專利名稱：艾塞那肽凍干制劑制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
技術(shù)背景生物大分子藥物包括多肽、蛋白質(zhì)、抗體等，目前主要用于治療腫瘤、艾滋 病、心腦血管病、糖尿病等重大疾病，是21世紀(jì)藥物研究開發(fā)中最有前景的領(lǐng)域之一。Exendin-4是由美國西南部的希拉毒蜥唾液腺中分泌的一種多肽，能激活處 于休眠狀態(tài)的消化系統(tǒng)，刺激胰腺分泌胰島素，使食物得到消化吸收。它還能抑 制能夠使血糖升高的胰高糖素的釋放，從而達(dá)到降糖效果。艾塞那肽(Exenatide) 是含39個(gè)氨基酸的多肽，是Exendin-4的人工合成品。艾塞那肽與人的胰高血糖 素(glucagon)有48%的同源性，與人的GLP-1(胰高血糖素樣肽一1)有53X的同 源性。GLP-1是一種由腸胃分泌的腸促胰高血糖素激素，當(dāng)人們攝取食物之后， 胃腸道就會(huì)分泌出GLP-l進(jìn)而刺激胰島p細(xì)胞分泌胰島素。艾塞那肽可以和胰島卩 細(xì)胞上的GLP-1受體作用，并且其結(jié)合力是GLP-l的2.5倍(Kdi.l36nM)。有文獻(xiàn) 報(bào)道其在降低血糖作用效應(yīng)方面是GLP-1的5530倍，而且其降糖作用的持續(xù)時(shí)間 也要比GLP-1更長。美國Amylin公司和禮來公司共同開發(fā)的糖尿病藥物艾塞那肽 (商品名Byetta，化學(xué)名Exenatide)于2005年4月28日獲得美國食品和藥品管理局 批準(zhǔn)上市。生物大分子藥物對反應(yīng)物的選擇性及藥效作用具有其他藥物無法比擬的高 效性，但生物大分子藥物結(jié)構(gòu)復(fù)雜，容易發(fā)生結(jié)構(gòu)變化，造成活性降低、免疫原 性增強(qiáng)。并且，生物大分子藥物存在多晶型、多構(gòu)象、多尺度和聚集態(tài)復(fù)雜性等問題，限制了其生物活性穩(wěn)定性及其使用效率。有資料顯示，艾塞那肽存在分子間相互作用，動(dòng)態(tài)光譜數(shù)據(jù)證實(shí)艾塞那肽存 在單體和聚集體之間的平衡。蛋白質(zhì)或多肽的聚集，特別是高聚體的產(chǎn)生將導(dǎo)致 分子量增大，易出現(xiàn)沉淀，而活性單體形式相應(yīng)減少。pH值及溫度的變化、溶 劑的更換，均會(huì)導(dǎo)致聚集體的產(chǎn)生及數(shù)量的變化。分子排阻色譜法(Sizs-Exclusion chromatogrphy， SEC)研究結(jié)果表明，艾塞那肽水溶液中含有5%-25%的四聚體， 另外其Byetta液體制劑有在制備、儲(chǔ)藏和使用過程中水解的現(xiàn)象，運(yùn)輸不方便、 放置和貯藏穩(wěn)定性不好。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供一種艾塞那肽凍干制劑制備方法，以解決艾塞那肽高聚 體的產(chǎn)生導(dǎo)致分子量增大、易出現(xiàn)沉淀、而使活性單體形式相應(yīng)減少，和在制備、 儲(chǔ)藏和使用過程中的水解、放置和貯藏穩(wěn)定性不好的問題。本發(fā)明采取的技術(shù)方案是用注射用水將處方量的艾塞那肽和輔料溶解，除菌除熱源處理，將該溶液加熱至25-55。C，保持10-60分鐘，自然冷卻至室溫后按照凍干工藝進(jìn)行冷凍干燥。 本發(fā)明一種實(shí)施方案是，凍干前的加熱步驟中，加熱溫度為40-45°C，加熱 時(shí)間為25-30分鐘。本發(fā)明一種實(shí)施方案是，艾塞那肽凍干制劑中的艾塞那肽90%以上為單體形 式，無高聚體(n》4)形式。本發(fā)明一種實(shí)施方案是，艾塞那肽凍干制劑中的艾塞那肽98%以上為單體形 式，無高聚體(n》4)形式。本發(fā)明一種實(shí)施方案是，艾塞那肽凍干制劑包含主藥艾塞那肽及輔料，輔料 包括凍干支撐劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、pH調(diào)節(jié)劑和抑菌劑等。本發(fā)明一種實(shí)施方案是，凍干支撐劑包括1.0%-10%的甘氨酸、甘露醇、葡萄糖、蔗糖、乳糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和多元醇及其組合物。 本發(fā)明一種實(shí)施方案是，凍干支撐劑為1.0%-5%的甘露醇和蔗糖。 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于處方中加入適宜的凍干保護(hù)劑，凍干前先將艾塞那肽及輔料水溶液進(jìn)行加熱處理，凍干后能夠保留艾塞那肽的原有生物活性，且活性單體形式可達(dá)98%以上，無四聚體及更大的聚集體。其凍干粉劑白色細(xì)膩、疏松不塌陷粘連，穩(wěn)定性好，易水化。與液體制劑相比，運(yùn)輸方便安全，放置和貯藏穩(wěn)定性更好，能夠有效降低多肽藥物的水解。


圖1是實(shí)施例中凍干前艾塞那肽溶液中聚集體情況； 圖2是實(shí)施例中艾塞那肽凍干制劑中聚集體情況。 色譜條件① 儀器Agilent 1100型高效液相色譜儀(四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、紫外檢測 器)，② 色譜柱ShodexPROTEINKW-802.5 (8x300mm， 5pm)，③ 流動(dòng)相水(用三氟乙酸調(diào)pH至3.0)-乙腈(95:5)為流動(dòng)相，④ 流速0.8ml/min，⑤ 柱溫25°C，⑥ 檢測波長220nm。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例h準(zhǔn)確稱取5g甘露醇，溶于500ml注射用水中，用0.1MH3PO4調(diào)pH值為4.5，活性炭吸附法除熱源。稱量艾塞那肽粉末溶于上述溶液中，過無菌濾膜， 調(diào)整艾塞那肽濃度為50pg/ml。取該溶液適量，分子排阻色譜法對溶液中艾塞那 肽聚集體情況進(jìn)行測定，見圖l;將溶液于40'C水浴加熱30 min，冷卻至室溫后分裝于無菌西林瓶中，0.5 m1/ 瓶。按照凍干工藝條件，在10 Pa-15 Pa真空壓力下，-30匸下進(jìn)行冷凍干燥， 控制水分含量《3%，充氮，壓塞，軋蓋，得艾塞那肽凍干制劑。取艾塞那肽凍干 制劑1瓶，用0.5 ml注射用水溶解，分子排阻色譜法對凍干制劑中艾塞那肽聚集 體情況進(jìn)行測定，見圖2。按上述方法制備的艾塞那肽凍干制劑為白色餅狀或粉末狀、質(zhì)地細(xì)膩、疏松 不塌陷粘連，穩(wěn)定性好，易水化。分子排阻色譜測定結(jié)果表明凍干前艾塞那肽溶 液中單體形式占約74% (保留時(shí)間16.181 min)，四聚體占21% (保留時(shí)間9.728 min);本方法制備的艾塞那肽凍干制劑中活性單體形式可保持在98%以上(保 留時(shí)間16.064min),無四聚體。實(shí)施例2:準(zhǔn)確稱取5g甘露醇，溶于500ml注射用水中，用0.1MH3PO4調(diào)pH值為 4.5，活性炭吸附法除熱源。稱量艾塞那肽粉末溶于上述溶液中，過無菌濾膜， 調(diào)整艾塞那肽濃度為50 pg/ml;將溶液于25'C水浴加熱60min，冷卻至室溫后分裝于無菌西林瓶中，0.5 m1/ 瓶。按照凍干工藝條件，在10Pa-15Pa真空壓力下，-45°0下進(jìn)行冷凍干燥， 控制水分含量《3%,充氮，壓塞，軋蓋，得艾塞那肽凍干制劑。實(shí)施例3:準(zhǔn)確稱取5g甘露醇，溶于500ml注射用水中，用0.1 MH3P04調(diào)pH值為 4.5，活性炭吸附法除熱源。稱量艾塞那肽粉末溶于上述溶液中，過無菌濾膜， 調(diào)整艾塞那肽濃度為50 pg/ml;將溶液于42r:水浴加熱27min，冷卻至室溫后分裝于無菌西林瓶中，0.5 m1/ 瓶。按照凍干工藝條件，在10Pa-15Pa真空壓力下，-3(TC下進(jìn)行冷凍干燥， 控制水分含量《3%，充氮，壓塞，軋蓋，得艾塞那肽凍千制劑。實(shí)施例4:準(zhǔn)確稱取5g甘露醇，溶于500ml注射用水中，用0.1 MH3P04調(diào)pH值為 4.5，活性炭吸附法除熱源。稱量艾塞那肽粉末溶于上述溶液中，過無菌濾膜， 調(diào)整艾塞那肽濃度為50 pg/ml;將溶液于45。C水浴加熱30min，冷卻至室溫后分裝于無菌西林瓶中，0.5 m1/ 瓶。按照凍干工藝條件，在10Pa-15Pa真空壓力下，-25卩下進(jìn)行冷凍干燥， 控制水分含量《3%，充氮，壓塞，軋蓋，得艾塞那肽凍干制劑。實(shí)施例5:準(zhǔn)確稱取5g甘露醇，溶于500ml注射用水中，用0.1 MH3P04調(diào)pH值為 4.5，活性炭吸附法除熱源。稱量艾塞那肽粉末溶于上述溶液中，過無菌濾膜， 調(diào)整艾塞那肽濃度為50 pg/ml;將溶液于55'C水浴加熱10min，冷卻至室溫后分裝于無菌西林瓶中，0.5 m1/ 瓶。按照凍千工藝條件，在10Pa-15Pa真空壓力下，-35'C下進(jìn)行冷凍干燥， 控制水分含量《3%，充氮，壓塞，軋蓋，得艾塞那肽凍干制劑。
權(quán)利要求
1. 一種艾塞那肽凍干制劑制備方法，用注射用水將處方量的艾塞那肽和輔料溶解，除菌除熱源處理，其特征是將該溶液加熱至25-55℃，保持10-60分鐘，自然冷卻至室溫后按照凍干工藝進(jìn)行冷凍干燥。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的艾塞那肽凍干制劑制備方法，其特征是凍干前 的加熱步驟中，加熱溫度為40-45"C，加熱時(shí)間為25-30分鐘。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的艾塞那肽凍干制劑制備方法，其特征是艾塞那 肽凍干制劑中的艾塞那肽90%以上為單體形式，無高聚體(n》4)形式。
4 、根據(jù)權(quán)利要求3所述的艾塞那肽凍干制劑制備方法，其特征是艾塞那 肽凍干制劑中的艾塞那肽98%以上為單體形式，無高聚體(n^4)形式。
5 、根據(jù)權(quán)利要求l所述的艾塞那肽凍干制劑制備方法，其特征是艾塞那 肽凍干制劑包含主藥艾塞那肽及輔料，輔料包括凍干支撐劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、pH 調(diào)節(jié)劑和抑菌劑等。
6、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的艾塞那肽凍干制劑制備方法，其特征是凍干支 撐劑包括1.0%-10%的甘氨酸、甘露醇、葡萄糖、蔗糖、乳糖、聚乙烯吡咯烷酮、 聚乙二醇和多元醇及其組合物。
7、 根據(jù)權(quán)利要求6所述的艾塞那肽凍干制劑制備方法，其特征是凍干支 撐劑為1.0%-5%的甘露醇和蔗糖。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種艾塞那肽凍干制劑及其制備方法，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。主要解決艾塞那肽原料及現(xiàn)有制劑中除單體外還含有一定比例多聚體的問題。其方案是用注射用水將處方量的艾塞那肽和輔料溶解，除菌除熱源處理，將溶液加熱至40-45℃，保持25-30分鐘，自然冷卻至室溫后按照凍干工藝進(jìn)行冷凍干燥，制成艾塞那肽凍干制劑。本發(fā)明能使制劑中98％艾塞那肽以單體形式存在，從而增加了藥物的穩(wěn)定性和有效性。另外，本發(fā)明為凍干制劑，與液體制劑相比運(yùn)輸方便安全、放置和貯藏穩(wěn)定性更好，能夠有效降低多肽藥物的水解。
文檔編號(hào)A61K47/10GK101264319SQ20071005540
公開日2008年9月17日 申請日期2007年3月14日 優(yōu)先權(quán)日2007年3月14日
發(fā)明者于佳一, 慧 曹, 王麗鳳, 董慶光, 妍 陳 申請人:長春百克生物科技有限公司