，而且具有某些新用途。
本發(fā)明還提出了所述枳實(shí)總黃酮提取物的制備工藝，它可以采用以下任意一種方法，或這些方法的任意組合進(jìn)行制備(1)溶劑提取法；(2)溶劑萃取法；(3)大孔吸附樹脂法；(4)鉛鹽沉淀法；(5)超臨界流體萃取法；(6)柱色譜法；(7)液-液逆流分配色譜法。其中優(yōu)選的方法為大孔吸附樹脂法。
在使用這些方法進(jìn)行制備時(shí)，一般包括以下幾個(gè)步驟(1)提取所用溶劑可以是水或任意一種醇類、酮類及酯類溶劑，或這些溶劑按一定比例組成的混合溶劑，或由這些溶劑與酸、堿、鹽配成的酸性或堿性溶劑。提取方法可以是煎煮、加熱回流、超聲提取、冷浸、滲漉、微波提取、高壓提取等。
優(yōu)選的提取工藝為枳實(shí)藥材加0～90％乙醇，回流提取2～3次，每次提取1～2小時(shí)，溶劑用量為5～20倍量(L/kg)。
(2)過濾包括離心、抽濾、超濾、壓濾等方法，使用或不使用以下任意一種澄清劑或其組合醇沉劑，明膠，高嶺土，各種樹脂，聚乙二醇，聚乙三醇，殼聚糖以及天然澄清劑成品如101果汁澄清劑、ZTC+1天然澄清劑等。
(3)濃縮包括常壓或減壓條件下的薄膜蒸發(fā)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)及煎煮濃縮等。
(4)干燥包括真空干燥、噴霧干燥、冷凍干燥等。
當(dāng)采用溶劑萃取法進(jìn)行制備時(shí)，一般先將提取物混懸于水中，然后用低極性的酯類、烷烴類或醚類溶劑(如石油醚、乙醚、己烷、汽油、乙酸乙酯等)萃取除去脂溶性雜質(zhì)，然后用合適極性的溶劑，如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等，或是這些溶劑的混合物，萃取獲得其中的總黃酮類成分，得到總黃酮提取物。
當(dāng)采用大孔吸附樹脂法進(jìn)行制備時(shí)，所用的大孔樹脂可以是非極性、弱極性、中等極性、弱堿性或弱酸性等任意一種類型，如D101、D4020、HPD400、AB-8、S-8、HZ-806等，其中優(yōu)選的為弱極性或中等極性的樹脂，如AB-8、HPD400、D101等。所用的洗脫劑為水和含水的乙醇、甲醇、丙酮等，其中優(yōu)選的為0～100％的乙醇。
優(yōu)選的枳實(shí)黃酮提取物樹脂純化工藝為選用AB-8、HPD400等中等極性或弱極性大孔吸附樹脂作為純化用樹脂，枳實(shí)提取物上樣液稀釋倍數(shù)1∶5～15(以生藥量計(jì))，吸附流速2～5BV/h，樹脂柱徑高比1∶5～1∶10，上樣量為0.10～0.50g/mL(以生藥量計(jì))，0～20％乙醇洗脫1～4倍樹脂體積進(jìn)行除雜，除雜流速為2～5BV/h，用40～90％乙醇洗脫3～8倍樹脂體積，洗脫流速為3～9BV/h。
當(dāng)采用鉛鹽沉淀法進(jìn)行制備時(shí)，所用的鉛鹽試劑為醋酸鉛或堿式醋酸鉛，所用的脫鉛劑為H2S、磷酸鹽及硫酸鹽等。
當(dāng)采用超臨界流體萃取法進(jìn)行制備時(shí)，可以對(duì)枳實(shí)原材料直接進(jìn)行萃取，也可以對(duì)上述任一方法和步驟所獲得的產(chǎn)物進(jìn)行萃取。萃取時(shí)可以使用或不使用以下任一種類溶劑及溶劑混合物水、醇類、酮類及酯類溶劑。
當(dāng)采用柱色譜法進(jìn)行制備時(shí)，其處理的對(duì)象可以是上述提取步驟所獲得的產(chǎn)物，也可以是經(jīng)上述溶劑提取法、溶劑萃取法、大孔吸附樹脂法、鉛鹽沉淀法或超臨界流體萃取法初步純化后的產(chǎn)物。所用的固定相可以是硅膠、聚酰胺、氧化鋁、葡聚糖(Sephadex系列或Sephadex LH-20系列)、C-8、C-18、活性炭、纖維素等，所用的洗脫液因固定相的不同而不同，一般是由水、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、石油醚等組成的混合溶劑。
當(dāng)采用液-液逆流萃取法進(jìn)行制備時(shí)，其處理的對(duì)象可以是上述提取步驟的產(chǎn)物，也可以是經(jīng)上述溶劑萃取法、大孔吸附樹脂法、鉛鹽沉淀法或超臨界流體萃取法初步純化后的產(chǎn)物。一般先將提取物混懸于水中，然后用低極性的酯類、烷烴類或醚類溶劑(如石油醚、乙醚、己烷、汽油、乙酸乙酯等)萃取除去脂溶性雜質(zhì)，然后用合適極性的溶劑，如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等，或是這些溶劑的混合物，萃取獲得其中的總黃酮成分，得總黃酮提取物。
該提取物可以單獨(dú)或與其它任何中西藥物或食物按任意比例配伍，用于制備藥物或功能性食品，所制得的藥物或功能性食品可以是膠囊劑、片劑、丸劑、顆粒劑、口服液、糖漿、沖劑、酒劑、注射劑、膏劑、散劑、飲料等。
本發(fā)明質(zhì)量控制方法可包括以下含量測(cè)定方法中的一種或兩種1.總黃酮精密稱取新橙皮苷對(duì)照品適量(約3mg)，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。精密吸取新橙皮苷對(duì)照品溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，置具塞、帶刻度、裝有250mg鎂粉的試管中，加50％乙醇至4.5mL，將試管置于15℃水浴中，每隔兩分鐘滴加濃鹽酸0.2mL，并輕輕振搖，直至鎂粉完全反應(yīng)，用濃鹽酸定容至7mL，搖勻，放入37℃水浴中保溫一小時(shí)，取出冷卻。于564nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以新橙皮苷對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
精密稱取枳實(shí)總黃酮提取物樣品各3份，每份3mg，置10mL量瓶中，加50％乙醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取上述樣品溶液2.0mL，新橙皮苷對(duì)照品溶液0.2mL、0.8mL，置具塞、帶刻度、裝有250mg鎂粉的試管中，加50％乙醇至4.5mL，將試管置于15℃水浴中，每隔兩分鐘滴加濃鹽酸0.2mL，并輕輕振搖，直至鎂粉完全反應(yīng)，用濃鹽酸定容至7mL，搖勻，放入37℃水浴中保溫一小時(shí)，取出冷卻。于564nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量。
2.柚皮苷、橙皮苷及新橙皮苷色譜條件色譜柱Hypersil C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相乙腈-0.1％磷酸水溶液(18∶82)；流速1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)280nm；柱溫室溫。
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制分別精密吸取柚皮苷對(duì)照品溶液(濃度為0.291μg/μL)、橙皮苷對(duì)照品溶液(濃度為0.0136μg/μL)、新橙皮苷對(duì)照品溶液(濃度為0.238μg/μL)0、2、4、6、8、10μL注入液相色譜儀，測(cè)定各色譜峰峰面積，以對(duì)照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，色譜峰峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
含量測(cè)定精密稱取3批枳實(shí)總黃酮提取物樣品各3份，每份約6mg，置10mL量瓶中，加70％乙醇超聲溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密吸取上述供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定各色譜峰峰面積，外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算含量。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1枳實(shí)總黃酮提取物制備工藝取枳實(shí)飲片1kg，加水10L回流提取3次，每次提取2小時(shí)，減壓回收溶劑。上樣稀釋倍數(shù)為1∶10(以生藥量計(jì))，通過5L AB-8大孔吸附樹脂，吸附流速3BV/h，樹脂柱徑高比為1∶8，上樣量為0.2g/mL(以生藥量計(jì))，水洗脫3倍樹脂體積進(jìn)行除雜，除雜流速為3BV/h，50％乙醇洗脫5倍樹脂體積，洗脫流速為5BV/h，收集50％乙醇洗脫液，回收溶劑，減壓干燥，即為枳實(shí)總黃酮提取物。測(cè)定枳實(shí)總黃酮提取物中總黃酮含量為74％，其中柚皮苷、新橙皮苷和橙皮苷三種成分的含量占總黃酮含量的63％。
實(shí)施例2枳實(shí)總黃酮提取物制備工藝取枳實(shí)飲片5kg，30％乙醇15L，回流提取2次，每次提取2小時(shí)，回收溶劑，提取物加水分散溶解，使上樣液稀釋倍數(shù)為1∶8(以生藥量計(jì))，通過5L AB-8大孔吸附樹脂，吸附流速2BV/h，樹脂柱徑高比為1∶7，上樣量為0.1g/mL(以生藥量計(jì))，10％乙醇洗脫3倍樹脂體積進(jìn)行除雜，除雜流速為2BV/h，70％乙醇洗脫7倍樹脂體積，洗脫流速為5BV/h，收集70％乙醇洗脫液，回收溶劑，減壓干燥，即為枳實(shí)總黃酮提取物。測(cè)定枳實(shí)總黃酮提取物中總黃酮含量為70％，其中柚皮苷、新橙皮苷和橙皮苷三種成分的含量占總黃酮含量的60％。
實(shí)施例3枳實(shí)總黃酮提取物制備工藝取枳實(shí)飲片10kg，加50％乙醇12L回流提取3次，每次提取1.5小時(shí)，回收溶劑，提取物加水分散溶解，使上樣液稀釋倍數(shù)為1∶6(以生藥量計(jì))，通過7L AB-8大孔吸附樹脂，吸附流速4BV/h，樹脂柱徑高比為1∶6，上樣量為0.3g/mL(以生藥量計(jì))，20％乙醇洗脫2倍樹脂體積進(jìn)行除雜，除雜流速為2BV/h，90％乙醇洗脫4倍樹脂體積，洗脫流速為4BV/h，收集90％乙醇洗脫液，回收溶劑，減壓干燥，即為枳實(shí)總黃酮提取物。測(cè)定枳實(shí)總黃酮提取物中總黃酮含量為80％，其中柚皮苷、新橙皮苷和橙皮苷三種成分的含量占總黃酮含量的72％。
實(shí)施例4枳實(shí)總黃酮提取物制備工藝取枳實(shí)飲片10kg，加70％乙醇20L回流提取2次，每次提取2小時(shí)，回收溶劑至無(wú)醇味，加水稀釋，使上樣液稀釋倍數(shù)為1∶5(以總色原酮量計(jì))，通過4L AB-8大孔吸附樹脂，吸附流速2BV/h，樹脂柱徑高比為1∶9，上樣量為0.4g/mL(以生藥量計(jì))，水洗脫4倍樹脂體積進(jìn)行除雜，除雜流速為4BV/h，90％乙醇洗脫4倍樹脂體積，洗脫流速為3BV/h，收集90％乙醇洗脫液，回收溶劑，減壓干燥，即為枳實(shí)總黃酮提取物，測(cè)定枳實(shí)總黃酮提取物中總黃酮含量為70％，其中柚皮苷、新橙皮苷和橙皮苷三種成分的含量占總黃酮含量的55％。
實(shí)施例5枳實(shí)總黃酮片的制備枳實(shí)總黃酮提取物100g淀粉100g上述組分混合均勻，加滑石粉適量，壓制成1000片。
實(shí)施例6枳實(shí)總黃酮復(fù)方制劑的制備枳實(shí)總黃酮提取物50g防風(fēng)醇提取物50g白芍總苷提取物 100g白術(shù)細(xì)粉(100目) 300g上述組分混合均勻，裝入硬明膠膠囊中，共2000粒膠囊。
權(quán)利要求
1.一種枳實(shí)總黃酮提取物，其特征在于該提取物由中藥枳實(shí)中提取獲得，并含有以下黃酮類成分柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷、柚皮蕓香苷及其衍生物。
2.如權(quán)利要求1所述的枳實(shí)總黃酮提取物，其特征在于枳實(shí)為市售枳實(shí)飲片或蕓香科植物酸橙及其變種或甜橙任一種植物的全部植株或任何部位，如根、根莖、莖、葉、花穗、果實(shí)等，還包括經(jīng)過炮制的各種炮制品，如麩炒枳實(shí)、燙枳實(shí)等。
3.如權(quán)利要求1所述的枳實(shí)總黃酮提取物，其特征在于上述總黃酮類成分含量總和以重量計(jì)為5～100％。
4.如權(quán)利要求3所述的枳實(shí)總黃酮提取物，其特征在于各黃酮類成分中柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷三種成分的含量占總黃酮含量以重量計(jì)為5～100％。
5.如權(quán)利要求1所述的枳實(shí)總黃酮提取物，其特征在于上述黃酮類成分，還包括與堿和鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鋅鹽等金屬鹽形成的金屬鹽類衍生物以及與鐵、鋁、鋅、銅、鋇、鉻、鍶等金屬離子形成的金屬離子絡(luò)合物。
6.如權(quán)利要求1～5所述的枳實(shí)總黃酮提取物，其特征在于采用溶劑提取法、溶劑萃取法、大孔吸附樹脂法、鉛鹽沉淀法、超臨界流體萃取法、柱色譜法、液-液逆流分配色譜法等任意一種方法，或這些方法的任意組合進(jìn)行制備。
7.如權(quán)利要求6所述的枳實(shí)總黃酮提取物制備方法，其特征在于，在使用這些方法進(jìn)行制備時(shí)，包括以下一個(gè)或幾個(gè)步驟提取所用溶劑可以是水或任意一種醇類、酮類及酯類溶劑，或這些溶劑按一定比例組成的混合溶劑，或由這些溶劑與酸、堿、鹽配成的酸性或堿性溶劑；提取方法可以是煎煮、加熱回流、超聲提取、冷浸、滲漉、微波提取、高壓提取等；過濾包括離心、抽濾、超濾、壓濾等方法，使用或不使用以下任一種澄清劑或其組合醇沉劑，明膠，高嶺土，各種樹脂，聚乙二醇，聚乙三醇，殼聚糖以及天然澄清劑成品如101果汁澄清劑、ZTC+1天然澄清劑等；濃縮包括常壓或減壓條件下的薄膜蒸發(fā)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)及煎煮濃縮等；干燥包括真空干燥、噴霧干燥、冷凍干燥等。
8.如權(quán)利要求6所述的枳實(shí)總黃酮提取物制備方法，其特征在于當(dāng)使用大孔吸附樹脂法時(shí)，所用的大孔樹脂可以是非極性、弱極性、中等極性、弱堿性或弱酸性等任何一種類型，如D101、D4020、HPD400、AB-8、S-8、HZ-806等，其中優(yōu)選的為弱極性或中等極性的樹脂，如AB-8、HPD400、D101等，所用的洗脫劑為水和含水的乙醇、甲醇、丙酮等。
9.如權(quán)利要求8所述的枳實(shí)總黃酮提取物制備方法，其特征在于選用AB-8、HPD400等中等極性或弱極性大孔吸附樹脂作為純化用樹脂，枳實(shí)提取物上樣液稀釋倍數(shù)1∶5～15(以生藥量計(jì))，吸附流速2～5BV/h，樹脂柱徑高比1∶5～1∶10，上樣量為0.1～0.5g/mL(以生藥量計(jì))，0～20％乙醇洗脫1～4倍樹脂體積進(jìn)行除雜，除雜流速為2～5BV/h，用40～90％乙醇洗脫3～8倍樹脂體積，洗脫流速為3～9BV/h。
10.如權(quán)利要求1、5所述的提取物的應(yīng)用，其特征在于，該提取物可以單獨(dú)或與其它任何中西藥物或食物按任意比例配伍，用于制備藥物或功能性食品，所制得的藥物或功能性食品可以是膠囊劑、片劑、丸劑、顆粒劑、口服液、糖漿、沖劑、酒劑、注射劑、膏劑、散劑、飲料等。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從中藥枳實(shí)中提取得到的總黃酮提取物及其制備方法。該提取物主要包括柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷、柚皮蕓香苷及其衍生物等。該提取物可由溶劑提取法、溶劑萃取法、大孔吸附樹脂法、鉛鹽沉淀法、超臨界流體萃取法、柱色譜法、液－液逆流分配色譜法等任意一種方法，或這些方法的任意組合制備獲得。所制得的枳實(shí)總黃酮提取物中各種黃酮類成分百分含量的總和為5～100％(w/w)，其中柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷三種成分的含量占總黃酮含量的5～100％(w/w)。
文檔編號(hào)A61P9/10GK101062165SQ200710111229
公開日2007年10月31日 申請(qǐng)日期2007年6月18日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月18日
發(fā)明者石任兵, 劉斌, 李軍, 董志濱 申請(qǐng)人:石任兵, 劉斌