專利名稱：作為m的制作方法
技術領域：
本發(fā)明提供了式I化合物、其組合物和M4亞型毒蕈堿性受體的變構增效方法，該方法包括對患者給予有效量的式I化合物。另外，本發(fā)明涉及制備式I化合物的過程及其中間體。
背景技術：
本發(fā)明提供了化合物，它們是M4亞型毒蕈堿性受體的選擇性變構調(diào)控劑。M4毒蕈堿性受體據(jù)信在調(diào)控參與調(diào)節(jié)心境、嗜欲、注意力和認知的關鍵腦區(qū)域的突觸功能中起作用。其結果是，這提供了治療下列疾病的新的治療靶精神病；注意力障礙，例如注意缺陷多動癥(ADHD)；認知障礙，包括記憶喪失；和藥物成癮。M2和M4亞型毒蕈堿性受體還參與毒蕈堿激動劑-誘導的止痛效應，但是據(jù)信這類治療的副作用主要與M2受體活化有關。因而，選擇性調(diào)控M4受體的化合物將為神經(jīng)病性疼痛提供新的治療策略，而沒有所不希望的副作用。
與作用于神經(jīng)遞質(zhì)結合位點(原構(orthosteric)位點)的化合物不同，變構調(diào)控劑作用于受體上的不同位點。變構調(diào)控劑的使用在疾病的治療中提供了若干優(yōu)點。Christopoulos，Nature Reviews(2002)1198-210。例如，在飽和條件下(高濃度變構增效劑)，預計將沒有M4毒蕈堿性受體的過度刺激，因為它依賴于內(nèi)源性神經(jīng)遞質(zhì)供活化。其次，變構激動劑僅在內(nèi)源性激動劑的存在下才發(fā)揮它們的生理效應。其結果是，變構增效劑不太可能產(chǎn)生與過度膽堿能刺激有關的受體脫敏或減量調(diào)節(jié)的情況。最后，變構調(diào)控劑有可能顯示出更高的受體選擇性，尤其是原構結合位點在毒蕈堿性受體亞型之間是完全保守的。
目前，尚未報道過M4亞型毒蕈堿性受體的選擇性變構調(diào)控劑。因此，選擇性M4變構增效劑的開發(fā)將大大增強治療諸如精神病和疼痛的紊亂的能力，而沒有所不希望的副作用。因而，本發(fā)明提供了M4毒蕈堿性受體的一類變構調(diào)控劑、包含這些化合物的組合物和使用這些化合物的方法。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了式I化合物或其可藥用鹽， 其中m是1或2；n是0、1或2；X是價鍵、-O-、-SOp-、-C(O)-、-NR2-、-C(O)-NR2-或-NR2-C(O)-；p是0、1或2；R1是氫、羥基、C1-C4烷基、苯基、吡啶基、吡咯烷基、哌嗪基、嗎啉代基、噻唑基、咪唑基或1，3-二氧雜環(huán)戊烷基(dioxalanyl)；所述苯基、哌嗪基或噻唑基可以任選被一個選自下組的取代基取代鹵代基或C1-C2烷基；其中當p是0時，或當X是-O-、-NR2或-NR2-C(O)-時，n不能是0；R2是氫或C1-C2烷基；所述C1-C2烷基可以任選被一個羥基取代。
式I化合物是毒蕈堿性受體增效劑。具體而言，式I化合物是M4亞型毒蕈堿性受體的變構增效劑。因為這些化合物增強與M4受體活化有關的生理效應，所以這些化合物可用于治療涉及不適當?shù)腗4受體活化的紊亂。這些紊亂包括精神病(特別是精神分裂癥)；認知障礙(例如記憶喪失)；注意力障礙(例如注意缺陷多動癥)；和疼痛(特別是神經(jīng)病性疼痛)。
在一種實施方案中，本發(fā)明提供了藥物組合物，包含作為活性成分的式I化合物或其可藥用鹽以及或多種可藥用載體、稀釋劑或賦形劑。
在其它實施方案中，本發(fā)明涉及制備式I化合物的方法及其中間體。
在另一種實施方案中，本發(fā)明提供了通過使受體與式I化合物或其可藥用鹽接觸來選擇性增效M4受體的方法。
在另一種實施方案中，本發(fā)明提供了治療與M4亞型毒蕈堿性受體有關的紊亂的方法，該方法包括對有需要的患者給予有效量的式I化合物。也就是說，本發(fā)明提供了式I化合物或其藥物組合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療與M4毒蕈堿性受體有關的紊亂。本發(fā)明還提供了用在療法中的式I化合物。
在與M4毒蕈堿性受體有關的紊亂中，精神病、疼痛、注意力障礙和認知障礙(例如記憶喪失)是特別重要的。
因而，在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供了治療疼痛的方法，該方法包括對有需要的患者給予有效量的式I化合物或其可藥用鹽。
在另一種優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供了治療精神病的方法，該方法包括對有需要的患者給予有效量的式I化合物或其可藥用鹽。
在另一種優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供了治療認知障礙的方法，該方法包括對有需要的患者給予有效量的式I化合物或其可藥用鹽。
發(fā)明詳述用在制備例和實施例中的術語和縮寫具有它們的通常含義，另有指定除外。例如，“℃”表示攝氏度；“N”表示當量濃度；“mol”表示摩爾；“h”表示小時；“eq”表示當量；“g”表示克；“L”表示升；“M”表示摩爾濃度；“鹽水”表示飽和氯化鈉水溶液；“J”表示赫茲；“ES”表示電霧化；“MS”表示質(zhì)譜；“NMR”表示核磁共振光譜；“TLC”表示薄層色譜；“ACN”表示乙腈；“DMF”表示N，N-二甲基甲酰胺；“DMSO”表示二甲基亞砜；“Et2O”表示乙醚；“EtOAc”表示乙酸乙酯；“MeOH”表示甲醇；“EtOH”表示乙醇；“iPrOH”表示異丙醇；“TEA”表示三乙胺；“TFA”表示三氟乙酸；“THF”表示四氫呋喃。
本文所用的術語“C1-C4烷基”表示1至4個碳原子的直鏈或支鏈一價飽和脂族鏈，包括但不限于甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基和叔丁基。術語“C1-C3烷基”和“C1-C2烷基”涵蓋在“C1-C4烷基”的定義內(nèi)。
“鹵代基”、“鹵素”和“鹵化物”代表氯、氟、溴或碘原子。優(yōu)選的鹵素包括氯和氟。
本領域技術人員將清楚，當X是-NR2-C(O)-時，式I化合物如下所繪 某些本發(fā)明化合物可能存在立體異構體。關于相對于甘油醛異構體的立體化學，本文采用(R)-與(S)-的Cahn-Prelog-Ingold指定和L-與D-的指定來表示具體的異構體。具體的立體異構體可以通過立體有擇合成來制備，或者可以通過本領域已知的技術進行拆分和回收，例如手性固定相色譜法，和由用于該目的的試劑所生成的加成鹽的分步重結晶?？捎糜诓鸱趾突厥站唧w立體異構體的方法是本領域已知的，參見E.L.Eliel和S.H.Wilen的“Stereochemistry of Organic Compounds”(Wiley-Interscience 1994)以及J.Jacques，A.Collet和S.H.Wilen的“Enantiomers，Racemates，andResolutions”(Wiley-Interscience 1981)。應當理解，本發(fā)明涵蓋所有對映異構體和對映異構體混合物，包括外消旋物。
技術人員將認識到，某些本發(fā)明化合物可以存在互變異構體。應當理解，式I化合物的互變異構形式也涵蓋在本發(fā)明內(nèi)。
本發(fā)明包括式I化合物的可藥用鹽。本發(fā)明化合物可具有堿性足夠的官能團，它們能夠與任意一種無機和有機酸反應，生成可藥用鹽。
本文所用的術語“可藥用鹽”表示上式I化合物的鹽。應當被認識到的是，構成本發(fā)明任意鹽一部分的具體抗衡離子的屬性通常不是關鍵，只要該鹽作為整體是藥理學上可接受的，并且只要該抗衡離子不對作為整體的鹽產(chǎn)生不可取的性質(zhì)。
本文所述的式I化合物和中間體與多種有機和無機酸生成可藥用酸加成鹽，包括經(jīng)常用在藥物化學中的生理學上可接受的鹽。這類鹽也是本發(fā)明的一部分?？伤幱盟峒映甥}由可藥用酸生成，這是本領域所熟知的。這類鹽包括Journal of Pharmaceutical Science，66，2-19(1977)中列出的可藥用鹽，它們是技術人員已知的。另見The Handbook ofPharmaceutical Salts；Properties，Selection，and Use.P.H.Stahl和C.G.Wermuth編輯，Verlag，Zurich(瑞士)2002。
用于生成這類鹽的典型的無機酸包括鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、硫酸、磷酸、連二磷酸(hypophosphoric acid)、偏磷酸、焦磷酸等。也可以使用從有機酸衍生的鹽，所述酸例如是脂族一元與二元羧酸、苯基取代的鏈烷酸、羥基鏈烷酸與羥基鏈烷二酸、芳族酸、脂族與芳族磺酸。這類可藥用鹽因而包括乙酸鹽、苯基乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙烯酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、鄰-乙酰氧基苯甲酸鹽、萘-2-苯甲酸鹽、溴化物、異丁酸鹽、苯基丁酸鹽、α-羥基丁酸鹽、丁炔-1，4-二甲酸鹽、己炔-1，4-二甲酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、肉桂酸鹽、檸檬酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、乙醇酸鹽、庚酸鹽、馬尿酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、羥基馬來酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、煙酸鹽、異煙酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、對苯二酸鹽、丙炔酸鹽、丙酸鹽、苯基丙酸鹽、水楊酸鹽、癸二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、苯磺酸鹽、對溴苯磺酸鹽、氯苯磺酸鹽、乙磺酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、甲磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、萘-1，5-磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、酒石酸鹽等。
本文所用的術語“患者”表示患有一種或多種與M4受體有關的紊亂的哺乳動物。豚鼠、狗、貓、大鼠、小鼠、馬、牛、羊和人是該術語含義范圍內(nèi)哺乳動物的實例。將被理解的是，最優(yōu)選的患者是人。
也被認識到的是，本領域技術人員可以通過用有效量的式I化合物治目前患有紊亂或者預防性處置患有紊亂的患者來影響這些紊亂。因而，術語“治療”旨在表示所有其中可能存在延緩、中斷、阻止、控制或終止本文所述紊亂進展的過程，并且意欲包括這類紊亂的預防性處置，但是不一定指所有紊亂癥狀的完全消除。
本文所用的術語式I化合物的“有效量”表示有效治療本文所述紊亂的量。
關于藥物活性化合物的任意基團，有些基團在它們的終應用中是優(yōu)選的。下文討論本發(fā)明的優(yōu)選實施方案。
(a)m是1；(b)m是2；(c)n是0；(d)n是1；(e)n是2；(f)X是價鍵；(g)X是-C(O)-NR2-；(h)X是-O-；(i)R1是氫；(j)R1是羥基；(k)R1是C1-C4烷基；(l)R1是吡啶基；(m)R1是哌嗪基；(n)R1是嗎啉代基；(o)R2是氫。
本發(fā)明的優(yōu)選化合物包括3-氨基-5-氯-6-甲氧基-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺；3-氨基-5-氯-4-甲基-6-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺。
技術人員將領會到，通過組合上述的優(yōu)選實施方案，或者參照本文給出的實施例，可以選擇其它優(yōu)選的實施方案。
流程本文公開的化合物可以按照下列流程制備。流程、制備例和實施例決不應當被理解為以任意方式限制如何可以制備化合物。
技術人員將領會到，某些取代基的引入將在式I化合物中產(chǎn)生不對稱性。本發(fā)明涵蓋所有的立體異構體、對映異構體和對映異構體混合物、包括外消旋物和非對映異構體。優(yōu)選含有手性中心的本發(fā)明化合物是單一的對映異構體。
將被本領域技術人員認識到的是，可以改變下列流程中的個體步驟，以提供式I化合物。生成式I化合物所需的具體步驟順序依賴于被合成的具體化合物、起始化合物和被取代部分的相對穩(wěn)定性。為清楚起見在下列流程中未顯示一些取代基，這不打算以任意方式限制流程的教導。
流程I 在第一種合成方案(流程I)中，使氯乙酰氯與環(huán)丙胺在堿如TEA或吡啶的存在下、在質(zhì)子惰性溶劑如乙醚或二氯甲烷中、在0℃至室溫的溫度下反應，得到中間體酰胺化合物1a。將化合物1a在極性質(zhì)子惰性溶劑如二氯甲烷中用硫羥乳酸和堿如TEA處理，得到中間體酰胺化合物1b。在0℃至室溫下，使化合物1b在低級(C1-C4)鏈烷醇如MeOH和濃氫氧化銨溶液中水解，得到硫醇試劑化合物1c。產(chǎn)物可以通過本領域熟知的技術進行分離和純化，所述技術例如有沉淀、過濾、萃取、蒸發(fā)、研制、色譜法和重結晶。
流程II 在流程II的另一種合成方案中，將2，5-二氯-4-甲基煙腈用醇化物陰離子(由鏈烷醇和堿、例如氫化鈉或雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰生成)在鏈烷醇溶劑中、在0℃至室溫下處理30分鐘至24小時，得到置換產(chǎn)物2a和2b的混合物。將2a和2b的混合物用2至4當量的N-氯代琥珀酰亞胺在冰乙酸中、在100至140℃下、在密閉反應容器中氯化24至48小時，得到氯化中間體混合物3a和3b。在適宜堿如鈉、鉀或鋰的醇化物(其中醇化物是低分子量的醇化物)的存在下，將氯化混合物3a和3b用化合物1c處理。堿溶于鏈烷醇如甲醇中。堿的鏈烷醇溶液優(yōu)選是甲醇鈉的MeOH溶液。反應在100至140℃下、在密閉反應容器中進行30分鐘至4小時，生成式I化合物。產(chǎn)物可以通過上述技術進行分離和純化。
流程III 在流程III中，將4-甲基-2，5，6-三氯-煙腈用醇化物陰離子(由鏈烷醇和堿如氫化鈉或雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰生成)在鏈烷醇溶劑中、在0℃至室溫下處理30分鐘至24小時，得到置換產(chǎn)物4。將中間體4用流程I的試劑化合物1c處理，得到式I。產(chǎn)物可以通過上述技術進行分離和純化。
流程IV 在流程IV中，將4-甲基-2，5，6-三氯-煙腈用低分子量的鋰、鈉或鉀的硫醇化物(C1-C4)如甲硫醇鈉在低分子量鏈烷醇(C1-C4)如MeOH中處理，得到置換產(chǎn)物5。使中間體5與流程I的化合物1c反應，得到化合物6。將化合物6在低分子量鏈烷醇(C1-C4)中如MeOH中、在室溫至40℃下用例如過氧化氫進行氧化，反應時間為12至48小時，得到亞砜7。如流程I或II那樣，用醇化物在鏈烷醇中使亞砜7進行置換，得到式I化合物。產(chǎn)物可以通過上述技術進行分離和純化。
實施例實施例13-氨基-5-氯-6-甲氧基-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺 A.2-氯-N-環(huán)丙基-乙酰胺在0℃下，通過加液漏斗向環(huán)丙胺(50.0g，0.876mol)的二氯甲烷(700ml)溶液中滴加2-氯乙酰氯(49.4g，0.436mol)。將所得混合物在0℃下攪拌2小時，然后通過Celite墊過濾。濃縮濾液至橙色固體，在500ml己烷中制成漿狀，然后過濾。收集橙色固體，在真空室內(nèi)干燥30分鐘。得到標題化合物，為橙色固體(58.12g，99％)。質(zhì)量(m/z)134.1(M++1).
B.硫羥乙酸S-環(huán)丙基氨甲酰基甲基酯.
在0℃下，向2-氯-N-環(huán)丙基-乙酰胺(58.1g，0.435mol)的二氯甲烷(700ml)溶液中加入硫羥乳酸(49.65g，0.652mol)。將混合物在0℃下攪拌5分鐘，然后非常緩慢地加入TEA(88.0g，0.870mol)(放熱反應)。將混合物在0℃下攪拌2小時，然后倒在700ml水上，同時攪拌。水層用5N HCl酸化至pH2，振蕩和分離各層。水層用二氯甲烷萃取(2×400ml)。合并有機層，用鹽水洗滌，然后干燥(無水硫酸鎂)，過濾，濃縮，得到標題化合物，為黃橙色固體(74.5g，99％)。質(zhì)量(m/z)174.1(M++1).
C.N-環(huán)丙基-2-巰基-乙酰胺.
向硫羥乙酸S-環(huán)丙基氨甲酰基甲基酯(17.0g，98.14mmol)的MeOH(200ml)溶液中加入28％氫氧化銨的水溶液(17ml)。將所得溶液于室溫攪拌1小時。將反應溶液倒在水(400ml)上，用5N HCl酸化至pH2。溶液用EtOAc萃取(6×200ml)，合并有機層，干燥(無水硫酸鎂)，過濾，濃縮，得到標題化合物，為淺橙色固體(12.87g，99％)。質(zhì)量(m/z)132.1(M++1).
D.2，5-二氯-6-甲氧基-4-甲基-煙腈.
向2，5，6-三氯-4-甲基-煙腈(11.0g，49.67mmol，Tetrahedron，1977，33，113-117)在MeOH(125ml)中的漿狀物中加入甲醇鈉溶液(25％wt.MeOH溶液)(11.92ml，52.15mmol)。將反應混合物在0℃下攪拌30分鐘，然后于室溫攪拌1小時。加入水(300ml)淬滅反應物，生成濃厚的白色沉淀。加入另外200ml水，將混合物在0℃下攪拌10分鐘。過濾收集沉淀，干燥(真空烘箱，16小時，60℃)，得到標題化合物，為灰白色固體(10.05g，93％)。質(zhì)量(m/z)217.0(M++1).
E.3-氨基-5-氯-6-甲氧基-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺向N-環(huán)丙基-2-巰基-乙酰胺(6.65g，50.68mmol)的MeOH(100ml)溶液中加入甲醇鈉溶液(25％wt.MeOH溶液)(11.59ml，50.68mmol)。將所得溶液于室溫攪拌10分鐘，然后用2，5-二氯-6-甲氧基-4-甲基-煙腈(10.0g，46.07mmol)處理。將反應容器密封，在100℃下加熱2小時。將反應混合物冷卻至室溫，倒在500ml冷水上。生成濃厚的白色沉淀。將混合物在0℃下攪拌10分鐘，然后過濾收集固體。將松散的白色固體(標題化合物)置于60℃真空烘箱中干燥過夜(7.74g，54％)。質(zhì)量(m/z)312.0(M++1).
實施例23-氨基-5-氯-6-羥基-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺 向3-氨基-5-氯-6-甲氧基-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺(5.0g，16.04mmol)的DMF(45ml)溶液中加入固體95％甲硫醇鈉(1.30g，17.64mmol)。將反應容器密封，在100℃下加熱5小時。將反應物冷卻至室溫，加入水(75ml)淬滅。向混合物加入5N HCl酸化至pH2。逐漸生成濃厚的白色沉淀，在0℃下攪拌10分鐘，然后過濾收集。將固體在60℃真空烘箱中干燥過夜，得到標題化合物，為白色固體(4.13g，86％)。質(zhì)量(m/z)298.0(M++1).
實施例33-氨基-5-氯-6-異丙氧基-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺 A.2-氯-6-異丙氧基-4-甲基-煙腈與6-氯-2-異丙氧基-4-甲基-煙腈的1∶1混合物在0℃下，向2，6-二氯-4-甲基煙腈(0.500g，2.67mmol)在4ml 2-丙醇中的漿狀物中滴加雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰溶液(1.0M己烷溶液)(2.67ml，2.67mmol)。將所得混合物在0℃下攪拌20分鐘，然后于室溫攪拌5小時。加入水(10ml)淬滅反應物。使混合物在水與EtOAc(各75ml)之間分配，振蕩和分離各層。將有機層用鹽水洗滌，然后干燥(無水硫酸鎂)，過濾，濃縮，得到標題化合物(黃褐色固體，0.510g，91％收率)，為區(qū)域異構體的1∶1混合物(基于NMR數(shù)據(jù))。質(zhì)量(m/z)211.0(M++1).
B.2，5-二氯-6-異丙氧基-4-甲基-煙腈與5，6-二氯-2-異丙氧基-4-甲基-煙腈的1∶1混合物向厚玻璃制帶螺帽的反應試管中加入2-氯-6-異丙氧基-4-甲基-煙腈與6-氯-2-異丙氧基-4-甲基-煙腈的1∶1混合物(0.510g，2.42mmol)、冰乙酸(7ml)和N-氯代琥珀酰亞胺(1.29g，9.68mmol)。密封反應試管，將混合物在125℃下加熱48小時。將反應混合物冷卻至室溫，在水與EtOAc(各100ml)之間分配。振蕩和分離各層。將有機層依次用飽和碳酸氫鈉水溶液(100ml)、水(100ml)和鹽水(100ml)洗滌。將有機層干燥(無水硫酸鎂)，過濾，濃縮，得到褐色的油。進行快速色譜法(5∶1己烷∶EtOAc)，得到標題化合物(白色固體，0.400g，67％收率)，為區(qū)域異構體的1∶1混合物(基于NMR數(shù)據(jù))。質(zhì)量(m/z)243.0(M+-1).
C.3-氨基-5-氯-6-異丙氧基-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺向N-環(huán)丙基-2-巰基-乙酰胺(0.498g，3.80mmol)的MeOH(5ml)溶液中加入甲醇鈉溶液(25％wt.MeOH溶液)(0.652ml，2.85mmol)。將所得溶液于室溫攪拌30分鐘，然后用2，5-二氯-6-異丙氧基-4-甲基-煙腈與5，6-二氯-2-異丙氧基-4-甲基-煙腈的1∶1混合物(0.400g，1.63mmol)處理。將反應試管密封，在100℃下加熱2.5小時，冷卻至室溫。將反應混合物倒在水(60ml)上，然后用EtOAc萃取(2×40ml)。合并有機層，用鹽水(50ml)洗滌，干燥(無水硫酸鎂)，過濾，濃縮，得到黃棕色固體。進行快速色譜法(1.5∶1己烷∶EtOAc)，得到標題化合物，為黃褐色固體(20mg)。質(zhì)量(m/z)340.1(M++1).
實施例43-氨基-5-氯-6-(2-甲氧基-乙氧基)-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺 A.2-氯-6-(2-甲氧基-乙氧基)-4-甲基-煙腈與6-氯-2-(2-甲氧基-乙氧基)-4-甲基-煙腈的1∶1混合物在0℃下，向2，6-二氯-4-甲基煙腈(0.500g，2.67mmol)在6ml 2-甲氧基甲醇中的漿狀物中滴加雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰溶液(1.0M己烷溶液)(2.67ml，2.67mmol)。將所得混合物在0℃下攪拌20分鐘，然后于室溫攪拌5小時。加入水(10ml)淬滅反應物。使混合物在水與EtOAc(各75ml)之間分配，振蕩和分離各層。將有機層用鹽水洗滌，然后干燥(無水硫酸鎂)，過濾，濃縮，進行快速色譜法(5∶1己烷∶EtOAc)，得到標題化合物(白色固體，0.530g，88％收率)，為區(qū)域異構體的1∶1混合物(基于NMR數(shù)據(jù))。質(zhì)量(m/z)227.0(M++1).
B.2，5-二氯-6-(2-甲氧基-乙氧基)-4-甲基-煙腈與5，6-二氯-2-(2-甲氧基-乙氧基)-4-甲基-煙腈的1∶1混合物向厚玻璃制帶螺帽的反應試管中加入2-氯-6-(2-甲氧基-乙氧基)-4-甲基-煙腈與6-氯-2-(2-甲氧基-乙氧基)-4-甲基-煙腈的1∶1混合物(0.450g，1.99mmol)、冰乙酸(8ml)和N-氯代琥珀酰亞胺(1.06g，7.94mmol)。密封反應試管，將混合物在110℃下加熱24小時。將反應混合物冷卻至室溫，在水與EtOAc(各100ml)之間分配。振蕩和分離各層。將有機層依次用飽和碳酸氫鈉水溶液(3×50ml)和水(100ml)洗滌。將有機層干燥(無水硫酸鎂)，過濾，濃縮，得到標題化合物，為黃橙色的油(0.453g，87％收率)，為區(qū)域異構體的1∶1混合物(基于NMR數(shù)據(jù))。質(zhì)量(m/z)261.0(M+-1).
C.3-氨基-5-氯-6-(2-甲氧基-乙氧基)-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺向N-環(huán)丙基-2-巰基-乙酰胺(0.452g，3.45mmol)的MeOH(5ml)溶液中加入甲醇鈉溶液(25％wt.MeOH溶液)(0.589ml，2.58mmol)。將所得溶液于室溫攪拌30分鐘，然后用2，5-二氯-6-(2-甲氧基-乙氧基)-4-甲基-煙腈與5，6-二氯-2-(2-甲氧基-乙氧基)-4-甲基-煙腈的1∶1混合物(0.450g，1.72mmol)處理。將反應試管密封，在100℃下加熱2.5小時，冷卻至室溫。將反應混合物倒在水(60ml)上，然后用EtOAc萃取(2×40ml)。合并有機層，用鹽水(50ml)洗滌，干燥(無水硫酸鎂)，過濾，濃縮，得到黃棕色固體。進行快速色譜法(1.5∶1己烷∶EtOAc)，得到標題化合物，為奶油色固體(53mg，10％)。質(zhì)量(m/z)356.1(M++1).
實施例53-氨基-5-氯-6-(2-羥基-乙氧基)-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺 A.2，5-二氯-4-甲基-6-甲硫基-煙腈在0℃下，向2，5，6-三氯-4-甲基-煙腈(10.0g，45.2mmol，Tetrahedron，1977，33，113-117)在MeOH(150ml)中的漿狀物中加入固體甲硫醇鈉(3.33g，45.2mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時，然后于室溫攪拌1小時。加入水(250ml)淬滅反應物。使混合物在水與EtOAc(各500ml)之間分配，振蕩和分離各層。將有機層干燥(無水硫酸鎂)，過濾，濃縮，得到標題化合物，為黃色固體(10.5g，99％)。質(zhì)量(m/z)233.0(M++1).
B.3-氨基-5-氯-4-甲基-6-甲硫基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺向硫羥乙酸S-環(huán)丙基氨甲?；谆?8.58g，49.5mmol)與MeOH(100ml)的混合物中加入甲醇鈉溶液(25％wt.MeOH溶液)(15.4ml，67.5mmol)。將所得溶液于室溫攪拌20分鐘，然后用2，5-二氯-4-甲基-6-甲硫基-煙腈(10.5g，45.0mmol)處理。將混合物在100℃下回流2小時，冷卻至室溫，加入水(100ml)淬滅。使混合物在水與EtOAc(各300ml)之間分配，振蕩和分離各層。水層用EtOAc萃取(2×150ml)。合并有機層，用鹽水(200ml)洗滌，干燥(無水硫酸鎂)，過濾，濃縮，得到橙色固體。進行快速色譜法(1∶1己烷∶EtOAc)，得到標題化合物，為黃色固體(8.4g，57％)。質(zhì)量(m/z)328.1(M++1).
C.3-氨基-5-氯-6-甲基亞磺?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺向3-氨基-5-氯-4-甲基-6-甲硫基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺(7.5g，22.87mmol)在冰乙酸(75ml)中的漿狀物中加入30％過氧化氫的水溶液(2.85ml，25.16mmol)中。將混合物在35℃下攪拌16小時，冷卻至室溫，倒在水(300ml)上。生成亮黃色沉淀。將混合物在0℃下攪拌1小時，然后過濾收集固體，在60℃下真空干燥3小時，得到標題化合物，為亮黃色固體(5.58g，71％)。質(zhì)量(m/z)344.1(M++1).
D.(3-氨基-5-氯-2-環(huán)丙基氨甲?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-6-基氧基)-乙酸甲酯于室溫，向乙醇酸甲酯(6.55g，72.71mmol)的THF(35ml)溶液中滴加雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰溶液(1.0M己烷溶液)(36.35ml，36.35mmol)。將所得混合物攪拌20分鐘，然后用3-氨基-5-氯-6-甲基亞磺?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺(5.0g，14.54mmol)處理。將反應容器密封，在90℃下加熱3小時。將反應物冷卻至室溫，加入水(50ml)淬滅。使混合物在水與EtOAc(各250ml)之間分配，振蕩和分離各層。水層用2×100mlEtOAc萃取。合并有機層，干燥(無水硫酸鎂)，過濾，濃縮，進行快速色譜法(1∶1己烷∶EtOAc)，得到標題化合物，為黃色固體(3.1g，58％)。質(zhì)量(m/z)370.1(M++1)，368.0(M+-1).
E.3-氨基-5-氯-6-(2-羥基-乙氧基)-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺在-78℃下，向(3-氨基-5-氯-2-環(huán)丙基氨甲?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-6-基氧基)-乙酸甲酯(0.250g，0.676mmol)的THF(3ml)溶液中滴加二異丁基氫化鋁溶液(1.5M甲苯溶液)(1.35ml，2.03mmol)。將反應溶液在-78℃下攪拌30分鐘，然后于室溫攪拌1小時。如果根據(jù)TLC(2∶1EtOAc∶己烷)反應是不完全的，可以加入另外1.0eq二異丁基氫化鋁(1.5M甲苯溶液)(0.45ml，0.676mmol)。15分鐘后，加入3ml MeOH∶水的1∶1混合物淬滅反應物。使反應混合物在水與EtOAc(各50ml)之間分配，振蕩和分離各層。水層用2×50ml EtOAc萃取，合并有機層，干燥(無水硫酸鎂)，過濾，濃縮，得到黃色固體。將該固體溶于2∶1EtOAc∶己烷，一旦溶解，生成黃色沉淀。過濾收集黃色固體，在60℃真空烘箱中干燥過夜，得到標題化合物，為黃色固體(0.155g，67％)。質(zhì)量(m/z)342.1(M++1).
實施例63-氨基-5-氯-4-甲基-6-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺 于室溫，向4-(2-羥基乙基)嗎啉(5.72g，43.62mmol)的THF(25ml)溶液中滴加雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰溶液(1.0M己烷溶液)(21.80ml，21.80mmol)。將反應混合物攪拌15分鐘，然后用3-氨基-5-氯-6-甲基亞磺?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺(3.0g，8.72mmol)處理。將反應容器密封，在80℃下加熱3小時。將反應物冷卻至室溫，加入水(200ml)淬滅。生成黃色沉淀。將混合物用水稀釋至350ml，冷卻至0℃。過濾收集黃色沉淀。將固體在100ml 3∶1己烷∶EtOAc中制成漿狀物，攪拌10分鐘。過濾混合物，收集固體，在真空烘箱中干燥過夜，得到標題化合物，為黃色固體(2.11g，59％)。質(zhì)量(m/z)411.1(M++1)，409.1(M+-1).
實施例73-氨基-5-氯-4-甲基-6-[2-(4-甲基-噻唑-5-基)-乙氧基]-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺 于室溫，向4-甲基-5-噻唑-乙醇(0.375g，2.62mmol)的THF(1ml)溶液中滴加雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰溶液(1.0M己烷溶液)(1.74ml，1.74mmol)。將反應混合物攪拌15分鐘，然后用3-氨基-5-氯-6-甲基亞磺?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺(0.300g，0.872mmol)處理。將反應混合物于室溫攪拌18小時，然后加入水(5ml)淬滅。使混合物在水與EtOAc(各40ml)之間分配。加入5ml 1N HCl，振蕩和分離各層。水層用EtOAc(50ml)萃取，合并有機層，干燥(無水硫酸鎂)，過濾，濃縮，進行快速色譜法(1∶2己烷∶EtOAc)，得到標題化合物，為淡黃色固體(0.094g，25％)。質(zhì)量(m/z)423.1(M++1)，421.1(M+-1).
實施例8(3-氨基-5-氯-2-環(huán)丙基氨甲?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-6-基氧基)-乙酸二甲基酰胺
A.(3-氨基-5-氯-2-環(huán)丙基氨甲?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-6-基氧基)-乙酸向(3-氨基-5-氯-2-環(huán)丙基氨甲?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-6-基氧基)-乙酸甲酯(0.940g，2.54mmol)的THF(20ml)溶液中加入95％三甲基甲硅烷醇鉀(1.63g，12.71mmol)。將所得混合物于室溫攪拌2小時，然后加入水(50ml)淬滅。加入1N HCl酸化混合物至pH2，然后用EtOAc(100ml)萃取。將有機層用鹽水(40ml)洗滌，然后干燥(無水硫酸鎂)，過濾，濃縮，得到標題化合物，為黃色固體(0.693g，77％)。質(zhì)量(m/z)355.9(M++1)，354.0(M+-1).
B.(3-氨基-5-氯-2-環(huán)丙基氨甲?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-6-基氧基)-乙酸二甲基酰胺向(3-氨基-5-氯-2-環(huán)丙基氨甲酰基-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-6-基氧基)-乙酸(0.200g，0.562mmol)在THF∶DMF(各1.5ml)的1∶1混合物中的溶液中加入1-羥基苯并三唑水合物(0.099g，0.731mmol)、N，N-二異丙基乙胺(0.109g，0.843mmol)、1-[3-(二甲氨基)-丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.162g，0.843mmol)和二甲胺(2.0M MeOH溶液)(0.85ml，1.69mmol)。將所得溶液于室溫攪拌24小時，然后在50℃下攪拌24小時。將反應物冷卻至室溫，加入水淬滅。使混合物在水與EtOAc(各40ml)之間分配，振蕩和分離各層。將水層用1N HCl酸化至pH3，然后用EtOAc(40ml)萃取。合并有機層，干燥(無水硫酸鎂)，過濾，濃縮，進行快速色譜法(100％EtOAc)，得到標題化合物，為白色固體(0.040g，19％)。質(zhì)量(m/z)383.2(M++1)，381.2(M+-1).
實施例9(3-氨基-5-氯-2-環(huán)丙基氨甲酰基-4-甲基-噻吩并[2，3b]吡啶-6-基氧基)-乙酸2-羥基乙基酰胺
向(3-氨基-5-氯-2-環(huán)丙基氨甲?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-6-基氧基)-乙酸(0.200g，0.562mmol)在THF∶DMF(各1.5ml)的1∶1混合物中的溶液中加入1-羥基苯并三唑水合物(0.099g，0.731mmol)、N，N-二異丙基乙胺(0.109g，0.843mmol)、1-[3-(二甲氨基)-丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.162g，0.843mmol)和乙醇胺(0.103g，1.69mmol)。將所得溶液于室溫攪拌24小時，然后在50℃下攪拌24小時。將反應物冷卻至室溫，加入水淬滅。使混合物在水與EtOAc(各40ml)之間分配，振蕩和分離各層。將水層用1NHCl酸化至pH3，然后用EtOAc(40ml)萃取。合并有機層，干燥(無水硫酸鎂)，過濾，濃縮，進行快速色譜法(100％EtOAc)，得到標題化合物，為奶油色固體(0.075g，34％)。質(zhì)量(m/z)399.2(M++1)，397.2(M+-1).
實施例10(3-氨基-5-氯-2-環(huán)丙基氨甲酰基-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-6-基氧基)-乙酸(4-甲基-哌嗪-1-基)-酰胺 向(3-氨基-5-氯-2-環(huán)丙基氨甲?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-6-基氧基)-乙酸(0.200g，0.562mmol)在THF∶DMF(各1.5ml)的1∶1混合物中的溶液中加入1-羥基苯并三唑水合物(0.099g，0.731mmol)、N，N-二異丙基乙胺(0.109g，0.843mmol)、1-[3-(二甲氨基)-丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.162g，0.843mmol)和N-甲基哌嗪(0.169g，1.69mmol)。將所得溶液于室溫攪拌24小時，然后在50℃下攪拌24小時。將反應物冷卻至室溫，加入水淬滅。使混合物在水與EtOAc(各40ml)之間分配，振蕩和分離各層。將水層用1N HCl酸化至pH3，然后用EtOAc(40ml)萃取。合并有機層，干燥(無水硫酸鎂)，過濾，濃縮，進行快速色譜法(100％EtOAc)，得到標題化合物，為黃色固體(0.080g，33％)。質(zhì)量(m/z)438.2(M++1)，436.2(M+-1).
實施例113-氨基-5-氯-6-(3-羥基-丙氧基)-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺 于室溫，向1，3-丙二醇(1.053g，13.84mmol)的THF(3ml)溶液中滴加雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰溶液(1.0M己烷溶液)(3.50ml，3.50mmol)。將反應混合物攪拌15分鐘，然后用3-氨基-5-氯-6-甲基亞磺?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺(0.345g，1.00mmol)處理。將反應混合物在75℃下加熱1小時，冷卻至室溫，然后加入水(15ml)淬滅。向反應混合物中加入冰，同時攪拌，生成黃色沉淀。過濾收集固體，置于真空烘箱中干燥(60℃16小時)。得到標題化合物，為黃色固體(0.240g，67％)。質(zhì)量(m/z)356.2(M++1)，354.1(M+-1).
實施例123-氨基-5-氯-6-[2-(2-羥基-乙氧基)-乙氧基]-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺 于室溫，向二甘醇(1.118g，10.54mmol)的THF(3ml)溶液中滴加雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰溶液(1.0M己烷溶液)(3.50ml，3.50mmol)。將反應混合物攪拌15分鐘，然后用3-氨基-5-氯-6-甲基亞磺?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺(0.345g，1.00mmol)處理。將反應混合物在75℃下加熱1小時，冷卻至室溫，然后加入水(15ml)淬滅。向反應混合物中加入冰，同時攪拌，生成黃色沉淀。過濾收集固體，置于真空烘箱中干燥(60℃16小時)。得到標題化合物，為黃色固體(0.150g，39％)。質(zhì)量(m/z)386.2(M++1)，384.1(M+-1).
實施例133-氨基-5-氯-6-[2-(2-羥基-乙基氨基)-乙氧基]-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺 于室溫，向二乙醇胺(1.097g，10.43mmol)的THF(3ml)溶液中滴加雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰溶液(1.0M己烷溶液)(3.50ml，3.50mmol)。將反應混合物攪拌15分鐘，然后用3-氨基-5-氯-6-甲基亞磺?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺(0.345g，1.00mmol)處理。將反應混合物在75℃下加熱1小時，冷卻至室溫，然后加入水(15ml)淬滅。向反應混合物中加入冰，同時攪拌，生成黃色沉淀。過濾收集固體，置于真空烘箱中干燥(60℃16小時)。得到標題化合物，為黃色固體(0.216g，56％)。質(zhì)量(m/z)385.2(M++1)，383.1(M+-1).
實施例143-氨基-5-氯-4-甲基-6-(2-哌嗪-1-基-乙氧基)-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺 于室溫，向1-(2-羥基乙基)哌嗪(1.061g，8.15mmol)的THF(3ml)溶液中滴加雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰溶液(1.0M己烷溶液)(3.50ml，3.50mmol)。將反應混合物攪拌15分鐘，然后用3-氨基-5-氯-6-甲基亞磺?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺(0.345g，1.00mmol)處理。將反應混合物在75℃下加熱1小時，冷卻至室溫，然后加入水(15ml)淬滅。向反應混合物中加入冰，同時攪拌，生成黃色沉淀。過濾收集固體，置于真空烘箱中干燥(60℃16小時)。得到標題化合物，為黃色固體(0.245g，71％)。質(zhì)量(m/z)410.2(M++1)，408.2(M+-1).
實施例153-氨基-5-氯-4-甲基-6-(2-甲硫基-乙氧基)-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺 于室溫，向2-(甲硫基)乙醇(1.060g，11.50mmol)的THF(3ml)溶液中滴加雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰溶液(1.0M己烷溶液)(3.50ml，3.50mmol)。將反應混合物攪拌15分鐘，然后用3-氨基-5-氯-6-甲基亞磺酰基-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺(0.345g，1.00mmol)處理。將反應混合物在80℃密封試管中加熱1.5小時，冷卻至室溫，然后加入水(15ml)淬滅。向反應混合物中加入冰，同時攪拌，生成黃色沉淀。過濾收集固體，置于真空烘箱中干燥(60℃16小時)。得到標題化合物，為黃色固體(0.203g，55％)。質(zhì)量(m/z)372.1(M++1)，370.1(M+-1).
實施例163-氨基-5-氯-4-甲基-6-[2-(2-哌嗪-1-基-乙氧基)-乙氧基]-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺 于室溫，向1-[2-(2-羥基乙氧基)乙基]哌嗪(1.061g，6.09mmol)的THF(3ml)溶液中滴加雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰溶液(1.0M己烷溶液)(3.50ml，3.50mmol)。將反應混合物攪拌15分鐘，然后用3-氨基-5-氯-6-甲基亞磺?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺(0.345g，1.00mmol)處理。將反應混合物在80℃密封試管中加熱1.5小時，冷卻至室溫，然后加入水(15ml)淬滅。向反應混合物中加入冰，同時攪拌，生成黃色沉淀。過濾收集固體，置于真空烘箱中干燥(60℃16小時)。得到標題化合物，為黃色固體(0.078g，17％)。質(zhì)量(m/z)454.2(M++1)，452.2(M+-1).
實施例176-(2-乙酰氨基-乙氧基)-3-氨基-5-氯-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺 于室溫，向N-乙?；掖及?1.120g，10.86mmol)的THF(3ml)溶液中滴加雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰溶液(1.0M己烷溶液)(3.50ml，3.50mmol)。將反應混合物攪拌15分鐘，然后用3-氨基-5-氯-6-甲基亞磺?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺(0.345g，1.00mmol)處理。將反應混合物在80℃密封試管中加熱1.5小時，冷卻至室溫，然后加入水(15ml)淬滅。向反應混合物中加入冰，同時攪拌，生成黃色沉淀。過濾收集固體，置于真空烘箱中干燥(60℃16小時)。得到標題化合物，為黃色固體(0.199g，52％)。質(zhì)量(m/z)383.2(M++1)，381.1(M+-1).
實施例183-氨基-5-氯-4-甲基-6-(3-吡啶-2-基-丙氧基)-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺 于室溫，向2-吡啶丙醇(0.960g，7.0mmol)的THF(3ml)溶液中滴加雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰溶液(1.0M己烷溶液)(3.50ml，3.50mmol)。將反應混合物攪拌15分鐘，然后用3-氨基-5-氯-6-甲基亞磺?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺(0.345g，1.00mmol)處理。將反應混合物在75℃密封試管中加熱1.5小時，冷卻至室溫，然后加入水(10ml)淬滅。將反應混合物轉移至錐形瓶中，用水稀釋至75ml。將混合物冷卻至0℃，攪拌。在此期間生成黃色沉淀。過濾收集固體，在2∶1EtOAc∶己烷混合物中制成漿狀物。將該漿狀物攪拌10分鐘，過濾收集固體，置于真空烘箱中干燥(60℃16小時)。得到標題化合物，為黃色固體(0.141g，34％)。質(zhì)量(m/z)417.2(M++1)，415.1(M+-1).
實施例193-氨基-5-氯-4-甲基-6-(3-吡啶-3-基-丙氧基)-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺 于室溫，向3-吡啶丙醇(0.960g，7.0mmol)的THF(3ml)溶液中滴加雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰溶液(1.0M己烷溶液)(3.50ml，3.50mmol)。將反應混合物攪拌15分鐘，然后用3-氨基-5-氯-6-甲基亞磺?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺(0.345g，1.00mmol)處理。將反應混合物在75℃密封試管中加熱1.5小時，冷卻至室溫，然后加入水(10ml)淬滅。將反應混合物轉移至錐形瓶中，用水稀釋至75ml。將混合物冷卻至0℃，攪拌。在此期間生成黃色沉淀。過濾收集固體，在2∶1EtOAc∶己烷混合物中制成漿狀物。將該漿狀物攪拌10分鐘，過濾收集固體，置于真空烘箱中干燥(60℃16小時)。得到標題化合物，為黃色固體(0.242g，58％)。質(zhì)量(m/z)417.2(M++1)，415.2(M+-1).
實施例203-氨基-5-氯-4-甲基-6-(2-吡啶-4-基-乙氧基)-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺 于室溫，向4-吡啶乙醇(0.862g，7.0mmol)的THF(3ml)溶液中滴加雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰溶液(1.0M己烷溶液)(3.50ml，3.50mmol)。將反應混合物攪拌15分鐘，然后用3-氨基-5-氯-6-甲基亞磺?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺(0.345g，1.00mmol)處理。將反應混合物在75℃密封試管中加熱1.5小時，冷卻至室溫，然后加入水(10ml)淬滅。將反應混合物轉移至錐形瓶中，用水稀釋至75ml。將混合物冷卻至0℃，攪拌。在此期間生成黃色沉淀。過濾收集固體，在2∶1EtOAc∶己烷混合物中制成漿狀物。將該漿狀物攪拌10分鐘，過濾收集固體，置于真空烘箱中干燥(60℃16小時)。得到標題化合物，為黃色固體(0.231g，57％)。質(zhì)量(m/z)403.1(M++1)，401.1(M+-1).
實施例213-氨基-6-{2-[雙-(2-羥基乙基)-氨基]-乙氧基}-5-氯-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺 于室溫，向三乙醇胺(1.044g，7.0mmol)的THF(3ml)溶液中滴加雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰溶液(1.0M己烷溶液)(3.50ml，3.50mmol)。將反應混合物攪拌15分鐘，然后用3-氨基-5-氯-6-甲基亞磺?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺(0.345g，1.00mmol)處理。將反應混合物在75℃密封試管中加熱1.5小時，冷卻至室溫，然后加入水(10ml)淬滅。將反應混合物轉移至錐形瓶中，用水稀釋至75ml。將混合物冷卻至0℃，攪拌。在此期間生成黃色沉淀。過濾收集固體，在2∶1EtOAc∶己烷混合物中制成漿狀物。將該漿狀物攪拌10分鐘，過濾收集固體，置于真空烘箱中干燥(60℃16小時)。得到標題化合物，為黃色固體(0.179g，41％)。質(zhì)量(m/z)429.2(M++1)，427.2(M+-1).
實施例223-氨基-5-氯-6-([1，3]間二氧雜環(huán)戊烷-4-基甲氧基)-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺
于室溫，向甘油甲縮醛(0.729g，7.0mmol)的THF(3ml)溶液中滴加雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰溶液(1.0M己烷溶液)(3.50ml，3.50mmol)。將反應混合物攪拌15分鐘，然后用3-氨基-5-氯-6-甲基亞磺酰基-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺(0.345g，1.00mmol)處理。將反應混合物在75℃密封試管中加熱1.5小時，冷卻至室溫，然后加入水(10ml)淬滅。將反應混合物轉移至錐形瓶中，用水稀釋至75ml。將混合物冷卻至0℃，攪拌。在此期間生成黃色沉淀。過濾收集固體，在2∶1EtOAc∶己烷混合物中制成漿狀物。將該漿狀物攪拌10分鐘，過濾收集固體，置于真空烘箱中干燥(60℃16小時)。得到標題化合物，為白色固體(0.195g，51％)。質(zhì)量(m/z)384.1(M++1)，382.1(M+-1).
實施例233-氨基-5-氯-4-甲基-6-[(2-吡咯烷-1-基-乙基氨甲?；?-甲氧基]-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺 向(3-氨基-5-氯-2-環(huán)丙基氨甲?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-6-基氧基)-乙酸(0.300g，0.843mmol)在THF∶DMF的1∶1混合物(各2.0ml)中的溶液中加入1-羥基苯并三唑水合物(0.148g，1.096mmol)、N，N-二異丙基乙胺(0.163g，1.265mmol)、1-[3-(二甲氨基)-丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.242g，1.265mmol)和1-(2-氨基乙基)吡咯烷(0.289g，2.529mmol)。將所得溶液于室溫攪拌16小時。加入水(25ml)淬滅反應物。生成黃色沉淀。將混合物冷卻至0℃，攪拌10分鐘，然后過濾。收集固體，在60℃真空烘箱中干燥3小時。得到標題化合物，為黃色固體(0.069g，18％)。質(zhì)量(m/z)452.2(M++1)，450.2(M+-1).
實施例243-氨基-5-氯-6-[(4-氟-芐基氨甲?；?-甲氧基]-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺 向(3-氨基-5-氯-2-環(huán)丙基氨甲?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-6-基氧基)-乙酸(0.300g，0.843mmol)在THF∶DMF(各2.0ml)的1∶1混合物中的溶液中加入1-羥基苯并三唑水合物(0.148g，1.096mmol)、N，N-二異丙基乙胺(0.163g，1.265mmol)、1-[3-(二甲氨基)-丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.242g，1.265mmol)和4-氟芐基胺(0.317g，2.529mmol)。將所得溶液于室溫攪拌16小時。加入水(25ml)淬滅反應物。生成黃色沉淀。將混合物冷卻至0℃，攪拌10分鐘，然后過濾。收集固體，在10∶1己烷∶EtOAc中制成漿狀物，攪拌10分鐘。過濾收集固體，在50℃真空烘箱中干燥1小時。得到標題化合物，為淡黃色固體(0.143g，37％)。質(zhì)量(m/z)463.1(M++1)，461.1(M+-1).
實施例253-氨基-5-氯-4-甲基-6-[(2-嗎啉-4-基-乙基氨甲?；?-甲氧基]-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺 向(3-氨基-5-氯-2-環(huán)丙基氨甲酰基-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-6-基氧基)-乙酸(0.300g，0.843mmol)在THF∶DMF(各2.0ml)的1∶1混合物中的溶液中加入1-羥基苯并三唑水合物(0.148g，1.096mmol)、N，N-二異丙基乙胺(0.163g，1.265mmol)、1-[3-(二甲氨基)-丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.242g，1.265mmol)和4-(2-氨基乙基)嗎啉(0.329g，2.529mmol)。將所得溶液于室溫攪拌16小時。加入水(25ml)淬滅反應物。如果沒有生成沉淀，可以將混合物用1N HCl酸化至pH2，用EtOAc(25ml)萃取。棄去有機層，水層用5NNaOH調(diào)至堿性(pH12)，用EtOAc(40ml)萃取。將有機層干燥(無水硫酸鎂)，過濾，濃縮，得到黃色固體。將固體在3∶1己烷∶EtOAc(10ml)中中制成漿狀物，然后過濾。收集固體，在50℃真空烘箱中干燥72小時。得到標題化合物，為黃色固體(0.053g，13％)。質(zhì)量(m/z)468.2(M++1)，466.2(M+-1).
實施例263-氨基-5-氯-4-甲基-6-{2-[(吡啶-4-羰基)-氨基]-乙氧基}-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺 于室溫，向N-(2-羥基乙基)-異煙酰胺(0.831g，5.00mmol)的THF(2.5ml)溶液中滴加雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰溶液(1.0M己烷溶液)(2.50ml，2.50mmol)。將反應混合物攪拌15分鐘，然后用3-氨基-5-氯-6-甲基亞磺酰基-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺(0.345g，1.00mmol)處理。將反應混合物在80℃密封試管中加熱2小時，冷卻至室溫，然后加入水(15ml)淬滅。將混合物用水稀釋至100ml，然后冷卻至0℃，攪拌。生成黃色沉淀。過濾收集固體，在EtOAc中制成漿狀物，再次過濾，得到黃色固體，置于真空烘箱中干燥(50℃3小時)。得到標題化合物，為黃色固體(0.046g，10％)。質(zhì)量(m/z)446.3(M++1)，444.2(M+-1).
實施例273-氨基-6-芐氧基-5-氯-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺 于室溫，向芐醇(0.541g，5.00mmol)的THF(2.5ml)溶液中滴加雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰溶液(1.0M己烷溶液)(2.50ml，2.50mmol)。將反應混合物攪拌15分鐘，然后用3-氨基-5-氯-6-甲基亞磺?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺(0.345g，1.00mmol)處理。將反應混合物在80℃密封試管中加熱2小時，冷卻至室溫，然后加入水(15ml)淬滅。將混合物用水稀釋至100ml，然后冷卻至0℃，攪拌。生成黃色沉淀。過濾收集固體，經(jīng)過快速色譜純化(1.5∶1己烷∶EtOAc)，得到標題化合物，為淡黃色固體(0.130g，33％)。質(zhì)量(m/z)388.2(M++1)，386.2(M+-1).
實施例283-氨基-5-氯-4-甲基-6-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺鹽酸鹽 將3-氨基-5-氯-4-甲基-6-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺(0.800g，1.95mmol)與MeOH(50ml)的混合物加熱至50℃。混合物用THF(5ml)和DMF(5ml)處理。仍然在50℃下，將混合物用濃HCl酸化至pH1。生成均勻的溶液。使溶液緩慢冷卻至室溫。在此期間生成白色沉淀。過濾收集固體，在50℃真空烘箱中干燥72小時。得到標題化合物，為白色固體(0.562g，65％)。質(zhì)量(m/z)411.1(M++1)-HCl，445.1(M+-1).
實施例293-氨基-5-氯-6-乙氧基-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺 在氮下，將氫化鈉(0.037g，0.925mmol)混懸在無水1，2-二甲氧基-乙烷(5.0ml)中。將混懸液冷卻至0℃。經(jīng)由套管向該冷的混懸液中加入3-氨基-5-氯-6-羥基-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺(0.300g，1.01mmol)的無水DMF(5.0ml)溶液。除去冰浴，使反應物升溫至室溫。將反應物于室溫攪拌25分鐘后，加入固體溴化鋰(0.175g，2.02mmol)，將反應物攪拌另外2小時。最后加入乙基碘(0.24ml，0.47g，3.00mmol)，將反應物于室溫攪拌36小時。在反應時間結束時，用水淬滅混合物。過濾收集固體，然后經(jīng)過快速色譜純化(己烷∶EtOAc梯度)，得到標題化合物，為白色固體(24.3mg，8％收率)。質(zhì)量(m/z)326.0(M+)，324.0(M-).
或者，可以按照實施例29的制備所述的工藝、用EtOH代替芐醇制備實施例33。
實施例30(3-氨基-5-氯-2-環(huán)丙基氨甲?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-6-基氧基)-乙酸(咪唑-1-基)-酰胺 于室溫，向(3-氨基-5-氯-2-環(huán)丙基氨甲?；?4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-6-基氧基)-乙酸(0.350g，0.98mmol)的DMF(4ml)溶液中加入1，1’-羰基二咪唑(0.239g，1.48mmol)。將所得溶液在40℃下加熱攪拌20分鐘。在此期間生成奶油色沉淀。將混合物冷卻至10℃，加入凈2-氨基吡啶(0.231g，2.46mmol)。將混合物于室溫攪拌30分鐘，然后加入飽和碳酸氫鈉溶液(10ml)淬滅。生成濃厚的白色沉淀。將混合物用水(25ml)稀釋，攪拌10分鐘，然后過濾。收集固體，在真空烘箱中干燥16小時。得到標題化合物，為白色固體(0.228g，58％)。質(zhì)量(m/z)404.0(M+-1).
本發(fā)明化合物可以被單獨給藥或者以藥物組合物的形式給藥，所謂藥物組合物也就是與可藥用載體或賦形劑組合，后者的比例和屬性取決于所選擇的化合物的溶解性和化學性質(zhì)、所選擇的給藥途徑和標準的藥學實踐。本發(fā)明化合物盡管本身是有效的，不過出于穩(wěn)定性、結晶的方便、增加溶解度等目的，也可以以它們可藥用鹽的形式加以配制和給藥。
因而，本發(fā)明提供了藥物組合物，包含式I化合物和可藥用稀釋劑。
式I化合物可以通過多種途徑給藥。在進行對患有本文所述紊亂的患者進行治療時，式I化合物可以以使得化合物在有效量下是生物可利用的任意劑型或模式給藥，包括口服和胃腸道外途徑。例如，式I化合物可以經(jīng)口服、吸入或者經(jīng)皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、透皮、鼻內(nèi)、直腸、眼、局部、舌下、口腔或其它途徑給藥?？诜o藥一般是治療本文所述神經(jīng)和精神紊亂所優(yōu)選的。
制劑領域技術人員能夠容易選擇恰當?shù)慕o藥劑型和方式，這依賴于所選擇的化合物的特定特征、所要治療的紊亂或病癥、該紊亂或病癥的階段和其它相關因素(Remington′s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack出版公司，(1990))。
藥物組合物按照藥學領域熟知的方式制備。載體或賦形劑可以是固體、半固體或液體材料，它們能夠充當活性成分的媒介或介質(zhì)。適宜的胃腸道外或局部用途，可以以片劑、膠囊劑、氣霧劑、吸入劑、栓劑、溶液、混懸劑等劑型對患者給藥。
本發(fā)明化合物可以經(jīng)口服給藥，例如利用惰性稀釋劑或膠囊或者壓制成片。對于口服治療給藥的目的，化合物可以與賦形劑結合，以片劑、錠劑、膠囊劑、酏劑、混懸劑、糖漿劑、糯米紙囊劑、咀嚼膠等劑型使用。這些制劑應當含有至少4％的本發(fā)明化合物作為活性成分，但是可以因特定劑型而異，可以方便地在單位的4％至約70％重量之間。組合物中的化合物含量是將獲得適宜劑量的量。本發(fā)明的優(yōu)選組合物和制劑可以由本領域技術人員來確定。
片劑、丸劑、膠囊劑、錠劑等還可以含有一種或多種下列助劑粘合劑，例如聚維酮、羥丙基纖維素、微晶纖維素、黃蓍膠或明膠；賦形劑，例如磷酸二鈣、淀粉或乳糖；崩解劑，例如藻酸、Primogel、玉米淀粉等；潤滑劑，例如滑石粉、硬脂酸鎂或Sterotex；助流劑，例如膠體二氧化硅；和甜味劑，例如蔗糖、阿司帕坦或糖精；或者可以加入矯味劑，例如薄荷、水楊酸甲酯或橙味調(diào)料。當劑量單位形式是膠囊時，除了上述類型材料以外，它還可以含有液體載體，例如聚乙二醇或脂肪油。其它劑量單元形式可以含有其它各種調(diào)整劑量單元的物理形狀的材料，例如包衣。因而，片劑或丸劑可以包有糖、蟲膠或其它包衣劑。除了本發(fā)明化合物以外，糖漿劑還可以含有蔗糖作為甜味劑，以及含有某些防腐劑、染劑與著色劑和矯味劑。用于制備這些各種組合物的材料應當是藥學純的，并且對其用量而言是無毒的。
出于腸胃外給藥治療的目的，本發(fā)明化合物可以被摻入到溶液或混懸液中。這些制劑通常含有至少0.001％本發(fā)明化合物，但是可以在0.001與約90重量％之間不等。式I化合物在這類組合物中的含量是將獲得適宜劑量的量。溶液或混懸液還可以包括一種或多種下列助劑無菌稀釋劑，例如注射用水、鹽水溶液、不揮發(fā)性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶劑；抗菌劑，例如芐醇或對羥基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，例如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，例如乙二胺四乙酸；緩沖劑，例如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；和張力調(diào)節(jié)劑，例如氯化鈉或葡萄糖。腸胃外制劑可以被封裝在安瓿、一次性注射器或由玻璃或塑料制成的多劑量小瓶中。優(yōu)選的組合物和制劑能夠由本領域技術人員來確定。
本發(fā)明化合物也可以被局部給藥，此時載體可以適宜地包含溶液、軟膏或凝膠基質(zhì)?；|(zhì)例如可以包含下列物質(zhì)中的一種或多種凡士林、羊毛脂、聚乙二醇、蜂蠟、礦物油、稀釋劑(例如水和醇)、乳化劑和穩(wěn)定劑。典型的制劑可以含有濃度約0.1至約10％w/v(每單位體積的重量)的式I化合物或其藥用鹽。
式I化合物是M4亞型毒蕈堿性受體的變構增效劑。此外，式I化合物相對于其它毒蕈堿性受體而言選擇性地增效M4受體。本發(fā)明化合物的活性可以通過下列方法測定。
穩(wěn)定表達人毒蕈堿性受體的全細胞中的鈣活動A.穩(wěn)定的細胞系可以利用標準分子克隆技術生成表達人毒蕈堿性M1-M5受體的穩(wěn)定細胞系。M1、M3和M5受體在中國倉鼠卵巢(CHO)細胞系中被表達，而M2和M4在AV12 Gα15細胞系中被表達。編碼這些毒蕈堿性受體的cDNA對應于NCBI核苷酸數(shù)據(jù)庫中的已公布序列，對M1-M5而言，登記號分別為AF498915、AF498916、AF498917、AF498918和AF498919。
B.方法使用鈣-敏感性熒光染劑，利用熒光成像平板讀數(shù)(FLIPR)儀器在單一測定法中可以檢測既定化合物的激動劑或增效活性。在進行測定之前24小時，將細胞平板接種在聚-D-賴氨酸涂覆的黑色平板/透明底(BectonDickinsons)中的生長培養(yǎng)基中，密度為40,000細胞/ml(100μl/孔)。除去培養(yǎng)基，然后加入50μl熒光染劑溶液(HBSS，含有20mM Hepes、10μMFluo-3-AM、0.05％pluronic acid F127；就CHO細胞測定法而言補充有2.5mM丙磺舒)。將細胞與染劑一起溫育75分鐘，然后用測定緩沖液(20mMHepes的Hanks平衡鹽溶液(Gibco)；就CHO細胞測定法而言補充有2.5mM丙磺舒)替換。將平板轉移至FLIPR機器(Molecular Devices)供熒光記錄。用488nm光定期激發(fā)細胞，所發(fā)射的熒光穿過510-570nm濾光器，然后用冷CCD照相機檢測。通過計算機程序安排多次自動加入化合物。使細胞與遞增濃度的化合物一起預溫育。2分鐘后，向每種濃度化合物加入一系列濃度的乙酰膽堿。如果化合物是變構增強劑，將可檢測到化合物濃度依賴性的乙酰膽堿響應增效作用?？梢酝ㄟ^親和性和協(xié)同性對增效劑化合物的有效性進行分級。
一種替代方法可用于評估本發(fā)明化合物的親和性以及基于這種所評估的親和性對化合物進行分級。在這種方法中，向所有小孔加入單一濃度(約為飽和濃度的10％)的卡巴膽堿，并且加入遞增濃度的供試的本發(fā)明化合物。通過計算對10％卡巴膽堿響應的增效而言的EC50，推導所評估的親和性值。這種方法可用于為本文實施例中所述的化合物進行分級。
如采用實施例1的化合物所證實的，在變構調(diào)控劑的存在下，乙酰膽堿和卡巴膽堿(均為非選擇性全毒蕈堿性受體激動劑)以等同方式被增效。
C.數(shù)據(jù)分析和結果利用Lazareno等人，Mol.Pharmacol.(1995)48362-378的方程可以評估變構參數(shù)。利用FLIPR可以測試遞增濃度的實施例1化合物在重組細胞系(AV12Gα15hM2或hM4和CHO hM1，hM3或hM5)中對細胞ACh濃度-響應曲線的效應。從至少三次的獨立實驗收集數(shù)據(jù)，一式兩份。在穩(wěn)定表達hM1、hM3或hM5受體的CHO細胞中沒有觀察到顯著的變構效應。實施例1的化合物對hM4受體的協(xié)同因子和親和性分別評估為34.5±3.5和200±42nM。還觀察到對hM2受體微弱的變構效應，但是過于微弱以至于無法準確評估。
如上文關于本發(fā)明化合物的分級中所述，利用增效10％卡巴膽堿的FLIPR測定法，本文作為實施例描述的化合物對hM4受體的評估親和性＜500nM。
神經(jīng)遞質(zhì)釋放測定A.方法通過二氧化碳窒息和頸脫位法處死兩只雄性Lister Hooded大鼠。迅速除去腦，切出紋狀體，在150μm橫向切三次。將切片混懸在12ml HEPES緩沖液(128mM NaCl，2.4mM KCl，3.2mM CaCl2，1.2mM KH2PO4，1.2mMMgSO47H2O，25mM HEPES，10mM葡萄糖，pH7.5)中。將切片洗滌兩次，每次重新混懸在新鮮緩沖液中，然后與[3H]-氯化膽堿(250nM)一起在37℃下溫育30分鐘。30分鐘后，進行另外四次洗滌，將100μl切片置于96孔濾板(Millipore MABCN 96-孔multiscreen板)的每孔中。真空過濾(Millipore Univac歧管系統(tǒng))除去浴溶液，然后向每孔加入另外70μl HEPES緩沖液(+/-化合物)，將平板放回溫育器溫育5分鐘。5分鐘溫育后，真空過濾移取緩沖液至收集板(Wallac 96孔韌性樣品板)。然后加入刺激溶液(70μl/孔20mM鉀+/-化合物)，將平板放回溫育器另外溫育5分鐘。然后真空過濾移卻刺激緩沖液至第二收集板。在實驗結束時，如下評估每孔中的組織量將平板置于冰箱中達一小時，在過濾盤上打孔，加入Soluene(以消化切片)，放置另外一小時。利用液體閃爍計數(shù)法測量被消化組織中的放射性。計算神經(jīng)遞質(zhì)釋放，為小孔中總放射性的比例。
B.結果化合物在天然組織中的增效作用通過其增強紋狀體切片中乙酰膽堿釋放的自主抑制的能力來測試，如20mM鉀刺激所誘導的。這被認為是一種經(jīng)由紋狀體中突觸前自主調(diào)節(jié)的由M4介導的過程。Zhang，W.等人，J.Neurosci.(2002)221709-1717。采用上述方法，本發(fā)明的代表性化合物(實施例1)表現(xiàn)出濃度依賴性的自主抑制增效作用，IC50為1.5μM。
對于一些與毒蕈堿性受體有關的紊亂，已經(jīng)描述過若干臨床前實驗室動物模型。例如，通過精神安定藥和非典型的抗精神病藥的條件性回避反應(CAR)的抑制是研究最多的精神病藥理模型之一。迄今，所有臨床有效的抗精神病藥均已被證明選擇性地抑制CAR(參見Wadenberg & Hicks，1999.Neuroscience& Biobehavioral Reviews，23851-8)。
條件性回避反應A.方法在回避范例中訓練雄性Fisher-344大鼠(N＝5-8)，在該范例中大鼠必須作出穿梭反應以回避或逃脫足部電擊。裝置是Coulbourn Instruments穿梭操作室。每期等于總計50次試驗，試驗間隔30秒，每次試驗開始時同時室內(nèi)照明和升起閘門。在開始1mA足部電擊之前大鼠有10秒時間到達另一側(回避反應)。電擊持續(xù)至大鼠到達另一側(逃脫反應)或者10秒鐘結束(逃脫失敗)。以這種方式充分訓練大鼠，基線回避性能＞95％。記錄每期的回避反應、逃脫反應和逃脫失敗反應的次數(shù)，用于分析。
向大鼠給予(1)載體(10％阿拉伯膠加無菌水)，(2)亞有效劑量的毒蕈堿激動劑氧化震顫素倍半富馬酸鹽(簡寫為Oxo)(單獨的Oxo)，或者(3)在遞增劑量供試化合物(10mg/kg至60mg/kg)存在下的Oxo，繼之以(4)重新測試單獨的Oxo。在測試前2小時口服給予每種供試化合物。在測試前30分鐘皮下給予Oxo(0.03mg/kg)。通過單向(組內(nèi)設計)方差分析法(ANOVA)分析數(shù)據(jù)。在顯著的ANOVA(p＜0.05)的情況下，可以進行post-hoc比較，其中反向比較化合物劑量和單獨的Oxo組(成對t檢驗)。
B.結果
條件性回避測定法是有效測試臨床抗精神病功效的指征。代表性毒蕈堿性M4受體增效劑在條件性回避反應范例中表現(xiàn)出抗精神病樣性質(zhì)。盡管這些M4增效劑在單獨測試時沒有活性(數(shù)據(jù)未顯示)，但是這些化合物能增強無活性的劑量的毒蕈堿激動劑氧化震顫素的功效。
鈣活動和神經(jīng)遞質(zhì)釋放研究的結果證明了本發(fā)明化合物充當M4毒蕈堿性受體增效劑的能力。由此認識到本發(fā)明化合物預期能增強M4受體活化的效應。因而，本發(fā)明的化合物預期可用于治療多種與毒蕈堿性受體有關的紊亂(如本文所述)以及其它可用這類變構增效劑治療的紊亂(如本領域技術人員所領會的)。
通過給予有效量的式I化合物或其藥物組合物，可以治療與M4毒蕈堿性受體有關的紊亂。通過采用常規(guī)技術和通過觀察在類似環(huán)境下所得的結果，作為本領域技術人員的診斷醫(yī)師能夠容易地確定有效量。在確定式I化合物的有效量、即劑量時，診斷醫(yī)師將考慮眾多因素，包括但不限于所給予的式I化合物；哺乳動物的種屬——其大小、年齡和一般健康狀況；所牽涉的具體紊亂；紊亂的牽涉程度或嚴重度；個體患者的響應；給藥方式；所給予制劑的生物利用度特征；所選擇的劑量方案；其它共用藥物的使用；和其它相關的情況。
式I化合物的有效量預期從約0.001毫克/千克體重/天(mg/kg/天)至約100mg/kg/天不等。優(yōu)選的量可以由本領域技術人員容易地確定。
權利要求
1.式I化合物或其可藥用鹽， 其中m是1或2；n是0、1或2；X是價鍵、-O-、-SOp-、-C(O)-、-NR2-、-C(O)-NR2-或-NR2-C(O)-；p是0、1或2；R1是氫、羥基、C1-C4烷基、苯基、吡啶基、吡咯烷基、哌嗪基、嗎啉代基、噻唑基、咪唑基或1，3-二氧雜環(huán)戊烷基；所述苯基、哌嗪基或噻唑基可以任選被一個選自下組的取代基取代鹵代基或C1-C2烷基；其中當p是0時，或當X是-O-、-NR2或-NR2-C(O)-時，n不能是0；R2是氫或C1-C2烷基；所述C1-C2烷基可以任選被一個羥基取代。
2.權利要求1的化合物，其中X是價鍵。
3.權利要求1或2的化合物，其中n是0。
4.權利要求1-3任一項的化合物，其中m是1。
5.權利要求4的化合物，其中R1是氫。
6.權利要求1-3任一項的化合物，其中m是2。
7.權利要求6的化合物，其中R1是嗎啉代基。
8.權利要求1的化合物，它是3-氨基-5-氯-6-甲氧基-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺。
9.權利要求1的化合物，它是3-氨基-5-氯-4-甲基-6-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺。
10.化合物，它是3-氨基-5-氯-6-羥基-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺或3-氨基-5-氯-6-異丙氧基-4-甲基-噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酸環(huán)丙基酰胺。
11.治療與M4毒蕈堿性受體活性有關的病癥的方法，該方法包括對有需要的患者給予有效量的權利要求1-9任一項的化合物。
12.權利要求11的方法，其中與M4毒蕈堿性受體活性有關的病癥選自疼痛、精神病、注意缺陷多動癥和記憶喪失。
13.用在治療中的權利要求1-9任一項的化合物。
14.權利要求1-9任一項的化合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療與M4毒蕈堿性受體活性有關的紊亂。
15.藥物組合物，包含權利要求1的化合物或其可藥用鹽以及可藥用載體、賦形劑或稀釋劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及式I或其可藥用鹽的選擇性變構增效劑，用于治療與M
文檔編號A61K31/4365GK101048413SQ200580036624
公開日2007年10月3日 申請日期2005年10月18日 優(yōu)先權日2004年10月25日
發(fā)明者A·魯比奧埃斯特班, D·W·希利亞德 申請人:伊萊利利公司