專利名稱：：作為hdac抑制劑的fk228衍生物的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及作為HDAC抑制劑的特定酯肽類物質(zhì)。技術背景組蛋白脫乙酰酶(HDAC)為催化乙酰化賴氨酸殘基水解的鋅金屬酶。在組蛋白中，這使賴氨酸回到其正常的質(zhì)子化狀態(tài)，是真核轉(zhuǎn)錄調(diào)控的全^制，其結(jié)果是4吏核小體中DNA緊密包裝。此外，可逆的賴氨酸乙?；欠墙M蛋白蛋白質(zhì)重要的調(diào)節(jié)過程。因此，能調(diào)節(jié)HDAC的化合物具有重要的治療學潛能。兩種天然產(chǎn)物酯肽FK228和SpimchostatinA已凈皮才艮道具有作為HDAC抑制劑的潛能。但化學改性這些天然產(chǎn)物以提供另外的類似物的可能性非常有限。
發(fā)明內(nèi)容現(xiàn)在我們驚奇地發(fā)現(xiàn)，具有下面列出的通式(I)和(I')的化合物可作為HDAC抑制劑。因此，本發(fā)明提供了為FK228類似物的式(I)或(I')化合物、其等排物或其藥學可接受的鹽在用作HDAC抑制劑的藥物的生產(chǎn)中的用途。o其中，RpR2、R3和R4相同或不同，代表M酸側(cè)鏈部分，各R^相同或不同，代表氫或d-Ci烷基，P—和P一相同或不同，代表氬或硫羥保護基。本發(fā)明還提供了如上所定義的FK228類似物或其藥學可接受的鹽在用作HDAC抑制劑的藥物的生產(chǎn)中的用途。本文中用到的術語"Jl^酸側(cè)鏈部分"指天然和非天然氬基酸中存在的任何氨基酸側(cè)鏈。衍生自非天然氨基酸的氨基酸側(cè)鏈部分的實例(其衍生源M酸在括號中示出)為-(CH2)2-C(0)-0-C(CH3)3(叔丁氧羰基甲基丙氨酸(analine))、-(CH2)4-NH-C(0)-0-C(CH3)3(]N^-(叔丁氧il^)-賴氨酸)、-(CH2)3-NH-C(0)NH2(瓜氨酸)、-CH2-CH2OH(高絲氨酸)和-(CH2)2-CH2NH2(鳥氨酸)。特別值得一提的是(CH2)3-NH-C(0)NH2(瓜氨酸)、-CH2-CH2OH(高絲氨酸)和(CH2)2-CH2NH2(鳥氨酸)。Cr"C6烷基基團或部分可為線型或支化的。通常其為d-C4烷基基團或部分，例如曱基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基和叔丁基。優(yōu)選的實例包括曱基、異丙基和叔丁基。C2-C6烯基基團或部分可為線型或支化的。通常其為CVC4烯基基團或部分。優(yōu)選所述烯基為單或二不飽和的，更優(yōu)選單不飽和的。實例包括乙烯基、烯丙基、l-丙烯基、異丙烯基、l-丁烯基、2-丁烯基和3-丁烯基。亞烷基為二價的所述烷基。所述硫羥保護基通常為(a)形成硫醚以保護硫羥基團的保護基，例如任選地被d-C6烷氧基(例如甲氧基)、d-Q酰lL&(例如乙酰lL&)、羥基和硝基取代的卡基、吡啶甲基、吡啶甲基-N-氧化物、蒽基甲基、二苯甲基、苯基、叔丁基、金剛烷基(adamanthyl)、Q-C6酰氧甲基(例如新戊酰氧甲基、叔丁ftJJ^氧曱基)；(b)形成單硫、二硫或氨基硫縮醛以保護硫羥基的保護基，例如CrC6烷氧基甲基(例如甲氧基甲基、異丁氧基甲基)、四氫吡喃基、芐_^>5克曱基、苯^5危甲基、噻唑烷、乙酰胺甲基、苯甲酰M甲基；(c)形成硫酯以保護硫羥基的保護基，例如叔丁氧羰基(BOC)、乙酰基和其衍生物、苯甲酰和其^f生物；或(d)形成氨基甲酸硫酯以保護硫羥基的保護基，例如氨基甲酰基、苯基絲曱酰基、d-C6烷基M甲?；?例如甲基絲甲酰基和乙基絲曱?；?。通常，P—和P—相同或不同，各自代表氫或形成硫醚、單硫、二硫或氨基硫縮醛、硫酯或氨基曱酸硫酯以保護硫羥基的保護基。優(yōu)選P—和P—相同或不同，各自代表氫或保護基，所述保護基選自任選地被d-C6烷氧基(例如甲H&)、Q-C6酰氧基(例如乙酰lL^)、羥基和硝基取代的芐基、吡啶甲基、吡啶曱基-N-氧化物、蒽基甲基、二苯甲基、苯基、叔丁基、金剛烷基、CrC6酰氧甲基(例如新戊酰氧甲基、叔丁氧基^^氧甲基)、CrC6烷氧基甲基(例如曱lL^甲基、異丁氧基甲基)、四氫吡喃基、節(jié)基琉甲基、苯基硫甲基、噻唑烷、乙酰胺甲基、苯甲酰氨基曱基、叔丁氧羰基(BOC)、乙?；推溲苌?、苯甲?；推溲苌铩⒓柞；?、苯基M甲?；蚫-C6烷基M甲酰基(例如甲基氛基甲?；鸵一被鶗貂；?。最優(yōu)選P—和P一為氫。在一個實施方案中，所述氨基酸側(cè)鏈部分為衍生自天然氨基酸的那些。衍生自天然氨基酸的氨基酸側(cè)鏈部分的實例(其衍生源M酸在括號中示出)為-H(甘氨酸)、-CH3(丙氨酸)、-CH(CH3)2(纈氨酸)、-CH2CH(CH3)2(亮氨酸)、-01(13)<:112013(異亮氨酸)、(CH2)4NH2(賴氨酸)、-(CH2)3NHC(=NH)NH2(精氨酸)、-12-(5-1樂咪唑基)(組氨酸)、-CH2CONH2(天冬酰胺)、-CH2CH2CONH2(谷氨酰胺)、CH2COOH(天冬氨酸)、-CH2CH2COOH(谷氨酸)、-CHr苯基(苯丙氨酸)、-CHH4-OH-苯基)(酪氨酸)、《112-(3-1樂吲咮基)(色氨酸)、-CH2SH(半胱氨酸)、-CH2CH2SCH3(蛋氨酸)、-CH2OH(絲氨酸)和-CH(OH)CH3(蘇氨酸)。在一個實施方案中，各M酸側(cè)鏈為存在于天然氨基酸中的M酸側(cè)鏈部分或為-(CH2)2-C(0)-0-C(CH3)3(叔丁氧羰基甲基丙氨酸)、-(CH2)4-NH-C(0)-0-C(CH3)3(N￡-(叔丁氧羰基)-賴氨酸)、-(CH2)3-NH-C(0)NH2(瓜氨酸)、-CH2-CH2OH(高絲氨酸)或-(CH2)2-CH2NH2(鳥氨酸)。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，各氨基酸側(cè)鏈為選自-H、《1-(:6烷基、C2-C6烯基、-L-O-C(O)-R'、-L國C(O)-O-R"、-L曙A、-L-NR'R'、-L-Het-C(O)-Het-R"和-L-Het-R"的部分，其中L為d-C6亞烷基，A為苯基或5-到6-元雜芳基，各R'相同或不同，代表d-C4烷基，各R"相同或不同，代表H或d-C6烷基，各-Het-相同或不同，為選自-O-、-N(R"')-和-S-的雜原子間隔基，各R'〃相同或不同，代表H或d-C4烷基。當基團A為5到6元雜芳基時，其可為例如呋喃基、噻吩基、吡咯基、。惡哇基、瘞唑基、咪唑基、吡唑基、異口惡唑基、異瘞唑基、口惡二唑基、三哇基、噻二唑基、吡免基、歧噢基(pyridazyl)、嘧梵基、吡溱基、三噪基。但通常各個A部分為苯基。雜原子間隔基Het通常為-0-或-N(R〃')-。更通常其為-0-或-N(H)-。優(yōu)選各氨基酸側(cè)鏈為選自-H、-d-C6烷基、-L-C(O)-O-R"、-L-A、幽1^\11''議''和丄-4(11'')-(:(0)-0-11''的部分，其中L、A和R"的定義同上。通常本發(fā)明的化合物的氨基酸側(cè)鏈部分選自(CH2)2-C(0)-0-C(CH3)3、-(CH2)4-NH-C(0)-0-C(CH3)3、(CH2)2-C(0)OH、CH2C6H5、-H、-CH3、CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)CH2CH3、(CH2)4NH2、CH2SH、-CH2CH2SCH3、-CH2OH和-CH(OH)CH3。更通常所述氨基酸側(cè)鏈部分選自-H、-CH3、CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)CH2CH3、(CH2)4NH2、CH2SH、-CH2CH2SCH3、-CH2OH和-CH(OH)CH3。優(yōu)選所述氨基酸側(cè)鏈部分選自-H、-CH3、(CH2)2-C(0)0-C(CH3)3、-(CH2)4-NH-C(0)-0-C(CH3)3、(CH2)2-C(0)OH、-CH2-C6H5、(CH2)4NH2~-CH(CH3)2。在本發(fā)明的一個實施方案中，所述^J^酸側(cè)鏈部分選自-H、《113和-01(013)2。通常，R為選自-h、-(:1-<:6烷基、-(:2-(:6烯基、-l-o-c(o)國r'、-L-C(O)-O-R'、-L-A、-L畫NR'R'、-L-Het-C(O)-Het-R'和-L-Het國R''的絲酸側(cè)鏈部分，其中L、R'、R"、-Het-和R'"的定義同上。優(yōu)選Ri為選自誦H、d-C6烷基、-L-C(O)-O-R'、陽L-A、-L畫NR'R'和-L-N(R")-C(O)-O-R"的部分，其中L、A和R"的定義同上。更優(yōu)選Ri為選自-H和-d-C6烷基的部分。還更優(yōu)選Ri為-d-C4烷基，特別是異丙基。通常，R2為選自譯H、-d-C^;^^,腸C2-C6烯基、國L-O-C(O)-R'、-L-C(O)-O-R'、-L-A、L-NR〃R'、-L-Het-C(O)-Het-R'和-L隱Het-R"的M酸側(cè)鏈部分，其中L、R'、R"、-Het-和R'"的定義同上。優(yōu)選R2為選自-H、d畫C6烷基、-L-C(O)-O塵R'、-L曙A、-L-NR'R'和-L-N(R")-C(O)-O-R"的部分，其中L、A和R"的定義同上。更優(yōu)選R2為選自-H和-d-C4烷基的部分。還更優(yōu)選R2為-H、-CH3或-CH(CH3)2。甚至更優(yōu)選R2為-H或-CH3。通常，R3為選自-H、-CVC6烷基、-C;rC6烯基、-L-O-C(O)-R'、-L-C(O)-O-R'、-L曙A、-L-NR'R'、-L-Het-C(O)-Het-R'和畫L-Het-R"的氨基酸側(cè)鏈部分，其中L、R'、R〃、-Het-和R'〃的定義同上。優(yōu)選R3為選自-H、C廠C6烷基、-L-C(O)-O-R'、-L-A、L畫NR〃R'和-L-N(R")-C(O)-O-R"的部分，其中L、A和R"的定義同上。更優(yōu)選R3為(CH2)2-C(0)0-C(CH3)3、(CH2)4-NH-C(0)0-C(CH3)3、(CH2)2C(0)OH、-CH2-C6H5、CH3、-CH(CH3)2或(CH2)4NH2。通常，R4為選自-H、國d畫C6烷基、-<:2畫<:6烯基、-L-O畫C(O)-R'、-L-C(O)-O國R'、-L隱A、L-NR〃R'、-L-Het畫C(O)-Het畫R'和-L-Het-R''的氨基酸側(cè)鏈部分，其中L、R'、R"、-Het-和R'"的定義同上。優(yōu)選R4為選自-H、CVC6烷基、L-C(0)-0-R〃、-L-A、-L畫NR'R'和-L-N(R")-C(O)-O-R"的部分，其中L、A和R"的定義同上。更優(yōu)選R4為氫、-(^-(:6烷基或-(:2-<:6烯基。還更優(yōu)選R4為氫或-d-C4烷基，更優(yōu)選氫。通常，各R6相同或不同，為氬或-d-C2烷基。優(yōu)選各Rfi為氫。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了如上所定義的為式(I)化合物的FK228類似物、其等排物或其藥學可接受的鹽。本發(fā)明的優(yōu)選化合物為如上所定義的FK228類似物(其中&選自-H和-CrC6烷基，R2選自-H和-CVC4烷基、R3選自-H、-(^-(:6烷基、-L-C(O)-O-R'、-L-A、-L-NRR〃和-L-N(R〃)誦C(0)-0-R',其中L、A和R〃的定義同上，R4選自-H和-d-C6烷基，各&相同或不同，為氫或-d-C2烷基)、其等排物和其藥學可接受的鹽。本發(fā)明的進一步優(yōu)選的化合物為(a)式(I)化合物(其中R為-Q-C4烷基、R2選自-H和-CH3，R3選自-H、-d-Cs烷基、L-C(0)-0-R〃、國L國A、-L-NR''R'，-L-N(R')-C(0)-0-R'，其中L、A和R'的定義同上，R4為-H，各R6為-H)、其等排物和其藥學可接受的鹽，和(b)式(I')化合物(其中Ri為-CrC4烷基、R2選自-H和-CH3，R3選自-H、-d-C6烷基、-L誦C(O)-O-R'、-L-A、-L-NR'R'和-L-N(R')-C(O)-O-R'，其中L、A和R"的定義同上，R4為-H，各R6為-H，P—和P一為氫)、其等排物和其藥學可接受的鹽。還特別優(yōu)選的式(I)化合物為其中Ri為-CH(CH3)2、R2為-CH3、R3為-CH3、Rj為氫、R6為-H;Ri為-CH(CH3)2、R2為-H、R3為-(CH2)2-C(0)-0-C(CH3)3、R4為氫、R^為-H;R!為-CH(CH3)2、R2為-H、R3為-(CH2)2國C(0)國OH、R4為氫、R6為-H;Ri為-CH(CH3)2、R2為-H、R3為-(CH2)-C6Hs、Rt為氫、R^為-H;R!為-CH(CH3)2、R2為-H、R3為-CH(CH3)2、R4為氫、R6為H;》-CH(CH3)2、R2為國H、R3為-(CH2)4-NH-C(0)畫0-C(CH3)3、Rt為氫、R6為-H;或Ri為-CH(CH3)2、R2為-H、R3為-(CH2)4-NH2、R4為氫、R6為-H的那些；及其藥學可接受的鹽。還特別優(yōu)選的式(i':k匕合物為其中Ri為-CH(CH3)2、R2為-CH3、R3為-CH3、Rf為氫、R6為-H、Pr1和P一為氫；R工為畫CH(CH3)2、R2為畫H、R3為誦(CH2)2-C(0)-0-C(CH3)3、R4為氫、R^為-H、P—和Pr2為氫;Ri為-CH(CH3)2、R2為-H、R3為-(CH2)2-C(0)-OH、R4為氫、Re為-H、P—和Pr2為氫；Ri為-CH(CH3)2、R2為-H、R3》-(CH2)-C6H5、Rj為氫、R6為-H、P—和Pr2為氫；Ri為-CH(CH3)2、R2為-H、R3為-CH(CH3)2、R4為氫、R6為-H、P一和Pr2為氫；A》-CH(CH3)2、R2為-H,R3》(CH2)4-NH-C(0)-0-C(CH3)3、R4為氫、R6為-H、P—和Pr2為氫；或Ri為-CH(CH3)2、R2為-H、R3為-(CH2)4-NH2、Rt為氫、Rfi為-H、P—和Pr2為氫的那些；及其藥學可接受的鹽。優(yōu)選的FK228類似物具有式(2)或(2')。另一優(yōu)選的FK228類似物具有式(3)或(3')。另一優(yōu)選的FK228類似物具有式(4)或(4')。另一優(yōu)選的FK228類似物具有式(5)或(5')。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>另一優(yōu)選的FK228類似物具有式(6)或(6')。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>另一優(yōu)選的FK228類似物具有式(7)或(7')。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>另一優(yōu)選的FK228類似物具有式(8)或(8')。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>另一優(yōu)選的FK228類似物具有式(9)或(9%<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>在本發(fā)明的一個實施方案中，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>FK228類似物具有式(II)或(II'):其中R^R2、R3、R、R6、P—和Pr2的定義同上。在本發(fā)明的另一實施方案中，F(xiàn)K228類似物具有式(ni)或(in'):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>其中R^R2、R3、P—和Pr2的定義同上。在本發(fā)明的另一實施方案中，F(xiàn)K228類似物具有式(IV)或(IV'),<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>其中RpR2、R3、P—和Pr2的定義同上。在本發(fā)明的另一實施方案中，F(xiàn)K228類似物具有式(V)或(V')，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>其中RpR2、R3、Pi^和Pr2的定義同上。在另一實施方案中，本發(fā)明提供了式(VI)化合物、其等排物或其藥學可接受的鹽在用作HDAC抑制劑的藥物的生產(chǎn)中的用途，其中RpR2和R3相同或不同，代表M酸側(cè)鏈部分，R4為氫、Ci-C6^^^或〔2-〔6蜂>&0通常在該實施方案中，R為衍生自天然氨基酸的氨基酸側(cè)鏈部分。優(yōu)選在該實施方案中，Ri為瞧H、-CH3、CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)CH2CH3、-(CH2)4NH2、-CH2SH、-CH2CH2SCH3、-CH2OH或-CH(OH)CH3。更優(yōu)選Ri為-H、-CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2或畫CH(CH3)CH2CH3。最優(yōu)選為-CH(CH3)2。通常在該實施方案中，R2為衍生自天然氨基酸的^酸側(cè)鏈部分。優(yōu)選R2為-H、-CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)CH2CH3、(CH2)4NH2、CH2SH、-CH2CH2SCH3、-CH2OH或隱CH(OH)CH3。更優(yōu)選R2為-H、CH3或-CH(CH3)2。最優(yōu)選R2為-H。通常在該實施方案中，R3為衍生自天然氨基酸的氨基酸側(cè)鏈部分。優(yōu)選R3為-H、CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)CH2CH3、(CH2)4NH2、-CH2SH、-CH2CH2SCH3、-CH2OH或畫CH(OH)CH3。更優(yōu)選R3為-H、-CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2或誦CH(CH3)CH2CH3。最優(yōu)選R3為-CH3。通常在該實施方案中，R4為氫或Q-C6烷基。優(yōu)選R4為氫或CVC2烷基。更優(yōu)選R4為氬。在該實施方案中，本發(fā)明的優(yōu)選化合物為式(VI)化合物，其中Ri為陽H、-CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)CH2CH3、(CH2)4NH2、-CH2SH、CH2CH2SCH3、-CH2OH或-CH(OH)CH3;R2為-H、CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、(CH2)4NH2、-CH2SH、CH2CH2SCH3、-CH2OH或-CH(OH)CH3;R3為-H、-CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)CH2CH3、(CH2)4NH2、-CH2SH、-CH2CH2SCH3、-CH2OH或-CH(OH)CH3;和R4為氫或d-C2烷基。在該實施方案的優(yōu)選方面中，本發(fā)明提供了式(VI)化合物，其中Ri為-H、-CH3、-CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2或-CH(CH3)CH2CH3;R2為-H、CH3或-CH(CH3)2;R3為-H、-CH3、-CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2或-CH(CH3)CH2CH3;和R4為氫。該實施方案的特別優(yōu)選的化合物為式(VI)中為-CH(CH3)2、R;為-H、R3為-CH3、R4為氫的那些。該實施方案進一步優(yōu)選的化合物為式(III)化合物，O(in)其中RpR2和R3的定義同上。該實施方案還更優(yōu)選的化合物為式(IV)化合物,O其中RpR2和R3的定義同上。本發(fā)明的化合物被認為是新型的，本發(fā)明因此提供了式(I)化合物、其等排物或其藥學可接受的鹽。本發(fā)明還提供了式(I)化合物或其藥學可接受的鹽。本發(fā)明也提供了用于治療人體或動物體的方法的式(I)化合物、其等排物或其藥學可接受的鹽。本發(fā)明還提供了用于治療人體或動物體的方法的式(I)化合物或其藥學可接受的鹽。由于其高度的療效，本發(fā)明的化合物是特別有利的。由于四肽芯可容易地合成，從這一點來說其也是有利的。本文中用到的藥學可接受的鹽為藥學可接受的酸或堿的鹽。藥學可接受的酸包括無機酸(如鹽酸、硫酸、磷酸、焦磷酸、氫溴酸或硝酸)和有機酸(如檸檬酸、延胡索酸、馬來酸、蘋果酸、抗壞血酸、琥珀酸、酒石酸、苯曱酸、乙酸、甲磺酸、乙磺酸、M酸或?qū)譤酸)。藥學可接受的堿包括堿金屬(如鈉或鉀)和堿土金屬(如釣或鎂)氫氧化物及有機喊如烷基胺、芳烷基胺或雜環(huán)胺。本文中用到的術語"等排物"指自原子或原子團與另外的廣義相似的原子或原子團交換得到的化合物。在式(I)化合物中，含等排基團的部分優(yōu)選-NH-CHR廣CO-、-NHCHR2-COO-和-NH-CO-CHR3-NH-CO-。在式(I)化合物中，含等排基團的部分更優(yōu)選NH-CHRrCO-和-NH-CHR2-COO-。這類等排物的實例為-NH-部分已為-CH2、-O-或-S-所取代、-CO-部分已為-CS-或-C(-NH)-所取代、-O-部分已為-S-、CH2-或-NH-所取代的式(I)化合物。本發(fā)明的化合物具有式(I)中所示的手性。但基團RpR2和R3的空間定位可導致化合物中另外的手性中心的形成。為避免疑義，本文中描繪的化學結(jié)構(gòu)意在涵蓋與這些另外的手性中心相關的所有立體異構(gòu)構(gòu)型，包括外消旋和非外消旋混合物及純對映異構(gòu)體和/或非對映異構(gòu)體。為避免疑義，本發(fā)明也涵蓋在體內(nèi)反應產(chǎn)生本發(fā)明的化合物或其等排物或其藥學可接受的鹽的前藥。本發(fā)明的優(yōu)選化合物為光學異構(gòu)體。因此，例如，僅含一個手性中心的式(I)的優(yōu)選化合物包括基本純形式的R異構(gòu)體、基本純形式的S對映體和含過量的R對映體或過量的S對映體的對映體混合物。本發(fā)明也提供了式(I)化合物、其等排物或其藥學可接受的鹽和藥學可接受的載體或稀釋劑。所述藥物組合物通常含至多85wt。/。的本發(fā)明化合物。更通常其含至多50wt。/。的本發(fā)明化合物。優(yōu)選的藥物組合物是無菌、無熱原的。此外，本發(fā)明提供的藥物組合物所含的本發(fā)明化合物通常為基本純的光學異構(gòu)體。優(yōu)選所述藥物組合物包含式(I)化合物的藥學可接受的鹽或其等排物。FK228類似物可通過常規(guī)路線制備，例如用下面的方案，其中基團&到R4的定義同上<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>在步驟(a)中，帶側(cè)鏈R2的氨基酸酯與帶側(cè)鏈A的第二氨基酸縮合產(chǎn)生二肽。在步驟(b)中，二肽與受保護的半胱氨酸衍生物縮合產(chǎn)生三肽。在步驟(c)中，三肽與^酸偶聯(lián)產(chǎn)生受保護的四肽。在步驟(d)中，四肽的N-端去保護，游離胺與(5-羥基酸衍生物偶聯(lián)，其中Rs為臨時封端基團，其可被除去而產(chǎn)生Rs為H、X為手性助劑的化合物，如Yurek-George,A.;Habens,F.;Brimmell，M.;Packham，Ci;Ganesan,A./爿附.Oie附.2004，226,1030-1031中所報道的。在步驟(e)中，酯基水解，然后在步驟(f)中環(huán)化并在(g)中形成二硫鍵，完成雙環(huán)酯肽化合物(I)的合成。其中&不是氫的曰本，、明化合物可通過烷基化相應的其、中R，為氫式(I')化合物可通過使上面步驟(g)的產(chǎn)物反應以斷開二硫鍵而獲得。二硫鍵的斷裂通常用常用來還原處理含二硫鍵的蛋白質(zhì)的硫醇化合物例如巰基乙醇、巰基乙酸、2-巰基乙胺、苯硫酚、對石克代甲酚和二硫蘇糖醇實現(xiàn)。優(yōu)選使用巰基乙醇和二硫蘇糖醇。過量的硫醇化合物可通過例如滲析或凝膠過濾除去。作為替代方案，例如電解、四氬硼酸鈉、氫化鋁鋰或亞硫酸鹽可用來斷開二石危鍵。p—和/或p一不是氫的式(r)化合物可通過向p一和/或p一為氫的相應化合物中引入硫羥保護基制備。在這方面，該反應中待使用的引入硫羥保護基的適宜試劑適宜根據(jù)待引入的保護基確定。實例包括相應保護基的氯化物(例如節(jié)基氯、甲氧基千基氯、乙酰氧基節(jié)基氯、硝基芐基氯、吡啶甲基氯、吡啶甲基氯-N-氧化物、蒽基甲基氯、異丁氧基甲基氯、苯基硫甲基氯)和相應保護基的醇(例如二苯甲醇、金剛烷醇、乙酰胺曱醇、苯甲酰M曱醇)、二硝基苯、異丁烯、二曱氧基甲烷、二氫吡喃和氯甲酸叔丁酯。本領域技術人員會理解，當RpR2、R3和R4中的一個帶有官能團如-OH、-SH、-NH2或-COOH時，則可以優(yōu)選在其引入后的一個或多個反應步驟里將該基團保護起來。這時，所討論的基團可在引入后單獨的步驟中被保護，或其可在引入時已被保護。技術人員應清楚可用于這方面的適宜的保護基。所得FK228類似物可通過用適宜的酸或堿處理而鹽化。通過任何上述方法獲得的外消旋混合物可通過標準技術拆分，例如在手性色i普柱上洗脫。本發(fā)明的優(yōu)選化合物具有至少與辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)所表現(xiàn)出的相當?shù)腍DAC抑制活性。因此，在又一實施方案中，本發(fā)明提供了選擇具有至少與SAHA所表現(xiàn)出的相當?shù)腍DAC抑制活性的化合物的方法，所述方法包括通過如下步驟制備式(I)或(I')化合物(i)使式(VI)化合物與式(VII)化合物反應，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>其中&和R2的定義同上，R7為d-C4烷基或QrC4烯基，Y為JL^保護基；(ii)對所得中間體去保護并使之與式(vin)化合物反應，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>其中Y'為^J^呆護基，Y〃為氫或保護基；(iii)對所得中間體去保護并使之與式(IX)化合物反應<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>其中R3的定義同上，Y〃'為M保護基；(iv)對所得中間體去保護并使之與式(X)化合物反應<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>(x)其中R4的定義同上，Rs為氫或羥基保護基，LG為離去基團，Y'〃'為氫或保護基；(v)任選地，對所得中間體上的p-羥基去保護以除去Rs保護基并以H取代之；(vi)水解和環(huán)化所得中間體；(vii)任選地，使所得中間體反應形成二硫鍵，如果形成了二石克鍵，則任選地斷開所得化合物中的二硫鍵，如果所得化合物含硫羥基，則任選地引入疏羥保護基；和(viii)篩選所得化合物以測定其作為HDAC抑制劑的活性。通常，在步驟(vi)中，酯基的水解在環(huán)化前進行。通常在步驟(vii)中使用DTT(二硫蘇糖醇)來實現(xiàn)二硫鍵的斷裂。本領域技術人員應理解，保護基Y、Y'、Y〃、Y〃'和Y'〃'可使用各種本體，優(yōu)選的本體將取決于各情形下存在的特定基團的性質(zhì)。基團Y、Y'和Y〃'可例如為叔-丁氧羰基(Boc)或9-芴基甲氧皿(Fmoc)。它們通常為Fmoc?；鶊FY〃和Y〃〃可例如為三苯曱基(Trt)。本領域技術人員知曉離去基團LG的適宜本體。其可例如為手性助劑，如通過其N原子連接的噢唑烷硫酮，如Yurek-George，A.等(丄j附.C7^附.2004，"6,1030-1031)中所述。作為替代方案，其可為-OH基?；鶊FR7通常為d-Ct烷基或d-Q烯基。更通常地，其為甲基或蜂丙基o技術人員應理解，多種檢測適于測定HDAC抑制并可用來測定自步驟(vii)所得化合物與已知的HDAC抑制劑SAHA相比的活性。因此，試l^f匕合物對HDAC的ICs?？衫缭隗w外檢測中測定并與相同檢測條件下SAHA的ICs。相比較。如果試驗化合物的ICs。值等于或低于SAHA的，則應理解為其具有至少與SAHA所表現(xiàn)出的相當?shù)腍DAC抑制活性。在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供了選擇具有至少與如上所定義的SAHA所表現(xiàn)出的相當?shù)腍DAC抑制活性的化合物的方法，其中步驟(viii)中所述篩選步驟為體外HDAC檢測。通常，所述檢測包括使各種濃度的試驗化合物和SAHA與經(jīng)稀釋的海拉細胞核提取物(HelaNuclearExtract)接觸，以測定試驗化合物和SAHA對海拉細胞核提取物的IC5Q。對海拉細胞核提取物測得的ICs。值等于或低于相同檢測條件下SAHA的ICso的試驗化合物應理解為具有至少與SAHA所表現(xiàn)出的相當?shù)囊种苹钚浴ＭǔＫ鰴z測用HDAC熒光活性檢測試劑盒(Biomol，UK)進行且試驗化合物在分析前還原。所述檢測試驗可例如按下面標題"活性檢測5"下所述進行。在另一實施方案中，本發(fā)明提供了選擇具有至少與SAHA所表現(xiàn)出的相當?shù)娜税┘毎L抑制活性的化合物的方法，所述方法包括通過如上所定義的步驟(i)到(vii)制備式(I)或(I')化合物，然后(viii)篩選所得化合物以測定其作為人癌細胞生長抑制劑的活性。技術人員應理解，多種檢測適于測定人癌細胞生長抑制并可用來測定自步驟(vii)所得化合物與SAHA相比的活性。因此，試驗化合物對人癌細胞生長的IC5Q可例如在體外檢測中測定并與相同檢測條件下SAHA的ICs。相比較。如果試驗化合物的ICs。值等于或低于SAHA的，則應理解為其具有至少與SAHA所表現(xiàn)出的相當?shù)囊种苹钚?。通常在該實施方案中，步驟(viii)包括體外檢測，所述體外檢測包括使各種濃度的試驗化合物和SAHA與MCF7乳腺癌細胞系、HUT78T-細胞白血病細胞系、A2780卵巢癌細胞系、PC3或LNCAP前列腺癌細胞系接觸以確定試驗化合物和SAHA對所述細胞系的ICs。值。對任何這些細胞系測得的ICs。值等于或低于相同檢測條件下SAHA的ICso值的試驗4匕合物應理解為具有至少與SAHA相當?shù)囊种苹钚?。通常在該實施方案中，所述檢測用CyQuantTM檢測系統(tǒng)(MoelcularProbes,Inc.USA)進行。所述檢測試驗可例如按下面標題"活性檢測6"和/或"活性檢測1"下所述進4亍。在本發(fā)明的另一優(yōu)選實施方案中提供了選擇具有至少與SAHA所表現(xiàn)出的相當?shù)目寡谆钚缘幕衔锏姆椒ǎ龇椒òㄍㄟ^如上所定義的步驟(i)到(vii)制備式(I)或(I')化合物，然后(vm)篩選所得化合物以測定其抗炎活性。技術人員應理解，多種檢測適于評估化合物的抗炎活性。試驗化抑制由外周血單核細胞(PBMC)產(chǎn)生TNF(x中的活性確定。因此，試驗4匕合物抑制PBMC產(chǎn)生TNFa的能力可例如在檢測中測定并與相同檢測條件下SAHA的活性相比較。如果試驗化合物對產(chǎn)生TNFa的體外抑制活性等于或高于相同檢測條件下SAHA的，則應理解為其具有至少與SAHA所表現(xiàn)出的相當?shù)目寡谆钚浴Ｍǔ２襟E(viii)用Quantikine⑧人-a檢測試劑盒(R&Dsystems,AbingdonUK)進4亍。所述檢測可例如按下面標題"活性檢測7"下所述進行。在本實施方案的另一方面，試驗化合物相對于SAHA的抗炎活性可通過評估化合物相對于SAHA在抑制Balb/c小鼠炎癥中的活性確定。如果試驗化合物的體內(nèi)抑制活性等于或高于相同試驗條件下SAHA的，則應理解為其具有至少與SAHA所表現(xiàn)出的相當?shù)目寡谆钚浴ＭǔＴ谠搶嵤┓桨钢?，步驟(viii)通過評估試驗化合物和SAHA在抑制化學激發(fā)誘發(fā)的Balb/c小鼠炎癥中的體內(nèi)活性進行。通常，所述化學激發(fā)包括局部給予小鼠oxalazone或丙酮。在該實施方案中，所研究的化合物可在化學激發(fā)前或后施用。所述抗炎活性評估可例如按下面標題"活性檢測8"下所述進行。在本發(fā)明的另一優(yōu)選實施方案中提供了選擇具有至少與SAHA所表現(xiàn)出的相當?shù)脑贛CF7細胞中誘發(fā)主要的G2/M期阻滯或細胞死亡的活性的化合物的方法，所述方法包括通過如上所定義的步驟(i)到(vii)制備式(I)或(I')化合物，然后通過(viii)篩選所得化合物以測定其相對于SAHA在MCF7細胞中誘發(fā)主要的G2/M期阻滯或細胞死亡的活性。篩選步驟(viii)可例如包括按下面標題"活性檢測3"下所述進行的檢測。在上述篩選步驟中，試驗化合物的優(yōu)選形式取決于篩選步驟的性質(zhì)。因此，如果篩選步驟為體外檢測，如下面"活性檢測5"下所述的，則試驗化合物優(yōu)選如上面所定義的式(I')。但如果篩選步驟是針對細胞系的，則試驗化合物優(yōu)選式(I)。已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物是HDAC的抑制劑。本發(fā)明的化合物因此是治療學有用的。本發(fā)明的化合物和包含其的組合物可以多種劑型給藥。在一個實施方案中，包含本發(fā)明化合物的藥物組合物可配制為適于經(jīng)口、直腸、腸胃外、鼻內(nèi)或經(jīng)皮給藥或通過吸入或通過栓劑給藥的形式。典型的給藥途徑為腸胃外、鼻內(nèi)或經(jīng)皮給藥或通過吸入給藥。本發(fā)明的化合物可口服給藥，例如以片劑、錠劑、糖錠、水或油懸劑、可分歉性粉劑或顆粒劑。本發(fā)明的優(yōu)選藥物組合物為適于口服給藥的組合物，例如片劑和膠嚢劑。本發(fā)明的化合物也可腸胃外給藥，即通過皮下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、胸內(nèi)、經(jīng)皮方式或通過輸注技術給藥。所述化合物也可以作為栓劑給藥。一種優(yōu)選的給藥途徑是吸入。與許多口服藥物相比，吸入性藥物的主要優(yōu)勢在于其直接遞送到供血豐富的區(qū)域。因此，由于肺泡表面積巨大、有豐富的血液供應，且避免了首過代謝，其吸收非常快。本發(fā)明的優(yōu)選藥物組合物因此包括適于吸入的那些。本發(fā)明也提供了含這類藥物組合物的吸入裝置。通常所述裝置為定量吸入器(MDI)，其含藥學可接受的化學推進劑以將藥物推出吸入器。通常所述推進劑為碳氟化合物。其他優(yōu)選的吸入裝置包括噴霧器。噴霧器為能在壓力下用空氣或氧氣將藥物的細小液霧通過裝在鼻和嘴上的"罩"遞送的裝置。其常用來治療不能使用吸入器的哞喘患者，包括嬰兒、幼兒和所有年齡段的急性病患者。所述吸入裝置也可為例如能遞送本發(fā)明的化合物而不用推進劑的旋轉(zhuǎn)吸入器或干粉吸入器。通常，所述^^裝置含隔離器(spacer)。隔離器為能讓個體將更大的藥量直接吸進其預期進入的下部導氣管而不是進入喉部的裝置。許多隔離器裝在吸入器末端；有的將藥物濾毒罐裝進裝置中。帶截留室和單向閥的隔離器阻止藥物逃逸到空氣中。許多人，特別是幼兒和老年人，可能在協(xié)調(diào)其吸入與觸發(fā)定量吸入器的噴射所需的動作上有困難。對于這些患者，使用隔離器是特別推薦的。另一優(yōu)選的給藥途徑是鼻內(nèi)給藥。鼻腔的高滲透組織非常善于接受藥物并快速、高效地吸收，比片劑藥物更加快速和高效。經(jīng)鼻藥物遞送不像注射那么痛苦和具有侵襲性，在患者中造成的焦慮要少一些。藥物可以通過比片劑形式遞送的藥物小的劑量經(jīng)鼻遞送。通過這種方法，吸收非?？烨冶苊饬耸走^代謝，因此減少了患者之間的差異。經(jīng)鼻遞送裝置還使藥物可以精確定劑量地施用。因此，本發(fā)明的藥物組合物通常適于鼻內(nèi)給藥。此外，本發(fā)明也提供了含這類藥物組合物的鼻內(nèi)裝置。另一優(yōu)選的給藥途徑是經(jīng)皮給藥。本發(fā)明因此也提供了含本發(fā)明的化合物或其藥學可接受的鹽的經(jīng)皮貼劑。也優(yōu)選采用舌下給藥。本發(fā)明因此也提供了包含本發(fā)明的化合物或其藥學可接受的鹽的舌下片劑。本發(fā)明的化合物通常配制為與藥學可接受的載體或稀釋劑一起給藥。例如，固體口服劑型可包含與所述活性化合物一起的稀釋劑(如乳糖、右旋糖、蔗糖、纖維素、玉米淀粉或馬鈴薯淀粉)、潤滑劑(如二氧化硅、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂或鈣和/或聚乙二醇)、粘合劑(如淀粉、阿拉伯膠、明膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素或聚乙烯吡咯烷酮)、崩解劑(如淀粉、藻酸、藻酸鹽或羥基乙酸淀粉鈉)、泡騰混合物、著色劑、甜味劑、潤濕劑(如卵磷脂、聚山梨酸酯、硫酸月桂酯)和一般在藥物配方中使用的非毒性和藥理學不活潑的物質(zhì)。這樣的藥物制劑可用已知方式生產(chǎn)，例如通過混合、造粒、壓片、糖包衣或膜包衣工藝。口服用液體^:劑可為糖漿、乳劑和懸劑。糖漿可含例如蔗糖或蔗糖與甘油和/或甘露醇和/或山梨糖醇作為栽體。懸劑和乳劑可含例如天然樹膠、瓊脂、藻酸鈉、果膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素或聚乙烯醇作為載體。肌肉內(nèi)注射用懸劑或溶液可包含與所述活性化合物一起的藥學可接受的載體，例如無菌水、橄欖油、油酸乙酯、二醇(如丙二醇)、和根據(jù)需要的適宜量的鹽酸利多卡因。注射或輸注用溶液可含例如無菌水作為載體，或優(yōu)選其可呈無菌的等滲鹽水溶液形式。本發(fā)明的化合物在治療學上用于HDAC介導的疾病的治療或預防。因此，本發(fā)明提供了式(I)化合物或其藥學可接受的鹽在HDAC介導的疾病的治療或預防用藥物的生產(chǎn)中的用途。也提供了治療患有或易患HDAC介導的疾病的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的式(I)化合物、其等排物或其藥學可接受的鹽。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物可與其他已知的HDAC抑制劑如SAHA聯(lián)用。在該實施方案中，可以配制聯(lián)用產(chǎn)品，使其包含各個同時、分別或順序^f吏用的藥物。本發(fā)明因此提供了一種產(chǎn)品，所述產(chǎn)品含(a)如上所定義的本發(fā)明的FK228類似物或其等排物或其藥學可接受的鹽；和(b)同時、分別或順序4吏用的其他已知的HDAC抑制劑如SAHA。本發(fā)明因此也提供了如上所定義的本發(fā)明的FK228類似物或其等排物或其藥學可接受的鹽在與其他已知的HDAC抑制劑如SAHA聯(lián)用的藥物的生產(chǎn)中的用途。技術人員知曉其他已知的HDAC抑制劑。例如US20040266769給出了適宜的實例。實例包括spiruchostatinA、FR-卯1228、trichostatinA和SAHA。本發(fā)明的化合物可用于癌癥的治療和預防中，也可用于單一治療或聯(lián)合治療中。當用于聯(lián)合治療中時，本發(fā)明的化合物通常與基于小分子化合物、輻射、抗體的療法(例如赫賽汀(herceptin)和利妥希瑪)、抗癌接種、基因療法、細胞療法、激素療法或細胞因子療法一起使用。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的化合物與其他化療或抗腫瘤劑聯(lián)合用于癌癥的治療。這類其他化療或抗腫瘤劑的實例包括米托蒽醌、長春花屬生物堿(如長春新堿和長*>5成)、蒽環(huán)類抗生素(例如柔紅霉素和阿霉素)、烷化劑(如苯丁酸氮芥和苯丙氨酸氮芥)、紫杉烷(如紫杉醇)、葉酸拮抗劑(如氨甲蝶呤和雷替曲塞)、表鬼臼毒素(如足葉乙甙)、喜樹堿(如藥薯和其活性代謝物SN38)及DNA甲基化抑制劑(如WO02/085400中公開的DNA甲基化抑制劑)。因此，本發(fā)明提供了一種產(chǎn)品，其包含本發(fā)明的化合物及其他化療或抗肺瘤劑作為在緩解癌癥中同時、分別或順序使用的聯(lián)合制劑。本發(fā)明也提供了如上面所定義的FK228類似物或其等排物或其藥學可接受的鹽在通過與其他化療或抗腫瘤劑聯(lián)用而緩解癌癥的藥物的生產(chǎn)中的用途。本發(fā)明的化合物和所述其他藥劑可以任何順序施用。在這兩種情形下，本發(fā)明的化合物與所述其他藥劑可一起施用或按醫(yī)生確定的任何順序分別給予。HDAC被認為是若干不同疾病的病理和/或癥狀的原因，因此，通過抑制降低對象中HDAC的活性可用來從治療學上解決這些病狀?？捎帽景l(fā)明的HDAC抑制劑治療的各種疾病的實例如本文中所述。注意，隨著對HDAC以各種途徑起到的生物學作用的理解更加全面，可以在后來確認除了本文中所公開的之外的其他疾病。本發(fā)明的HDAC抑制劑可用來治療的一組適應證為涉及不希望的或不受控制的細胞增殖的那些。這類適應證包括良性腫瘤、各種類型的癌癥如原發(fā)瘤和瘤轉(zhuǎn)移、再狹窄(如冠狀動脈、頸動脈和腦損傷)、內(nèi)皮細胞的異常刺激(動脈粥樣硬化)、因外科手術而致的身體組織損傷、異常的傷口ll:合、異常的血管生成、產(chǎn)生組織纖維化的疾病、重復性運動失調(diào)、非高度血管化的組織失調(diào)和與器官移植相關的增殖反應。HDAC抑制劑更具體的適應證包括但不限于前列腺癌、肺癌、急性白血病、多發(fā)性骨髓瘤、膀胱癌、腎癌、乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、成神經(jīng)細胞瘤和黑素瘤。在一個實施方案中提供了治療與不希望的和不受控制的細胞增殖相關的疾病的方法。所述方法包括向遭受不受控制的細胞增殖的對象施用治療學有效量的本發(fā)明的HDAC抑制劑，以便減輕所述不受控制的細胞增殖。待使用的抑制劑的具體劑量將取決于病狀的嚴重程度、給藥途徑和相關因素，這可由主治醫(yī)師確定。通常，可接受的有效日劑量為足以有效減慢或消除不受控制的細胞增殖的量。本發(fā)明的HDAC抑制劑也可與其他抑制不希望的和不受控制的細胞增殖的藥劑結(jié)合使用。其他可與本發(fā)明的HDAC抑制劑結(jié)合使用的抗細胞增殖劑的實例包括但不限于類維生素A酸和其衍生物、2-甲氧基雌二醇、ANGIOSTATIN(TM)蛋白質(zhì)、ENDOSTATIN(TM)蛋白質(zhì)、蘇拉明、角鯊胺(squalamine)、金屬蛋白酶-I的組織抑制劑、金屬蛋白酶-2的組織抑制劑、纖維蛋白溶酶原活化因子抑制劑-1、纖維蛋白溶酶原活化因子抑制劑-2、軟骨源抑制劑、紫杉醇、血小板因子4、硫酸魚精蛋白(緋精蛋白)、硫酸化甲殼質(zhì)衍生物(自雪花蟹殼制備)、硫酸化多糖肽聚糖復合物(sp-pg)、星孢菌素、基質(zhì)代謝調(diào)節(jié)劑，包括例如脯氨酸類似物((l-氮雜環(huán)丁烷-2-羧酸(LACA)、順式羥基脯氨酸、d,l-3,4-脫氬脯氨酸、硫代脯氨酸)、p-氨基丙腈延胡索酸酯、4-丙基-5-(4-吡^^)-2(3H)-0惡唑酮；氨曱蝶呤、米托蒽醌、肝素、干擾素、2巨球蛋白-血清、chimp-3、抑糜蛋白酶素、p-環(huán)糊精十四石危酸酯、eponemycin;煙曲霉素、硫代蘋果酸金鈉、d-青霉胺(CDPT)、p.-l-抗l^f、酶-血清、a,2-抗纖維蛋白溶酶、比生群、氯勤L利二鈉、正-(2-羧苯基-4-chloroanthronilic酸二鈉)或"CCA"、沙立度胺；angostatic類固醇、J^J^咪唑；金屬蛋白酶抑制劑如BB94。其他可使用的抗血管生成劑包括抗體，優(yōu)選針對這些血管生長因子的單克隆抗體bFGF、aFGF、FGF-5、VEGF亞型、VEGF-C、HGF/SF和Ang-1/Ang誦2。FerraraN.和Alitalo,K."Clinicalapplicationofangiogenicgrowthfactorsandtheirinhibitors(血管生長因子和其抑制劑的臨床應用)"(1999)NatureMedicine5:1359-1364。通常，良性腫瘤中的細胞保持其分化特征而不以完全不受控制的方式分裂。良性腫瘤通常是局部化的且是非轉(zhuǎn)移性的?？捎帽景l(fā)明的HDAC抑制劑治療的特定類型的良性腫瘤包括血管瘤、肝細胞腺瘤、海綿狀血管瘤、病灶性結(jié)節(jié)狀增生、聽神經(jīng)瘤、纖維神經(jīng)瘤、膽管腺瘤、膽管細胞瘤、纖維瘤、脂肪瘤、平滑肌瘤、間皮瘤、畸胎瘤、粘液瘤、結(jié)節(jié)狀再生性增生、沙眼和化膿性肉芽腫。在惡性腫瘤情形下，細胞變成無分化狀態(tài)，對身體的生長控制信號無響應，并以不受控制的方式增殖。惡性腫瘤是4曼襲性的，能擴散到遠位(轉(zhuǎn)移)。惡性腫瘤通常分為兩類原發(fā)的和繼發(fā)的。原發(fā)腫瘤直接發(fā)生于其所在的組織。繼發(fā)腫瘤或轉(zhuǎn)移瘤為源自體內(nèi)其他地方但現(xiàn)已擴散到遠處器官的肺瘤。轉(zhuǎn)移的常見途徑是直接生長i^目鄰結(jié)構(gòu)、通過血管或淋巴系統(tǒng)擴散和沿組織面和體隙(腹膜液、腦脊髓液等)行進?？捎帽景l(fā)明的HDAC抑制劑治療的特定類型的癌或惡性腫瘤(原發(fā)的或繼發(fā)的)包括但不限于白血病、乳腺癌、皮膚癌、骨癌、前列腺癌、肝癌、肺癌、腦癌、喉癌、膽嚢癌、胰腺癌、直腸癌、甲狀旁腺癌、甲狀腺癌、腎上腺癌、神經(jīng)組織癌、頭頸癌、結(jié)腸癌、胃癌、支氣管癌、腎癌、基底細胞癌、潰瘍和乳頭型的鱗狀細胞癌、轉(zhuǎn)移性皮膚癌、骨肉瘤、尤因氏肉瘤、網(wǎng)狀細胞肉瘤、骨髓瘤、巨細胞瘤、小細胞肺瘤、膽石、胰島細胞瘤、原發(fā)性腦瘤、急性和慢性淋巴細胞和顆粒細胞腫瘤、毛細胞瘤、腺瘤、增生、髓樣癌、副神經(jīng)節(jié)瘤、粘膜神經(jīng)瘤、腸節(jié)細胞神經(jīng)瘤、增生性角膜神經(jīng)瘤、馬方綜合征體型瘤、維爾姆斯瘤、精原細胞瘤、卵巢瘤、平滑肌瘤、子宮頸非典型增生和原位癌、成神經(jīng)細胞瘤、成視網(wǎng)膜細胞瘤、軟組織肉瘤、惡性類癌瘤、局部皮膚損傷、蕈樣霉菌病、橫玟肌肉瘤、卡波西肉瘤、成骨肉瘤和其他肉瘤、惡性高鈣血癥、腎細胞瘤、真性紅細胞增多癥、腺癌、多形性膠質(zhì)母細胞瘤、白血病、淋巴腺瘤、惡性黑素瘤、表皮樣癌及其他癌和肉瘤。本發(fā)明的HDAC抑制劑也可用來治療因外科手術中身體組織損傷引起的異常細胞增殖。這些損傷可能起因于多種外科術如關節(jié)外科、腸外科和蟹足腫癍疤形成。產(chǎn)生纖維化組織的疾病包括肺氣腫?？捎帽景l(fā)明治療的重復性運動失調(diào)包括腕管綜合征?？捎帽景l(fā)明治療的細胞增生癥的實例為骨瘤?？捎帽景l(fā)明的HDAC抑制劑治療的與器官移植相關的增殖反應包括影響潛在器官排斥或相關并發(fā)癥的增殖反應。具體而言，這些增殖反應可能在心臟、肺、肝、腎和其他身體器官或器官系統(tǒng)的移植過程中發(fā)生?？捎帽景l(fā)明治療的異常血管生成包括伴隨類風濕性關節(jié)炎、缺血-再灌注相關腦水腫和損傷、腦皮層缺血、卵巢增生和血管過多、(多嚢卵巢綜合征)、子宮內(nèi)膜異位、牛皮癉、糖尿病性視網(wǎng)膜病和其他目M^管生成病如早熟性視網(wǎng)膜病(晶狀體后纖維形成)、黃斑變性、角膜移植排斥、neuroscular青光眼和OsterWebber綜合征的那些異常血管生成。可按本發(fā)明治療的與不受控制的血管生成相關的疾病的實例包括但不限于視網(wǎng)膜/脈絡膜新血管形成和角膜新血管形成。視網(wǎng)膜/脈絡膜新血管形成的實例包括但不限于Bests病、近視、視窩、Stargarts病、Pagets病、靜脈閉塞、動脈閉塞、鐮狀細胞性貧血、類肉瘤、梅毒、彈性假黃色瘤頸動脈阻塞病(pseudoxanthomaelasticumcarotidapostructivediseases)、慢性葡萄膜炎/玻璃體炎、分支桿菌感染、Lyme病、系統(tǒng)性紅斑狼癡、早熟性視網(wǎng)膜病、Eales病、糖尿病性視網(wǎng)膜病、黃斑變性、Bechets病、引起視網(wǎng)膜炎或脈絡膜炎的感染、類眼組織胞漿菌病、睫狀體平坦部炎、慢性視網(wǎng)膜脫離、粘稠綜合征、弓形體病、外傷和激光后并發(fā)癥、與rubesis(角新血管形成)相關的疾病以及維管或纖維組織的異常增生引起的疾病(包括各種形式的增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病)。角膜新血管生成的實例包括但不限于流行性角膜結(jié)膜炎、維生素A缺乏癥、隱形眼鏡超戴癥、特應性角膜炎、上部角膜緣角膜炎、翼狀胬肉干燥性角膜炎、干燥綜合征、紅斑痤瘙、小水皰病、糖尿病性視網(wǎng)膜病、早熟性視網(wǎng)膜病、角膜移植排斥、蠶食性角膜潰瘍、Terrien邊緣變性、邊緣性角膜炎、多動脈炎、Wegener結(jié)節(jié)病、鞏膜炎、類天皰瘡輻射性角膜散光癥、新生血管性青光眼和晶狀體后纖維形成、梅毒、分支桿菌感染、脂質(zhì)變性、化學燒傷、細菌性潰瘍、真菌性潰瘍、單純皰滲感染、帶狀皰滲感染、原蟲感染和卡波西肉瘤。也可用本發(fā)明的HDAC抑制劑治療與不受控制的血管生成相關的慢性炎癥疾病。慢性炎癥依靠毛細管芽的連續(xù)形成來維持炎性細胞的流入。炎性細胞的流入和存在產(chǎn)生肉芽腫并因此維持慢性炎癥狀態(tài)。單獨用HDAC抑制劑或與其他抗炎劑一起抑制血管生成可阻止肉芽腫的形成并因此減輕疾病。慢性炎癥疾病的實例包括但不限于炎性腸病(如克羅恩氏病和潰瘍性結(jié)腸炎)、牛皮癬、結(jié)節(jié)病和類風濕性關節(jié)炎。炎性腸病如克羅恩氏病和潰瘍性結(jié)腸炎以慢性炎癥和在胃腸道中各位點上發(fā)生血管生成為特征。例如，克羅恩氏病作為慢性透壁炎癥發(fā)生，最常影響末端回腸和結(jié)腸但也可發(fā)生在從口到肛門和肛周的胃腸道的任何部位中?；伎肆_恩氏病的患者通常有慢性腹瀉并伴有腹痛、發(fā)熱、厭食、體重減輕和皿。潰瘍性結(jié)腸炎也是慢性的非特異性炎性和潰瘍性疾病，發(fā)生在結(jié)腸粘膜中并以存在帶血腹瀉為特征。這些炎性腸病通常由整個胃腸道中的慢性肉芽腫炎癥引起，包括炎性細胞軸突所包繞的新生毛細管芽。通過這些抑制劑對血管生成的抑制應抑制芽的形成并阻止肉芽腫的形成。炎性腸病也具有額外的腸表現(xiàn)如皮膚損傷。這類損傷以炎癥和血管生成為特征并可發(fā)生在胃腸道的許多位點處。通過本發(fā)明的HDAC抑制劑對血管生成的抑制可減少炎性細胞的流入和阻止損傷形成。另一種慢性炎癥疾病結(jié)節(jié)病以多系統(tǒng)肉芽胂病為特征。該病的肉芽腫可在體內(nèi)的任何地方形成。因此，癥狀取決于肉芽腫的位點以及該病是否是活動性的。肉芽肺由生成血管的毛細管芽引起，毛細管芽提供炎性細胞的恒定供給。通過用本發(fā)明的HDAC抑制劑來抑制血管生成，這樣的肉芽肺形成可得到抑制。牛皮痺也是一種慢性復發(fā)性炎癥疾病，以各種大小的丘滲和斑塊為特征。單獨用這些抑制劑或與其他抗炎劑結(jié)合的治療應阻止維持特征性病變所必要的新血管的形成并減輕患者的癥狀。類風濕性關節(jié)炎(RA)也是一種慢性炎癥疾病，以外周關節(jié)的非特異性炎癥為特征。認為關節(jié)滑膜內(nèi)襯中的血管發(fā)生血管形成。除形成新的血管網(wǎng)絡外，內(nèi)皮細胞釋放導致血管蓊生長和軟骨破壞的因子和活性氧。血管形成中涉及的因子可能積極有助于并幫助維持類風濕性關節(jié)炎的慢性發(fā)炎狀態(tài)。單獨用本發(fā)明的HDAC抑制劑或與其他抗RA劑結(jié)合的治療可阻止維持慢性炎癥所必要的新血管的形成。本發(fā)明的化合物還可用于治療心/血管疾病如肥大、高血壓、心肌梗塞、再灌注、缺血性心臟病、咽峽炎、心律失常、高膽固醇血癥、動脈粥樣硬化和中風。所述化合物還可用來治療神經(jīng)退行性疾病/CNS疾病如急性和慢性神經(jīng)疾病，包括中風、亨廷頓病、肌萎縮性側(cè)索硬化和阿爾茨海默病。本發(fā)明的化合物也可用作抗微生物劑，例如抗菌劑。本發(fā)明因此也提供了一種用于細菌性感染治療的化合物。本發(fā)明的化合物可用作針對病毒、細菌、真菌和寄生蟲感染的抗感染化合物。感染的實例包括原蟲寄生感染(包括癡原蟲、小球隱孢子蟲、鼠弓形蟲、神經(jīng)肉孢子蟲和艾美球蟲屬)。本發(fā)明的化合物特別適用于治療不希望的或不受控制的細胞增殖，優(yōu)選用于良性胂瘤/增生和惡性腫瘤的治療，更優(yōu)選用于惡性肺瘤的治療，最優(yōu)選用于CCL、乳腺癌和T-細胞淋巴瘤的治療。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的化合物用于緩解癌癥、心臟肥大、慢性心力衰竭、炎癥、心血管疾病、血紅蛋白病、地中海貧血癥、鐮狀細胞病、CNS病、自身免疫性疾病、糖尿病、骨質(zhì)疏松癥、MDS、良性前列腺肥大、口腔粘膜白斑、遺傳相關的代謝失調(diào)、感染、Rubens-Taybi、脆性X綜合征或a-l抗胰蛋白S^:乏，或用于加速傷口愈合、用于保護毛嚢或用作免疫抑制劑。通常，所述炎癥為皮膚炎癥(例如牛皮癬、痤瘡和濕滲)、孝喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、類風濕性關節(jié)炎(RA)、炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病或結(jié)腸炎。通常，所述癌癥為慢性淋巴細胞性白血病、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、間皮瘤或T-細胞淋巴瘤。通常，所述心血管疾病為高血壓、心肌梗塞(MI)、缺血性心臟病(IHD)(再灌注)、心絞痛、心律失常、高膽固醇血癥、高脂血癥、動脈粥樣硬化、中風、心肌炎、充血性心臟病、原發(fā)和繼發(fā)擴張性(充血性)心肌病、月巴厚型心肌病、限制性心肌病、外周性血管疾病、心動奴、高血壓或血栓癥。通常，所述遺傳相關的代謝失調(diào)為嚢性纖維化(CF)、過氧物酶體生物合成失調(diào)或腎上腺腦白質(zhì)營養(yǎng)不良。通常，本發(fā)明的化合物用作器官移植后的免疫抑制劑。通常，所述感染為病毒、細菌、真菌或寄生蟲感染，特別是金黃色葡萄球菌、痤瘡丙酸桿菌、念珠菌或曲霉所致的感染。通常，所述CNS病為亨廷頓病、阿爾茨海默病、多發(fā)性硬化或肌萎縮性側(cè)索硬化。優(yōu)選地，在該實施方案中，本發(fā)明的化合物用于緩解癌癥、心臟肥大、慢性心力衰竭、炎癥、心血管疾病、血紅蛋白病、地中海貧血癥、鐮狀細胞病、CNS病、自身免疫性疾病、糖尿病或骨質(zhì)疏松癥，或用作免疫抑制劑。更優(yōu)選本發(fā)明的化合物用來緩解慢性淋巴細胞性白血病、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、間皮瘤、T-細胞淋巴瘤、心臟肥大、慢性心力衰竭或皮膚炎癥，特別是牛皮痺、痤瘡或濕滲。本發(fā)明的化合物可用于動物的治療，優(yōu)選用于哺乳動物的治療，更優(yōu)選用于人的治療。合適的話，本發(fā)明的化合物可預防性地用來降低這類疾病的發(fā)生率。本發(fā)明的化合物以治療學有效的量施用于患者。按特定化合物的活性、接受治療的患者的年齡、重量和狀況、疾病的類型和嚴重性以及給藥頻率和途徑，典型的劑量為約0.001到50mg每千克體重。優(yōu)選日劑量水平為5mg到2g。下面的實施例說明本發(fā)明。但它們不以任何方式限制本發(fā)明。在這方面，重要的是應理解實施例部分中所用的特定檢測僅是為了指出抑制HDAC的活性而設計的。有許多檢測方法可用來測定給定化合物作為HDAC拮抗劑的活性，因此，在任何一個特定檢測中的負面結(jié)果均不是決定性的。實施例用如下所示方案制備(EXLSV7i，105;21i)-7-異丙基-21-甲基-2-氧雜-12,13-二硫雜曙5,8，20，23-四氮雜畫雙環(huán)[8.7.6]二十三碳-16-烯-3，6，9，19，22-戊酮(pentaone),下文稱為化合物001:化合物001[(R)-2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-3-甲基-丁酰氨基l-乙酸曱酯(2)的制備向攪拌的Fmoc保護的D-纈氨酸(2.70g，7.96mmol)/CH2a2(50mL)溶液中加入EDAC.HC1(1.83g,9.55mmol)、HOBt(1.30g,9.55mmo1)和DIEA(3.8mL，27.86mmo1)。室溫下攪拌15分鐘后加入甘氨酸曱酯(1，1.0g,7.96mmo1)，反應混合物攪拌4小時，用CH2Cl2(50mL)稀釋，用水(25mL)、10%HC1(25mL)、5%NaHC03溶液(25mL)和飽和mp=148-150。C;[a]"D-7.32(c0.50,CHa3);[a產(chǎn)o-7.32(c0.50，CHC13);IRv腦3287，1750,16卯，1649，1535cm'];!HNMR400MHz7.75(d,7,5Hz,2H),7.57(d，7.0Hz，2H),7.39(t，7,0Hz，2H)，7.28(m，2H),6.54(s，IH)，5,44(s,IH)，7.43-4,38(m，2H),4.21(t，/=7.0Hz,1H),4.01-3.96(m，3H)3.72(s，3H)，2.16(m,1H),0.96(t,/=9,0Hz，卿;13CNMR100薩z171.7(C),170.1(C),156.6(C),143.9(C),141.4(C),127.8(CH)，127,2(CH)，125.2(CH),120.1(CH),67.2(CH2),60.4(CH)，52.5(CH),47.3(CH3),41.2(CH2)，31.2(CH)，19.3(CH3)，17.9(CH);MSw/z432,9(M+Na)+,842,8(2M+Na)+.{(R)-2-[(S)-2-(9樂芴-9-基甲氧基羰基氨基)-3-(三苯曱基硫烷基)-丙酰^-3-甲基-丁酰#^}-乙酸曱酯(3)的制備室溫下向攪拌的2(l.Og，2.44mmol)/CH3CN(48.5mL)溶液中加入Et2NH(2.5mL)。室溫下攪拌3小時后用己烷(100mL)稀釋反應混合物并濃縮得到無色油狀的粗胺。向攪拌的Fmoc-(5Trt)-D-半胱氨酸(1.70g.2.9mmol)/CH3CN(25mL)溶液中加入EDAC'HCI(561.0mg,2.93mmo1)、HOBt(396mg,2.93mmol)和DIEA(1.31mL,7.32mmo1)。室溫下攪拌15分鐘后加入粗胺，反應混合物攪拌4小時，除去溶劑，將殘留物溶解在CH2Cl2(100mL)中，用水(25mL)、10%HC1(25mL)、5%NaHC03溶液(25mL)和飽和NaCl溶液(25mL)洗滌，經(jīng)干燥(Na2S04)、過濾和溶劑脫除，得到灰白色固體，用CH3CN重結(jié)晶，得到呈白色固體的3(1.46g,79%):[a]22D-2.35(c0.50，CHC13);IRvmax3267,1646,1543cm";&NMR400MHz7.76(t,/=7.0Hz,2H),7.54(d,>6.5Hz,2H)，7.39-7,21(m19H)，6.87(s，IH)'6.23(d，8.0，2H)，5.04(d,7.0,IH)，4,37(d，/=7.0,2H),4.29(dd,/=8.6，/=5.0,IH)，4.17(t,6.5，IH)，3.96(m，1H),3,72(dd,，J-IS.I，J=5.0，1H),3.65(s,3H)，3.60(m，IH)，2.70(d，/-6.5，2H)，2.30(m，1H),1.70(s，1H),0.87(dd，/=13.0，/-7.0Hz,6H);13CNMR100MHz170.6(C),170.5(C),170.1(C),156.2(C),144.3(C),143.8(C),143.7(C)141.4(C),129.6(CH),12S,4(CH),128.0(CH),127.8(CH)127.2(CH)，125.1(CH)，120.2(CH)，67.6(CH),67.2(CH2)，58.4(CH)，54.3(CH)，52.4(CH3)，47.1(CH)，40.9(CH2),33.6(CH2),30,0(CH)，19.4(CH3)，17,4(CH3);MSm/z777.8(M+Na)+.C45H45N306S分析計算值71.50;H,6.00;N，5.56;實測值C,71.42.'H,5.99;N,5.55。((R)-2-KS)-2-[(R)-2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-丙酰氨基-3-三苯甲差J克烷基-丙酰氨基}-3-甲基-丁酰M)-乙酸甲酯(4)的制備室溫下向攪拌的3(400mg，0.53mmol)/CH3CN(30mL)溶液中加入Et2NH(1.5mL)。室溫下攪拌3小時后用庚烷(60mL)稀釋反應混合物并濃縮得到無色油狀的粗胺。向攪拌的Fmoc-D-丙氨酸(198mg，0.636mmol)/CH3CN(25mL)溶液中加入EDAC.HC1(122.0mg,0.634mmo1)、HOBt(86mg,0.636mmol)和DIEA(502[d,1.91mmo1)。室溫下攪拌15分鐘后加入粗胺，反應混合物攪拌18小時，除去溶劑，將殘留物溶解在CH2C12(50mL)中，用水(15mL)、10%HC1(15mL)、5%NaHC03溶液(15mL)和飽和NaCl溶液(15mL)洗滌，經(jīng)干燥(Na2S04)、過濾和溶劑脫除，得到灰白色固體，用CH3CN重結(jié)晶，得到呈白色固體的4(670mg,81%):mp=195-197。C;[a]22D+5,1(c0,50,CHC13);IRvmax3267,3054，1744，1706,1635，1531.1cm";HNMR400MHz7.75(d，■/=7.5Hz，2H)，7.52(d,/=7.0Hz,2H)，7.39(m，7印，7.26-7.15(ni，13H)，6.79(s，1H),6.62(s，1H),5.47(s,1H),4.43-4.28(m,4H)，4.13(m,IH)，4.01(m,IH)，3.88(s,2H),3.63(s,3H)，2.81(m,1H),2.52(m,IH)，2.26'(m,1H),1.30(d,6.0Hz，3H),0.94(d,J=6.0Hz,3H)，0.S97.0Hz,3H);13CNMR100MHz172.7,17U，170.2,156.1,144.4，143,9，143,8，141,4，129,6，128.3,127.9,127.2，127.1，125.1，120.1,58.5，52.7,52.3,50,8,47.2'41.0，33.5,30.4，19.3,19.0，17.7;MSw/z849,2(M+Na)+，865.1(M+K)+.((R)-2-"S)-2-[(R)-2-((E)-(S)-3-羥基-7-三苯甲基硫烷基-庚-4-烯酰丙酰氨基l-3-三苯曱差J克烷基-丙酰氨基}-3-甲基-丁酰^JO-乙酸甲酯(6)的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula>室溫下向攪拌的4(137mg,0.166mmol)/CH3CN(10mL)溶液中加入Et;jNH(0.5mL)。室溫下攪拌5小時后用庚烷(30mL)稀釋反應混合物，除去溶劑，加入CH2Cl2(10mL)，過濾并濃縮得到無色油狀的粗胺。0。C下向攪拌的粗胺/CH2Cl2(4mL)溶液中加入5(84.0mg,0.149mmo1,按Yurek-George，A.;Habens，F(xiàn).;Brimmell，M.;Packham,G;Ganesan，A./j附.C7^附.2004，226,1030-1031中的程序制備)和DMAP(2.2mg，0.0176mmo1)。室溫下攪拌8小時后除去溶劑，殘留物用快速色鐠(洗脫劑30-40%的EtOAc/己烷)純化，得到呈白色玻璃狀的6(127mg，85%):mp=191-193。C;[ct]22D-18.0(c0.50,CHC13);IRv飄3272,3064，1758，1692,1621cm";'HNMR400MHz(5%CD30D/CDC13)7.40(m，12H)，7.25(m，12H)，7.20(m,6H)，6.96and6.88(不穩(wěn)定的NH，d,8.0Hz，1H),5,49(dt,■/=15.0Hz,6.5Hz，IH)，5.37(dd,■/=15,5Hz,6.0Hz，1H),4.32(m,2H),4.22(d，6.0Hz,1H),3,98(t，■/=7-0Hz，1H),3.92(d，/=18,1Hz,1H),3.72(d，/=17.6Hz,1H)>3,67(s,3H),2.64(dd,13,0Hz,7.5Hz,1H),2,58(dd，>13.0Hz,7.5Hz，1H),2.56-2.18(m，9H)，2-ll(q,/=6.5Hz，2H),1.31(d，/=7.5Hz，3H),0.91(t，/=7,0Hz，卿;13CNMR100MHz(50/0CD30r>/CDCl3)173.0,172.0,171.3，170.5,170.2,144.9，144.2，132.8，129.9,129.7，129.6，129.5，128.2,128.1,127.9，127.1,126.7,69.6，67.1,66,7,58,9，58.8,52.7，52.2，50.0,49.8,49.6,49.5,49.4，49.1，43.7,40.9,40.8，33.1,31.5，、31,3,30.0,19,2,17.5;MSm/z1050.4(M+2Na)+.((R)-2-KS)-2-[(R)-2-((E)-(S)-3-羥基-7-三苯甲基硫烷基-庚-4-烯酰絲)-丙酰絲畫3-三苯甲J^t烷基-丙酰絲}-3-曱基-丁酰絲)隱乙酸(7)的制備0。C下向攪拌的6(220mg，0.222mmol)/4:lTHF/H2O(4.0mL)溶液中加入LiOH(llmg，0.440mmo1)。攪拌1小時后，用H20(30ml)稀釋反應混合物，用2MKHS04酸化至pH4-5，并用EtOAc(3x30mL)萃取。有機層用飽和NaCl溶液(15mL)洗滌，并干燥(Na2S04)、過濾和濃縮，得到白色固體，將該固體與乙醚一起研磨，得到呈白色固體的7(199.5mg,91%),其不經(jīng)處理直接用于下一步驟中mp=191-193。C;[a]22D-18.5(c0,50，CHC13);IRvmax3413,1711，1678,1630，1451cm";^NMR400MHz(5%CD3OD/CDCl3)7.30(m，12H),7.16(m,12H)，7.13(m，6H)，5.43(dt，15.5Hz,6.0Hz,IH)，5,30(dd,/=15.5Hz，6.0Hz，1H),4.27(m,2H)，4.21(m,IH)，3.99(m5IH)，3-75(s,2H),3.77(m,br,卿，2.55(dd,/=12.5Hz，6,5Hz,IH)，2,44(dd，12.5Hz,7.5Hz，1H),2.21(m，2H),2,12(m，3H),2.02(m,2H)，1.23(d'/=7.0Hz,3H),0.83(d,J=7,0Hz，3H)，0.80(d,J=7.0Hz,3H);13CNMR100MHz(5%CD3OD/CDCl3)173.0，172,1，171.6，171,5，170.5,144.9，144.3，132.7，129,8,129.6，129.5,128.2，127,9,127.0,126,7,69.5，67,1,66,7，58.7,52.7，43.5,40.9,33.2,31.5,31.3，30.3，19.2，19.1，".6;MSw/z1013.2(M+Na)+.(6i"S，12i,165)-6-異丙基-l^曱基-16-((E;M-三苯甲基硫烷基-丁-1-烯基)-9-三苯甲基硫烷基甲基-1-氧雜-4,7,10,13-四氮雜-環(huán)十六烷-2,5，8，ll,14-戊酮(8)的制備0。C下向攪拌的羥基酸7(100mg，0.102mmol)/CH2Cl2(5mL)溶液中逐滴加入DCC(28.2mg,0.137mmol)/CH2Cl2(0.5mL)溶液。0。C下攪拌30分鐘后，加入DMAP(2.5mg，0.0213mmol)/CH2Cl2(51mL)溶液，然后在室溫下攪拌16小時。濾除固體沉淀，濾液用CH2Cl2(5mL)洗滌。有機層用水(10mL)、5%KHS04(10mL)、5%NaHC03溶液(10mL)和飽和NaCl溶液(10mL)洗滌，并千燥(Na;jS04)、過濾和濃縮。殘留物用快速色鐠(洗脫劑30-50%的EtOAc/己烷)純化，得到呈白色玻璃狀的8(37mg,38%)。(^>(1&7及，105;217)-7-異丙基-21-甲基-2-氧雜-12,13-二硫雜-5,8,20,23-四氮雜-雙環(huán)[8.7.61二十三碳-16-烯-3，6,9,19，22-戊酮(化合物OOl)的制備用5分鐘向劇烈攪拌的12(37.1mg，0.146mmol)/MeOH(50mL)溶液中逐滴加入受保護的二巰基化物8(35mg,0.0365mmol)/MeOH(20mL)。再繼續(xù)攪拌10分鐘后，加入0.2M的抗壞血^70.2M檸檬酸緩沖液(4mL)并濃縮有機相，加入1:1的EtOAc:NaCl(20mL)，用EtOAc(5x25mL)萃取，合并有機萃取物，并干燥(Na;tS04)、過濾和脫除溶劑。殘留物用快速色譜(洗脫劑1-6%的MeOH/CHCl3)純化，得到呈白色固體的化合物001(11.8mg,67%):M22D-98.0(c0,50，CHC13);IRv薩3300，2477,1734，1659，1526，1446cm:，HNMR400MHz7.41(d,J-6.0Hz,1H),7,23(d,/=8.5Hz，1H)，6.37(s,1H),5.94(dt，/=16.5,7.5Hz，1H),5.78-5.71(m,1H)，4.86(m，1H)，4.26(d，7.5Hz，1H)，4.17(d,■/=14,0Hz，1H),4.08(d，《/=14.0Hz，1H)，3.44(dd,J=14.5Hz，10.0Hz，1H),3.22(d,10.0Hz,1H)，2.88-2.56(m,8H),1.49(d,/=7.5Hz,3H),O.卯(d,J=6,5Hz，3H)，0.92(d,6,5Hz,3H);13CNMR100應z173.2，171,9,170.9,170.1,168.3,129.8,70.2，64.4,55.9，51.7，41.7,38,2，37.9，35.7,31,0，26.9,20.2,19.7，15.4;HRMSw/z509.1495(M+Na)+預期的509.1499.合成式(I)所代表的類似物的一般程序在步驟(a)中，帶側(cè)鏈R2的氨基酸酯與帶側(cè)鏈&的第二種氨基酸縮合產(chǎn)生二肽。在步驟(b)中，二肽與受保護的半胱氨酸衍生物縮合產(chǎn)生三肽。在步驟(c)中，三肽與氨基酸結(jié)合產(chǎn)生受保護的四肽。在步驟(d)中，四肽的N-端去保護，游離胺與(3-羥基酸衍生物結(jié)合。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，R4和Rs為H，X為如Yurek-George，A.;Habens，F(xiàn).;Brimmell,M.;Packham,G;Ganesan，A，/爿柳.Oe附.5W.2004,1030-1031中所報道的手性助劑。在步驟(e)中，酯基水解，然后在步驟(f)中環(huán)化并在(g)中形成二硫鍵以完成雙環(huán)酯肽化合物(I)的合成。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage45</formula>[(R)-2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-3-曱基-丁酰氨基-乙酸甲酯(2A)的制備。向攪拌的Fmoc保護的D-纈氨酸(2.70g,7.96mmol)/CH2Cl2(50mL)46通過一般方案合成類似物9A-F,oH2N'0'0R2R2=H,1AFmocHN^""^tj----^、0'R2-H,='Pr,2AFmocHN'STrtR2-H,K=(Pr,3ATrtS'FmocHN""""^OSTrtOR2R2=H'R,-'Pr,R3=Me,4AR2-H,&='Pr,R3=Bn,犯R2-H,R-'Pr,R3-'Pr,4CR2=KR，='Pr,R3=CH2(CH2)2CH2NHBoc,4D、，、R1、STrtn人R2.=H,='Pr,R3:R2=H，R，='Pr,R3:Rs=H,Ri='Pr,R3:R2=H,='Pr,R3:;Me,6A:Bn,6B:fPr,6CCH2(CH2)2CH2,oc,6DR2=Me，R'=〖Pr'R3-Me,6ER2=H,R,='Pr,R3-CH2CH2C02'BU,6FR2IVR2R2:H,-'Pr,Ra=Me,7A:H,=fPr,R3=Bn,7B:H，R，='Pr,R3老,7C:H,&='Pr,R3-CH2(CH2)2CH2NHBoc,7D:Me,R，='Pr,R3=Me,7E:H,-'Pr，R3=CH2CH2C02fBu,7F=H,-'Pr,R3=Me,8AR2-H,=fPr,R3=Me,9A=H,-,Pr,R3=Bn,8BR2-H,R1-,Pr,R3=Bn,9B-H，R，-'Pr,R3='Pr,8CR2-H,R='Pr,R3='Pr'9C=H,-'Pr,R3=CH2(CH2)2CH2NHBoc,8DR2-H,-'Pr,Rg=CH2(CH2)2CH2NHBoc,9D-Ms,R，=fPr,R3=Me,8ER2-Me,R，-'Pr,R3=Me,犯=H國R，='Pr,R3=CH2CH2C02'Bu,8Fh|~R2=H,-'Pr國R3=CH2CH2C02fBu,9FhR2-H,='Pr,R3-CH2CH2C02H,10F、3、3溶液中加入EDAC'HC1(1.83g，9.55mmol)、HOBt(1.30g,9.55mmol)和DIEA(3.8mL，27.86mmol)。室溫下攪拌15分鐘后加入甘氨酸甲酯(1A,1.0g,7.96mmol)，反應混合物攪拌4小時，用CH2Cl2(50mL)稀釋，用水(25mL)、10%HC1(25mL)、5%NaHC03溶液(25mL)和飽和NaCl溶液(25mL)洗滌，經(jīng)干燥(Na2S04)、過濾和濃縮，得到灰白色固體，用CH3CN重結(jié)晶，得到呈白色固體的2A(2.81g,86%):mp=148-150°C;[ot〗22D-7.32(c0.50，CHC13);IRv咖x3287,1750，1690,1649，1535cm'1;'HNMR(400MHz,CDC13)57,75(d，J-7.5Hz，2H)'7.57(d,■/=7.0Hz，2H),7.39(t，7.0Hz，2H)，7.28(m,2H)'6.54(s,IH)，5,44(s,IH)'4.43-4.38(m，2H)，4.21(t,/=7.0Hz,1H),4.01-3.96(m，3H),3,72(s，3H),2.16(m,IH)，0.96(t,9.0Hz，6H);I3CNMR(100MHz,CDC13)S171.7(C),170.1(C)，156.6(C),143.9(C),141.4(C),127.S(CH),127.2(CH)'125.2(CH)，120.1(CH)，67.2(CH2)，60.4(CH)，52.5(CH)，47.3(CH3)，41.2(CH2),31.2(CH),19,3(CH3),17.9(CH);MSm/z842.8(30%，[2M+Na],，432.9(100%,[M+Na],.{(R)-2-[(S)-2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-3-(三苯曱基硫烷基)-丙酰M-3-甲基-丁酰^J^-乙酸曱酯(3A)的制備室溫下向攪拌的2A(1.0g，2.44mmol)/CH3CN(48.5mL)溶液中加入Et2NH(2.5mL)。室溫下攪拌3小時后用己烷(100mL)稀釋反應混合物并濃縮得到無色油狀的粗胺。向攪拌的Fmoc-(STrt)-D-半胱氨酸(1.70g，2.9mmol)/CH3CN(25mL)溶液中加入EDAOHC1(561.0mg,2.93mmo1)、HOBt(396mg，2.93mmol)和DIEA(1.31mL，7.32mmo1)。室溫下攪拌15分鐘后加入粗胺，反應混合物攪拌4小時，除去溶劑，將殘留物溶解在CH2Cl2(100mL)中，用水(25mL)、10%HC1(25mL)、5%NaHC03溶液(25mL)和飽和NaCl溶液(25mL)洗滌，經(jīng)干燥(Na2S04)、過濾和溶劑脫除，得到灰白色固體，用CH3CN重結(jié)晶，得到呈白色固體的3A(1.46g，79%):[a]2、(c0.50，CHC13);IRvmox3267,1543cm、NMR400MHz(400MHz,CDC")S7.76(t'J=7,0Hz,2H)，7.54(d,J=6.5Hz,2H)'7.39々.21(m卿，6.87(s，IH)，6.23(d'J=8.0,2H),5.04(d,J=7.0,1H〉,4.37(d,J=7,0，2H),4.29(dd,J=8.6,5.0,1H),4.17(t，J-6.5,1H),3,96(m,1H),3.72(dd,,J=18.1,5.0，1H),3.65(s,3H),3.60(m'IH)'2.70(d，J=6.5，2H),2.30(m'IH),L70(s'1H),0.87(dcU=13.0,J=7.0Hz,6H);13CNMR(100MHz,CDC13)S170.6(C),170.5(C),170.1(C),156.2(C),144.3(C),143.8(C),143.7(C)141.4(C),129.6(CH),128.4(CH),128.0(CH),127.8(CH)127.2(CH〉'125.1(CH)'120.2(CH)，67.6(CH),67.2(CH2),58,4(CH)，54.3(CH),52.4(CH3),47.1(CH>,40.9(CH2>,33,6(CH2),30.0(CH),19.4(CH3),17,4(CH3);LRMSm/《777.8(100%,[M+Na〗+);C45H45N306S分析計算值71.50;H，6.00;N，5.56;實測值C,71.42;H，5.99;N，5.55((R)-2-"S)-2-(R)-2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-丙酰氨基-3-三苯甲1^危烷基-丙酰#^}-3-甲基-丁酰M)-乙酸甲酯(4A)的制備室溫下向攪拌的3A(卯Omg，1.19mmol)/(CH3CN/CH2Cl2)(l:l,60mL)溶液中加入Et2NH(3mL)。室溫下攪拌3小時后用庚烷(60mL)稀釋反應混合物并濃縮得到無色油狀的粗胺。向攪拌的Fmoc-D-丙氨酸(529mg,1.7mmol)/CH2Cl2(30mL)溶液中加入EDAC.HC1(326mg，1.7mmo1)、HOBt(230mg,1.7mmol)和DIEA(627nL，3.6mmo1)。室溫下攪拌10分鐘后加入粗胺/CH2Cl2(20mL)溶液，反應混合物攪拌18小時。用水(15mL)、10%HCl(15mL)、5%NaHC03溶液(15mL)和飽和NaCl溶液(15mL)洗滌，經(jīng)干燥(32804)、過濾和溶劑脫除，得到灰白色固體，用CH3CN重結(jié)晶，得到呈白色固體的4A(810mg,0.98mmo1,82%):nip=195-197。C;〖a〗22D+5.1(c0.50，CHC13);IRv鵬3267,3054,1744,1706,1635,1531.1cm1;!HNMR(400MHz,CDC13)S7.75(d,J=7.5Hz,2H)，7.52(d,J-7.0Hz,2H),7.39(m,7H),7,26-7.15(m,13H),6.79(s,IH)'6.62(s'1H),5.47(s,IH)，4.434.28(m,4H),4,13(m，IH)'4.01(m'1H),3.88(s,2H〉,3.63(s'3H)，2.81(m,IH)'2.52(m,1H),2.26,(m'1H),U0(d,J=6.0Hz,3H),0,94(d,J=6,0Hz,3H),0,89(d，J=7.0Hz,3H);13CNMR(100MHz,CDC")S172.7,17U,170.2,156.1,144.4,143.9,143.8,141.4，129.6,128.3,127.9，127,2,127.1,125,1'120.1,58,5，52.7，52.3'50.8,47.2,41.0,33.5'30.4,19.3,19.0，17.7;LRMSm/《849.2(100%,〖M+Na+),865.1(20%,[M+K]+).((R)-2-KS)-2-[(R)-2-((E)-(S)-3-羥基-7-三苯甲基硫烷基-庚-4-烯酰丙酰氨基-3-三苯曱差J危烷基-丙酰氛基}-3-曱基-丁酰M)-乙酸甲酯(6A)的制備室溫下向攪拌的4A(760mg，0.92mmol)/(CH2Cl2/CH3CN)(3:2,150mL)溶液中加入Et2NH(7.5mL)。室溫下攪拌5小時后用庚烷(60mL)稀釋反應混合物，除去溶劑，加入CH2Cl2(50mL)，過濾并濃縮得到無色油狀的粗胺。室溫下向攪拌的粗胺/CH2Cl2(30mL)溶液中加入5(672mg,1.20mmo1，按Yurek-George,A.;Habens,F.;Brimmell,M.;Packham，G;Ganesan,A.爿附.C7re附.5Vc2004,"6，1030-1031中的程序制備)/CH2Cl2(5mL)和DMAP(15mg，0.12mmol)的溶液。室溫下攪拌12小時后除去溶劑，殘留物用快速色鐠(洗脫劑10-100%的EtOAc/CH2Cl2)純化，得到呈白色玻璃狀的6A(740mg,80%):mp=191-193。C;[a]"D-18.0(c0.50,CHCb);IRvmM3272,3064，1758,1692,1621cm";NMR(柳MHz,5%CD30D/CDC13)S7.40(m，12H)，7.25(m，12H),7,20(m，6H)，6.96and6,88(labileNH,d,8.0Hz,IH)，5.49(dt,15.0Hz,6.5Hz,1H),5.37(組《/=15.5Hz，6.0Hz，IH)，4.32(m，2H)，4.22(d,6.0Hz,IH)，3.98(t,/=7.0Hz,IH)，3,92((!，/=18.1Hz,IH)，3.72(d,/=17.6Hz，IH)，3,67(s,犯),2.64(dd,/=13.0,7.5Hz'IH)'2.58(dd，13.0,7.5Hz，IH)，2,56-2.18(m，9H)，2.11(q，/=6.5Hz,2H),1.31(d,7=7,5Hz，3H),0.91(t，J"=7.0Hz,6H);13CNMR(100MHz,5%CD30D/CDC13)S173.0,172.0，171,3，170,5，170.2,144.9;144.2,132.8,129.9，129.7,129.6，129.5，128.2,128.1，127.9,127.1，126.7，69.6,67.1，66.7,58.9,58.8,52.7,52.2，50.0，49.8,49,6，49.5，49.4，49.1，43.7,40.9,40.8，33.1,31.5，31,3，30.0,19.2,17.5;LRMS1050.4(100%，[M+Na]".((R)-2-KS)-2-[(R)-2-((E)-(S)-3-羥基-7-三苯曱基硫烷基-庚-4-烯酰丙酰Ml畫3畫三苯甲！^危烷基-丙酰#^}-3-甲基-丁酰M)-乙酸(7A)的制備0。C下向攪拌的6A(700mg，0.70mmol)/THF(15mL)溶液中加入LiOH(25mg,1.05mmol)/H2O(2.4mL)溶液。攪拌1小時后，用H20(30ml)稀釋反應混合物，用1MKHS04酸化至pH3-4,并用EtOAc(3x30mL)萃取。有機層用飽和NaCl(15mL)洗^，并干燥(Na2S04)、過濾和濃縮，得到白色固體，將該固體與乙醚一起研磨，得到呈白色固體的7A(693mg,99%),其不經(jīng)處理直接用于下一步驟中mp=191-193。C;[a]22D'18,5(c0.50,CHCl3);IRv滅3413,1711,1678,1630'1451cm'1;lHNMR(400MHz，5%CD30D/CDC1》S7.30(m,12H),7.16(m'12H〉，7.B(m，6H),5.43(dtj=15,5Hz,6.0Hz,IH)，5.30(dd,J=15.5Hz,6.0Hz，1H),4.27(m，2H)，4.21(m,1H),3.99(m,iH)，3.75(s,2H>,3.77(ni,br,6H),2.55(dcU=12,5Hz，6.5Hz,1H),2.44(dd,J=12.5Hz,7.5Hz,1H),2.21(m'2H),2.12(m，3H),2.02(m,2H),1,23(d，J=7,0Hz,3H)，0.83(d,J=7.0Hz,3H〉,0.80(d，J=7.0Hz,3H);l3CNMR(100MHz,50/oCD]OD/CDCl3)S173.0,172,1'171.6,171.5,170.5,144.9,1443,132.7'129.8,129.6，129,5,128.2，127,9,127.0,126.7'69.5,67,1'66.7，58,7,52.7,43,5'40,9，33,2，31,5,3U，30.3,19.2，19.1,17.6;LRMSm/z1013.2(100%,,Na〗+),(6及,9&12i,16^S)-6-異丙基-12-甲基-16-((E)-4-三苯甲基硫烷基-丁-1-烯基)-9-三苯甲基硫烷基甲基-1-氧雜-4，7，10,13-四氮雜-環(huán)十六烷-2,5,8，11,14-戊酮(8人)的制備用5小時向(2-甲基-6-硝基苯曱酸酐(MNBA)(289mg，0.84mmo1)+DMAP(205mg，1.68mmol))/CH2Cl2(160mL)溶液中逐滴加入酸7A(693mg,O.70mmol)/(CH2C12/THF)(2:1，600mL)溶液。再過12小時后，加入1MHC1(150mL)，用CH2C12(3xl00mL)萃取。合并有^W目，用飽和NaHC03溶液(150mL)、隨后用鹽水(80mL)洗滌，然后干燥(MgS04)、過濾和濃縮。殘留物用快速色語(洗脫劑50-100%的EtOAc/己烷)純化，得到呈白色玻璃狀的8A(478mg，0.49mmo1，70%):[a〗22D'7.0(cO.50,CHCI3);IRv隨1735，1659,1526cm";!HNMR(400MHz,CDC13〉57.43-7.33(nx，12H),7.32-7.13(m，20H)'6.77(dj=5,3Hz,IH)'6.54(cU=7.3Hz'1H),5,58(dt,J-15.1,6.8Hz，1H),5.44^.29(m,2H)，4.55(dd,/=16.8,9,0Hz,IH)，4.46(ddj=9,5,4.3Hz，IH)'3.89(quin,(ddJ-7.0Hz,1H),3.77(dtj=8,3,5,3Hz,IH)，3.43(ddj=16>8,2.8Hz,IH)，3.03(ddj=12,6，8.3Hz,IH)，2,61-2.49(m,3H),2.18(t,J=7.5Hz'2H),2.11'1.95(m,2H)'U8(dj=7,0Hz'3H),0.94(d,J-6.8Hz,3H),0.90(d，J=6,8Hz,3ti);13C'NMR,MHz,CDC13)S174.0(C)，170.9(C)，170.8(C),169.8(C),169.3(C),144.9(C)'144,3(C〉，133.2(CH)'129,7(CH)'129.5(CH),128.3(CH),128,0(CH),127.2(CH),126.8(CH),72.3(CH)，67,3(C〉，66,8(C),58.3〈CH〉,55.9(CH〉,50,5(CH),41.7(2xCH2)，32.5(CH2)，31,3(CH2),31.2(CH2)，28.8(CH),19.8(CH3),19.8(CH3)，17.2(CH3),16,7(CH3〉；LRMS(ES+)m/《996(100°/。，[M+Na]+),974(10%,[M+H]+).(EXlSJJMtKS^li),-異丙基-21-甲基-2-氧雜-12，13-二石克雜-5,8，20,23-四氮雜-雙環(huán)[8.7.6]二十三碳-16-烯-3,6,9,19,22-戊酮(9人)的制備用30分鐘向劇烈攪拌的I2(H20mg，4.42mmol)/(CH2Cl2/MeOH)(9:l，lOOOmL)溶液中逐滴加入受保護的二巰基化物8A(430mg,0.44mmol)/(CH2Cl2/MeOH)(9:l，500mL)。再攪拌30分鐘后，加入0.1M的硫代硫酸鈉溶液(300mL)和飽和NaCl(100mL)，用CH2C12(3xl00mL)萃取。合并有機萃取物，并干燥(MgS04)、過濾和脫除溶劑。殘留iM快速色鐠(洗脫劑1-6%的MeOH/CH2Cl2)純化，得到呈白色固體的9A(205mg,0.42mmo1,96%):[a〗Z2D-98.0(ca50,CHCl3);mv幽3300，2477,1734，1659,1526，1446on'1;NMR(400MHz,CDC13)S7.46(d,J=6.5Hz，1H)'7.33(t,J=5.3Hz，1H〉'7.28(dJ=8.8Hz,1H),6.60(d,J=3.8Hz，1H〉，5.95(dtd,J=16.1,6,5,2,0Hz,1H),5.80巧.70(m,2H),4.85(ddd,J=9,8,8.5,3.8Hz,1H)，4.21(qd,J=7.3,3.8Hz,1H),4.11(d,J=5.3Hz,2H)，3.44(dcU-15.6'10.0Hz,1H),3.20(dd,J=10.3,6.8Hz,1H)，3.01'2.95(m,2H)，2,92(dd,J=15.6,4.0Hz,1H),2,85-2,58(m'5H)1.49(dj-7.5Hz,3H),0,98(dj-6.5Hz,3H),0.92(dj=6.5Hz,3H);l3CNMR100MHz173.3(C),171.6(C),m.O(C),169.4(C)'16S.2(C),130.4(CH),130.3(CH)'69,8(CH),64.9(CH)，54.5(CH)，52.0(CH),42.4(2xCH2),38,7(CH2)，38.6〈CH2),32.7〈CH2),27,5(CH)，20.8(CH3),20.1(CH3),16.7(CH3);LRMS(ES+)m/《995(50%，[2M+Na〗+)，509(80%,[M+Na]+)，487(100%,[M+H]+);HRMSm々509.1495(M+Na)+預期的509,1柳.((R)-2-KS)-2-[(R)-2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰氨基-3-三苯甲基硫烷基-丙酰氨基}-3-曱基-丁酰氨基)-乙酸甲酯(4B)的制備室溫下向攪拌的3A(836mg,l.llmmol)/(CH3CN/CH2Cl2)(l:l，60mL)溶液中加入Et2NH(3mL)。室溫下攪拌3小時后用庚烷(60mL)稀釋反應混合物并濃縮得到無色油狀的粗胺。向攪拌的Fmoc-D-苯丙氨酸(650mg，1.7mmol)/CH2Cl2(30mL)溶液中加入EDAC.HCl(326mg，1.7mmo1)、HOBt(230mg，1.7mmol)和DIEA(627nl，3.6mmo1)。室溫下攪拌10分鐘后加入粗胺/CH2Cl2(20mL)溶液，反應混合物攪拌12小時。隨之用水(15mL)、10%HCl(15mL)、5%NaHC03溶液(15mL)和飽和NaCl溶液(15mL)洗滌反應，經(jīng)干燥(Na2S04)、過濾和溶劑脫除，得到灰白色固體，用CH3CN重結(jié)晶，得到呈白色固體的4B(800mg,0.89mmo1，80%):IRvmax3264,3053,1742,1701，1636,1532cm'1;iH-NMR(400MHz'CDC13)S7.75(d，>/=7.5Hz，2H),7.46(t,7,5Hz,2H),7.41-7.31(m,8H),7.30-7.07(m,16H)，7.01(brs,1H),6.54(brs,2H)，5,29(brs，IH)，4.48-4.32(m，3H)，4.25-4.13(m，IH)'4.10(t，/=8.5Hz,1H),3.99-3,76(m，3H),3.65(s，3H)，3.10-2.88(m,2H),2.83-2.69(m,IH)，2,49(dd,/-13.0,6.3Hz，IH)，2.36-2.22，(m，1H),0.93(t,/-7.0Hz，6H);13CNMR100MHz171.2(C),171.0(C),170.2(C),170,0(C)，156.2(C)，144.3(C),143.9(C),143.7(C)，141.4(C)，136.0(C)，129.5(CH),129.3(CH),129.0(CH)，128.3(CH)，127.9(CH),127.4(CH),127.2(CH),127.1(CH),125.2(CH),120.1(CH),67,3(CH2),58.6(CH)，56.2(CH),52.8(CH),52,3(CH3),47,2(CH),41.0(CH2),38,3(CH2)，33.5(CH2),30.2(CH),19.4(CH3)，17.7(CH3);LRMS(ES"w/z1828(30%,[2M+Na]4)，925(100%,[M+Na]".((R)-2-KS)-2-[(R)-2-((E)-(S)-3-羥基-7-三苯甲基硫烷基-庚-4-烯酰氨基)-3-苯基-丙酰氨基-3-三苯甲基硫烷基-丙酰氨基}-3-甲基-丁酰氨基)-乙酸曱酯(6B)的制備室溫下向攪拌的4B(245mg，O.28mmol)/(CHC13/CH3CN)(1:1,14mL)溶液中加入Et2NH(lmL)。室溫下攪拌5小時后用庚烷(10mL)稀釋反應混合物，除去溶劑，得到無色油狀的粗胺。室溫下向攪拌的粗胺/CH2Cl2(10mL)溶液中加入5(193mg,0.34mmol)/CH2Cl2(5mL)溶液和DMAP(4mg，0.034mmo1)。室溫下攪拌12小時后除去溶劑，殘留物用快速色鐠(洗脫劑2-4%的MeOH/CH2Cl2)純化，得到呈白色固體的6B(l卯mg,64%):NMR(400MHz,CDC13)S7,46-7.05(m，37H),6.85(brs，1H),6.34(brs，1H)，5.44(<Jt,15.3，6.5Hz,IH)，5.29(dd，15.3，6.2Hz，IH)，4.74(brd,/=5.3Hz,IH)，4,37(t,7.0Hz,IH)，4.33-4.25(m,1H),4.20-4.08(m，IH)，3.93-3-74(m，2H),3.65(s,3H),3.31(brs，1H),3.06(dd,/-14.3,5.3Hz,1H),2.96(dd,/=14.3,7.3Hz,1H),2.59(dd，J=12.5，6.8Hz，1H),2.33-2,08(m,5H)，2.04(q,/-、7.0Hz，2H)，0,90(t,6.3Hz，6H);13CNMR(100MHz,CDC13)5171.9(C)，171.2(C)，17U(C),170.4(2xC)，145.0(C),144.3(C),136.1(C)，132.5(CH)，130.1(CH),129.7(CH),129.5(CH)，129.3(CH)，128.8(CH),128.2(CH),128.0(CH)，127.3(CH)，127.1(CH),126.7(CH),69.8(CH),67.1(C)，66.8(C)，58.9(CH)，54.4(CH),52.6(CH),52,3(CH3)，43,7(CH2)，41.0(CH2),37,6(CH2)，33,8(CH2)，31.5(CH2),31.4(CH2)，30.3(CH),19,3(CH3),17.9(CH3》LRMS(ES+)m/z1104(100%,[M+Na〗,，1082(5Qo/o,[M+H]4).(67，9&12及，166>12-千基-6-異丙基-16-((￡)-4-三苯甲基石克烷基-丁-1-烯基)-9-三苯甲基硫烷基曱基-1-氧雜-4，7,10,13-四氮雜-環(huán)十六烷-2，5，8，11，14-戊酮(8B)的制備向甲酯6B(180mg，0.17mmol)/THF(0。C,10mL)溶液中加入LiOH(6mg，0.25)/H20(1.5mL)溶液。1小時后加入1MHC1(6mL)結(jié)束反應。加入CHCl3(50mL)，分離有^4目，用CHC13(2xl0mL)萃取。有樹目用鹽水(15mL)洗滌，然后干燥(MgS04)、過濾和真空濃縮，得到呈白色固體的粗酸7B(179mg,定量(qualitative))，其立即用于下一步驟中(ES-)w々1066(100%,[M-H]-)。用3小時向(MNBA(68mg,0.20mmol)+DMAP(49mg,0.40mmo1))/CH2Cl2(40mL)溶液中逐滴加入酸7B(179mg,O.17mmol)/(CH2C12/THF)(15:1，160mL)溶液(Nb先將酸溶于THF中，然后加入CH2C12)。再過14小時后，加入lMHCl(40mL)結(jié)束反應。分離有;M目(用CH2C12萃取)并依次用NaHCO3(30mL)和鹽水(20mL)洗滌。合并有機相，干燥(MgS04)、過濾并真空濃縮，得到黃色油。用硅膠柱色譜純化(30-70%的EtOAc/CH2Cl2),得到呈白色固體的8B(108mg，O.lOmmol，60%):!H-NMR(400MHz,CDCI3)57.42-7.08(m,35H),7.05(d,=7.3Hz,2H)，6.96(brs,1H)，6.54(brs,1H)，5.46(dt，15.3,6,5Hz，2H),5.21(dd，■/=15.3，6.6Hz,1H),4.49(dd，J=13.5，4.3Hz,1H),4-32(dd，J-16.8,9.0Hz,1H),4.16-4.06(m，1H)，3.85(brq，</=6.0Hz，1H),3.02-2.82(m，4H),2,65-2,53(m，2H),2.40(dd,/=14.6，3.3Hz,1H)，2.23(dd，■/-14,6,11.3Hz，1H),2,10(t>J=7.0Hz，2H)，1.97-1.84(m，2H)，0.98(d，/=7.0Hz，3H),0,92(d,/=7.0Hz,3H);13C-NMR(100MHz,CDCb)S173.5(C)，170.8(C),170.7(C),169.9(2xC)，144.9(C)，144.2(C)，136.3(C),132.7(CH),129,6(CH)，129.5(CH)，129.3(CH)，128.9(CH),128.3(CH)，128.0(CH),127.9(CH),127.3(CH),127.1(CH),126.7(CH),72.2(CH),67,3(C),66.7(C)，58,3(CH)，55.8(2xCH)，42.0(CH2)，41.4(CH2),36,7(CH2)，32.3(CH2),31.3(CH2)，31.1(CH2)，28.7(CH)，19.8(CH3)，17.2(CH3);LRMS(ES"■1071(100%，[M+Na〗+)，畫(10%,+),1049(10%，[M+H〗"，fE>-(lS，7i,105;21i)-21-爺基-7-異丙基-2-氧雜-12,13-二硫雜國5，8，20，23-四氮雜-雙環(huán)[8.7.6二十三碳-16-烯-3,6,9,19，22-戊酮(9B)的制備用30分鐘向劇烈攪拌的12(254mg，1.0mmol)/(CH2Cl2/MeOH)(9:l，230mL)溶液中逐滴加入雙-三苯甲基化合物8B(105mg，O.lOmmol)的溶液。再攪拌30分鐘后，加入硫代硫酸鈉(0.05M,100mL)、然后加入鹽水(10mL)結(jié)束反應。分離有樹目，水相用CH2C12(3xl5mL)萃取。合并有機相，并千燥(MgS04)、過濾和真空濃縮，得到白色固體。用珪膠柱色譜純化(1-3.5%的MeOH/CH2Cl2)，得到呈白色固體的雙環(huán)酯肽9B(43mg,0.08mmo1,75%):[a產(chǎn)D—98(c0.05，1:1MeOH/CHCl3);IRvmax3280,1732,1627'1538，1445cm";!H-NMR(400顧z，19:1CD30D/CDC13)57.35-7.18(m，5H),5.86-5.76(m，1H),5.74-5.66(m，2H),4.62(dd，/=11.3，4.0Hz，1H)，4.45(dd,J=9.3，5.3Hz，1H),4.28(d,/=17.6Hz,1H)，3.77(d,J=17.6Hz,1H)，3,3910.5Hz,1H)，3.27-3.17(m,2H)，3,11-2.99(m,3H),2.97-2.83(ra，2H)'2.81(dd，13,6,2.0Hz,1H)，2.70-2.53(m,3H),0.96(d,/=6.5Hz,3H),0.926.5Hz，3H);13C-NMR(100匿z，19:1CD30D/CDC13)S173.8(C),173.2(C)，172.9(C),171.3(C),169,4(C),137.7(CH),131.3(CH)'13J,3(CH)，129.7(CH)，129.6(CH)'128.0(CH)，71.9(CH),65.9(CH)，58.3(CH)，58.1(CH),42.6(CH2),39.3(2xCH2),36.9(CH2)，36.8(CH2),31.8(CH2),28.1(CH)，20.6(CH3),20.5(CH3);LRMS(ES4)580(50%,[2M+Na]+)，563(100%,[M+NH4]+),563(10%[M+H]".((R)-2-{(S)-2-[(R)-2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-3-甲基-丁酰氨基]-3-三苯甲基硫烷基-丙酰氨基}-3-甲基-丁酰氨基)-乙酸甲酯(4C)的制備室溫下向攪拌的3A(836mg,l.llmmol)/(CH3CN/CH2Cl2)(l:l，^mL)溶液中加入Et2NH0mL)。室溫下攪拌3小時后用庚烷(60mL)稀釋反應混合物并濃縮得到無色油狀的粗胺。向攪拌的Fmoc-D-纈氨酸(577mg，1.7mmol)/CH2Cl2(40mL)溶液中加入EDAOHC1(326mg，1.7mmo1)、HOBt(230mg,1.7mmol)和DIEA(627^1,3.6mmo1)。室溫下攪拌10分鐘后加入粗胺/CH2Cl2(20mL)溶液，反應混合物攪拌12小時。隨之用水(15mL)、10%HCl(15mL)、5%NaHC03溶液(15mL)和飽和NaCl溶液(15mL)洗滌反應，經(jīng)干燥(&2804)、過濾和溶劑脫除，得到灰白色固體，用CH3CN重結(jié)晶，得到呈白色固體的4C(734mg,0.86mmo1,78%):!H-NMR(400MHz,CDC13)57.74(d,7.5Hz，2H)，7.53(t,/=7,5Hz,2H),7.42-7.32(m，9H)，7.30-7.19(tn,9H),7.16(t，/=7.0Hz，2H),6.80(d，=8,0Hz，1H)，6.57(d，/=7.0Hz，1H),5.52(d，/=8,0Hz，1H)，4.44(t，/=8,0Hz，1H)，4,38(dd,J=10.5，7.5Hz,1H)，4,25(dd，J=10.5,7.0Hz，1H)，4.17-3,95(m,3H)，3,87(ddj-18.1，5.5Hz,1H),3.78(dd，J=18.1，5.5Hz，1H),3,63(s，3H)，2.71(dd，《/=12.5,6.0Hz,1H)，2.53(dd,/-12.5，6.0Hz,1H),2.21(sept,</-6.4Hz,1H),2.07-1.93(m，1H)，0.93-0.83(m,12H);3CNMR100MHz171,5(C)，171.1(C)，170.2(2xC),156.6(C),144,4(C),144.0(C),143:8(C),141.4(C)，129.6(CH),128.3(CH),127.9(CH),127.2(CH)，127.1(CH),U5.2(CH),120.1(CH),67,3(CH2)，67.2(C),60.3(CH),58.5(CH),52.5(CH)，52.3(CH),47.3(CH)，41.0(CH2),33,S(CH2)，31.5(CH),30.5(CH)，19.2(2xCH3),18.0(CH3)，17,8(CH3);LRMS(ES,m/z1832(腦，[2M+Na]+),877,5(100%，[M+Na]+).((R)-2-KS)-2-[(R)-2-((E)-(S)-3-羥基-7-三苯甲基硫烷基-庚-4-烯酰氨基)-3-甲基-丁酰氨基卜3-三苯甲基硫烷基-丙酰氨基}-3-曱基-丁酰氨基)-乙酸甲酯(6C)的制備室溫下向攪拌的4C(235mg,O.28mmol)/(CHC13/CH3CN)(1:1,"mL)溶液中加入Et2NH(lmL)。室溫下攪拌5小時后用庚烷(10mL)稀釋反應混合物，除去溶劑，得到無色油狀的粗胺。室溫下向攪拌的粗胺/CH2Cl2(10mL)溶液中加入5(193mg,0.34mmol)/CH2Cl2(5mL)溶液和DMAP(4mg,0.034mmo1)。室溫下攪拌12小時后除去溶劑，殘留物用快速色谞(洗脫劑1-3%的MeOH/CH2Cl2)純化，得到呈白色固體的6C(230mg,81%):力NMR(400MHz,CDC13)S7.42-7.38(m，12H)，7.30-7.14(m,20H)，6.74(brs,1H),6.39(brs,1H),5.49(dtd'15.3，6.5,0.8Hz,1H)，5.36(dd，15,3,6.3Hz，1H)，4.39-4.26(m,3H),4.16-4.06(m，1H),3.83(d,/-5.5Hz,2H)，3.65(s，3H),3.33(brs,1H)，2.60(dd，/-12.8,7.3Hz，1H),2,54(dd,/=12.8，6,8Hz，1H)，2.37(dd,/-14.0，3.0Hz,1H)，2.30-2.02(ra,7H),0"0(d，/=7.0Hz,3H)，0.89(d，./=7.0Hz，3H),0.88(d，/=7.0Hz，3H)，0.85(d，7,0Hz,3H);13CNMR(100MHz,CDC13)3172,1(C),171.4(C),171.2(C),170.5(C),170.3(C)，145.0(C),144.3(C)，132.6(CH),130.2(CH),129.7(CH)，129.5(CH),128.3(CH)，128.0(CH),127.1(CH),126,8(CH),69.8(CH),67.1(C),66.8(C)，59.0(CH)，58.9(CH)，52.5(CH)，52.3(CH3),43.9(CH2)，41.0(CH2),33,7(CH2),31.5(2xCH2),30.4(CH)，30.2(CH2),19.5(CH3),19.3(CH3)，17.9(2xCH3);LRMS(ES"1056(100%,[M+Na]、1051(50%,[M+NKU],.(6T,9&12J,165)-6，12-二異丙基-16-((E)-4-三苯曱基疏烷基-丁-l國烯基)-9-三苯甲基硫烷基甲基-l-氧雜-4,7，10，13-四氮雜-環(huán)十六垸-2,5,8，11,14-戊酮(8C)的制備0。C下向曱酯6B(220mg，0.21mmol)/THF(12mL)溶液中加入LiOH(7.6mg,0.32)/H20(2mL)溶液。1小時后加入1MHCI(6mL)結(jié)束反應。加入CHCl3(50mL),分離有樹目，用CHC13(2xl5mL)萃取。有機相用鹽水(10mL)洗滌，然后干燥(MgS04)、過濾和真空濃縮，得到呈白色固體的粗酸7C(217mg,定量)，其立即用于下一步驟中(ES")w/z1017(100%,[M-町)。用3小時向(MNBA(卯mg,0.26mmol)+DMAP(62mg，0.51mmo1))/CH2Cl2(50mL)溶液中逐滴加入酸7C(217mg,O.21mmol)/(CH2C12/THF)(15:1，200mL)溶液(Nb.先將酸溶于THF中，然后加入CH2C12)。再過14小時后，加入1MHC1(40mL)結(jié)束反應。分離有樹目(用CH2C12萃取)并依次用NaHCO3(30mL)和鹽水(20mL)洗滌。合并i樹目，干燥(MgS04)、過濾并真空濃縮，得到黃色油。用硅膠柱色謙純化(30-70%的EtOAc/CH2Cl2),得到呈白色固體的8C(130mg,0.13mmo1，62%):!H-NMR(400MHz，CDC13)57.88(brs，2H)，7.42-7,34(m，12H),7,29-7.14(m，19H),6.20(brd，/=7.0Hz,1H)，5.62-5.50(m,2H),5,31(dd,/=15.3,6.4Hz，1H),4,36(dd,J=17,3，8.3Hz'1H),4.24(dd，/=8,5,4.5Hz,1H)，4.11(t,>/-7,3Hz，1H),3.65-3.56(m，1H),3.42(d>/-14.5Hz，1H),2.99(t,</=10.8Hz，lH)^^"^,/-12,0，6.3Hz，lEOJ.SCKdd,/-15.1，2.5Hz,1H)，2.35(dd，《/=14,8，9.8Hz，1H)，2.17(t，7.5Hz'2H)，2.06-1,86(叫3H)，1.84-1.72(m，1H),0.91(d，/=6.8Hz，3H),0.88(d，/=6.3Hz，6H),0.83(d，J-6.8Hz，3H);13C-NMR(100MHz,CDC13)S173.8(C)，172.2(Q,171.0(C)，169.5(C),168.9(C)，145.0(C),144.4(C),132.7(CH),129.7(CH),128.2(CH),128.1(CH),128.0(CH),127.0(CH),126.8(CH),72.2(CH)，67.3(C)，66.8(C),58.8(CH)，58-7(CH),58.4(CH),42.1(CH2)，41.9(CH2)，32.0(CH2),31.5(CH2),31.3(CH)，31.2(CH2),29.4(CH)，19.6(CH3),19.4(CH3)18.5(CH3)，17.0(CH3);LRMS(ES"w/z1023(100%,[M+Na]+),1018(60%,[M+NTHU]".(^-(1&7^,10乂217)誦7,21-二異丙基-2-氧雜-12,13-二硫雜-5，8，20，23-四氮雜-雙環(huán)[8.7.61二十三碳-16-烯-3，6，9，19,22-戊酮(9C)的制備用30分鐘向劇烈攪拌的I2(305mg，1.2mmol)/(CH2Cl2/MeOH)(9:l,280mL)溶液中逐滴加入雙-三苯甲基化合物8C(120mg,0.12mmol)的溶液。再攪拌30分鐘后，加入硫代硫酸鈉(0.05M，100mL)、然后加入鹽7JC(lOmL)結(jié)束反應。分離有樹目，？K相用CH2C12(3xl5mL)萃取。合并有機相，并干燥(MgS04)、過濾和真空濃縮，得到白色固體。用硅膠柱色鐠純化(1-4%的MeOH/CH2Cl2)，得到呈白色固體的雙環(huán)酯肽9C(60mg，0.12mmo1，97%):[a]25D-105.7(1:1MeOH/CHCl3，c0.15);!H-NMR(柳MHz,CD3OD)55.76-5,63(m，3H),4.52((W，/=11,3，4,7Hz,1H),3.96(d,5.1Hz,1H),3.74(d,/=17.5Hz，1H),3.38(d,J=10.9Hz,1H),3.19-3.11(m,2H),3.09-2.96(m，3H),2,90(dd,J=13.6，2.5Hz,1H),2.71-2.62(m32H),2.58-2.44(m,1H),2.31-2,18(m,1H),Ul(d,7.0Hz,3H)，1.09(d'■/-7.0Hz，3H)，1.01(d,J=6.6Hz，3H),0.91(d'/=6,6Hz,3H);13C-NMR(100MHz,CD3OD)5171.8(C)，171.7(C),170.7(C),170.4(C),168.3(C)，130.0(CH)，129.6(CH)，69.8(CH),64.6(CH),61.9(CH)，54,8(CH),42,2(CH2),39,3(CH2),37.5(CH2)，37.1(CH2),32.1(CH2)，29.2(CH),27.3(CH)，20.6(CH3)，20.0(CH3)，19.4(CH3)，19,0(CH3);LRMS(ES,m/z537(100%，[M+Naf),515(90%，[M+H],.((R)-2-"S)-2-[(R)-6-叔丁氧羰基氨基-2-(9H-芴-9-基曱氧基羰基氨基)-己酰絲]冬三苯甲1^危烷基-丙酰絲}-3-甲基-丁酰絲)誦乙酸甲酯(4D)的制備在氬氣下將三肽3A(548mg，0.7mmol)溶解在CH2C12/CH3CN(44mL,1:1)中，然后在攪拌下加入二乙胺(1.65mL，16mmo1),反應混合物在室溫下攪拌4.5小時。然后向反應混合物中加入己烷(100mL),真空除去溶劑，再用己烷(3x25mL)重復此過程。粗胺然后在高真空下干燥40分鐘。然后在氬氣中伴隨攪拌向(PyB叩(558mg,l.lmmol)+Fmoc-D-賴氨酸(Boc)-OH(477mg，lmmol))/CH3CN(16.5mL)溶液中加入二異丙基乙胺(0.45mL,2.6mmo1)。將所得去保護的胺3加入CH2C12(19mL)中，反應混合物在室溫下攪拌16小時。然后真空除去溶劑，所形成的固體用硅膠柱色鐠純化(洗脫劑6:4的EtOAc/己烷)，得到呈白色固體的4D(571mg，0.57mmo1，81%):Rf0.17EtOAc/己烷(6:4):[a]D26=+47(c0.3，MeOH);IR3294，1744，1646,1515,1445(m);)HNMR(鄰0MHz，CDC13)57.74(d,8.0,2H),7.56-7.51(m,2H)，7.42-7,34(m，8H)'7,30-7.17(m，IIH)，7.02(brs，1H),6.94(brs,1H),6.59(d,8.03Hz,1H)，5.75(s，1H)，4,38-4,21(m,2H)，4.18(dd,/=8.5'6.0Hz，1H),4.15-4.05(m,2H)，3.87(d,/=5.5Hz,3H),3.55(s，3H),3.03(brd，J=8.0Hz,2H),2.76-2.67(m，1H)，2.66-2,58(m,1H),2.20-2,10(m,1H)，1.93-LS4(m，2H),1.82-1.72(in，1.704,59(m，1H),1.43(s，9H),1.50-1,30(m,3H),0.89(d,7.02Hz,3H)，0,84(d,J=7.03Hz，3H),13CNMR(100MHz,CDC13)S172.6(C),171.4(C)'170.6(C)'170,6(C),(C),156.3(CO)，144.4(C》144.3(C),143,9(C),W3'S(C),141.4(C),i29.7(CH)，129.5(CH)，i2S,3(CH),128.2(CH),127,2(CH),127.1(CH)，125,2(CH)，120.0(CH),67.4(CH2)，47,2(CH3),4U(CH2)，40.0(CH2)，33,5(CH2)，31.9(CH2),30.3(CH2),29.S(CH),28.6(CH3),22,5(CH2),19.4(CH3),17,9(CH3)，52,3(CH)，52,8(CH)，S5.1(CH),59,0(C取LRMS(ES+)麗,O(100%,[M+闊4).((R)J-KS)-2-[(R)-6-叔丁氧羰基氨基-2-((S)-3-羥基-7-三苯甲基硫烷基-庚-4-烯酰餘)-己酰絲]-3-三苯甲1^克烷基-丙酰絲}-3-甲基-丁酰M)-乙酸甲酯(6D)的制備在氬氣下向四肽4D(201mg，0.2mmol)/(CH2Cl2(13.5mL)+CH3CN(16.5mL))溶液中加入三乙胺(lmL，9.6mmol)并將^^應混合物攪拌5小時。真空除去溶劑，并用己烷(2xl0mL)重復此過程。然后向粗胺/CH2Cl2(7mL)溶液中加入DMAP(4mg，0.03mmo1)，隨后加入5(158mg,0.28mmol)/CH2Cl2(7mL)溶液。然后攪拌反應18小時。然后真空除去溶劑，所形成的固體用珪膠柱色i普純化(洗脫劑6:4-7:3的EtOAc/己烷)，得到呈白色固體的6D(136mg，0.12mmo1，60%):mp85-87。C;i,0.29EtOAc/己烷(8:2);[a〗29。=+19(c0.49，CH2C12);IR(薄膜)3289，1751,1687，1634,1521，1490，1443;NMR(400MHz,CDC13)57.42-7.35(m,15H)，7.29-7.16(m，17H),6.95(d，J-7.5Hz，1H)，6.80(d,/=8.0Hz，1H)'5.48(dt,15.1，6-5Hz,1H,)，5.35(dd，15.1，6.0Hz，1H,),4.65(s,1H)，4,46-4.35(m，2H)，4,21(dd，8.5，6.52Hz,1H)，4.04-3,96(m,1H)，3.93(d，/=5.5Hz,1H)，3.89-3.81(m，2H),3.62(s,3H)，3.02(d,J=5.5Hz，2H),2,60-2.45(m，2H),235-2,00(m，卿,1.85-1.74(m,叫1.66-1,54(m，1H),1,40(s，9H)，1.47-1.25(m,2H)，0.88(d,J=7.0Hz,3H,),0.84(d，/=7.0Hz，3H),13CNMR(100麗z，CDC13)5172,3(C)，172.2(C),171.5(C)，170.7(C)，170.5(C),156.2(C)>145.0(C),145.0(C),144.3(C)，132.9(CH),129.7(CH),129.6(CH)，129.5(CH),129.5(CH),128,2(CH)，128.2(CH)，128,0(CH)，127.0(CH),126.7(CH)，69.5(CH),67.1(CH2),66.7(CH2),58.6(CH),52.9(CH)，52.6(CH)，52.3(CH)'52.2(CH3)，44.2(CH2),41.1(CH2),40.1(CH2)，33.9(CH2)，31.4(CH2),31.0(CH2),31.0(CH2),30.6(CH)，29,8(CH2),28.6(CH3)，22.6(CH2),19.3(CH3)，18.0(CH3)，MS(ES"1185(100%,[M+Naf)，1163(概，[M+H").(4畫[(6W，95;i2i)-6-異丙基-2，5,8，ll，14-五氧-16-((S)-4-三苯甲基硫烷基-丁-l-烯基)-9-三苯曱l^克烷基曱基-l-氧雜-4,7,10，13-四氮雜-環(huán)十六烷-12-基卜丁基卜M甲酸叔丁酯(8D)的制備0。C下向6D(136mg，0.12mmol)/THF(1.9mL)溶液中加入LiOH(6.8mg,0.28mmol)/H2O(0.5mL)溶液并將反應混合物攪拌55分鐘。逐滴加入檸檬酸直至pH降至3~4，然后加入水(3.7mL)、隨后加入EtOAc(15mL)。分離各層，產(chǎn)物用EtOAc(2xl0mL)萃取。合并有機層，用飽和鹽水(10mL)洗滌，用MgS04干燥，并真空除去溶劑，得到呈白色固體的粗酸7D(132mg，定量)，其立即用于下一步驟中LRMS(ES，1147(100%,[M-HD用10小時然后向(MNBA(47mg,0.14mmol)+DMAP(33mg，0.27mmo1))/CH2Cl2(25mL)溶液中—逐滴加入酸7D(132mg,0.11mmol)/CH2Cl2(96mL)溶液，反應混合物在室溫下再攪拌9.5小時。然后加入0.2%的HC1(50mL)，分離所形成的層，有機層用石危酸氬鈉(30mL)和飽和鹽水(30mL)洗滌，用MgS04千燥并真空濃縮，得到棕色固體。然后用快速柱色鐠純化(洗脫劑為6:4-3:1的EtOAc/己烷)，得到呈白色固體的產(chǎn)物8D(52mg,0.05mmo1,42%):々0.07EtOAc/己烷(6:4);[a]25D=-76(c0.1，CH2C12);IR(薄膜)32711739(m)，1683，1641,1536，1490,1444，1391;&NMR(400MHz,CDC13)S7.54(s,1H),7,44-7.36(m，12H)，7.30-7.17(m,19H),6.80(d,8.5Hz,IH,),6.47(d，/=8.5Hz，IH)，5.58(dt,J=15.1，7.0Hz，IH,)，5.47(td,■/=6.5，2.5Hz，IH,),5,39(dd,15.1，6.5Hz,IH)，4.68(s,1H),4.29(q,/=7.0Hz,1H),4.20(dd,/-17,1'7,5Hz,1H),4.16(dd，/=9.0,6.0Hz,1H),3.53(dd，/=17.1，5.5Hz,1H),3.447.5Hz,1H),3.00-2.90(m，2H),2.66(d，J=7.5Hz,2H)，2.55-2.48(m,IH)，2,39(dd，15.1，8.0Hz,1H),2,30-2.15(m,3H),2.13-2,01(m，4H)，1.68-1.58(m,1H),1.51(dd，13.5，7.0Hz，IH，),1.40(s，9H)，1.45-1.34(m，2H),1.36-1,28(m,2H)，1.31-1.23(m,2H),0.89(d,6.5Hz，3H),0.84(d,J-6.5Hz，3H，)，13CNMR(100MHz，CDC13)5173.1(C)，171.3(C),171.3(C)，169.8(C)，168,9(C)，'156.2(C)，145.0(C),144.5(C)，132.6(CH),129.7(CH),128.2(CH)，128.0(CH),127.0(CH),126,8(CH)，79.1(CH),67.5(C),66.8(C)，58,7(CH)，53,1(CH),53.0(CH),42.0(CH2)，41.8(CH2)，40.2(CH2),32,2(CH2),31.5(CH2)，31,4(CH2),31.2(CH2),31.0(CH2)，29.7(CH)，28.6(CH3)，22,8(CH2),19.5(CH3)，17.6(CH3);LRMS(ES"l152(100%，[M+Na勺).[4畫((7i,10&14S;2IK)-7-異丙基-3，6，9，19，22-五氧-2-氧雜-12,13-二硫雜_5，8,20,23-四氮雜-雙環(huán)8.7.6]二十三碳-16-烯-21-基)-丁基]-氨基甲酸叔丁酯(9D)的制備用30分鐘向攪拌的碘(117mg,0.5mmol)/(CH2Cl2/MeOH)(9:l，148mL)溶液中逐滴加入8D(52mg，0.05mmol)/(CH2Cl2/MeOH)(9:l，77mL)溶液，將反應混合物再攪拌30分鐘，然后加入硫代硫酸鈉(128mL,0.02M)。分離各層，產(chǎn)物用CH2C12(3x25mL)萃取，用MgS04干燥，并真空除去溶劑。然后用硅膠柱色譜(洗脫劑為2:98-8:92的MeOH/CH2Cl2)進行純化，得到呈白色固體的9D(3mg,0.005mmo1,o/).及,0.05MeOH/CH2Cl2(5:95)，L腹S(ES勺666,8(100%,[M+Na〗"(R)-2-((R)-2-KR)-2-[(R)-2-((E)-(S)-3-羥基-9,9，9-三苯基-壬-4-烯酰氨基)-丙酰氨基]-5，5，5-三苯基-戊酰氨基}-3-甲基-丁酰氨基)-丙酸甲酯(6E)的制備向H2N-D-Ala-D-Cys(STrt)-D-Val-D-Ala-OMe(96mg，0.155mmo1,購自Bi叩epideCo"CA92121畫1510,USA，純度~60%)/(CH2Cl2/THF)(1:1，30mL)溶液中加入5(87mg,O.155mmol)/CH2C12(5mL)溶液，然后加入DMAP(2mg,0.02mmo1)。18小時后真空濃縮反應混合物。用硅膠柱色鐠(1-3.5%的MeOH/CH2Cl2)進行純化，得到呈白色固體、溶解度低的雙-三苯甲基化合物6E(55mg,0.054mmol,35%):LRMS(HPLCES+，用XTerraMSds柱，粒徑5nm，3.0x50mm，線性梯度，用5分鐘從5。/o曱醇(0.1。/。HCOOH)/H2O到100%，1.25mL/min。然后是100%甲醇(0.1%HCOOH)5分鐘，1.5mL/min)rt=7.93min,附々1041.7(100%，[M+Na+)，1019.7(30%,[M+H+)。(3及,6/,95,127，165>6-異丙基-3，12-二曱基-16-((^)-4-三苯曱基石危烷基-丁-1-烯基)-9-三苯甲^>5克烷基甲基-1-氧雜-4，7,10,13-四氮雜-環(huán)十六烷-2,5,8，ll,14-戊酮(8E)的制備0。C下向甲酯6E(81mg,0.080mmol)/THF(5mL)溶液中加入LiOH(3mg，0.12mmol)/H2O(0.8mL)溶液。1小時后加入1MHC1(10mL)結(jié)束反應。加入CHCl3(20mL),分離有樹目，用CHC13(2xl0mL)萃取。有樹目用鹽水(15mL)洗滌、干燥(MgS04)并真空濃縮，得到呈白色固體的粗酸7E(80mg，定量)，其直接用于下一步驟中LRMS(ES-)附々1003(100%,[M-H]—)。用3小時向(MNBA(35mg，0.10mmol)+DMAP(25mg，0.20mmo1))/CH2Cl2(20mL)溶液中逐滴加入酸7E(80mg,O.080mmol)/(CH2C12/THF)(75:5,80mL)溶液。再過14小時后，加入1MHC1(25mL)結(jié)束反應。分離有樹目(用CH2Cl2萃取)，并依次用NaHCO3(30mL)和鹽水(20mL)洗滌。合并有樹目，并干燥(MgS04)和真空濃縮，得到黃色油。用硅膠柱色i普(70-100。/o的EtOAc/CH2Cl2)進行純化，得到呈白色固體的8E(34mg，0.035mmol,43%):!H-NMR(400MHz,CDC13)57,49-7.08(ra,33H)，6.31(brs，1H)，5.57(dt,/=15.3,6.5Hz，1H),5.47(q，/=6.1Hz，1H)，5.36(dd，/=15.3，6.8Hz,1H)，4.45(quin,/=7.0Hz，1H)，4.21(quin,/=7,0Hz，1H)，3.87(t,■/=7.3Hz，1H),3.59(brs,1H),2.92(dd，/=12.5,8.5Hz,1H)，2.55(dd,/=12.5，5.4Hz,1H)，2.51-2.36(m,2H)，2,17(t,/=7.3Hz,2H),2.05-1.86(m，3H)，1.36(d,J=7.0Hz，3H),1,33(d,/-7.0Hz，3H),0.88(d，=6,8Hz,3H),0.83(d,/=7,0Hz3H);13C-NMR(100MHz,CDC13)5173.6(C)，170.8(C)，170.4(C)，170.2(C),169.7(C),144.9(C),144>4(C)，132.9(CH),129.7(CH)，129.6(CH),128.2(CH)，128,1(CH),128.0(CH),127.0(CH)'126,8(CH),72.0(CH)，67.2(C),66,8(C),61.4(CH),55.3(CH),49.9(CH),49.5(CH),41.3(CH2)，32.4(CH2),31.4(CH2),31.3(CH2),29.8(CH),19.8(CH3)，18.4(CH3)，17.9(CH3)，17.8(CH3);LRMS(ES、w々麵(100%,[M+Na]4),987(10%,[M+H〗+).(^KLS;4i,77,105;21i)-7-異丙基-4,21-二甲基-2-氧雜-12,13-二硫雜-5，8，20，23-四氮雜-雙環(huán)[8.7.6二十三碳-16-烯-3，6,9，19,22-戊酮(9E)的制備用30分鐘向I2(87mg,0.34mmol)/(CH2Cl2/MeOH)(9:l，lOOmL)溶液中逐滴加入雙-三苯甲基化合物8E(34mg,0.034mmol)的溶液。再過30分鐘后，加入硫代硫酸鈉(0.05M,25mL)、然后加入鹽水(10mL)結(jié)束反應。分離有樹目，7JC相用CH2C12(3xl5mL)萃取。合并有樹目，千燥(MgS04)并過濾，之后真空濃縮，得到白色固體。用硅膠柱色語(3-5%的MeOH/CH2Cl2)進行純化，得到環(huán)化的酯肽9E(10mg,0.02mmo1,60%):〖cx〗25D—51,8(c0.45,MeOH);lH-NMR(400MHz,CDC13)S7.52(d,/-6.5Hz,1H),7.40(d,/=6.3Hz，1H),6.94((!,/-9.5Hz，IH)，6.46(d,/=3.0Hz,IH)，6,23-6,10(m，1H),5.80-5.72(m，2H),5,06(ddd,/=10,0,6.8,3.7Hz,IH)，4.47(quin，/-7.0Hz，1H),4.20(qd，J=7,3，3.5Hz，IH)，3.81(dd，J-14.3,6.5Hz,IH)，2,96-2.77(m,3H),2.76-2.64(m，5H),2.61(dd,/=13.5，2.2Hz,IH)，1.49(d,/=7.0Hz，3H)，1.48(d,/=7.2Hz，3H),0.95(d，/-6.5Hz,3H),0,93(d,■/-6.5Hz,3H);13ONMR(100MHz,CD3OD)S174.9(C),173.9(C)，172.4(C),172,2(C)，172,0(C)，131.9(CH),13U(CH)，71,8(CH),67.2(CH),56.3(CH)，53.0(CH),50.7(CH)，40.4(CH2)，39,9(CH2),39.3(CH2),34.4(CH2)，28.7(CH)，20.7(CH3》20.3(CH3)，17.7(CH3)，16.4(CH3);LRMS(ES"m/z1024(200%,[2M+Na],，523(50%，[M+Na〗、501(100%,H]+),(R)-4_((E)-(S)-3-羥基-7-三苯甲基硫烷基-庚-4-酰氨基)-4-KS)-l-[(R)-l-(甲氧基羰基曱基-氨基曱酰基)-2-曱基-丙基氨基甲?；鵌-2-三苯甲基硫烷基-乙基氨基曱?；鶀-丁酸叔丁酯(6F)的制備向H2N-D-Glu((yBu)-D-Cys(STrt)-D-Val-Gly-OMe(145mg，0.2mmol,購自BiopepideCo.,CA92121-1510,USA,純度~60。/0)/CH2Cl2(40mL)溶液中加入5(113mg,O.2mmol)/CH2C12(lOmL)溶液，然后加入DMAP(2.5mg,0.02mmo1)。18小時后真空濃縮反應。用硅膠柱色譜(1-3%的MeOH/CH2CU)進行純化，得到呈白色固體的6F(97mg，0.087mmo1，44%):!H-NMR(400麗z,CDC13)57.46-7,33(m,12H),7.32-7.13(m,20H)，7.07(brs,1H),6.77(d,/-8.3Hz,1H)，5.46(dt，</=15，3,6.5Hz,1H)，5.34(dd,■/=15.3，6.3Hz,1H),4,40-4.23(m，3H),4.11-3.86(m,2H)，3.79(dd,/=17.8，5.5Hz，1H),3,70-3.58(m,1H)，3.64(s，3H)，3，06(brs,1H),2.63(dd,/=12,8，7,5Hz，1H)，2.53(dd，/=12.8,5.8Hz，1H),2.48-2,12(m,6H)，2.11-1,85(m,4H),1.41(s，9H),0.92(d,/-6.7Hz，3H),0.91(d，/=6,7Hz,3H);l3C-NMR(100應z,CDCb)S173.7(C),172,3(C),171,6(C)，171,3(C)，170.4(C),170.3(C)，145.0(C)，144.3(C)，133.6(CH),130.3(CH)，129.7(CH),129,5(CH),128.2(CH)，128,0(CH)，127.1(CH)，126.7(CH)，81.5(C),70,0(CH)，67,1(C),66.7(C)'59.3(CH),54.6(CH)，53.0(CH),52.2(CH3)，44.1(CH2),41.0(CH2)，33.3(CH2)，32.2(CH2)，31,4(CH2x.2),29.9(CH),28.1(CH3),26.1(CH2),19.3(CH3),17.7(CH3);LRMS(ES"w/z1142(1000/0，[M+Na]4).3-[(6及，9&12及，165>6-異丙基-2,5,8，11,14-五氧-16-((^)-4-三苯甲基硫烷基-丁-l-烯基)-9-三苯甲^S克烷基甲基-l-氧雜-4,7，10,13-四氮雜-環(huán)十六烷-12-基-丙酸叔丁酯(8F)的制備0。C下向甲酯6F(98mg，0.088mmol)/THF(5mL)溶液中加入LiOH(3mg,0.13)/H2O(0.8mL)溶液。1小時后加入1MHC1(15mL)結(jié)束反應。加入CHCl3(20mL)，分離有^W目，用CHC13(2xl0mL)萃取。有;W目用鹽水(15mL)洗滌、干燥(MgS04)并真空濃縮，得到呈白色固體的粗酸7F(96mg,定量)，其直接用于下一步驟中(ES，附々1103(100%,[M-H)。用3小時向(MNBA(36mg,0.10mmol)+DMAP(25mg,0.21mmo1))/CH2C12(20mL)溶液中逐滴加入酸7F(96mg,O.087mmol)/(CH2C12/THF)(75:2,77mL)溶液。再過14小時后，加入1MHC1(25mL)結(jié)束反應。分離有樹目(用CH2Cl2萃取)，并依次用NaHCO3(30mL)和鹽水(20mL)洗滌。合并有機相，并干燥(MgS04)和真空濃縮，得到黃色油。用硅膠柱色譜(50-70%的EtOAc/CH2Cl2，然后+0.1%的MeOH)進行純化，得到呈白色固體的8F(53mg，0.049mmo1,56%):lH-NMR(400MHz,CDC13)57.44-7.32(m,12H),7.31-7.15(m，19H)，7.11-7.03(m,2H)，6.68(brs,lH)，5.58(dt,J=15,6，6.5Hz，1H),5.439.5,7.0,3.0Hz,1H)，5.33(dd，/=15.6，7.0Hz,1H)，4.44(dd，/=17.0，9.6Hz,1H),4.30(dd，■/=9.0，4.5Hz,1H)，4.04(q,J=7.0Hz，1H)，3.59(m,1H)，3.50(dd，J=6.5，2.0Hz，1H)，3.07(t，/=11.0Hz,1H)，2.60-2.45(m'3H)'2.42-2,23(m,3H),2.22-2.12(m,2H)，2.08-1.89(邁，4H)，1.40(s,9H),0.S8(d,</=7.0Hz,3H)，0.83(d,■/=7.0Hz，3H);"C-NMR(100MHz,CDC13)S173.4(C)，172.6(C),171,1(C)，170.9(C)，170,0(C),169.0(C),145,0(C),144.3(C),133.2(CH),129.7(CH),129.6(CH)，128.3(CH)，128.0(CH)，127,1(CH),126.8(CH)，81.3(C),72.1(CH)，67.3(C)，66.8(C),58.7(CH),56.8(CH)，54.1(CH),41.9(CH2)，41.3(CH2)，32.4(CH2)，31.8(CH2)，31.4(CH2),31.2(CH2),29.0(CH),28,2(CH3)，25.9(CH2),19.7(CH3)，17,2(CH3);LRMS(ES+)m/z1109(100%，[M+Naf)，1087(50%,[M+H力.3-((^HlS，7i，10S,21i)-7-異丙基-3，6，9，19,22-五氧-2-氧雜-12，13-二硫雜_5,8,20，23-四氮雜-雙環(huán)[8.7.6二十三碳-16-烯-21-基)-丙酸叔丁酯(9F)的制備用30分鐘向12(117mg,0.46mmol)/(CH2Cl2/MeOH)(9:l,130mL)溶液中逐滴加入雙-三苯甲基化合物8F(50mg，0.046mmol)的溶液。再過30分鐘后，加入硫代硫酸鈉溶液(0.05M,50mL)、然后加入鹽水(20mL)結(jié)束反應。分離有樹目，水相用CH2C12(3x25mL)萃取。合并有W目，干燥(MgS04)，真空濃縮前得到白色固體。用珪膠柱色i普(l-3。/。的MeOH/CH2Cl2)進行純化，得到呈白色固體的雙環(huán)酯肽9F(19mg,0.032mmo1，69%):25D-76.7(c0.60,MeOH);^-NMR(400MHz,CDC13)S8.15(d,/=4,0Hz，1H)，7.35(d,=6.5Hz,1H),7.23(t，J-5.5Hz，1H)，7.11(d，/=9.0Hz，1H),6.05(ddt,J=15.5，7.0，2.0Hz,1H),5.84-5.73(m，2H)，4.97(td，/=8.0,4.5Hz，1H)，4.18-4.01(m,3H)，3.61(dd,/=15.1，8.0Hz,1H)，3,24(dd，/=10.5,6.5Hz,1H)，2.95-2.75(m,5H),2.73-2.62(m，3H),2.51(dd，/=13.6，2.0Hz，1H),2,42(ddd乂-18.0,9.0,3.5Hz，1H)，2.19-2.04(m,2H)，1.83(s，9H),0.98(d,>/=6.5Hz,3H),0.92(d，=6.5Hz,3H);13C-NMR(100MHz,CDC13)5175.7(C),171.8(C)，171.7(C)，170.9(C),169.9(C)，168.2(C)，130.2(CH)，129.6(CH),82.6(C)，69.4(CH)，65.4(CH),57,6(CH)，53.8(CH),42.4(CH2)，40,0(2xCH2)，38.6(CH2),34.1(CH2),33,1(CH2),28,2(CH3),27.4(CH)，24.9(CH2),20.6(CH3),20.2(CH3);LRMS(ES+)w/z623(90%，[M+Na〗+)，601(100%,[M+H]".、3-((^Ht9，7i,105;21i)-7-異丙基-3，6，9,19,22-五氧-2-氧雜-12，13-二硫雜-5，8,20，23-四氮雜-雙環(huán)[8.7.6]二十三碳-16-烯-21-基)-丙酸(10F)的制備向(9F(12mg,0.02mmol)+Et3SiH(10^iL，0.06mmol))/CH2Cl2(1.5mL)溶液中加入TFA(15(HiL,2.0mmo1)。6小時后除去溶劑，殘留物用珪膠柱色譜(10。/。的甲醇/CH2Cl2,然后+1%的AcOH)純化，得到呈白色固體的10F(5.6mg,O.Olmmol，55%):25D-63.4(c0.25,MeOH);iH-NMR(400MHz,CD3OD)57.5(1xNH觀察到的，d，/-7.5Hz，1H),5.81(dddd,/=16,8，6.8，4.8，2.5Hz，IH)，5.75-5.67(m>2H)，4.62(ddd，/=11,0,8.0，5.5Hzm)，4.28(<!，/=17.5Hz,1H),4.15(dd,/=9.0,6.0Hz，1H),3,78(d，/=17.5Hz,IH)，3.43(d，/=10.5Hz,IH)，3.20-3.10(m，2H)，3.07-3.00(m，2H)，2.94-2.81(m，1H),2.82(dd,/=13.2,2,2Hz,IH)，2.73-2.50(m，4H),2.3S(q，/-7.0Hz，IH)，2.23-1,99(m,2H)，0.98(d，J=6.5Hz,3H)，0.92(d，J=6.5Hz，3H);13C-NMR(100MHz,CD3OD)S176,5(C),174,0(C)，173,5(C),173,0(C)，171.6(C)，169.5(C),131.4(CH),131.3(CH),72.1(CH),66,0(CH),58,5(CH)，57.0(CH),42.7(CH2)，39.7(CH2),39.4(CH2)，36.S(CH2),31,8(CH2)，31.6(CH2)，28.2(CH3),26,6(CH2)，20.6(CH3),20,5(CH3);LRMS(ES')543(100%,[M-HD.結(jié)果活性檢測1我們比較了辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)(—種已知的HDAC抑制劑)與化合物001(第7頁上的式(2)化合物)抑制MCF7人乳腺癌細胞和正常人皮膚成纖維細胞(NHDF)的生長的能力。方法細胞增殖檢測用CyQuantTM檢測系統(tǒng)(MolecularProbes,Inc.USA)按生產(chǎn)商的說明進行。該系統(tǒng)使用有專利權(quán)的綠色熒光染料，其在與細胞的核酸結(jié)合時發(fā)生強烈的焚光增強，以便可確定細胞數(shù)，其線性檢測范圍為50-250,000個細胞。將雌激素受體陽性的MCF7乳腺癌細胞(ECAAC)和NHDF細胞(Cambrex，UK)置于96孑L板中，密度為每孔中1000個細胞/100nl細胞培養(yǎng)基。最少5小時后加入在細胞培養(yǎng)基中的一系列稀釋度的化合物，加入量為lOOnl，濃度為2倍最終濃度。六天后將板翻轉(zhuǎn)于印跡紙上以除去細胞培養(yǎng)基，并用200^1PBS輕柔洗滌細胞一次。立即將板冷凍于-80。C下最少一小時，然后解凍。立即向每孔中加入200fd按生產(chǎn)商的說明制備的加染料的1xCyQuant細胞溶解緩沖液并在室溫下孵育3-5分鐘。然后用CytofluorII熒光多孔板讀數(shù)器和CytoFhiorII軟件測定各孔的熒光，濾光器設置為使激發(fā)波長為480nm、最;UL射波長為520nm。測定細胞增殖，得到作為相對于未處理細胞樣品(=100%)的百分數(shù)的雙份樣品的平均值。用生長抑制曲線推導ICs。值。圖1示出了化合物001和SAHA對MCF7和正常人皮膚成纖維細胞(NHDF)生長的影響。MCF7和NHDF用指定濃度的化合物粹育。6天后用CyQuantTM檢測法測定相對于未處理細胞(-100。/。)的細胞生長。等量的DMSO(作為溶劑對照)對細胞生長無影響(未示出)。所示數(shù)據(jù)為雙份樣品測定值的平均值士標準偏差，代表多個實驗。結(jié)果化合物抑制了細胞生長。重要的是，抑制劑之間以及細胞類型之間存在差異。自多個實驗計算出生長抑制的平均IC5。(士SD)并在下表l中給出。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage68</column></row><table>a由一式兩份進行的單個實驗計算得到的IC5?；衔?01是有效的癌細胞生長抑制劑。重要的是，在目前的II期試驗中，化合物001顯著比SAHA有效(p一.003，Student'st檢驗)。與NHDF相比，兩種化合物均對MCF7細胞更有效，表明其對惡性細胞有選擇性。用HUT78T-細胞白血病細胞進行的類似實驗(按上述進行)表明化合物001也抑制這些細胞的生長(數(shù)據(jù)未示出)?；钚詸z測2我們研究了化合物001(第7頁上的式(2)化合物)是否激活以前已證明響應HDAC-介導抑制的SV40啟動子。方法我們構(gòu)建了源自含有整合報告分子構(gòu)建體的MCF7細胞的穩(wěn)定克隆，其中SV40立即早期啟動子克隆到螢光素酶基因上游。MCF7細胞使用Transfast轉(zhuǎn)染劑轉(zhuǎn)染pGL2-Basic(SV40/螢光素酶報告分子)(Promega,UK)和pcDNA3(表達新霉素抗性基因)。24小時后用胰蛋白酶消化收集細胞并以低密度置于板上。接下來的一天向生長培養(yǎng)基中加入G418。約21天后分離各耐藥集落并培養(yǎng)。我們選擇加入HDAC抑制劑后表現(xiàn)為高度誘導螢光素酶活性的克隆(2.1.1細胞)進行進一步的研究。為測試化合物001的效果，用各種濃度的化合物001或等量的DMSO(作為對照)孵育2.1.1細胞。接下來的一天收集細胞并用Promega螢光素酶檢測系統(tǒng)和TopCount(Perkin-Elmer)檢測螢光素酶活性。圖2示出了化合物001對響應HDAC的SV40啟動子的活性的影響。用指定濃度的化合物001或DMSO(作為溶劑對照)處理含穩(wěn)定整合的SV40啟動子-螢光素酶報告質(zhì)粒的MCF7來源細胞。約16小時后測定螢光素酶活性。所示數(shù)據(jù)是一個實驗進行兩次而得到的，并代表多個實驗。結(jié)果實驗表明化合物001有效地逆轉(zhuǎn)HDAC介導的SV40立即早期啟動子阻遏?；钚詸z測3我們研究了化合物001(第7頁上的式(2)化合物)和SAHA對MCF7細胞中細胞周期分布和存活的影響方法用指定濃度的化合物或不經(jīng)處理(作為對照)孵育MCF7細胞，持續(xù)各種時間，如圖例中詳細給出的。收集細胞并按先前所述(Purohitetal.,IntJCa85,584-92000)的缺化丙錠染色和流式細胞術測定處于細胞周期不同階段的細胞的比例。首先計算〈G0/G1含量(preGO)的細胞占全部細胞的比例。然后計算處于不同細胞周期階段(G0/G1，S，G2/M)中的細胞占細胞周期中全部細胞(即全部細胞減去〈G0/G1含量的細胞)的比例。圖3示出了化合物001和SAHA對MCF7細胞中細胞周期分布和存活的影響。用指定濃度的化合物(各相當于約IO倍生長抑制ICso值)或DMSO(作為溶劑對照)賻育MCF7細胞24、48或72小時。用流式細胞術測定細胞周期不同階段中細胞的比例。所示數(shù)據(jù)為得自兩個單獨的實驗的平均值士SD,相對于未處理的細胞(歸一化為1)。結(jié)果圖中表明在相當?shù)挠行舛认?，化合?01和SAHA誘發(fā)MCF7細胞中占優(yōu)勢的G2/M期滯留和細胞死亡?；钚詸z測4我們研究了化合物001(第7頁上的式(2)化合物)對MCF7乳腺癌細胞和心肌細胞中組蛋白乙?；挠绊?。方法心肌細胞按Chembiochem.2005Jan;6(1):162-70中所述制備并用指定濃度的化合物001孵育24小時。MCF7細胞用指定濃度的化合物001醉育24小時。用來自UpstateBiotech的抗體通過先前所述(Brimmelletal.BrJCancer.1999Nov;81(6):1042國51)的蛋白質(zhì)印跡法(Westernblotting)分析總組蛋白H4乙酰化或組蛋白H4-K8或組蛋白H3-K9的特異性乙?；谋磉_。圖4示出了化合物001對組蛋白乙酰化的影響。(A)MCF7細胞用化合物001孵育24小時。用免疫印跡法測定組蛋白H4的乙酰化。(B)心肌細胞用指定的化合物001孵育24小時。用免疫印跡法測定組蛋白H4乙?；?C)MCF7細胞用化合物001孵育24小時。用免疫印跡法測定組蛋白H3-K9和組蛋白H4-K8的乙?；＝Y(jié)果實驗表明化合物001誘導乙?；M蛋白H4的積聚以及特異性組蛋白H3-K9和組蛋白H4-K8的乙?；Ｎ覀円沧C明化合物001增加了原發(fā)性慢性淋巴細胞性白血病細胞中乙?；M蛋白H4的水平(數(shù)據(jù)未示出)。活性檢測5我們分析了化合物抑制體外HDAC活性的能力。體外HDAC檢測用HDAC焚光活性檢測試劑盒(Biomol,UK)按生產(chǎn)商的說明進行。分析前將化合物還原；ImM的化合物用30mM的DTT在DMSO中于室溫下避光過夜還原。然后在96孔板中建立反應。對于各反應，將l(Hil的化合物(在檢測緩沖液中，5倍于所需濃度)與15pl經(jīng)稀釋的海拉細胞核提取物(在檢測緩沖液中稀釋30倍)混合。為各化合物建立一系列稀釋度。也建立僅含海拉提取物及僅含檢測緩沖液的反應。向各反應中加入25fil經(jīng)稀釋的FluordeLysTM底物(在檢測緩沖液中稀釋100倍)，然后將其在37。C下孵育1小時。加入50nl的FluordeLysTM顯色劑(在檢測緩沖液中稀釋20倍，另含稀釋100倍的TSAyft^應停止。在室溫下孵育反應10分鐘，然后用CytoFluorII熒光多孔板讀數(shù)器和CytoFluorII軟件測定熒光，濾光器設置為使'H波長為360nm、發(fā)射波長為460nm。測定體外HDAC活性的抑制，得到一式兩份樣品的平均值，為相對于僅含HeLa提取物的反應而言的百分數(shù)。用GraphPadPrism軟件計算ICs。值。表2HDAC活性的抑制化合物第7、8或9頁上的相應化學式IC鄰(nM)SAHAN/A3309A(2)9.9犯(3)879F(4)8.010F(5)1.79B(6)259CCO9.9活性檢測6我們分析了化合物抑制人癌細胞體外生長的能力。細胞增殖檢測用CyQuantTM檢測系統(tǒng)(MolecularProbes，Inc.USA)按生產(chǎn)商的^兌明進行。將MCF7乳腺癌、A2780卵巢癌和PC3及LNCAP前列腺癌細胞置于％孔板中，密度為每孔1000個細胞(對于MCF7細胞)或5000個細胞(對于A2780/PC3/LNCAP細胞)/100^1細胞培養(yǎng)基。最少5小時后加入在細胞培養(yǎng)基中的一系列稀釋度的化合物，加入量為100^1,濃度為2倍最終濃度。4(A2780,PC3或LNCAP細胞)或6(MCF7細胞)天后通過將板翻轉(zhuǎn)于印跡紙上以除去細胞培養(yǎng)基，并用200^11PBS輕柔洗滌細胞一次。立即將板冷凍于-80。C下最少一小時，然后解凍。立即向每孔中加入200fil按生產(chǎn)商的說明制備的加染料的1xCyQimnt細胞溶解緩沖液并在室溫下孵育3-5分鐘。然后用CytofluorII熒光多孔板讀數(shù)器和CytoFluorII軟件測定各孔的熒光，濾光器設置為使激發(fā)波長為480nm、最大發(fā)射波長為520nm。測定細胞增殖，得到一式兩份樣品的平均值，為相對于未處理細胞樣品(-100%)而言的百分數(shù)。用生長抑制曲線推導ICso值。表3細胞生長抑制(ICso值(nM))<table>tableseeoriginaldocumentpage72</column></row><table>活性檢測7我們分析了化合物抑制由外周血單核細胞(PBMC)產(chǎn)生TNFa的能力。TNF-a免疫測定用Quantikine⑧人TNF-a檢測試劑盒(R&Dsystems,AbingdonUK)按生產(chǎn)商的i兌明進行。人全血用FicolpaqueTMPlus(GEHealthcare,Amersham,UK)分離，并將PBMC置于24孔板中，密度為每孔2.5xl06/500nl細胞培養(yǎng)基。1小時后加入量為100jil、濃度6倍于最終濃度的化合物。五小時后加入量為lOjil、濃度為60倍于最終濃度的脂多糖(LSP，Sigma,Poole,UK)?；旌习宀⒂?7。C、5%C02下過夜。將板離心并將細胞上清液轉(zhuǎn)移到新的板中。按生產(chǎn)商的說明制備Quantikine⑧檢測試劑和標準品。Quantikine⑧檢測板通過向各孑L中加入50^1的檢測稀釋劑RD1F制備。隨后加入200fil的標準品或100nl的校正稀釋劑加100nl的細胞上清液；在室溫(RT)下孵育2小時。用洗滌緩沖液洗滌所n4次。最后一次洗滌后，在干凈的紙巾上輕拍所a以除去所有殘留的緩沖液。向各孔中加入200^1TNF-a偶聯(lián)物并在室溫下孵育1小時。再像先前那樣洗滌所述板。所需量的底物溶液通過避光加入等體積的顯色試劑A和B制備，向各孔中加入200^1該混合物并在室溫下避光孵育20分鐘。按與底物溶液相同的順序向各孔中加入50nl終止溶液，并在Biorad68096孔板讀數(shù)器(Bio-Rad,HemelHempstead，UK)上于"0nm下讀板，在570nm下進行人校正。測定TNF-a7JC平，得到一式兩份樣品的吸光度(以nm計)平均值，從所有結(jié)果中減去校準零值以校正檢測中校準稀釋劑的添加。<table>tableseeoriginaldocumentpage73</column></row><table>活性檢測8我們分析了化合物9A(第7頁上的式(2)化合物)抑制小鼠炎癥的能力。通過將5%(w/v)的魄唑酮涂布到腹部去毛皮膚上來敏化Balb/c小鼠。7天后通過將3%(w/v)的oxalazone局部涂布于左耳上、丙酮于右耳上來激發(fā)小鼠。30分鐘后，將溶解在丙酮中的試驗化合物施用于雙耳上(背面和腹面)。24小時后無痛處死小鼠并測定雙耳的重量。抑制%用下式確定，其中W等于平均重量抑制％=l-((W驗物+試驗物氣w栽體xi00)/(只有刺激物曙W栽體))表5體內(nèi)炎癥<table>tableseeoriginaldocumentpage73</column></row><table>權(quán)利要求1.作為具有式(I)或(I′)的FK228類似物的化合物、其等排物或其藥學可接受的鹽在用于治療或預防HDAC介導病癥的藥物的生產(chǎn)中的用途，其中，R1、R2、R3和R4相同或不同，代表氨基酸側(cè)鏈部分，各R6相同或不同，代表氫或C1-C4烷基，Pr1和Pr2相同或不同，代表氫或硫羥保護基。2.為如權(quán)利要求1中所定義的式(I)或(I')化合物的FK228類似物或其藥學可接受的鹽在用于治療或預防HDAC介導病癥的藥物的生產(chǎn)中的用途。3.前述權(quán)利要求中任一項的用途，其中各氨基酸側(cè)鏈為選自-H、d-C6烷基、《2-<:6烯基、陽L-O畫C(O)-R'、-L-C(O)-O隱R"、-L-A、-L誦NR"R"、-L-Het-C(O)-Het-R"和-L-Het-R"的部分，其中L為d-C6亞烷基，A為苯基或5-到6-元雜芳基，各R'相同或不同，代表d-C4烷基，各R〃相同或不同，代表H或d-C6烷基，各-Het-相同或不同，為選自-O-、-N(R"')-和-S-的雜原子間隔基，各R'〃相同或不同，代表H或d-Cj烷基。4.權(quán)利要求3的用途，其中A為苯基。5.權(quán)利要求3或4的用途，其中-Het-為-O-或-NR'"。6.權(quán)利要求3、4或5中任一項的用途，其中Ri為選自-H和-CrC6烷基的部分。7.權(quán)利要求3-6中任一項的用途，其中R2為選自-H和-d-C4烷基的部分。8.權(quán)利要求3-7中任一項的用途，其中R3為選自-H、-d-C6烷基、畫L-C(0)隱0國R〃、-L國A、-1^^11〃11〃和丄-1^(11')曙<:(0)-0國11〃的部分。9.權(quán)利要求3-8中^f壬一項的用途，其中R4為選自-H和-d-C4烷基的部分。10.權(quán)利要求3-9中任一項的用途，其中R6為國H。11.權(quán)利要求3-10中任一項的用途，其中P一和P一相同或不同，選自氫和保護基，所述保護M自任選地凈皮d-C6烷lL^、d-C6酰氧基、羥基和硝基取代的芐基、吡啶甲基、吡啶甲基-N-氧化物、蒽基甲基、二苯曱基、苯基、叔丁基、金剛烷基、d-Q酰氧甲基、d-C6烷氧甲基、四氫吡喃基、芐基硫曱基、苯基硫曱基、噻唑烷、乙酰胺甲基、苯曱酰氨基甲基、叔丁氧羰基(BOC)、乙酰基和其衍生物、苯甲酰基和其衍生物、M曱?；?、苯基Jl^甲酰基和CVC6烷基J^甲?；?2.權(quán)利要求3-11中任一項的用途，其中P—和P一為氫。13.權(quán)利要求1或2的用途，其中各氨基酸側(cè)鏈為存在于天然氨基酸中的氨基酸側(cè)鏈部分，或為-(CH2)2-C(0)-0-C(CH3)3、-(CH2)4-NH-C(0)0-C(CH3)3、(CH2)3NH-C(0)NH2、-CH2-CH2OH或-(CH2)2-CH2冊2。14.權(quán)利要求l的用途，其中所述化合物為式(2)、(2')、(3)、(3')、(4)、(4')、(5)、(5')、(6)、(6')、(7)、(7')、(8)、(8')、(9)或(9')化合物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>15.前述權(quán)利要求中任一項的用途，其中所述FK228類似物為式(I)化合物、其等排物或其藥學可接受的鹽。16.前述權(quán)利要求中任一項的用途，其中所述藥物用于緩解癌癥、心臟肥大、'隄性心力衰竭、炎癥、心血管疾病、血紅蛋白病、地中海貧血癥、鐮狀細胞病、CNS病、自身免疫性疾病、糖尿病、骨質(zhì)疏松癥、MDS、良性前列腺肥大、口腔粘膜白斑、遺傳相關的代謝失調(diào)、感染、Rubens-Taybi、脆性X綜合征或a-l抗胰蛋白酶缺乏，或用于加速傷口愈合、或用于保護毛嚢或用作免疫抑制劑。17.權(quán)利要求16的用途，其中所述藥物用于緩解慢性淋巴細胞性白血病、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、間皮瘤、T-細胞淋巴瘤、心臟肥大、慢性心力衰竭或皮膚炎癥，特別是牛皮癬、痤瘙或濕療。18.如權(quán)利要求1-15的任一項中所定義的FK228類似物、其等排物或其藥學可接受的鹽，用在治療人體或動物體的方法中。19.如權(quán)利要求1-15的任一項中所定義的FK228類似物、其等排物或其藥學可接受的鹽。20.—種藥物組合物，所述組合物包含如權(quán)利要求1-15的任一項中所定義的FK228類似物、其等排物或其藥學可接受的鹽及藥學可接受的載體或稀釋劑。21.權(quán)利要求20的藥物組合物，其為適于經(jīng)口、直腸、腸胃外、鼻內(nèi)或經(jīng)皮給藥或通過吸入或通過栓劑給藥的形式。22.權(quán)利要求21的藥物組合物，其為片劑、膠嚢、錠劑、糖錠、水或油懸劑、可*性粉劑或顆粒劑或舌下片劑的形式。23.治療患有或易患如權(quán)利要求1、16或17中所定義的HDAC介導病癥的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的如權(quán)利要求1-15的任一項中所定義的化合物、其等排物或其藥學可接受的鹽。24.—種選擇具有至少與辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)所表現(xiàn)出的相當?shù)腍DAC抑制活性的化合物的方法，所述方法包括通過如下步驟制備如權(quán)利要求1-15的任一項中所定義的式(I)或(I')化合物(i)使式(VI)化合物與式(VII)化合物反應，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>其中R和R2如前述權(quán)利要求的任一項中所定義，117為d-C4烷基或C2-C4烯基，Y為JL&保護基；(ii)對所得中間體去保護并使之與式(vin)化合物反應，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>其中Y'為M保護基，Y"為氫或保護基；(iii)對所得中間體去保護并使之與式(IX)化合物反應，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>其中R3如前述權(quán)利要求的任一項中所定義，Y〃'為Jl^保護基;(iv)對所得中間體去保護并使之與式(X)化合物反應，其中R4如前述權(quán)利要求的任一項中所定義，Rs為氫或羥基保護基，LG為離去基團，Y〃〃為氫或保護基；(v)任選地，對所得中間體上的p-羥基去保護以除去R5保護基并以H取代之；(vi)水解和環(huán)化所得中間體；(vii)任選地，使所得中間體反應形成二石克鍵，并且，如果形成了二硫鍵，則任選地斷開所得化合物中的所述二硫鍵，以及如果所得化合物含石克羥基，則任選地引入硫羥保護基；和(viii)篩選所得化合物以測定其作為HDAC抑制劑的活性。25.權(quán)利要求24的方法，其中步驟(viii)中所述篩選步驟為體外HDAC檢測，所述檢測包括使各種濃度的試驗化合物和SAHA與經(jīng)稀釋的海拉細胞核提取物接觸，以測定試驗化合物和SAHA對海拉細胞核提取物的IC5。。26.—種選擇具有至少與SAHA所表現(xiàn)出的相當?shù)娜税┘毎L抑制活性的化合物的方法，所述方法包括通過如下步驟制備如權(quán)利要求1-15的任一項中所定義的式(I)或(I')化合物(i)使式(VI)化合物與式(VII)化合物反應，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>其中A和R2如前述權(quán)利要求的任一項中所定義，R7為d-C4烷基或CrC4烯基，Y為M保護基；(ii)對所得中間體去保護并使之與式(VIII)化合物反應，其中R3如前述權(quán)利要求的任一項中所定義，Y〃'為M保護基;(iv)對所得中間體去保護并使之與式(X)化合物反應，其中R4如前述權(quán)利要求的任一項中所定義，Rs為氫或羥基保護基，LG為離去基團，Y"〃為氫或保護基；(v)任選地，對所得中間體上的p-羥基去保護以除去Rs保護基并以H取代之；(vi)水解和環(huán)化所得中間體；(vii)任選地，使所得中間體反應形成二硫鍵，并且，如果形成了二硫鍵，則任選地斷開所得化合物中的所述二石危鍵，以及如果所得化合物含硫羥基，則任選地引入硫羥保護基；和(viii)篩選所得化合物以測定其作為人癌細胞生長抑制劑的活性。27.權(quán)利要求26的方法，其中步驟(viii)中所述篩選步驟為體外檢測，所述檢測包括使各種濃度的試驗化合物和SAHA與MCF7乳腺癌細胞系、HUT78T-細胞白血病細胞系、A2780卵巢癌細胞系、PC3或其中Y'為Jl^保護基，Y〃為氫或保護基；(iii)對所得中間體去保護并使之與式(IX)化合物反應，LNCAP前列腺癌細胞系接觸，以確定試驗化合物和SAHA對所述細胞系的ICs。。28.—種選擇具有至少與SAHA所表現(xiàn)出的相當?shù)目寡谆钚缘幕衔锏姆椒?，所述方法包括通過如下步驟制備如權(quán)利要求1-15的任一項中所定義的式(I)或(I')化合物(i)使式(VI)化合物與式(VII)化合物反應，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>。,(VI)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>其中A和R2如前述權(quán)利要求的4壬一項中所定義，R7為d-C4烷基或C2-C4烯基，Y為M保護基；(ii)對所得中間體去保護并使之與式(VIII)化合物反應，OH(V川)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>其中Y'為M保護基，Y"為氫或保護基；(iii)對所得中間體去保護并使之與式(IX)化合物反應，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>(IX)其中R3如前述權(quán)利要求的任一項中所定義，Y'〃為M保護基;(iv)對所得中間體去保護并使之與式(X)化合物反應，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>(x)其中R4如前述權(quán)利要求的任一項中所定義，Rs為氫或羥基保護基，LG為離去基團，Y〃〃為氫或保護基；(v)任選地，對所得中間體上的p-羥基去保護，以除去Rs保護基并以H取代之；(vi)水解和環(huán)化所得中間體；(vii)任選地，使所得中間體Jl應形成二硫鍵，并且，如果形成了二硫鍵，則任選地斷開所得化合物中的所述二硫鍵，以及如果所得化合物含硫羥基，則任選地引入硫羥保護基；和(viii)篩選所得化合物以測定其抗炎活性。29.權(quán)利要求28的方法，其中步驟(viii)中所述篩選步驟為檢領寸，所述檢測包括測定化合物相對于SAHA在抑制由外周血單核細胞(PBMC)產(chǎn)生TNFa中的活性。30.—種產(chǎn)品，所述產(chǎn)品含(a)如權(quán)利要求l-15的任一項中所定義的FK228類似物、其等排物或其藥學可接受的鹽，和(b)在如權(quán)利要求1、16或17中所定義的HDAC介導病癥的治療或預防中同時、分別或順序〗吏用的其他HDAC抑制劑。31.—種產(chǎn)品，所述產(chǎn)品含(a)如權(quán)利要求l-15的任一項中所定義的FK228類似物、其等排物或其藥學可接受的鹽，和(b)在癌癥的治療或預防中同時、分別或順序使用的其他化療或抗肺瘤劑。全文摘要發(fā)現(xiàn)了為FK228類似物的通式(I)或(I′)的化合物、其等排物和其藥學可接受的鹽抑制HDAC，其中R₁、R₂、R₃和R₄相同或不同，代表氨基酸側(cè)鏈部分，各R₆相同或不同，代表氫或C₁-C₄烷基。文檔編號A61K38/15GK101212982SQ200680024271公開日2008年7月2日申請日期2006年6月2日優(yōu)先權(quán)日2005年6月2日發(fā)明者亞歷山大·于雷克-喬治,亞歷山大·理查德·利亞姆·塞西爾,格雷厄姆·基思·帕克哈姆,阿拉舒·加內(nèi)桑申請人:南安普敦大學