專利名稱：N－芳基雜環(huán)族化合物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化合物的新用途，特別是涉及N-芳基雜芳族化合物以及含有它們的藥物組合物在抑制腫瘤轉(zhuǎn)移中的新用途。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤是一類對(duì)人類健康威脅最大的疾病，盡管投入了大量的人力和物力，但腫瘤的發(fā)病率和死亡率仍呈不斷上升趨勢。腫瘤組織和細(xì)胞具有很多不同于正常組織和細(xì)胞的特性，其中轉(zhuǎn)移(metastasis)是惡性腫瘤的最主要的生物學(xué)特征和標(biāo)志，也是腫瘤患者治療失敗和死亡的根本原因。臨床統(tǒng)計(jì)90％以上的惡性腫瘤患者死于腫瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)并發(fā)癥。過去40年對(duì)腫瘤細(xì)胞生長調(diào)控機(jī)制的認(rèn)識(shí)及取得的成就要遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于對(duì)腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制的認(rèn)識(shí)。由于對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制缺乏根本了解，目前已有的治療藥物和方法仍限于針對(duì)腫瘤本身，而缺乏針對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物和方法。腫瘤轉(zhuǎn)移是極其復(fù)雜的多基因調(diào)控和多步驟發(fā)展過程，并涉及到腫瘤細(xì)胞、機(jī)體、靶組織的相互影響和作用；涉及到一系列腫瘤相關(guān)基因的激活或失活。粘附分子、移動(dòng)因子、細(xì)胞骨架、基質(zhì)降解酶及其抑制物、轉(zhuǎn)移抑制基因、血管形成因子和細(xì)胞游走因子等都在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移中起重要作用。腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移機(jī)制中，腫瘤血管形成和細(xì)胞游走是最重要的因素，它們又受多種血管形成因子和細(xì)胞游走因子的調(diào)節(jié)。因此，抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的分裂增殖和腫瘤細(xì)胞游走，是治療和預(yù)防腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的重要靶點(diǎn)。
目前已開發(fā)的抗腫瘤藥物，從其作用機(jī)制上可分為①抑制或阻斷腫瘤細(xì)胞與外界間的信號(hào)傳導(dǎo)通路；②干擾腫瘤細(xì)胞骨架系統(tǒng)的合成；③破壞或抑制腫瘤細(xì)胞的代謝過程；④阻斷或抑制由腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)的新生血管形成過程。從其來源上可分為①人工合成化合物；②重組蛋白質(zhì)；③天然提取物。
在專利WO/2004/078732和US2005/0130989A1中詳細(xì)公開了包括本發(fā)明通式化合物在內(nèi)的N-芳基雜芳族化合物的制備方法及其抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用。
本發(fā)明所涉及的有關(guān)化合物由法國公司Aventis Pharma S.A.的Le-Brun，Alain等人于2004年化學(xué)合成并專利了其合成方法。目前已知的該化合物的用途僅限于對(duì)體外培養(yǎng)的細(xì)胞系的生長狀態(tài)的影響0.2M濃度時(shí)抑制HCT116內(nèi)微管蛋白的聚合；0.002M濃度時(shí)抑制HCT116細(xì)胞的增殖；1M濃度時(shí)可抑制22％被處理的HDMEC細(xì)胞的附壁。而人們對(duì)該化合物對(duì)在體腫瘤生長狀態(tài)的影響尤其是對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的影響則一無所知11。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供下述式(I)化合物在制備治療腫瘤轉(zhuǎn)移藥物中的應(yīng)用， 其中，R1為Cl、CH3，R2為Cl、CH3、H。
優(yōu)選的化合物是其中，R1為Cl，R2為H，具有如式(II)所示的結(jié)構(gòu) 分子式C21H21ClN4O(下稱WCH44)化學(xué)名稱[4-(3-氯苯)哌嗪-1-基](5-甲基-2-苯基-2H-吡唑-3-基)-甲酮[4-(3-Chlorophenyl)piperazin-1-yl](5-methyl-2-phenyl-2H-pyrazol-3-yl)-methanone另一優(yōu)選的化合物是其中，R1為CH3，R2為CH3，具有如式(III)所示結(jié)構(gòu) 分子式C23H26N4O(下稱WCH57)。
體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明，式(II)化合物(下稱WCH44)和式(III)化合物(下稱WCH57)對(duì)體外培養(yǎng)的腸癌細(xì)胞HCT116和RAS基因惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞C11-RAS具有顯著的生長抑制作用，而對(duì)正常細(xì)胞NIH/3T3和C11則抑制作用較弱，WCH44和WCH57對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長具有選擇性抑制作用。體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，WCH44和WCH57能顯著抑制人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞(C6)和人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系細(xì)胞(CCL-256)的裸鼠體內(nèi)移植瘤的生長，更重要的是，WHC44能非常顯著地抑制裸鼠移植瘤肺轉(zhuǎn)移的發(fā)生。體外血管環(huán)生長試驗(yàn)和體內(nèi)毛細(xì)血管侵入試驗(yàn)顯示W(wǎng)CH44和WCH57可顯著抑制由b-FGF誘導(dǎo)的體內(nèi)外新生血管的形成；細(xì)胞周期分析顯示W(wǎng)CH44和WCH57顯著影響人前列腺癌細(xì)胞(Dul45)的細(xì)胞周期分布，使細(xì)胞周期阻斷在G2/M期，和已知的血管形成抑制劑Combratastatin的作用完全相似，WCH44對(duì)小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞(SEND)具有上述相似的作用，但WCH57對(duì)SEND細(xì)胞周期的影響不明顯，而是具有顯著的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。WCH44和WCH57能有效抑制bFGF誘導(dǎo)的參與調(diào)控新生血管形成的轉(zhuǎn)錄因子Net的磷酸化過程，而對(duì)MAP激酶信號(hào)通路的其他激酶分子p42/44、P-JNK、P-p38的磷酸化沒有影響，net基因是一種與血管形成及細(xì)胞增殖相關(guān)的基因2～9，并通過對(duì)PAI-1基因表達(dá)的調(diào)控調(diào)節(jié)細(xì)胞的游走10?；蛐酒治鲲@示體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中，WHC44和WCH57可使一系列基因的mRNA的表達(dá)發(fā)生改變抑制癌基因的表達(dá)水平；抑制多種蛋白酶及蛋白激酶的表達(dá)水平，如MAPK13、MMP3從而降低細(xì)胞增殖活性和轉(zhuǎn)移能力；增強(qiáng)多種蛋白酶及蛋白激酶抑制劑的表達(dá)水平；增加腫瘤細(xì)胞凋亡，提高Bcl2、BAD、BAX、及P53的表達(dá)水平；降低腫瘤細(xì)胞分泌VEGF和VEGFB的能力，抑制血管形成及腫瘤的生長的轉(zhuǎn)移。因此本發(fā)明的化合物具有抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用。
附圖簡要說明

圖1顯示W(wǎng)CH44對(duì)轉(zhuǎn)錄因子Net磷酸化水平的影響；其中，左圖為腫瘤細(xì)胞，右圖為在b-FGF誘導(dǎo)調(diào)件下的正常細(xì)胞；44代表WCH44；45代表WCH45；圖2顯示W(wǎng)CH44和WCH57對(duì)轉(zhuǎn)錄因子Net磷酸化水平的影響(20nM)；其中，左圖為在b-FGF誘導(dǎo)調(diào)件下的正常成纖維細(xì)胞，右圖為3T3細(xì)胞，44WCH44、45WCH45、58WCH58、57WCH57；圖3顯示W(wǎng)CH44(50nM)對(duì)正常細(xì)胞、惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞和腫瘤生長的不同作用效果；圖4顯示W(wǎng)CH44和WCH57(50nM)對(duì)前列腺癌細(xì)胞系(Dul45)細(xì)胞周期的影響；圖5顯示W(wǎng)CH44和WCH57(50nM)對(duì)小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞(SEND)細(xì)胞周期的影響；圖6顯示W(wǎng)CH44對(duì)腫瘤細(xì)胞(非小細(xì)胞肺癌CCL細(xì)胞系)多種基因表達(dá)的作用；圖7顯示W(wǎng)CH44和WCH57對(duì)新生血管的生成的影響；圖8顯示W(wǎng)CH44對(duì)新生血管形成的影響；圖9顯示W(wǎng)CH44對(duì)裸鼠皮下種植腫瘤生長的影響；圖10顯示W(wǎng)CH44和WCH57對(duì)裸鼠皮下種植腫瘤所致肺轉(zhuǎn)移的影響(非小細(xì)胞肺癌CCL)；圖11顯示W(wǎng)CH44對(duì)裸鼠皮下種植腫瘤所致肺轉(zhuǎn)移的影響(神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6)；圖12顯示W(wǎng)CH44對(duì)腫瘤實(shí)體中多種基因表達(dá)水平的影響，其中腫瘤由非小細(xì)胞肺癌CCL細(xì)胞系在裸鼠體內(nèi)生成。
具體實(shí)施例方式
以下通過藥效學(xué)試驗(yàn)證明本發(fā)明的有益效果。
為了更好地說明本發(fā)明的效果，分別選擇了式(II)化合物的無效同分異構(gòu)體式(IV)化合物(以下簡稱WCH45)和式(III)化合物的無效同分異構(gòu)體式(V)化合物(以下簡稱WCH58)作為藥效實(shí)驗(yàn)的對(duì)照組，式(IV)和式(V)化合物的結(jié)構(gòu)式如下 以下實(shí)驗(yàn)中所使用的材料如無特別說明均為市售購買。
本發(fā)明化合物的制備式(II)化合物的制備方法參見專利申請(qǐng)WO/2004/078732中“Schema1”，“Schema2”，“Schema3”，“Schema4”，“Schema5”，“Schema6”，“Schema7”，“Schema8”，“Schema9”，“Schema10”，“Schema11”，“Schema12”，“Schema13”，“Schema14”，“Schema15”，“Schema16”，“Schema17”，“Schema18”，“Schema19”，以及“Exemple1”，“Exemple E14”。
式(III)化合物的制備方法參見專利申請(qǐng)WO/2004/078732中“Schema1”，“Schema2”，“Schema3”，“Schema4”，“Schema5”，“Schema6”，“Schema7”，“Schema8”，“Schema9”，“Schema10”，“Schema11”，“Schema12”，“Schema13”，“Schema14”，“Schema15”，“Schema16”，“Schema17”，“Schema18”，“Schema19”，和“Exemple2”。
式(IV)及式(V)化合物的制備方法參見專利申請(qǐng)WO/2004/078732“Schema1”，“Schema2”，“Schema3”，“Schema4”，“Schema5”，“Schema6”，“Schema7”，“Schema8”，“Schema9”，“Schema10”，“Schema11”，“Schema12”，“Schema13”，“Schema14”，“Schema15”，“Schema16”，“Schema17”，“Schema18”，“Schema19”。
實(shí)施例1本發(fā)明化合物選擇性抑制net基因所編碼蛋白的磷酸化已知Net的磷酸化狀態(tài)對(duì)腫瘤的發(fā)生，腫瘤的血管生成過程和細(xì)胞游走都有極為重要的作用2～10，降低Net的磷酸化水平對(duì)腫瘤生長的抑制效果明顯9。
方法對(duì)Net磷酸化本底水平極低的NIH3T3小鼠成纖維細(xì)胞，分別用WCH44及其無效同分異構(gòu)體WCH45進(jìn)行處理，10nM處理3小時(shí)及20小時(shí)；處理后的細(xì)胞再接受40ng/ml bFGF(R&D Systems)的處理15分鐘，收獲細(xì)胞后將其裂解物作免疫印記(Western blotting)分析。結(jié)果見圖1、圖2。
結(jié)果顯示W(wǎng)CH44能有效抑制b-FGF誘導(dǎo)的Net磷酸化過程，而對(duì)MAP激酶信號(hào)通路的其他激酶分子p42/44、P-JNK、P-p38的磷酸化沒有影響。
類似地，對(duì)Net磷酸化本底水平較高的人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞C6、人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系CCL細(xì)胞，分別用WCH44，WCH57及其無效同分異構(gòu)體WCH45，WCH58進(jìn)行處理。結(jié)果顯示W(wǎng)CH44及WCH57能有效抑制腫瘤細(xì)胞內(nèi)本底較高的Net磷酸化水平。結(jié)果見圖1。
實(shí)施例2本發(fā)明化合物選擇性抑制惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的生長將細(xì)胞周期阻斷于G2/M期，不能進(jìn)入下一周期，并增加單個(gè)細(xì)胞中染色質(zhì)的含量，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡；并使細(xì)胞增殖相關(guān)基因mRNA的表達(dá)發(fā)生改變①抑制一系列癌基因的表達(dá)水平；②抑制多種蛋白酶及蛋白激酶的表達(dá)水平，從而降低細(xì)胞增殖活性；③增強(qiáng)多種蛋白酶及蛋白激酶抑制劑的表達(dá)水平；④增加腫瘤細(xì)胞凋亡，提高Bcl2、BAD、BAX、及P53的表達(dá)水平；⑤降低腫瘤細(xì)胞分泌VEGF和VEGFB的能力(見表1)。
表1

方法A.生長曲線正常小鼠成纖維細(xì)胞NIH3T3(3T3ATCC)，由pRas CTBX2(Ras-V12)(或其對(duì)照p△Ras空載體轉(zhuǎn)染)(Wasylyk et al 1987)，然后由750μg/ml G418篩選出穩(wěn)定表達(dá)Ras-V12的NIH3T3克隆細(xì)胞系C11-Ras，轉(zhuǎn)染對(duì)照p△Ras空載體的NIH3T3克隆細(xì)胞系(C11)(Institute de Genetique et deBiologie Moleculaire et Cellulaire，F(xiàn)rance)，人結(jié)腸癌細(xì)胞系HCT116(ATCC)，共同組成一組(四個(gè))生長曲線基本一致的實(shí)驗(yàn)組。在各自相應(yīng)的培養(yǎng)條件下，以相同的細(xì)胞數(shù)量開始培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)(起始細(xì)胞濃度為20％鋪滿狀態(tài))。然后每組細(xì)胞系分別培養(yǎng)于含10～100nm濃度的WCH44的培養(yǎng)基中，并于第1-5天收獲細(xì)胞，進(jìn)行MTT分析，以測算相同WCH44培養(yǎng)條件下各細(xì)胞系從第1天至第5天的細(xì)胞數(shù)量。結(jié)果見圖3。結(jié)果顯示，100nM的WCH44能顯著抑制結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116和RAS基因惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞C11-RAS的生長，而對(duì)正常細(xì)胞NIH/3T3和C11則抑制作用較弱，腫瘤細(xì)胞較正常細(xì)胞對(duì)WCH44的生長抑制作用更敏感，說明WCH44對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長具有選擇性抑制作用。
B.細(xì)胞周期分析人前列腺癌細(xì)胞系(Dul45(ATCC))和小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞系(SEND(Institute de Genetique et de Biologie Moleculaire etCellulaire，F(xiàn)rance))。用WCH44，WCH57及其無效同分異構(gòu)體WCH45，WCH58分別對(duì)其進(jìn)行處理(相同濃度50μM和時(shí)間24h)。處理后的細(xì)胞進(jìn)行固定和PI染色，進(jìn)入流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞染色質(zhì)含量與細(xì)胞周期的分析。結(jié)果見圖4，5。結(jié)果顯示W(wǎng)CH44和WCH57顯著影響二種細(xì)胞的細(xì)胞周期分布，可使人前列腺癌細(xì)胞系(Dul45)的細(xì)胞周期阻斷在G2/M期，而且G0/G1期細(xì)胞明顯減少，這與已知的血管形成抑制劑Combratastatin的作用完全相似；WCH44對(duì)小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞(SEND)具有上述相似的作用，但化合物WCH57對(duì)SEND細(xì)胞對(duì)G2/M期的阻斷不明顯，而主要誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
C.基因芯片分析選擇人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系CCL-256(ATCC)。培養(yǎng)至80％鋪滿時(shí)，換成含5uM WCH44的培養(yǎng)基培養(yǎng)30分鐘后，收獲細(xì)胞，提取RNA，與以下Chip雜交并分析結(jié)果“Atlas Mouse Cancer1，2 Array”和“Atlas Mouse cDNA Expression Array”(Clontech)。結(jié)果見圖6，表達(dá)上調(diào)的基因包括蛋白激酶或蛋白酶抑制劑(蛋白C抑制劑、絲氨酸蛋白酶抑制劑3、細(xì)胞周期素依賴的蛋白激酶抑制劑1)；細(xì)胞周期和凋亡相關(guān)基因(Bcl-x、bcl-2相關(guān)死亡蛋白、BAX-α、TP53；其他基因(淋巴毒受體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶ERp72、DNA雙鏈斷裂修復(fù)基因RAD2同原序列、半胱氨酸蛋白酶抑制劑C3、半胱氨酸蛋白酶抑制劑B)。表達(dá)下調(diào)的基因包括蛋白酶和蛋白激酶(MAPKK1、MAPKK5、MAPK14、絲氨酸/蘇氨酸激酶5、絲氨酸/蘇氨酸激酶6、蛋白質(zhì)酪氨酸激酶9、EGF受體底物、蛋白酶B、MAP激酶p38、p44-MAPK(ERK1)、整合素結(jié)合蛋白激酶、細(xì)胞周期素依賴的蛋白激酶7、蛋白激酶C底物、IL-1受體激酶相關(guān)受體、MAPKA PK2)，整合素基因(β1整合素、β7整合素、α3整合素)；癌基因和轉(zhuǎn)化相關(guān)基因(fyn原癌基因、SHC轉(zhuǎn)化蛋白、c-myc原癌基因、禽肉瘤病毒CT10癌基因同原序列、ski原癌基因、abl原癌基因)；生長因子基因(VEGF、VEGF-B)；磷酸化酶基因(蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸化酶)；層粘蛋白β1亞單位1、層粘蛋白B2亞單位、層粘蛋白α5亞單位前體。
實(shí)施例3本發(fā)明化合物抑制新生毛細(xì)血管的生長A.小鼠主動(dòng)脈環(huán)毛細(xì)血管生成實(shí)驗(yàn)小鼠胸主動(dòng)脈全段分離后切為1mm長的小段，每小段置于400μl“Matrigel”中(R&D System)，先在EGM-2培養(yǎng)液(Clontech)中培養(yǎng)24小時(shí)，然后再在EBM培養(yǎng)液(Clontech)中培養(yǎng)3天。然后分別于EBM培養(yǎng)液中加入5nM，50nM WCH44或其無效同分異構(gòu)體WCH45；1uM，10uMWCH57或其無效同分異構(gòu)體WCH58。于第5天用相差顯微鏡觀察毛細(xì)血管生長狀態(tài)。然后徹底洗去該培養(yǎng)液，換入新的EBM培養(yǎng)液培養(yǎng)2天，繼續(xù)觀察毛細(xì)血管生長狀態(tài)。結(jié)果見圖7，結(jié)果顯示，WCH44對(duì)小鼠主動(dòng)脈環(huán)新生毛細(xì)血管的生長具有顯著的抑制作用，可完全抑制新生毛細(xì)血管的生長，并且這種生長抑制作用在去藥兩天后，也不可逆。
B.毛細(xì)血管侵入試驗(yàn)將20ng b-FGF與200ul“Matrigel”混合，然后分別加入WCH44(200nM)及其無效同分異構(gòu)體WCH45(2μM)。注入正常小鼠皮下，形成半固體的球形體。4天后取出球形體，固定，石蠟包埋切片，作免疫組化分析用抗CD31抗體標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞，VECTASTAIN Elite ABC Kit呈深灰色染色。結(jié)果見圖8，分別為球體的縱橫切面，圖中箭頭所指為免疫組化染色陽性的血管內(nèi)皮細(xì)胞。結(jié)果顯示200μM的WHC44可顯著抑制由b-FGF誘導(dǎo)的體內(nèi)“Matrigel”中的新生血管的形成，使新生毛細(xì)血管的生長阻斷于“Matrigel”球體的外周區(qū)域，而不繼續(xù)向內(nèi)部侵入，而其無效同分異構(gòu)體WCH45作為則缺乏此作用，新生血管在“Matrigel”球體內(nèi)部和中心大量生長。
實(shí)施例4本發(fā)明化合物抑制小鼠腫瘤生長人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系CCL-256(ATCC)和人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞C6細(xì)胞系(ATCC)。使用Bulb C nu/nu小鼠，體重20-20g雌性。每組動(dòng)物將最終腫瘤最大與最小的小鼠排除在統(tǒng)計(jì)之外，取所剩下的動(dòng)物進(jìn)入統(tǒng)計(jì)。用10％DMSO/PBS分別溶解WCH44，WCH45；和WCH57，WCH58至所需濃度。無菌操作，腹腔內(nèi)注射200μg/kg體重，每日一次，持續(xù)4周。
A.CCL256細(xì)胞系4只實(shí)驗(yàn)鼠，1×106細(xì)胞分別皮下注射(100μl)。20天后處死動(dòng)物，剝離腫瘤，在PBS溶液中制成細(xì)胞勻漿，再將1×106/100μl上述制備的細(xì)胞勻漿分別接種至60只實(shí)驗(yàn)鼠背部皮下，細(xì)胞接種后當(dāng)天開始分實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組(各12只鼠)分別行腹腔內(nèi)注射WCH44，WCH45；和WCH57，WCH58。
B.C6細(xì)胞系1×106細(xì)胞皮下注射(100μl)。20天后處死動(dòng)物，剝離腫瘤，在PBS溶液中制成細(xì)胞勻漿，再將1×106/100μl細(xì)胞勻漿分別接種至14只實(shí)驗(yàn)鼠皮下，細(xì)胞接種后第8-10天，當(dāng)腫瘤直徑平均達(dá)到0.5cm。此時(shí)，再開始分別向?qū)嶒?yàn)組和對(duì)照組(各7只鼠)腹腔內(nèi)注射WCH44及WCH45。
腫瘤細(xì)胞接種四周后停藥，處死動(dòng)物，解剖剝離腫瘤。稱瘤重，取雙側(cè)肺，及全肝。將雙肺，全肝及80％體積腫瘤用10％PFA固定，石蠟包埋切片(全器官每隔30μm制10μm切片一張，HE染色，10倍光鏡觀察計(jì)數(shù)雙肺及全肝鏡下轉(zhuǎn)移灶數(shù)量。結(jié)果見圖9，10，11。結(jié)果顯示，WCH44能顯著抑制CCL256細(xì)胞和C6細(xì)胞裸鼠移植瘤的體內(nèi)生長(圖9)；更重要的是，WCH44和WCH57能顯著抑制CCL256細(xì)胞和C6細(xì)胞裸鼠移植瘤的肺轉(zhuǎn)移的發(fā)生；在C6細(xì)胞裸鼠移植瘤中，對(duì)照的無效同分異構(gòu)體WCH45處理組的平均肺轉(zhuǎn)移數(shù)為23個(gè)，而WCH44處理組僅為2個(gè)(圖11)；在CCL細(xì)胞裸鼠移植瘤中，WCH45處理組的平均肺轉(zhuǎn)移數(shù)為18個(gè)，而WCH44處理組僅為2個(gè)。
另20％體積腫瘤，置入“Trizol”溶液，機(jī)械勻漿提取RNA，與“AtlasMouse Cancer 1.2 Array”和“Atlas Mouse cDNA Expression Array”雜交，結(jié)果見圖12。結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)WCH44處理的CCL移植瘤中的一些蛋白酶和蛋白激酶、生長增殖相關(guān)因子等基因表達(dá)下調(diào)，包括MAPK13、MMP3、絲氨酸/蘇氨酸激酶25、MAPKAPK2、蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸化酶、巨噬細(xì)胞刺激因子1受體、克隆形成因子1受體、酪氨酸激酶受體1、PI3激酶、FGFR1、IGFBP1等；而另一些可能抑制細(xì)胞增殖和生長有關(guān)的基因表達(dá)上調(diào)，包括ephrinB1、Tolloid-like1、細(xì)胞周期素E2、抑瘤素M(oncostatin M)、卵泡抑素、INFγ受體2。
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11.“Preparation of N-arylheteroaryls，in particular N-phenylpiperazinyl methanones，asinhibitors of tubulin polymerization and their compositions for treatment of cancer.”
權(quán)利要求
1.具有下述式(I)結(jié)構(gòu)的化合物在制備抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物中的應(yīng)用 其中，R1為Cl或CH3，R2為Cl、CH3或H。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中化合物中R1為Cl，R2為H，具有下式(II)結(jié)構(gòu)
3.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中所述化合物中R1為CH3，R2為CH3，具有下式(III)結(jié)構(gòu)
4.含有式(I)所示結(jié)構(gòu)化合物的藥物組合物在制備抑制腫瘤藥物中的應(yīng)用 其中，R1為Cl或CH3，R2為Cl、CH3或H。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I)化合物以及含有它們的藥物組合物在制備抑制腫瘤轉(zhuǎn)移藥物中的新用途。
文檔編號(hào)A61P35/04GK1969853SQ20061015715
公開日2007年5月30日 申請(qǐng)日期2006年11月30日 優(yōu)先權(quán)日2006年11月30日
發(fā)明者鄭鴻 申請(qǐng)人:四川大學(xué)華西醫(yī)院