專利名稱：：一種從葛花中提取總異黃酮的方法及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種從植物中提取藥用化學(xué)成份的領(lǐng)域，更具體涉及一種從葛花中提取總異黃酮的方法，提取的總異黃酮適用于酒精性肝病的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
：在快節(jié)奏的現(xiàn)代社會中，生活、競爭及越來越復(fù)雜的人際關(guān)系使得人們承受的擔(dān)子沉重，人們不健康的飲食生活方式，如長期的飲酒和酗酒是造成亞健康的重要原因。隨著我國酗酒和酒精中毒者日益增多，酒精性肝病包括酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、肝硬化患者也日益增多。這已嚴重影響了人們的身體健康和家庭、社會的穩(wěn)定。造成以上各型病理的原因在于飲酒后攝人體內(nèi)的乙醇90%以上在肝內(nèi)分解代謝，肝細胞的乙醇脫氫酶可把乙醇氧化為乙醛，再通過乙醛脫氫酶轉(zhuǎn)化為乙酸，最終代謝為二氧化碳和水，而上述過程中產(chǎn)生的大量氫離子可把氧化型輔酶(NAD)轉(zhuǎn)變?yōu)檫€原型輔酶(NADH)，后者又可把丙酮酸還原為乳酸，因此乙醇的代謝使得正常的肝臟氧化一還原狀態(tài)失調(diào)。NADH可使脂肪酸的氧化減少，合成增多，促進了甘油三酯的形成，使其在肝細胞內(nèi)堆積而形成酒精性脂肪肝。大量飲酒可使乙醛明顯增多，而乙醛為高活性化合物，對肝細胞有多種毒性，可促進肝細胞的變性、壞死和炎癥細胞浸潤.而形成酒精性肝炎。因此，研究開發(fā)解酒及防治酒精性肝病的新藥具有巨大的市場前景。目前對酒精性肝病并無特效藥、有些對脂肪肝有效的西藥本身對肝臟有一定的損害，市場上流行的是解酒保肝類保健品，不能起到有效的治療作用。葛花為豆科植物野葛和干葛藤的干燥花，為衛(wèi)生部中藥材標準所收載。具有"解酒毒、清濕熱"之功效，"用于酒毒煩渴，濕熱便血"。性味"甘、平"?！吨兴幋筠o典》中也有收載"葛花，甘、平。解酒止渴。用于酒醉煩渴"。葛花在《神農(nóng)本草經(jīng)》、《醫(yī)藥大全》、《東醫(yī)寶典疑難病篇》、《本草綱目》等都稱其"解酒醒脾"。民間歷史素有"千杯不醉葛藤花"之說。葛花單服和復(fù)方服用治療"傷酒"、"酒癖"在我國古代和民間早有應(yīng)用。如葛花單服解酒毒、葛花湯、葛花解酒湯治療酒疽、酒精性肝病等。經(jīng)文獻檢索，葛花中的異黃酮類化合物具有強烈的消除活性氧作用，這對預(yù)防和治療酒精性肝病是有益的。但目前未見以葛花總異黃酮(特別是總異黃酮》50%)的提取物為主要原料治療酒精性肝病的口服制劑上市。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是在于提供了一種從葛花中提取總異黃酮的方法，此方法易行，操作簡便，成本低廉，提取物收率高，在提取物中總異黃酮的含量為50-90%，其中鳶尾甘含量為20-90%。本發(fā)明的另一個目的是在于從葛花中提取的總異黃酮在制備治療或預(yù)防酒精性肝病的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的一種從葛花中提取總異黃酮的方法，其步驟如下a.在葛花中加入醇濃度為1080%含水醇溶液熱回流提取14次，每次含水醇溶液用量為葛花重量的630倍，每次回流時間0.52小時，濾過，合并濾液，減壓(一0.02一0.09Mpa)回收至無醇味，溫度控制在(5090°C)，得到葛花提取液。b.在葛花提取液中加入為葛花重量410倍的水或者醇溶液，其中用的醇溶液醇濃度為1060%，濾過，得濾液。c.濾液經(jīng)填充有吸附材料的吸附柱，選用的吸附材料為聚酰胺、大孔吸附樹脂或硅膠中的任一種。d.洗脫前或選用體積為吸附材料48倍的水淋洗吸附柱至流出液為無色。e.用含2070%的醇溶液洗脫，洗脫液用量為吸附材料的410倍，收集洗脫液。f.減壓(一0.02一0.09Mpa)回收溶劑，溫度控制在(509(TC)，得稠膏，稠膏經(jīng)干燥后得含葛花總異黃酮5090%的提取物，其中鳶尾甘含量為20-90%。將所得提取物的干膏采用常規(guī)粉碎或固體分散技術(shù)或超微粉碎，得不同粒徑所述的醇溶液中所用的醇優(yōu)選為乙醇或甲醇中的一種。所述大孔樹脂的型號為AB-8、SP-70、DlOl、DM-130、S-8、D3520、D4020其中的一種。本發(fā)明中所制備的葛花提取物，加入適量的輔料(如淀粉、糊精、微晶纖維素、乳糖、低取代羥丙纖維素、辛基十二垸醇、甘露醇等)，制備成用于預(yù)防和治療酒精性肝病的口服制劑，包括片劑(素片、糖衣片、薄膜衣片、分散片、咀嚼片)、膠囊劑(硬膠囊、軟膠囊)、顆粒劑、滴丸。本發(fā)明所制備的提取物的藥效學(xué)研究1.葛花提取物對小鼠急性酒精肝預(yù)防作用取昆明種小鼠60只，雌雄各半，隨機分為6組，每組10只，即溶媒對照組、模型對照組、葛花提取物低、中和高劑量組以及硫普羅寧組。溶媒對照組和模型對照組均灌胃給予0.5%CMC;葛花提取物低、中和高劑量組灌胃給予葛花提取物，劑量分別為2.5、5和10g生藥/kg;硫普羅寧組灌胃給予硫普羅寧，劑量為200mg/kg。連續(xù)7天。末次給藥l小時后，除溶媒對照組灌胃給予蒸餾水外，其余各組動物均灌胃給予40%(V/V)乙醇，給藥體積均為0.2ml/10g。給40%(V/V)乙醇后開始計時，記錄小鼠翻正反射消失即醉酒動物個數(shù)、小鼠耐受酒精時間(從給酒精到翻正反射消失)和醉酒時間(從翻正反射消失到翻正反射重新開始止)。同時，12小時后每組動物眼眶采血，檢測血清中GPT和GOT含量。結(jié)果顯示葛花提取物低、中和高劑量組能顯著性降低小鼠急性酒精肝血清中GPT含量，能顯著性減少醉倒的動物，增加動物耐受酒精的時間，降低動物醉酒時間；葛花提取物高劑量組能顯著性降低小鼠急性酒精肝血清中GOT含量。結(jié)果見表12。表l葛花提取物對小鼠急性酒精肝的預(yù)防作用(S土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>葛花提取物中劑量組5g/kg1041士8※126±30葛花提取物高劑量組10g/kg1040士10※121±17《硫普羅寧組200mg/kg1050±10131±16※p<0.05※※p<0.001均與模型對照組比較表2葛花提取物對小鼠耐受酒精時間和醉酒時間的影響(x土51，n=10)組另U齊廿量醉倒動物數(shù)耐(只)受時間(min)醉酒時間(min)溶媒對照組/00土0※※模型對照組/913±8281±43葛花提取物低劑量組2.5g/kg722±8《231±39《葛花提取物中劑量組5g/kg529士14※223±33《葛花提取物高劑量組10g/kg233±1嚴205土37※※硫普羅寧組200mg/kg429±10《222±39《※p<0.05※※p<0.001均與模型對照組比較2.葛花提取物對小鼠急性酒精肝治療作用取昆明種小鼠60只，雌雄各半，隨機分為6組，每組10只，即溶媒對照組、模型對照組、葛花提取物低、中和高劑量組以及硫普羅寧組。除溶媒對照組灌胃給予0.5%CMC夕卜，其余各組小鼠均灌胃給藥40%(V/V)乙醇，給藥體積為0.2ml/10g，4小時后重復(fù)給40%(V/V)乙醇一次，1小時后各組均按以上方法給藥，6小時后每組動物眼眶采血，檢測血清中GPT和GOT含量；取肝臟，檢測肝勻漿中SOD(超氧化楊岐化酶)、MDA(丙二醛)、GST(還原型谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶)。結(jié)果顯示葛花提取物高劑量組能顯著性降低小鼠急性酒精肝血清中GPT含量，葛花提取物低、中和高劑量組對血清中GOT含量有降低的趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異；葛花提取物中和高劑量組能顯著性降低肝勻漿中MDA含量，高劑量組能顯著性升高肝勻漿中SOD含量，但葛花提取物低、中和高劑量組對肝勻漿中GST無明顯影響。結(jié)果見表34。表3葛花提取物對小鼠急性酒精肝的治療作用(JC±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>※p<0.05※※p<0.001均與模型對照組比較表4葛花提取物對小鼠肝勻漿中GST、SOD、和MDA含量的影響(<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>※p<0.05與模型對照組比較結(jié)論葛花提取物對小鼠急性酒精肝的肝功能有保護作用。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點和效果近年來我國酗酒和酒精中毒者日益增多，嚴重影響人們身體健康和家庭、社會的穩(wěn)定。酒對人體有廣泛的藥理作用，急性大量飲酒可引起惡心、嘔吐、記憶力減退、注意力不集中、精細運動能力受損和情緒不穩(wěn)定，嚴重時甚至可因呼吸肌麻痹而導(dǎo)致死亡。長期飲酒可引起精神障礙、胃潰瘍以及脂肪肝、酒精性肝炎、肝硬化等疾病，有資料表明食道癌、肝癌發(fā)病率的升高似乎也與飲酒有關(guān)。研究開發(fā)解酒及防治酒精性肝病的新藥具有巨大的市場前景。目前對酒精性肝病并無特效藥、有些對脂肪肝有效的西藥本身對肝臟有一定的損害，市場上流行的是解酒保肝類保健品，不能起到有效的治療作用。另外，本提取物的制備不用有毒的有機溶劑，不污染環(huán)境，是在常規(guī)含水溶媒提取方法的基礎(chǔ)上，采用了吸附材料吸附分離技術(shù)，耗時少，效率高，提取工藝簡單，成本低廉，可進行產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，并達到了環(huán)保的要求。而且，乙醇可以回收重復(fù)使用，大孔樹脂和聚酰胺也可以處理后再應(yīng)用，降低了相對低廉，便于推廣，因此，在國內(nèi)外市場上有強勁的競爭力。葛花取自天然資源，葛花中異酮類藥物毒副作用小，安全可靠，具有多種生物活性，葛花中的異黃酮類化合物具有強烈的消除活性氧作用，這對預(yù)防和治療酒精性肝病是有益的。葛花在我國自然資源十分豐富，從葛花中提取異黃酮有效成分用于新藥研制，是有效利用自然資源的一項有力措施。本發(fā)明通過藥效試驗證明葛花異黃酮對酒精性肝病有保護和治療作用，臨床上用于治療酒精性肝病有較好的效果，為臨床推廣應(yīng)用提供了理論依據(jù)。具體實施方式實施例1加入葛花重量8倍的60%乙醇溶液熱回流提取3次，每次回流時間1小時，濾過，合并濾液，減壓(一0.08Mpa)回收至無醇味，溫度控制在(65°C)，得到葛花提取液。將提取液用水稀釋至葛花量6倍的藥液，濾過，得濾液。將濾液流經(jīng)填裝有DM-130大孔樹脂的吸附柱，用6倍量的40%乙醇洗脫，減壓(一O.07Mpa)回收溶劑，溫度控制在(7(TC)，得稠膏，稠膏經(jīng)干燥得含總異黃酮為52%(UV法測)的干膏，其中鳶尾苷含量為21%(HPLC法測)。將l份粉碎后的干膏粉與1.5份微晶纖維素混合后用80%乙醇溶液制粒，干燥，整粒，加入1%硬脂酸鎂，混勻，壓片，包薄膜衣，得薄膜衣片，每片0.3g。實施例2加入葛花重量10倍的70%乙醇溶液熱回流提取2次，每次回流時間1.5小時，濾過，合并濾液，減壓(一0.07Mpa)回收至無醇味，溫度控制在(60'C)，得到葛花提取液。將提取液用水稀釋至葛花量8倍的藥液，濾過，得濾液。將濾液流經(jīng)填裝有AB-8大孔樹脂的吸附柱，先用6倍量的水淋洗至流出液至無色，再用6倍量的50%乙醇洗脫，減壓(一0.08Mpa)回收溶劑，溫度控制在(65'C)，得稠膏，稠膏經(jīng)干燥得含總異黃酮為55%(UV法測)的干膏，其中鳶尾苷含量為23%(HPLC法測)。干膏采用超微粉碎工藝粉碎，取1份干膏粉與0.5份微晶纖維素和1份淀粉混合后用70%乙醇溶液制粒，干燥，整粒，加入1%硬脂酸鎂，混勻，灌裝膠囊，每粒0.3g。實施例3加入葛花重量12倍的55%乙醇溶液熱回流提取3次，每次回流時間1小時，濾過，合并濾液，減壓(一0.05Mpa)回收至無醇味，溫度控制在(70°C)，得到葛花提取液。將提取液用30%乙醇稀釋至葛花量6倍的藥液，濾過，得濾液。將濾液流經(jīng)填裝有D101大孔樹脂的吸附柱，先用6倍量的水淋洗至流出液至無色，用2倍量的30%乙醇洗脫后再用6倍量50%乙醇洗脫，收集50%乙醇洗脫液，減壓(一0.06Mpa)回收溶劑，溫度控制在(7CTC)，得稠膏，稠膏經(jīng)干燥得含總異黃酮為83%(UV法測)的干膏，其中鳶尾苷含量為41%(HPLC法測)。干膏粉碎后置已熔化的PEG中，待藥物完全分散在液態(tài)的載體中后，置滴丸設(shè)備中，滴入液體石蠟中，滴制成小丸。實施例4加入葛花重量15倍的60%乙醇溶液熱回流提取2次，每次回流時間1小時，濾過，合并濾液，減壓(一0.07Mpa)回收至無醇味，溫度控制在(65°C)，得到葛花提取液。將提取液用50%乙醇稀釋至葛花量8倍的藥液，濾過，得濾液。將濾液流經(jīng)填裝有聚酰胺的吸附柱，先用4倍量的水淋洗至流出液至無色，再用6倍量的60%乙醇洗脫，減壓(一0.06Mpa)回收溶劑，溫度控制在(75°C)，得稠膏，稠膏經(jīng)干燥得含總異黃酮為63%(UV法測)的干膏，其中鳶尾苷含量為31%(HPLC法測)。干膏粉碎后分散到辛基十二垸醇中，并加工成軟膠囊，每粒0.4g。實施例5釆用實施例2中的制備工藝制得干膏，將干膏粉碎，取1份干膏粉與2份糊精和1份乳糖混合，用70%乙醇制軟材，制粒，千燥，整粒，分裝即得。(每袋裝lg)。實施例6采用實施例2中的制備工藝制得干膏，將干膏粉碎，取1份干膏粉與1.2份微晶纖維素、0.3份低取代羥丙纖維素混勻，用80%乙醇溶液制粒制粒，干燥，加入1%硬脂酸鎂，混勻，壓片，包薄膜衣，即得分散片。每片0.3g。實施例7采用實施例2中的制備工藝制得干膏，將干膏粉碎，取1份干膏粉與1.5份甘露醇、0.2份赤蘚醇、O.l份甜蜜素混勻，用5%聚乙烯吡咯烷酮乙醇溶液制粒制粒，干燥，加入1%硬脂酸鎂，混勻，壓片，包薄膜衣，即得咀嚼片。每片0.35g。實施例8治療酒精性脂肪肝患者32例，其中男性29例，女性3例。患者口服本品的薄膜衣片，每次4片，一日三次，用藥3個月后評定療效。結(jié)果32例患者中，臨床癥狀消失，化驗指標正常，B超提示肝臟未見異常者13例(40.6%):癥狀好轉(zhuǎn)，化驗指標基本正常(谷丙轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、膽固醇、甘油三脂等不超過正常值的30%)，B超提示脂肪肝好轉(zhuǎn)者15例(46.9%)，化驗指標、B超檢査肝內(nèi)無變化者4例(12.5%)?？傆行蕿?7.5%。本組病例觀察表明，葛花總異黃酮提取物制成的制劑對酒精性脂肪肝有較好的治療效果。權(quán)利要求1、一種從葛花中提取總異黃酮的方法，其步驟是a.在葛花中加入醇濃度為10～80％含水醇溶液熱回流提取1～4次，每次含水醇溶液用量為葛花重量的6～30倍，每次回流時間0.5～2小時，濾過，合并濾液，減壓-0.02～-0.09Mpa回收至無醇味，溫度控制在50～90℃，得到葛花提取液；b.在葛花提取液中加入為葛花重量4～10倍的水或醇溶液，其中用的醇溶液醇濃度為10～60％，濾過，得濾液；c.濾液經(jīng)填充有吸附材料的吸附柱，選用的吸附材料為聚酰胺、大孔吸附樹脂或硅膠中的任一種；d.洗脫前或選用體積為吸附材料4～8倍的水淋洗吸附柱至流出液為無色；e.用含20～70％的醇溶液洗脫，洗脫液用量為吸附材料的4～10倍，收集洗脫液；f.減壓-0.02～-0.09Mpa)收溶劑，溫度控制在50～90℃，得稠膏，稠膏經(jīng)干燥后得含葛花總異黃酮50～90％的提取物，其中鳶尾甘含量為20-90％。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從葛花中提取總異黃酮的方法，其特征是所述的醇溶液中所用的醇為乙醇或甲醇中的一種。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從葛花中提取總異黃酮的方法，其特征是所述大孔樹脂的型號有AB-8、SP-70、DlOl、DM-130、S_8、D352(KD4020其中的一種。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從葛花中提取總異黃酮的方法，其特征在于提取總異黃酮制成片劑、膠囊、顆粒劑、滴丸或顆粒劑。5、從葛花中提取的總異黃酮在制備治療或預(yù)防酒精性肝病的的藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種從葛花中提取總異黃酮的方法及用途，在葛花中加入含水醇溶液熱回流提取，濾過，減壓回收至無醇味，在葛花提取液中加入水或醇溶液，濾過，濾液經(jīng)填充有吸附材料的吸附柱，洗脫前或選用水洗吸附柱至流出液為無色，用含有20～70％醇溶液洗脫，收集洗脫液，減壓回收溶劑，得稠膏，干燥后得總異黃酮。提取物的總異黃酮在治療或預(yù)防酒精性肝病的藥物中的用途。文檔編號A61K9/16GK101129447SQ200710053380公開日2008年2月27日申請日期2007年9月27日優(yōu)先權(quán)日2007年9月27日發(fā)明者博劉,劉烈洲,史自東,楊向東,陳四艷申請人:湖北麗益醫(yī)藥科技有限公司