專利名稱：當(dāng)歸水溶性提取物及其注射用制劑和制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥提取物及其制劑和制備方法，具體涉及一種當(dāng)歸水溶性提取物及其注射用制劑和制備工藝。
背景技術(shù)：
當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根，具有活血化瘀，消炎止痛，祛風(fēng)散寒的功效。在臨床上具有廣泛的應(yīng)用。
目前市場(chǎng)上有當(dāng)歸濃縮丸、當(dāng)歸片等劑型，濃縮丸和片劑口服經(jīng)胃腸道吸收，在肝臟發(fā)生首過效應(yīng)后吸收入血，生物利用度低，吸收慢。不利于發(fā)揮當(dāng)歸在治療心腦血管疾病方面的特長(zhǎng)和優(yōu)勢(shì)。
當(dāng)歸注射液是中藥當(dāng)歸經(jīng)水提制成的滅菌水溶液，臨床用于冠心病、腦梗塞、腦動(dòng)脈硬化、血栓閉塞性脈管炎、缺血性骨壞死、突發(fā)性耳聾、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等癥。研究表明，當(dāng)歸水劑靜脈注射有擴(kuò)張外周血管、增加血流量，改善外周循環(huán)及抑制血小板聚集等作用。阿魏酸是當(dāng)歸水提部分的主要活性成分之一，其生物活性幾乎貫穿于整個(gè)當(dāng)歸的藥理功效之中。阿魏酸是一種非肽類內(nèi)皮素受體競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑，對(duì)心、腦、肺、腎及血管疾病有顯著療效，具有抗心肌缺血，抗血小板聚集，提高心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞、心肌細(xì)胞耐缺氧能力，減輕炎性因子對(duì)內(nèi)皮、心肌細(xì)胞的損害的作用。
中國(guó)專利CN02115699.9公開了一篇“當(dāng)歸靜脈注射液及其制備方法”的專利，藥材的提取采用水提醇沉工藝，提取液顏色深，雜質(zhì)含量高(其中阿魏酸的含量很低)，直接影響藥品的安全性、有效性和穩(wěn)定性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種質(zhì)量穩(wěn)定、有效成分含量高的當(dāng)歸水溶性提取物。
本發(fā)明的另一目的是提供一種當(dāng)歸水溶性提取物的注射用制劑——注射液、凍干粉針劑及輸液劑。
本發(fā)明還有一個(gè)目的，即提供當(dāng)歸水溶性提取物注射用制劑的制備工藝。
本發(fā)明當(dāng)歸水溶性提取物的提取工藝，包括以下工藝步驟①將當(dāng)歸藥材用5～15倍量體積的水或任意濃度的乙醇回流提??；②將提取液用1～5倍量體積得水或乙醇沉淀，并回收除去濾液中的乙醇；③將濾液經(jīng)大孔吸附樹脂純化；④先用蒸餾水洗去雜質(zhì)，再用30％～95％的乙醇分別洗脫大孔吸附樹脂，收集洗脫液，減壓除去洗脫液中的乙醇，濃縮得當(dāng)歸水溶性提取物。
步驟①中的提取包括反復(fù)煎煮，熱回流、滲漉、超聲、微波等方法。
所述大孔吸附樹脂為HPD-100、HPD-300、D101、AB-8或LSA-30中任何一種。
本發(fā)明的當(dāng)歸水溶性提取物，其中阿魏酸含量大于25％。
一種當(dāng)歸水溶性提取物的注射用制劑，是將當(dāng)歸水溶性提取物與藥學(xué)上可以接受的pH調(diào)節(jié)劑或滲透壓調(diào)節(jié)劑或賦形劑結(jié)合，制備成注射液、凍干粉針劑或輸液劑。
一種當(dāng)歸水溶性提取物注射液的制備工藝，是在當(dāng)歸水溶性提取物中加1～10倍量的注射用水?dāng)嚢杈鶆颍洳?4～72小時(shí)，過濾；再加入注射用水，用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)PH值至6.5～8.0，超濾膜過濾，灌封，在100～115℃滅菌30～60min，分裝得當(dāng)歸注射液。
一種當(dāng)歸水溶性提取物凍干粉針劑的制備工藝，是將當(dāng)歸水溶性提取物加1～10倍量的注射用水?dāng)嚢杈鶆颍洳?4～72小時(shí)，過濾；加入當(dāng)歸水溶性提取物1％～10％量的賦形劑，攪拌溶解；再加入注射用水，用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)PH值至6.5～8.0，超濾膜過濾，微孔濾膜過濾，灌封，冷凍干燥，得當(dāng)歸凍干粉針劑。
所述藥液的凍干分多段凍干。在凍干過程中，藥液在凍干曲線降溫階段溫度低點(diǎn)-30～-70℃下保持2～10小時(shí)，在升溫階段溫度高點(diǎn)0～50℃下保持1～10小時(shí)，封裝時(shí)采用惰性氣體填充，以保證貯存期不易發(fā)生氧化，儲(chǔ)存時(shí)間長(zhǎng)。
一種當(dāng)歸水溶性提取物輸液劑的制備工藝，是將當(dāng)歸水溶性提取物加1～10倍量的注射用水?dāng)嚢杈鶆?，并用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)PH值至6.5～8.0，冷藏放置24～72小時(shí)，濾過、灌封，滅菌，超濾膜過濾后得當(dāng)歸備用液；再取注射用滲透壓調(diào)節(jié)劑溶于適量注射用水，加入上述當(dāng)歸備用液，并添加注射用水，用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)PH值至6.5～8.0；微孔濾膜過濾至澄明，灌封，在100～115℃熱壓滅菌，得當(dāng)歸輸液。
所述pH調(diào)節(jié)劑為臨床上可接受的氫氧化鈉、碳酸氫鈉、磷酸二氫鈉或磷酸氫二鈉中的至少一種。
所述賦形劑為臨床上可接受甘露醇、葡萄糖、乳糖、山梨醇、蔗糖、麥芽糖、右旋糖苷，PEG、PVP中的至少一種。
所述滲透壓調(diào)節(jié)劑為臨床上可接受的葡萄糖、氯化鈉、果糖、木糖、甘露醇中的至少一種。
以本發(fā)明的工藝制備的樣品進(jìn)行藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如下1試驗(yàn)?zāi)康挠么笫蠹毙孕募∪毖湍X卒中模型考察當(dāng)歸不同工藝提取物有效性，從生物活性角度選擇較好的工藝。
2試驗(yàn)材料2.1藥品及試劑DG注射液樣品1為棕色液體，每毫升相當(dāng)于生藥10g，批號(hào)050403。樣品2為棕褐色液體，每毫升相當(dāng)于生藥5g，批號(hào)050428。樣品3為棕色液體，每毫升相當(dāng)于生藥5g，批號(hào)050429。
紅四氮唑(TTC)，上?；瘜W(xué)試劑公司生產(chǎn)，批號(hào)F990930。以磷酸鹽緩沖液配制成2％TTC溶液供腦組織染色用。
2.2動(dòng)物Wistar大鼠，分籠飼養(yǎng)，每籠5只，自由飲食，飼養(yǎng)室溫度由中央空調(diào)系統(tǒng)控制在22±2℃，濕度為45±15％，光照12h(6:00～18:00)。
2.3儀器Cardimax FX-101B心電圖儀，日本琴島福田公司產(chǎn)品。
COOLPIX955數(shù)碼相機(jī)，日本尼康公司產(chǎn)品。
病理圖像采集與分析系統(tǒng)，北京航空航天大學(xué)圖象中心產(chǎn)品。
RXL全自動(dòng)生化分析儀，杜邦公司產(chǎn)品。
PK121R低溫冷凍離心機(jī)，意大利ALC公司產(chǎn)品。
BP310S電子天平，德國(guó)Sartorius產(chǎn)品。
PYX-DHS-300型隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱，湖北黃石醫(yī)療器械廠生產(chǎn)。
WZ-5013微量注射泵，浙江醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)儀器廠生產(chǎn)。
3試驗(yàn)方法3.1對(duì)結(jié)扎冠狀動(dòng)脈所致大鼠心肌缺血模型的影響3.1.1模型制備Wistar大鼠40只，雌雄各半。35％水合氯醛(360mg/kg)腹腔注射麻醉，測(cè)定正常II導(dǎo)心電圖后，左胸部去毛，鎖骨正中線與第四肋骨交點(diǎn)為中心，沿鎖骨正中線切開皮膚、肌層，環(huán)肌層作荷包縫合，串線備扎，切斷第四肋骨，以環(huán)形勾將心臟拉出胸腔，于左心耳下約1.5mm處以6/0號(hào)絲線結(jié)扎冠脈左前降支，將心臟放回胸腔，抽出胸腔內(nèi)空氣，并作肌層的荷包結(jié)扎，縫合皮膚。
3.1.2試驗(yàn)分組及給藥方案大鼠冠狀動(dòng)脈結(jié)扎后15min測(cè)定II導(dǎo)心電圖，測(cè)量J點(diǎn)抬高值作為ST段升高值。根據(jù)ST段升高程度隨機(jī)分組。造型動(dòng)物設(shè)4組，模型對(duì)照組給予生理鹽水，3個(gè)受試物組給予三種當(dāng)歸注射液，劑量均為5g生藥/kg，每組10只。冠狀動(dòng)脈結(jié)扎后15min開始給藥，單次尾靜脈輸注1次，輸注時(shí)間為30min，給藥體積均為2mL/只。
3.1.3對(duì)大鼠心電圖的影響大鼠35％水合氯醛(360mg/kg)腹腔注射麻醉，測(cè)定II導(dǎo)心電圖，作為大鼠術(shù)前正常值；結(jié)扎冠脈左前降支15min后測(cè)定II導(dǎo)心電圖，作為大鼠術(shù)后藥前值；開始給藥后分別于5、15、30、45、60、90、120、180min測(cè)定II導(dǎo)心電圖，測(cè)量J點(diǎn)抬高值作為ST段升高值。
3.1.4對(duì)血清生化指標(biāo)的影響動(dòng)物回置籠飼養(yǎng)，24h后腹主動(dòng)脈取血，低溫離心制備血清，置-20℃保存，1個(gè)月內(nèi)用生化分析儀測(cè)定AST、LDH、CK-MB等血清生化指標(biāo)。
3.1.5對(duì)大鼠心肌梗死范圍的影響大鼠取血后，取出心臟，生理鹽水沖洗，沿心臟長(zhǎng)軸方向?qū)⑿呐K切片，厚度為1.5mm，將切片置于1％TTC液中染色15min后，取出心臟切片。梗死區(qū)染為白色，正常區(qū)為紅色，經(jīng)數(shù)碼成像后，通過圖像分析系統(tǒng)測(cè)定梗死區(qū)占左室的百分。
3.2對(duì)阻斷大腦中動(dòng)脈(MCAO)所致大鼠腦缺血模型的影響3.2.1模型制備雄性Wistar大鼠40只，雌雄各半，腹腔注射35％水合氯醛(350mg/kg)麻醉，側(cè)臥位固定。于外耳道與眼眥連線中點(diǎn)切開皮膚，逐層分離肌肉，暴露顴弓和顳骨鱗部，鉸斷顴弓，在手術(shù)顯微鏡下，于顴弓和顳骨鱗部前連接處的前下方約2mm處，用牙科鉆開2mm直徑小顱窗，暴露大腦中動(dòng)脈，將一小塊濾紙敷于中動(dòng)脈處，將10μl的50％FeCl3滴于濾紙片上，30min后將濾紙片取出，并用生理鹽水清洗干凈，局部滴加2～3滴青霉素液(1.6×105U/ml)，以防傷口感染，逐層縫合，回籠飼養(yǎng)。
3.2.2試驗(yàn)分組及給藥方案術(shù)后2h進(jìn)行行為障礙程度評(píng)分，依據(jù)分值高低均勻分組。造型動(dòng)物設(shè)4組，模型對(duì)照組給予生理鹽水，3個(gè)受試物組給予三種當(dāng)歸注射液，劑量均為5g生藥/kg，各組動(dòng)物數(shù)均為10只。MCAO后2h開始給藥，單次尾靜脈輸注1次，輸注時(shí)間為30min，給藥體積均為2mL/只。
3.2.3行為評(píng)分動(dòng)物分別于給藥結(jié)束后30min、24h根據(jù)附表1的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)采用盲法進(jìn)行神經(jīng)功能損害程度評(píng)分?？偡譃?1分。
表1 MCAO大鼠神經(jīng)功能評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

3.2.4梗死范圍測(cè)量于末次評(píng)分后斷頭，取全腦，迅速冰凍，沿冠狀面切成2mm厚的切片，間隔取上述一半腦片放入2％TTC染液中，避光37℃溫孵30min進(jìn)行染色，經(jīng)10％甲醛溶液固定后，采用COOLPIX955數(shù)碼相機(jī)成像系統(tǒng)將數(shù)字影像存儲(chǔ)于計(jì)算機(jī)中，并用圖像分析系統(tǒng)v4.0軟件測(cè)量梗死區(qū)和全腦面積，計(jì)算腦梗死范圍。
3.2.5腦水含量測(cè)量另一半腦片稱重后，置于50℃烘箱中烤至恒重，稱量其干重，計(jì)算腦含水量。
4試驗(yàn)結(jié)果
4.1.1對(duì)大鼠心電圖ST段抬高的影響大鼠單次靜脈輸注給予三種當(dāng)歸注射液5g生藥/kg后，能不同程度抑制冠脈結(jié)扎引起的ST段抬高，減輕心肌缺血程度，與模型對(duì)照相比，批號(hào)為050428的當(dāng)歸注射液在缺血后的多個(gè)時(shí)間段能明顯抑制心肌缺血大鼠ST段抬高，批號(hào)為050429、050403的當(dāng)歸注射液作用較弱。
表2 三種當(dāng)歸注射液對(duì)急性心肌缺血大鼠II導(dǎo)聯(lián)心電圖ST段(mV)的影響(x±s，n＝10)

表3 三種當(dāng)歸注射液對(duì)心肌缺血大鼠心電圖ST段影響曲線下面積、峰面積的影響

4.1.3對(duì)大鼠心肌梗死范圍的影響大鼠單次靜脈輸注給予三種當(dāng)歸注射液5g生藥/kg后，能不同程度縮小心肌梗死范圍，與模型對(duì)照相比，梗死區(qū)面積分別下降34.5％、22.3％、10.1％；梗死區(qū)/左室百分?jǐn)?shù)分別下降33.8％(P＜0.01)、44.6％(P＜0.001)、56.3％(P＜0.001)。復(fù)方丹參滴丸250mg/kg給藥后也明顯縮小心肌梗死范圍，210mg/kg的復(fù)方丹參片與250mg/kg滴丸相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
表4 三種當(dāng)歸注射液對(duì)急性心肌缺血大鼠心肌梗死范圍的影響(x±s，n＝10)

注與模型對(duì)照組比較*P＜0.05。
4.2對(duì)MCAO引起的大鼠局部腦缺血模型的影響4.2.1對(duì)大鼠行為障礙的影響MCAO后，大鼠出現(xiàn)明顯神經(jīng)功能障礙，單次靜脈輸注給予三種當(dāng)歸注射液5g生藥/kg，其行為障礙得到不同程度改善，24h后行為評(píng)分比模型對(duì)照組分別降低了28.57％、3.57％、10.71％。上述結(jié)果表明，批號(hào)為050428的當(dāng)歸注射液能明顯改善局部腦缺血大鼠神經(jīng)功能障礙，批號(hào)分別為050429、050403的當(dāng)歸注射液作用不明顯。
表5 三種當(dāng)歸注射液對(duì)MCAO引起的大鼠受損的神經(jīng)功能評(píng)分的影響(x±s，n＝10)

注1與模型組比較**P＜0.01，2與給藥前比較++P＜0.01。
4.2.2對(duì)大鼠腦梗死范圍的影響模型對(duì)照組腦梗死范圍明顯。單次靜脈輸注給予三種當(dāng)歸注射液5g生藥/kg，可不同程度縮小腦缺血大鼠腦梗死范圍，與模型對(duì)照組比較，分別縮小了47.9％、9.92％、19.01％。上述結(jié)果表明，批號(hào)為050428的當(dāng)歸注射液能明顯縮小腦缺血大鼠腦梗死范圍，批號(hào)分別為050429、050403的當(dāng)歸注射液作用不明顯。
表6 三種當(dāng)歸注射液對(duì)局部腦缺血大鼠腦梗死范圍的影響(x±s，n＝10)

注與模型組比較*P＜0.05。
4.2.3對(duì)大鼠腦含水量的影響模型對(duì)照組腦含水量明顯增加，腦水腫明顯。單次靜脈輸注給予三種當(dāng)歸注射液5g生藥/kg，可不同程度緩解腦水腫，與模型對(duì)照組比較，腦水腫分別減少了1.41％、0.90％、-0.38％。上述結(jié)果表明，批號(hào)為050428的當(dāng)歸注射液能明顯緩解腦水腫，批號(hào)分別為050429、050403的當(dāng)歸注射液作用不明顯。
表7 三種當(dāng)歸注射液對(duì)局部腦缺血大鼠腦水腫的影響(x±s，n＝10)

注與模型組比較*P＜0.05。
4.3三種當(dāng)歸注射液藥效綜合比較見表8050428最優(yōu)，050429次之，050403較差。
表8 三種當(dāng)歸注射液藥效綜合比較

對(duì)兔離體血小板聚集作用的比較1.試驗(yàn)?zāi)康挠秒x體家兔血小板聚集實(shí)驗(yàn)考察當(dāng)歸不同工藝提取物對(duì)血小板最大聚集的抑制作用，從生物活性角度選擇較好的工藝。
2.試驗(yàn)材料2.1藥品及試劑DG注射液樣品1為棕色液體，每毫升相當(dāng)于生藥10g，批號(hào)050403。樣品2為棕褐色液體，每毫升相當(dāng)于生藥5g，批號(hào)050428。樣品3為棕色液體，每毫升相當(dāng)于生藥5g，批號(hào)050429。
二磷酸腺苷(ADP)Serva公司產(chǎn)品，批號(hào)01993。
2.2動(dòng)物大耳白兔，雄性，體重2.5-3.0kg。
2.3儀器PK121R型離心機(jī)(意大利ALC International SRL產(chǎn)品)。
表3、各實(shí)驗(yàn)組注射鏈脲佐菌素一周后血生化的比較

注與正常組相比，*p＜0.05。
表4、正常組各時(shí)間段血生化的比較

注各時(shí)間段比較均未見明顯差異
3、本發(fā)明的粉針劑的凍干采用分段凍干，封裝時(shí)采用惰性氣體填充，有效地防止有效成分在水中的氧化、水解、失活，可以更好地保證含量和療效。
4、本發(fā)明的制劑制備工藝成熟，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，便于工業(yè)化生產(chǎn)。


圖1為本發(fā)明三種當(dāng)歸注射液對(duì)大鼠心肌缺血的作用曲線圖具體實(shí)施方式
實(shí)施例1、本發(fā)明注射液的制備取適量當(dāng)歸藥材粉碎，過10目篩；加入當(dāng)歸藥材2倍量的乙醇(濃度60％)浸泡6小時(shí)，移至滲漉筒中，以1.0mL/min的速度滲漉，收集滲漉液至藥材的5倍量；加入滲漉液相同體積的水，冷藏24h，濾過，減壓(0.1MP，60℃)除去濾液中的乙醇；將濾液通過HPD-100型大孔吸附樹脂柱進(jìn)行純化，先用4BV蒸餾水淋洗，再用60％乙醇4BV洗脫，然后收集乙醇洗脫液，減壓除去乙醇(0.1MP，60℃)并濃縮至相對(duì)密度為1.10～1.15(80℃)得當(dāng)歸水溶性提取物。
在當(dāng)歸水溶性提取物中加提取物1倍體積量注射用水，充分?jǐn)嚢?，冷?4h，濾過，再加入注射用水，調(diào)節(jié)PH值至6.5，超濾膜過濾(截留分子量6000)，灌封，在100℃滅菌60min，得當(dāng)歸注射液。規(guī)格每支2ml。
實(shí)施例2、本發(fā)明注射液的制備取適量當(dāng)歸藥材，加入當(dāng)歸藥材15倍量體積水煎煮2次，每次2h，濾過，濾液合并，減壓濃縮(0.1MP，60℃)至相對(duì)密度1.15～1.20(80℃)；加入濾液5倍體積量的乙醇，靜置過夜，濾過，濾液減壓回收乙醇至無醇味(0.1MP，60℃)，通過D101型大孔吸附樹脂柱純化，先用5BV蒸餾水淋洗，再用95％乙醇3BV洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓除去乙醇(0.1MP，60℃)，得當(dāng)歸水溶性提取物。
在當(dāng)歸水溶性提取物中加提取物5倍體積量的注射用水?dāng)嚢杈鶆?，冷?8小時(shí)，過濾；再加入注射用水，調(diào)節(jié)PH值至7.2，超濾膜過濾(截留分子量6000)，灌封，在110℃滅菌45min，分裝得當(dāng)歸注射液。規(guī)格每支2ml。
實(shí)施例3、本發(fā)明注射液的制備取適量當(dāng)歸藥材，以當(dāng)歸藥材10倍量的乙醇(80％乙醇)回流提取3次，每次提取1.5h，合并藥液，減壓除去乙醇(0.1MP，60℃)并濃縮至相對(duì)密度1.10～1.15(80℃)。加入藥液3倍體積的水，冷藏24h，濾過，將濾液通過AB-8型大孔吸附樹脂柱純化，先用4BV蒸餾水淋洗，再用30％乙醇4BV洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓除去乙醇(0.1MP，60℃)并濃縮至相對(duì)密度1.20～1.25(80℃)得當(dāng)歸水溶性提取物。
在當(dāng)歸水溶性提取物中加提取物2倍體積量的注射用水，充分?jǐn)嚢?，冷?2h，濾過，再加入注射用水，調(diào)節(jié)PH值至8.0，超濾膜過濾(截留分子量6000)，灌封，在115℃滅菌30min，分裝得當(dāng)歸注射液。規(guī)格每支2ml。
實(shí)施例4、本發(fā)明凍干粉針劑的制備取適量當(dāng)歸藥材粉碎，過10目篩；加入當(dāng)歸藥材2倍量的乙醇(濃度60％)浸泡6小時(shí)，移至滲漉筒中，以1.0mL/min的速度滲漉，收集滲漉液至藥材的5倍量；加入滲漉液3倍體積的水，冷藏24h，濾過，減壓(0.1MP，60℃)除去滲漉液中的乙醇；將濾液通過HPD-300型大孔吸附樹脂柱進(jìn)行純化，先用4BV蒸餾水淋洗，再用60％乙醇4BV洗脫，然后收集乙醇洗脫液，減壓除去乙醇(0.1MP，60℃)并濃縮至相對(duì)密度為1.10～1.15(80℃)得當(dāng)歸水溶性提取物。
在當(dāng)歸水溶性提取物中加10倍量的注射用水?dāng)嚢杈鶆颍洳?4小時(shí)，過濾；加入當(dāng)歸水溶性提取物10％量的甘露醇，攪拌溶解；再加入注射用水，調(diào)節(jié)PH值至6.5，超濾膜過濾(截流分子量6000)，微孔濾膜過濾，在無菌條件下，灌裝于5mL滅菌小瓶(每瓶裝2mL)，冷凍干燥，得當(dāng)歸凍干粉針劑。
實(shí)施例5、本發(fā)明凍干粉針劑的制備取適量當(dāng)歸藥材，加入當(dāng)歸藥材10倍量體積水煎煮2次，每次2h，濾過，濾液合并，減壓濃縮(0.1MP，60℃)至相對(duì)密度1.15～1.20(80℃)。加入濾液2倍體積的乙醇，靜置過夜，濾過，濾液減壓回收乙醇至無醇味(0.1MP，60℃)，通過LSA-30型大孔吸附樹脂柱純化，先用5BV蒸餾水淋洗，再用95％乙醇3BV洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓除去乙醇(0.1MP，60℃)，得當(dāng)歸水溶性提取物。
在當(dāng)歸水溶性提取物中加5倍量的注射用水?dāng)嚢杈鶆颍洳?8小時(shí)，過濾；加入當(dāng)歸水溶性提取物5％量的葡萄糖，攪拌溶解；再加入注射用水，調(diào)節(jié)PH值至7.0，超濾膜過濾(截流分子量6000)，微孔濾膜過濾，在無菌條件下，灌裝于5mL滅菌小瓶(每瓶裝2mL)，冷凍干燥，得當(dāng)歸凍干粉針劑。
實(shí)施例6、本發(fā)明凍干粉針劑的制備取適量當(dāng)歸藥材，以當(dāng)歸藥材5倍量的乙醇(80％乙醇)回流提取3次，，每此提取1.5h，合并藥液，減壓除去乙醇(0.1MP，60℃)并濃縮至相對(duì)密度1.10～1.15(80℃)。加入藥液相同體積的水，冷藏24h，濾過，將濾液通過AB-8型大孔吸附樹脂柱純化，先用4BV蒸餾水淋洗，再用50％乙醇4BV洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓除去乙醇(0.1MP，60℃)并濃縮至相對(duì)密度1.20～1.25(80℃)得當(dāng)歸水溶性提取物。
在當(dāng)歸水溶性提取物中加1倍量的注射用水?dāng)嚢杈鶆?，冷?2小時(shí)，過濾；加入當(dāng)歸水溶性提取物1％量的山梨醇，攪拌溶解；再加入注射用水，調(diào)節(jié)PH值至8.5，超濾膜過濾(截流分子量6000)，微孔濾膜過濾，在無菌條件下，灌裝于5mL滅菌小瓶(每瓶裝2mL)，冷凍干燥，得當(dāng)歸凍干粉針劑。
實(shí)施例7、本發(fā)明輸液劑的制備取適量當(dāng)歸藥材粉碎，過10目篩；加入當(dāng)歸藥材2倍量的乙醇(濃度60％)浸泡6小時(shí)，移至滲漉筒中，以1.0mL/min的速度滲漉，收集滲漉液至藥材的5倍量，加入滲漉液2倍體積的水，冷藏24h，濾過，減壓(0.1MP，60℃)除去滲漉液中的乙醇；將濾液通過HPD-100型大孔吸附樹脂柱進(jìn)行純化，先用4BV蒸餾水淋洗，再用60％乙醇4BV洗脫，然后收集乙醇洗脫液，減壓除去乙醇(0.1MP，60℃)并濃縮至相對(duì)密度為1.10～1.15(80℃)得當(dāng)歸水溶性提取物。
將當(dāng)歸水溶性提取物加2倍體積量的注射用水?dāng)嚢杈鶆颍{(diào)節(jié)PH值至8.0，冷藏放置72小時(shí)，濾過、灌封，100℃流通蒸汽滅菌1h，放置3～7天，超濾膜過濾后得當(dāng)歸備用液；取注射用木糖溶于適量注射用水，再加入上述當(dāng)歸備用液中，并添加注射用水，調(diào)節(jié)PH值至7.0；微孔濾膜過濾至澄明，灌封，在100℃熱壓滅菌，得當(dāng)歸木糖注射液。規(guī)格為每瓶250ml。
實(shí)施例8、本發(fā)明輸液劑的制備取適量當(dāng)歸藥材，加入當(dāng)歸藥材10倍量體積水煎煮2次，每次2h，濾過，濾液合并，減壓濃縮(0.1MP，60℃)至相對(duì)密度1.15～1.20(80℃)。加入濾液3倍體積的乙醇，靜置過夜，濾過，濾液減壓回收乙醇至無醇味(0.1MP，60℃)，通過D101型大孔吸附樹脂柱純化，先用5BV蒸餾水淋洗，再用95％乙醇3BV洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓除去乙醇(0.1MP，60℃)，得當(dāng)歸水溶性提取物。
是將當(dāng)歸水溶性提取物加2倍體積量的注射用水?dāng)嚢杈鶆颍{(diào)節(jié)PH值至8.0，冷藏放置48小時(shí)，濾過、灌封，100℃流通蒸汽滅菌1h，放置3～7天，超濾膜過濾后得當(dāng)歸備用液；取注射用氯化鈉溶于適量注射用水，再加入上述當(dāng)歸備用液中，并添加注射用水，調(diào)節(jié)PH值至6.5；微孔濾模過濾至澄明，灌封，在110℃熱壓滅菌，得當(dāng)歸氯化鈉注射液。規(guī)格為每瓶250ml。
實(shí)施例9、本發(fā)明輸液劑的制備取適量當(dāng)歸藥材，以當(dāng)歸藥材5倍量的乙醇(80％乙醇)回流提取3次，此提取1.5h，合并藥液，減壓除去乙醇(0.1MP，60℃)并濃縮至相對(duì)密度1.10～1.15(80℃)。加入藥液5倍體積的水，冷藏24h，濾過，將濾液通過AB-8型大孔吸附樹脂柱純化，先用4BV蒸餾水洗脫，再用50％乙醇4BV洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓除去乙醇(0.1MP，60℃)并濃縮至相對(duì)密度1.20～1.25(80℃)得當(dāng)歸水溶性提取物。
是將當(dāng)歸水溶性提取物加1倍體積量的注射用水?dāng)嚢杈鶆?，調(diào)節(jié)PH值至8.0，冷藏放置24小時(shí)，濾過、灌封，100℃流通蒸汽滅菌1h，放置3～7天，超濾膜過濾后得當(dāng)歸備用液；取注射用葡萄糖溶于適量注射用水，再加入上述當(dāng)歸備用液中，并添加注射用水，調(diào)節(jié)PH值至6.5；微孔濾膜過濾至澄明，灌封，在115℃熱壓滅菌，得當(dāng)歸葡萄糖注射液。規(guī)格為每瓶250ml。
權(quán)利要求
1.一種當(dāng)歸水溶性提取物，其特征在于其中阿魏酸含量大于25％。
2.一種如權(quán)利要求1所述當(dāng)歸水溶性提取物的提取工藝，包括以下工藝步驟①將當(dāng)歸藥材用5～15倍量體積的水或任意濃度的乙醇回流提?。虎趯⑻崛∫河?～5倍量體積的水或乙醇沉淀，并回收除去濾液中的乙醇；③將濾液經(jīng)大孔吸附樹脂純化；④先用蒸餾水洗去雜質(zhì)，再用30％～95％的乙醇分別洗脫大孔吸附樹脂，收集洗脫液，減壓除去洗脫液中的乙醇，濃縮得當(dāng)歸水溶性提取物。
3.如權(quán)利要求2所述當(dāng)歸水溶性提取物的提取工藝，其特征在于所述大孔吸附樹脂為HPD-100、HPD-300、D101、AB-8或LSA-30中任何一種。
4.一種當(dāng)歸水溶性提取物的注射用制劑，是將當(dāng)歸水溶性提取物與藥學(xué)上可以接受的pH調(diào)節(jié)劑或滲透壓調(diào)節(jié)劑或賦形劑結(jié)合，制備成注射液、凍干粉針劑或輸液劑。
5.一種當(dāng)歸水溶性提取物注射液的制備工藝，是在當(dāng)歸水溶性提取物中加1～10倍量的注射用水?dāng)嚢杈鶆?，冷?4～72小時(shí)，過濾；再加入注射用水，用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)PH值至6.5～8.0，超濾膜過濾，灌封，分裝，在100～115℃滅菌30～60min得當(dāng)歸注射液。
6.如權(quán)利要求5所述當(dāng)歸水溶性提取物輸液劑的制備工藝，其特征在于所述pH調(diào)節(jié)劑為臨床上可接受的氫氧化鈉、碳酸氫鈉、磷酸二氫鈉或磷酸氫二鈉中的至少一種。
7.一種當(dāng)歸水溶性提取物凍干粉針劑的制備工藝，是將當(dāng)歸水溶性提取物加1～10倍量的注射用水?dāng)嚢杈鶆?，冷?4～72小時(shí)，過濾；加入當(dāng)歸水溶性提取物1％～10％量的賦形劑，攪拌溶解；再加入注射用水，用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)PH值至6.5～8.0，超濾膜過濾，微孔濾膜過濾，灌封，冷凍干燥，得當(dāng)歸凍干粉針劑。
8.如權(quán)利要求7所述當(dāng)歸水溶性提取物凍干粉針劑的制備工藝，其特征在于所述pH調(diào)節(jié)劑為臨床上可接受的氫氧化鈉、碳酸氫鈉、磷酸二氫鈉或磷酸氫二鈉中的至少一種；所述賦形劑為臨床上可接受甘露醇、葡萄糖、乳糖、山梨醇、蔗糖、麥芽糖、右旋糖苷，PEG、PVP中的至少一種。
9.一種當(dāng)歸水溶性提取物輸液劑的制備工藝，是將當(dāng)歸水溶性提取物加1～10倍量的注射用水?dāng)嚢杈鶆?，并用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)PH值至6.5～8.0，冷藏放置24～72小時(shí)，濾過、灌封、滅菌、放置，超濾膜過濾后得當(dāng)歸備用液；再取注射用滲透壓調(diào)節(jié)劑溶于適量注射用水，加入上述當(dāng)歸備用液，并添加注射用水，用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)PH值至6.5～8.0；微孔濾膜過濾至澄明，灌封，在100～115℃熱壓滅菌，得當(dāng)歸輸液。
10.如權(quán)利要求9所述當(dāng)歸水溶性提取物輸液劑的制備工藝，其特征在于所述pH調(diào)節(jié)劑為臨床上可接受的氫氧化鈉、碳酸氫鈉、磷酸二氫鈉或磷酸氫二鈉中的至少一種；所述滲透壓調(diào)節(jié)劑為臨床上可接受的葡萄糖、氯化鈉、果糖、木糖、甘露醇中的至少一種。
全文摘要
本發(fā)明提供一種當(dāng)歸水溶性提取物及其注射用制劑和制備工藝。本發(fā)明的當(dāng)歸水溶性提取物是將當(dāng)歸藥材用水或乙醇回流提取后，用水或乙醇沉淀，并回收除去濾液中的乙醇；再經(jīng)大孔吸附樹脂純化；先后用蒸餾水和30％～95％的乙醇分別洗脫大孔吸附樹脂，收集洗脫液，減壓除去洗脫液中的乙醇，濃縮而得。將當(dāng)歸水溶性提取物與一定比例臨床上可接受的pH調(diào)節(jié)劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、冷凍干燥賦形劑及注射用水結(jié)合，制備成當(dāng)歸注射劑、凍干粉針劑和輸液劑。本發(fā)明的當(dāng)歸水溶性提取物中，阿魏酸的含量大于25％，提高了藥效；本發(fā)明采用超濾法除菌，保證了藥物的穩(wěn)定性，更好地保證了藥品活性物質(zhì)的含量和療效。
文檔編號(hào)A61P29/00GK1857348SQ20061004184
公開日2006年11月8日 申請(qǐng)日期2006年2月22日 優(yōu)先權(quán)日2006年2月22日
發(fā)明者宋秉生, 張鐵軍, 孫維宏, 龔蘇曉, 何子清, 劉素香, 劉毅, 伏慶紅 申請(qǐng)人:蘭州大得利生物化學(xué)制藥(廠)有限公司