專利名稱：作為抗病毒劑的四環(huán)吲哚衍生物的制作方法
作為抗病毒劑的四環(huán)吲咮衍生物本發(fā)明涉及四環(huán)吲咮化合物、含有其的藥物組合物，其用于治療或 預(yù)防丙型肝炎病毒感染的應(yīng)用，以及這種化合物和組合物的制備方法。丙型肝炎(HCV)由病毒感染引起。至今仍沒有治療HCV感染的 合適的方法，不過(guò)人們相信在哺乳動(dòng)物特別是人中抑制RNA聚合酶將 會(huì)產(chǎn)生好處。7>開的國(guó)際專利申請(qǐng)WO2003/010140和WO2004/065367 (均為 Boehringer Ingelheim )提出吲哚衍生物作為HCV聚合酶可能的抑制劑。 然而沒有公開四環(huán)吲咮衍生物。因此本發(fā)明提供式(I)化合物(i)其中Ar為含有至少一個(gè)芳環(huán)并且具有任選含有1、 2或3個(gè)獨(dú)立地選自 N、 0或S的雜原子的5-、 6-、 9-或10-環(huán)原子的部分，所述環(huán)任選祐^ 團(tuán)(^和(52取代；Qi為囟素、羥基、d-6烷基、d-6烷氧基、芳基、雜芳基、CONRaRb、 (CH2)0-3NRaRb、 0(CH2)!—3NRaRb、 O(CH2)0-3CONRaRb、 O(CH2)0—3芳基、 0(012)。.3雜芳基、OCHReRd;Ra和Rb每個(gè)獨(dú)立地選自氫、Cw烷基和C(0)Cw烷基；或Ra 、 Rb和其所連接的氮原子 一起形成4-7個(gè)環(huán)原子的雜脂肪族環(huán)， 其中所述環(huán)任選被卣素、羥基、d-4烷基或d-4烷氧基取代；Re和Rd每個(gè)獨(dú)立地選自氫和C!-4烷氧基；或Re、 Rd和通過(guò)選自N、 O和S的雜原子連接以形成4-7個(gè)環(huán)原子的雜脂肪族環(huán)，其中所述環(huán)任選被面素、羥基、Cw烷基或d-4烷氧基取代；并且其中所述d-4烷基、d-4烷氧基和芳基任選被卣素或羥基取代；(52為卣素、羥基、d-4烷基或CM烷氧基，其中所述CM烷基和d-4烷氧基任選被卣素或羥基取代；或Qi和(^可通過(guò)鍵或選自N、 O和S的雜原子連接以形成4-7個(gè) 原子的環(huán)，其中所述環(huán)任選被鹵素、羥基、CM烷基或Ci-4烷氧基取代；A為(33-6烷基或C2-6烯基；或者A為3-8個(gè)環(huán)原子的非芳環(huán)，其中所述環(huán)可含有雙鍵和/或可含 有O、 S、 SO、 S02或NH部分；或A為4-8個(gè)環(huán)原子的非芳香二環(huán)部分； 并且A任選被卣素、羥基、d—4烷基或d—4烷氧基取代； W為氫、Cw烷基或。2_6烯基； R2為氫或Cw烷基； L為其中113和114每個(gè)獨(dú)立地選自氫、鹵素、Cw烷基、C:4烯基或d-4烷氧基；或R3和R4連接以形成C3-8環(huán)烷基；B為芳基、雜芳基、CONR5R6,任選被鹵素、Cw烷基、C2-4烯基 或d-4烷氧基取代；R5為氫或Cw烷基；或115連接到W和/或W以形成5-10元環(huán)，其中所述環(huán)可以是飽和 的、部分飽和的或不飽和的，并且其中所述環(huán)任選^皮卣素、Cw烷基、 C2-4烯基、C2-4炔基或d-4烷氧基取代；Rs為芳基或雜芳基；或R5、 RS與其所連接的氮原子形成5-10元單或二環(huán)環(huán)系，其中所 述環(huán)可以是飽和的、部分飽和的或不飽和的，并且其中所述環(huán)任選被卣素、C"烷基、C2-4烯基、C24炔基或CM烷氧基取代；D為鍵、d—6亞烷基、。2-6亞烯基、C2-6亞炔基、芳基或雜芳基，其中所述芳基或雜芳基任選被卣素、Q-4烷基或C2_4烯基取代；W和Z獨(dú)立地選自鍵、C=0、 O、 S(0)。-2、 (CR1QRU)—(CR121113)^X和Y獨(dú)立地選自鍵、OO、 O、 -01141115-和NR14; 并且W、 X、 Y和Z中都不是鍵，或者W、 X、 Y和Z中一個(gè)或兩 個(gè)為鍵；R10、 R11、 R12、 R13、 R"和R"每個(gè)獨(dú)立地選自氫、羥基、d-6烷基、 C2—6烯基、Cw烷氧基、C(0)d-6烷基、Het、 (CH2)。.3NR16R17 、 C(O)(CH2)0.3NR16R17 、 NHC(O)(CH2)0.3NR16R17 、 OCCH^wNR^R17 、 S(0)o-2(CH2)0—3R16R17和C(O)(CH2)0.3OR16;Het為4-7個(gè)環(huán)原子的雜脂肪族環(huán)，該環(huán)可含有1、 2或3個(gè)選自N、 O或S的雜原子或基團(tuán)S(O)、 S(0)2、 NH或NCw烷基；R16和R17獨(dú)立地選自氫、d-6烷基和(CH2)o-4NR18111^或R16、 R"與其所連接的氮原子一起形成4-7個(gè)環(huán)原子的雜脂肪族 環(huán)，所述環(huán)可任選還含有1或2個(gè)選自O(shè)或S的雜原子或基團(tuán)S(O)、 S(0)2、 NH或NCL4烷基，并且所述環(huán)任選被卣素、羥基、CM烷基或 d-4烷氧基取代；R"和R"獨(dú)立地選自氫和Cw烷基；或R18、 R19與其所連接的氮原子一起形成4-7個(gè)環(huán)原子的雜脂肪族環(huán)，所述環(huán)可任選還含有1或2個(gè)選自O(shè)或S的雜原子或基團(tuán)S(O)、S(0)2、 NH或Nd—4烷基，并且所述環(huán)任選被鹵素、羥基、d-4烷基或d-4烷氧基取代；以及其藥學(xué)上可接受的鹽。在本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案中，Ar為任選含有l(wèi)、 2或3個(gè)獨(dú)立地選自 N、 O和S的雜原子的五元或六元芳環(huán)，并且該環(huán)任選^L上文所定義的 基團(tuán)Q4口(^取代。Ar優(yōu)選為任選含有l(wèi)或2個(gè)獨(dú)立地選自N、0或S的雜原子的五元 或六元芳環(huán)，例如苯基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、呋喃基、 吡唑基、咪唑基和p塞吩基，該環(huán)任選被上文所定義的基團(tuán)Q4口(^取代。 Ar更優(yōu)選為苯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-呋喃基或3-呋喃 基，特別優(yōu)選苯基，任選被上文所定義的基團(tuán)(^和Q"取代。QM尤選為鹵素、羥基、d-4烷基、d-4烷氧基或(CH2)0-3N(d-6烷基)2。(^更優(yōu)選為氟、氯、甲基、甲氧基或CH2NMe2。 (^最優(yōu)選為甲氧基。 QM尤選不存在。在另一實(shí)施方案中，A為C3-6烷基、C2，6烯基或C3-8環(huán)烷基，其中 A任選被卣素、羥基、CM烷基或CM烷氧基取代。A優(yōu)選為C3-8環(huán)烷 基，更優(yōu)選為環(huán)戊基或環(huán)己基，最優(yōu)選環(huán)己基，任選被鹵素、羥基、d-4 烷基或Ci-4烷氧基取代。A優(yōu)選未取代，或者被氟、氯、甲基或曱氧基，特別是被氟取代。 更優(yōu)選A未取代。在另一實(shí)施方案中，Ri為氫或d,4烷基。優(yōu)選R^為氫或甲基。更 優(yōu)選R/為氫。在另一實(shí)施方案中，f為氫或CM烷基。優(yōu)選f為氫或甲基。更優(yōu)選f為氫。在另一實(shí)施方案中，113和114連接以形成環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基。優(yōu)選R3和R4連接以形成環(huán)戊基。在另一實(shí)施方案中，B為CONRS芳基，任選^皮卣素、d-4烷氧基取 代，其中RS如以上所定義。B優(yōu)選為CONH苯基。在另一實(shí)施方案中，D為鍵或亞乙烯基。優(yōu)選D為亞乙烯基。合適的L基團(tuán)的例子包括在另 一實(shí)施方案中，W為鍵、C=0、誦(CR^rH)畫(CRUR")cm-或NR10, 其中R10、R11 、R12和R13如以上所定義。優(yōu)選W為-(CR^R1 i)國(guó)(CRUR13)01, 例如曙CH2-、 -CH2CH2-、 -CH(CH3)-、 -CH(CH3)-CH(CH3)-、畫C(CH3)2-或 -C(CH3)2-C(CH3)2-。更優(yōu)選W為-CH2-或-CH2CH2-。最優(yōu)選W為-CH2-。在另一實(shí)施方案中，Z為鍵、C=0, 0, -(011°1111)-(01121113)0-1-或 NR1G,其中R1G、 R11、 1112和R"如以上所定義。優(yōu)選Z為鍵、O或 -(CR^rUHCRUR13)^更優(yōu)選Z為鍵、o、 -CH24-CH2CH2-。最優(yōu)選 Z為鍵、O或-CHr。在另一實(shí)施方案中，X為C二O、 -01141115-或NR14,其中R"和R15 如以上所定義。優(yōu)選X為C二O、 -CH2-、 -0^((:1-6烷基)-、-0麗1 116或 -CHN(CH3)R16 ， 其中 R16如以上所定義。更優(yōu)選X為c=o、 -ch2-、 -0^11國(guó)012國(guó)(:112^11181119或畫(:1^(0 3)-012-012誦"11181119，其中 R18 和 R19 如以上所定義。最優(yōu)選 X 為-CHr或國(guó)C麗(CH3)-CH2-CH2-N(CH3)2。在另一實(shí)施方案中，Y為CK)、 O、 -CR14R15-或NR14,其中R"和 R"如以上所定義。優(yōu)選Y為O、 -01141115-或NR14。更優(yōu)選Y為-CH2-、 NH、 N(d—6烷基)、NCH2CH2N(d-6烷基)2或麗C(0)(CH2)l2n(C!-6烷基)2 。 更優(yōu)選Y為-CH2-、 NH、 N(d-4烷基)、N(CH2)2N(Cm烷基)2或 NHC(0)CH2N(d-4烷基)2。 Y尤其為-CH2-、 NCH3或N(CH2)2N(CH3)2。本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案提供式(Ia)化合物(la)或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中W、 X、 Y和Z如式(I)所述。 優(yōu)選W為-CH2-4-CH2CH2-。更優(yōu)選W為-CH2-。 優(yōu)選Z為4建、O、 -012-或-012012-。更優(yōu)選Z為4建、O或-CHr。 優(yōu)選X為C二O、 -CH2-、 -012(^12-或《麗((^1-4烷基)-(012)2-:^。烷基)2。更優(yōu)選X為-CH2-或-CHN(CH3)-(CH2)2-N(CH3)2。優(yōu)選Y為-CR"R"-或NR14,其中R"和R"如以上所定義。更優(yōu)選 Y為-CHr或NRM,其中R"為氫、d-6烷基或(CH2V3NR161117,其中R16 和R"如以上所定義。最優(yōu)選Y為-CHr、 NH、 N(d-4烷基)或 N(CH2)2N(d-4烷基)2。 Y尤其為-CH2-、 NCH3或N(CH2)2N(CH3)2。當(dāng)任何可變基團(tuán)在式(I)或任何取代基中出現(xiàn)一次以上時(shí)，其在每 次出現(xiàn)時(shí)的定義獨(dú)立于其在其它每次出現(xiàn)時(shí)的定義。此處使用的作為基團(tuán)或基團(tuán)一部分的術(shù)語(yǔ)"烷基"或"烷氧基"指 該基團(tuán)為直鏈或支鏈的。合適的烷基的實(shí)例包括甲基、乙基、正丙基、 異丙基、正丁基、仲丁基和叔丁基。合適的烷氧基的實(shí)例包括甲氧基、 乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。此處提及的環(huán)烷基例如可表示環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基。此處使用的作為基團(tuán)和基團(tuán)一部分的術(shù)語(yǔ)"烯基"和"炔基"指該 基團(tuán)為直鏈或支鏈的。合適的烯基的實(shí)例包括乙烯基和烯丙基。合適的 炔基為炔丙基。此處使用的術(shù)語(yǔ)"亞烷基"指的是連接兩個(gè)獨(dú)立基團(tuán)的烷基并且可 為直鏈或支鏈的。合適的亞烷基的實(shí)例包括亞乙基[-CH2-CHH和亞丙基 [■CH2-CH2-CH2-、畫CH(CH3)畫CH2誦或-CH2國(guó)CH(CH3)國(guó)]。術(shù)i吾"亞歸基"和 "亞炔基"將以類似方式解釋。此處使用的術(shù)語(yǔ)"卣素"表示氟、氯、溴和碘。此處使用的作為基團(tuán)和基團(tuán)一部分的術(shù)語(yǔ)"芳基"指的是碳環(huán)芳環(huán)。 合適的芳基的實(shí)例包括苯基和萘基。此處使用的作為基團(tuán)和基團(tuán) 一部分的術(shù)語(yǔ)"雜芳基"指的是含有1 -4 個(gè)選自N、 O和S的雜原子的5-10元雜芳香環(huán)系。這種基團(tuán)的具體實(shí)例 包括吡咯基、吹喃基、p塞吩基、吡啶基、吡唑基、咪唑基、哺唑基、異 夢(mèng)惡唑基、噻唑基、異噻唑基、吡溱基、嘧咬基、噠嗪基、三唑基、哺二 唑基、噻二唑基、三溱基、四唑基、口引咮基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、 苯并呔喃基、喹啉基和異喹啉基。當(dāng)化合物或基團(tuán)描述為"任選取代"時(shí)，可以存在一個(gè)或多個(gè)取代 基。而且，任選的取代基可以連接到化合物或基團(tuán)，其可以多種方式取 代，或者直接取代或者通過(guò)例如以下連接基團(tuán)取代胺、酰胺、酯、醚、 硫醚、氨磺酰、磺酰胺、亞砜、脲、硫脲和尿烷。視情況而定，任選的 取代基可以本身被另 一取代基取代，后一取代基直接連接到前者或者通過(guò)例如以上所述的連接基團(tuán)連接。本發(fā)明范圍內(nèi)的特定化合物包括(2E)-3-(4-{[(l-{[(14-環(huán)己基-3-曱氧基-6-甲基-5,6,7,8-四氫吲哚 [2,l-a][2,習(xí)苯并二吖辛因-ll-基)羰基]氨基p不戊基)羰基]氨基)苯基)丙烯酸，(2E)-3-(4-([(l-([(14-環(huán)己基-6-甲基-5,6,7,8-四氬吲哚[2,l-a][2，5]苯并 二吖辛因_ 11 -基)羰基]氨基}環(huán)戊基)羰基]氨基)苯基)丙烯酸，(2E)-3-(4-[((l-[((13-環(huán)己基-5-[2-(二曱氨基)乙基]-6,7-二氫-5H-吲哚 [1,2-(1][1,4]苯并二氮雜革-10-基}羰基)氨基]環(huán)戊基}羰基)氨基]苯基}丙烯酸，(2￡)-3-{4-[({1-[({14-環(huán)己基-6-[2-(二甲氨基)乙基]-5,6,7,8-四氫吲哚 [2,l-a][2,5]苯并二吖辛因-ll-基〉羰基)氨基]環(huán)戊基)羰基)氨基]苯基〉丙烯酸，(2E)-3-(4-[((l-[(((m)-14-環(huán)己基-7-[[2-(二曱氨基)乙基](曱基)氨基]-7,8-二氫-6H-吲哚[l,2-e][l,5]苯并噹唑辛(benzoxazocin) -11-基}羰基)氨基]環(huán)戊基}羰基)氨基]苯基}丙烯酸， 以及其藥學(xué)上可接受的鹽。對(duì)于醫(yī)學(xué)應(yīng)用，式(I)化合物的鹽將為無(wú)毒的藥學(xué)上可接受的鹽。 然而，其它鹽也可用于制備根據(jù)本發(fā)明化合物或其無(wú)毒的藥學(xué)上可接受 的鹽。本發(fā)明化合物的合適的藥學(xué)上可接受的鹽包括酸加成鹽，其可通 過(guò)例如將根據(jù)本發(fā)明化合物的溶液與藥學(xué)上可接受的酸的溶液混合形 成，藥學(xué)上可接受的酸例如為鹽酸、富馬酸、對(duì)曱苯磺酸、馬來(lái)酸、琥 珀酸、乙酸、檸檬酸、酒石酸、碳酸、磷酸或硫酸。胺基的鹽還可包含 季銨鹽，其中氨基氮原子帶有合適的有機(jī)基團(tuán)，例如烷基、烯基、炔基 或芳烷基部分。此外，在本發(fā)明化合物帶有酸性部分的情形，其合適的 藥學(xué)上可接受的鹽可包括金屬鹽，例如堿金屬鹽，如鈣鹽或鎂鹽和堿土 金屬鹽，例如鉤鹽和鎂鹽。這些鹽可通過(guò)常規(guī)方法形成，例如通過(guò)該產(chǎn)品的游離堿形式與 一當(dāng) 量或多當(dāng)量合適的酸在該鹽不溶解的溶劑或介質(zhì)中反應(yīng)得到，或者在例 如水的溶劑中反應(yīng)，然后真空除去水，或者通過(guò)冷凍干燥除去水，或者 在合適的離子交換樹脂上通過(guò)交換現(xiàn)有鹽的陰離子為另 一 陰離子得到。本發(fā)明在其范圍內(nèi)包括上式(I)化合物的前藥。這種前藥通常為式(I)化合物的功能衍生物，其可容易地在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為所需的式(I)化合物。選擇和制備合適的前藥衍生物的常規(guī)方法例如公開在"Design of Prodrugs" , H. Bundgaard編輯，Elsevier, 1985中。前藥可為生物體活性物質(zhì)("母體化合物"或"母體分子")的藥 理學(xué)惰性的衍生物，其需要在體內(nèi)轉(zhuǎn)化以釋放活性藥物，并且具有比母 體藥物分子改善的釋放性質(zhì)。體內(nèi)轉(zhuǎn)化例如可以是某些代謝過(guò)程的結(jié) 果，例如羧酸、磷酸或硫酸酯的化學(xué)或酶水解，或者敏感官能團(tuán)的還原 或氧化。本發(fā)明在其范圍內(nèi)包括式(I)化合物以及其鹽的溶劑化物，例如水合物。本發(fā)明在其范圍內(nèi)還包括式(I)化合物的任何對(duì)映體、非對(duì)映體、 幾何異構(gòu)體和互變異構(gòu)體。應(yīng)理解的是，全部這些異構(gòu)體以及其混合物將包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明此外提供用于治療的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。 另一方面，本發(fā)明提供如上所述式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽用于制造在人或動(dòng)物中治療或預(yù)防丙型肝炎病毒感染的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明另 一方面提供含有如上所述式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受 的鹽與藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。根據(jù)指定給藥方法，該組合 物可為任何合適的形式。例如對(duì)于口服給藥，其可為片劑、膠嚢或液態(tài) 形式，或者對(duì)于腸胃外給藥，其可為溶液或懸浮液的形式。該藥物組合物任選還包括一種或多種用于治療病毒感染的其它藥 物，例如抗病毒藥，或免疫調(diào)節(jié)劑，例如a-、 P-或y-干擾素。本發(fā)明另 一 方面提供一種抑制丙型肝炎病毒聚合酶和/或治療或預(yù) 防丙型肝炎病毒引起的疾病的方法，所述方法包括向患有所述疾病的人 或動(dòng)物(優(yōu)選哺乳動(dòng)物)主體給藥治療或預(yù)防有效量的如上所述的藥物 組合物或如上所述的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。"有效量" 指的是足以對(duì)主體產(chǎn)生效果的量或者至少引起主體病況改變的量。化合物給藥的給藥速率將取決于各種因素，包括所應(yīng)用的特定化 合物的活性、該化合物的代謝穩(wěn)定性和作用的長(zhǎng)短、患者的年齡、體重、 一般健康、性別、飲食、給藥的方式和時(shí)間、排泄速率、藥物聯(lián)合、具 體病癥的嚴(yán)重程度以及接受治療的宿主。合適的劑量水平大約可為每天0.02至5或10克，口服劑量高二至五倍。例如，以1至50毫克化合物 每千克體重每天給藥l-3次是適宜的。合適的給藥劑量可通過(guò)常規(guī)試驗(yàn) 選擇。該化合物可以單獨(dú)給藥，或者與其它治療一起同時(shí)或續(xù)貫給藥。 例如，可以與本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知的有效量的抗病毒藥、免疫調(diào)節(jié) 劑、抗感染藥或疫苗一起給藥?？梢酝ㄟ^(guò)任何合適的途徑給藥，包括口 服、靜脈內(nèi)、經(jīng)皮和皮下途徑?？梢灾苯咏o藥到合適的位置，或者以靶 向特定位置例如特定類型的細(xì)胞的方式給藥。合適的靶向方法已經(jīng)公 知。本發(fā)明的其它方面提供一種制備藥物組合物的方法，包括將至少一 種如上所定義的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽與一種或多種藥學(xué) 上可接受的助劑、稀釋劑或載體和/或 一種或多種其它治療或預(yù)防性活性劑混合。本發(fā)明還提供制備式(I)化合物的方法。根據(jù)通用方法(a),式(i)化合物可通過(guò)式(n)化合物與式(m)化合物的反應(yīng)制備其中R1、 R2、 L、 A、 Ar、 W、 X、 Y和Z如式(I)中所定義。該反應(yīng) 通常在例如HATU的偶聯(lián)劑和例如二異丙基乙胺的堿的存在下在例如 DMF的溶劑中進(jìn)行。式(II)和式(III)化合物為本領(lǐng)域已知或者可通過(guò)本領(lǐng)域熟練技 術(shù)人員已知的常規(guī)方法制備，例如說(shuō)明書和實(shí)施例中所述的方法，或者 通過(guò)顯而易見的替代方法制備。例如，式(III)化合物可通過(guò)式(IV)化合物的內(nèi)環(huán)閉合制備<formula>formula see original document page 16</formula>(IV)
其中A、 Ar、 W和Z如式(I)中所定義，P為合適的保護(hù)基，例如曱基， 并且X'和Y'具有成為如式(I)中所定義的X和Y中一種或兩種的合適 的前體官能團(tuán)。例如當(dāng)X是-CH2-并且Y是N(CH3)時(shí)，X'和Y'可分別為 -CHO^p-NC(CH3),其中反應(yīng)在例如氰基硼氬化鈉的弱還原劑的存在下 在輕度酸性條件下在例如甲醇的合適的溶劑中進(jìn)行?；蛘?，當(dāng)X是CK) 并且Y是NH時(shí)，X'和Y'可分別為C(O)OtBu和NHC(O)OtBu，其中反 應(yīng)在酸性條件下在例如二氯曱烷/水混合物的合適的溶劑體系中進(jìn)行。式(I)化合物可以使用本領(lǐng)域公知的合成方法轉(zhuǎn)化為其它式(I) 化合物。例如，通過(guò)在例如二氧六環(huán)、THF和/或曱醇的合適的溶劑中在 水的存在下使用LiOH處理將酯轉(zhuǎn)化為羧酸，R1為C02CH2CH3的式(I) 化合物可以轉(zhuǎn)化為R1為C02H的式(I)化合物。此外，通過(guò)在例如THF的合適的溶劑中〗吏用例如BH3 . Me2S的硼 烷反應(yīng)物還原含氧基，X為C = O的式(I)化合物可以轉(zhuǎn)化為其中X 為CH2的式(I)化合物。任一上述合成序列期間，可能需要和/或希望保護(hù)任何涉及分子上敏 感或活性的基團(tuán)。這可通過(guò)常規(guī)保護(hù)基實(shí)現(xiàn)，例如Protective Groups in Organic Chemistry, J.F.W. McOmie編輯，Plenum Press, 1973和T.W. Greene & P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons,第3版，1999中所述的那些。這些保護(hù)基可使用本領(lǐng)域 已知的方法在隨后方便的步驟除去。本發(fā)明通過(guò)以下非限制性實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明。在酶抑制試驗(yàn)(實(shí)施例(i))和基于細(xì)胞的次基因組復(fù)制試驗(yàn)(實(shí) 施例(ii))中測(cè)試了本發(fā)明化合物對(duì)抗HCVRNA依賴的RNA聚合酶 (NS5B)的抑制活性。該化合物在酶活性測(cè)定中通常具有低于1 jLiM 的IC50，，并且?guī)讉€(gè)實(shí)施例在基于細(xì)胞的測(cè)試中具有4氐于0.5 |LiM的 EC50'。實(shí)施例中的化合物名稱使用ACDLabs ( 6.0版)軟件產(chǎn)生。(i) 體外HCV NS5B酶抑制測(cè)定WO 96/37619 7>開了/人感染重組桿狀病毒的昆蟲細(xì)月包產(chǎn)生重組 HCVRdRp,該桿狀病毒編碼酶。使用RNA作為才莫板，純化的酶顯示具 有體外RNA聚合酶活性。該參考文獻(xiàn)描述了使用聚腺普酸(Poly(A)) 和低聚尿苷酸(01igo(U))作為引物或者雜聚模板的聚合測(cè)定。氚化UTP 或NTPs的加入通過(guò)測(cè)量酸-不溶性放射性確定。本發(fā)明人已經(jīng)使用該測(cè) 定以篩選如上所述各種化合物作為HCVRdRp抑制劑。放射性UMP的加入如下測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)(50毫升)在含有20 mM Ph為7.5的tris/HCl、 5 mM MgCl2、 1 mM DTT、 50 mM NaCl、 0.03 % N-辛基葡糖苷、1 jLiCi [3H]-UTP ( 40 Ci/毫摩爾，NEN)、 10 ju M UTP和 10微克/毫升聚腺苷酸或5 pM NTPs和5微克/毫升雜聚模板的緩沖液 中進(jìn)行。01igo(U)12 ( 1微克/毫升，Genset)作為引物加入到工作在聚腺 香酸才莫板上的測(cè)定中。最終NS5B酶濃度為5 nM。混合順序?yàn)閘)化 合物、2)酶，3)模板/引物，4)NTP。在22。C培養(yǎng)1小時(shí)后，反應(yīng)通 過(guò)加入50《鼓升20% TCA停止并且將樣品加入到DE81過(guò)濾器中。過(guò)濾 器用pH為7.0的含有1M Na2HP04/NaH2P04的5 % TCA充分地洗滌， 用水洗滌然后用乙醇洗滌，隨后空氣干燥，并且在閃爍計(jì)數(shù)器中測(cè)量過(guò) 濾器結(jié)合放射性。在如上設(shè)定的不同濃度的每種化合物的存在下進(jìn)行該 反應(yīng)，根據(jù)下式測(cè)量IC5o值%剩余活性=100/(1+[I]/IC50)S其中[I]為抑制劑濃度并且"S"為抑制曲線斜率。(ii) 基于細(xì)胞的HCV復(fù)制測(cè)定通過(guò)使用與Lohmann等人(1999) (EMBL-genbank No. AJ242652)所 述D77neo/NS3-3，/相同的RNA復(fù)制子轉(zhuǎn)染Huh-7細(xì)胞,然后使用新霉素 硫酸鹽(G418)選擇，得到細(xì)胞克隆，其穩(wěn)定保持了次基因組的HCV復(fù) 制子。使用抗NS3單克隆抗體10E5/24在生長(zhǎng)于96孔微孔滴定板 (Cell-ELISA)中的細(xì)胞上直接進(jìn)行ELISA測(cè)定，通過(guò)測(cè)量NS3蛋白表 達(dá)監(jiān)測(cè)病毒復(fù)制(如國(guó)際申請(qǐng)WO 02/5932所述)。細(xì)胞以0.1毫升 DMEM/10%FCS的最終體積以104細(xì)胞/孔的密度播種在96孔板中。2 小時(shí)后，加入含有3倍濃度抑制劑的50微升DMEM/10 % FCS,細(xì)胞培 養(yǎng)96小時(shí)然后使用水冷的異丙醇固定IO分鐘。每個(gè)條件測(cè)試一式兩份并且平均吸光度值用于計(jì)算。細(xì)胞用PBS洗滌兩次，使用PBS + 0.1% Triton X100 + 0.02% SDS ( PBSTS)中5 %脫脂奶粉阻斷，然后在4。C使 用在奶/PBSTS中稀釋的10E5/24 mab培養(yǎng)。用PBSTS洗滌5次后，細(xì) 胞使用在奶/PBSTS中稀釋的結(jié)合到堿性磷酸酶(Sigma)的Fc特異性 的抗小鼠IgG在室溫下培養(yǎng)3小時(shí)。再次如上洗滌后，反應(yīng)使用對(duì)硝基 苯磷酸二鈉底物(Sigma)繼續(xù)并且每隔一段時(shí)間在405/620納米讀數(shù)測(cè) 量吸光率。對(duì)于計(jì)算，我們使用其中沒有使用抑制劑培養(yǎng)的樣品具有 1-1.5的吸光度值的數(shù)據(jù)集。減少50% NS3表達(dá)的抵制劑濃度(IC50)通 過(guò)按照Hill方程式擬合數(shù)據(jù)計(jì)算，《且分承卩制=l-(Ai-b)/(A0國(guó)b) = [I]n / ([I]n + IC50)其中-Ai =添加有指定抵制劑濃度的HBI10細(xì)胞的吸光度值。 -AO =沒有抑制劑的HBI10細(xì)胞的吸光度值。 -b =在相同微孔滴定板中并且不使用抑制劑在相同濃度分布的 Huh-7細(xì)胞的吸光度值。 -n-Hill系數(shù)。 (iii) 一般方法全部溶劑得自商業(yè)來(lái)源(Fluka, puriss.)并且無(wú)須另外純化使用。 除常規(guī)脫保護(hù)和偶合步驟之外，反應(yīng)在氮?dú)鈿夥障略诤娓?ll(TC)玻 璃器皿中進(jìn)行。有機(jī)萃取液使用硫酸鈉干燥，并且使用在減壓下操作的 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮(濾出干燥劑后)。按照公開方法(W.C. Still等人， J. Org. Chem. 1978, 43, 2923 )在硅膠上或者使用預(yù)填充塔在商用快速色 "i普體系(Biotage corporation和Jones Flashmaster II)上進(jìn)4亍快速色i普。反應(yīng)物通常直接得自商業(yè)供應(yīng)商(并且用作供應(yīng)品)，然而使用得 自公司內(nèi)部收集的有限數(shù)量的化合物。在后一種情形下，反應(yīng)物使用科 學(xué)文獻(xiàn)中公開的或者本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所公知的常規(guī)合成步驟容易 得到。& NMR光譜記錄在操作在300至600MHz的Bmker AM系列光譜 儀上。相應(yīng)于非可交換質(zhì)子(并且可交換質(zhì)子可見)信號(hào)的化學(xué)位移(5 ) 相對(duì)于四甲基硅烷以百萬(wàn)分之幾(ppm)記錄，并且使用剩余溶劑峰值 作為定位測(cè)量。信號(hào)概括如下多重性(s，單峰；d，雙重峰；t,三重 峰；q，四重峰；m,多重峰；br,寬峰，以及其組合)；以赫茲(Hz)表示的偶合常數(shù)(s);質(zhì)子數(shù)。質(zhì)譜(MS)數(shù)據(jù)在陰性(ES-)或陽(yáng)性 (ES+ )離子化模式操作的Perkin Elmer API100或Waters MicroMass ZQ 上得到，并且所得結(jié)果僅以母體離子物質(zhì)與電荷的比例(m/z)記錄。 制備級(jí)HPLC分離在裝有Waters 486吸收檢測(cè)器的Waters Delta Prep 4000分離模塊上進(jìn)行，或者在Gilson制備體系中進(jìn)行。在全部情況下， 化合物使用流速為15-40毫升/分鐘的含有0.1%TFA的線性梯度的水和 乙腈洗脫。在實(shí)施例、方案和表格中使用以下縮寫Ar:芳基；cat:催化的； DCM: 二氯甲烷；dioxan(e): 1,4-二氧六環(huán)；DIPEA: 二異丙基乙胺； DMAP: N,N-二曱基吡啶-4-胺；DME: 二曱氧基乙烷；DMF: 二甲基曱 酰胺；DMSO.' 二甲亞砜；EDAC.HC1: l-乙基-(3-二甲氨基丙基)碳二亞 胺鹽酸鹽；叫.當(dāng)量；Et:乙基；EtOAc:乙酸乙酯；Et20:乙醚；EtOH: 乙醇；h:小時(shí)；HATU: 0-(7-氮雜苯并三唑-l-基)-N,N,N，,N，-四曱基脲镥 六氟磷酸鹽；Me:甲基；MeCN:乙腈；MeOH:曱醇；min:分鐘； MS:質(zhì)譜；NBS: N-溴代琥珀酰亞胺；PE:石油醚；Ph:苯基；Prep.: 制備性；iPr2Net: 二異丙基乙胺；quant:定量；RP-HPLC:反相高壓 液相色鐠；RT/rt:室溫；sol.:溶液；TFA..三氟乙酸；THF:四氫呋喃； TMS:三曱基曱硅烷基。說(shuō)明k 14-環(huán)己基-3-曱氧基-6-甲基-5,6,7,8-四氫吲哚[2,l-a][2,5]苯 并二吖辛因-ll-羧酸歩驟1: 2-溴-3-環(huán)己基-l-n,3-二氧戊環(huán)-2-基甲基VlH-吲哚-6-羧酸甲NaH (1.5叫.，礦物油中60%分散體)加入到2-溴-3-環(huán)己基-lH-吲哚-6-羧酸曱酯(如公開的國(guó)際專利申請(qǐng)WO 2004/065367中制備)在 DMF (0.1 M)的溶液中，并且一次冒泡已經(jīng)平息后將溶液在室溫下另外 攪拌30分鐘。然后加入2-溴曱基-1,3-二氧戊環(huán)(4 eq.)和催化量(0.025 eq) 硤化鉀并將混合物在50。C加熱36小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用HC1 水溶液(1N)淬滅并用EtOAc萃取。有機(jī)物用HC1水溶液(1N) (3 x )、水和鹽水洗滌，然后使用Na2S04干燥，過(guò)濾并真空蒸發(fā)溶劑。 通過(guò)快速色譜法(10。/。EtOAc/PE)純化得到淺黃色固體，將其與Et20/PE 一起研磨，以白色固體得到標(biāo)題化合物(69% ) 。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300 K) 5 1,35-1.45 (m, 3H), 1.68-1.80 (m, 3H), 1.8-2.0 (m,4H), 2.83-2.89 (m, 1H), 3.78 (s, 4H), 3.88 (s, 3H), 4.45-4.46 (m, 2H), 5.13-5,18 (m, 1H) 7.65 (d, J 8.5, 1H), 7.81 (d, J 8.5, 1H)， 8.14 (s, IH); MS (ES+) m/z 422 (M+H)+, m/z 424 (M+H)+。步驟2: 3-環(huán)己基-l-n,3-二氣戊環(huán)-2-基甲基)-2-〖2-甲?；?4-曱氧基 苯基VlH-吲哚-6-羧酸曱酯向2-溴-3-環(huán)己基-l-(l,3-二氧戊環(huán)-2-基曱基)-lH-吲哚-6-羧酸甲酯 (得自步驟1)在二氧六環(huán)(0.1M)的溶液中加入Na2C03 (6eq., 2M 水溶液)、4-甲氧基-2-曱酰基苯基硼酸(2 eq)和二(三苯基膦)鈀(II)二 氯化物(0.2叫)。將混合物脫氣，然后回流加熱30分鐘。反應(yīng)混合物 的RP-HPLC分析表明存在起始物料。反應(yīng)混合物冷卻，并且加入另外1 當(dāng)量4-甲氧基-2-甲?；交鹚岷?.1當(dāng)量二(三苯基膦)鈀(II)二氯化 物。然后重新開始回流加熱30分鐘。將反應(yīng)冷卻至室溫并在水和EtOAc 之間分配。水相組分用EtOAc萃取，并將合并的有機(jī)物用鹽酸(1 N)、 水和鹽水洗滌，并且使用Na2S04干燥，過(guò)濾并在真空中進(jìn)行濃縮。原 材料通過(guò)快速色譜法(10-20%梯度的EtOAc/PE)純化，以黃色泡沫得 到標(biāo)題化合物(72% ) 。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6， 300 K) 5 1.10-1.24 (m, 3H), 1.60-1.80 (m, 7H)， 2.30-2.39 (m, 1H), 3.41-3.48 (m, 1H), 3.56-3.65 (m, 3H), 3.89 (s, 3H)， 3.94 (s, 3H), 3.98 (dd, J 15.3, 4.4, 1H), 4.25 (dd, J 15.3, 2.6, 1H), 4.92-4.93 (m, 1H), 7.40-7.46 (m, 2H), 7.49 (d, J 2.2, 1H), 7.70 (d, J 8.8, 1H), 7.85 (d, J 8,8, 1H), 8,21 (s, 1H), 9.61 (s, IH); MS (ES+) m/z 478 (M+H)+。歩驟3: 3-環(huán)己基-l-n,3-二氧戊環(huán)-2-基甲基V244-甲氧基-2-「(曱基 氨基)甲基l苯基VlH-吲哚-6-羧酸曱酯向3-環(huán)己基-l-(l,3-二氧戊環(huán)-2-基甲基)-2-(2-曱?；?4-曱氧基苯 基)-lH-吲哚-6-羧酸曱酯(得自步驟2)在THF (0.05M)的溶液中加入 曱胺(10eq., THF中2M溶液)并使用乙酸將pH調(diào)節(jié)為6。溶液在真 空濃縮之前在室溫下攪拌45分鐘。殘余物在MeOH中吸收以得到0.025 M溶液。加入NaBH3CN (2.4eq)并將混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。反 應(yīng)混合物的RP-HPLC分析表明完全轉(zhuǎn)化為所需的胺。反應(yīng)用飽和 NaHC03水溶液淬滅并使用EtOAc萃取(2x )。合并的有機(jī)物用水和 鹽水洗滌然后使用Na2S04干燥，過(guò)濾并且真空濃縮，以粘性油狀物得 到標(biāo)題化合物(89% ) 。 ！H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300 K) 51.10-1.27 (m, 3H), 1.60-1.75 (m, 6H), 1.79-1.90 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 2.29-2.35 (m, 1H), 3.34 (br s, 2H, partially obscured by water peak), 3.63-3.72 (m, 3H), 3.73-3.78 (m, IH), 3.79-3.84 (m， IH), 3.85 0, 3H), 3.87 (s, 3H), 4.15 (dd, J 15.0, 4.7, IH), 4.84-4.87 (m, IH), 6.96 (dd, J 8.5, 2.6, IH), 7.18 (d, J 8.5, IH), 7.23 (d, J 2.6, IH), 7,65 (dd， J 8.4, 1.3, IH), 7.80 (d, J 8.4, IH)， 8.16 (d, J 1.3, IH); MS (ES+) m/z 493 (M+H)+。歩驟4: 3-環(huán)己基-244-曱氧基-2-「〖曱氨基)甲基l苯基卜l-(2-氧代甲 基VlH-吲哚-6-羧酸甲酯將鹽酸(25 eq.， 3 M)加入到3-環(huán)己基-l-(l,3-二氧戊環(huán)-2-基曱 基)—2-(4-甲氧基-2-[(曱基氨基)甲基]苯基卜lH-吲哚-6-羧酸曱酯(得自步 驟3)在THF (0.02M)的溶液中，并將混合物回流加熱24小時(shí)。反應(yīng) 混合物等分試樣的iHNMR分析證實(shí)起始物料的完全轉(zhuǎn)化。揮發(fā)物在真 空中除掉，并且殘余物在EtOAc和飽和NaHC03水溶液(保證水相為堿 性)之間分配。水相用EtOAc萃取，并將合并的有機(jī)物用水和鹽水洗滌， 然后使用Na2S04干燥，過(guò)濾并在真空中進(jìn)行濃縮，以基本上定量收率 得到標(biāo)題化合物。^NMR(400MHz,DMSO-d6, 300 K) 5 1.05-1.35 (m, 3H), 1.60-1.95 (m, 7H), 2.25-2.33 (m, 1H)， 2.86 (s, 3H), 3.74-3.78 (m, 1H, obscured by water peak), 3.88 (s, 3H), 3.95 (s, 3H), 4.29 (d, J 14.2, IH), 5.31 (d, J 7.3, IH), 5.70 (d, J 7.3, IH), 7.06-7.10 (m, 2H), 7.32 (d, J 8.3, IH), 7.63 (dd, J 8.4, 1.4, IH), 7.84 (d, J 8.4, IH), 7.96 (d, J 1.4, IH), 9.02 (br s, IH); MS (ES+) m/z 449 (M+H)+。歩驟5: 14-環(huán)己基-3-甲氣基-6-甲基-5.6,7,8-四氫吲哚r2,l-al「2,51苯 并二吖辛因-ll-羧酸將乙酸在室溫下滴加到3-環(huán)己基-2-{4-甲氧基-2-[(曱氨基)甲基]苯 基卜l-(2-氧代乙基)-lH-吲哚-6-羧酸甲酯(得自步驟4)在MeOH (0.005 M)的溶液中，并且將pH調(diào)節(jié)為pH6。混合物攪拌10分鐘，然后加入 NaCNBH3 (3.2eq) 。 1小時(shí)后反應(yīng)混合物的RP-HPLC分析證實(shí)氨基醛 完全轉(zhuǎn)化為所需的環(huán)胺。反應(yīng)用等體積的THF稀釋并且加入NaOH( 100 eq., 2M水溶液)。反應(yīng)混合物然后在60。C加熱3小時(shí)，然后冷卻至室 溫。THF/MeOH體積真空減少，并且殘余物在用EtOAc萃取之前(4 x ) 用HC1水溶液(1N)酸化。合并的有機(jī)物用鹽水洗滌，使用Na2S04干 燥，過(guò)濾并且在真空中進(jìn)行濃縮，以黃色固體得到產(chǎn)品的鹽酸鹽。通過(guò)自動(dòng)RP-MS-HPLC (固定相柱Waters XTERRA制備C18, 5微米， 19xl00毫米。流動(dòng)相用0.1。/。TFA緩沖的MeCN/H20)。含有純化合 物的組分合并并且凍干，以白色粉末得到標(biāo)題化合物(21% )。HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 300 K) 5 1.09-1.21 (m, 1H), 1.28-1.37 (m, 2H), 1.50-1.56 (m, 1H), 1,65-1,75 (m, 2H)， 1.82-2.0 (m， 4H), 2.58-2.67 (m, IH), 3.04 (br s, 3H), 3.3-3.5 (m, IH,浮皮水峰掩蓋)，3.63-3.75 (m, 3H), 3,91 (s, 3H), 4.32 (d, J 13.4, IH), 4.79 (dd, J 16.0, 3.5, IH), 7.25 (dd, J 8.5, 2.3, IH乂 7.40 (d, J 8.5, IH), 7.61 (d, J 2.3, IH), 7.73 (d, J 8.3, IH), 7.91 (d, J 8.3, IH), 8.19 (s, IH), 9.86 (br s, IH), 12.68 (br s, IH); MS (ES+) m/z 419 (M+H)+。說(shuō)明2:14-環(huán)己基-6-[2-(二甲氨基)乙基]-5,6,7,8-四氫吲哚[2,l-a][2,5] 苯并二吖辛因-ll-羧酸步驟1: 2-澳-3-環(huán)己基-l-a2-二曱氧基乙基VlH-吲哚-6-羧酸曱酯在室溫下向2-溴-3-環(huán)己基-lH-吲咮-6-羧酸曱酯(如公開的國(guó)際專利 申請(qǐng)WO 2004/087714所述制備)(0.2 M， 1叫)在DMF的攪拌溶液中 加入NaH (礦物油中60%分散體，1.75eq)。 1小時(shí)后加入KI(8摩爾 % )和溴代乙醛二甲基縮醛(2.5叫)并將反應(yīng)在SO。C加熱17小時(shí)。冷 卻至室溫后，反應(yīng)通過(guò)加入HC1水溶液(1N)淬滅并萃取進(jìn)入EtOAc (3x )。合并的有機(jī)物用HCl( 1N)、H20和鹽水洗滌，然后使用Na2S04 干燥，過(guò)濾并且在真空中進(jìn)行濃縮。通過(guò)快速色譜(Biotage, 5-10% EtOAc/PE梯度)純化，以白色固體得到標(biāo)題化合物(79% ) 。 ^NMR (300 MHz, d6-DMSO, 300 K) 5 1.51-1.68 (m, 3H), 1,67-1,72 (m, 3H), 1.82-1.99 (m, 4H), 2.81-2.89 (m, 1H), 3.25 (s, 6H), 3.87 (s, 3H), 4.35-4.37 (m, 2H), 4.46-4.59 (m, 1H), 7.64 (d, J 8.4, 1H), 7.80 (d， J 8,4, 1H), 8,10 (s, IH); MS (ES+) m/z 446 (M+H)+, 448 (M+H)+。步驟2: 3-環(huán)己基-l-(2.2-二甲氧基乙基V2-(2-甲?；交鵙lH-吲哚 -6-羧酸曱酯2-溴-3-環(huán)己基-l-(2,2-二曱氧基乙基)-lH-吲哚-6-羧酸曱酯(0.16M, 1 eq,得自步驟1)在二氧六環(huán)和Na2C03 (6當(dāng)量2M溶液)中的溶液 通過(guò)超聲處理脫氣10分鐘。加入2-曱酰基苯基硼酸(1.5 eq)和二(三苯 基膦)鈀(II)二氯化物(20摩爾％ )并將反應(yīng)置于在108。C加熱的預(yù)加熱 油浴中20分鐘直到變黑。冷卻至室溫后，反應(yīng)在H20和EtOAc之間分酉己(3x )。合并的有機(jī)物用HC1 (1N) 、 H20和鹽水洗滌，然后使用 Na2S04干燥，過(guò)濾并且在真空中進(jìn)行濃縮。通過(guò)快速色鐠(Biotage, 10 % EtOAc/PE)純化，以淺黃色固體得到標(biāo)題化合物(85 % )?！紿 NMR (300 MHz, d6-DMSO, 300 K) 5 1.08-1.23 (m, 3H), 1.60-1.81 (m, 7H), 2.30-2.34 (m, 1H), 3.01 (s, 3H), 3.07 (s, 3H), 3.89 (s， 3H), 3.95-3.97 (m, 1H), 4.12-4.18 (m, 1H), 4.36-4.37 (m, 1H), 7.53 (d, J 7.5, 1H), 7.70-7.78 (m, 2H): 7.84-7.88 (m, 2H), 8.04 (d, J 7.5, 1H), 8.17 (s, 1H), 9.66 (s, IH); MS (ES+) m/z 472 (M+Na)+, 450 (M+H)+。歩驟3: 3-環(huán)己基-l-a2-二曱氧基乙基)-2-「2-m2-(二甲氨基)乙基l 氨基l甲基〗苯基l-lH-吲哚-6-羧酸曱酯向3-環(huán)己基-l-(2,2-二甲氧基乙基)-2-(2-曱?；交?-lH-吲哚-6-羧 酸曱酯(0.16M, l叫，得自步驟2)和2-二曱氨基乙胺(2eq)在THF 的攪拌溶液中加入水醋酸以將反應(yīng)的pH調(diào)節(jié)為大約pH 4。反應(yīng)攪拌1 小時(shí)，然后在減壓下除去THF并將殘余物再溶解于MeOH中。分批加 入NaBH4 (8eq)直到通過(guò)LC-MS分析觀察到完全轉(zhuǎn)化。反應(yīng)通過(guò)加入 NaHC03飽和水溶液淬滅并且萃取進(jìn)入EtOAc (3 x )。合并的有機(jī)物用H20和鹽水洗滌，然后使用Na2S04干燥，過(guò)濾并且在真空中進(jìn)行濃縮。 以淺黃色油狀物得到標(biāo)題化合物并且無(wú)須進(jìn)一步純化就可使用(定量)。 !H N匿(300 MHz, d6-DMSO, 300 K) 5 1.15-1.23 (m, 3H), 1.67-1.72 (m, 7H), 2.16 (s, 6H), 2.33-2.50 (m, 5H被DMSO峰掩蓋)，3.00 (s, 3H), 3.08 (s: 3H), 3.40-3.50 (m， 2H被水峰掩蓋)，3.78 (dd, J 14.8, 4.6, 1H), 3.88 (s, 3H): 4.07-4.14 (m, 1H), 4.26-4.28 (m, 1H), 7.29 (d, J 7.5, 1H), 7.40-7.44 (m, 1H): 7.52-7.56 (m, 1H), 7.65-7.70 (m, 2H), 7.83 (d, J 8.4, 1H), 8.1 (s, IH); MS (ES+) m/z 522 (M+H)+。歩驟4: 14-環(huán)己基-6-「2-(二曱氨基)乙基l-5五7,8-四氫吲哚「2,l-a1「2，51 苯并二吖辛因-ll-羧酸甲酯向3-環(huán)己基-l-(2,2-二曱氧基乙基)-2-[2-({[2-(二甲氨基)乙基]氨基) 甲基)苯基]-lH-吲哚-6-羧酸曱酯(0.16 M, 1 eq，得自步驟3 )在THF 的攪拌溶液中加入等體積的1 N HC1。反應(yīng)在60。C加熱2.5小時(shí)并且在 冷卻到室溫后通過(guò)加入NaOH (2N)淬滅并萃取進(jìn)入EtOAc (3 x )。 合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，然后使用Na2S04干燥，過(guò)濾并在真空 中進(jìn)行濃縮。殘余物再溶于MeOH并使用水醋酸酸化至pH 4。攪拌45分鐘后，分批加入NaBH4 ( 8 eq)直到通過(guò)LC-MS分沖斤證實(shí)環(huán)化作用完 成。反應(yīng)通過(guò)加入NaHC03飽和水溶液淬滅并且萃取進(jìn)入EtOAc( 3 x )。 合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，然后使用Na2S04干燥，過(guò)濾并在真空 中進(jìn)行濃縮。以淺黃色油狀物得到標(biāo)題化合物，并且無(wú)須另外純化使用 (定量)。&畫R (400固z, d6-DMSO, 300 K) S 1.12-1.35 (m, 3H), 1.50-1.53 Cm, 1H), 1.66-1.72 (m, 2H), 1.79-1.86 (m, 1H), 1.94-1.92 (m, 3H), 2.53-2.57 (m, 1H被DMSO峰掩蓋)，2.61-2.65 (m, 2H), 2.82 (s, 6H), 2.85-2.92 (m, 3H), 3.25-3.36 (m, 2H被水峰掩蓋)，3.51-3.57 (m， 1H), 3.79 (d, J 13.8, 1H), 3.88 (s, 3H), 4.47-4.52 (m, 1H), 7.38 (d, J 7.5, 1H), 7.47-7.50 (m, 1H), 7.53-7.57 (m， 1H), 7.64 (d, J 7.5, 1H), 7.70 (d, J 8.4, 1H), 7.91 (d, J 8.4, 1H), 8.10 (s, IH); MS (ES+) m/z 460 (M+H)+。步驟5: 14-環(huán)己基-6-「2-(二曱氨基)乙基l-5，6,7,8-四氬吲哚r2,l-a1「2,51 苯并二吖辛因-ll-羧酸14-環(huán)己基-6-[2-(二曱氨基)乙基]-5,6,7,8-四氫吲哚[2,l-a][2,5]苯并二 吖辛因-ll-羧酸曱酯(0.16M, leq,得自步驟4 )在MeOH和1N NaOH (4叫)的溶液加熱到80。C6小時(shí)。冷卻至室溫后，在減壓下除去MeOH 并將所得水溶液使用3N HC1水溶液酸化直到pH 1-2,導(dǎo)致淺黃色沉淀 的形成。濾出沉淀并且在過(guò)濾器上干燥整夜，以黃色固體得到產(chǎn)物的粗 鹽酸鹽。通過(guò)RP-MS-HPLC(固定相柱Waters XTERRA制備MS C18, 5微米，30xl00毫米。流動(dòng)相用0.1% TFA緩沖的MeCN/H20)純 化。合并含有純化合物的組分并且在3N HC1水溶液的存在下凍干(2 x )， 以白色粉末得到標(biāo)題化合物的二鹽酸鹽(在步驟3、 4和5中65% )。 丄H麗R(400固z, d6-DMSO+TFA, 300 K) 5 1.12-1.15 (m, 1H), 1.31-1.36 (m, 2H), 1.53-1.56 (m, 1H), 1.67-1.72 (m, 2H), 1.82-1,84 (m, 1H), 1.90-1.99 (m, 3H), 2.62-2.69 (m， 1H), 2.87 (s, 6H), 3.45-3.50 (m， 1H), 3.62-3.82 (m, 7H)， 4.52 (d, J 13,6, 1H), 4.84 (dd, J 16.6, 4.6, 1H), 7.47-7.49 (m, 1H), 7.63-7.68 (m, 2H), 7.74 (d, J 8.4, 1H), 7.93-7.95 (m, 2H), 8.2 (s, IH); MS (ES+) m/z 446 (M+H)+。實(shí)施例1: (2E)-3-(4-([(l-U(14-環(huán)己基-3-甲氧基-6-曱基-5,6,7,8-四氫 吲咮[2,l-a][2,5]苯并二吖辛因-ll-基)羰基]氨基)環(huán)戊基)羰基]氨基)苯基) 丙烯酸歩驟1: (2EV3-(44「n-氨基環(huán)戊基)羰基l氨基l苯基)丙烯酸乙酯將1-{[(芐氧基)羰基]氨基}環(huán)戊羧酸溶于DMF( 0.2 M)。加入HATU (1 eq)和三乙胺(3 eq),然后加入(2E)-3-(4-氨基苯基)丙烯酸乙酯(0,95 eq)。所得混合物在40。C攪拌48小時(shí)。蒸發(fā)DMF,所得油狀物在EtOAc 中吸收，并且溶液使用鹽酸(3x, 1M)、水、飽和NaHC03水溶液(2 x )和鹽水洗滌。使用硫酸鈉干燥并蒸發(fā)以得到橙色固體，其使用 PE/EtOAc ( 2.5:1，含有1 %EtOH)作為洗脫液通過(guò)快速色譜在硅膠上純 化。所得固體立即溶于DCM (0.1 M)并且在室溫下滴加三氟甲石黃酸(5 叫)。在室溫下5分鐘后，紅色混合物倒入到NaHC03的水溶液中。分 離有機(jī)相，水相用DCM(4x )萃取并且合并的有機(jī)相使用硫酸鈉干燥。蒸發(fā)，以灰白色固體得到標(biāo)題化合物，其無(wú)須進(jìn)一步純化直接使用。& NMR (400固z, DMSO-d6, 300 K) S 1.26 (t, J 7.1, 3H), 1.48-1.61 (m, 2H), 1.63-1.87 (m, 4H), 1.96-2.10 (m, 2H), 4.188 (q， J 7.1 Hz, 2H), 6.53 (d, J 16.0, 1H), 6.60-7.30 (bs, 3H), 7.59 (d, J 16.0, 1H), 7.67 (d, J 8.5, 2H), 7.76 (d, J 8.5, 2H); MS (ES+) m/z 303 (M+H)+。作為其鹽酸鹽形式的(2E)-3-(4-([(l-氨基環(huán)戊基)羰基]氨基)苯基)丙 烯酸乙酯還可通過(guò)如上所述類似地方式將l-[(叔丁氧羰基)氨基]環(huán)戊酸 偶合到(2E)-3-(4-氨基苯基)丙烯酸酯上制備。然后使用在EtOAc中的鹽 酸脫保護(hù)以得到鹽酸鹽。作為游離堿或鹽形式的(2E)-3-(4-{[(1 -氨基環(huán)戊 基)羰基]氨基)苯基)丙烯酸乙酯可互換地用于隨后的偶聯(lián)一一根據(jù)需要 簡(jiǎn)單使用額外當(dāng)量的堿以中和鹽酸鹽。歩驟2: (2EV3-(4-W14rn4-環(huán)己基-3-甲氣基-6-甲基-5A7,8-四氫吲 哚r2,l-al「2,51苯并二吖辛因-ll-基)羰基l氨基l環(huán)戊基〗羰基l氨基)苯基) 丙烯酸乙酯將HATU (1.1 eq)加入到14-環(huán)己基-3-甲氧基-6-曱基-5,6,7,8-四氫 吲哚[2,l-a][2,5]苯并二吖辛因-ll-羧酸(得自說(shuō)明1, 0.015 M)、(2E)-3-(4-([(l-氨基環(huán)戊基)羰基]氨基)苯基)丙烯酸乙酯鹽酸鹽(得自步 驟1， 1.1 eq)和iPi"2NEt (3.5 eq)在無(wú)水DMF的攪拌溶液中。然后將 反應(yīng)在50。C加熱2小時(shí)。將反應(yīng)冷卻至室溫并另外加入0.2 eqHATU、 0.2 eq (2E)-3-(4-([(l-氨基環(huán)戊基)羰基]氨基〉苯基)丙烯酸乙酯鹽酸鹽和 1 eqiPr2NEt,并且重新開始加熱1.5小時(shí)。反應(yīng)冷卻至室溫，用NaHC03 飽和水溶液淬滅并萃取進(jìn)入EtOAc。水相再次用EtOAc萃取并將合并的 有機(jī)物用飽和NaHC03水溶液、水、1NHC1 (3x )和鹽水洗滌，然后使用Na2S04干燥，過(guò)濾并且在真空中進(jìn)行濃縮，以淺黃色蠟狀固體得 到產(chǎn)物(91 % )。 NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300 K) 5 1.10-1.38 (m, 6H), 1.47-1.56 (m, 1H), 1,64-1,99 (m, 10H), 2.05-2.14 (m, 2H), 2.31-2.49 (m, 5H 部分被DMSO峰掩蓋)，2.58-2.66 (m, 1H), 2.78-2.86 (m, 1H), 3.12-3.21 (m: 1H), 3.51-3.66 (m， 2H), 3.86 (s, 3H), 4.13-4.21 (m, 3H), 4.35-4.44 (m, 1H), 6.49 (d, J 16.2, 1H), 7.01-7.05 (m, 1H), 7.12 (br s, 1H), 7.26 (d, J 8,6, 1H), 7.56 (d, J 16.2, 1H), 7.60-7.68 (m， 5H), 7.80 (d, J 8.6, 1H)， 8,06 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 9.67 (s, IH); MS (ES+) m/z 703 (M+H)+。歩驟3:〖2EV3-(4-nn-Un4-環(huán)己基-3-曱氧基-6-甲基-5,6,7、8-四氫吲 咮「2丄al「2,51苯并二吖辛因-ll-基)羰基l氨基)環(huán)戊基)羰基l氨基l苯基) 丙烯酸將氫氧化鋰一水合物(2.5 eq)加入到(2E)-3-(4-{[(l-{[(14-環(huán)己基-3-曱氧基-6-甲基-5,6,7,8-四氫吲哚[2,l-a][2,5]苯并二吖辛因-ll-基)羰基]氨 基}環(huán)戊基)羰基]氨基}苯基)丙烯酸乙酯(得自步驟2)在1:1的曱醇:水 混合物中(0.06M)。反應(yīng)在40。C攪拌3小時(shí)，直到已經(jīng)發(fā)生酯的完全 水解作用。反應(yīng)冷卻至室溫，然后使用1NHC1淬滅，并且水相使用EtOAc 萃取(3次)。合并的有機(jī)物用鹽水洗滌，使用Na2S04干燥，過(guò)濾并且 在真空中進(jìn)行濃縮，以褐色固體得到粗產(chǎn)物。通過(guò)自動(dòng)RP-MS-HPLC(固 定相柱Waters XTERRA制備C18, 5微米，19xl00毫米。流動(dòng)相 用0.1。/。TFA緩沖的MeCN/H20)純化。含有純化合物的組分合并并且 在6N HC1的存在下凍干，以白色粉末得到標(biāo)題化合物的鹽酸鹽(33 % )。 & NMR (400 MHz, DMSO-d6 + TFA, 300 K) S 1.10-1.20 (m, 1H)， 1.25-1.38 (m, 2H), 1.49-1.58 (m, 1H)， 1.64-1.99 (m, 10H), 2.04-2.15 (m, 2H), 2.31-2.40 (m, 2H), 2.58-2.65 (m, 1H), 3.04 (br s, 3H), 3.38-3.49 (m, 1H), 3.60-3.76 (m, 3H), 3.90 (s, 3H), 4.29-4.36 (m, 1H)， 4.69-4.77 (m, 1H), 6.38 (d, J 16.0, 1H), 7.20-7.25 (m, 1H), 7.39 (d, J 8.8, 1H), 7,50 (d, J 16.0, 1H), 7.56-7.61 (m, 3H), 7.65 (d, J 9.0, 2H), 7.74-7.78 (m, 1H), 7.85 (d, J 8.6 1H), 8.16 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 9.71 (s, IH),IO.O (br s, IH); MS (ES+) m/z 675 (M+H)+。實(shí)施例2: (2E)-3-(4-([(l-([(14-環(huán)己基-6-曱基-5,6,7,8-四氬吲哚 [2,l-a][2,5]苯并二吖辛因-ll-基)羰基]氨基)環(huán)戊基)羰基]氨基)苯基)丙烯酸步驟1: 3-環(huán)己基-1-(1,3-二氧戊環(huán)-2-基曱基)-2-(2-曱酰基苯基)-111-巧|咮-6-羧酸甲酯向2-溴-3-環(huán)己基-l-(l,3-二氧戊環(huán)-2-基曱基)-lH-吲哚-6-羧酸甲酯 (說(shuō)明1,步驟1)在二氧六環(huán)(0.15M)的溶液中加入Na2C03 (4eq., 2M水溶液)、2-甲酰基苯基硼酸(1.5 eq)和二(三苯基膦)4巴(II)二氯化 物(0.2 eq)。將混合物脫氣，然后回流加熱45分鐘。反應(yīng)混合物的 RP-HPLC分析表明存在起始物料。因此重新開始回流加熱30分鐘。將 反應(yīng)冷卻至室溫并在水和EtOAc之間分配。水相組分用EtOAc萃取， 并且合并的有機(jī)物用鹽水洗滌，然后使用Na2S04干燥，過(guò)濾并且在真 空中進(jìn)行濃縮。原材料通過(guò)快速色鐠法(10-20%梯度的EtOAc/PE)純 化，以黃色泡沫得到標(biāo)題化合物(85% ) 。 iHNMR(300MHz,DMSO-d6, 300 K) 5 1.02-1.23 (m, 3H), 1.59-1.81 (m, 7H), 2.30-2.37 (m, 1H), 3.37-3.45 (m, 1H), 3.52-3.64 (m, 3H), 3.89 (s, 3H), 3.95-4.00 (m, 1H), 4.26 (dd, J 15.3, 2.5, 1H), 4.91-4.93 (m, 1H), 7.51 (d, J 7.1, 1H), 7.69-7,77 (m, 2H), 7.82-7.87 (m, 2H), 8.03 (d, J 7.7, 1H), 8.22 (s, 1H), 9.67 (s, IH); MS (ES+) m/z 448 (M+H)+。歩驟2: 3-環(huán)己基-l-n,3-二氧戊環(huán)-2-基曱基V242-r〖曱氨基〗甲基l苯 基hlH-吲哚-6-羧酸甲酯向3-環(huán)己基-l-(l,3-二氧戊環(huán)-l-基曱基)-2-(2-甲?；交?-lH-吲哚 -6-羧酸甲酯(得自步驟1)在THF(0.15M)的溶液中加入曱胺(10eq., THF中2 M溶液)并使用乙酸將pH調(diào)節(jié)為6。溶液在真空濃縮之前在 室溫下攪拌lh。殘余物在MeOH中吸收以得到0.075 M溶液。加入 NaBH3CN (1.5 eq)并將混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。反應(yīng)混合物的 RP-HPLC分析表明完全轉(zhuǎn)化為所需的胺。反應(yīng)用飽和NaHC03水溶液淬 滅并使用EtOAc萃取(兩次)。合并的有機(jī)物用鹽水洗滌然后使用Na2S04 干燥，過(guò)濾并且真空濃縮，以粘性油狀物得到標(biāo)題化合物(定量)。^ NMR (300 MHz, DMSO-d6, 300 K) 5 1.12-1.29 (m, 4H), 1.60-1.75 (m, 6H), 2.18 (s, 3H), 2.27-2.32 (m, 1H), 3.36 (br s, 2H,部分凈皮水峰掩蓋), 3.61-3.81 (m, 5H), 3.87 (s, 3H), 4.14-4.21 (m, 1H), 4.87 (t, J 4.2, 1H), 7.27 (d, J 7.3, 1H), 7.37-7.42 (m, 1H), 7.50-7,55 (m， 1H), 7.65-7.68 (m, 2H), 7.82 (d， J 8.4, 1H), 8.18 (s, IH); MS (ES+) m/z 463 (M+H)+。歩驟3: 14-環(huán)己基-6-甲基-5,6,7,8-四氫吲哚「2,l-al「2,51苯并二吖辛因誦ll國(guó)羧酸鹽酸(25 eq.， 3 M)加入到3-環(huán)己基-l-(l,3-二氧戊環(huán)-2-基曱 基)-2-(2-[(曱氨基)甲基]苯基卜lH-吲哚-6-羧酸曱酯(得自步驟2 )在THF (0.02M)的溶液中，并將混合物回流加熱21小時(shí)。反應(yīng)混合物等分試 樣的^NMR分析證實(shí)起始物料的完全消耗。揮發(fā)物真空除去，并且殘 余物在EtOAc和飽和NaOH水溶液(2M)(保證水相為堿性)之間分 配。水相用EtOAc萃取，并且合并的有機(jī)物用鹽水洗滌，然后使用Na2S04 干燥，過(guò)濾并且在真空中進(jìn)行濃縮。殘余物再次溶于MeOH (0.06M) 中并且在室溫下向攪拌溶液中滴加乙酸，以將pH調(diào)節(jié)至6。混合物攪 拌10分鐘，然后加入NaCNBH3 (1.5 eq) 。 18小時(shí)后反應(yīng)混合物的 RP-HPLC分析證實(shí)氨基醛完全轉(zhuǎn)化為所需的環(huán)胺。反應(yīng)用等體積的THF 稀釋并且加入NaOH (50 eq., 2 M水溶液)。反應(yīng)混合物然后在90。C 加熱10小時(shí)，然后冷卻至室溫。THF/MeOH體積真空減少，并且殘余 物在用EtOAc萃取之前(4 x )用HC1水溶液(1M)酸化。合并的有機(jī) 物用鹽水洗滌，使用Na2S04干燥，過(guò)濾并且在真空中進(jìn)行濃縮，以黃 色固體得到產(chǎn)品的鹽酸鹽。通過(guò)自動(dòng)RP-MS-HPLC (固定相柱Waters XTERRA制備C18, 5微米，19xl00毫米。流動(dòng)相用0.1。/qTFA緩 沖的MeCN/H20)純化。含有純化合物的組分合并并且凍干，以白色粉 末得到標(biāo)題化合物(40 % ) 。 & NMR (400 MHz, DMSO-d6 + TFA, 300 K) S 1.12-1.15 (m， 1H), 1.31-1.37 (m, 2H), 1.53-1.56 (m, 1H), 1.67-1.75 (m, 2H)， 1.82-1.85 (m， 1H), 1.93-1.98 (m, 3H), 2.63-2.67 (m, 1H), 3.04 (br s, 3H), 3.65-3.78 (m, 4H), 4.38-4.41 (m, 1H), 4.79-4.83 (m, 1H), 7.47-7.49 (m, 1H), 7.66-7.68 (m, 2H), 7.74 (dd， J 8.3, 1H), 7.92-7.95 (m, 2H), 8.21 (s, 1H); MS (ES+) m/z 389 (M+H)+。歩驟4:〖2EV3-(4-Un-n04-環(huán)己基-6-甲基-5,6,7,8-四氫吲哚 [2丄al[2,51苯并二吖辛因-1 l-基)羰基l氨基l環(huán)戊基)羰基1氨基1苯基)丙 烯酸(得自步驟3的14-環(huán)己基-6-甲基-5,6,7,8-四氫吲哚[2,l-a][2,5]苯并 二吖辛因-ll-羧酸和實(shí)施例1步驟1的(2E)-3-(4-([(l-氨基環(huán)戊基)羰基] 氨基)苯基)丙烯酸乙酯)以類似于實(shí)施例1、步驟2和步驟3的方式直 接進(jìn)行。iHNMR (400 MHz, DMSO-d6 + TFA, 300 K) 5 1.05-1.17 (m, 2H), 1.25-1.33 (m, 2H), 1.52-1.54 (m, 1H), 1.68-1.74 (m, 6H), 1.87-1.96 (m, 3H),2.09-2.11 (m, 2H), 2.34-2.36 (m, 2H), 2.63-2.67 (m, 1H), 3.02 (br s, 3H), 3.40-3.51 (m, 1H), 3.62-3.74 (m, 3H), 4.35-4.38 (m, 1H), 4.71-4.75 (m, 1H)， 6.33-6.37 (d, J 16.0, 1H), 7.45-7.47 (m, 2H), 7.51-7.56 (m, 3H), 7.63-7.65 (m, 4H), 7.75-7.77 (m, 1H), 7.85-7.88 (m, 1H), 7.92 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 9.69 (s, 1H), 9.98 ( br s, IH); MS (ES+) m/z 645 (M+H)+。實(shí)施例3: (2E)-3-(4-[((l-[((13-環(huán)己基-5-[2-(二甲氨基)乙基]-6,7-二 氫-5H-吲哚[l,2-d][l,4]苯并二氮雜萆-10-基)羰基)氨基]環(huán)戊基)羰基)氨 基]苯基)丙烯酸歩驟1: 2-溴-l-(2-叔丁氧基-2-氧代乙基V3-環(huán)己基-lH-吲哚-6-羧酸曱酯NaH ( 1.4eq.,礦物油中60%分散體)加入到2-溴-3-環(huán)己基-lH-吲 咮-6-羧酸曱酯在DMF ( 0.2 M)的溶液中并將溶液在室溫下攪拌1小時(shí)。 然后加入溴乙酸叔丁酯(1.1 eq)并將混合物在室溫下攪拌40分鐘。 RP-HPLC分析表明，不存在起始物料，形成單一的主要產(chǎn)物。DMF在 真空中進(jìn)行濃縮并且殘余物吸收在EtOAc中。有機(jī)相用H20 (兩次)洗 滌然后用鹽水洗滌，然后使用Na2S04干燥，過(guò)濾并且在真空中蒸發(fā)溶 劑。以呈褐色固體得到標(biāo)題化合物(90 % )。 & NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300 K) 5 1.3-1.50 (m, 12H), 1.65-1.80 (m, 3H), 1.80-2.00 (m, 4H), 2.85-2.95 (m, 1H), 3.87 (s, 3H), 5.1 (s, 2H)， 7.67 (d, J 8.4, 1H), 7.83 (d, J 8.4, 1H), 8.13 (s, IH); MS (ES+) m/z 450 (M+H)+, m/z 452 (M+H)+。歩驟2: 2-{2-「(叔丁氧羰基)氨基1苯基卜1-(2-叔丁氧基-2-氧代乙 基V3-環(huán)己基-lH-巧l咮-6-羧酸曱酯向2-溴-l-(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)-3-環(huán)己基-lH-吲哚-6-羧酸甲酯 (得自步驟1 )在二氧六環(huán)(0,15M)的溶液中加入Na2C03 (4 eq., 2M 水溶液)，[2-(4,4,5,5-四曱基-l,3,2-二氧雜戊硼烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔 丁酯(1.5eq)和二(三苯基膦)釔(II)二氯化物(0.2 eq.)?；旌衔锘亓骷訜?1小時(shí)，此時(shí)RP-HPLC分析表明起始物料完全消耗。反應(yīng)混合物過(guò)濾并 將濾液用EtOAc稀釋。有機(jī)相用H20、鹽水洗滌，然后使用Na2S04干 燥，過(guò)濾并在真空中進(jìn)行濃縮。粗產(chǎn)物通過(guò)快速色譜法(Biotagecatridge Si40M, 0.8:9.2 EtOAc/PE)純化，以白色固體得到標(biāo)題化合物(65% )。 丄H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300 K) S 1.10-1.40 (m, 20H), 1.50-1.90 (m， 8H), 2.20-2.40 (m, 1H), 3.87(s, 3H), 4.51-4.73 (m, 2H), 7.10-7.22 (m, 2H),7.45-7.52 (m, 1H), 7.65-7.71 (m， 2H), 7.78-7.82 (m, 1H), 7.86 (d, J 8.4, 1H) 8.10 (s, IH); MS (ES+) m/z 563 (M+H)+。步驟3: 13-環(huán)己基-6-氧代-6,7-二氫-5H-吲哚「l,2-din,41苯并二氮雜 蕈-10-羧酸甲酯向2-{2-[(叔丁氧羰基)氨基]苯基}-1-(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)-3-環(huán) 己基-lH-吲哚-6-羧酸曱酯(得自步驟2 )在DCM/H2〇1:1的混合物的溶 液中加入大大過(guò)量(> 200 eq)的TFA并將溶液在40。C攪拌10小時(shí)。 RP-HPLC分析表明起始物料完全消耗。真空除去溶劑。粗殘余物通過(guò)快 速色譜(Biotage catridge Si40M， 4:6 EtOAc/PE)純化，以白色固體得到 標(biāo)題化合物(74 % )。 & NMR (400固z, DMSO-d6, 300 K) 5 1.10-1.20 (m, 1H), 1.30-1.55 (m, 3H), 1.65-1.80 (m， 2H), 1.81-1.9 (m, 1H)， 1.98-2.11 (m, 3H) 2.80-2.92 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 4.54 (d, J 14.7, 1H), 5.08 (d, J 14.7, 1H), 7.29 (d, J 7.8, 1H), 7.38-7.42 (m, 1H), 7.51-7.55 (m, 2H), 7.69 (d, J 8.5: 1H)， 7,97 (m, J 8.5 1H), 8.28 (s, 1H), 10.3 (s, IH); MS (ES+) m/z 389 (M+H)+。歩驟4: 13-環(huán)己基-5-「2-(二甲氨基V2-氧代乙基l-6-氧代-6,7-二氪-5H-吲哚「l,2-diri,41苯并二氮雜簟-10-羧酸甲酯NaH ( 1.4 eq.，礦物油中60 %分散體)加入到13-環(huán)己基-6-氧代-6,7-二氫-5H-吲哚[l,2-d][l,4]苯并二氮雜萆-10-羧酸甲酯(得自步驟3)在 DMF ( 0.15 M)的溶液中，并且溶液在室溫下攪拌45分鐘。然后加入2-氯-N,N-二曱基乙酰胺(1.1叫)并將混合物在室溫下攪拌20分鐘。 RP-HPLC分析表明不存在起始物料，所需產(chǎn)物作為主峰。溶液用EtOAc 稀釋并且用1NHC1洗滌。水相用EtOAc (3x )萃取，并且合并的有機(jī) 物用鹽水洗滌，然后使用Na2S04干燥，過(guò)濾并且真空蒸發(fā)溶劑。粗產(chǎn) 物通過(guò)快速色^普(Biotage catridge Sil2M, 9:1 EtOAc/PE)純化以得到標(biāo) 題化合物(73% ) 。 ^NMR(400 MHz,DMSO-d6, 300 K)S 1.15-1.23 (m, 1H), 1.35-1.48 (m, 2H), 1.55-1.61 (m, 1H) 1.70-1.77 (m, 2H), 1.85-2,11, (m, 4H), 2.46-2.51 (m, 1H部分被DMSO峰掩蓋)，2.82 (s, 3H), 2.90 (s, 3H), 3.89 (s, 3H), 4.42 (d, J 16.8, 1H), 4.49 (d, J 14.6, 1H), 4.66 (d, J 16.8, 1H), 5.20 (d, J 14.6, 1H), 7.42-7.49 (m, 2H), 7.52-7.68 (m， 2H), 7.69 (d, J 8.8, 1H), 7.96 (d, J 8.8, 1H), 8.29 (s, IH); MS (ES+) m/z 474(M+H)+。歩驟5: 13-環(huán)己基-5-『2-〖二甲氨基)乙基l-6,7-二氫-5H-吲哚n,2-din,4i苯并二氮雜簟-io-羧酸甲酯13-環(huán)己基-5-[2-(二曱氨基)-2-氧代乙基]-6-氧代-6,7-二氫-5H-吲哚 [1,2-d][l,4]苯并二氮雜萆-10-羧酸曱酯(得自步驟4)在THF (0.15 M)的 溶液中加入BH3.Me2S (20eq., THF中2M溶液)并將混合物在室溫下 攪拌3小時(shí)。RP-HPLC分析表明不存在起始物料，形成新的單一主要產(chǎn) 物。通過(guò)加入MeOH中1.25N的HC1小心地淬滅溶液，直到停止冒泡。 然后通過(guò)將混合物煮沸至無(wú)水以分離揮發(fā)物。粗殘余物直接用于下一 步。MS (ES+) m/z 446 (M+H)+。歩驟6: 13-環(huán)己基-5-「2-(二曱氨基)乙基l-6,7-二氫-5H-吲哚 ri，2-dl「l，41苯并二氮雜蕈-10-羧酸向13-環(huán)己基-5-[2-(二曱氨基)乙基]-6,7-二氫-5H-吲哚[l,2-d][l,4]苯 并二氮雜萆-10-羧酸曱酯(得自步驟5)在MeOH (0.06M)的溶液中加 入5eqlNNaOH。溶液在60。C攪拌5小時(shí)，此時(shí)RP-HPLC分析表明不 存在起始物料，并且產(chǎn)物的形成作為主峰。真空蒸發(fā)溶劑。粗產(chǎn)物然后 通過(guò)RP-HPLC (固定相柱Waters XTERRA制備C18, 5微米，19 x 150毫米。流動(dòng)相用0.1 % TFA緩沖的MeCN/H20)純化。含有純化 合物的組分合并并且凍干，以35%收率(兩個(gè)步驟中)以黃色粉末得到 標(biāo)題化合物。& NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300 K) S 1.15-1.55 (m, 4H), 1.70-2.10 (m, 6H), 2.46 (s, 6H), 2.70-2.82 (m, 1H), 3.00-3.20 (m, 3H), 3.50-4.00 (m, 4H), 4.70-4.85 (br s, 1H), 7.25-7.38 (m, 3H), 7.50 (t, J 7.2, 1H), 7.61 (d, J 8.4, 1H), 7.86 (d, J 8.4, 1H), 8.12 (s, 1H), 9.14 (br s, 1H), 12.6 (br s, 1H); MS (ES+) m/z 432 (M+H)+。歩驟7: (2EV344-r(U-「(n3-環(huán)己基-5-「2-r二曱氨基)乙基l-6,7-二氫 -511-卩引咮「1,2-(11「1,41苯并二氮雜簟-10-基}羰基〗氨基1環(huán)戊基}羰基)氨基1 苯基l丙烯酸(由得自步驟6的13-環(huán)己基-5-[2-(二曱氨基)乙基]-6,7-二氫-5H-吲 哚[l,2-d][l,4]苯并二氮雜萆-10-羧酸和實(shí)施例1步驟1的(2E"-(4-U(l-氨基環(huán)戊基)羰基]氨基}苯基)丙烯酸乙酯開始)以類似于實(shí)施例1、步驟 2和步驟3的方式直接進(jìn)行——在全部?jī)蓚€(gè)水處理中省略酸洗。& NMR (400固z, DMSO-d6, 300 K) S 1.15-1.46 (m, 4H), 1.60-1.90 (m, 8H), 1.95-2.20 (m, 4H), 2.30-2.40 (m, 2H)， 2.46 (s, 6H), 2.75-2.85 (m, 1H), 3.00-4.00 (m, 3H), 3.50-4.00 (m， 5H部分被水峰掩蓋)，6.38 (d, J 16.0, 1H)7.27-7.40 (m, 3H), 7.50 (d， J 16, 1H), 7.48-7.52 (m， 1H), 7.54-7.70 (m, 6H)， 7.81 (d, J 8.5,1H), 8.18 (s， 1H), 8.29 (s, 1H), 9.14 (br s, 1H), 9.67 (s, 1H), 12.20 (br s, 1H); MS (ES+) m/z 688 (M+H)+。實(shí)施例4: (2E)-3-(4-[((l-[((14-環(huán)己基-6-[2-(二曱氨基)乙基]-5,6,7,8畫 四氫吲哚[2,l-a][2,5]苯并二吖辛因-ll-基)羰基)氨基]環(huán)戊基)羰基)氨基] 苯基)丙烯酸(由得自說(shuō)明2的14-環(huán)己基-6-[2-(二曱氨基)乙基]-5,6,7,8-四氫吲 哚[2,l-a][2,5]苯并二吖辛因-ll-羧酸和實(shí)施例1步驟1的(2E)-3-(4-([(" 氨基環(huán)戊基)羰基]氨基}苯基)丙烯酸乙酯開始)以類似于實(shí)施例1、步驟 2和步驟3的方式直接進(jìn)行——在全部?jī)蓚€(gè)水處理中省略酸洗。^NMR (400固z, DMSO-d6 + TFA, 300 K) 5 1.10-1.20 (m, 1H), 1.25-1.40 (m, 2H): 1.50-1.60 (m, 1H), 1.65-1.85 (m, 7H), 1.90-2.00 (m, 3H), 2.11-2.16 (m, 2H), 2.29-2.43 (m, 2H), 2.50-2.70 (m, 1H), 2.85 (s, 6H), 3.38-3.50 (m, 1H), 3.50-3.77 (m, 7H), 4.40 (d， J 13.6, 1H), 4,77 (m, 1H), 6.56 (d, J 16.0, 1H), 7.46-7.52 (m, 2H), 7.55-7.60 (m, 2H), 7.62-7.69 (m, 4H), 7.80-7.91 (m, 3H), 8.11 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 9.71(s, 1H); MS (ES+) m/z 702 (M+H)+。實(shí)施例5: (2E)-3-(4-[((l-[(((7R)-14-環(huán)己基-7-[[2-(二曱氨基)乙 基](甲基)氨基]-7,8-二氫-6H-吲哚[l,2-e][l,5]苯并嚙唑辛-ll-基)羰基)氨 基]環(huán)戊基}羰基)氨基]苯基}丙烯酸向(7R)-N-(ll-羧基-14-環(huán)己基-7,8-二氫-6H-吲哚[l,2-e][l,5]苯并噹 唑辛-7-基)-N,N',N'-三曱基乙烷-l,2-二銨雙(三氟乙酸鹽)(如公開的國(guó)際 專利申請(qǐng)WO 2006/04603，實(shí)施例9和12所述制備)和(2E)-3畫(4國(guó)([(1國(guó) 氨環(huán)戊基)羰基]-氨基)苯基)丙烯酸曱酯的鹽酸鹽(l丄eq,實(shí)施例1步驟 1乙酯部分制備)在無(wú)水DMF (0.14 M)的溶液中加入DIPEA (6 eq.) 和HATU ( 1.5 eq.),并將所得混合物在室溫下攪拌60小時(shí)。然后混合 物用EtOAc稀釋，并用飽和NaHC03水溶液和鹽水萃取。使用Na2S04 干燥后全部揮發(fā)物真空蒸發(fā)，并將殘余物溶于THF/MeOH/水(4:1:1 )， 并加入氫氧化鋰一水合物(1.5 eq)。混合物在40。C攪拌3小時(shí)。然后 在真空中蒸發(fā)全部揮發(fā)物，并將殘余物通過(guò)質(zhì)量-指導(dǎo)的制備性 RP-HPLC (固定相柱Waters XTERRA制備C18, 5微米，19 x 150亳 米。流動(dòng)相用0.1 % TFA緩沖的MeCN/H20)純化。產(chǎn)品組分冷凍 干燥后，以無(wú)色粉末得到產(chǎn)物。& NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300 K) 5<formula>formula see original document page 33</formula>
權(quán)利要求
1.式(I)化合物其中Ar為含有至少一個(gè)芳環(huán)并且5-、6-、9-或10-環(huán)原子任選含有1、2或3個(gè)獨(dú)立地選自N、O和S的雜原子的部分，所述環(huán)任選被基團(tuán)Q1和Q2取代；Q1為鹵素、羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、芳基、雜芳基、CONRaRb、(CH2)0-3NRaRb、O(CH2)1-3NRaRb、O(CH2)0-3CONRaRb、O(CH2)0-3芳基、O(CH2)0-3雜芳基、OCHRcRd；Ra和Rb每個(gè)獨(dú)立地選自氫、C1-4烷基和C(O)C1-4烷基；或Ra、Rb和其所連接的氮原子一起形成4-7個(gè)環(huán)原子的雜脂肪族環(huán)，其中所述環(huán)任選被鹵素、羥基、C1-4烷基或C1-4烷氧基取代；Rc和Rd每個(gè)獨(dú)立地選自氫和C1-4烷氧基；或Rc、Rd和通過(guò)選自N、O和S的雜原子連接以形成4-7個(gè)環(huán)原子的雜脂肪族環(huán)，其中所述環(huán)任選被鹵素、羥基、C1-4烷基或C1-4烷氧基取代；并且其中所述C1-4烷基、C1-4烷氧基和芳基任選被鹵素或羥基取代；Q2為鹵素、羥基、C1-4烷基或C1-4烷氧基，其中所述C1-4烷基和C1-4烷氧基任選被鹵素或羥基取代；或Q1和Q2可通過(guò)鍵或選自N、O和S的雜原子連接以形成4-7個(gè)原子的環(huán)，并且所述環(huán)任選被鹵素、羥基、C1-4烷基或C1-4烷氧基取代；A為C3-6烷基或C2-6烯基；或者A為3-8個(gè)環(huán)原子的非芳環(huán)，其中所述環(huán)可含有雙鍵和/或可含有O、S、SO、SO2或NH部分；或A為4-8個(gè)環(huán)原子的非芳香雙環(huán)部分；并且A任選被鹵素、羥基、C1-4烷基或C1-4烷氧基取代；R1為氫、C1-6烷基或C2-6烯基；R2為氫或C1-6烷基；L為其中R3和R4每個(gè)獨(dú)立地選自氫、鹵素、C1-4烷基、C2-4烯基或C1-4烷氧基；或R3和R4連接以形成C3-8環(huán)烷基；B為芳基、雜芳基、CONR5R6，任選被鹵素、C1-4烷基、C2-4烯基或C1-4烷氧基取代；R5為氫或C1-6烷基；或R5連接到R3和/或R4以形成5-10元環(huán)，其中所述環(huán)可以是飽和的、部分飽和的或不飽和的，并且其中所述環(huán)任選被鹵素、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基或C1-4烷氧基取代；R6為芳基或雜芳基；或R5、R6與其所連接的氮原子形成5-10元單或二環(huán)環(huán)系，其中所述環(huán)可以是飽和的、部分飽和的或不飽和的，并且其中所述環(huán)任選被鹵素、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基或C1-4烷氧基取代；D為鍵、C1-6亞烷基、C2-6亞烯基、C2-6亞炔基、芳基或雜芳基，其中所述芳基或雜芳基任選被鹵素、C1-4烷基或C2-4烯基取代；W和Z獨(dú)立地選自鍵、C＝O、O、S(O)0-2、(CR10R11)-(CR12R13)0-1和NR10；X和Y獨(dú)立地選自鍵、C＝O、O、CR14R15和NR14；并且W、X、Y和Z中都不是鍵，或者W、X、Y和Z中一個(gè)或兩個(gè)為鍵；R10、R11、R12、R13、R14和R15每個(gè)獨(dú)立地選自氫、羥基、C1-6烷基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、C(O)C1-6烷基、Het、(CH2)0-3NR16R17、C(O)(CH2)0-3NR16R17、NHC(O)(CH2)0-3NR16R17、O(CH2)1-3NR16R17、S(O)0-2(CH2)0-3R16R17和C(O)(CH2)0-3OR16；Het為4-7個(gè)環(huán)原子的雜脂肪族環(huán)，該環(huán)可含有1、2或3個(gè)選自N、O或S的雜原子或S(O)、S(O)2、NH或NC1-4烷基的基團(tuán)；R16和R17獨(dú)立地選自氫、C1-6烷基和(CH2)0-4NR18R19；或R16、R17與其所連接的氮原子一起形成4-7個(gè)環(huán)原子的雜脂肪族環(huán)，所述環(huán)可任選還含有1或2個(gè)選自O(shè)或S的雜原子或基團(tuán)S(O)、S(O)2、NH或NC1-4烷基，并且所述環(huán)任選被鹵素、羥基、C1-4烷基或C1-4烷氧基取代；R18和R19獨(dú)立地選自氫和C1-6烷基；或R18、R19與其所連接的氮原子一起形成4-7個(gè)環(huán)原子的雜脂肪族環(huán)，所述環(huán)可任選還含有1或2個(gè)選自O(shè)或S的雜原子或基團(tuán)S(O)、S(O)2、NH或NC1-4烷基，并且所述環(huán)任選被鹵素、羥基、C1-4烷基或C1-4烷氧基取代；以及其藥學(xué)上可接受的鹽。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中Ar為任選含有1、 2或3 個(gè)獨(dú)立地選自N、 O和S的雜原子的五元或六元芳環(huán)，并且該環(huán)4壬選祐_ 如上所定義的基團(tuán)(^和(^2取代。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的化合物，其中A為C3-6坑基、C2-6烯基或C3-8環(huán)烷基，其中A任選被鹵素、羥基、d-4烷基或d-4烷氧基取代。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項(xiàng)所述的化合物，其中W為氫或d.4烷基。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的化合物，其中R"為氫或Cm烷基。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)所述的化合物，其中113和114連接 以形成環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1-6中任意一項(xiàng)所述的化合物，其中B為CONR5 芳基，任選被卣素、Cw烷氧基取代，其中115如權(quán)利要求1所定義。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1-7中任意一項(xiàng)所述的化合物，其中D為鍵或亞 乙烯基。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1-8中任意一項(xiàng)所述的化合物，其中W為鍵、C二0、 -(CRWRUHCRUR13)^^ NR1。，其中R1。、 R11、 R12和R13如權(quán)利要求1 所定義。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1-9中任意一項(xiàng)所述的化合物，其中Z為鍵、C=0, 0, -(01101111)畫(。11121113)0-1-或NR10,其中R10、 R11、 RU和R"如權(quán)利要 求1所定義。
11. 根據(jù)權(quán)利要求1-10中任意一項(xiàng)所述的化合物，其中X為C二O、 -CR"R"-或NR14，其中R14和R15如權(quán)利要求1所定義。
12. 根據(jù)權(quán)利要求1-11中任意一項(xiàng)所述的化合物，其中Y為C=0、 O、 -CR14R15^^NR14,其中R"和R"如權(quán)利要求1所定義。
13. 權(quán)利要求1所述式(Ia)的化合物(ia)或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中W、 X、 Y和Z如權(quán)利要求1所定義。
14.如權(quán)利要求1所述的化合物，選自(2E)-3-(4-{[(l-{[(14-環(huán)己基-3-曱氧基-6-甲基-5,6,7,8-四氬吲哚 [2,l-a][2,5]苯并二吖辛因-ll-基)羰基]氨基)環(huán)戊基)羰基]氨基〉苯基)丙烯酸，(2E)-3-(4-([(l-U(14-環(huán)己基-6-曱基-5,6,7,8-四氫吲哚[2,l-a][2,5]苯并 二吖辛因_ 11 -基)羰基]氨基)環(huán)戊基)羰基]氨基}苯基)丙烯酸，(2E)-3-(4-[((l-[((13-環(huán)己基-5-[2-(二曱氨基)乙基]-6,7-二氫-5H-吲哚 [1,2-(1][1,4]苯并二氮雜萆-10-基}羰基)氨基]環(huán)戊基}羰基)氨基]苯基}丙烯酸，(2E)-3-{4-[({l-[(( 14-環(huán)己基-6-[2-(二甲氨基)乙基]-5,6,7,8-四氫吲哚 [2,"][2,5]苯并二吖辛因-11-基}羰基)氨基]環(huán)戊基}羰基)氨基]苯基}丙烯酸，(2E)-3-(4-[((l-[(((7R)-14-環(huán)己基-7-[[2-(二曱氨基)乙基](曱基)氨 基]-7,8-二氫-611-吲哚[1，2《][1,5]苯并哺唑辛-11-基}羰基)氨基]環(huán)戊基}羰基)氨基]苯基}丙烯酸，以及其藥學(xué)上可接受的鹽。
15. 用于治療學(xué)中的權(quán)利要求1-14中任意一項(xiàng)所述化合物或其藥學(xué) 上可接受的鹽。
16. 權(quán)利要求1-14中任意一項(xiàng)所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽用 于制造在人或動(dòng)物中治療或預(yù)防丙型肝炎病毒感染的藥物中的應(yīng)用。
17. 含有權(quán)利要求1-14中任意一項(xiàng)所述化合物或其藥學(xué)上可接受的 鹽與藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。
18. 如權(quán)利要求17所述的藥物組合物，另外含有一種或多種用于 治療病毒感染的其它藥物，例如抗病毒藥，或免疫調(diào)節(jié)劑，例如ot-、 P -或y -干擾素。
19. 一種抑制丙型肝炎病毒聚合酶和/或治療或預(yù)防丙型肝炎病毒引 起的疾病的方法，所述方法包^^向患有所述疾病的人或動(dòng)物(優(yōu)選哺乳 動(dòng)物)患者給藥治療或預(yù)防有效量的權(quán)利要求17或權(quán)利要求18所述的 藥物組合物或權(quán)利要求1-14中任意一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上可接 受的鹽。
20. 在偶聯(lián)劑和堿的存在下在合適的有機(jī)溶劑中通過(guò)式(II)化合 物與式(III)化合物的反應(yīng)制備權(quán)利要求1-14中任意一項(xiàng)所述化合物的 方法其中R1、 R2、 L、 A、 Ar、 W、 X、 Y和Z如權(quán)利要求1中所定義，偶聯(lián) 劑例如HATU,堿例如二異丙基乙胺，合適的溶劑例如DMF。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I)的四環(huán)吲哚衍生物其中Ar、A、R¹、R²、L、W、X、Y和Z如此處所定義，以及其藥學(xué)上可接受的鹽、含有其的藥物組合物，以及其用于治療或預(yù)防丙型肝炎病毒感染的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K31/5517GK101258155SQ200680032904
公開日2008年9月3日 申請(qǐng)日期2006年9月1日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月9日
發(fā)明者F·納耶斯, I·斯坦斯費(fèi)爾德 申請(qǐng)人:P.安杰萊蒂分子生物學(xué)研究所