專利名稱：：納米顆粒免疫抑制化合物的可注射的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及含至少一種免疫抑制化合物的可注射的納米顆粒組合物。在示范性實(shí)施方案中，本發(fā)明描述了納米顆粒免疫抑制化合物如他克莫司、西羅莫司或其組合的可注射的組合物。
背景技術(shù)：
：A.有關(guān)免疫抑制化合物的背景免疫抑制化合物的實(shí)例包括但不限于他克莫司和西羅莫司。1.有關(guān)他克莫司的背景他克莫司，或FK-506,是一種大環(huán)內(nèi)酯免疫抑制劑，據(jù)稱是環(huán)孢菌素效力的100倍。它由鏈霉菌的一種單型物種蘇庫巴鏈霉菌(Streptomycestsukubaensis)發(fā)酵制得。美國專利4,894,366和EPO出版物No.0184162描述了他克莫司，在這里全文引用作為參考。他克莫司以？110011八？@(可由FujisawaUSA,Inc.得到)的商品名稱銷售，它抑制某些體液免疫，而且在更大程度上抑制細(xì)胞介導(dǎo)的反應(yīng)，例如同種異體移植物的排斥、遲發(fā)型超敏反應(yīng)、膠原誘發(fā)的關(guān)節(jié)炎、實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性腦脊髓炎和移植物抗宿主病。他克莫司延長了肝、腎、心臟、骨髓、小腸和胰腺、肺和氣管、皮膚、角膜和四肢的動物移植模型中宿主和移植物的存活期。實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明，他克莫司與胞內(nèi)蛋白FKBP-12相結(jié)合。然后形成他克莫司-FKBP-12、鈣、4丐調(diào)蛋白和4丐依賴磷酸酶的復(fù)合物，《丐依賴磷酸酶的磷酸酶活性被抑制。這一作用可以防止活化T細(xì)胞核因子(NF-AT)的去磷酸化和易位，NF-AT被認(rèn)為是引發(fā)形成淋巴因子(例如白介素-2,y-干擾素)所需的基因轉(zhuǎn)錄的一種核組分。其總結(jié)果是抑制T-淋巴細(xì)胞的活化(即，免疫抑制作用)。他克莫司的經(jīng)驗(yàn)式C44H69NO^H20,分子量為822.05。他克莫司為白色晶體或晶狀粉末，幾乎不溶于水，在乙醇中易溶解，在曱醇和氯仿中極易溶解。他克莫司的化學(xué)結(jié)構(gòu)如下(參見TheMerckIndex,第12版,9200,Merck&Co.,Inc.,Rahway,NJ,1996)。他克莫司在口服后于胃腸道內(nèi)的吸收是不完全和變化不定的。他克莫司在成年腎移植患者(N二26)中的絕對生物利用度為17土10%，在成年肝移植患者(N47)中為22±6%,在健康的志愿者中為18±5%(N=16)。在32名健康的志愿者中進(jìn)行的單劑量研究確定了lmg和5mg膠嚢的生物等效性。另一項(xiàng)在32名健康志愿者中進(jìn)行的單劑量研究確定了0.5mg和lmg膠嚢的生物等效性。他克莫司最大血液濃度(CmJ和曲線下面積(AUC)在接受3mg、7mg和10mg單次口服劑量的18名禁食的健康志愿者中像是以正比于劑量的方式增加。在18名腎移植患者中，在服藥10-12小時后測得的他克莫司谷濃度3-30mg/mL(Cmm)與AUC的相關(guān)性很好(相關(guān)系數(shù)0.93)。在濃度范圍為10-60mg/mL的24名肝移植患者中，相關(guān)系數(shù)為0.94。關(guān)于食物的影響，他克莫司的吸收速度和程度在禁食條件下最大。當(dāng)對15名健康志愿者施用時，食物的存在和組成降低了他克莫司的吸收速度和程度。高脂膳食(848千卡，46%脂肪)的這一影響最顯著平均AUC和C咖x分別降低37%和77%,T咖x延長了5倍。高碳水化合物膳食(668千卡，85%碳水化合物)將平均AUC和平均Cmax分別降低28%和65%。在健康的志愿者中(N=16)，用餐時間也影響他克莫司的生物利用度。當(dāng)用餐后立即施用時，與禁食條件相比，平均Qnax下降71。/。，平均AUC下降39。/。。當(dāng)進(jìn)餐1.5小時后施用時，與禁食條件相比，平均Cmax下降63%,平均AUC下降390/0。在ll名肝移植患者中，在高脂(400千卡，34%脂肪)早餐15分鐘后施用他克莫司，與禁食條件相比，造成AUC(27士18。/o)和Cmax(50±19%)降低。他克莫司的血漿蛋白結(jié)合約為99%,并且在5-50ng/ml的范圍內(nèi)與濃度無關(guān)。他克莫司主要與白蛋白和ct-l-酸性糖蛋白結(jié)合，并與紅細(xì)胞高度締合。他克莫司在全血和血漿之間的分布取決于幾個因素，例如血細(xì)胞比容、血漿分離時的溫度、藥物濃度和血漿蛋白濃度。在美國的一項(xiàng)研究中，全血濃度與血漿濃度之比平均為35(范圍為12-67)。他克莫司通過混合功能氧化酶系統(tǒng)、主要是細(xì)胞色素P-450系統(tǒng)(CYP3A)來廣泛地進(jìn)行新陳代謝。已經(jīng)提出了導(dǎo)致形成8種可能的代謝產(chǎn)物的代謝途徑。脫曱基作用和羥基化作用被稱為體外生物轉(zhuǎn)化的主要機(jī)制。在人肝微粒體培養(yǎng)中所識別的主要的代謝產(chǎn)物是13-脫甲基他克莫司。在體外試驗(yàn)中，已經(jīng)報(bào)導(dǎo)了31-脫甲基代謝產(chǎn)物具有與他克莫司相同的活性。在健康志愿者、成年腎移植患者和成年肝移植患者中，在他克莫司的靜脈內(nèi)施用后的平均清除率分別為0.040、0.083和0.053L/hr/kg。在人體中，所施用的小于1%的劑量無變化地在尿中排泄。在向6名健康志愿者的靜脈內(nèi)施用的放射性標(biāo)記的他克莫司的質(zhì)量平衡研究中，放射性標(biāo)記的平均回收率為77.8±12.7%。糞便排出占92.4±1.0%,基于放射性的排出半衰期為48.1±15.9小時，而基于他克莫司濃度，其為43.5±11.6小時。放射性標(biāo)記的平均清除率是0.029±0.015L/hr/kg,他克莫司的清除率是0.029±0.009L/hr/kg。當(dāng)口月良施用時，放射性標(biāo)記的平均回收率為94.9±30.7%。糞便排出占92.6±30.7%,尿排出占2.3±1.1%,基于放射性的排出半衰期為31.9±10.5小時，而基于他克莫司濃度，其為48.4±12.3小時。放射性標(biāo)記的平均清除率為0.226±0.116L/hr/kg,他克莫司的清除率為0.172±0.088L/hr/kg。對不能口月良？110011八？@膠嚢的患者，可以用PROGRAF⑧注射劑開始治療。當(dāng)考慮使用？110011八？@注射劑時，應(yīng)當(dāng)注意用含蓖麻油衍生物如CREMAPHOR⑧的他克莫司注射物曾發(fā)生過敏反應(yīng)。因此，對HCO-60(聚氧乙烯(60)氬化蓖麻油)過敏的患者禁用PROGRAF注射劑。尺0011八？@的首次劑量應(yīng)當(dāng)在移植后6小時馬上施用。建議的PROGRAF⑧注射劑的初始劑量為0.03-0.05mg/kg/天，連續(xù)靜脈內(nèi)輸注。成年患者應(yīng)以劑量范圍的下限接受劑量。在移植后早期建議同時進(jìn)行腎上腺皮質(zhì)類固醇治療。PROGRAF⑧注射劑的連續(xù)靜脈內(nèi)(IV)輸注應(yīng)當(dāng)只持續(xù)到患者可以耐受口服？110011八？@膠嚢為止。使用前，PROGRAF⑧注射劑必須用0.9%氯化鈉注射液或5%葡萄糖注射液稀釋，直至濃度為0.004-0.02mg/mL。稀釋的輸注液應(yīng)當(dāng)4諸存在玻璃或聚乙烯容器中，并應(yīng)在24小時后丟棄。稀釋的輸注液不應(yīng)儲存在PVC容器中，因?yàn)榉€(wěn)定性會降低，而且有鄰苯二甲酸鹽(酯)萃出的可能性。在使用更稀的溶液的情形(例如兒科配藥等)中，同樣應(yīng)當(dāng)使用無PVC的管子，以最小化大量藥物吸附在管子上的可能性。每當(dāng)溶液和容器允許，腸外藥物產(chǎn)品在施用前應(yīng)當(dāng)目測檢查顆粒物和變色情況。由于PROGRAF⑧在堿性介質(zhì)中的化學(xué)不穩(wěn)定性，PROGRAF⑧注射劑不應(yīng)當(dāng)與pH為9或更高的溶液(例如更昔洛韋或阿昔洛韋)混合或者共輸注。如果靜脈內(nèi)治療是必需的，建議在能夠耐受口服治療時立即從靜脈內(nèi)轉(zhuǎn)換成口服他克莫司。在接受靜脈內(nèi)輸注的患者中，首次口服治療劑量應(yīng)當(dāng)在停止靜脈內(nèi)輸注8-12小時后進(jìn)行。建議的他克莫司膠嚢起始口服劑量為0.10-0.15mg/kg/天，以每12小時按兩分日劑量施用。已報(bào)道共服葡萄柚汁來提高肝移植患者的他克莫司血液谷濃度。配藥應(yīng)當(dāng)根據(jù)排斥和耐受性的臨床評估來確定。2.關(guān)于西羅莫司的背景西羅莫司是由吸濕鏈霉菌(Streptomyceshygroscopicus)生成的免疫抑制性大環(huán)內(nèi)酯。西羅莫司(亦稱雷帕霉素)的化學(xué)名稱是(3S,6R,7E,9R,10R,12R,14S,15E,17E,19E，21S,23S,26R,27R，34aS)-9,10,12,13,14,21,22,23,24,25,26,27,32,33,34,34a-十六氫-9，27-二羥基國3誦[(lR)畫2畫[(lS,3R,4R)-4-羥基-3-曱氧基環(huán)己基]-l-曱基乙基]-10,21-二曱氧基-6,8,12,14，20,26-六曱基-23,27-環(huán)氧-3H-吡啶并[2,l-c][l，4]氧雜氮雜hentriacontine-l,5,ll,28,29(4H,6H,31H)-五S同。它的分子式是C51H79N013,分子量為914.2。西羅莫司的結(jié)構(gòu)式如下所示。西羅莫司是白色至灰白色粉末，不溶于水，但易溶于千醇、氯仿、丙酮和乙腈。西羅莫司目前是以口服劑型的形式以商品名稱1^口&111111^@由Wyeth-AyerstInc.(Madison,N.J.)銷售。Rapamune⑧以含1mg/mL西羅莫司的口服液的形式施用。Rapamune此外以含l-mg西羅莫司的白色、三角形藥片和含2-mg西羅莫司的黃色至米色三角形藥片的形式獲得。Rapamuneo服液中的非活性成分是Phosal50PG⑧(磷脂酰膽堿、丙二醇、單和二-甘油酯、乙醇、大豆脂肪酸、和抗壞血酸棕櫚酸酯)和聚山梨酯80。Rapamune口服液包含1.5%-2.5%乙醇。Rapamune⑧片劑中的非活性成分包括蔗糖、乳糖、聚乙二醇8000、硫酸釣、微晶纖維素、藥物釉(pharmaceuticalglaze)、滑石、二氧化鈥、硬脂酸4美、聚維酮、泊洛沙姆188、聚乙二醇20,000、甘油單油酸酯、巴西棕櫚蠟及其他成分。2毫克劑型還包含氧化鐵黃10和氧化鐵棕70。西羅莫司抑制T-淋巴細(xì)胞活化和增殖(其是響應(yīng)由不同于其它免疫抑制劑的機(jī)制所造成的抗原和細(xì)胞因子(白介素[IL]-2、IL-4、和IL-15)刺激而發(fā)生的)。西羅莫司還抑制抗體產(chǎn)生。在細(xì)胞中，西羅莫司結(jié)合到抑免蛋白，F(xiàn)K結(jié)合蛋白-12(FKBP-12),以產(chǎn)生免疫抑制復(fù)合物。西羅莫司FKBP-12復(fù)合物對鉀依賴磷酸酶活性沒有影響。該復(fù)合物結(jié)合并抑制西羅莫司的哺乳動物靶(mTOR)——一種關(guān)鍵的調(diào)節(jié)激酶的活化。這種抑制壓制了細(xì)胞因子驅(qū)動的T細(xì)胞的增殖，抑制了細(xì)胞周期從Gi至S期的進(jìn)程。在實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭械难芯勘砻?，在小鼠、大鼠、豬和/或靈長類動物中，西羅莫司使同種異體移植物(腎、心臟、皮、胰島、小腸、胰十二指腸和骨髓)的存活得到了延長。在大鼠中，西羅莫司逆轉(zhuǎn)了心臟和腎的同種異體移植物的急性排斥反應(yīng)，并且在預(yù)敏化的大鼠中使移植物的存活得到了延長。在一些研究中，在中止治療后，西羅莫司的免疫抑制作用持續(xù)了長達(dá)6個月。這種耐受性作用是同種異體抗原特異性的。在自身免疫性疾病的嚙齒動物模型中，西羅莫司抑制了與系統(tǒng)性紅斑狼瘡、膠原誘發(fā)的關(guān)節(jié)炎、自身免疫I型糖尿病、自身免疫心肌炎、實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性腦脊髓炎、移植物抗宿主病和自身免疫葡萄膜視網(wǎng)膜炎有關(guān)的由免疫介導(dǎo)的事件。在健康受試者、兒科透滲析患者、肝損傷患者和腎移植患者中在口服后已經(jīng)確定了西羅莫司藥物動力學(xué)活性。在施用1^口&111111^@口服液后，西羅莫司被快速吸收，在健康受試者中在單一劑量后，至最大濃度的平均時間(T^O大約為1小時，而在腎移植者中，在給予多口服劑量后，至最大濃度的平均時間大約為2小時。在施用1^口3111111^@口服液后，估計(jì)西羅莫司的系統(tǒng)利用率為大約14%。在施用片劑后，西羅莫司的平均生物利用率為大約為27%高于口服液。西羅莫司口服片劑與口服液不是生物等效的；然而，在2mg劑量水平下，已經(jīng)證實(shí)了臨床等效性。在將Rapamune口服液施用于穩(wěn)定的腎移植患者后，西羅莫司濃度與劑量成比例，在3-12mg/m2。B.關(guān)于納米顆?；钚詣┙M合物的背景納米顆?；钚詣┙M合物最早見于美國專利5,145,684('684專利)，包括溶解性差的治療或診斷劑的顆粒，在其表面上有吸附的或締合的非交聯(lián)的表面穩(wěn)定劑。'684專利還描述了制備這種納米顆?；钚詣┙M合物的方法，但是沒有提到含有納米顆粒形式的他克莫司的組合物。在題為"MethodofGrindingPharmaceuticalSubstances，，的美國專利5,518,187和5,862,999,題為"ContinuousMethodofGrindingPharmaceuticalSubstances"的美國專利5,718,388,和題為"ProcessofPreparingTherapeuticCompositionsContainingNanoparticles，，的美國專利5,510,118中，描述了制造納米顆粒組合物的方法。例如，納米顆粒組合物還在下述專利中描述美國專利5,298,262:UseofIonicCloudPointModifierstoPreventParticleAggregationDuringSterilization;美國專利5,302,401:MethodtoReduceParticleSizeGrowthDuringLyophilization;美國專利5,318,767:X-RayContrastCompositionsUsefulinMedicalImaging;美國專利5,326,552:NovelFormulationForNanoparticulateX-RayBloodPoolContrastAgentsUsingHighMolecularWeightNon-ionicSurfactants;美國專利5,328,404:MethodofX-RayImagingUsingIodinatedAromaticPropanedioates;美國專利5,336,507:UseofChargedPhospholipidstoReduceNanoparticleAggregation;美國專利5,340,564:FormulationsComprisingOlin10-GtoPreventParticleAggregationandIncreaseStability;美國專利5,346,702:UseofNon-IonicCloudPointModifierstoMinimizeNanoparticulateAggregationDuringSterilization;美國專利5,349,957:PreparationandMagneticPropertiesofVerySmallMagnetic-DextranParticles;美國專利5,352,459:UseofPurifiedSurfaceModifierstoPreventParticleAggregationDuringSterilization;美國專利5,399,363和5,494,683:SurfaceModifiedAnticancerNanoparticles;美國專利5,401,492:WaterInsolubleNon畫MagneticManganeseParticlesasMagneticResonanceEnhancementAgents;美國專利5,429,824:UseofTyloxapolasaNanoparticulateStabilizer;美國專利5，447,710:MethodforMakingNanoparticulateX誦RayBloodPoolContrastAgentsUsingHighMolecularWeightNon-ionicSurfactants;美國專矛J5,451，393:X陽RayContrastCompositionsUsefulinMedicalImaging;美國專利5,466,440:FormulationsofOralGastrointestinalDiagnosticX-RayContrastAgentsinCombinationwithPharmaceuticallyAcceptableClays;美國專利5,470,583:MethodofPreparingNanoparticleCompositionsContainingChargedPhospholipidstoReduceAggregation;美國專利5,472,683:NanoparticulateDiagnosticMixedCarbamicAnhydridesasX-RayContrastAgentsforBloodPoolandLymphaticSystemImaging;美國專利5,500,204:NanoparticulateDiagnosticDimersasX-RayContrastAgentsforBloodPoolandLymphaticSystemImaging;美國專利5,518,738:NanoparticulateNSAIDFormulations;美國專利5,521,218:NanoparticulateIododipamideDerivativesforUseasX-RayContrastAgents;美國專利5,525,328:NanoparticulateDiagnosticDiatrizoxyEsterX-RayContrastAgentsforBloodPoolandLymphaticSystemImaging;美國專利5,543,133:ProcessofPreparingX-RayContrastCompositionsContainingNanoparticles;美國專利5,552，160:SurfaceModifiedNSAIDNanoparticles;美國專利5,560,931:FormulationsofCompoundsasNanoparticulateDispersionsinDigestibleOilsorFattyAcids;美國專矛J5,565,188:PolyalkyleneBlockCopolymersasSurfaceModifiersforNanoparticles;美國專矛J5,569,448:SulfatedNon-ionicBlockCopolymerSurfactantasStabilizerCoatingsforNanoparticleCompositions;美國專矛J5,571,536:FormulationsofCompoundsasNanoparticulateDispersionsinDigestibleOilsorFattyAcids;美國專利5,573,749:NanoparticulateDiagnosticMixedCarboxylicAnydridesasX-RayContrastAgentsforBloodPoolandLymphaticSystemImaging;美國專利5,573,750:DiagnosticImagingX-RayContrastAgents;美國專利5,573,783:國專利5,580,579:Site-specificAdhesionWithintheGITractUsingNanoparticlesStabilizedbyHighMolecularWeight,LinearPoly(ethyleneOxide)Polymers;美國專利5,585,108:FormulationsofOralGastrointestinalTherapeuticAgentsinCombinationwithPharmaceuticallyAcceptableClays;美國專利5,587,143:ButyleneOxide畫EthyleneOxideBlockCopolymersSurfactantsasStabilizerCoatingsforNanoparticulateCompositions;美國專利5,591,456:MilledNaproxenwithHydroxypropylCelluloseasDispersionStabilizer;美國專利5,593,657:NovelBariumSaltFormulationsStabilizedbyNon-ionicandAnionicStabilizers;美國專利5,622,938:SugarBasedSurfactantforNanocrystals;美國專利5,628,981:ImprovedFormulationsofOralGastrointestinalDiagnosticX-RayContrastAgentsandOralGastrointestinalTherapeuticAgents;美國專利5,643,552:NanoparticulateDiagnosticMixedCarbonicAnhydridesasX-RayContrastAgentsforBloodPoolandLymphaticSystemImaging;美國專利5,718,388:ContinuousMethodofGrindingPharmaceuticalSubstances;美國專利5,718,919:NanoparticlesContainingtheR(-)EnantiomerofIbuprofen;美國專利5,747,001:AerosolsContainingBeclomethasoneNanoparticieDispersions;美國專矛J5,834,025:ReductionofIntravenouslyAdministeredNanoparticulateFormulationInducedAdversePhysiologicalReactions;美國專利6,045,829:"NanocrystallineFormulationsofHumanImmunodeficiencyVirus(HIV)ProteaseInhibitorsUsingCelluosicSurfaceStabilizers;美國專利6,068,858:MethodsofMakingNanocrystallineFormulationsofHumanImmunodeficiencyVirus(HIV)ProteaseInhibitorsUsingCellulosicSurfaceStabilizers;美國專利6,153,225:InjectableFormulationsofNanoparticulateNaproxen;美國專利6,165,506:NewSolidDoseFormofNanoparticulateNaproxen;美國專利6,221,400:MethodsofTreatingMammalsUsingNanocrystallineFormulationsofHumanImmunodeficiencyVirus(HIV)ProteaseInhibitors;美國專利6,264,922:NebulizedAerosolsContainingNanoparticleDispersions;美國專利6,267,989:MethodsforPreventingCrystalGrowthandParticleAggregationinNanoparticleCompositions;美國專利6,270,806:UseofPEG-DerivatizedLipidsasSurfaceStabilizersforNanoparticulateCompositions;美國專利6,316,029:RapidlyDisintegratingSolidOralDosageForm;美國專利6,375,986:SolidDoseNanoparticulateCompositionsComprisingaSynergisticCombinationofaPolymericSurfaceStabilizerandDioctylSodiumSulfosuccinate;美國專利6,428,814:BioadhesiveNanoparticulateCompositionsHavingCationicSurfaceStabilizers;美國專利6,431,478:SmallScaleMill;美國專利6,432,381:MethodsforTargetingDrugDeliverytotheUpperand/orLowerGastrointestinalTract;美國專利6,582,285:ApparatusforSanitaryWetMilling;美國專利6,592,903:NanoparticulateDispersionsComprisingaSynergisticCombinationofaPolymericSurfaceStabilizerandDioctylSodiumSulfosuccinate;美國專利6,656,504:NanoparticulateCompositionsComprisingAmorphousCyclosporine;美國專利6,742,734:SystemandMethodforMillingMaterials;美國專利6,745,962:SmallScaleMillandMethodThereof;美國專利6,811,767:LiquiddropletaerosolsofNanoparticulatedrugs;美國專利6,908,626:Compositionshavingacombinationofimmediatereleaseandcontrolledreleasecharacteristics;美國專利6,969,529:Nanoparticulatecompositionscomprisingcopolymersofvinylpyrrolidoneandvinylacetateassurfacestabilizers;美國專利6,976,647:SystemandMethodforMillingMaterials;和美國專利6,991,191:MethodofUsingaSmallScaleMill;其全部結(jié)合入本文作為參考。另外，美國專利申請20020012675Al(2002年1月31日乂/^布ControlledReleaseNanoparticulateCompositions)4笛述了纟內(nèi)米茅貞粒組合物，并特別結(jié)合入本文作為參考。這些參考文件都沒有描述納米顆粒他克莫司或納米顆粒西羅莫司的組合物。US20030054042(Stabilizationofchemicalcompoundsusingnanoparticulateformulations)描述了納米顆粒雷帕霉素制劑，其包括可注射的制劑。美國專利5,989,59l(Rapamycinformulationsfororaladministration)描述了片劑劑型的用于口服的納米顆粒雷帕霉素組合物。例如在下述專利中描述了無定形小顆粒組合物美國專利4，783,484:ParticulateCompositionandUseThereofasAntimicrobialAgent;美國專利4,826，689:MethodforMakingUniformlySizedParticlesfromWater-InsolubleOrganicCompounds;美國專利4,997,454:MethodforMakingUniformly-SizedParticlesFromInsolubleCompounds;美國專利5,741,522:Ultrasmall,Non-aggregatedPorousParticlesofUniformSizeforEntrappingGasBubblesWithinandMethods;和美國專利5,776,496:UltrasmallPorousParticlesforEnhancingUltrasoundBackScatter;其全部4寺另寸結(jié)合入本文作為參考。需要免疫抑制劑如他克莫司和西羅莫司的組合物，其具有增強(qiáng)的溶解特性，其又在施用于患者時，提供了增強(qiáng)的生物利用率，以及降低的進(jìn)食/禁食吸收變化性。通過提供包括他克莫司、西羅莫司或其組合的可注射的納米顆粒制劑的方法和組合物，本發(fā)明滿足了這些需要。這種可注射的納米顆粒制劑消除了對使用增溶劑如聚氧乙烯(60)氫化蓖麻油(HCO-60)或聚山梨酯如聚山梨酯80的需要。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及一種可注射的納米顆粒制劑，其包含免疫抑制化合物如他克莫司、西羅莫司或其組合。該納米顆粒制劑使得可以通過改變他克莫司、西羅莫司或其組合的粒度而以期望的速率從注射部位連續(xù)釋放。在一種實(shí)施方案中，所述制劑是一種可注射的組合物，其可以在皮下或肌內(nèi)注射來施用，從而形成了提供藥物長期釋放的貯點(diǎn)(depot)。這種制劑確保了較好的藥理學(xué)功效和患者順應(yīng)性。本發(fā)明還提供了一種可注射的免疫抑制的制劑，其包含納米顆粒他克莫司、納米顆粒西羅莫司或其組合，其中他克莫司和/或西羅莫司的有效平均粒度小于約2000nm。另外，所述組合物包括至少一種表面穩(wěn)定劑，其吸附或締合于他克莫司和/或西羅莫司顆粒的表面。在本發(fā)明的其他實(shí)施方案中，納米顆粒他克莫司或西羅莫司顆粒的有效平均粒度小于約1900nm、小于約1800nm、小于約1700nm、小于約1600nm、小于約1500nm、小于約1400nm、小于約1300nm、小于約1200nm、小于約1250nm、小于約1000nm、小于約900nm、小于約800nm、小于約700腿、小于約600nm、小于約550nm、小于約500nm、小于約450nm、小于約400nm、小于約350nm、小于約300nm、小于約250nm、小于約200nm、小于約150nm、小于約100nm、小于約75nm、或小于約50nm。本發(fā)明的另一方面提供了可注射的納米顆粒他克莫司、納米顆粒西羅莫司或他克莫司/西羅莫司組合的制劑，其消除了使用聚氧乙烯(60)氫化蓖麻油(HCO-60)和/或聚山梨酯80作為增溶劑的需要。這是有益的，因?yàn)槌Ｒ?guī)的非納米顆?？勺⑸涞乃四净蛭髁_莫司制劑包括聚氧乙烯(60)氫化蓖麻油或聚山梨酯80作為增溶劑。這種增溶劑的存在可能導(dǎo)致患者的過敏性休克(即嚴(yán)重的變態(tài)反應(yīng))和死亡。本發(fā)明還提供了在注射體積中含高濃度的他克莫司、西羅莫司或其組合的制劑，在施用時形成了具有慢的、長期藥物溶解的貯點(diǎn)。在本發(fā)明的另一方面中，提供了一種制備含他克莫司、西羅莫司或其組合的可注射的納米顆粒免疫抑制制劑的方法。所述方法包括(1)在液體分散介質(zhì)中將所選的免疫抑制化合物分散；和(2)用機(jī)械方法將免疫抑制化合物的粒度減小到期望的有效平均粒度，例如小于約2000nm。在免疫抑制化合物的粒度減小之前、之中或之后，可以將一種或多種表面穩(wěn)定劑添加到組合物中。在一種實(shí)施方案中，所述表面穩(wěn)定劑是分子量小于約40,000道爾頓的聚維酮聚合物。優(yōu)選地，在粒度減小過程中，將液體分散介質(zhì)維持在生理pH水平，例如約3-約8。本發(fā)明還涉及使用含他克莫司、西羅莫司或其組合的本發(fā)明的可注射的納米顆粒制劑治療包括人在內(nèi)的哺乳動物以預(yù)防器官排斥的方法。例如，所述組合物對于接受同種異體肝或腎移植的患者以及治療牛皮癬或其它免疫性疾病來說是有用的。所述方法包括以下步驟將治療有效量的他克莫司、西羅莫司或其組合的可注射的納米顆粒制劑經(jīng)皮下或肌內(nèi)注射而施用于受試者，使得在其中形成貯點(diǎn)以便藥物的長期施用。本發(fā)明的可注射的納米顆粒他克莫司或西羅莫司制劑可任選地包括一種或多種藥理學(xué)可接受的賦形劑，如無毒性的生理學(xué)可接受的液體載體、pH調(diào)節(jié)劑或防腐劑。以上概述和以下詳述都是示范性的和說明性的，都意圖提供對如所要求保護(hù)的本發(fā)明的進(jìn)一步的解釋。通過以下發(fā)明的詳細(xì)說明，其它目的、優(yōu)點(diǎn)和新穎特征對本領(lǐng)域技術(shù)人員將是顯而易見的。圖1.未研磨的他克莫司的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的100X光學(xué)顯微照片。圖2.具有2Q/o(w/w)聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K29/32和0.05%(/)磺基琥珀酸二辛酯(DOSS)的10。/。(w/w)納米顆粒他克莫司(CamidaLLC)水分散體的釆用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的IOOX光學(xué)顯微照片。圖3.具有2。/。(w/w)聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K29/32和0.C)5。/o(w/w)磺基琥珀酸二辛酯(DOSS)的10。/0(w/w)納米顆粒他克莫司(CamidaLLC)水分散體在冷藏貯存一周后的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的100X光學(xué)顯微照片。圖4.具有2%(w/w)PVPK12和0.15。/。(w/w)脫氧膽酸鈉的10%(w/w)納米顆粒他克莫司(CamidaLLC)水分散體的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的IOOX光學(xué)顯樣么照片。圖5.具有3%(w/w)PlasdoneS630(乙烯基吡咯烷酮和乙酸乙烯酯的比例為60:40的無規(guī)共聚物)的20。/。(w/w)納米顆粒他克莫司(CamidaLLC)水分散體的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的IOOX光學(xué)顯微照片。圖6.具有3%(w/w)PlasdoneS630(乙烯基吡咯烷酮和乙酸乙烯酯的比例為60:40的無規(guī)共聚物)的20。/。(w/w)納米顆粒他克莫司(CamidaLLC)水分散體在冷藏貯存一周后的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的100X光學(xué)顯微照片。圖7.具有2Q/。(w/w)羥丙基纖維素(HPC-SL)和0.1%(w/w)DOSS的10y。(w/w)納米顆粒他克莫司(CamidaLLC)水分散體的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的IOOX光學(xué)顯微照片。圖8.具有P/o(w/w)HPC-SL和0.15o/o(w/w)DOSS的5。/。(w/w)納米顆粒他克莫司(CamidaLLC)水分散體的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的100X光學(xué)顯微照片。圖9.具有l(wèi)%(w/w)HPC-SL和0.15%(w/w)DOSS的5。/。(w/w)納米顆粒他克莫司(CamidaLLC)水分散體在冷藏貯存12天后的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的100X光學(xué)顯微照片。圖10.具有l(wèi)%(w/w)HPC-SL和0.1。/。(w/w)脫氧膽酸鈉的5%(w/w)納米顆粒他克莫司(CamidaLLC)水分散體的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的IOOX光學(xué)顯微照片。圖11.具有l(wèi)%(w/w)HPC-SL和0.P/。(w/w)脫氧膽酸鈉的5%(w/w)納米顆粒他克莫司(CamidaLLC)水分散體在冷藏貯存12天后的釆用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的IOOX光學(xué)顯微照片。圖12.具有2。/。(w/w)羥丙基甲基纖維素(HPMC)和0.05。/o(w/w)DOSS的10。/。(w/w)納米顆粒他克莫司(CamidaLLC)水分散體的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的IOOX光學(xué)顯微照片。圖13.具有2。/o(w/w)羥丙基甲基纖維素(HPMC)和0.05。/o(w/w)DOSS的10。/。(w/w)納米顆粒他克莫司(CamidaLLC)水分散體在冷藏貯存一周后的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的IOOX光學(xué)顯微照片。圖14.具有2%PluronicF108的10。/。(w/w)納米顆粒他克莫司(CamidaLLC)水分散體的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的100X光學(xué)顯微照片。圖15.具有2%PluronicF108的K)o/o(w/w)納米顆粒他克莫司(CamidaLLC)水分散體在冷藏貯存一周后的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的IOOX光學(xué)顯微照片。圖16.具有2%Tween80的10。/0(w/w)納米顆粒他克莫司(CamidaLLC)水分散體的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的IOOX光學(xué)顯微照片。圖17.具有2%Tween80的10。/0(w/w)納米顆粒他克莫司(CamidaLLC)水分散體在冷藏貯存一周后的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的100X光學(xué)顯微照片。發(fā)明的詳細(xì)說明A.引言本發(fā)明涉及包含可注射的納米顆粒免疫抑制制劑如納米顆粒他克莫司、納米顆粒西羅莫司或其組合的可注射制劑的組合物。本發(fā)明中所用的免疫抑制劑可以是任何水溶性差的免疫抑制劑。在本發(fā)明的一種實(shí)施方案中，免疫抑制劑是他克莫司、西羅莫司或其組合。納米顆粒免疫抑制劑的有效平均粒度為小于約2000nm。與常規(guī)的、非納米顆?；蛉芙庑问降乃四净蛭髁_莫司相比，含納米顆粒他克莫司、納米顆粒西羅莫司或其組合的本發(fā)明的制劑的優(yōu)點(diǎn)包括但不局限于(l)增加的水溶性；(2)增加的生物利用率；(3)由于增強(qiáng)的生物利用率造成的較小的劑型大??；(4)由于增強(qiáng)的生物利用率造成的較低的治療劑量；(5)由于較低的劑量造成的不希望的副作用的降低的風(fēng)險(xiǎn)；(6)增強(qiáng)的患者便利性和順應(yīng)性；和(7)在器官替換手術(shù)后更有效預(yù)的他克莫司i西羅莫司的常規(guī)形式:本發(fā)明^含他克莫司、西羅i司或其組合的可注射的納米顆粒制劑的進(jìn)一步的優(yōu)點(diǎn)是消除了使用聚氧乙烯(60)氬化蓖麻油(HCO-60)或聚山梨酯如聚山梨酯80作為增溶劑的需要。本發(fā)明還包括含他克莫司、西羅莫司或其組合以及一種或多種無毒生理學(xué)可接受的載體、助劑或媒介體(總稱為載體)的納米顆粒組合物。這些組合物可以配制成用于腸道外注射(例如，靜脈內(nèi)、月幾肉或皮下)，以固體、液體或氣溶膠形式口服，陰道、鼻、直腸、眼、局部(粉末、軟膏或滴劑)、含服、腦池內(nèi)、腹膜內(nèi)或表面施用等。B.定義如同下面和整篇申請中所述，本文中使用若干定義來描述本發(fā)明。本文使用的術(shù)語"小于約2000nm的有效平均粒度"意味著當(dāng)用例如沉降場流動分級、光子相關(guān)鐠、光散射、盤式離心和本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它技術(shù)測定時，按重量計(jì)至少50%的他克莫司、西羅莫司或他克莫司和西羅莫司顆粒的尺寸小于約2000nm。如本文中使用的，"約，，應(yīng)該被本領(lǐng)域普通技術(shù)人員理解，并將隨其所用之處的上下文而有一定程度的變化。如果根據(jù)術(shù)語應(yīng)用的上下文，對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，其使用不是清楚的，那么"約"意思是不超過所述特定術(shù)語的正負(fù)10%。如本文使用的，關(guān)于穩(wěn)定的他克莫司或西羅莫司顆粒，術(shù)語"穩(wěn)定的"包含但不限于一種或多種下述參數(shù)(l)隨著時間的過去，他克莫司或西羅莫司顆粒沒有因?yàn)轭w粒相互間的引力而顯著絮凝或凝聚或者粒度明顯增加；(2)隨著時間的過去，他克莫司或西羅莫司顆粒的物理結(jié)構(gòu)不會改變，例如從無定形相轉(zhuǎn)變?yōu)榫啵?3)他克莫司或西羅莫司顆粒是化學(xué)穩(wěn)定的；和/或(4)在制備本發(fā)明的納米顆粒過程中，在他克莫司或西羅莫司的熔點(diǎn)或熔點(diǎn)以上，他克莫司和/或西羅莫司沒有經(jīng)歷加熱步驟。術(shù)語"常規(guī)的"或"非納米顆粒"他克莫司、西羅莫司或其組合應(yīng)指溶解的或有效平均粒度大于約2000nm的活性劑。如本文中所定義的納米顆?；钚詣┑挠行骄６刃∮诩s2000nm。如本文中使用的短語"水溶性差的藥物"，是指水中溶解度小于約30mg/mL,小于約20mg/mL,小于約10mg/mL,或小于約1mg/mL的藥物。如本文中所使用的，短語"治療有效量，，，應(yīng)指對于在需要所述治療的眾多受試者中所施用的藥物提供了特定的藥理學(xué)響應(yīng)的藥物劑量。應(yīng)該強(qiáng)調(diào)，在特定情形下，對特定受試者所施用的治療有效量的藥物，即使所述劑量被本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)為是治療有效量的，在治療本文中所述癥狀/疾病方面將不總是有效。如本文中使用的，術(shù)語"顆粒"是指以離散顆粒、丸粒、珠粒或團(tuán)粒存在為特征的物質(zhì)狀態(tài)，而不管其大小、形狀或形態(tài)如何。如本文中使用的，術(shù)語"多顆粒"是指多個離散或聚集的顆粒、丸粒、珠粒、團(tuán)粒或其混合物，而不管其大小、形狀或形態(tài)如何。C.納米顆粒免疫抑制組合物的特征本發(fā)明的納米顆粒免疫抑制組合物有4艮多增強(qiáng)的藥理學(xué)特性。1.增加的生物利用率與現(xiàn)有的常規(guī)他克莫司或西羅莫司制劑相比，本發(fā)明的含他克莫司、西羅莫司或其組合的制劑在相同的他克莫司、西羅莫司或其組合的同樣劑量下表現(xiàn)出增加的生物利用率。非生物等效性是重要的，因?yàn)檫@意味著他克莫司、西羅莫司或其組合的納米顆粒劑型顯示出明顯更大的藥物吸收。對于與常規(guī)微晶劑型生物等效的納米顆粒劑型，該納米顆粒劑型將一定包含明顯更少的藥物。因而，納米顆粒劑型顯著地增加了藥物的生物利用率。而且，含他克莫司、西羅莫司或其組合的納米顆粒劑型要求更少的藥物以獲得與常規(guī)微晶劑型(例如？110011八@)所觀察到的相同的藥理學(xué)作用。因此，相比于常規(guī)的微晶劑型，納米顆粒劑型具有增加的生物利用率。2.本發(fā)明的他克莫司和/或西羅莫司組合物的藥物動力學(xué)特征不受攝入該組合物的受試者的進(jìn)食或禁食狀態(tài)的影響本發(fā)明組合物包含他克莫司、西羅莫司或其組合，其中他克莫司、西羅莫司或其組合的藥物動力學(xué)特征基本上不受攝入該組合物的受試者的進(jìn)食或禁食狀態(tài)的影響。這意味著，相對于禁食，當(dāng)在進(jìn)食狀態(tài)下施用含他克莫司、西羅莫司或其組合的納米顆粒組合物時，藥物吸收量或藥物吸收速率幾乎沒有或者沒有明顯的差別?；旧舷澄镉绊懙膭┬偷囊嫣幇ㄔ黾恿耸茉囌叩谋憷裕瑥亩岣吡耸茉囌叩捻槕?yīng)性，因?yàn)樗鍪茉囌卟恍枰_保他們在有食或無食的條件下服藥。這是重要的，因?yàn)樵谑茉囌邔λ四净蛭髁_莫司較差的順應(yīng)性條件下，可能會觀察到該藥物用來治療的醫(yī)學(xué)癥狀的增強(qiáng)，例如患者可能遭受器官排斥，或者未對牛皮齊或其他免疫性疾病進(jìn)行治療。本發(fā)明還優(yōu)選地提供含他克莫司、西羅莫司或其組合的組合物，其當(dāng)施用于哺乳動物受試者時，具有所希望的藥物動力學(xué)特征。含他克莫司、西羅莫司或其組合的組合物的所希望的藥物動力學(xué)特征優(yōu)選地包括但不局限于(l)當(dāng)對施用后的哺乳動物受試者的血漿進(jìn)行分析時，以相同劑量施用，他克莫司、西羅莫司或其組合的Cn^優(yōu)選地大于非納米顆粒他克莫司或西羅莫司制劑的Cmax;和/或(2)當(dāng)對施用后的哺乳動物受試者的血漿進(jìn)行分析時，以相同劑量施用，他克莫司、西羅莫司或其組合的AUC優(yōu)選地大于非納米顆粒他克莫司或西羅莫司制劑的AUC;和/或(3)當(dāng)對施用后的哺乳動物受試者的血漿進(jìn)行分析時，以相同劑量施用，他克莫司、西羅莫司或其組合的T咖x優(yōu)選地小于非納米顆粒他克莫司或西羅莫司制劑的Tmax。如本文中使用的，所希望的藥物動力學(xué)特征是在他克莫司、西羅莫司或其組合的首次劑量后所測量的藥物動力學(xué)特征。在一種實(shí)施方案中，以相同劑量施用，在與非納米顆粒他克莫司或西羅莫司制劑的比較藥物動力學(xué)試驗(yàn)中，含他克莫司、西羅莫司或其組合的組合物顯示出Tmax不大于非納米顆粒他克莫司或西羅莫司制劑所顯示的Tmax的約90%、約80°/。、約70%、約60%、約50%、約30%、約25%、約20%、約15%、約10%或約5%。在另一實(shí)施方案中，在與非納米顆粒他克莫司或西羅莫司制劑的比較藥物動力學(xué)試驗(yàn)中，以相同劑量施用，本發(fā)明的含他克莫司、西羅莫司或其組合的組合物顯示出Cmax大于非納米顆粒他克莫司或西羅莫司制劑所顯示出的Cm収至少約50%、至少約100%、至少約200%、至少約300%、至少約400%、至少約500%、至少約600%、至少約700%、至少約800%、至少約900%、至少約1000%、至少約1100%、至少約1200%、至少約1300%、至少約1400%、至少約1500%、至少約1600%、至少約1700%、至少約1800%或至少約1900%。在又一個實(shí)施方案中，在與非納米顆粒他克莫司或西羅莫司制劑的比較藥物動力學(xué)試驗(yàn)中，以相同劑量施用，本發(fā)明的含他克莫司、西羅莫司或其組合的組合物顯示出AUC大于非納米顆粒他克莫司或西羅莫司制劑所顯示出的AUC至少約250/。、至少約50%、至少約75%、至少約100%、至少約125%、至少約150%、至少約175%、至少約200%、至少約225%、至少約250%、至少約275%、至少約300%、至少約350%、至少約400%、至少約450%、至少約500%、至少約550%、至少約600%、至少約750%、至少約700%、至少約750%、至少約800%、至少約850%、至少約900%、至少約950%、至少約1000%、至少約1050%、至少約1100%、至少約1150%或者至少約1200%。3.相對于禁食狀態(tài)，在進(jìn)食狀態(tài)下施用時本發(fā)明的含免疫抑制化合物的組合物的生物等效性本發(fā)明還包括含納米顆粒他克莫司、納米顆粒西羅莫司或其組合的組合物，其中在禁食狀態(tài)下對受試者施用該組合物生物等效于在進(jìn)食狀態(tài)下對受試者施用該組合物。相對于禁食狀態(tài)，在進(jìn)食狀態(tài)下施用時，含納米顆粒他克莫司、納米顆粒西羅莫司或其組合的組合物的吸收差異優(yōu)選地小于約35%、小于約30%、小于約25%、小于約20%、小于約15%、小于約10%、小于約5%、或小于約3%。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，本發(fā)明包括含納米顆粒他克莫司、納米顆粒西羅莫司或其組合的組合物，其中在禁食狀態(tài)下對受試者施用該組合物生物等效于在進(jìn)食狀態(tài)下對受試者施用該組合物，特別是正如由美國食品與藥物管理局和相應(yīng)的歐洲管理機(jī)構(gòu)(EMEA)所給出的Cmax和AUC指南所定義的。根據(jù)美國FDA指南，如果AUC和Cmax的90%置信區(qū)間(CI)處在0.80至1.25之間(就調(diào)節(jié)目的而言，Tmax測量與生物等效性不相關(guān))，則兩種產(chǎn)品或方法是生物等效的。根據(jù)歐洲EMEA指南，為了顯示出兩種化合物或施用狀況之間的生物等效性，AUC的90%的CI必須在0.80至1.25之間，而Cmax的90%的CI必須在0.70至1.43之間。4.本發(fā)明的免疫抑制組合物的溶解曲線本發(fā)明的含他克莫司、西羅莫司或其組合的組合物出乎意料地具有令人驚奇的溶解曲線。所施用的活性劑的快速溶解是優(yōu)選的，因?yàn)檩^快的溶解一般會導(dǎo)致更快地發(fā)生作用和更大的生物利用率。為了改進(jìn)含他克莫司、西羅莫司或其組合的溶解曲線和生物利用率，提高藥物的溶解使其能達(dá)到接近100%的水平是有用的。本發(fā)明的含他克莫司、西羅莫司或其組合的組合物優(yōu)選具有這樣的溶解曲線，其中在約5分鐘內(nèi)至少約20%的組合物被溶解。在本發(fā)明的其他實(shí)施方案中，至少約30%或至少約40%的含他克莫司、西羅莫司或其組合的組合物在約5分鐘內(nèi)溶解。在本發(fā)明的其它實(shí)施方案中，優(yōu)選至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%或至少約80%的含他克莫司、西羅莫司或其組合的組合物在約IO分鐘內(nèi)溶解。最后，在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，優(yōu)選至少約70%、至少約80%、至少約90%或至少約100%的含他克莫司、西羅莫司或其組合的組合物在約20分鐘內(nèi)溶解。溶解優(yōu)選在判別性介質(zhì)中測量。這樣一種溶解介質(zhì)將對兩種在胃液中具有很不同的溶解曲線的產(chǎn)品產(chǎn)生兩種很不相同的溶解曲線，即，該溶解介質(zhì)預(yù)測組合物的體內(nèi)溶解情況。示例性的溶解介質(zhì)是含0.025M表面活性劑十二烷基硫酸鈉的水介質(zhì)?？梢酝ㄟ^分光光度法測定所溶解的量。旋動葉片法(歐洲藥典)可用來測量溶解情況。5.在生物相關(guān)介質(zhì)中免疫抑制組合物的穩(wěn)定性本發(fā)明的含他克莫司、西羅莫司或其組合的組合物的另外的特點(diǎn)是當(dāng)分散在生物相關(guān)介質(zhì)中，所述組合物基本上保持納米顆粒粒度。生物相關(guān)介質(zhì)模仿體內(nèi)所存在的情況。由于本發(fā)明的納米顆粒活性劑組合物受益于活性劑的小粒度；如果在施用時，活性劑不基本上保持納米顆粒粒度的話，那么會形成"團(tuán)塊"或團(tuán)聚的活性劑顆粒。隨著這種團(tuán)聚顆粒的形成，劑型的生物利用率可能降低。優(yōu)選地，在生物相關(guān)介質(zhì)中分散后，本發(fā)明的組合物保持小于約2000nm的有效平均粒度。在本發(fā)明的其它實(shí)施方案中，本發(fā)明的再分散的他克莫司和/或西羅莫司顆粒的有效平均粒度小于約1900nm,小于約1800nm,小于約1700nm，小于約1600nm,小于約1500nm，小于約1400nm,小于約1300nm，小于約1200nm，小于約1100nm,小于約1000nm,小于約900nm，小于約800nm，小于約700nm,小于約650nm，小于約600nm，小于約550nm,小于約500nm，小于約450nm,小于約400nm,小于約350nm,小于約300nm,小于約250nm,小于約200nm,小于約150nm，小于約100nm，小于約75nm或小于約50nm,如通過光散射方法、顯微技術(shù)或其他合適方法測量的。適于測量有這種生物相關(guān)的水介質(zhì)可以是顯示出所要求的離子強(qiáng)度和pH的任何水介質(zhì)，所述的離子強(qiáng)度和pH構(gòu)成了介質(zhì)生物相關(guān)性的基礎(chǔ)。所要求的pH和離子強(qiáng)度是在人體中存在的生理情況的代表。這種生物相關(guān)的水介質(zhì)可以是例如顯示出所要求的pH值和離子強(qiáng)度的電解質(zhì)水溶液或任何鹽、酸或堿的水溶液或其組合。生物相關(guān)的pH是本領(lǐng)域眾所周知的。例如，在胃中，pH范圍是從略小于2(但一般大于1)直至4或5。在小腸中，pH可以為4-6。在結(jié)腸中，它可以是6-8。生物相關(guān)的離子強(qiáng)度也是本領(lǐng)域眾所周知的。禁食狀態(tài)胃液的離子強(qiáng)度為約0.1M,而禁食狀態(tài)腸液的離子強(qiáng)度為約0.14。例如見Lindahl等的"CharacterizationofFluidsfromtheStomachandProximalJejunuminMenandWomen,"Pharm.Res.,14(4):497-502(1997)。據(jù)信試驗(yàn)溶液的pH和離子強(qiáng)度比特定的化學(xué)內(nèi)容物更為關(guān)鍵。因此，合適的pH和離子強(qiáng)度值可以通過強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、鹽、單偶合或多偶合的酸-堿對(即，弱酸和該酸的相應(yīng)鹽)、單質(zhì)子和多質(zhì)子電解質(zhì)等的許多種組合得到。代表性的電解質(zhì)溶液可以是但不限于濃度約O.OOl-約O.lM的HCl溶液，和濃度約0.001-約0.1M的NaCl溶液，以及其混合物。例如，電解質(zhì)溶液可以是但不限于約O.IM或更稀的HC1，約0.01M或更稀的HC1,約0.001M或更稀的HC1,約0.1M或更稀的NaCl，約O.OIM或更稀的NaCl,約O.OOIM或更稀的NaCl，以及其混合物。在這些電解質(zhì)溶液中，0.01MHC1和/或0.1MNaCl最代表禁食人體生理?xiàng)l件，歸于近側(cè)胃腸道的pH和離子強(qiáng)度條件。0.001MHC1、0.01MHC1和0.1MHC1的電解質(zhì)濃度分別相應(yīng)于pH=3、pEH2和pH-l。例如，O.OIMHCI溶液模擬了胃中存在的典型的酸性條件。0.1M的NaCl溶液提供了在包括胃腸液在內(nèi)的整個人體中存在的離子強(qiáng)度條件的合理近似，不過高于0.1M的濃度可以用來^^莫擬人的胃腸道內(nèi)的進(jìn)食條件。顯示出所要求的pH值和離子強(qiáng)度的鹽、酸、堿或其組合的示范性溶液包括但不限于，磷酸/磷酸鹽+氯化鈉、氯化鉀和氯化4丐，乙酸/乙酸鹽+氯化鈉、氯化鉀和氯化鈣，碳酸/碳酸氫鹽+氯化鈉、氯化鉀和氯化釣，和檸檬酸/檸檬酸鹽+氯化鈉、氯化鉀和氯化4丐。再分散性可以用本領(lǐng)域已知的任何合適的方法檢測。參見例如美國專利6，375,986(SolidDoseNanoparticulateCompositionsComprisingaSynergisticCompositionofaPolymericSurfaceStabilizerandDioctylSodiumSulfosuccinate)的實(shí)施例部分。6.與其它活性劑聯(lián)合使用的免疫抑制組合物本發(fā)明的含他克莫司、西羅莫司或其組合的組合物可以另外含有一合物。本發(fā)明的組合物可以與這些其它活性劑共同配制，或是本發(fā)明組合物可以與所述活性劑一起共同施用或順序施用?？梢耘c他克莫司和/或西羅莫司共同施用或者共同配制的藥物的實(shí)例，包括但不限于環(huán)孢菌素、麥可酚酸、阿侖單抗、麥考酚酸嗎乙酯、皮質(zhì)類固醇、糖皮質(zhì)類固醇、多西環(huán)素、干擾素卩-lb、丙二腈酰胺FK778、石克唑嘌呤、Campath-IH、巴利昔單抗和曱氨蝶呤。D.組合物本發(fā)明提供了包含納米顆粒他克莫司、西羅莫司或其組合和至少一種表面穩(wěn)定劑的組合物。表面穩(wěn)定劑優(yōu)選吸附或締合于他克莫司或西羅莫司顆粒的表面。本文中有用的表面穩(wěn)定劑不與他克莫司或西羅莫司顆?；蛘咦陨戆l(fā)生化學(xué)反應(yīng)。優(yōu)選地，表面穩(wěn)定劑的各個分子基本上沒有分子間交聯(lián)鍵。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物可以包含兩種或多種表面穩(wěn)定劑。本發(fā)明還包括含他克莫司、西羅莫司或其組合以及一種或多種無毒生理學(xué)可接受的載體、助劑或媒介體(總稱為載體)的納米顆粒組合物。所述組合物可被配制成用于腸道外注射(例如靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下注射)、腹膜內(nèi)注射等。1.免疫抑制活性劑用于本發(fā)明可注射的劑型的示范性的免疫抑制活性劑是他克莫司和西羅莫司。他克莫司，也稱作FK-506或藤霉素，是一種23元的大環(huán)內(nèi)酯。如本文中使用的，術(shù)語"他克莫司"包括其類似物和鹽，并且可以是結(jié)晶相、無定形相、半結(jié)晶相、半無定形相或其混合物。他克莫司可能以一種基本上旋光純的對映體形式，或以對映體的混合物、外消旋物或其它形式存在。他克莫司的常規(guī)形式包含增溶劑，如Crem叩ho產(chǎn)，這是不希望的。西羅莫司可作為免疫抑制劑和抗真菌抗生素，它的用途描述在以下文獻(xiàn)中美國專利3,929,992、3,993,749和4,316,885以及比利時專利877,700。該化合物，僅微溶于水中，即20微克/mL,當(dāng)受潮時迅速水解。因?yàn)楫?dāng)遇到水介質(zhì)時西羅莫司非常不穩(wěn)定，所以已經(jīng)開發(fā)出特別的可注射制劑以便施用于患者，如歐洲專利EP041,795中所描述的那些。這種制劑往往是不希望的，因?yàn)橥ǔ７撬鋈軇┍憩F(xiàn)出有毒性的副作用。如本文中使用的，術(shù)語"西羅莫司"包括其類似物和鹽，并且可以為晶相、無定形相、半晶相、半無定形相或其混合物。西羅莫司可能以一種基本上旋光純的對映體的形式存在，或者以對映體的混合物、外消旋或其它形式存在。2.表面穩(wěn)定劑在本發(fā)明的含他克莫司、西羅莫司或其組合的可注射制劑中可以使用一種以上表面穩(wěn)定劑的組合。合適的表面穩(wěn)定劑包括但不限于已知的有機(jī)或無機(jī)藥物賦形劑。這些賦形劑包括各種聚合物、低分子量低聚物、天然產(chǎn)物和表面活性劑。表面穩(wěn)定劑包括非離子型、陰離子型、陽離子型、離子型和兩性離子型表面活性劑。一種示范性的用于可注射的納米顆粒他克莫司和/或納米顆粒西羅莫司制劑的表面穩(wěn)定劑是聚維酮聚合物。表面穩(wěn)定劑的代表性實(shí)例包括但是不局限于羥丙基甲基纖維素(現(xiàn)稱為"羥丙曱纖維素")、羥丙基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、十二烷基硫酸鈉、磺基琥珀酸二辛酯、明膠、酪蛋白、卵磷脂(磷脂)、葡聚糖、阿拉伯樹膠、膽固醇、黃蓍膠、硬脂酸、苯扎氯銨、硬脂酸鈣、單硬脂酸甘油酯、十六醇十八醇混合物、聚西托醇乳化蠟、失水山梨糖醇酯、聚氧乙烯烷基醚(例如，聚乙二醇醚如聚西托醇1000)、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯(例如，市售可得的Tweei^,例如，Tween20⑧和Tween80(ICISpecialityChemicals));聚乙二醇(例如，Carbowaxes3550⑧和934⑧(UmonCarbide))、聚氧乙烯硬脂酸酯、膠體二氧化硅、磷酸鹽/酯、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥乙基纖維素、鄰苯二曱酸羥丙曱纖維素、非晶纖維素、硅酸鋁鎂、三乙醇胺、聚乙烯醇(PVA)、4-(l,l,3,3-四甲基丁基)苯酚與環(huán)氧乙烷和甲醛的聚合物(亦稱泰洛沙泊、四丁酚醛和triton)、泊洛沙姆(例如，Pluronics68@和F108，其是環(huán)氧乙烷和環(huán)氧丙烷的嵌段共聚物)；poloxamines(例如，Tetromc908,亦稱Poloxamine908，它是由環(huán)氧丙烷和環(huán)氧乙烷順序加成到乙二胺而衍生形成的四官能嵌段共聚物(BASFWyandotteCorporation,Parsippany,N丄))；Tetronic1508(T-1508)(BASFWyandotteCorporation),TritonX-200⑧(一種烷基芳基聚醚磺酸酯，RohnandHaas);CrodestasF-ll(f(蔗糖硬脂酸酯和蔗糖二硬脂酸酯的混合物，CrodaInc.);對異壬基苯氧基聚(縮水甘油)，也稱作Olin-IOG吸或Surfactant10-G(OlinChemicals,Stamford,CT);CrodestasSL-40(Croda,Inc.);和SA90HCO(C18H37CH2(CON(CH3)-CH2(CHOH)4(CH2OH)2,EastmanKodakCo.);癸酰-N-甲基葡糖酰胺(glucamide);正癸基(-D國吡喃葡糖苷；正癸基(-D-吡喃麥芽糖苷；正十二烷基(-D-吡喃葡糖苷；正十二烷基(-D-麥芽糖苷；庚酰-N-曱基葡糖酰胺；正庚基-(-D-吡喃葡糖苷；正庚基(-D-硫代葡糖苷；正己基(-D-吡喃葡糖苷；壬酰-N-曱基葡糖酰胺；正壬酰(-D-吡喃葡糖苷；辛酰-N-曱基葡糖酰胺；正辛基-(-D-吡喃葡糖苦；辛基(-D-硫代吡喃葡糖苷；PEG-磷脂，PEG-膽固醇，PEG-膽固醇衍生物；PEG-維生素A，PEG-維生素E,溶菌酶，乙烯基吡咯烷酮和乙酸乙烯酯的無規(guī)共聚物等。有用的陽離子型表面穩(wěn)定劑的實(shí)例包括但不局限于聚合物、生物聚合物、多糖、纖維素質(zhì)(cellulosics)、藻酸鹽、磷脂和非聚合的化合物，諸如兩性離子型穩(wěn)定劑、聚-n-曱基吡啶鎮(zhèn)、氯化anthryul吡啶鐳、陽離子型磷脂、殼聚糖、聚賴氨酸、聚乙烯基咪唑、polybrene、溴化聚曱基丙烯酸曱酯三曱基溴化銨(PMMTMABr)、己基二苯乙酮基三曱基溴化銨(HDMAB)和聚乙烯吡咯烷酮-2-二曱氨基乙基異丁烯酸酯硫酸二甲酯。其他有用的陽離子型穩(wěn)定劑包括但不局限于，陽離子型脂質(zhì)、锍、鑄和季銨化合物，諸如硬脂基三甲基氯化銨、千基二(2-氯乙基)乙基溴化銨、椰油三曱基氯化銨或溴化銨、椰油曱基二羥乙基氯化銨或溴化銨、癸基三乙基氯化銨、癸基二曱基羥乙基氯化銨或溴化銨、(:12-15二曱基羥乙基氯化銨或溴化銨、椰油二曱基羥乙基氯化銨或溴化銨、十四烷基三甲基甲硫酸銨、月桂基二曱基千基氯化銨或溴化銨、月桂基二曱基(氧乙烯基)4氯化銨或溴化銨、N-烷基(dw8)二甲基芐基氯化銨、N-烷基(d"8)二甲基千基氯化銨、N-十四烷基二曱基芐基氯化銨一水合物、二曱基二癸基氯化銨、N-烷基和(C!W4)二甲基1-萘基甲基氯化銨、三曱基鹵化銨、烷基三曱基銨鹽和二烷基二曱基銨鹽、月桂基三甲基氯化銨、乙氧基化烷酰氨基烷基二烷基銨鹽和/或乙氧基化三烷基銨鹽、二烷基苯二烷基氯化銨、N-二癸基二甲基氯化銨、N-十四烷基二甲基千基氯化銨一水合物、N-烷基(d^4)二甲基1-萘基甲基氯化銨和十二烷基二曱基千基氯化銨、二烷基苯烷基氯化銨、月桂基三曱基氯化銨、烷基千基曱基氯化銨、烷基T基二曱基溴化銨、C12,C15,C17三甲基溴化銨、十二烷基芐基三乙基氯化銨、聚二烯丙基二曱基氯化銨(DADMAC)、二曱基氯化銨、烷基二甲基囟化銨、三(十六烷基)甲基氯化銨、癸基三甲基溴化銨、十二烷基三乙基溴化銨、十四烷基三曱基溴化銨、曱基三辛基氯化銨(ALIQUAT336)、POLYQUAT、四丁基溴化銨、節(jié)基三曱基溴化銨、膽石咸酯(諸如脂肪酸的膽石咸酯)、苯扎氯銨、司4立氯銨(stearalkoniumchloride)類化合物(諸如硬脂基三甲基氯化銨和二硬脂基二曱基氯化銨)、十六烷基溴化吡啶^t或氯化吡啶^t、季銨化的聚氧乙基烷基胺的卣化物鹽、MIRAPOL和ALKAQUAT(AlkarilChemicalCompany)、烷基吡啶錯鹽；胺，諸如烷基胺、二烷基胺、鏈烷醇胺、聚乙烯多胺、N,N-二烷基氨基烷基丙烯酸酯和乙烯基吡啶，胺鹽，諸如十二烷基胺乙酸鹽、十八烷基胺乙酸鹽、烷基吡啶鎮(zhèn)鹽和烷基咪唑錯鹽，和氧化胺；酰亞胺吡咯錯(imideazolinium)鹽；質(zhì)子化的季型丙烯酰胺；曱基化的季型聚合物如聚[二烯丙基二曱基氯化銨]和聚[N-甲基乙烯基氯化吡啶錯];和陽離子型瓜爾膠。這種示例性的陽離子型表面穩(wěn)定劑和其它有用的陽離子型表面穩(wěn)定劑描述于以下文獻(xiàn)中J.Cross和E.Singer,CationicSurfactants:AnalyticalandBiologicalEvaluation(MarcelDekker,1994);P.和D.Rubingh(》扁者)，CationicSurfactants:PhysicalChemistry(MarcelDekker,1991》禾口J.Richmond,CationicSurfactants:OrganicChemistry,(MarcelDekker,1990)。非聚合的表面穩(wěn)定劑是任何非聚合的化合物，如苯扎氯銨、碳4翁化合物、锜化合物、氧餘;化合物、卣餘;化合物、陽離子型有機(jī)金屬化合物、季磷化合物、吡啶未貧化合物、苯胺4貧化合物、銨化合物、羥基銨化合物、伯銨化合物、仲餒化合物、叔銨化合物和通式NRlR2R3R4(+)的季銨化合物。對于通式NR!R2R3R4(+)的化合物來說(i)Rl-R4都不是CH3;(ii)Rl-R4中的一個是CH3;(iii)Rl-R4中的三個是CH3;(iv)R1-R4全部都是CH3;(v)Rl-R4中的兩個是CH3，Rl-R4中的一個是C6H5CH2,且Rl-R4中的一個是7個或更少個碳原子的烷基鏈；(vi)Rl-R4中的兩個是CH3，Rl-R4中的一個是C6HsCH2，且Rl-R4中的一個是19個或更多個碳原子的烷基鏈；(vii)Rl-R4中的兩個是CH3，Rl-R4中的一個是基團(tuán)C6H5(CH2)n，其中n>l;(viii)Rl-R4中的兩個是CH3，Rl-R4中的一個是C6H5CH2，且Rl-R4中的一個含至少一個雜原子；(ix)R1-R4中的兩個是CH3，R1-R4中的一個是QH5CH2,且R1誦R4中的一個含至少一個卣素；(x)Rl-R4中的兩個是CH3，Rl-R4中的一個是C6H5CH2，且Rl-R4中的一個含至少一個環(huán)狀片段；(xi)Rl-R4中的兩個是CH3，Rl-R4中的一個是苯環(huán)；或(xii)Rl-R4中的兩個是CH3并且Rl-R4中的兩個是純粹的脂族片段。這些化合物包括但不限于二十二烷基千基二曱基氯化銨、氯化benzethonium、十六烷基氯化吡啶i貧、二十二烷基三甲基氯化銨、十二烷基千基二甲基氯化銨、十六烷基芐基二甲基氯化銨、十六烷基三曱基溴化銨、十六烷基三曱基氯化銨、十六烷基氫氟胺、氯化氯烯丙基六亞甲基四胺(Quaternium-15)、二硬脂基二甲基氯化銨(Quaternium-5)、十二烷基二甲基乙基芐基氯化按(Quaternium-14)、Quaternium-22、Quaternmm-26、Quaternium-18鋰蒙脫石、二曱氨乙基氯鹽酸鹽、半胱氨酸鹽酸鹽、二乙醇銨POE(10)油基醚磷酸鹽、二乙醇銨POE(3)油基醚磷酸鹽、牛脂基節(jié)基二甲基氯化銨、二曱基二(十八烷基)銨膨潤土、司拉氯銨、溴化杜滅芬、地那銨苯曱酸鹽、十四烷基千基二曱基氯化銨、十二烷基三甲基氯化銨、乙二胺二鹽酸鹽、鹽酸胍、鹽酸吡哆醇、鹽酸碘非他胺、鹽酸葡曱胺、甲千索氯銨、十四烷基三甲基溴化銨、油基三曱基氯化銨、Polyquaternmm-l、鹽酸普魯卡因、椰油基甜菜堿、硬脂基節(jié)基二甲基銨膨潤土、硬脂基千基二曱基銨鋰蒙脫石、十八烷基三羥基乙基丙二胺二氫氟酸鹽、牛脂基三曱基氯化銨和十六烷基三曱基溴化銨。這些表面穩(wěn)定劑的大多數(shù)是已知的藥物賦形劑，在TheAmericanPharmaceuticalAssociation和ThePharmaceuticalSocietyofGreatBritain聯(lián)合出版的HandbookofPharmaceuticalExcipients(ThePharmaceuticalPress,2000)中有詳細(xì)說明，特別S1入本文作為參考。聚維酮聚合物聚維酮聚合物是用于配制可注射的納米顆粒他克莫司和/或納米顆粒西羅莫司制劑的示范性的表面穩(wěn)定劑。聚維酮聚合物，亦稱"polyvidon(e)"、"povidonum"、"PVP"和"聚乙烯處咯烷酮"，以Kollidon(BASFCorp.)和Plasdone(ISPTechnologies,Inc.)的商品名銷售。它們是多分散的大分子，化學(xué)名稱為l-乙烯基(ethenyl)-2-吡咯烷酮聚合物和l-乙烯基(vinyl)-2-吡咯烷酮聚合物。聚維酮聚合物作為商業(yè)產(chǎn)品被制備成平均分子量從約10,000到約700,000道爾頓的一系列產(chǎn)品。要用作施用給哺乳動物的藥物化合物的表面改性劑，聚維酮聚合物的分子量必須小于約40,000道爾頓，因?yàn)榇笥?0,000的分子量將難以從體內(nèi)清除。聚維酮聚合物用例如Reppe方法制備，包括(l)利用Reppe丁二烯合成法，由乙炔和曱搭得到1,4-丁二醇；(2)在200。C將1，4-丁二醇于銅上脫氫，形成"丁內(nèi)酯；(3)使Y-丁內(nèi)酯與氨反應(yīng)，生成吡咯烷酮。隨后用乙炔處理，得到乙烯基吡咯烷酮單體。在H20和NH3存在下，通過加熱進(jìn)行聚合。參見TheMerckIndex,10thEdition,pp.7581(Merck&Co.,Rahway,NJ;1983)。分子i不f^r對于每種特定的市售可^的品級，所述分、;的分子量大約圍繞一平均值變化。因?yàn)殡y以直接確定聚合物的分子量，所以最常用的將不同分子量等級分類的方法是利用基于粘度測量值的K值。各種不同等級的聚維酮聚合物的K值代表平均分子量的函數(shù)，其得自粘度測量值，并且根據(jù)Fikentscher公式計(jì)算。分子量的重均值Mw是通過測量各個分子的重量的方法如光散射法而確定的。表1提供了幾種市售可得的聚維酮聚合物的分子量數(shù)據(jù)，所述聚維酮聚合物都是可溶的。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>*因?yàn)榉肿恿看笥?0,000道爾頓，此種聚維酮聚合物不宜用作腸道外施用(即，注射)的藥物化合物的表面穩(wěn)定劑。"Mv是粘均分子量，Mn是數(shù)均分子量，Mw是重均分子量。Mw和Mn通過光散射和超離心方法測定，Mv通過粘度測量來確定。根據(jù)表l中提供的數(shù)據(jù)，示范性的有用的市售可得的聚維酮聚合物包括但不限于PlasdoneC-15、Kollidon12PF、Kollidon17PF⑧和Kollidon25。3.納米顆粒他克莫司和西羅莫司的粒度如本文中使用的，才艮據(jù)如本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常^見粒度測量技術(shù)所測量的重均粒度來確定粒度。所述技術(shù)包括例如沉降場流動分級、光子相關(guān)譜法、光散射和盤式離心法。本發(fā)明的免疫抑制組合物包括他克莫司和/或西羅莫司納米顆粒，其有效平均粒度小于約2000nm(即2微米)。在本發(fā)明的其它實(shí)施方案中，他克莫司和西羅莫司納米顆粒的有效平均粒度小于約1900nm,小于約1800nm，小于約1700nm,小于約1600nm,小于約1500nm,小于約1400nm，小于約1300nm，小于約1200nm，小于約1100nm,小于約1000nm,小于約900nm,小于約800nm,小于約700nm,小于約650nm,小于約600nm,小于約550nm,小于約500nm,小于約450nm,小于約400nm,小于約350nm，小于約300nm，小于約250nm，小于約200nm,小于約150nm,小于約100nm,小于約75nm或小于約50nm,如通過光散射方法、顯微技術(shù)或其他合適方法測量的。"小于約2000nm的有效平均粒度"是指按重量計(jì)算，至少50%的所述他克莫司、西羅莫司或他克莫司和西羅莫司顆粒的粒度小于有效平均值，即小于約2000nm。如果"有效平均粒度"小于約1900nm,那么，當(dāng)通過如上所述的技術(shù)進(jìn)行測量時，至少約50%的他克莫司、西羅莫司或他克莫司和西羅莫司顆粒的大小為小于約1900nm。對于上述其它粒度，同樣如此。在其他的實(shí)施方案中，至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約95%或至少約99%的他克莫司、西羅莫司或他克莫司和西羅莫司顆粒的粒度小于有效平均值，即小于約2000nm、小于約1900nm、小于約1800nm等。在本發(fā)明中，納米顆粒他克莫司、西羅莫司或他克莫司和西羅莫司組合物的D50值是按重量計(jì)算，50%的他克莫司、西羅莫司或他克莫司和西羅莫司顆粒所低于的粒度。同樣地，D90是按重量計(jì)算，90%的他克莫司、西羅莫司或他克莫司和西羅莫司顆粒所低于的粒度。4.納米顆粒免疫抑制化合物和表面穩(wěn)定劑的濃度他克莫司、西羅莫司和其組合以及一種或多種表面穩(wěn)定劑的相對數(shù)量可以在很大范圍內(nèi)變化。單獨(dú)組分的最優(yōu)數(shù)量例如取決于所選的表面穩(wěn)定劑的物理和化學(xué)性質(zhì)，如親水親油平衡(HLB)、熔點(diǎn)和穩(wěn)定劑的水溶液的表面張力等等。優(yōu)選地，他克莫司、西羅莫司或其組合的濃度可以如下變化約99.5wt。/o-約0.001wt%,約95wt。/。-約0.1wt%，或約90wto/o-約0.5wt%,基于他克莫司、西羅莫司或其組合和至少一種表面穩(wěn)定劑的總重量，不包括其它賦形劑。從劑量和成本效率觀點(diǎn)來看，活性成分的較高的濃度通常是優(yōu)選的。優(yōu)選地，表面穩(wěn)定劑的濃度可以如下變化約0.5wtQ/。-約99.999wt%,約5.0wto/o-約99.9wt%,或約10^%-約99.5wt%,基于活性劑和至少一種表面穩(wěn)定劑的總干重，不包括其它賦形劑。5.其他的藥物賦形劑本發(fā)明的藥物組合物，根據(jù)給藥途徑和所希望的劑型，還可以含有一種或多種粘合劑、填充劑、潤滑劑、懸浮劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑、緩沖劑、潤濕劑、崩解劑、泡騰劑和其它賦形劑。這些賦形劑是本領(lǐng)域眾所周知的。填充劑的實(shí)例是乳糖一水合物、無水乳糖和各種淀粉；粘合劑的實(shí)例是各種纖維素和交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷酮、微晶纖維素如AvicelPH101和AvicelPHI02、微晶纖維素、和硅酸化微晶纖維素(ProSolvSMCCTM)。合適的潤滑劑，其包括對要被壓縮的粉末的流動性起作用的試劑，是膠體二氧化硅，例如Aerosil200、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂、硬脂酸4丐和硅膠。甜味劑的實(shí)例是任何天然或人工甜味劑，例如蔗糖、木糖醇、糖精鈉、環(huán)己氨磺酸鹽、天冬甜素和乙酰舒泛(acsulfame)。矯味劑的實(shí)例是Magnasweet(MAFCO商標(biāo))、泡泡糖香料和水果香料等。防腐劑的實(shí)例是山梨酸鉀、對羥基苯曱酸曱酯、對羥基苯甲酸丙酯、苯曱酸及其鹽、對羥基苯曱酸的其它酯如對羥基苯曱酸丁酯、醇如乙醇或苯甲醇、酚類化合物如苯酚、和季銨化合物如苯扎氯銨。合適的稀釋劑包括藥用可接受的惰性填料，例如微晶纖維素、乳糖、磷酸氫鈣、糖類和/或上述任何物質(zhì)的混合物。稀釋劑的實(shí)例包括微晶纖維素，例如AvicelPH101和AvicelPH102;乳糖，例如乳糖一水合物、無水乳糖和Pharmatose⑧DCL21;磷酸氫鈣，例如Emcompress;甘露糖醇；淀粉；山梨糖醇；蔗糖和葡萄糖。合適的崩解劑包括輕度交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷酮、玉蜀黍(corn)淀粉、馬鈴薯淀粉、玉米(maize)淀粉及改性淀粉，交聯(lián)的羧甲基纖維素鈉，交聚維酮(cross-povidone),淀粉羥乙酸鈉及其混合物。泡騰劑的實(shí)例是泡騰配對物，例如有機(jī)酸與碳酸鹽或碳酸氫鹽。合適的有機(jī)酸包括例如檸檬酸、酒石酸、蘋果酸、富馬酸、己二酸、丁二酸和藻酸以及酸酐和酸式鹽。合適的碳酸鹽和碳酸氫鹽包括例如碳酸鈉、碳酸氬鈉、碳酸鉀、碳酸氫鉀、碳酸鎂、甘氨酸碳酸鈉、L-賴氨酸碳酸鹽和精氨酸碳酸鹽?；蛘?，可以只存在泡騰配對物中的碳酸氫鈉組分。6.可注射的納米顆粒他克莫司制劑本發(fā)明提供了含他克莫司、西羅莫司或其組合的可注射的納米顆粒制劑，其在低的注射體積中包括高藥物濃度。示范性的制劑包括，基于w/w。/o計(jì)免疫抑制活性劑1.0-50%表面穩(wěn)定劑0.1-50%防腐劑0.05-0.25%pH調(diào)節(jié)劑pH為約6-約7水q.s.示范性的防腐劑包括對羥基苯甲酸曱酯(約0.18%,基于w/w。/。)、對羥基苯甲酸丙酯(約0.02%,基于w/w%)、苯酴(約0.5%,基于w/w%)、和芐醇(高至2。/。v/v)。示范性的pH調(diào)節(jié)劑是氫氧化鈉，示范性的液體載體是無菌注射水。其它有用的防腐劑、pH調(diào)節(jié)劑和液體載體是本領(lǐng)域眾所周知的。本發(fā)明中的活性他克莫司或西羅莫司可能以一種基本上旋光純的對映體的形式存在，或者以對映體的混合物、外消旋或其它形式存在。所述免疫抑制劑優(yōu)選存在于本發(fā)明的可注射的納米顆粒制劑中，其數(shù)量為約O.Olmg-約50mg,或者其數(shù)量為約0.05mg-約20mg。E.制備納米顆粒他克莫司和/或西羅莫司制劑的方法使用本領(lǐng)域中任何合適的已知方法如研磨、均化、沉淀或超臨界流體粒子生成技術(shù)，可以制備納米顆粒他克莫司和/或西羅莫司組合物。制備納米顆?；钚詣┙M合物的示范性的方法描述于美國專利5,145,684中。此外在以下文獻(xiàn)中描述了制備納米顆?；钚詣┙M合物的方法美國專利5,518,187(MethodofGrindingPharmaceuticalSubstances)、美國專利5,718,388(ContinuousMethodofGrindingPharmaceuticalSubstances)、美國專利5,862,999(MethodofGrindingPharmaceuticalSubstances)、美國專利5,665,33l(Co-MicroprecipitationofNanoparticulatePharmaceuticalAgentswithCrystalGrowthModifiers)、美國專利5,662,8S3(Co隱MicroprecipitationofNanoparticulatePharmaceuticalAgentswithCrystalGrowthModifiers)、美國專利5,560,932(MicroprecipitationofNanoparticulatePharmaceuticalAgents)、美國專利5,543,133(ProcessofPreparingX-RayContrastCompositionsContainingNanoparticles)、美國專利5,534,270(MethodofPreparingStableDrugNanoparticles)、美國專利5,510,118(ProcessofPreparingTherapeuticCompositionsContainingNanoparticles)禾口美國專利5,470,583(MethodofPreparingNanoparticleCompositionsContainingChargedPhospholipidstoReduceAggregation),其全部特別引入本文作為參考。所形成的納米顆粒他克莫司和/或西羅莫司組合物或分散體可能以固體、半固體或液體劑型制劑的形式使用，例如液體分散體、凝膠、氣溶膠、油膏、乳膏、控釋制劑、速熔制劑、冷凍干燥制劑、片劑、膠囊、延遲釋放制劑、延長釋放制劑、脈動釋放制劑、混合型立即釋放劑和控釋制劑等。在本發(fā)明中，可注射的劑型是優(yōu)選的。在本發(fā)明的另一方面中，提供了一種制備本發(fā)明的可注射的納米顆粒免疫抑制制劑的方法。所述方法包括以下步驟(l)在液體分散介質(zhì)中將期望劑量的他克莫司、西羅莫司或其組合的分散；和(2)用機(jī)械方法將他克莫司、西羅莫司或其組合的粒度減小到小于約2000nm的有效平均粒度。在活性劑的粒度減小之前、之中或之后，可以將表面穩(wěn)定劑添加到分散介質(zhì)中。在一種實(shí)施方案中，所述表面穩(wěn)定劑是分子量小于約40,000道爾頓的聚維酮聚合物。在粒度減小過程期間，可以將液體分散介質(zhì)維持在生理pH水平，例如約3.0-約8.0;在粒度減小過程期間，更優(yōu)選為約5.0-約7.5。在另一實(shí)施方案中，用于粒度減小過程的分散介質(zhì)是水性的。使用粒度減小方法，將免疫抑制劑的粒度減小到小于約2000nm的有效平均粒度。為他克莫司或西羅莫司免疫抑制劑的粒度減'j、而提供機(jī)械力的有效方法包括球磨研磨、介質(zhì)研磨和均化，例如利用Microfluidizer⑧(MicrofluidicsCorp.)。球磨研磨是一種使用研磨介質(zhì)、藥物、穩(wěn)定劑和液體的低能量研磨方法。材料被置于以最佳速度旋轉(zhuǎn)的研磨容器中，使得研磨介質(zhì)階式落下并且通過撞擊使得藥物粒度減小。所用的介質(zhì)必須具有高密度，因?yàn)橛糜诹６葴p小的能量是由重力和研磨介質(zhì)的質(zhì)量提供的。介質(zhì)研磨是高能量研磨方法。將藥物、穩(wěn)定劑和液體置于儲存器內(nèi)，在含有介質(zhì)和轉(zhuǎn)軸/葉輪的小室內(nèi)再循環(huán)。轉(zhuǎn)軸攪動介質(zhì)，其使藥物受到?jīng)_擊和剪切力作用，從而減小了藥物的粒度。均化是一種未使用研磨介質(zhì)的技術(shù)。藥物、穩(wěn)定劑和液體(或者藥物和液體，穩(wěn)定劑在粒度減小后加入)組成工藝物流，其被推進(jìn)到工藝段中，所述工藝段在Microflmdizer中被叫為互作用腔(InteractionChamber)。待處理的產(chǎn)物被引入泵中，然后推出。Microfluidizer⑧的起動閥將泵中的空氣排出。一旦泵中充滿產(chǎn)物，起動閥被關(guān)閉并且產(chǎn)物被推壓穿過互作用腔?；プ饔们坏膸缀谓Y(jié)構(gòu)產(chǎn)生強(qiáng)有力的剪切、沖擊和空化作用力，這是粒度減小的原因。具體地說，在互作用腔內(nèi)，受壓的產(chǎn)物被分成兩股物流并被加速到極高的速度。所形成的射流隨后在相互作用區(qū)域中彼此互射和碰撞。所形成的產(chǎn)物具有4艮細(xì)和均勻的粒度或液滴大小。Microfluidize^還提供了熱交換器以使產(chǎn)物冷卻。美國專利5,510,118提及了使用Microflmdize^的方法，該專利特意引入本文作為參考?？梢詫⒚庖咭种苿┨砑拥皆谄渲忻庖咭种苿┗旧喜蝗芙獾囊后w介質(zhì)，從而形成預(yù)混物。表面穩(wěn)定劑可以存在于預(yù)混物中，或者其可以在粒度減小后添加到藥物分散體中。通過使預(yù)混物經(jīng)歷機(jī)械設(shè)備而使分散體中的平均他克莫司或西羅莫司粒度減小到小于約2000nm,從而能夠直接使用該預(yù)混物。優(yōu)選的是當(dāng)使用球磨機(jī)來研磨時，直接使用預(yù)混物。或者，使用合適的攪動，例如Cowles型混合器，可以將免疫抑制劑和至少一種表面穩(wěn)定劑分散在液體介質(zhì)中，直至觀察到均質(zhì)的分散體，其中沒有肉眼可見的大凝聚體。優(yōu)選的是當(dāng)使用再循環(huán)介質(zhì)磨機(jī)進(jìn)行研磨時，預(yù)混物經(jīng)受這樣一種預(yù)研磨分散步驟。用于使他克莫司或西羅莫司粒度減小的機(jī)械設(shè)備可以采取分散研磨機(jī)的形式。合適的分散研磨機(jī)包括球磨機(jī)、立式磨機(jī)(attritormill)、振動磨機(jī)、介質(zhì)磨機(jī)諸如砂磨機(jī)和珠磨機(jī)。介質(zhì)磨機(jī)是優(yōu)選的，因?yàn)樾枰鄬^短的研磨時間來提供期望的粒度的減小。對于介質(zhì)磨機(jī)，預(yù)混物的表觀粘度優(yōu)選為約100-約1000厘泊，對于球磨研磨，預(yù)混物的表觀粘度優(yōu)選為約1直至約100厘泊。這樣的范圍往往提供了有效的粒度減小和介質(zhì)侵蝕之間的最佳平衡。研磨時間可以在^艮大范圍內(nèi)改變，并且這主要取決于特定的枳4成設(shè)備和所選的加工條件。對于球磨機(jī)，可能要求最多5天或更長一些的加工時間。或者，借助于高剪切介質(zhì)磨機(jī)，短于1天的加工時間是可能的(停留時間為l分鐘直至數(shù)小時)。在不明顯使免疫抑制劑分子降解的溫度下，可以使他克莫司或西羅莫司顆粒的粒度減小。通常優(yōu)選加工溫度為小于約30-小于約40。C。如果期望的話，可以借助傳統(tǒng)冷卻設(shè)備來冷卻加工設(shè)備。例如，考慮通過夾套或者將磨機(jī)腔室浸入水水中來控制溫度。通常，本發(fā)明的方法是在環(huán)境溫度和對于研磨方法來說安全和有效的加工壓力的條件下方便地進(jìn)行的。環(huán)境加工壓力是球磨機(jī)、立式磨機(jī)和振動磨機(jī)所典型使用的。研磨介質(zhì)粒度減小步驟的研磨介質(zhì)可選自剛性介質(zhì)，優(yōu)選球形或顆粒狀的，平均尺寸小于約3mm,更優(yōu)選小于約lmm。這種介質(zhì)令人想望地可以提供具有較短加工時間的本發(fā)明的顆粒并且使研磨設(shè)備有較小的磨損。不認(rèn)為研磨介質(zhì)的材料選擇是關(guān)鍵的。氧化鋯如用氧化鎂穩(wěn)定的95%ZrO、硅酸鋯、陶資、不銹鋼、二氧化鈦、氧化鋁、用釔穩(wěn)定的95%ZrO、玻璃研磨介質(zhì)和聚合物研磨介質(zhì)是示范性的研磨材料。研磨介質(zhì)可以包括顆粒，其優(yōu)選基本上是球狀的，例如珠粒，基本上由聚合樹脂或其它合適的材料組成。或者，研磨介質(zhì)可以包括具有粘附于其上的聚合樹脂涂層的芯。聚合樹脂的密度可以為約0.8-約3.0g/cm3。通常，合適的聚合樹脂在化學(xué)和物理上是惰性的，基本上不含金屬、溶劑和單體，并具有足夠的硬度和脆性，使其能避免在研磨期間碎裂或粉碎。合適的聚合樹脂包括交聯(lián)聚苯乙烯，如用二乙烯基苯交聯(lián)的聚笨乙烯；苯乙烯共聚物；聚碳酸酯；聚縮醛，例如Delri,(E丄duPontdeNemoursandCo.);氯乙烯聚合物和共聚物；聚氨酯；聚酰胺；聚(四氟乙烯)，例如Teflon(E.I.duPontdeNemoursandCo.)和其它含氟聚合物；高密度聚乙烯；聚丙烯；纖維素醚和酯，例如乙酸纖維素；聚羥基異丁烯酸酯；聚羥乙基丙烯酸酯；和含硅氧烷聚合物，例如聚硅氧烷等。聚合物可以是生物可降解的。示范性的可生物降解的聚合物包括聚(丙交酯)、聚(乙交酯)、丙交酯和乙交酯的共聚物、聚酐、聚(曱基丙烯酸羥乙酯)、聚(亞氨基碳酸酯)、聚(N-酰基羥脯氨酸)酯、聚(N-棕櫚酰羥脯氨酸)酯、乙烯-醋酸乙烯酯共聚物、聚(原酸酯)、聚(己內(nèi)酯)和聚(磷腈)。對于可生物降解的聚合物，介質(zhì)本身的污染可以有利地進(jìn)行體內(nèi)新陳代謝而變?yōu)樯锟山邮艿漠a(chǎn)物，其可以從身體中排出。研磨介質(zhì)優(yōu)選尺寸為約0.01-約3mm。對于精細(xì)研磨來說，研磨介質(zhì)的尺寸優(yōu)選地為約0.02-約2mm,更優(yōu)選地為約0.03-約lmm。在優(yōu)選的研磨方法中，連續(xù)地制造顆粒。這種方法包括將活性的他克莫司或西羅莫司連續(xù)加入到研磨室中，使所述化合物與研磨介質(zhì)接觸，同時在研磨室內(nèi)使粒度減小，并從研磨室中連續(xù)取出活性納米顆粒。在二次加工中利用常規(guī)的分離技術(shù)，例如利用簡單過濾，經(jīng)過篩網(wǎng)過濾器或?yàn)V網(wǎng)篩分等，將研磨介質(zhì)與研磨過的納米顆粒他克莫司或西羅莫司分離。也可以使用其它的分離技術(shù)例如離心。無菌產(chǎn)品制造可注射的組合物的發(fā)展要求制造無菌產(chǎn)品。本發(fā)明的制造方法與用于無菌混懸液的典型的已知制造方法類似。典型的無菌混懸液的制造工藝流程圖如下(介質(zhì)調(diào)節(jié))丄混配丄粒度減小丄裝瓶(冷凍干燥)和/或(末端殺菌)如括號內(nèi)任選步驟所示，一些加工取決于粒度減小的方法和/或殺菌的方法。例如，對于不使用介質(zhì)的研磨方法，不需要介質(zhì)調(diào)節(jié)。如果末端殺菌不是可行的，由于化學(xué)和/或物理不穩(wěn)定性造成的，則可以使用無菌力口工。F.治療方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明的又一個方面提供了一種使用本發(fā)明的可注射的納米顆粒官排斥或治療牛皮癬或其他免疫性疾病。所述方法包括以下步驟將本發(fā)明的治療有效量的可注射的納米顆粒他克莫司或西羅莫司制劑施用于受試者以便在患者內(nèi)形成皮下或肌內(nèi)貯點(diǎn)。隨著時間，所述貯點(diǎn)緩慢地釋放活性物質(zhì)而向同種異體器官接受者提供長期治療或者治療牛皮癬或其他免疫性疾病。他克莫司或西羅莫司的貯點(diǎn)制劑可以提供免疫抑制治療長達(dá)l年，如果要求這樣的話。在本發(fā)明的其它實(shí)施方案中，可注射的貯點(diǎn)納米顆粒他克莫司、西羅莫司或其組合組合物提供了藥物的治療水平達(dá)高達(dá)約1星期、高達(dá)約2星期、高達(dá)約3星期、高達(dá)約4星期、高達(dá)約5星期、高達(dá)約6星期、高達(dá)約7星期、高達(dá)約8星期、高達(dá)約9星期、高達(dá)約10星期、高達(dá)約11星期、高達(dá)約12星期、高達(dá)約1月、高達(dá)約2月、高達(dá)約3月、高達(dá)約4月、高達(dá)約5月、高達(dá)約6月、高達(dá)約7月、高達(dá)約8月、高達(dá)約9月、高達(dá)約10月、高達(dá)約11月或高達(dá)約1年。本發(fā)明特別有益的特點(diǎn)是本發(fā)明的可注射的納米顆粒他克莫司、西羅莫司或他克莫司和西羅莫司制劑可以被注射到患者體內(nèi)成為貯點(diǎn)并且消除了使用聚氧乙烯(60)氬化蓖麻油(HCO-60)和/或聚山梨酯諸如聚山梨酯80作為增溶劑的需要。另外，本發(fā)明的可注射制劑可以在貯點(diǎn)輸送系統(tǒng)中提供高濃度的他克莫司、西羅莫司或其組合以便實(shí)現(xiàn)長期治療效果。本領(lǐng)域普通技術(shù)將會理解的是他克莫司、西羅莫司或其組合的有效量可以憑經(jīng)驗(yàn)確定并且能夠以純的形式使用，其中，所述形式以藥用可接受的鹽、酯或前體藥物形式存在。因此，所選的劑量水平取決于期望的治療效果、施用途徑、所施用的他克莫司、西羅莫司或其組合的效力、期望的治療持續(xù)時間以及其它因素。劑量單元組合物可以含有其約量(submultiples)的這些數(shù)量，所述約量可用來構(gòu)成日劑量。然而應(yīng)該理解，對于任何特定的患者，具體的劑量水平將取決于多種因素要實(shí)現(xiàn)的細(xì)胞或生理響應(yīng)的類型和程度；使用的具體作用劑或組合物的活性；使用的具體作用劑或組合物；患者的年齡、體重、一般健康狀況、性別和飲食；施用時間、施用途徑和藥物的排泄速度；治療的持續(xù)時間；與具體作用劑聯(lián)合或同時使用的藥物；以及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中熟知的類似因素。sj^給出以下實(shí)施例用以說明本發(fā)明。然而應(yīng)該理解，本發(fā)明的精神和范圍不限于這些實(shí)施例中描述的具體條件或細(xì)節(jié)，而只應(yīng)受權(quán)利要求的范圍的限制。本文中給出的所有參考文獻(xiàn)，包括美國專利，都特別引入作為參考。實(shí)施例實(shí)施例1司制劑。圖1顯示了未研磨的他克莫司的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的100X光學(xué)顯微照片。結(jié)合有2。/。(w/w)聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K29/32和0.05。/。(w/w)磺基琥珀酸二辛酯(DOSS)的10。/0(w/w)他克莫司(CamidaLLC)水分散體在NanoMillO.Ol(NanoMillSystems,KingofPrussia,PA;參見例如美國專利6,431,478)的10ml研磨室中與500微米的PolyMil產(chǎn)研磨介質(zhì)(DowChemical,89%介質(zhì)裝載量)一起研磨。將混合物在2500rpm的速度下研磨60分鐘。研磨后，在去離子的蒸餾水中使用HoribaLA910粒度分析器測量研磨后的他克莫司顆粒的粒度。初始平均的研磨后的他克莫司的粒度為192nm,D50為177nm，D90為278nm,如表1所示。圖2顯示了研磨后的他克莫司的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的100X光學(xué)顯微照片。在〈15。C下冷藏l周后，在蒸餾水中的第二次測量中，平均他克莫司粒度是245nm，D50是219nm,D卯是374nm。圖3顯示了冷藏1周后的研磨后的他克莫司的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的IOOX光學(xué)顯微照片。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>結(jié)果表明成功地制備了穩(wěn)定的納米顆粒他克莫司制劑，因?yàn)榈玫降钠骄６葹?92nm,并且儲存后觀察到極小的粒度增加。實(shí)施例2該實(shí)施例的目的是制備適于作為可注射的劑型的納米顆粒他克莫司制劑。結(jié)合有2%PVPK12和0.15%脫氧膽酸鈉的10。/。(w/w)他克莫司(CamidaLLC)水分散體在NanoMillO.Ol(NanoMillSystems,KingofPrussia,PA;參見例如美國專利6,431,478)的10ml研磨室中與500微米的PolyMill⑧研磨介質(zhì)(DowChemical,89%介質(zhì)裝載量)一起研磨。將混合物在2500rpm的速度下研磨150分鐘。研磨后，在去離子的蒸餾水中使用HonbaLA910粒度分析器測量研磨后的他克莫司顆粒的粒度。平均的研磨后的他克莫司的粒度為329nm,D50為303nm,D90為466nm。圖4顯示了研磨后的他克莫司的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的100X光學(xué)顯微照片。結(jié)果表明成功地制備了穩(wěn)定的納米顆粒他克莫司制劑，因?yàn)榈玫降钠骄６葹?29nm。實(shí)施例3該實(shí)施例的目的是制備適于作為可注射的劑型的納米顆粒他克莫司制劑。結(jié)合有3%(w/w)PluronicS630和0.05%(w/w)DOSS的20。/。(w/w)他克莫司(CamidaLLC)水分散體在NanoMillO.Ol(NanoMillSystems,KingofPrussia,PA;參見例如美國專利6,431,478)的10ml研磨室中與500微米的PolyMill⑧研磨介質(zhì)(DowChemical,89%介質(zhì)裝載量)一起研磨。將混合物在2500rpm的速度下研磨60分鐘。圖5中顯示了研磨后的他克莫司的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的IOOX光學(xué)顯微照片。研磨后，在去離子的蒸餾水中使用HoribaLA910粒度分析器測量研磨后的他克莫司顆粒的粒度。初始平均的研磨后的他克莫司的粒度為171nm,D50為163nm，D90為230nm,如以下表2所示。在〈15。C下冷藏1周后，在蒸餾水中的第二次測量中，平均他克莫司粒度是194nm,D50是180nm,D90是279nm。圖6中顯示了在冷藏貯存一周后的研磨后的他克莫司的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的IOOX光學(xué)顯微照片。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>結(jié)果表明成功地制備了穩(wěn)定的納米顆粒他克莫司制劑，因?yàn)榈玫降钠骄６葹?71nm,并且儲存后觀察到極小的粒度增加。實(shí)施例4該實(shí)施例的目的是制備適于作為可注射的劑型的納米顆粒他克莫司制劑。結(jié)合有2。/。羥丙基纖維素(HPC-SL)和0.1%(w/w)DOSS的10%(w/w)他克莫司(CamidaLLC)水分散體在NanoMillO.Ol(NanoMillSystems,KingofPrussia,PA;參見例如美國專利6,431,478)的10ml研磨室中與500微米的PolyMill⑧研磨介質(zhì)(DowChemical,89%介質(zhì)裝載量)一起研磨。將混合物在2500rpm的速度下研磨150分鐘。圖7中顯示了研磨后的他克莫司的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的IOOX光學(xué)顯微照片。研磨后，在去離子的蒸餾水中使用HoribaLA910粒度分析器測量研磨后的他克莫司顆粒的粒度。平均的研磨后的他克莫司的粒度為389nm,D50為328nm,D90為614nm。結(jié)果表明成功地制備了穩(wěn)定的納米顆粒他克莫司制劑，因?yàn)榈玫降钠骄６葹?89nm。實(shí)施例5該實(shí)施例的目的是制備適于作為可注射的劑型的納米顆粒他克莫司制劑。結(jié)合有l(wèi)%(w/w)HPC-SL和0.15%(w/w)DOSS的5y。(w/w)他克莫司(CamidaLLC)水分散體在NanoMill0.01(NanoMillSystems,KingofPrussia,PA;參見例如美國專利6,431,478)的10ml研磨室中與500微米的PolyMill⑧研磨介質(zhì)(DowChemical,89%介質(zhì)裝載量)一起研磨。將混合物在5500rpm的速度下研磨90分鐘。圖8中顯示了研磨后的他克莫司的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的IOOX光學(xué)顯微照片。研磨后，在去離子的蒸餾水中使用HoribaLA910粒度分析器測量研磨后的他克莫司顆粒的粒度。初始平均的研磨后的他克莫司的粒度為169nm,D50為160nm,D90為225nm，如以下表3所示。在〈15。C下冷藏12天后，在蒸鎦水中的第二次測量中，平均他克莫司粒度是155nm，D50是138nm,D90是216nm。圖9中顯示了研磨后的他克莫司在冷藏貯存12天后的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的IOOX光學(xué)顯微照片。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>結(jié)果表明成功地制備了穩(wěn)定的納米顆粒他克莫司制劑，因?yàn)榈玫降钠骄６葹?69nm，并且儲存后觀察到極小的粒度變化。實(shí)施例6該實(shí)施例的目的是制備適于作為可注射的劑型的納米顆粒他克莫司制劑。結(jié)合有P/。(w/w)HPC-SL和0.1。/。(w/w)脫氧膽酸鈉的5。/。(w/w)他克莫司(CamidaLLC)水分散體在NanoMillO.Ol(NanoMillSystems,KingofPrussia,PA;參見例如美國專利6,431,478)的10ml研磨室中與500微米的PolyMill⑧研磨介質(zhì)(DowChemical,890/0介質(zhì)裝載量)一起研磨。將混合物在5500rpm的速度下研磨75分鐘。圖10中顯示了研磨后的他克莫司的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的100X光學(xué)顯微照片。研磨后，在去離子的蒸餾水中使用HoribaLA910粒度分析器測量研磨后的他克莫司顆粒的粒度。初始平均的研磨后的他克莫司的粒度為1780nm，D50為220nm，D90為6665nm,如以下表4所示。在〈15。C下冷藏12天后，在蒸餾水中的第二次測量中，平均他克莫司粒度是65100nm,D50是31252nm,D90是175813nm。圖ll中顯示了研磨后的他克莫司在冷藏貯存12天后的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的IOOX光學(xué)顯微照片。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>實(shí)施例7該實(shí)施例的目的是制備適于作為可注射的劑型的納米顆粒他克莫司制劑。結(jié)合有2。/0(w/w)羥丙基曱基纖維素(HPMC)和0.05%(w/w)DOSS的100/。(w/w)他克莫司(CamidaLLC)水分散體在NanoMillO.Ol(NanoMillSystems,KingofPrussia,PA;參見例如美國專利6,431,478)的10ml研磨室中與500微米的PolyMill⑧研磨介質(zhì)(DowChemical,89%介質(zhì)裝載量)一起研磨。將混合物在2500rpm的速度下研磨60分鐘。圖12中顯示了研磨后的他克莫司的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的100X光學(xué)顯微照片。研磨后，在去離子的蒸餾水中使用HoribaLA910粒度分析器測量研磨后的他克莫司顆粒的粒度。初始平均的研磨后的他克莫司的粒度為215nm,D50為196nm,D90為311nm，如以下表5所示。在〈15。C下冷藏l周后，在蒸餾水中的第二次測量中，平均他克莫司粒度是227nm，D50是206nm,D90是337nm。圖13中顯示了在冷藏貯存一周后的研磨后的他克莫司的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的IOOX光學(xué)顯微照片。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>結(jié)果表明成功地制備了穩(wěn)定的納米顆粒他克莫司制劑，因?yàn)榈玫降钠骄６葹?15nm,并且儲存后觀察到極小的粒度增加。實(shí)施例8該實(shí)施例的目的是制備適于作為可注射的劑型的納米顆粒他克莫司制劑。10。/0(w/w)他克莫司(CamidaLLC)和2%(w/w)PluronicF108的水分散體在NanoMillO.Ol(NanoMillSystems,KingofPrussia,PA;參見例如美國專利6,431,478)的10ml研磨室中與500微米的PolyMil產(chǎn)研磨介質(zhì)(DowChemical,89。/。介質(zhì)裝載量)一起研磨。將混合物在2500rpm的速度下研磨60分鐘。圖14中顯示了研磨后的他克莫司的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的100X光學(xué)顯微照片。研磨后，在去離子的蒸餾水中使用HoribaLA910粒度分析器測量研磨后的他克莫司顆粒的粒度。初始平均的研磨后的他克莫司的粒度為237nm,D50為212nm，D90為355nm,如以下表6所示。在〈15。C下冷藏l周后，在蒸餾水中的第二次測量中，平均他克莫司粒度是332nm,D50是306nm,D90是467nm。圖15中顯示了在冷藏貯存一周后的研磨后的他克莫司的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的IOOX光學(xué)顯微照片。<table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>結(jié)果表明成功地制備了穩(wěn)定的納米顆粒他克莫司制劑，因?yàn)榈玫降钠骄６葹?37nm，并且儲存后觀察到極小的粒度增加。實(shí)施例9該實(shí)施例的目的是制備適于作為可注射的劑型的納米顆粒他克莫司制劑。K)o/o(w/w)他克莫司(CamidaLLC)和2%(w/w)Tween80的水分散體在NanoMillO.Ol(NanoMillSystems,KingofPrussia,PA;參見例如美國專利6,431,478)的10ml研磨室中與500微米的PolyMil產(chǎn)研磨介質(zhì)(DowChemical,89。/。介質(zhì)裝載量)一起研磨。將混合物在2500rpm的速度下研磨60分鐘。圖16中顯示了研磨后的他克莫司的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的100X光學(xué)顯微照片。研磨后，在去離子的蒸餾水中使用HoiibaLA910粒度分析器測量研磨后的他克莫司顆粒的粒度。初始平均的研磨后的他克莫司的粒度為208nm,D50為191nm,D90為298nm,如以下表7所示。在〈15。C下冷藏l周后，在蒸餾水中的第二次測量中，平均他克莫司粒度是406nm,D50是348nm，D90是658nm。圖17中顯示了在冷藏貯存一周后的研磨后的他克莫司的采用相位光學(xué)技術(shù)拍攝的100X光學(xué)顯微照片。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>結(jié)果表明這種制劑可能不是優(yōu)選的，因?yàn)榇鎯周后，他克莫司粒度幾乎加倍。然而，粒度仍在小于2微米的優(yōu)選尺寸內(nèi)。實(shí)施例10該實(shí)施例的目的是描述含納米顆粒他克莫司和西羅莫司的可注射的劑型。通過將實(shí)施例1-5或7-9中所述的任何納米顆粒他克莫司制劑與納米顆粒西羅莫司組合物結(jié)合可以制備含納米顆粒他克莫司和納米顆粒西羅莫司的可注射的組合物。如US20030054042(Stabilizationofchemicalcompoundsusingnanoparticulateformulations)戶斤述，可以制備纟內(nèi)米顆粒西羅莫司組合物。承承**對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，顯而易見的是在不背離本發(fā)明的精神和范圍的條件下，可以在本發(fā)明的方法和組合物中進(jìn)行許多改變和變化。因而，本發(fā)明意在涵蓋本發(fā)明的改變和變化，前提是它們落入所附權(quán)利要求以及其等同物的范圍內(nèi)。權(quán)利要求1.一種可注射的納米顆粒制劑，其包含(a)有效平均粒度小于約2000nm的他克莫司顆粒；和(b)至少一種表面穩(wěn)定劑。2.權(quán)利要求1的組合物，還包括有效平均粒度小于約2000nm的西羅莫司顆粒和表面穩(wěn)定劑，其中西羅莫司表面穩(wěn)定劑可以和他克莫司表面穩(wěn)定劑相同或不同。3.權(quán)利要求1或2的組合物，其中他克莫司選自晶相、無定形相、半晶相、半無定形相和其混合物。4.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的組合物，其中納米顆粒他克莫司顆粒的有效平均粒度選自小于約1900nm,小于約1800nm,小于約1700nm,小于約1600跳小于約1500nm，小于約1400nm,小于約1300nm,小于約1200nm,小于約1100nm,小于約1000nm,小于約900nm,小于約800nm,小于約700nm,小于約650nm,小于約600nm,小于約550nm,小于約500nm，小于約450nm,小于約400nm,小于約350nm,小于約300nm,小于約250nm,小于約200nm,小于約150nm，小于約100nm，小于約75nm和小于約50nm。5.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的組合物，其中當(dāng)注射給病人時，形成皮下或肌內(nèi)貯點(diǎn)以便長期免疫抑制劑釋放。6.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的組合物，其中該組合物還包含一種或多種藥用可接受的賦形劑、載體或者其組合。7.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的組合物，其中至少一種表面穩(wěn)定劑的含量選自以下約0.5wto/o-約99.999wt%,約5.0wt。/o-約99.9wt。/。和約10wt。/。-約99.5wt%,基于他克莫司和至少一種表面穩(wěn)定劑的總干重，不包括其它賦形劑。8.權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的組合物，其中他克莫司的含量選自以下約99.5wt。/o-約0.001wt%,約95wt%4々0.1wt%,和約90\^%國約0.5wt%,基于他克莫司和至少一種表面穩(wěn)定劑的總重量，不包括其它賦形劑。9.權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的組合物，其包含至少兩種表面穩(wěn)定劑。10.權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的組合物,其中表面穩(wěn)定劑選自陰離子表面穩(wěn)定劑、陽離子表面穩(wěn)定劑、兩性離子表面穩(wěn)定劑、非離子表面穩(wěn)定劑和離子表面穩(wěn)定劑。11.權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的組合物，其中至少一種表面穩(wěn)定劑選自十六烷基氯化吡啶東t、明膠、酪蛋白、磷脂、葡聚糖、甘油、阿拉伯樹膠、膽固醇、黃蓍膠、硬脂酸、苯扎氯銨、硬脂酸釣、單硬脂酸甘油酯、十六醇十八醇混合物、聚西托醇乳化蠟、失水山梨糖醇酯、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯、聚乙二醇、十二烷基三曱基溴化銨、聚氧乙烯硬脂酸酯、膠體二氧化硅、磷酸鹽/酯、十二烷基硫酸鈉、羧甲基纖維素鈣、羥丙基纖維素、羥丙曱纖維素、羧甲基纖維素鈉、曱基纖維素、羥乙基纖維素、鄰苯二甲酸羥丙甲纖維素、非晶纖維素、硅酸鋁鎂、三乙醇胺、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、4-(l,l，3，3-四曱基丁基)苯酚與環(huán)氧乙烷和曱醛的聚合物、泊洛沙姆；poloxamines、帶電的磷脂、磺基琥珀酸二辛酯、石黃基琥珀酸鈉二烷基酯、十二烷基硫酸鈉、烷基芳基聚醚磺酸酯、蔗糖硬脂酸酯和嚴(yán)糖二硬脂酸酯的混合物、對異壬基苯氧基聚(縮水甘油)、癸酰-N-甲基葡糖酰胺；正癸基(3-D-吡喃葡糖苷；正癸基P-D-吡喃麥芽糖苷；正十二烷基卩-D-吡喃葡糖苷；正十二烷基(3-D-麥芽糖苷；庚酰-N-曱基葡糖酰胺；正庚基-P-D-p比喃葡糖苷；正庚基卩-D-硫代葡糖苷；正己基(3-D-吡喃葡糖苷；壬酰-N-甲基葡糖酰胺；正壬基P-D-吡喃葡糖苷；辛酰-N-甲基葡糖酰胺；正辛基-(3-D-吡喃葡糖苷；辛基(3-D-硫代吡喃葡糖苷；溶菌酶、PEG-磷脂、PEG-膽固醇、PEG-膽固醇衍生物、PEG-維生素A、PEG-維生素E、乙酸乙烯酯與乙烯基吡咯烷酮的無規(guī)共聚物、陽離子型聚合物、陽離子型生物聚合物、陽離子型多糖、陽離子型纖維素質(zhì)、陽離子型藻酸鹽、陽離子型非聚合化合物、陽離子型磷脂、陽離子型脂質(zhì)、聚甲基丙烯酸甲酯三甲基溴化銨、锍化合物、聚乙烯吡咯烷酮-2-二甲氨基乙基異丁烯酸酯硫酸二甲酯、十六烷基三甲基溴化銨、錛化合物、季銨化合物、千基二(2-氯乙基)乙基溴化銨、椰油三甲基氯化銨、椰油三甲基溴化銨、椰油甲基二羥乙基氯化銨、椰油曱基二羥乙基溴化銨、癸基三乙基氯化銨、癸基二甲基羥乙基氯化銨、癸基二甲基羥乙基氯化溴化銨、C12_15二甲基羥乙基氯化銨、C12、15二甲基羥乙基氯化溴化銨、椰油二甲基羥乙基氯化銨、椰油二甲基羥乙基溴化銨、十四烷基三甲基甲硫酸銨、月桂基二甲基千基氯化銨、月桂基二曱基千基溴化銨、月桂基二甲基(氧乙烯基)4氯化銨、月桂基二曱基(氧乙烯基)4溴化銨、N-烷基(d^8)二甲基千基氯化銨、N-烷基(C^8)二甲基節(jié)基氯化銨、N-十四烷基二甲基芐基氯化銨一水合物、二曱基二癸基氯化銨、N-烷基和(d^4)二曱基1-萘基曱基氯化銨、三曱基卣化銨、烷基三曱基銨鹽、二烷基二曱基銨鹽、月桂基三甲基氯化銨、乙氧基化烷酰氨基烷基二烷基銨鹽、乙氧基化三烷基銨鹽、二烷基苯二烷基氯化銨、N-二癸基二甲基氯化銨、N-十四烷基二甲基節(jié)基氯化銨一水合物、N-烷基(C^4)二甲基1-萘基甲基氯化銨、十二烷基二曱基節(jié)基氯化銨、二烷基苯烷基氯化銨、月桂基三曱基氯化銨、烷基千基甲基氯化銨、烷基芐基二甲基溴化銨、Cu三甲基溴化銨、ds三甲基溴化銨、Cn三甲基溴化銨、十二烷基千基三乙基氯化銨、聚二烯丙基二曱基氯化銨(DADMAC)、二甲基氯化銨、烷基二甲基卣化銨、三(十六烷基)甲基氯化銨、癸基三曱基溴化銨、十二烷基三乙基溴化銨、十四烷基三曱基溴化銨、曱基三辛基氯化銨、POLYQUAT10、四丁基溴化銨、芐基三曱基溴化銨、膽堿酯、苯扎氯銨、司拉氯銨化合物、十六烷基溴化吡啶錯、十六烷基氯化吡啶餘;、季銨化的聚氧乙基烷基胺的卣化物鹽、MIRAPOL、ALKAQUAT、烷基吡啶4翁鹽；胺、胺鹽、氧化胺、酰亞胺吡咯錯(imideazolinmm)鹽、質(zhì)子化的季型丙烯酰胺、甲基化的季型聚合物和陽離子型瓜爾膠。12.權(quán)利要求l-ll中任一項(xiàng)的組合物，其包含作為表面穩(wěn)定劑的聚維酮聚合物，該聚合物的分子量為約40000道爾頓或更少。13.權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的組合物，還包含一種或多種非他克莫司或者非西羅莫司活性劑。14.權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)的組合物，其中該組合物重新分散在生物相關(guān)介質(zhì)中，使得他克莫司顆粒的有效平均粒度選自以下小于約2微米，小于約1900跳小于約1800nm,小于約1700nm,小于約1600nm，小于約1500nm,小于約1400mn,小于約1300nm,小于約1200nm，小于約1100nm，小于約1000nm,小于約900nm，小于約800nm，小于約700nm,小于約650nm,小于約600nm,小于約550nm,小于約500nm,小于約450nm，小于約400nm,小于約350nm,小于約300nm,小于約250nm,小于約200nm,小于約150nm,小于約100nm,小于約75nm和小于約50nm。15.權(quán)利要求14的組合物，其中生物相關(guān)介質(zhì)選自水、電解質(zhì)水溶液、鹽的水溶液、酸的水溶液、石威的水溶液和其組合。16.權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)的組合物，其中以相同劑量施用，當(dāng)對施用后的哺乳動物受試者的血漿進(jìn)行分析時，所述他克莫司的Tmax小于非納米顆粒他克莫司的Tmax。17.權(quán)利要求16的組合物，其中(a)以相同劑量施用，所述T咖x選自不大于非納米顆粒他克莫司制劑所顯示的Tmax的約90%、約80%、約70%、約60%、約50%、約30%、約25%、約20%、約15%、約10%和約5%;(b)在施用于禁食受試者后，該組合物顯示出選自以下的Tmax:小于約6小時，小于約5小時，小于約4小時，小于約3小時，小于約2小時，小于約1小時和小于約30分鐘；或者(c)(a)和(b)的組合。18.權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)的組合物，其中以相同劑量施用，當(dāng)對施用后的哺乳動物受試者的血漿進(jìn)行分析時，所述他克莫司的Cmax大于非納米顆粒他克莫司制劑的Cmax。19.權(quán)利要求18的組合物，其中以相同劑量施用，所述Cmax選自大于非納米顆粒他克莫司制劑所顯示的Cmax至少約50%、至少約100%、至少約200%、至少約300%、至少約400%、至少約500%、至少約600%、至少約700%、至少約800%、至少約900%、至少約1000%、至少約1100%、至少約1200%、至少約1300%、至少約1400%、至少約1500%、至少約1600%、至少約1700%、至少約1800%或者至少約1900%。20.權(quán)利要求1-19中任一項(xiàng)的組合物，其中以相同劑量施用，當(dāng)對施用后的哺乳動物受試者的血漿進(jìn)行分析時，所述他克莫司的AUC大于非納米顆粒他克莫司制劑的AUC。21.權(quán)利要求20的組合物，其中以相同劑量施用，所述AUC選自大于所述免疫抑制劑的非納米顆粒制劑所顯示的AUC至少約25%、至少約50%、至少約75%、至少約100%、至少約125°/。、至少約150%、至少約175%、至少約200%、至少約225%、至少約250%、至少約275%、至少約300%、至少約350%、至少約400%、至少約450%、至少約500%、至少約550%、至少約600%、至少約750%、至少約700%、至少約750%、至少約800%、至少約850%、至少約900%、至少約950%、至少約1000%、至少約1050%、至少約1100%、至少約1150%或者至少約1200%。22.權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)的組合物，在進(jìn)食條件下施用時，與在禁食條件下相比，其沒有產(chǎn)生顯著不同的吸收水平。23.權(quán)利要求22的組合物，其中相對于禁食狀態(tài)，在進(jìn)食狀態(tài)下施用時，他克莫司組合物的吸收差別選自小于約100%、小于約90%、小于約80%、小于約70%、小于約60%、小于約50%、小于約40%、小于約30%、小于約25%、小于約20%、小于約15%、小于約10%、小于約5%和小于約3%。24.權(quán)利要求1-23中任一項(xiàng)的組合物，其中在禁食狀態(tài)下對人施用該組合物生物等效于在進(jìn)食狀態(tài)下對受試者施用該組合物。25.權(quán)利要求1-24中任一項(xiàng)的組合物用于制造藥物的用途。26.權(quán)利要求25的用途，其中所述藥物可用于器官排斥的預(yù)防性治療或者牛皮癬或其他免疫性疾病的治療。27.權(quán)利要求25的用途，其中該藥物是可注射的藥物組合物，該可注射的藥物組合物形成皮下或肌內(nèi)|&點(diǎn)，以便長期釋放。28.—種制造可注射的納米顆粒他克莫司組合物的方法，該方法包括使他克莫司顆粒與至少一種表面穩(wěn)定劑在一定條件下接觸一段時間，所述條件和時間足以提供有效平均粒度小于約2000nm的他克莫司顆粒。29.權(quán)利要求28的方法，其中所述接觸包括研磨、濕磨、均化、沉淀或超臨界流體粒子生成技術(shù)。30.權(quán)利要求28的方法，還包括向納米顆粒他克莫司組合物中添加納米顆粒西羅莫司組合物，其中納米顆粒西羅莫司組合物包含有效平均粒度小于約2000nm的西羅莫司顆粒和表面穩(wěn)定劑，其中西羅莫司表面穩(wěn)定劑可以和他克莫司表面穩(wěn)定劑相同或不同。全文摘要本發(fā)明涉及用于形成皮下或肌內(nèi)貯點(diǎn)的可注射的納米顆粒免疫抑制劑組合物。本發(fā)明還涉及納米顆粒他克莫司和/或西羅莫司的可注射的組合物，其消除了使用聚氧乙烯(60)氫化蓖麻油(HCO-60)和/或聚山梨酯80作為增溶劑的需要。本發(fā)明還公開了制備可注射的納米顆粒他克莫司和/或西羅莫司組合物的方法，并且還涉及對皮下或肌內(nèi)貯點(diǎn)使用含他克莫司、西羅莫司或其組合的可注射的納米顆粒制劑的治療方法以預(yù)防器官排斥和治療牛皮癬或其他免疫性疾病。文檔編號A61K9/14GK101175481SQ200680017078公開日2008年5月7日申請日期2006年3月16日優(yōu)先權(quán)日2005年3月17日發(fā)明者G·利弗西奇,S·詹金斯申請人:伊蘭制藥國際有限公司