專利名稱：一種Tc－99m標(biāo)記的苯并噻唑苯胺類化合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種Tc-99m標(biāo)記的化合物，特別是一種Tc-99m標(biāo)記的苯并噻唑苯胺類化合物，及其制備方法和該化合物在阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)診斷中作為β-淀粉樣斑塊顯像劑的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一種在老年期發(fā)生的以癡呆為主要特征的神經(jīng)元退行性疾病。其主要臨床表現(xiàn)為進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙和記憶力衰退，性格和行為改變，判斷力下降，社交障礙，生活自理能力喪失，最終死亡，嚴(yán)重危害著老年人的身體健康和生活質(zhì)量。
據(jù)估計(jì)該病癥在＞65歲的人群中，發(fā)病率為8-10％；在＞75歲的人群中，發(fā)病率為25％；而在＞95歲的人群中，發(fā)病率高達(dá)50％。目前全世界約有2500萬人受到AD的影響(Mathis，Wang&Klunk，Cur.Pharm.Des.，2004，101469-1492.)，在發(fā)達(dá)國家，AD已經(jīng)成為繼心臟病、腫瘤、中風(fēng)之后的第四大殺手。中國目前約有500萬AD患者(程五鳳，老年醫(yī)學(xué)與保健，2004，1074-76.)。
目前AD的診斷還存在著很大的困難，死后尸檢腦內(nèi)的老年斑和神經(jīng)纖維纏結(jié)是唯一的確認(rèn)方法(Mirra，Heyman，McKeel，Sumi，Crain，Brownlee，Vogel，Hughes，van Belle & Berg，Neurology，1991，41479-486.)。研究無創(chuàng)傷的AD顯像劑成為當(dāng)前的迫切需要，可以為AD的診斷以及尋找有效的AD治療方法提供強(qiáng)有力的工具。從目前的發(fā)展情況來看，正電子類型的斑塊顯像劑的發(fā)展相對比較成熟，單光子的斑塊顯像劑，特別是Tc-99m標(biāo)記的斑塊顯像劑亟待解決。
剛果紅(Congo Red，CR)是一種常用的AD腦組織切片中斑塊的偶氮類染料，同時(shí)，它對神經(jīng)纖維纏結(jié)也能染色。1922年Bennhold(Bennhold，Munchen Med.Wochnschr 1922，691537-1538.)就用CR對Aβ斑塊進(jìn)行染色，1962年P(guān)uchtler等人(Puchtler，Sweat & Levine，J.Histochem.Cytochem.，1962，10355-364.)進(jìn)一步發(fā)展了該方法。1996年Han等人(Han，Cho&Lansbury，J.Am.Chem.Soc.，1996，1184506-4507.)首次嘗試對CR的類似物與異腈配體進(jìn)行了混配Tc-99m標(biāo)記，但這類化合物很難穿過血腦屏障(BBB)。1999年，Zhen等人(Zhen，Han，Anguiano，Lemere，Cho&Lansbury，J.Med.Chem.，1999，422805-2815.)通過單胺單酰胺(MAMA)雙功能連接劑對CR進(jìn)行了Tc-99m標(biāo)記，雖然該化合物配位中心為中性，但脂溶性太低，脂水分配系數(shù)P只有0.12，且分子量超過1000，同樣面臨無法穿過BBB的問題。
對于剛果紅類顯像劑，目前主要問題依然在于無法或很難穿過完整BBB。另外CR類化合物在體內(nèi)代謝產(chǎn)物聯(lián)苯二胺具有致癌活性，雖然放射性顯像劑最終用于人體的量很少，但這也是該類顯像劑的一個不利因素。柯胺-G類顯像劑同樣也存在著難以穿過正常BBB的問題。
Zhang等人(Zhuang，Kung，Hou & Kung，J.Label.Compd.Radiopharm.，2005，48S251.)采用PEG偶連二苯乙烯和Tc-99m配位核心，其中之一的化合物在體外與Tg2576轉(zhuǎn)基因小鼠腦切片具有親和性，注射后2min腦攝取在1.79±0.20％ID/g organ。Zhuang等人(Zhuang，Kung，Hou，Ploessl & Kung，Nucl.Med.Biol.，2005，32171-184.)報(bào)道將聯(lián)苯類化合物進(jìn)行Tc-99m標(biāo)記。
從目前Aβ斑塊顯像劑發(fā)展情況來看，無法或很難穿過血腦屏障是制約Tc-99m顯像劑發(fā)展的最主要問題。由于剛果紅和柯胺-G類的配體本身就很難穿過BBB，所以不適合用于Tc-99m標(biāo)記，基于硫磺素的小分子，如苯并噻唑苯胺類，二苯乙烯等，分子體積小，脂溶性高，修飾的空間大，更適合于Tc-99m的標(biāo)記。苯并噻唑苯胺類化合物是目前研究較多的、親和性較好的一類化合物，目前較為成功的例子是C-11標(biāo)記的PIB。但目前用Tc-99m標(biāo)記的苯并噻唑苯胺類化合物顯像劑不多，已有的少數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果并不理想，配合物腦攝取很低或者對Aβ斑塊沒有親和性(Tzanopoulou，Patsis，Sagnou，Pirmettis，Papadopoulos& Pelecanou，Technetium，Rhenium and Other Metals in Chemistry and Nuclear Medicine，2006，7103-104；Vanderghinste，Eeckhoudt&Cleynhens，Technetium，Rhenium and Other Metals inChemistry and Nuclear Medicine，2002，6463-465.)。

發(fā)明內(nèi)容
在上述背景下，本發(fā)明的目的在于提供一種具有更高腦攝取、靈敏度和選擇性的Tc-99m標(biāo)記的苯并噻唑苯胺類化合物，為AD的臨床診斷提供更有效的顯像劑。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下本發(fā)明提供一種Tc-99m標(biāo)記的苯并噻唑苯胺類化合物，具有如下結(jié)構(gòu)式 其中，n取1～5，R1和R2為H或CH3，R3為 或 所述的R3優(yōu)選為(I)或(II)。
本發(fā)明還提供3種制備上述Tc-99m標(biāo)記的苯并噻唑苯胺類化合物的方法。
方法1包括以下步驟
1)將按照現(xiàn)有技術(shù)合成的結(jié)構(gòu)式為 的化合物1與(CH2)nBr2進(jìn)行縮合反應(yīng)，得到結(jié)構(gòu)式為 的化合物2；其中，n取1～5；2)先將步驟1)制得的化合物2和化合物MAMA-MBz進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，得到結(jié)構(gòu)式為 的化合物3，然后將化合物3的硝基用氯化亞錫還原，得到結(jié)構(gòu)式為 的化合物4，再將化合物4脫巰基的保護(hù)基，得到結(jié)構(gòu)式為 的化合物5；3)在新制的99mTc-GH中加入步驟2)最終制得的化合物的乙醇溶液，調(diào)節(jié)pH＝5.5，加入40％99mTc-GH體積的乙醇，反應(yīng)混合物在100℃加熱30min，冷卻后用飽和碳酸氫鈉溶液中和，用二氯甲烷萃取。
上述方法1的步驟2)可以是將所述的化合物4進(jìn)一步用碘甲烷將氨基甲基化，得到結(jié)構(gòu)式為 或 的化合物4’，然后再將化合物4’脫巰基的保護(hù)基，得到結(jié)構(gòu)式為 或 的化合物5’。
方法2包括以下步驟1)按照上述方法1的方法得到化合物4后，進(jìn)一步將化合物4的酰胺基團(tuán)用硼烷還原，得到結(jié)構(gòu)式為 的化合物7；然后再將化合物7脫掉巰基的保護(hù)基，得到結(jié)構(gòu)式為 的化合物8；
2)按照方法1的步驟3)標(biāo)記本方法步驟1)最終制備的化合物。
上述方法2所述的步驟2)還可以是將按照方法1的方法制備的化合物4’的酰胺基團(tuán)用硼烷還原，得到結(jié)構(gòu)式為 或 的化合物7’；然后再將化合物7’脫掉巰基的保護(hù)基，得到結(jié)構(gòu)式為 或 的化合物8’。
方法3包括以下步驟1)將按照方法1制備的化合物2與結(jié)構(gòu)式為 的化合物10在堿性條件下縮合，得到結(jié)構(gòu)式為 的化合物11；然后將化合物11用氯化亞錫還原成結(jié)構(gòu)式為 的化合物12；其中，所述化合物10是用2-氨基甲基吡啶和溴乙酸乙酯縮合制得的；2)將化合物12的乙腈溶液與[99mTc(CO)3(H2O)3]+的溶液混合后80～90℃加熱30min，冷卻后，用二氯甲烷萃取。
上述方法3的步驟2)還可以是將所述化合物12進(jìn)一步用碘甲烷將氨基甲基化，得到結(jié)構(gòu)式為 或 的化合物12’。
本發(fā)明還提供一種上述Tc-99m標(biāo)記的苯并噻唑苯胺類化合物作為β-淀粉樣斑塊顯像劑的應(yīng)用。
上述Tc-99m標(biāo)記的苯并噻唑苯胺類化合物作為β-淀粉樣斑塊顯像劑的應(yīng)用，是在阿爾茨海默病的診斷領(lǐng)域的應(yīng)用。
本發(fā)明的化合物基于苯并噻唑苯胺的骨架，通過6位的羥基采用一定長度的碳鏈進(jìn)行偶連螯合配體，得到的配體經(jīng)過Tc-99m的標(biāo)記得到上述化合物。上述化合物在小鼠體內(nèi)具有很高的初始腦攝取和一定的腦清除。上述化合物的相應(yīng)Re的配合物與轉(zhuǎn)基因小鼠和AD病人腦內(nèi)的Aβ沉積選擇性的結(jié)合，具有很高的靈敏度和選擇性。上述化合物是有潛力的Aβ斑塊顯像劑，可能用于AD的臨床診斷。
使用方法將本發(fā)明的化合物以可檢測量引入組織或患者，在充分的時(shí)間之后化合物與淀粉樣沉積物發(fā)生結(jié)合，無創(chuàng)傷的采用SPECT技術(shù)檢測患者內(nèi)的標(biāo)記化合物。顯像的結(jié)果可以對腦內(nèi)的淀粉樣沉積物進(jìn)行定位和定量，以診斷或跟蹤患者的阿爾茨海默病的發(fā)展。
效果實(shí)驗(yàn)與數(shù)據(jù)1.小鼠體內(nèi)生物分布實(shí)驗(yàn)將0.1ml的本發(fā)明實(shí)施例1的化合物從尾靜脈注入到雌性ICR小鼠(18～22g)體內(nèi)。小鼠在注射后不同的時(shí)間點(diǎn)斷頸處死。臟器被剖出并測量濕重，臟器內(nèi)的放射性經(jīng)自動γ計(jì)數(shù)器(Wizard 1470)測定。每個臟器內(nèi)的放射性百分劑量通過比較適度稀釋的注射劑量計(jì)算，數(shù)據(jù)表示為每克臟器中放射性百分劑量(％ID/g organ)。結(jié)果見表1。
表1本發(fā)明實(shí)施例1的化合物的小鼠腦攝取與現(xiàn)有其他類化合物對比

從表中可以看出，本發(fā)明化合物的初始腦攝取很高，注射后2min達(dá)到0.62％ID/organ，該數(shù)值對于Tc-99m標(biāo)記的腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)的顯像劑是一個很高的數(shù)值。目前唯一成功用于臨床的Tc-99m標(biāo)記的腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)顯像劑[99mTc]TRODAT-1的小鼠的初始腦攝取為0.43％ID/organ(2min)。化合物在注射后60min后的腦攝取降為2min的一半，具有一定腦清除速度?；衔镏饕ㄟ^肝臟系統(tǒng)代謝。
2.轉(zhuǎn)基因小鼠腦切片熒光染色觀察熒光染色分別配制實(shí)施例1和3所制備的化合物的相應(yīng)的Re化合物的溶液，將5μm的12個月齡雄性轉(zhuǎn)基因小鼠的腦切片依次經(jīng)過3×20min的二甲苯脫石蠟，然后依次經(jīng)過2×5min的100％的乙醇，2×5min的95％的乙醇，5min的80％的乙醇和5min的70％的乙醇洗滌，流水沖洗10min后，至于10mM的PBS(pH＝7.6)中。將APP轉(zhuǎn)基因小鼠的腦切片分別浸于ThS(0.0125％，40％乙醇溶液)和本發(fā)明的兩個化合物的溶液中10min；切片經(jīng)過50％的乙醇洗滌、快速分化后，采用熒光顯微鏡觀察。結(jié)果見附圖1A、B、C。
圖1B與圖1A相比較可見本發(fā)明實(shí)施例1的化合物能夠與ThS一樣對Aβ斑塊有選擇性的結(jié)合，結(jié)合的斑塊處發(fā)出明顯的熒光，清晰可辨；與本底其他組織幾乎沒有結(jié)合，靶/非靶對比明顯。
圖1C與圖1A相比較可見本發(fā)明實(shí)施例3的化合物能夠與ThS一樣對Aβ斑塊有選擇性的結(jié)合，結(jié)合的斑塊處發(fā)出明顯的熒光，清晰可辨；與本底其他組織幾乎沒有結(jié)合，靶/非靶對比明顯。
所以，從組織切片染色圖片中可以看出，本發(fā)明的化合物與Aβ斑塊有選擇性的結(jié)合，且有較高的靈敏度。
3.AD人腦切片熒光染色觀察熒光染色分別配制實(shí)施例1所制備的化合物的相應(yīng)的Re化合物的溶液，將5μm的AD人腦的切片依次經(jīng)過3×20min的二甲苯脫石蠟，然后依次經(jīng)過2×5min的100％的乙醇，2×5min的95％的乙醇，5min的80％的乙醇和5min的70％的乙醇洗滌，流水沖洗10min后，至于10mM的PBS(pH＝7.6)中。將AD人腦的切片浸于本發(fā)明的化合物的溶液中10min；切片經(jīng)過50％的乙醇洗滌、快速分化后，采用熒光顯微鏡觀察。結(jié)果見附圖2。
從附圖2中可以看出本發(fā)明實(shí)施例1的化合物與人腦中的Aβ斑塊有選擇性的結(jié)合，且與不同大小斑塊均具有高強(qiáng)度的結(jié)合，具有很高的靈敏度。
上述實(shí)驗(yàn)觀察說明本發(fā)明中的化合物具有很高的腦攝取，同時(shí)化合物具有很高的靈敏度和選擇性，具有臨床應(yīng)用的潛力。


圖1.A是標(biāo)準(zhǔn)品ThS熒光標(biāo)記轉(zhuǎn)基因小鼠的大腦皮層區(qū)Aβ斑塊。
圖1.B是本發(fā)明實(shí)施例1的化合物的相應(yīng)錸化合物的選擇性熒光染色轉(zhuǎn)基因小鼠的Aβ斑塊。
圖1.C是本發(fā)明實(shí)施例3的化合物的相應(yīng)錸化合物選擇性熒光染色轉(zhuǎn)基因小鼠的Aβ斑塊。
圖2.是本發(fā)明實(shí)施例1的化合物的相應(yīng)錸化合物選擇性熒光染色AD人腦的Aβ斑塊。
具體實(shí)施例方式
以下實(shí)施例用來體現(xiàn)本發(fā)明化合物及其制備方法的具體實(shí)施方式
，但本發(fā)明的實(shí)施方式不局限于下列實(shí)施例。
實(shí)施例中所用化學(xué)試劑均購自化學(xué)品試劑公司。
實(shí)施例1當(dāng)R1和R2均為H，R3為I，n取5時(shí)，本發(fā)明的化合物結(jié)構(gòu)式為 該化合物按照下述方法制備1)按照參考文獻(xiàn)C.A.Mathis，Y.Wang，D.P.Holt et al.J.Med.Chem.2003，462740-2754的方法合成化合物 v具體方法如下a)將25g對硝基苯甲酸(0.15mol)加入40ml氯化亞砜中，混合物加熱回流約25h。冷卻后析出大量淡黃色針狀晶體，旋干溶劑，得到27.49g對硝基苯甲酰氯，產(chǎn)率約98％，紅外譜圖與標(biāo)準(zhǔn)譜圖完全一致，未進(jìn)一步純化，直接用于下一步反應(yīng)。IR3109，1760，1605，1528，1349，1319，1195，1173，1113，1011，889，869，838，706，691，634 cm-1。
b)將18.3g對甲氧基苯胺(0.15mmol)溶于100ml干燥的吡啶中，加入27g對硝基苯甲酰氯(0.15mmol)的150ml吡啶溶液，N2氣保護(hù)下加熱回流，3h后有沉淀析出。停止加熱，將反應(yīng)液倒入500ml水中，抽濾，濾餅依次用水、5％的碳酸氫鈉溶液、水洗滌。自然風(fēng)干得到結(jié)構(gòu)式為 的化合物的黃色固體36.04g，產(chǎn)率為89％。IR3297，1645，1599，1532，1515，1348，1323，1249，1105，1028，829，705 cm-1.1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ8.36(d，J＝8.6Hz，2H)，8.16(d，J＝8.4Hz，2H)，7.67(d，J＝8.5Hz，2H)，6.95(d，J＝8.8Hz，2H)，3.75(s，3H).EI-MS272.31；calcd272.08。
c)將20g化合物 (73.5mmol)和17.8g Lawesson試劑(44mmol)溶于80ml氯苯。混合物在130-140℃油浴中加熱，所得棕紅色溶液繼續(xù)加熱回流4-5h，冷卻至室溫，抽濾得到大量 的橙紅色固體17.7g，產(chǎn)率為83％。重復(fù)該實(shí)驗(yàn)得更多產(chǎn)品。IR3164，1608，1593，1519，1508，1347，1253cm-1.1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ8.29(d，J＝8.8Hz，2H)，7.98(d，J＝8.8Hz，2H)，7.77(d，J＝7.0Hz，2H)，7.01(d，J＝6.4Hz，2H)，3.79(s，3H).EI-MS288.24；calcd288.06。
d)將2ml乙醇加入13.6g化合物 47.2mmol)中，然后加入50ml的30％的氫氧化鈉溶液(8倍當(dāng)量)，再在該棕紅色的溶液中加入100ml水稀釋。將該150ml的混合液分30次間隔一分鐘加入到80-90℃的200ml鐵氰化鉀溶液(62g，4倍當(dāng)量)中。反應(yīng)體系維持80-90℃約30min。冷卻后析出大量沉淀，過濾，用大量水洗滌，自然風(fēng)干，得到粗產(chǎn)品12.7g。采用正己烷-乙酸乙酯(6∶1)作為淋洗劑，硅膠柱色譜分離，產(chǎn)物溶解性較差，結(jié)合在四氫呋喃內(nèi)重結(jié)晶，得到 的淡黃色針狀晶體，產(chǎn)率為32％。重復(fù)該實(shí)驗(yàn)得更多產(chǎn)品。IR1594，1552，1517，1476，1460，1436，1343，1315，1266，1220，1066，1030，968，849cm-1.1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ8.39(d，J＝8.2Hz，2H)，8.30(d，J＝8.4Hz，2H)，8.03(d，J＝8.9Hz，1H)，7.79(s，1H)，7.20(d，J＝8.1Hz，1H)，3.88(s，3H).EI-MS286.06；calcd286.04.Anal.Calcd for C14H10N2O3SC，58.73；H，3.52，N，9.78；FoundC，58.20；H，3.77，N，9.80。
e)將4.6g化合物 (16mmol)加入150ml干燥的二氯甲烷中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下冷卻到-70℃，混合物中逐滴滴加40ml的三溴化硼的二氯甲烷溶液(1M)，歷時(shí)1h。在-70℃下持續(xù)攪拌1h后緩慢升至室溫反應(yīng)過夜，用1M的鹽酸溶液淬滅反應(yīng)，加飽和碳酸氫鈉溶液中和?；旌弦河?×50ml的乙酸乙酯萃取，萃取時(shí)加入40ml二甲亞砜，合并有機(jī)相，無水硫酸鎂干燥過夜。濃縮至溶劑僅剩余二甲亞砜時(shí)，加入80ml水，析出大量沉淀，抽濾，干燥得到4.1g 的桔紅色固體，產(chǎn)率為94％。IR3447，1592，1519，1459，1342，1281，1238，1225，854cm-1.1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ8.38(d，J＝8.8Hz，2H)，8.27(d，J＝8.8Hz，2H)，7.95(d，J＝8.8Hz，1H)，7.49(d，J＝2.4Hz 1H)，7.07(dd，J1＝8.8Hz，J2＝2.4Hz，1H)，2.55(s，6H).EI-MS272.27；calcd272.03。
2)將2.0g步驟1)制備的化合物溶于10ml干燥的乙腈中，加入3.21g 1，5-二溴戊烷和無水碳酸鉀，反應(yīng)混合物在80～90℃加熱回流。旋干乙腈，混合物加入水，用二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，無水硫酸鎂干燥。濃縮至少量溶劑時(shí)加入大量正己烷研制，析出大量亮黃色固體，得到2.47g結(jié)構(gòu)式為 的化合物的亮黃色固體(IR2942，1594，1553，1519，1445，1344，1315，1268，1218，848cm-1.1H-NMR(500 MHz，CDCl3)δ8.37(d，J＝8.8Hz，2H)，8.25(d，J＝8.7Hz，2H)，8.03(d，J＝8.9Hz，1H)，7.40(d，J＝2.4Hz，1H)，7.17(dd，J1＝9.0 Hz，J2＝2.4Hz，1H)，4.10(t，J＝6.3Hz，2H)，3.49(t，J＝6.7Hz，2H)，2.00(p，J＝7.3Hz，2H)，1.90(p，J＝6.3Hz，2H)，1.71(m，2H))。
3)將840mg步驟2)制備的化合物和1.3g化合物MAMA-MBz溶于8ml干燥的乙腈中，加入DIEA。80℃加熱反應(yīng)。旋蒸除掉溶劑，殘余物加入水，用二氯甲烷萃取。合并有機(jī)相，濃縮濾液。采用硅膠柱色譜分離，得到956mg結(jié)構(gòu)式為 的化合物的黃色固體(IR3353，2934，2826，1679，1609，1594，1553，1516，1454，1344，1316，1302，1252，1219，1176，1107，1029，847，751，687cm-1.1H-NMR(500 MHz，CDCl3)δ8.36(d，J＝8.7Hz，2H)，8.22(d，J＝8.7Hz，2H)，8.00(d，J＝9.0Hz，1H)，7.83(s，1H)，7.38(d，J＝2.0Hz，1H)，7.22(d，J＝8.3Hz，4H)，7.15(dd，J1＝9.0Hz，J2＝2.2Hz，1H)，6.84(t，J＝8.4Hz，4H)，4.05(t，J＝6.2Hz，2H)，3.80(s，3H)，3.78(s，3H)，3.67(s，4H)，3.45(q，J＝6.1Hz，2H)，3.08(s，2H)，2.68 (m，2H)，2.57 (t，J＝6.4Hz，2H)，2.54 (m，4H)，1.85 (m，2H)，1.52(m，4H))；將965mg化合物 加入到40ml乙醇和乙酸乙酯的混合溶液中，加入1.67g氯化亞錫，回流8h，停止加熱，旋蒸除掉有機(jī)溶劑，殘余物用乙酸乙酯和氫氧化鈉溶液提取，合并有機(jī)相。濃縮，采用硅膠柱色譜分離，收集得到650mg結(jié)構(gòu)式為 的淡黃色油狀化合物(IR3447，3342，2933，1731，1665，1606，1511，1489，1455，1302，1284，1248，1176，1033，831.1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ7.75(d，J＝8.6Hz，1H)，7.68(d，J＝7.5Hz，2H)，7.54(s，1H)，7.18(t，J＝8.5Hz，4H)，7.01(d，J＝7.5Hz，1H)，6.82(t，J＝7.5Hz，4H)，6.65(d，2H)，3.99(t，2H)，3.69(s，3H)，3.68(s，3H)，3.65(s，2H)，3.63(s，2H)，3.25(t，2H)，2.96(s，2H)，2.64(m，2H)，2.45(m，6H)，1.71(m，2H)，1.40(m，4H))；將95.7mg化合物 冷卻到0℃，依次加入80mg苯甲醚，0.4ml甲烷磺酸和1ml三氟乙酸，反應(yīng)混合物在0℃下攪拌20min后于室溫下攪拌1h。旋蒸除去大部分溶劑，殘余物中加入冰水，用乙醚萃取三次。水相用飽和碳酸氫鈉溶液中和后用二氯甲烷-甲醇混合液萃取，合并有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥過夜，抽濾，濃縮得到47.2mg結(jié)構(gòu)式為 的化合物的淡黃色油狀物。
4)將0.5ml新制的99mTc-GH中加入0.1ml步驟3)最終制備得到的化合物的乙醇溶液，調(diào)節(jié)pH＝5.5，加入200μL的乙醇。反應(yīng)混合物在100℃加熱30min，冷卻后用飽和碳酸氫鈉溶液中和，用1ml二氯甲烷萃取制得本發(fā)明的化合物，結(jié)構(gòu)式為 實(shí)施例2當(dāng)R1和R2為H，R3為II，n取5時(shí)，本發(fā)明的化合物結(jié)構(gòu)式為
該化合物按照下述方法制備1)將600mg實(shí)施例1中結(jié)構(gòu)式為 的化合物溶于20ml干燥的四氫呋喃溶液，滴加硼烷的四氫呋喃溶液3ml，加熱回流過夜，冷卻到室溫后加入水破壞未反應(yīng)的硼烷，除去溶劑，加入10ml 10％的鹽酸溶液，加熱回流1小時(shí)，冷卻到室溫，用氨水中和至pH值10.0，用二氯甲烷/甲醇(9∶1)萃取，有機(jī)相干燥，濃縮采用制備薄層色譜板分離(二氯甲烷/甲醇(9∶1))得到80mg結(jié)構(gòu)式為 的化合物；2)采用與上述實(shí)施例1相同的脫保護(hù)和標(biāo)記的方法，將化合物 制備成化合物 實(shí)施例3當(dāng)R1和R2為H，R3為III，n取5時(shí)，本發(fā)明的化合物結(jié)構(gòu)式為 該化合物按照下述方法制備1)按照實(shí)施例1的方法制備化合物 2)將18.11mg 2-氨基甲基吡啶溶于100ml干燥的四氫呋喃中，冰浴至0℃，滴加入溴乙酸乙酯的100ml無水四氫呋喃溶液。0℃下反應(yīng)30min后室溫?cái)嚢?8h。濾除白色沉淀，旋蒸除去有機(jī)溶劑，殘余淡黃色液體，減壓蒸餾得到9.0g化合物 的淡黃色液體(IR3332，2981，1739，1591，1570，1474，1434，1367，1199，1149，1097，1048，1028，995，759cm-1.1H-NMR(500 MHz，CDCl3)δ8.51(d，J＝2.3Hz，1H)，7.59(t，J＝7.5Hz，1H)，7.27(s，1H)，7.11(t，J＝5.9Hz，1H)，4.14(q，J＝7.1Hz，2H)，3.89(s，2H)，3.42(s，2H)，2.42(s，1H)，1.22(t，J＝7.1Hz，3H))。
3)將500mg步驟1)制備的 和840mg步驟2)制備的 溶于15ml干燥的乙腈中，加入400mg DIEA。反應(yīng)混合液在80℃加熱攪拌30h，旋蒸除掉溶劑，殘余物加入60ml水中，用二氯甲烷萃取。合并有機(jī)相，無水硫酸鎂干燥過夜，過濾，濃縮濾液。采用硅膠柱色譜分離，得到368mg化合物 的黃色固體(IR2939，2863，1737，1594，1553，15119，1475，1454，1435，1314，1267，1217，1185，849，751，687cm-1)；將300mg所得化合物加入到10ml乙醇和乙酸乙酯的混合溶液中，加入氯化亞錫，回流8h，停止加熱，旋蒸除掉有機(jī)溶劑，殘余物用乙酸乙酯和氫氧化鈉溶液提取，合并有機(jī)相。濃縮，采用硅膠柱色譜分離，收集得到650mg結(jié)構(gòu)式為 的淡黃色油狀化合物。
4)將0.1ml步驟3)制得的化合物的乙腈溶液與0.1ml[99mTc(CO)3(H2O)3]+的溶液混合后80～90℃加熱30min，冷卻后，用1ml二氯甲烷萃取，制得本發(fā)明的化合物，結(jié)構(gòu)式為
實(shí)施例4.
當(dāng)R1和R2為H，R3為III，n取3時(shí)，本發(fā)明的化合物結(jié)構(gòu)式為 該化合物按照下述方法制備1)將2.0g按照實(shí)施例1的方法制備的化合物 溶于10ml干燥的乙腈中，加入3.0g 1，3-二溴戊烷和1.52g無水碳酸鉀，反應(yīng)混合物在80～90℃加熱回流，棕紅色的初始反應(yīng)物最后變?yōu)榈S色。旋干乙腈，混合物加入60ml水，用二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，無水硫酸鎂干燥過夜。濃縮加入大量正己烷，析出大量亮黃色固體，抽濾，得到黃色固體。采用石油醚-乙酸乙酯為展開劑，硅膠柱色譜分離后，四氫呋喃中重結(jié)晶得到1.75g化合物 的亮黃色固體(IR1594，1553，1519，1477，1454， 1343，1313，1266，1214，1107，848cm-1.1H-NMR(500 MHz，CDCl3)δ8.36(d，J＝8.8Hz，2H)，8.24(d，J＝8.7Hz，2H)，8.03(d，J＝9.0Hz，1H)，7.43(d，J＝2.4Hz，1H)，7.18(dd，J1＝9.0Hz，J2＝2.5Hz，1H)，4.24(t，J＝5.8Hz，2H)，3.68(t，J＝6.3Hz，2H)，2.41(p，J＝6.0Hz，2H))。
2)將1.75g上述步驟1)制備的化合物 和1.4g按照實(shí)施例3)步驟2)制備的化合物 溶于20ml干燥的DMSO中，加入0.863gDIEA和少量KI。反應(yīng)混合液在N2氣保護(hù)下，80℃加熱回流，冷卻后將反應(yīng)混合物倒入水中，用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥過夜，采用石油醚-乙酸乙酯作為淋洗劑，硅膠柱色譜分離，得到350mg化合物 的黃色固體(IR3440，2930，2850，1730，1592，1555，1522，1476，1452，1345，1313，1266，1215，1188，1056，1028，851，754，687cm-1.1H-NMR(500 MHz，CDCl3)δ8.53(d，J＝4.3Hz，1H)，8.36(d，J＝8.7Hz，2H)，8.23(d，J＝8.7Hz，2H)，8.00(d，J＝8.9Hz，1H)，7.59(t，1H)，7.54(s，1H)，7.36(d，J＝2.3Hz，1H)，7.15(t，J＝5.6Hz，1H)，7.07(dd，J1＝9.0Hz，J2＝2.3Hz，1H)，4.20(q，J＝7.2Hz，2H)，4.13(t，J＝6.1Hz，2H)，3.51(s，2H)，2.95(t，J＝6.4Hz，2H)，2.05(p，J＝6.4Hz，2H)，1.30 (t，J＝7.1Hz，2H))；將300mg化合物 加入到10ml乙醇和乙酸乙酯的混合溶液中，加入氯化亞錫，回流8h，停止加熱，旋蒸除掉有機(jī)溶劑，殘余物用乙酸乙酯和氫氧化鈉溶液提取，合并有機(jī)相。濃縮，采用硅膠柱色譜分離，收集得到100mg結(jié)構(gòu)式為 的化合物。
3)將0.1mg上述步驟2)制得的化合物的乙腈溶液與[99mTc(CO)3(H2O)3]+的溶液混合后80～90℃加熱30min，冷卻后，用1ml二氯甲烷萃取，制得本發(fā)明的化合物，結(jié)構(gòu)式為
權(quán)利要求
1.一種Tc-99m標(biāo)記的苯并噻唑苯胺類化合物，具有如下結(jié)構(gòu)式 其中，n取1～5，R1和R2為H或CH3，R3為 或
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Tc-99m標(biāo)記的苯并噻唑苯胺類化合物，其特征在于所述的R3為 或
3.一種制備權(quán)利要求1所述Tc-99m標(biāo)記的苯并噻唑苯胺類化合物的方法，包括以下步驟1)將合成的結(jié)構(gòu)式為 的化合物1與(CH2)nBr2進(jìn)行縮合反應(yīng)，得到結(jié)構(gòu)式為 的化合物2；其中，n取1～5；2)先將步驟1)制得的化合物2和化合物MAMA-MBz進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，得到結(jié)構(gòu)式為 的化合物3，然后將化合物3的硝基用氯化亞錫還原，得到結(jié)構(gòu)式為 的化合物4，再將化合物4脫巰基的保護(hù)基，得到結(jié)構(gòu)式為 的化合物5；3)在新制的99mTc-GH中加入步驟2)最終制得的化合物的乙醇溶液，調(diào)節(jié)pH＝5.5，加入40％99mTc-GH體積的乙醇，反應(yīng)混合物在100℃加熱30min，冷卻后用飽和碳酸氫鈉溶液中和，用二氯甲烷萃取。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備一種Tc-99m標(biāo)記的苯并噻唑苯胺類化合物的方法，其特征在于步驟2)是將所述的化合物4用碘甲烷將氨基甲基化，得到結(jié)構(gòu)式為 或 的化合物4’，然后再將化合物4’脫巰基的保護(hù)基，得到結(jié)構(gòu)式為 的化合物5’。
5.一種制備權(quán)利要求1所述Tc-99m標(biāo)記的苯并噻唑苯胺類化合物的方法，包括以下步驟1)將合成的結(jié)構(gòu)式為 的化合物1與(CH2)nBr2進(jìn)行縮合反應(yīng)，得到結(jié)構(gòu)式為 的化合物2；其中，n取1～5；2)先將步驟1)制得的化合物2和化合物MAMA-MBz進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，得到結(jié)構(gòu)式為 的化合物3，然后將化合物3的硝基用氯化亞錫還原，得到結(jié)構(gòu)式為 的化合物4，再將化合物4的酰胺基團(tuán)用硼烷還原，得到結(jié)構(gòu)式為 的化合物7；然后再將化合物7脫掉巰基的保擴(kuò)基，得到結(jié)構(gòu)式為 的化合物8；3)在新制的99mTc-GH中加入步驟2)最終制得的化合物的乙醇溶液，調(diào)節(jié)pH＝5.5，加入40％99mTc-GH體積的乙醇，反應(yīng)混合物在100℃加熱30min，冷卻后用飽和碳酸氫鈉溶液中和，用二氯甲烷萃取。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備一種Tc-99m標(biāo)記的苯并噻唑苯胺類化合物的方法，其特征在于所述步驟2)是將所述化合物4用碘甲烷將氨基甲基化，得到結(jié)構(gòu)式為 或 的化合物4’；然后再將化合物4’的酰胺基團(tuán)用硼烷還原，得到結(jié)構(gòu)式為 或 的化合物7’，再將化合物7’脫掉巰基的保護(hù)基，得到結(jié)構(gòu)式為 或 的化合物8’。
7.一種制備權(quán)利要求1所述的Tc-99m標(biāo)記的苯并噻唑苯胺類化合物的方法，包括以下步驟1)將合成的結(jié)構(gòu)式為 的化合物1與(CH2)nBr2進(jìn)行縮合反應(yīng)，得到結(jié)構(gòu)式為 的化合物2；其中，n取1～5；2)先將步驟1)制備的化合物2和結(jié)構(gòu)式為 的化合物10在堿性條件下縮合，得到結(jié)構(gòu)式為 的化合物11；然后將化合物11用氯化亞錫還原成結(jié)構(gòu)式為 的化合物12；其中，所述化合物10是用2-氨基甲基吡啶和溴乙酸乙酯縮合制得的；3)將步驟2)最終制得的化合物的乙腈溶液與[99mTc(CO)3(H2O)3]+的溶液混合后80～90℃加熱30min，冷卻后，用二氯甲烷萃取。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備一種Tc-99m標(biāo)記的苯并噻唑苯胺類化合物的方法，其特征在于所述步驟2)是將所述化合物12用碘甲烷將氨基甲基化，得到結(jié)構(gòu)式為 或 的化合物12’。
9.一種權(quán)利要求1所述的Tc-99m標(biāo)記的苯并噻唑苯胺類化合物作為β-淀粉樣斑塊顯像劑的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的Tc-99m標(biāo)記的苯并噻唑苯胺類化合物作為β-淀粉樣斑塊顯像劑的應(yīng)用，其特征在于所述的應(yīng)用是在阿爾茨海默病的診斷領(lǐng)域的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供一種Tc－99m標(biāo)記的苯并噻唑苯胺類化合物，具有如下結(jié)構(gòu)式，其中，n取1～5，R
文檔編號A61P25/28GK101020698SQ200710086619
公開日2007年8月22日 申請日期2007年3月27日 優(yōu)先權(quán)日2007年3月27日
發(fā)明者陳祥紀(jì), 劉伯里 申請人:北京師范大學(xué)