專利名稱：一種丹酚酸a的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥、保健食品領(lǐng)域，具體涉及一種丹酚酸A的制備方法。
技術(shù)背景
丹參水溶性有效成分-丹酚酸研究進(jìn)展，基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，杜冠華2000，20(5) 10 14.報(bào)道丹酚酸是丹參水溶性成分中最重要的活性成分，丹酚酸A是酚酸類化合物， 見(丹酚酸A抗四氯化碳中毒致大鼠肝損傷和肝纖維化的作用，中藥藥理學(xué)報(bào)，胡義楊 1997,18(5) =478-480.)，但是其在丹參中的含量較低(百萬分之五左右，甚至沒有，中草藥現(xiàn)代研究(第二卷)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所編著2005，Ρ479-496· ！)，即使通過一系列的方法將其提取出來，也只能得到微量的丹酚酸Α，因此存在生產(chǎn)成本高，無法進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)的難題，限制了人們更好地開發(fā)利用。很多醫(yī)藥工作者希望將丹酚酸A進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)，進(jìn)而開發(fā)為醫(yī)藥制劑，但鑒于丹酚酸A來源以及其穩(wěn)定性原因至今還不能解決其實(shí)際生產(chǎn)問題。
現(xiàn)有技術(shù)公幵了多種丹酚酸A提取純化的工藝方法，如表1所示方法，這些方法都是從藥材進(jìn)行提取，但是丹酚酸A在藥材中的含量很低，加上工藝步驟復(fù)雜，成分損失大， 無法滿足工業(yè)化生產(chǎn)丹酚酸A的需求。
表1.現(xiàn)有技術(shù)中丹酚酸A的制備方法比較
專利公開號(hào)制備來源純化步驟CN1397276A水或醇藥材提取樹脂或聚酰胺層析，再用硅膠柱層析CN1513848A水溫浸離心、超濾、調(diào)酸、有機(jī)溶劑萃取再反相柱層析CNl 887849水或醇提柱層析、調(diào)節(jié)pH值、有機(jī)溶劑萃取CN101041620水或醇提柱層析、調(diào)節(jié)pH值、有機(jī)溶劑萃取CN101130498水或醇提蛋白吸附、解析、有機(jī)溶劑萃取
近幾年來的專利或申請(qǐng)(CN1830947A、CN101230003、CN100999470A等)涉及到經(jīng)過高溫高壓熱解反應(yīng)，進(jìn)而再通過常規(guī)的分離純化技術(shù)制備丹酚酸Α，但是由于起始原料均是丹參水或醇提取物，成分復(fù)雜，采用熱降解法所得反應(yīng)液更加復(fù)雜，造成后續(xù)產(chǎn)物分離極其困難，使得丹酚酸A收率極低，無法滿足工業(yè)化需求。
本發(fā)明人經(jīng)過大量的實(shí)驗(yàn)研究，提供了一種以丹參多酚酸鹽(國藥準(zhǔn)字 Ζ20050246)為原料制備丹酚酸的方法，該方法收率高，能夠滿足工業(yè)化生產(chǎn)。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種丹酚酸A轉(zhuǎn)化液的制備方法，其特征為以丹參多酚酸鹽為原料，加水溶解，調(diào)PH值至4. 0-6. 0，在120-130°C，0. 12-0. 20MPa下反應(yīng)4-5小時(shí)，溶液冷卻后，加酸調(diào)PH值至2-3。優(yōu)選方法為用檸檬酸三鈉調(diào)節(jié)PH至4. 0-6. 0，調(diào)pH值至2_3的酸選自醋酸、鹽酸或磷酸。
本發(fā)明提供的丹酚酸A轉(zhuǎn)化液的更優(yōu)選制備方法為將丹參多酚酸鹽加水稀釋至4濃度為1%，以丹參乙酸鎂計(jì)，用檸檬酸三鈉調(diào)PH至6.0，于125°C、0. 15MPa條件下轉(zhuǎn)化4 小時(shí)，冷卻至室溫后鹽酸調(diào)pH至2. 0 3. 0。
本發(fā)明提供的丹酚酸A轉(zhuǎn)化液的更優(yōu)選方法為加入保護(hù)劑，保護(hù)劑選自乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酸丁酯中的一種或幾種。
本發(fā)明提供的丹酚酸A轉(zhuǎn)化液的進(jìn)一步優(yōu)選方法為將丹參多酚酸鹽加水稀釋至濃度為1%，以丹參乙酸鎂計(jì)，用檸檬酸三鈉調(diào)PH至6.0，加入乙酸乙酯，于125°C、0. 15MPa 條件下轉(zhuǎn)化4小時(shí)，冷卻至室溫后鹽酸調(diào)pH至2. 0 3. 0。
本發(fā)明提供了一種丹酚酸A的制備方法，其特征在于將上述任一所述方法得到的丹酚酸A轉(zhuǎn)化液依次進(jìn)行非極性或弱極性大孔樹脂柱層析、萃取和硅膠層析。其中非極性或弱極性大孔樹脂選自HPD-100、HPD-826、ADS-8或CG161中的一種或幾種，萃取中的有機(jī)溶劑選自乙酸乙酯、乙酸丁酯、甲基叔丁基醚或乙醚中的一種或幾種。大孔樹脂的洗脫液為水和乙醇溶液，其中乙醇溶液的濃度范圍為20-40%，硅膠柱的洗脫液為正己烷-乙酸乙
本發(fā)明提供了一種優(yōu)選的丹酚酸A的制備方法，其特征在于將上述任一所述方法得到的丹酚酸A轉(zhuǎn)化液過HPD100樹脂柱，依次用水、25 %乙醇溶液洗脫雜質(zhì)，棄去，再用 40%乙醇溶液洗脫收集丹酚酸A洗脫液1，減壓濃縮至丹酚酸A濃度約25mg/ml ；濃縮液過 CG161樹脂柱，依次用20%乙醇溶液洗脫雜質(zhì)，棄去，再用35%乙醇溶液洗脫收集丹酚酸A 洗脫液2，減壓濃縮至丹酚酸A濃度約50mg/ml ；鹽酸調(diào)pH至2 3，以等體積乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，減壓濃縮，加2. 5倍量硅膠(80 120目)拌勻，干燥，濕法上硅膠柱 200 300目，2. 5倍量，以正己烷-乙酸乙酯6 4和5 5洗脫，收集正己烷-乙酸乙酯 5 5洗脫液，減壓濃縮至干，加水適量分散，再減壓濃縮，干燥，得丹酚酸A。其中丹酚酸A 的純度大于95.0%。
采用本發(fā)明方法得到的丹酚酸A的轉(zhuǎn)化率比已有中國專利Q00710001055.4)公開的轉(zhuǎn)化方法提高了近3倍，然后再通過大孔樹脂柱層析、萃取、硅膠柱，得到了可工業(yè)化生產(chǎn)的丹酚酸A，且該丹酚酸A純度高，保證了用藥的安全性。
本發(fā)明為制備丹酚酸A提供了一個(gè)簡便高效的方法。使用本發(fā)明提供的方法制備丹酚酸A，工藝穩(wěn)定、質(zhì)量可控、轉(zhuǎn)化率高，主要產(chǎn)物丹酚酸A總收率高，成本低；聯(lián)用分離純化技術(shù)，可大批量工業(yè)化制備高純度丹酚酸A。
本發(fā)明提供的丹酚酸A的制備方法，生產(chǎn)工藝簡單易控，批間產(chǎn)物變化較小，為制備丹酚酸A提供了切實(shí)可行的技術(shù)路線。與現(xiàn)有的技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下突出優(yōu)點(diǎn) (1)采用純度較高的丹參多酚酸鹽，降解產(chǎn)物和降解工藝方便控制；( 優(yōu)選采用保護(hù)劑， 大大提高丹酚酸A的摩爾轉(zhuǎn)化率，可達(dá)70%; C3)純化工藝?yán)梅聪嗯c正相相結(jié)合的方式能有效提高丹酚酸A的純度，保證用藥的安全性。


圖1 實(shí)施例1的HPLC圖
圖2 實(shí)施例6的HPLC圖
圖3 試驗(yàn)例3的PH穩(wěn)定圖具體實(shí)施方式
下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
實(shí)施例1.制備丹酚酸A轉(zhuǎn)化液
取丹參多酚酸鹽(以丹參乙酸鎂計(jì)含量大于80% ) 12g，加水1L，檸檬酸三鈉調(diào)節(jié) pH值至6. 0、置于高壓滅菌鍋中，125°C溫度，0. 15MPa,加熱4小時(shí)，溶液冷卻后，加鹽酸調(diào)pH 值至2 3，得到丹酚酸A轉(zhuǎn)化液；轉(zhuǎn)化液的HPLC分析表明，丹酚酸A的摩爾轉(zhuǎn)化率45 % (圖 1)。
實(shí)施例2.制備丹酚酸A
取實(shí)施例1的轉(zhuǎn)化液丹酚酸A轉(zhuǎn)化液過HPD100樹脂柱，依次用水洗脫10個(gè)柱體積，25%乙醇溶液洗脫8個(gè)柱體積，棄去，再用40%乙醇溶液洗脫10個(gè)柱體積，收集洗脫液 1，將洗脫液1減壓濃縮至丹酚酸A濃度25mg/ml，濃縮液過CG161樹脂柱，用20%乙醇溶液洗脫10個(gè)柱體積，棄去，再用35%乙醇溶液洗脫12個(gè)柱體積，收集洗脫液2，減壓濃縮至丹酚酸A濃度50mg/ml ；鹽酸調(diào)pH至2 3，以等體積乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，減壓濃縮，加2. 5倍量80 120目硅膠拌勻，干燥，濕法上200 300目硅膠柱，2. 5倍量，以正己烷-乙酸乙酯6 4洗脫30個(gè)柱體積，棄去，再用正己烷-乙酸乙酯5 5洗脫25個(gè)柱體積，收集洗脫液3，將洗脫液3減壓濃縮至干，加水適量分散，再減壓濃縮，干燥，得丹酚酸A。
實(shí)施例3.制備丹酚酸A轉(zhuǎn)化液
取丹參乙酸鎂10g，加水1L，加乙酸乙酯10ml，調(diào)節(jié)溶液PH值至6、置于高壓滅菌鍋中，125°C溫度，0. 15MPa,加熱4小時(shí)，溶液冷卻后，加鹽酸調(diào)pH值至2 3，得到丹酚酸A 轉(zhuǎn)化液，轉(zhuǎn)化液的HPLC分析表明，丹酚酸A的摩爾轉(zhuǎn)化率72%。
實(shí)施例4.制備丹酚酸A轉(zhuǎn)化液
與實(shí)施例1方法相同，原料為丹參乙酸鎂12g，加水1L，加乙酸丁酯10ml，調(diào)節(jié)溶液 PH值至6、置于高壓滅菌鍋中，125°C溫度，0. 15MPa，加熱4小時(shí)，溶液冷卻后，加鹽酸調(diào)pH 值至2 3，得到丹酚酸A轉(zhuǎn)化液。
實(shí)施例5.制備丹酚酸A
取實(shí)施例3轉(zhuǎn)化液，其它方法同實(shí)施例2。
實(shí)施例6.制備丹酚酸A轉(zhuǎn)化液
取丹參多酚酸鹽(YBZ07562005，以丹參乙酸鎂計(jì)含量大于80% )12g，加水1L，加乙酸乙酯10ml，檸檬酸三鈉調(diào)節(jié)pH值至6. 0、置于高壓滅菌鍋中，130°C溫度，0. 20MPa,加熱 4. 0小時(shí)，溶液冷卻后，加鹽酸調(diào)pH值至2 3，得到丹酚酸A轉(zhuǎn)化液；轉(zhuǎn)化液的HPLC分析表明，丹酚酸A的摩爾轉(zhuǎn)化率62. 3% (圖幻，此外產(chǎn)物中還含有丹參素、原兒茶醛、紫草酸。
實(shí)施例7.制備丹酚酸A轉(zhuǎn)化液
取丹參多酚酸鹽12g，加水1L，加乙酸丁酯10ml，檸檬酸三鈉調(diào)節(jié)pH值至6.0、置于高壓滅菌鍋中，120°C溫度，0. 12MPa,加熱5. 0小時(shí)，溶液冷卻后，加鹽酸調(diào)pH值至2 3， 得到丹酚酸A轉(zhuǎn)化液；轉(zhuǎn)化液的HPLC分析表明，丹酚酸A的摩爾轉(zhuǎn)化率66. 7%，此外產(chǎn)物中還含有丹參素、原兒茶醛、紫草酸等。
試驗(yàn)例1 不同工藝方法丹酚酸A轉(zhuǎn)化液的的摩爾轉(zhuǎn)化率
實(shí)驗(yàn)方法一份按照傳統(tǒng)工藝方法(專利C N101130498,實(shí)施例一)得到丹酚酸A，一份按照工藝方法(專利CN1830947A，實(shí)施例一)得到丹酚酸A，一份按照工藝方法(專利CN101230003A，實(shí)施例3中的方法3)得到丹酚酸A，一份按照工藝方法(專利 CN100999470A,實(shí)施例一)得到丹酚酸A，一份按照本申請(qǐng)工藝方法(本申請(qǐng)專利的實(shí)施例 6)得到丹酚酸A，按照內(nèi)標(biāo)法計(jì)算樣品中的丹酚酸A，計(jì)算丹酚酸A收率以評(píng)價(jià)不同工藝方法的優(yōu)劣，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。表2不同工藝方法丹酚酸A收率
權(quán)利要求
1.一種丹酚酸A轉(zhuǎn)化液的的制備方法，其特征在于以丹參多酚酸鹽為原料，加水溶解， 用檸檬酸三鈉調(diào)PH值至4. 0-6. 0，在120-130°C，0. 12-0. 20MPa下反應(yīng)4-5小時(shí)，溶液冷卻后，加醋酸、鹽酸或磷酸調(diào)PH值至2-3。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于丹參多酚酸鹽加水稀釋至濃度為(以丹參乙酸鎂計(jì))，用檸檬酸三鈉調(diào)pH至6. 0，于125°C、0. 15MPa條件下轉(zhuǎn)化4小時(shí)，冷卻至室溫后鹽酸調(diào)pH至2. 0 3. 0。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于加入保護(hù)劑，保護(hù)劑選自乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酸丁酯中的一種或幾種。
4.一種丹酚酸A的制備方法，其特征在于將權(quán)利要求1-3任一所述方法得到的丹酚酸 A轉(zhuǎn)化液依次進(jìn)行非極性或弱極性大孔樹脂柱層析、萃取和硅膠層析。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于非極性或弱極性大孔樹脂選自HPD-100、 HPD-826、ADS-8或CG161中的一種或幾種，萃取中的有機(jī)溶劑選自乙酸乙酯、乙酸丁酯、甲基叔丁基醚或乙醚中的一種或幾種。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的制備方法，其中大孔樹脂的洗脫液為水和乙醇溶液，其中乙醇溶液的濃度范圍為20-40%，硅膠柱的洗脫液為正己烷-乙酸乙酯。
7.根據(jù)權(quán)利要求6述的方法，其特征在于丹酚酸A轉(zhuǎn)化液過HPD100樹脂柱，依次用水洗脫10個(gè)柱體積，25%乙醇溶液洗脫8個(gè)柱體積，棄去，再用40%乙醇溶液洗脫10個(gè)柱體積，收集洗脫液1，將洗脫液1減壓濃縮至丹酚酸A濃度25mg/ml，濃縮液過CG161樹脂柱， 用20%乙醇溶液洗脫10個(gè)柱體積，棄去，再用35%乙醇溶液洗脫12個(gè)柱體積，收集洗脫液 2，減壓濃縮至丹酚酸A濃度50mg/ml ；鹽酸調(diào)pH至2 3，以等體積乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，減壓濃縮，加2.5倍量80 120目硅膠拌勻，干燥，濕法上200 300目硅膠柱， 2. 5倍量，以正己烷-乙酸乙酯6 4洗脫30個(gè)柱體積，棄去，再用正己烷-乙酸乙酯5 5 洗脫25個(gè)柱體積，收集洗脫液3，將洗脫液3減壓濃縮至干，加水適量分散，再減壓濃縮，干燥，得丹酚酸A。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于丹參多酚酸鹽加水稀釋至濃度為(以丹參乙酸鎂計(jì))，用檸檬酸三鈉調(diào)pH至6. 0，于125°C、0. 15MPa條件下轉(zhuǎn)化4小時(shí)，冷卻至室溫后鹽酸調(diào)pH至2. 0 3. 0，得丹酚酸A轉(zhuǎn)化液，丹酚酸A轉(zhuǎn)化液過HPD100樹脂柱，依次用水洗脫10個(gè)柱體積，25%乙醇溶液洗脫8個(gè)柱體積，棄去，再用40%乙醇溶液洗脫10個(gè)柱體積，收集洗脫液1，將洗脫液1減壓濃縮至丹酚酸A濃度25mg/ml，濃縮液過CG161樹脂柱，用20%乙醇溶液洗脫10個(gè)柱體積，棄去，再用35%乙醇溶液洗脫12個(gè)柱體積，收集洗脫液2，減壓濃縮至丹酚酸A濃度50mg/ml ；鹽酸調(diào)pH至2 3，以等體積乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，減壓濃縮，加2. 5倍量80 120目硅膠拌勻，干燥，濕法上200 300目硅膠柱，2. 5倍量，以正己烷-乙酸乙酯6 4洗脫30個(gè)柱體積，棄去，再用正己烷-乙酸乙酯 5 5洗脫25個(gè)柱體積，收集洗脫液3，將洗脫液3減壓濃縮至干，加水適量分散，再減壓濃縮，干燥，得丹酚酸A。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于丹參多酚酸鹽加水稀釋至濃度為(以丹參乙酸鎂計(jì))，加入乙酸乙酯，用檸檬酸三鈉調(diào)pH至6. 0，于125°C、0. 15MPa條件下轉(zhuǎn)化4 小時(shí)，冷卻至室溫后鹽酸調(diào)pH至2. 0 3. 0，得丹酚酸A轉(zhuǎn)化液，丹酚酸A轉(zhuǎn)化液過HPD100 樹脂柱，依次用水洗脫10個(gè)柱體積，25%乙醇溶液洗脫8個(gè)柱體積，棄去，再用40%乙醇溶液洗脫10個(gè)柱體積，收集洗脫液1，將洗脫液1減壓濃縮至丹酚酸A濃度25mg/ml，濃縮液過CG161樹脂柱，用20%乙醇溶液洗脫10個(gè)柱體積，棄去，再用35%乙醇溶液洗脫12個(gè)柱體積，收集洗脫液2，減壓濃縮至丹酚酸A濃度50mg/ml ；鹽酸調(diào)pH至2 3，以等體積乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，減壓濃縮，加2.5倍量80 120目硅膠拌勻，干燥，濕法上 200 300目硅膠柱，2. 5倍量，以正己烷-乙酸乙酯6 4洗脫30個(gè)柱體積，棄去，再用正己烷-乙酸乙酯5 5洗脫25個(gè)柱體積，收集洗脫液3，將洗脫液3減壓濃縮至干，加水適量分散，再減壓濃縮，干燥，得丹酚酸A。
10.權(quán)利要求4-9任一所述方法得到的丹酚酸A。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種丹酚酸A轉(zhuǎn)化液的制備方法，進(jìn)一步通過大孔樹脂柱層析、萃取、硅膠柱得到丹酚酸A的制備方法，采用本發(fā)明方法得到的丹酚酸A可工業(yè)化生產(chǎn)，且該丹酚酸A純度高，保證了用藥的安全性。本發(fā)明為制備丹酚酸A提供了一個(gè)簡便高效的方法。使用本發(fā)明提供的方法制備丹酚酸A，工藝穩(wěn)定、質(zhì)量可控、轉(zhuǎn)化率高，主要產(chǎn)物丹酚酸A總收率高，成本低；聯(lián)用分離純化技術(shù)，可大批量工業(yè)化制備高純度丹酚酸A。
文檔編號(hào)C07C69/732GK102531901SQ20101062091
公開日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2010年12月25日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月25日
發(fā)明者劉軍鋒, 劉珂, 許卉, 邵萌, 鄒曉麗, 韓飛 申請(qǐng)人:上海綠谷制藥有限公司