專利名稱：一種丹參水溶性成分的衍生物erjt－12及其抗腫瘤應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種丹參水溶性成分的衍生物及其在制備抗腫瘤藥物中的應用。
背景技術(shù)：
中藥丹參是唇形科鼠尾草屬植物丹參(Salvia miltiorrhizae Bge.，SM)的干燥根及根莖，性味苦微寒涼。丹參是我國傳統(tǒng)醫(yī)學中應用最廣泛的中藥之一，有悠久的臨床應用歷史。丹參首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，歷代本草多有收載?！吨腥A人民共和國藥典》(2000年版第一部)歸納丹參的功能與主治為活血通絡，祛瘀止痛，涼血消癰，清心除煩等。以丹參為主的制劑有復方丹參注射劑、復方丹參滴丸及丹參片。近十年來主要應用于下列疾病冠心病、肺心病、缺血性中風、慢性腎功能不全、急性腎炎、急慢性肝炎等。
丹參的化學成分主要分為脂溶性成分和水溶性成分。20世紀早期的研究主要集中在以丹參酮為代表的脂溶性成分方面，經(jīng)過幾十年的努力，取得了巨大成就。丹參酮具有多種生物活性，主要表現(xiàn)為保護心肌、抗腫瘤、抗炎、抑制血小板聚集和抗血栓形成等；對丹參水溶性成分的研究起步較晚，主要原因是受到分離材料及分離鑒定技術(shù)的限制，而且早期的工作主要圍繞在水溶性成分的分離和結(jié)構(gòu)鑒定方面，涉及生物活性的研究較少。從70年代中期開始，對丹參水溶性有效成分的研究成為研究丹參的重要內(nèi)容。丹參水溶性有效成分主要為丹酚酸，具有抗肝損傷和肝纖維化、保護心腦血管、防治動脈粥樣硬化等作用。遺憾的是，丹參水溶性成分抗腫瘤方面的研究仍然很少。
1991年，香港中文大學黃乃正從丹參水溶性成分中分離到天然的苯并呋喃類化合物5-(3-羥基丙基)-7-甲氧基-2-(3-甲氧基-4-羥基)-3-苯并[b]呋喃甲醛，它是腺苷A1受體拮抗劑，在治療心絞痛、心肌梗塞方面具有良好的應用前景。2004年，臺灣學者發(fā)現(xiàn)，該化合物能夠抑制多種人腫瘤細胞的生長，并能抑制腫瘤細胞微管蛋白的聚合。這一發(fā)現(xiàn)為探索丹參水溶性成分的抗腫瘤作用提供了重要參考。然而，上述化合物在丹參中的含量僅為0.1×10-6，因此，如果能夠以這個天然化合物為基礎，設計合成并篩選出抗腫瘤活性突出的新型衍生物，那是具有重要意義的事情。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種丹參水溶性成分的衍生物ERJT-12。
本發(fā)明的另一個目的是提供上述衍生物ERJT-12在制備抗腫瘤藥物中的應用。
本發(fā)明根據(jù)從丹參水溶性成分中分離到天然的化合物苯并呋喃類化合物5-(3-羥基丙基)-7-甲氧基-2-(3-甲氧基-4-羥基)-3-苯并[b]呋喃甲醛，設計合成衍生物ERJT-12，中文名稱為2-(3-甲氧基-4-羥基苯基)-4-甲?；?5-(2-甲氧基羧基乙基)-7-甲氧基苯并[b]呋喃；英文名稱為2-(3’-methoxy-4’-hydroxyphenyl)-4-formyl-5-(2’-(methoxycarbonyl)ethyl)-7-methoxybenzo[b]furan；分子式C21H20O7；分子量為384.38；熔點為110～112℃；淺黃色固體。結(jié)構(gòu)式如式(I) 該化合物以微管為靶點。體外藥理實驗表明，化合物ERJT-12對多種人腫瘤細胞，包括人乳腺癌MCF-7，人肺腺癌GLC82，人卵巢癌HeLa，胃腺癌MGC803，膀胱癌ECV304，口腔上皮癌KB-3-1和白血病CCRF/CEM細胞等，具有明顯的生長抑制作用；Wright-Giemsa染色顯示，化合物ERJT-12使乳腺癌MCF-7細胞阻滯于有絲分裂期(M期)；微管蛋白聚合活性實驗表明，化合物ERJT-12能夠抑制純化微管蛋白的聚合。
本發(fā)明的有益效果本發(fā)明的化合物結(jié)構(gòu)新穎，合成方法切實可行；該化合物具有顯著的體外抗腫瘤活性，特別是其作用靶點明確，即作用于細胞的微管蛋白，而目前能夠用于臨床治療的以微管蛋白為靶點的抗腫瘤藥物非常有限。


圖1為ERJT-12誘導人乳腺癌細胞MCF-7阻滯于有絲分裂期；圖2為ERJT-12對微管蛋白聚合活性的影響。其中，a為對照細胞，b為ERJT-12處理細胞。
具體實施例方式
實施例1化合物ERJT-12的合成將3.0mmol化合物ERJT-11溶于10mL DMF中，0℃下滴加20mmol POCl3，r.t.攪拌20分鐘，95℃加熱攪拌2小時，將反應液倒入3.8g醋酸鈉和4.6g氯化銨的30ml冰水溶液中，二氯甲烷(15mL×3)提取，飽和氯化鈉水溶液洗滌(5mL×3)，無水NaSO4干燥，用100～200目硅膠柱層析，乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2洗脫得產(chǎn)物ERJT-12。
ERJT-12的合成路線為 ERJT-12為淺黃色固體，產(chǎn)率為54％。產(chǎn)物經(jīng)元素分析、IR譜、1H NMR譜、MS譜測定。分析結(jié)果如下元素分析(計算值/測定值)(％)C 65.63/65.89，H 5.21/5.25；IR譜υ3442，1729，1642，1508，1405，1287，1141，858，829，815cm-1；1H NMR譜(500MHz，CDCl3)δ2.73(2H，t，J＝8.0Hz，CH2)，3.42(2H，t，J＝8.0Hz，CH2)，3.68(3H，s，OCH3)，4.00(3H，s，OCH3)，4.11(3H，s，OCH3)，5.88(1H，br，OH)，6.66(1H，s，ArH)，6.98(1H，d，J＝8.5Hz，ArH)，7.38(1H，d，J＝2.0Hz，ArH)，7.49(1H，dd，J＝8.0Hz，2.0Hz，ArH)，7.67(1H，s，ArH)，10.49(1H，s，CHO)；FAB-MS譜m/z(％)384(M，48％)。
實施例2發(fā)明所述化合物的體外實驗(1)化合物體外抗腫瘤細胞增殖實驗所選細胞株包括人乳腺癌MCF-7，人肺腺癌GLC82，人卵巢癌HeLa，胃腺癌MGC803，膀胱癌ECV304，口腔上皮癌KB-3-1和白血病CCRF/CEM細胞等。取對數(shù)生長期腫瘤細胞制成一定濃度的細胞懸液接種于96孔板中，每孔加入一定濃度的ERJT-12，對照孔不加化合物。培養(yǎng)72小時后加入一定量MTT，繼續(xù)培養(yǎng)4小時，棄去培養(yǎng)液，每孔加入200ul二甲基亞砜，用酶標儀測定570/630nm雙波長吸光光度值，計算抑制50％細胞生長的化合物濃度(IC50)。結(jié)果見表1。
(2)化合物誘導MCF-7細胞有絲分裂阻滯分別收集對照細胞和ERJT-12處理的細胞，用細胞固定液(甲醇∶冰醋酸＝3∶1)固定15分鐘，離心后重懸細胞，滴片于載玻片上晾干，用Giemsa染液染色15～20分鐘，用水沖洗掉多余的染液，晾干后于顯微鏡下觀察。處于有絲分裂期的細胞核膜消失，染色體松散地分布于胞漿中，而間期細胞具有完整的核膜。結(jié)果見圖1(放大300倍)a，對照細胞；b，ERJT-12處理細胞。
(3)微管蛋白聚合活性實驗迅速融化-80℃保存的純化微管蛋白溶液并放入冰浴，用聚合緩沖液稀釋到2mg/ml，加入GTP至1mmol/L。從冰浴上馬上取適量微管蛋白溶液加入比色杯，在紫外分光光度計350nm下調(diào)定為“0”點。然后將比色杯置于37℃保溫，每5分鐘測定吸光光度值一次，共45分鐘。隨著保溫時間的延長，微管蛋白逐漸聚合，表現(xiàn)為OD值上升，直至達到坪值。重復上述過程，在樣品中加入化合物ERJT-12或秋水仙素。根據(jù)記錄的OD值繪制變化曲線。結(jié)果見圖2。
表1ERJT-12體外抑制腫瘤細胞生長活性實驗

IC50為50％抑制濃度體外藥理實驗表明，化合物ERJT-12對多種人腫瘤細胞，包括人乳腺癌MCF-7，人肺腺癌GLC82，人卵巢癌HeLa，胃腺癌MGC803，膀胱癌ECV304，口腔上皮癌KB-3-1和白血病CCRF/CEM細胞等，具有明顯的生長抑制作用；Wright-Giemsa染色顯示，化合物ERJT-12使乳腺癌MCF-7細胞阻滯于有絲分裂期(M期)；微管蛋白聚合活性實驗表明，化合物ERJT-12能夠抑制純化微管蛋白的聚合。因此，化合物ERJT-12可用于制備抗腫瘤藥物。
權(quán)利要求
1.一種丹參水溶性成分的衍生物ERJT-12，其分子式為C21H20O7；分子量為384.38；熔點為110～112℃；結(jié)構(gòu)式如式(I)所示
2.權(quán)利要求1所述丹參水溶性成分的衍生物ERJT-12在制備抗腫瘤藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種丹參水溶性成分的衍生物ERJT－12及其抗腫瘤應用。本發(fā)明根據(jù)從丹參水溶性成分中分離到天然的化合物苯并呋喃類化合物5－(3－羥基丙基)－7－甲氧基－2－(3－甲氧基－4－羥基)－3－苯并[b]呋喃甲醛，設計合成衍生物ERJT－12，該化合物以微管為靶點，對多種人腫瘤細胞具有明顯的生長抑制作用，能使乳腺癌MCF－7細胞阻滯于有絲分裂期，并能夠抑制微管蛋白的聚合。
文檔編號A61P35/00GK1803786SQ200610033300
公開日2006年7月19日 申請日期2006年1月24日 優(yōu)先權(quán)日2006年1月24日
發(fā)明者冼勵堅, 楊華, 龐冀燕, 許遵樂 申請人:中山大學