專利名稱：取代的噻吩衍生物用作抗癌藥的制作方法
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背景技術(shù)：
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及取代的五元雜環(huán)化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或前藥，這些化合物與藥學(xué)上可接受的載體的組合物，以及這些化合物的用途。
參考文獻(xiàn)本申請(qǐng)引用了以下發(fā)表的參考文獻(xiàn)Alessi，D.R.；Caudwell，F(xiàn).B.；Andjelkovic，M.；Hemmings，B.A.；Cohen，P.(1996)與MAPKAP激酶-1和p70 S6激酶相比，蛋白激酶B底物特異性的分子基礎(chǔ)(Molecular basis for the substrate specificity of protein kinase B；comparison withMAPKAP kinase-1 and p70 S6 kinase)，F(xiàn)EBS Lett.399333-38。
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將所有上面提到的出版物以全文納入本文作為參考，就好像專門和個(gè)別地將各個(gè)出版物以全文納入本文作為參考的程度。
現(xiàn)有技術(shù)Akt激酶起初，vAkt被鑒定為存在于轉(zhuǎn)化的小鼠白血病逆轉(zhuǎn)錄病毒中的細(xì)胞衍生的病毒癌基因，即AKT8(Staal和Hartley，1988)。該病毒的不尋常之處在于它能夠轉(zhuǎn)化貂肺上皮細(xì)胞而非其它細(xì)胞如NIH3T3成纖維細(xì)胞，這說明存在新型對(duì)細(xì)胞類型特異的癌基因。病毒Akt激酶的人同源物是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，屬于AGC蛋白激酶超家族，由于它類似于蛋白激酶A和C而命名為蛋白激酶B，產(chǎn)生現(xiàn)有“PKB/Akt”命名系統(tǒng)(Brazil和Hemmings，2001；及其參考文獻(xiàn))。
后來證明Akt能介導(dǎo)與磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)相關(guān)的下游事件，響應(yīng)于生長因子(包括血小板衍生生長因子(PDGF)、表皮生長因子(EGF)、堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)、胰島素樣生長因子(IGF-I)、神經(jīng)生長因子(NGF)、干細(xì)胞因子和血管內(nèi)皮生長因子)、細(xì)胞因子(包括白介素1、3、4、5和8)、胰島素、緩激肽、RANTES和內(nèi)皮縮血管肽，以及連接于胞外基質(zhì)(ECM)和各種形式的細(xì)胞應(yīng)激(如缺氧和熱激)，Akt聚集到質(zhì)膜上(Lawlor和Alessi，2001；Brazil和Hemmings，2001；Scheid和Woodgett，2003)。
在質(zhì)膜上，PI3K將磷脂酰肌醇4，5-雙磷酸(PtdIns(4，5)P2；PIP2)轉(zhuǎn)化為脂質(zhì)第二信使，磷脂酰肌醇3，4，5-三磷酸(PtdIns(3，4，5)P3；PIP3)。PIP3或其降解產(chǎn)物磷脂酰肌醇3，4-雙磷酸(PtdIns(3，4)P3；PI(3，4)P2)通過N-末端PKB的血小板-白細(xì)胞C激酶底物同源(PH)區(qū)將Akt征集到質(zhì)膜上。
通過多位點(diǎn)磷酸化，尤其是活化中心催化結(jié)構(gòu)域的T-環(huán)活化結(jié)合于膜的PKB。然后，磷酸化PKB參與涉及細(xì)胞周期調(diào)節(jié)、存活、運(yùn)動(dòng)性和生長的許多下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)事件(Lawlor和Alessi，2001；Scheid和Woodgett，2003)。這些過程是正常細(xì)胞功能必需的過程。此外，在人癌中發(fā)現(xiàn)影響磷酸化PKB的活性和/或產(chǎn)量的多肽的突變和/或異常表達(dá)(Luo等，2003)。具體說，在卵巢癌、乳腺癌和結(jié)腸癌中發(fā)現(xiàn)了Akt(Id.)。
目前至少鑒定了三種細(xì)胞同源物(即Akt1/PKBα、Akt2/PKBβ和Akt3/PKBγ)(Lawlor和Alessi，2001；Scheid和Woodgett，2003)。除PH區(qū)以外，已知這些蛋白質(zhì)具有用于其上游激活激酶的錨定結(jié)構(gòu)域(docking domain)(HM)，同為AGC家族激酶的3-磷酸肌醇(phosphoinoside)依賴性激酶(PDK1)。HM結(jié)構(gòu)域也似乎用作其它變構(gòu)調(diào)節(jié)方式的位點(diǎn)(Scheid和Woodgett，2003)。位于激活T-環(huán)內(nèi)的Thr308磷酸化似乎由PDK1進(jìn)行，它是PKB功能必需的。位于PKB C-末端疏水結(jié)構(gòu)域的Ser473磷酸化對(duì)于PKB活性的最大化同樣重要，盡管磷酸化機(jī)制不明(Brazil和Hemmings，2001；Scheid和Woodgett，2003)。
已鑒定或提出了許多Akt底物，包括Bcl-2促凋亡家族成員(BAD)；通過FasL和Bim介導(dǎo)凋亡的FOXO家族fork-head轉(zhuǎn)錄因子；癌癥相關(guān)性3’-磷酸酶PTEN；乳腺癌易感基因產(chǎn)物1(BRCA-1)；cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)；內(nèi)皮一氧化氮合酶(eNOS)；NFκB抑制劑(I-κB)；無K(Lys)蛋白激酶-1(WNK1)，與II型假醛固酮減少癥II(PHAII)相關(guān)的高血壓相關(guān)基因(Vitari等，2003)等，表明AKT在細(xì)胞生長調(diào)節(jié)中起到基礎(chǔ)作用(Brazil和Hemmings，2001；Luo等，2003)。
在一系列不同晚期癌癥中可見的一處常見改變是PTEN基因突變，該基因與細(xì)胞調(diào)節(jié)和凋亡(程序性細(xì)胞死亡)相關(guān)。PTEN是使PIP3失活和關(guān)閉PDK1和Akt的脂質(zhì)磷酸酶。在乳腺癌、前列腺癌、子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌、結(jié)腸癌、黑色素瘤、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤和淋巴瘤中發(fā)現(xiàn)了PTEN基因中的突變。動(dòng)物模型表明僅丟失一個(gè)拷貝的PTEN基因足以阻礙細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，并開始不受控制的細(xì)胞生長過程。所有這些PTEN突變的癌癥都有激活的AKT，并且是AKT療法的天然適應(yīng)癥。
Alessi和同事(Alessi等，1996)預(yù)測(cè)了PKB結(jié)合的共有序列；然而，側(cè)翼序列顯著影響PKB磷酸化包含共有序列的肽底物的能力(Obata等，2000)。因此，PKB/Akt底物特異性除一級(jí)氨基酸序列識(shí)別之外，還必須依賴于蛋白-蛋白相互作用(Luo等，2003)；強(qiáng)調(diào)了PKB/Akt底物識(shí)別的特異性。
已開發(fā)了成功用于臨床的激酶抑制劑，包括干擾受體酪氨酸激酶(RTK)Erb2/HER2、PDGF、BCR-Abl和c-KIT受體-磷酸化的抑制劑。也可獲得PI3K抑制劑，用于研究用途，并被證明能抑制腫瘤生長(Luo等，2003；及其參考文獻(xiàn))。不幸地是，這種抑制劑的靶點(diǎn)位于PKB/Akt上游，抑制這些靶點(diǎn)會(huì)對(duì)細(xì)胞生化通路產(chǎn)生廣泛影響。
AGC激酶包括PKB/Akt和PDK1的高度結(jié)構(gòu)相似性阻礙了靶向此類下游激酶的激酶抑制劑的鑒定，假定這些下游激酶僅影響下游激酶調(diào)節(jié)的一小組生化通路。已報(bào)道了PKB/Akt和PDK1激酶結(jié)構(gòu)域的部分X射線結(jié)構(gòu)；然而，這些結(jié)構(gòu)并未揭示各PH結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)，它們可能是PKB/Akt和/或PDK1-特異性抑制劑的優(yōu)選靶位點(diǎn)(Harris，2003)。
雖然天然產(chǎn)生的鞘脂、神經(jīng)酰胺似乎能阻止PIP3與PKB/Akt的PH區(qū)的相互作用(Powell等，2003)，并被用作抗癌藥，觀察到神經(jīng)酰胺的作用有時(shí)是對(duì)立的，可能短暫，且知之甚少(Radin，2003)。
因此，需要激酶如PKB/Akt的特異性抑制劑。
蛋白激酶A許多肽激素，如促卵泡激素(FSH)通過調(diào)節(jié)腺苷酸環(huán)化酶的活性起作用，腺苷酸環(huán)化酶結(jié)合于質(zhì)膜的內(nèi)表面。細(xì)胞內(nèi)腺苷酸環(huán)化酶活性的相對(duì)水平控制了用作肽激素信號(hào)下游轉(zhuǎn)導(dǎo)的“第二信使”的環(huán)化AMP(cAMP)的量(Watson等，1987，第982頁)。蛋白激酶A(PKA)通常通過PKA的調(diào)節(jié)性“R”亞基定位于質(zhì)膜。然而，當(dāng)cAMP的胞內(nèi)濃度升高時(shí)，它能結(jié)合PKA的調(diào)節(jié)R亞基并釋放蛋白激酶的催化部分。然后，活化的PKA轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞核，在核中激活許多底物，包括cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)、cAMP反應(yīng)元件調(diào)節(jié)子(CREM)和活化轉(zhuǎn)錄因子(ATF)(Lewin，1996，1081-82頁；Don和Stelzer，2002)。
就CREB而言，即使磷酸化一個(gè)Ser殘基(一般是Ser-133)就能提高它與在許多基因中發(fā)現(xiàn)的cAMP反應(yīng)元件(CRE)的親和力，包括但不限于細(xì)胞周期調(diào)節(jié)子，胞外基質(zhì)(ECM)蛋白酶，膽固醇運(yùn)輸?shù)鞍?，神?jīng)肽，免疫基因，胰島素樣生長因子(IGF)家族成員，激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白質(zhì)和與細(xì)胞生長、分化、增殖和精子發(fā)生相關(guān)的其它蛋白質(zhì)。cAMP下調(diào)的蛋白包括細(xì)胞周期蛋白B和E2、胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-5(IGFBP-5)、α1型XVI膠原、脂皮質(zhì)蛋白III、L-犬尿氨酸水解酶、卷毛相關(guān)蛋白、NF-κB和肌動(dòng)蛋白/原肌球蛋白/鈣調(diào)蛋白結(jié)合蛋白(Tierney等，2003)。
CDC7與DBF4調(diào)節(jié)亞基組成復(fù)合物的CDC7激酶是真核細(xì)胞中啟動(dòng)DNA復(fù)制所必需的。CDC7似乎是通過將合適酶征集到起始位點(diǎn)來“引發(fā)”或“開火”復(fù)制起點(diǎn)啟動(dòng)所必需的。CDC7涉及ATR和Chk1激酶的S期檢查點(diǎn)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)下游。
在數(shù)個(gè)模式系統(tǒng)中研究了CDC7的生物學(xué)作用。在酵母中，CDC7的失活導(dǎo)致正在進(jìn)行的DNA復(fù)制完成后生長阻滯。酵母研究也表明CDC7在減數(shù)分裂，檢查點(diǎn)應(yīng)答以及染色體結(jié)構(gòu)的維持和修復(fù)中的作用。相反，在未分化的小鼠胚胎干細(xì)胞中CDC7的條件失活導(dǎo)致生長阻滯，伴隨正在進(jìn)行的DNA合成中止，這表明即使在DNA合成起始后也需要CDC7。CDC7功能缺失也誘導(dǎo)重組修復(fù)和CDC2激酶抑制，最終導(dǎo)致p53依賴性凋亡。微型染色體維持蛋白質(zhì)(MCM)似乎是CDC7的主要生理底物。
CDC7激酶表達(dá)的部分損失導(dǎo)致細(xì)胞和整體水平的生長延緩，而在癌細(xì)胞中觀察到CDC7激酶水平升高。后一發(fā)現(xiàn)使CDC7激酶成為小分子激酶抑制劑的誘人靶點(diǎn)(Montagnoli，A.等，2004；Woo，R.A.和Poon，R.Y.，2003；Semple，J.W.和Duncker，B.P.，2004)。用微陣列進(jìn)行基因表達(dá)分析也將CDC7鑒定為藥物靶點(diǎn)(Walker，M.G.，2001)。
因此，PKB/Akt、PKA和CDC7不可避免地關(guān)系到細(xì)胞生長、分化、功能障礙和存活是熟知的。因此，需要激酶如PKB/Akt、PKA和CDC7的特異性抑制劑。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及式I代表的取代的五元雜環(huán)衍生化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或前藥 式中環(huán)A是含有5或6環(huán)原子的含氮雜芳基，其中1-4個(gè)環(huán)原子是氮原子；n是選自0或1的整數(shù)
R選自a)氫，b)羥基，c)烷基，d)取代的烷基，e)環(huán)烷基，f)取代的環(huán)烷基，g)-SO2R7，其中R7是C1-C5烷基或取代的烷基，h)烷氧基，i)羧基，j)羧酸酯，k)硝基，l)芳基，m)取代的芳基，n)雜芳基，o)取代的雜芳基，p)雜環(huán)基，q)取代的雜環(huán)基，r)酰氨基，和s)酰基；R1各自獨(dú)立地選自a)鹵素，b)氰基，c)硝基，d)羥基，e)巰基，f)氨基，g)取代的氨基，h)烷氧基，i)取代的烷氧基，j)芳氧基，
k)取代的芳氧基，l)雜芳氧基，m)取代的雜芳氧基，n)烷硫基，o)取代的烷硫基，p)-C(＝O)NR8R8，其中R8各自獨(dú)立地選自氫、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基，或者各R8可任選地與懸掛在它上面的氮原子連接在一起形成雜環(huán)基或取代的雜環(huán)基，q)-NHC(＝O)-R9，其中R9選自氫、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基，r)芳基或雜芳基，各自可被任選取代的烷基或芳基任選取代，s)雜環(huán)基，各自可被任選取代的烷基或芳基任選取代，和t)用1-3個(gè)取代基任選取代的C1-C5烷基，所述取代基選自鹵素、羥基、氨基、芳基、C1-C5烷基單取代的氨基和C1-C5烷基雙取代的氨基，其中各烷基獨(dú)立于其它烷基；m是等于0、1或2的整數(shù)；R2和R4獨(dú)立地選自a)氫，b)環(huán)烷基，c)取代的環(huán)烷基，d)雜環(huán)基，e)取代的雜環(huán)基，f)芳基，g)取代的芳基，h)雜芳基，i)取代的雜芳基，j)任選取代的C1-C5取代的烷基，k)任選取代的C2-C5烯基，l)任選取代的C2-C5炔基，m)任選取代的C1-C5烷氧基，n)羥基，
o)氨基，p)C1-C5烷基單取代的氨基，和q)C1-C5烷基雙取代的氨基，其中各烷基獨(dú)立于其它烷基，限制條件是當(dāng)R2或R4之一是環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基，R2或R4中另一個(gè)是氫；R3選自a)氫，b)C1-C5烷基，和c)在亞烷基鏈上由1-2個(gè)取代基任選取代的-(C1-C5亞烷基)p-Z，所述取代基選自i.由1-3個(gè)取代基任選取代的C1-C5烷基，所述取代基選自羥基、羧基、羧酸酯、氨基、C1-C5烷基單取代的氨基和C1-C5烷基雙取代的氨基，其中各烷基獨(dú)立于其它烷基，ii.由1-3個(gè)取代基任選取代的C2-C5烯基，所述取代基選自羥基、羧基、羧酸酯、氨基、C1-C5烷基單取代的氨基和C1-C5烷基雙取代的氨基，其中各烷基獨(dú)立于其它烷基，限制條件是所述羥基取代基不懸掛在取代的烯基的乙烯基碳原子上，iii.由1-3個(gè)取代基任選取代的C2-C5炔基，所述取代基選自羥基、羧基、羧酸酯、氨基、C1-C5烷基單取代的氨基和C1-C5烷基雙取代的氨基，其中各烷基獨(dú)立于其它烷基，限制條件是所述羥基取代基不懸掛在取代的炔基的乙炔碳原子上，iv.C3-C6環(huán)烷基，v.C3-C6螺環(huán)烷基，vi.羧基，vii.羧酸酯，viii.鹵素，ix.羥基，x.C1-C5烷氧基，xi.氨基，xii.C1-C5烷基單取代的氨基，xiii.C1-C5烷基雙取代的氨基，xiv.芳基，和xv.雜環(huán)基；
Z選自a)烷基，b)取代的烷基，c)烷基氨基，d)烷氧基，e)取代的烷氧基，f)環(huán)烷基，g)雜環(huán)基，h)取代的雜環(huán)基，i)芳基，j)取代的芳基，k)雜芳基，和l)取代的雜芳基；p是選自0或1的整數(shù)Q選自a)-C(X’)NR6-，b)-CH2NR6-，c)-NR6C(X’)-，d)-NR6C(X’)O-，e)-NR6C(X’)NR6-，f)-OC(X’)NR6-，g)-C(X’)O-，h)-CR6＝CR6-，i)-C≡C-，j)-S(O)2NR6-，和k)-S(O)NR6-，其中，X’選自氧和硫，R6各自獨(dú)立地選自氫和C1-C3烷基和C1-C3取代的烷基，或者R6與Q和其連接的碳原子加上R4和其連接的碳原子連接在一起形成雜環(huán)基或取代的雜環(huán)基，限制條件是當(dāng)Q是-C(O)NH-時(shí)，R3不是至少還用-C(O)在-C(O)NH-的β位取代的C2烷基，
進(jìn)一步的限制條件是當(dāng)Q是-S(O)2NH-時(shí)，R3不是至少還用-C(O)取代的C2烷基；W選自-O-、-S-、-SO-和-SO2-；附加條件是當(dāng)環(huán)A是嘧啶和Q是-C(O)NR6-時(shí)，R4不是芳基或雜芳基。
本發(fā)明也提供了含有式I化合物和藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體的藥物組合物。
在另一方面，本發(fā)明提供了治療患有至少部分由CDC7、PKA和/或Akt介導(dǎo)的病癥的哺乳動(dòng)物患者的方法。因此，本發(fā)明提供治療需要所述治療的哺乳動(dòng)物患者的方法，所述方法包括給予該患者治療有效量的式I化合物(包括其混合物)。
在一個(gè)實(shí)施方式中，至少部分由CDC7、PKA和/或Akt介導(dǎo)的病癥是細(xì)胞增殖性病癥。細(xì)胞增殖性病癥可以是癌癥。在另一實(shí)施方式中，癌癥可以是腫瘤或新生物，選自癌、腺癌和肉瘤。
在另一實(shí)施方式中，癌癥可選自實(shí)體瘤/惡性腫瘤、粘液樣和圓形細(xì)胞癌、局部晚期腫瘤、人軟組織癌、癌轉(zhuǎn)移、鱗狀上皮細(xì)胞癌、食道鱗狀上皮細(xì)胞癌、口腔癌、皮膚T細(xì)胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、腎上腺皮質(zhì)癌、產(chǎn)生ACTH的腫瘤、非小細(xì)胞癌、乳腺癌、腸胃癌、泌尿系統(tǒng)癌、女性生殖道惡性腫瘤、男性生殖道惡性腫瘤、腎癌、腦癌、骨癌、皮膚癌、甲狀腺癌、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、腹膜滲出物、惡性胸腔積液、間皮瘤、腎母細(xì)胞瘤、膽囊癌、滋養(yǎng)層腫瘤、血管外皮細(xì)胞瘤和卡波濟(jì)氏肉瘤。
在又一實(shí)施方式中，癌癥選自新生血管發(fā)生-介導(dǎo)的疾病、良性腫瘤、聽神經(jīng)瘤、纖維神經(jīng)瘤、化膿性肉芽瘤、膽道癌、絨毛膜癌、食道癌、胃癌、上皮內(nèi)腫瘤、肺癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、慢性髓細(xì)胞性白血病、急性成髓細(xì)胞性白血病和多發(fā)性骨髓瘤。
在又一方面，本發(fā)明提供了治療哺乳動(dòng)物患者的至少部分由Akt介導(dǎo)的病癥的方法，該方法包括單獨(dú)給予所述患者能有效減少或防止患者腫瘤生長的式I化合物量或與至少一種其它抗癌劑組合給予所述患者能有效減少或防止患者腫瘤生長的式I化合物量。
在又一方面，本發(fā)明提供了治療哺乳動(dòng)物患者的至少部分由PKA介導(dǎo)的病癥的方法，該方法包括單獨(dú)給予所述患者能有效減少或防止患者腫瘤生長的式I化合物量或與至少一種其它抗癌劑組合給予所述患者能有效減少或防止患者腫瘤生長的式I化合物量。在又一方面，本發(fā)明提供了治療哺乳動(dòng)物患者的至少部分由CDC7介導(dǎo)的病癥的方法，該方法包括單獨(dú)給予所述患者能有效減少或防止患者腫瘤生長的式I化合物量或與至少一種其它抗癌劑組合給予所述患者能有效減少或防止患者腫瘤生長的式I化合物量。
可通過合適途徑如口服、靜脈內(nèi)、胃腸道外、透皮、局部、直腸或鼻內(nèi)將本發(fā)明化合物或組合物給予哺乳動(dòng)物。
哺乳動(dòng)物患者包括例如人和其它靈長類，寵物或伴侶動(dòng)物如犬和貓，實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物如大鼠、小鼠和兔以及家畜如馬、豬、綿羊和牛。
優(yōu)選實(shí)施方式在優(yōu)選實(shí)施方式中，環(huán)A選自 式中R、R1、R5、n和m的定義如本文所述，t是0或1。
W優(yōu)選硫。
優(yōu)選的R選自氫、烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、酰氨基、雜芳基、硝基、芳基、-SO2R7、羧酸酯和?；?。
尤其優(yōu)選的R選自2-(甲基氨基)乙-1-基，2-(N-甲基哌嗪-N’-基)乙-1-基，2-(N-甲基吡咯-2-基)乙-1-基，2-(N-嗎啉代)乙-1-基，
2-(哌啶-N-基)乙-1-基，2-(吡啶-2-基)乙-1-基，2-(吡啶-3-基)乙-1-基，2-(吡啶-4-基)乙-1-基，2-(S)-苯基環(huán)丙基，2-氨基乙-1-基，2-羥基乙-1-基，2-苯基乙-1-基，2-螺環(huán)丙基-2-(4-氯苯基)乙-1-基，3-(咪唑-N-基)丙-1-基，3-(N-甲基哌嗪-N’-基)丙-1-基，3-(N-嗎啉代)丙-1-基，3-氨基丁-1-基，3-氨基丙-1-基，5-羧基-4-(R，S)-氨基戊-1-基，氨基羰基，芐基，芐基氨基羰基，丁基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)丙基，環(huán)丙基甲基，二甲基氨基羰基，乙基，乙基氨基羰基，氫，甲基，甲氧基羰基，甲基氨基羰基，甲基羰基，
新戊基，硝基，苯基，苯基氨基羰基，丙基，丙基氨基羰基，吡啶-2-基甲基，吡啶-3-基甲基，吡啶-4-基，吡啶-4-基甲基，和SO2CH3。
R5優(yōu)選氫或甲基。
較佳地，R1選自氫、C1-5烷基、-C(＝O)NR9和-NHC(＝O)-R9，其中R9選自氫或甲基。更佳地，R1選自氫、甲基、氨基羰基和甲基羰基氨基。
較佳地，R2和R4選自氫、羥基、氨基和用芳基或氨基任選取代的C1-C5烷氧基。更佳地，R2和R4選自氫、氨基、羥基、甲氧基、芐氧基和2-氨基乙氧基。
R3優(yōu)選為-(C1-C5亞烷基)p-Z，其中p是0或1。當(dāng)p是1時(shí)，亞烷基鏈優(yōu)選為未取代或用選自以下基團(tuán)的取代基取代的鏈C1-C5烷基，用羥基、氨基、單取代的氨基或雙取代的氨基取代的C1-C5烷基，C2-C5烯基，C2-C5炔基，C3-C6螺環(huán)烷基，羧基，羧酸酯，羥基，氨基，雜環(huán)基和芳基。更優(yōu)選的是，當(dāng)p是1時(shí)，亞烷基鏈?zhǔn)俏慈〈蛴眠x自以下基團(tuán)的取代基取代的鏈2-氨基乙基，2-二甲基氨基乙基，和2-羥乙基，2-甲基氨基乙基，3-甲基氨基丙基，氨基，氨基甲基，羧基，二甲基氨基，二甲基氨基甲基，
乙基，甲基，甲基羧基，嗎啉代，羥甲基，苯基，丙-2-烯基，丙-2-炔基，丙基，螺環(huán)丁基，和螺環(huán)丙基。
在其它優(yōu)選實(shí)施方式中，Z選自環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、烷基、氨基、烷基氨基和二烷基氨基。
尤其優(yōu)選的R3選自(2-氟-4-甲氧基苯基)乙-1-基，(2-氟-4-甲基苯基)乙-1-基，[1-(4-氯苯基)環(huán)丁-1-基]甲基，[1-(4-氯苯基)環(huán)丙-1-基]甲基，1-(1-氨基乙基)-4-氯-1H-苯并咪唑-2-基，1-(2-氨基乙基)-1H-苯并咪唑-2-基，1-(2-氨基乙基)-4-氯-1H-苯并咪唑-2-基，1-(2-氨基乙基)-4-甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基，1-(2-氨基乙基)-4-苯基-1H-苯并咪唑-2-基，1-(2-氨基乙基)-7-氯-1H-苯并瞇唑-2-基，1-(2-甲基丙基)-4-氯-1H-苯并咪唑-2-基，1-(3，3-二甲基丁基)-4-氯-1H-苯并咪唑-2-基，1-(3-氨基丙基)-4-氯-1H-苯并咪唑-2-基，1-(4-氯苯基)-3-(N-甲基氨基)丙-1-基，1-(4-氯苯基)-3-(N，N-二甲基氨基)丙-1-基，1-(4-氯苯基)-3-羥基丙-1-基，
1-(氨基甲基)-2-(2，4-二氯苯基)乙-1-基，1-(R)-1-(2，4-二氯芐基)-4-(二甲基氨基)丁-2-基，1-(R)-1-(2，4-二氯芐基)-4-(甲基氨基)丁-2-基，1-(R)-1-(2，4-二氯芐基)-4-氨基丁-2-基，1-(R)-2-(2，4-二氯苯基)-1-甲基乙-1-基，1-(R)-4-氟苯基)乙-1-基，1-(R)-氨基-1-(2，4-二氯芐基)乙-1-基，1-(R)-氨基甲基-2-(2，4-二氯苯基)乙-1-基，1-(R)-羥甲基-2-(4-氯苯基)乙-1-基，1-(R，S)-羧基-2-(2，4-二氯苯基)乙-1-基，1-(R，S)-羥甲基-1-苯基甲基，1-(R，S)-羥甲基-2-(2，4-二氯苯基)乙-1-基，1-(R，S)-羥甲基-2-苯基乙-1-基，1-(R，S)-甲基羧基-2-(2，4-二氯苯基)乙-1-基，1-(R，S)-苯基-2-苯基乙-1-基，1-(S)-1-(2，4-二氯芐基)-4-(二甲基氨基)丁-2-基，1-(S)-1-(2，4-二氯芐基)-4-(甲基氨基)丁-2-基，1-(S)-1-(2，4-二氯芐基)-4-氨基-丁-2-基，1-(S)-氨基-1-(2，4-二氯芐基)乙-1-基，1-(S)-氨基甲基-2-(1H-吲哚-3基)乙-1-基，1-(S)-氨基甲基-2-(2，4-二氯苯基)乙-1-基，1-(S)-氨基甲基-2-(吲哚-3-基)乙-1-基，1-(S)-二甲基氨基-2-(2，4-二氯苯基)乙-1-基，1-(S)-二甲基氨基甲基-2-(2，4-二氯苯基)乙-1-基，1，2，3，4-四氫萘-1-基，1-氨基乙基-4-甲氧基苯并咪唑-2-基，1-氨基甲基-2-(2，4-二氯苯基)乙-1-基，1-氨基甲基-2-(4-氯苯基)乙-1-基，1-氨基甲基-4-氯-1H-苯并咪唑-2-基，1-芐基吡咯烷-3-基，1-二甲基氨基-3-(2，4-二氯苯基)丙-2-基，
1-乙基-4-氯苯并咪唑-2-基，1-羥甲基-2-(2，4-二氯苯基)乙-1-基，1-羥甲基-2-甲基丙-1-基，1-異丁基-4-氯苯并咪唑-2-基，1-甲基-2-羥基乙-1-基，1-甲基-4-氯苯并咪唑-2-基，1-甲基苯并咪唑-2-基，1-苯基-1-(4-氯苯基)甲基，1-苯基-2-羥基乙-1-基，2-(2，4-二氯苯基)丁-1-基，2-(2，4-二氯苯基)乙-1-基，2-(2，4-二氯苯基)戊-1-基，2-(2，4-二氯苯基)戊-4-烯-1-基，2-(2，4-二氯苯基)戊-4-炔-1-基，2-(2，4-二氯苯基)丙-1-基，2-(2，5-二甲氧基苯基)乙-1-基，2-(2，6-二氯苯基)乙-1-基，2-(2-氯苯基)乙-1-基，2-(3，4-二氯苯基)乙-1-基，2-(3，4-二甲氧基苯基)乙-1-基，2-(3-氯苯基)乙-1-基，2-(3-氟苯基)乙-1-基，2-(3-甲氧基苯基)乙-1-基，2-(4-氨基苯基)乙-1-基，2-(4-氨基磺酰基苯基)乙-1-基，2-(4-聯(lián)苯基)乙-1-基，2-(4-溴苯基)乙-1-基，2-(4-氯苯基)乙-1-基，2-(4-乙氧基苯基)乙-1-基，2-(4-乙基苯基)乙-1-基，2-(4-氟苯基)乙-1-基，
2-(4-甲氧基苯基)乙-1-基，2-(4-甲基苯基)乙-1-基，2-(4-苯氧基苯基)乙-1-基，2-(N-甲基哌嗪-N’-基)乙-1-基，2-(N-甲基吡咯-2-基)乙-1-基，2-(N-嗎啉代)乙-1-基，2-(哌啶-1-基)乙-1-基，2-(哌啶-3-基)乙-1-基，2-(吡啶-2-基)乙-1-基，2-(吡啶-4-基)乙-1-基，2-(R)-(N-嗎啉代)-2-苯基乙-1-基，2-(R)-氨基-3-(吲哚-3-基)丙-1-基，2-(R)-羥基茚滿-1-基，2-(R)-甲基-2-苯基乙-1-基，2-(R，S)-氨基-2-苯基乙-1-基，2-(R，S)-羥基-2-(4-氯苯基)乙-1-基，2-(R，S)-甲基-2-苯基乙-1-基，2-(S)-氨基-3-(吲哚-3-基)丙-1-基，2-(S)-甲基-2-苯基乙-1-基，2-(三氟甲基)-4-氟苯基甲基，2，4-二氯芐基，2，4-二氯苯基甲基，2，2-二甲基-5-芐基四氫吡喃-4-基，2，2-二苯基乙-1-基，2，4-二氯芐基，2，4-二氟芐基，2，5-二氟芐基，2-氨基苯并噻唑-4-基，2-氨基乙-1-基，2-氯芐基，2-二甲基氨基乙-1-基，
2-氟-4-氯芐基，2-氟-6-氨基芐基，2-甲氧基芐基，2-甲基-4-氯苯基甲基，2-甲基芐基，2-苯乙基，2-苯基芐基，2-哌啶-N-基芐基，3-(4-氟苯基)丙-1-基，3-(吡咯-N-基)丙-1-基，3，4-二氯芐基，3，5-二氯芐基，3，5-二氟芐基，3-氨基-1-(4-氯苯基)丙-1-基，3-溴芐基，3-氯芐基，3-甲氧基芐基，4-(2-氯苯基)噻唑-2-基，4-(3，4-二氟苯基)噻唑-2-基，4-(3-氯苯基)噻唑-2-基，4-(4-甲氧基苯基)噻唑-2-基，4-(氨基甲基)苯并噻唑-2-基，4-(吡啶-2-基)噻唑-2-基，4-(吡啶-3-基)噻唑-2-基，4-(三氟甲氧基)-6-(氨基甲基)苯并噻唑-2-基，4-(三氟甲基)-6-(氨基甲基)苯并噻唑-2-基，4，6-二氯苯并噻唑-2-基，4，6-二氟苯并噻唑-2-基，4-氨基-2-(4-氯苯基)丁-1-基，4-氨基芐基，4-氨基磺?；S基，
4-溴-6-(氨基甲基)苯并噻唑-2-基，4-溴-6-異丙基-苯并噻唑-2-基，4-溴苯并噻唑-2-基，4-溴芐基，4-氯-[2-(S)-2-(氨基丙酰基)氨基甲基]苯并噻唑-2-基，4-氯-1，3-苯并噻唑-2-基，4-氯-5-甲基羧基-苯并噻唑-2-基，4-氯-6-({[2-(S)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基}甲基)苯并噻唑-2-基，4-氯-6-(2-氨基乙基)苯并噻唑-2-基，4-氯-6-(2-硝基乙基)苯并噻唑-2-基，4-氯-6-(二甲基氨基甲基)苯并噻唑-2-基，4-氯-6-(甲基氨基甲基)苯并噻唑-2-基，4-氯-6-(甲基羰基氨基甲基)苯并噻唑-2-基，4-氯-6-(三氟甲氧基)苯并噻唑-2-基，4-氯-6-(三氟甲基)苯并噻唑-2-基，4-氯-6-[(2-氨基)乙基氨基羰基]苯并噻唑-2-基，4-氯-6-{[(氨基甲基羰基)氨基]甲基}苯并噻唑-2-基，4-氯-6-氨基甲基苯并噻唑-2-基，4-氯-6-羥甲基苯并噻唑-2-基，4-氯-6-甲基氨基甲基苯并噻唑-2-基，4-氯-6-甲基噻唑-2-基，4-氯-6-N-嗎啉代甲基-苯并噻唑-2-基，4-氯-7-氨基甲基-苯并噻唑-2-基，4-氯-7-羥甲基-苯并噻唑-2-基，4-氯苯并噻唑-2-基，4-氯苯并唑-2-基，4-氯芐基，4-二甲基氨基芐基，4-氟芐基，4-氟苯并噻唑-2-基，4-氟芐基，
4-氟苯基，4-氟苯基甲基，4-羥基-2-(4-氯苯基)丁-1-基，4-羥基苯并噻唑-2-基，4-羥基苯并噻唑-4-基，4-甲氧基-6-(甲基氨基甲基)苯并噻唑-1-基，4-甲氧基苯并噻唑-2-基，4-甲氧基噻唑-2-基，4-甲基-6-氨基甲基-苯并噻唑-2-基，4-甲基芐基，4-甲基噻唑-2-基，4-苯基噻唑-2-基，5-(2-溴噻吩-5-基)噻唑-2-基，5-(3-溴-4-甲氧基苯基)噻唑-2-基，5-氯苯并咪唑-2-基，5-氯苯并噻唑-2-基，6-氨基甲基-8-氯喹啉-2-基，6-氨基甲基-苯并噻唑-2-基，6-氯苯并噻唑-2-基，6-氟苯并噻唑-2-基，7-氯苯并噻唑-2-基，苯并咪唑-2-基，苯并噻唑-2-基，苯并噻唑-6-基，苯并噻吩-2-基(benzothiophen-2-yl)，芐基，氫，茚滿-1-基(indan-1-yl)，萘-1-基甲基，吡啶-2-基甲基，吡啶-3-基甲基，
吡啶-4-基甲基，嘧啶-3-基，吡咯烷-3-基，喹啉-2-基，喹啉-3-基，喹啉-6-基，和噻吩-2-基甲基(thiophen-2-ylmethyl)。
優(yōu)選的Q基團(tuán)包括-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH-、-NHC(O)O-、-CH2NH-、-C(O)N(CH2CH2NH2)-、-C(O)N(CH3)-、-SO2NH-、-C(O)O-、-CH＝CH-和-C≡C-。
在另一優(yōu)選上述方式中，R6與Q和其連接的碳原子加上R4和其連接的碳原子連接在一起形成取代的雜環(huán)基，更優(yōu)選連接形成5，6-二氫嘧啶-4-酮。
R6優(yōu)選為氫或用氨基任選取代的C1-3取代的烷基。
其它實(shí)施方式本發(fā)明涉及式IA代表的取代的五元雜環(huán)衍生化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或前藥 式中R選自a)氫，b)羥基，c)烷基，d)取代的烷基，e)環(huán)烷基，f)取代的環(huán)烷基，g)-SO2R5，其中R5是C1-C5烷基或取代的烷基，
h)烷氧基，i)羧酸酯，j)硝基，k)芳基，l)取代的芳基，m)雜芳基，n)取代的雜芳基，o)酰氨基，和p)?；籖a選自氫、烷基和取代的烷基；R1各自獨(dú)立地選自a)鹵素，b)氰基，c)硝基，d)羥基，e)巰基，f)氨基，g)取代的氨基，h)烷氧基，i)取代的烷氧基，j)芳氧基，k)取代的芳氧基，l)雜芳氧基，m)取代的雜芳氧基，n)烷硫基，o)取代的烷硫基，p)-C(＝O)NR”R”，其中R”各自獨(dú)立地選自氫、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基，或者各R”可任選地與懸掛在它上面的氮原子連接在一起形成雜環(huán)基，q)-NHC(＝O)-R”，其中R”的定義如上，r)芳基或雜芳基，各自可被任選取代的烷基或芳基任選取代，和s)用1-3個(gè)取代基任選取代的C1-C5烷基，所述取代基選自鹵素、羥基、氨基、C1-C5烷基單取代的氨基和C1-C5烷基雙取代的氨基，其中各烷基獨(dú)立于其它烷基；m是等于0、1或2的整數(shù)；R2和R2’獨(dú)立地選自a)氫，b)環(huán)烷基，c)雜環(huán)基，d)芳基，e)雜芳基，f)用1-3個(gè)取代基任選取代的C1-C5烷基，所述取代基選自鹵素、羥基、氨基、C1-C5烷基單取代的氨基和C1-C5烷基雙取代的氨基，其中各烷基獨(dú)立于其它烷基，g)用1-3個(gè)取代基任選取代的C1-C5烯基，所述取代基選自鹵素、羥基、氨基、C1-C5烷基單取代的氨基和C1-C5烷基雙取代的氨基，其中各烷基獨(dú)立于其它烷基，h)用1-3個(gè)取代基任選取代的C1-C5炔基，所述取代基選自鹵素、羥基、氨基、C1-C5烷基單取代的氨基和C1-C5烷基雙取代的氨基，其中各烷基獨(dú)立于其它烷基，i)用1-3個(gè)取代基任選取代的C1-C5烷氧基，所述取代基選自鹵素、羥基、氨基、C1-C5烷基單取代的氨基和C1-C5烷基雙取代的氨基，其中各烷基獨(dú)立于其它烷基，j)羥基，k)氨基，l)C1-C5烷基單取代的氨基，和m)C1-C5烷基雙取代的氨基，其中各烷基獨(dú)立于其它烷基，限制條件是當(dāng)R2或R2’之一是環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基或雜芳基時(shí)，R2或R2’中另一個(gè)是氫；R3選自a)C1-C5烷基，和b)在亞烷基鏈上由1-2個(gè)取代基任選取代的-(C1-C5亞烷基)p-Z，所述取代基選自i.由1-3個(gè)取代基任選取代的C1-C5烷基，所述取代基選自羥基、羧基、羧酸酯、氨基、C1-C5烷基單取代的氨基和C1-C5烷基雙取代的氨基，其中各烷基獨(dú)立于其它烷基，ii.由1-3個(gè)取代基任選取代的C2-C5烯基，所述取代基選自羥基、羧基、羧酸酯、氨基、C1-C5烷基單取代的氨基和C1-C5烷基雙取代的氨基，其中各烷基獨(dú)立于其它烷基，，iii.由1-3個(gè)取代基任選取代的C2-C5炔基，所述取代基選自羥基、羧基、羧酸酯、氨基、C1-C5烷基單取代的氨基和C1-C5烷基雙取代的氨基，其中各烷基獨(dú)立于其它烷基，，iv.C3-C6環(huán)烷基，v.C3-C6螺環(huán)烷基，vi.羧基，vii.羧酸酯，viii.鹵素，ix.羥基，x.C1-C5烷氧基，xi.氨基，xii.C1-C5烷基單取代的氨基，xiii.C1-C5烷基雙取代的氨基，其中各烷基獨(dú)立于其它烷基，xiv.芳基；Z選自a)烷基，b)取代的烷基，c)烷基氨基，d)烷氧基，e)取代的烷氧基，f)環(huán)烷基，g)雜環(huán)基，h)取代的雜環(huán)基，
i)芳基，j)取代的芳基，k)雜芳基，和l)取代的雜芳基；p是0或1；Q選自a)-C(X’)NR6-，b)-CH2NR6-，c)-NR6C(X’)-，d)-NR6C(X’)O-，e)-NR6C(X’)NR6-，和f)-OC(X’)NR6-，其中，X’選自氧和硫，R6選自氫和C1-C3烷基和C1-C3取代的烷基，限制條件是當(dāng)Q是-C(O)NH-時(shí)，R3不是至少還用-C(O)取代的C2烷基；W選自-O-、-S-、-SO-和-SO2-；X各自獨(dú)立地選自-CH-、-CR1(R1定義如上)或氮，限制條件是至少一個(gè)X是氮；和Y選自-CH-、-CR1(R1定義如上)或氮，限制條件是當(dāng)Y是氮時(shí)，兩個(gè)X都是氮，限制條件還有當(dāng)Y是-CH-或-CR1且Q是-C(O)NR6-時(shí)，R2’不是芳基或雜芳基。
本發(fā)明的示范性化合物下表1-5列舉了本發(fā)明范圍內(nèi)的取代的五元雜環(huán)衍生物。在下表中，“Me”指甲基、“Et”指乙基，“Ph”指苯基。
表1
*化合物108是2，4-噻吩。
*化合物145用1，3，5-三嗪替代了嘧啶。
表2
表3
表4
表5
在實(shí)施例部分表6中可以發(fā)現(xiàn)本發(fā)明范圍內(nèi)的具體化合物。
發(fā)明詳述定義和概覽如上所述，本發(fā)明涉及新的取代的五元雜環(huán)化合物。
也應(yīng)理解，本文所用術(shù)語的目的僅為說明具體實(shí)施方式
，并不旨在限制本發(fā)明范圍。必須注意，本文和權(quán)利要求中所用的單數(shù)形式″一個(gè)(a)″、″一種(an)″和″這種(the)″包括復(fù)數(shù)含義，除非文中明確指出不是這樣。在此說明書和所附權(quán)利要求書中，參照應(yīng)具有以下定義的許多術(shù)語除非另有定義，以下術(shù)語具有下述含義。
術(shù)語″烷基″指具有1-5個(gè)碳原子、更優(yōu)選1-3個(gè)碳原子的單價(jià)飽和脂族烴基。該術(shù)語的例子是，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、正戊基等。
″取代的烷基″指具有1-3、優(yōu)選1-2個(gè)取代基的烷基，所述取代基選自烷氧基、取代的烷氧基、?；?、酰氨基、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基?；?、芳基、取代的芳基、芳氧基、取代的芳氧基、氰基、鹵原子、羥基、硝基、羧基、羧酸酯、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、螺環(huán)烷基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基和取代的雜環(huán)基。
“亞烷基”指優(yōu)選具有1-5個(gè)碳原子、更優(yōu)選具有1-3個(gè)碳原子的二價(jià)飽和脂族烴基，可以是直鏈或支鏈。該術(shù)語的例子是，例如亞甲基(-CH2-)、亞乙基(-CH2CH2-)、亞正丙基(-CH2CH2CH2-)、亞異丙基(-CH2CH(CH3)-)等。
″烷氧基″指″烷基-O-″，包括例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基等。
″取代的烷氧基″指″取代的烷基-O-″。
″?；⒅窰-C(O)-、烷基-C(O)-、取代的烷基-C(O)-、烯基-C(O)-、取代的烯基-C(O)-、炔基-C(O)-、取代的炔基-C(O)-環(huán)烷基-C(O)-、取代的環(huán)烷基-C(O)-、芳基-C(O)-、取代的芳基-C(O)-、雜芳基-C(O)-、取代的雜芳基-C(O)-、雜環(huán)基-C(O)-和取代的雜環(huán)基-C(O)-，其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基和取代的雜環(huán)基的定義如本文所述。
″酰氨基″指-C(O)NR10R10，其中R10各自獨(dú)立地選自氫、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基，各R10與氮原子連接形成雜環(huán)或取代的雜環(huán)，其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)和取代的雜環(huán)的定義如本文所述。
″酰氧基″指烷基-C(O)O-、取代的烷基-C(O)O-、烯基-C(O)O-、取代的烯基-C(O)O-、炔基-C(O)O-、取代的炔基-C(O)O-、芳基-C(O)O-、取代的芳基-C(O)O-、環(huán)烷基-C(O)O-、取代的環(huán)烷基-C(O)O-、雜芳基-C(O)O-、取代的雜芳基-C(O)O-、雜環(huán)基-C(O)O-和取代的雜環(huán)基-C(O)O-，其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基和取代的雜環(huán)基的定義如本文所述。
″烯基″指具有2-6個(gè)碳原子、優(yōu)選2-4個(gè)碳原子并具有至少1個(gè)、優(yōu)選1-2個(gè)烯基不飽和位點(diǎn)的烯基。這種基團(tuán)的例子是乙烯基、烯丙基、丁-3-烯-1-基等。
″取代的烯基″指具有1-3個(gè)取代基、優(yōu)選1-2個(gè)取代基的烯基，所述取代基選自烷氧基、取代的烷氧基、?；Ⅴ０被?、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基?；?、芳基、取代的芳基、芳氧基、取代的芳氧基、氰基、鹵原子、羥基、硝基、羧基、羧酸酯、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基和取代的雜環(huán)基，附帶條件是任何羥基取代基不能連接在乙烯基(不飽和)碳原子上。
″炔基″指具有2-6個(gè)碳原子、優(yōu)選2-3個(gè)碳原子并具有至少1個(gè)、優(yōu)選1-2個(gè)炔基不飽和位點(diǎn)的炔基。
″取代的炔基″指具有1-3個(gè)取代基、優(yōu)選1-2個(gè)取代基的炔基，所述取代基選自烷氧基、取代的烷氧基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基?；?、芳基、取代的芳基、芳氧基、取代的芳氧基、氰基、鹵原子、羥基、硝基、羧基、羧酸酯、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基和取代的雜環(huán)基，附帶條件是任何羥基取代基不連接于乙炔(不飽和)碳原子。
“氨基”指-NH2。
“氰基”指-CN。
“取代的氨基”指-NR10R10，其中R10各自獨(dú)立地選自氫、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基，假如兩個(gè)R10都不是氫，各R10與其結(jié)合的氮原子連接形成雜環(huán)基或取代的雜環(huán)基。當(dāng)R10是氫、另一個(gè)R10是烷基時(shí)，本文中的取代的氨基有時(shí)稱為烷基氨基。當(dāng)兩個(gè)R10都是烷基時(shí)，本文中的取代的氨基有時(shí)稱為二烷基氨基。當(dāng)指單取代的氨基時(shí)，意思是一個(gè)而非兩個(gè)R10是氫。當(dāng)指雙取代的氨基時(shí)，意思是兩個(gè)R10都不是氫。
″氨基?；逯?NR11C(O)烷基、-NR11C(O)取代的烷基、-NR11C(O)環(huán)烷基、-NR11C(O)取代的環(huán)烷基、-NR11C(O)烯基、-NR11C(O)取代的烯基、-NR11C(O)炔基、-NR11C(O)取代的炔基、-NR11C(O)芳基、-NR11C(O)取代的芳基、-NR11C(O)雜芳基、-NR11C(O)取代的雜芳基、-NR11C(O)雜環(huán)基和-NR11C(O)取代的雜環(huán)基，其中R11是氫或烷基，其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基和取代的雜環(huán)基的定義如本文所述。
“硝基”指-NO2。
″芳基″或″Ar″指具有一個(gè)環(huán)(如苯基)或多個(gè)稠合環(huán)(如萘基或蒽基)的6-14個(gè)碳原子的單價(jià)芳香碳環(huán)基團(tuán)，假如連接點(diǎn)在芳香碳原子上，稠合環(huán)可以是或不是芳香環(huán)(如2-苯并唑啉酮、2H-1，4-苯并嗪-3(4H)-酮-7-基等)。優(yōu)選芳基包括苯基和萘基。
“取代的芳基”指用1-3個(gè)取代基、優(yōu)選1-2個(gè)取代基取代的芳基，所述取代基選自羥基、?；?、酰氨基、酰氧基、烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、氨基、取代的氨基、氨基?；⒎蓟?、取代的芳基、芳氧基、取代的芳氧基、羧基、羧酸酯、氰基、巰基、烷硫基、取代的烷硫基、芳硫基、取代的芳硫基、雜芳硫基、取代的雜芳硫基、環(huán)烷硫基、取代的環(huán)烷硫基、雜環(huán)硫基、取代的雜環(huán)硫基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、鹵素、硝基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、雜芳氧基、取代的雜芳氧基、雜環(huán)氧基、取代的雜環(huán)氧基、氨基磺酰基(NH2-SO2-)和取代的氨基磺?；?。
″芳氧基″指芳基-O-，包括例如苯氧基、萘氧基等。
″取代的芳氧基″指取代的芳基-O-。
″羧基″指-COOH或其鹽。
″羧酸酯″指-C(O)O-烷基、-C(O)O-取代的烷基、-C(O)-芳基和-C(O)O-取代的芳基，其中烷基、取代的烷基、芳基和取代的芳基的定義如本文所述。
″環(huán)烷基″指具有一個(gè)或多個(gè)環(huán)的3-10個(gè)碳原子的環(huán)烷基，包括例如金剛烷基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)辛基等。
“螺環(huán)烷基”指具有螺接的環(huán)烷基環(huán)(螺接由一個(gè)原子形成，該原子是這些環(huán)的唯一共有原子)的3-10個(gè)碳原子的環(huán)狀基團(tuán)，如以下結(jié)構(gòu)所示
″取代的環(huán)烷基″指具有1-5個(gè)取代基的環(huán)烷基，所述取代基選自氧代(＝O)、硫代(＝S)、烷氧基、取代的烷氧基、?；Ⅴ０被?、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基?；?、芳基、取代的芳基、芳氧基、取代的芳氧基、氰基、鹵原子、羥基、硝基、羧基、羧酸酯、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基和取代的雜環(huán)基。
″環(huán)烷氧基″指-O-環(huán)烷基。
″取代的環(huán)烷氧基″指-O-取代的環(huán)烷基。
″鹵素″或″鹵原子″指氟、氯、溴和碘，優(yōu)選氟或氯。
“羥基”指-OH。
″雜芳基″指環(huán)中有1-10個(gè)碳原子和1-4個(gè)雜原子的芳香基團(tuán)，雜原子選自氧、氮和硫。所述雜芳基可具有一個(gè)環(huán)(如吡啶基或呋喃基)或多個(gè)稠合環(huán)(如中氮茚基或苯并噻吩基)，其中假如連接點(diǎn)在芳香雜芳基的原子上，稠合環(huán)可以是或不是芳香環(huán)和/或含有或不含雜原子。雜芳基優(yōu)選包括吡啶基、吡咯基、吲哚基、苯硫基(thiophenyl)和呋喃基。
本文所用術(shù)語“含氮雜芳基”指至少一個(gè)環(huán)原子是氮，優(yōu)選1-6個(gè)環(huán)原子是氮的雜芳基。在一些實(shí)施方式中，1-4個(gè)環(huán)原子是氮。
″取代的雜芳基″指用1-3個(gè)取代基取代的雜芳基，所述取代基選自取代的芳基中定義的取代基。
″雜芳氧基″指-O-雜芳基，″取代的雜芳氧基″指-O-取代的雜芳基。
″雜環(huán)″或″雜環(huán)基″或“雜環(huán)烷基”或“雜環(huán)基”指具有一個(gè)環(huán)或多個(gè)稠合環(huán)、環(huán)中具有1-10個(gè)碳原子和14個(gè)選自氮、硫或氧的雜原子的飽和或不飽和基團(tuán)，在稠合環(huán)系統(tǒng)中，假如連接點(diǎn)在雜環(huán)上，一個(gè)或多個(gè)環(huán)可以是環(huán)烷基、芳基或雜芳基。
″取代的雜環(huán)″或“取代的雜環(huán)烷基”或“取代的雜環(huán)基”指用與取代的環(huán)烷基中定義的相同的1-3個(gè)取代基取代的雜環(huán)基。
雜環(huán)基和雜芳基的例子包括但不限于氮雜環(huán)丁烷、吡咯、咪唑、吡唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、噠嗪、中氮茚、異吲哚、吲哚、二氫吲哚、吲唑、嘌呤、喹嗪、異喹啉、喹啉、酞嗪、萘基吡啶、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、咔唑、咔啉、菲啶、吖啶、菲咯啉、異噻唑、吩嗪、異唑、吩嗪、吩噻嗪、咪唑烷、咪唑啉、哌啶、哌嗪、二氫吲哚、鄰苯二甲酰亞胺、1，2，3，4-四氫-異喹啉、4，5，6，7-四氫苯并[b]噻吩、噻唑、噻唑烷、噻吩、苯并[b]噻吩、嗎啉基、硫代嗎啉基(也稱為硫嗎啉基)、哌啶基、吡咯烷、四氫呋喃基等。
應(yīng)注意，當(dāng)提到雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基和取代的雜環(huán)基時(shí)，可任選地氧化可能存在的任何氮原子或硫原子。
″巰基″指-SH。
″烷硫基″或“烷硫基醚(alkylthioether)”或“硫代烷氧基(alkoxythio)”指-S-烷基。
″取代烷硫基″或“取代烷硫基醚”或“取代的硫代烷氧基”指-S-取代的烷基。
“芳硫基”指-S-芳基，其中芳基定義如上。
“取代的芳硫基”指-S-取代的芳基，其中取代的芳基定義如上。
“雜芳硫基”指-S-雜芳基，其中雜芳基定義如上。
“取代的雜芳硫基”指-S-取代的雜芳基，其中取代的雜芳硫基定義如上。
″雜環(huán)硫基″指-S-雜環(huán)和＂取代的雜環(huán)硫基＂指-S-取代的雜環(huán)，其中雜環(huán)和取代的雜環(huán)定義如上。
“雜環(huán)氧基”指雜環(huán)基-O-，“取代的雜環(huán)基-O-指取代的雜環(huán)基-O-，其中雜環(huán)基和取代的雜環(huán)基定義如上。
“環(huán)烷硫基”指-S-環(huán)烷基，“取代的環(huán)烷硫基”指-S-取代的環(huán)烷基，其中環(huán)烷基和取代的環(huán)烷基定義如上。
本文所用″生物活性″指在實(shí)施例22-25所列的至少一個(gè)實(shí)驗(yàn)中測(cè)定時(shí)的抑制濃度。
本文所用術(shù)語″藥學(xué)上可接受的鹽″指式I化合物的無毒酸鹽或堿土金屬鹽。可在最后分離和純化式I化合物期間原位制備、或通過使堿或酸官能團(tuán)分別與合適的有機(jī)或無機(jī)的酸或堿單獨(dú)反應(yīng)制備這些鹽。代表性鹽包括但不限于乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、檸檬酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、二葡糖酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、葡糖庚酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、已酸鹽、延胡索酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙烷磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、煙堿鹽、2-萘磺酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽(pamoate)、果膠酸鹽(pectinate)、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽和十一酸鹽。同時(shí)，可用試劑如烷基鹵化物如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；二烷基硫酸酯如硫酸二甲基、硫酸二乙基、硫酸二丁基和硫酸二戊基，長鏈鹵化物如癸基、十二烷基、十四烷基和十八烷基的氯化物、溴化物和碘化物，芳烷基鹵化物如芐基溴和苯乙基溴等使堿性含氮基團(tuán)季銨化。從而獲得可溶解或分散于水或油的產(chǎn)物。
可用于形成藥學(xué)上可接受的酸加成鹽的酸的例子包括無機(jī)酸如鹽酸、硫酸和磷酸，以及有機(jī)酸如草酸、馬來酸、甲磺酸、琥珀酸和檸檬酸。可在最后分離和純化式I化合物期間原位制備、或通過使羧酸部分與合適堿或與氨或有機(jī)伯胺、仲胺或叔胺單獨(dú)反應(yīng)制備堿加成鹽，合適堿例如藥學(xué)上可接受的金屬陽離子的氫氧化物，碳酸鹽或碳酸氫鹽。藥學(xué)上可接受的鹽包括但不限于基于堿金屬和堿土金屬的陽離子，如鈉鹽、鋰鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、鋁鹽等，以及銨、季銨和胺陽離子，包括但不限于銨、四甲基銨、四乙基銨、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等?？捎糜谛纬蓧A加成鹽的其它代表性有機(jī)胺包括二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等。
本文所用術(shù)語“藥學(xué)上可接受的酯”指可在體內(nèi)水解的酯，包括在人體內(nèi)降解釋放出母體化合物或其鹽的酯。合適的酯基團(tuán)包括例如衍生自藥學(xué)上可接受的脂族羧酸，尤其是鏈烷酸、鏈烯酸、環(huán)烷酸和鏈烷二羧酸的酯，其中各烷基或烯基部分最好不多于6個(gè)碳原子。具體酯的代表性例子包括但不限于甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯、丁酸酯、丙烯酸酯和乙基琥珀酸酯(ethylsuccinate)。
本文所用術(shù)語“藥學(xué)上可接受的前藥”指本發(fā)明化合物的前藥，它們?cè)诤侠磲t(yī)療判斷范圍內(nèi)適合用于接觸人和低等動(dòng)物的組織而不產(chǎn)生過分毒性、刺激性、過敏反應(yīng)等，與合理利益/風(fēng)險(xiǎn)比相當(dāng)，并有效用于預(yù)計(jì)用途，(可能時(shí))是本發(fā)明化合物的兩性離子形式。術(shù)語“前藥”指在體內(nèi)迅速轉(zhuǎn)化，例如在血液中通過水解產(chǎn)生上式母體化合物的化合物。以下文獻(xiàn)中討論了這個(gè)問題T.Higuchi和V.Stella，《前藥作為新型遞送系統(tǒng)》(Pro-drugs as Novel Delivery Systems)，第14卷，A.C.S.系列研討會(huì)，和Edward B.Roche編，《藥物設(shè)計(jì)中生物可逆的載體》(Bioreversible Carriers in DrugDesign)，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press，1987，將其納入本文作為參考。
本文所用“抗癌劑”或“癌癥治療劑”指包括例如凋亡誘導(dǎo)劑；多核苷酸(如核酶)；多肽(如酶)；藥物；生物模擬物；生物堿；烷化劑；抗癌抗生素；抗代謝劑；激素；鉑化合物；與抗癌藥、毒素和/或放射性核素偶聯(lián)的單克隆抗體；生物反應(yīng)修飾劑(如干擾素和白介素等)；過繼性免疫療法藥；造血生長因子；誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化的藥物(如全反式維甲酸等)；基因治療試劑；反義療法試劑和核苷酸；腫瘤疫苗；新生血管發(fā)生抑制劑等藥物。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知許多其它藥物。
應(yīng)理解，在上面定義的所有取代基中，本發(fā)明不包括通過使取代基本身又被其它取代基取代得到的聚合物(如具有取代的芳基作為取代基的取代的芳基，取代基本身被取代的芳基取代等)。在這種情況下，這種取代基的最大數(shù)目是三個(gè)。即上述定義各自限于以下限制(例如)取代的芳基僅限于-取代的芳基-(取代的芳基)-取代的芳基。
類似地，應(yīng)理解上述定義不旨在包括不允許的取代模式(如用5個(gè)氟取代甲基或羥基連接于乙烯或乙炔不飽和基團(tuán)的α位)。這些不允許的取代模式是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。
由于化合物中存在一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱或手性中心，本發(fā)明化合物可具有立體異構(gòu)性。本發(fā)明考慮了各種立體異構(gòu)體和其混合物。某些本發(fā)明化合物含有不對(duì)稱取代的碳原子。這些不對(duì)稱取代的碳原子可導(dǎo)致本發(fā)明化合物包括特定不對(duì)稱取代的碳原子的立體異構(gòu)體混合物或一種立體異構(gòu)體。結(jié)果是，本發(fā)明包括本發(fā)明化合物的外消旋混合物、非對(duì)映異構(gòu)體的混合物、一種對(duì)映異構(gòu)體、以及一種非對(duì)映異構(gòu)體。本文所用術(shù)語″S″和″R″構(gòu)型的定義見IUPAC 1974″RECOMMENDATIONS FORSECTION E，F(xiàn)UNDAMENTAL STEREOCHEMISTRY，″Pure Appl.Chem.4513-30，1976。所需對(duì)映異構(gòu)體可通過用本領(lǐng)域熟知方法從市售手性原材料手性合成獲得、或可通過用已知技術(shù)從對(duì)映異構(gòu)體混合物分離所需對(duì)映異構(gòu)體而獲得。
本發(fā)明化合物也可具有幾何異構(gòu)性。幾何異構(gòu)體包括具有烯基或亞烯基部分的本發(fā)明化合物的順式和反式形式。本發(fā)明包括各幾何異構(gòu)體和立體異構(gòu)體及其混合物。
化合物制備可用以下通用方法和步驟從容易獲得的原材料制備本發(fā)明化合物。應(yīng)理解，當(dāng)給定一般或優(yōu)選的反應(yīng)條件(即反應(yīng)溫度、時(shí)間、反應(yīng)物的摩爾比、溶劑、壓力)時(shí)，也可采用其它反應(yīng)條件，除非另有說明。最優(yōu)反應(yīng)條件可隨所用具體反應(yīng)物或溶劑而改變，但本領(lǐng)域技術(shù)人員用常規(guī)優(yōu)化步驟可確定這些條件。
此外，正如本領(lǐng)域技術(shù)人員了解的那樣，需要常規(guī)的保護(hù)基團(tuán)來防止某些官能團(tuán)發(fā)生不需要的反應(yīng)。各種官能團(tuán)的合適保護(hù)基團(tuán)以及保護(hù)和去保護(hù)具體官能團(tuán)的合適條件是本領(lǐng)域熟知的。例如，T.W.Greene和P.G.M.Wuts，《有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)》(Protecting Groups in Organic Synthesis)，第二版，Wiley，New York，1991及其引用的參考文獻(xiàn)中描述了許多保護(hù)基團(tuán)。
而且，本發(fā)明化合物可含有一個(gè)或多個(gè)手性中心。因此，如果需要，這些化合物可制備或分離為純的立體異構(gòu)體，即單一的對(duì)映異構(gòu)體或非對(duì)映異構(gòu)體，或富含立體異構(gòu)體的混合物。除非另有說明，本發(fā)明范圍包括所有這些立體異構(gòu)體(和富集混合物)?？捎?例如)本領(lǐng)域熟知的光學(xué)活性原材料或立體選擇性試劑制備純的立體異構(gòu)體(或富集混合物)?；蛘?，可用(例如)手性柱色譜、手性拆分劑等分離這些化合物的外消旋混合物。
除非另有說明，用于以下實(shí)施例的試劑是市售的，可購自(例如)Sigma-AldrichCompany，Inc.(Milwaukee，WI，USA)。
可根據(jù)以下方案1合成本發(fā)明化合物?？赏ㄟ^在各種已知的成酰胺條件下將羧酸1A與式NH2R3胺偶聯(lián)形成化合物1B。在110℃的回流甲苯中使甲基酮1B接觸1.5當(dāng)量二甲基甲酰胺縮二甲醇，產(chǎn)生插烯的的酰胺1C。然后，還可在具有合適堿如2.1當(dāng)量NaOEt/EtOH的堿性條件下用2當(dāng)量式H2NC(＝NR)NH2胍的鹽酸鹽在80℃處理酰胺1C 16小時(shí)，產(chǎn)生5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺。
方案1合成5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺 式中R和R3的定義如本文所述或者，可通過活化嘧啶2B官能化嘧啶環(huán)，如方案2所示。在合適溶劑如吡啶中，插烯的酰胺1C與S-甲基異硫脲半硫酸鹽(0.5當(dāng)量H2SO4中的3當(dāng)量H2NC(＝NH)SMe)在100℃下縮合(condense)3天形成硫化物2A，然后室溫在溶劑如二氯甲烷中用2當(dāng)量間氯過氧苯甲酸氧化14小時(shí)得到砜2B，在1，4-二烷中與式RNH2的合適胺在110℃反應(yīng)約4-14小時(shí)，產(chǎn)生1D。
方案2
式中R和R3的定義如本文所述此外，也可通過首先組裝嘧啶環(huán)、然后引入羧酰胺部分來合成1D類型的化合物，如方案3所示。在回流甲苯中于110℃用2.5當(dāng)量二甲基甲酰胺縮二甲醇處理1A 15小時(shí)，產(chǎn)生3A。在合適堿如NaOEt/EtOH的堿性條件下，將插烯的酰胺3A與2當(dāng)量式H2NC(＝NR)NH2胍的鹽酸鹽在70℃反應(yīng)約15小時(shí)，形成乙酯3B。然后，在0.5當(dāng)量NaOMe的MeOH溶液中將之前反應(yīng)的產(chǎn)物與胺NH2R3在70℃縮合2天，產(chǎn)生酰胺1D。
方案3 式中R和R3的定義如本文所述也可如方案4所示合成噻吩羧酰胺。4A與NaH和三氟甲磺酸酐在DCM中室溫下反應(yīng)60小時(shí)形成雙三氟甲磺酸酯4B。羧酸4C與1當(dāng)量羰基二咪唑在THF中于室溫下反應(yīng)約12小時(shí)，然后與合適胺NH2R3偶聯(lián)產(chǎn)生酰胺4D。合適的胺起始材料包括羥基胺、烷基胺、硝基胺、H2N-CN等。通過鈀(0.05當(dāng)量Pd(dppf)2)催化的鈴木(Suzuki)反應(yīng)(2當(dāng)量DIEA，THF，在80℃反應(yīng)12小時(shí))將1.1當(dāng)量雙三氟甲磺酸酯4B偶聯(lián)于硼酸4D，產(chǎn)生三氟甲磺酸酯4E。在回流條件下將胺(5當(dāng)量RNH2或RRaNH的THF溶液)加入4E中反應(yīng)約16小時(shí)產(chǎn)生嘧啶4F。
方案4 式中R、R1、R3的定義如本文所述鈀介導(dǎo)的偶聯(lián)形成嘧啶-噻吩鍵也可以得到吡啶基取代的噻吩，如方案5所示，其中用靶催化劑如Pd(PPh3)4的2.6當(dāng)量Na2CO3(2M水溶液)溶液于70℃反應(yīng)18小時(shí)將1當(dāng)量硼酸偶聯(lián)于2-氯-4-碘吡啶5A。用過量(5-45當(dāng)量)胺RRaNH的THF溶液在150℃取代得到的氯化物2天，產(chǎn)生5-(2-氨基吡啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺。
方案5合成5-(2-氨基吡啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺 式中R和R3的定義如本文所述可如方案6所示合成含有4-(5-氨基噻吩-2-基)嘧啶-2-胺核心的本發(fā)明化合物。在溶劑如甲醇中用10當(dāng)量肼在70℃處理酯6A 16小時(shí)，形成酰肼6B。然后在乙酸中用1.05當(dāng)量HCl(0.6M水溶液)和1當(dāng)量NaNO2(4.0M水溶液)于0℃反應(yīng)30分鐘將酰肼轉(zhuǎn)變?yōu)轷；B氮6C。在加熱時(shí)化合物6C重排形成異氰酸酯，它可與胺(在二甲苯中于130℃反應(yīng)30分鐘，然后與3當(dāng)量R3NH2在130℃反應(yīng)1小時(shí))、醇(在二甲苯中于130℃反應(yīng)30分鐘，然后與3當(dāng)量R3OH在130℃反應(yīng)1小時(shí))或酸(在6當(dāng)量1.5M HCl水溶液中于100℃反應(yīng)16小時(shí))反應(yīng)，分別產(chǎn)生脲6D、氨基甲酸酯6E或胺6F。化合物6F還可被進(jìn)一步?；?，如用R3C(＝O)OC(＝O)-咪唑?；a(chǎn)生酰胺6G。
方案6合成4-(5-氨基噻吩-2-基)嘧啶-2-胺衍生物。
式中R和R3的定義如本文所述可如方案7所述合成含有5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-3-羧酰胺核心的本發(fā)明化合物，其中3-溴噻吩7C被鋰化，用二氧化碳猝滅該反應(yīng)。得到的酸7D可進(jìn)一步與胺偶聯(lián)產(chǎn)生相應(yīng)的酰胺7E。
方案75-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-3-羧酰胺
式中R和R3的定義如本文所述可如方案8所示合成含有5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-氨基甲基核心的本發(fā)明化合物。在THF中于70℃下，用(PPh3)Pd(0)以2，4-二氯嘧啶官能化親核試劑8A后，在酸性條件下去除縮醛基團(tuán)，然后接觸胺，通過乙醛8C形成相應(yīng)亞胺。在還原性胺化條件下將乙醛8C的亞胺轉(zhuǎn)變?yōu)榘?D。取代氯化物8D產(chǎn)生所需胺8E。
方案8合成5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-氨基甲烷
可如方案9所述合成含有5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-磺酰胺核心的本發(fā)明化合物。將購自Maybridge(Maybridge，Trevillett，Tintagel，Cornwall，PL34 OHW，英國)的磺酰氯9A與胺R3NH2相接觸，其中R3＝4-氯苯乙基，然后用間氯過氧苯甲酸氧化產(chǎn)生化合物9B。用胺取代磺酸酯產(chǎn)生磺酰胺9C。
方案9合成5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-磺酰胺 實(shí)施例中還提供了制備這些化合物的合成方法的其它范例。
藥物劑型當(dāng)用作藥物時(shí)，本發(fā)明化合物通常以藥物組合物的形式給藥?？赏ㄟ^各種途徑，包括口服、胃腸道外、透皮、局部、直腸和鼻內(nèi)給予這些化合物。這些化合物在注射組合物和口服組合物中都有效。用藥學(xué)領(lǐng)域中熟知的方式制備這種組合物，它包含至少一種活性化合物。
本發(fā)明也包括含有一種或多種上述本發(fā)明化合物(作為活性成分)以及藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。在制備本發(fā)明組合物的過程中，通常將活性成分與賦形劑混合、用賦形劑稀釋并封裝在載體中，載體可以是膠囊、藥囊、紙或其它容器的形式。所用賦形劑一般是適合給予人對(duì)象或其它哺乳動(dòng)物的賦形劑。當(dāng)賦形劑用作稀釋劑時(shí)，它可以是固體、半固體或液體材料，用作活性成分的載體(vehicle)、運(yùn)載體(carrier)或介質(zhì)。因此，該組合物可以是片劑、丸劑、粉末、錠劑、藥囊、扁囊劑、酏劑、懸浮液、乳劑、溶液、糖漿、氣霧劑(為固體或在液體介質(zhì)中)、含有(例如)高達(dá)10重量％活性化合物的軟膏、軟明膠和硬明膠膠囊、栓劑、無菌注射溶液和無菌封裝粉末的形式。
在制劑的制備過程中，在與其它成分混合之前可能需要研磨活性化合物以提供合適粒度。如果活性化合物基本不溶，通常將它研磨到粒度小于200目。如果活性化合物基本溶于水，通常通過研磨將粒度調(diào)整到在制劑中基本均一地分布的程度，如約40目。
合適賦形劑的一些例子包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯樹膠、磷酸鈣、藻酸鹽、黃蓍膠、明膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、無菌水、糖漿和甲基纖維素。制劑中還可包括潤滑劑如滑石粉、硬脂酸鎂和礦物油；濕潤劑；乳化劑和懸浮劑；防腐劑如甲基-和丙基羥基-苯甲酸鹽；甜味劑以及調(diào)味劑?？捎帽绢I(lǐng)域已知方法配制本發(fā)明組合物，以在給予患者后快速釋放、緩釋和延遲釋放活性成分。
藥物組合物及其單位劑型中活性成分即本發(fā)明化合物的量可因具體應(yīng)用、具體化合物的效力和所需濃度而大大改變或調(diào)整。
優(yōu)選將組合物配制成單位劑型，每劑含有約1-500mg，通常約5-100mg，偶爾約10-30mg活性成分。術(shù)語“單位劑型”指適合用作人對(duì)象和其它哺乳動(dòng)物的單一劑型的物理上分開的單位，各單位含有經(jīng)計(jì)算能產(chǎn)生所需療效的預(yù)定量的活性材料，再加上合適的藥物賦形劑。上述本發(fā)明化合物優(yōu)選以不高于約藥物組合物的20重量％，更優(yōu)選不高于約15重量％應(yīng)用，余量為藥學(xué)上惰性的載體。
活性化合物在寬劑量范圍內(nèi)有效，通常給予藥學(xué)上或治療上有效的量。然而應(yīng)理解，醫(yī)生根據(jù)相關(guān)情況，包括待治療的病癥、所治療病癥的嚴(yán)重性、選擇的給藥途徑、實(shí)際給予的化合物、個(gè)體患者的年齡、體重和反應(yīng)以及患者癥狀的嚴(yán)重性等決定實(shí)際給予的化合物量。
在治療或?qū)箿匮獎(jiǎng)游镅装Y的治療應(yīng)用中，可通過任何合適途徑如口服、局部、透皮和/或胃腸道外給予能獲得和維持一定濃度的劑量的本發(fā)明化合物或其藥物組合物，所述濃度即活性組分在進(jìn)行治療的動(dòng)物中能有效治療的量或血液水平。通常，這種治療有效量的活性組分劑量(即有效劑量)的范圍是約0.1-100，更優(yōu)選約1.0-50mg/kg體重/天。
為了制備固體組合物如片劑，將主要活性成分與藥物賦形劑混合形成含有本發(fā)明化合物的均一混合物的固體預(yù)制劑組合物。當(dāng)提到這些預(yù)制劑組合物均一時(shí)，指活性成分均勻分散在整個(gè)組合物中，以致于不難將該組合物再分為同樣有效的單位劑型如片劑、丸劑和膠囊。然后，再將此固體預(yù)制劑分為含有(例如)0.1-約500mg本發(fā)明活性成分的上述類型的單位劑型。
本發(fā)明的片劑或丸劑可包衣或復(fù)合(compound)，以提供產(chǎn)生延長作用的優(yōu)點(diǎn)的劑型。例如，片劑或丸劑可包含劑內(nèi)組分和劑外組分，后者是前者包膜的形式。這兩種組分可由腸溶層(enteric layer)分開，腸溶層用于抵抗胃內(nèi)崩解并使內(nèi)部組分能夠完整地進(jìn)入十二指腸或被延遲釋放?？蓪⒏鞣N材料用于所述腸溶層或腸溶衣，這種材料包括多種聚合酸和聚合酸的混合物，這種材料例如紫膠、十六烷醇和纖維素乙酸酯。
本發(fā)明新組合物可摻入其中的、用于口服給藥或注射給藥的液體形式包括水溶液、適當(dāng)調(diào)味的糖漿，水懸液或油懸液和用食用油如玉米油、棉花籽油、芝麻油、椰子油或花生油調(diào)味的乳劑，以及酏劑和類似藥物運(yùn)載體。
用于吸入或吹入的組合物包括藥學(xué)上可接受的水性或有機(jī)溶劑的溶液或懸液，或其混合物和粉末。該液體或固體組合物可包含適當(dāng)?shù)纳鲜鏊帉W(xué)上可接受的賦形劑。優(yōu)選通過口腔或鼻腔呼吸途徑給予該組合物以產(chǎn)生局部或全身效果。可用惰性氣體霧化優(yōu)選的藥學(xué)上可接受的溶劑中的組合物。可從噴霧裝置(或噴霧裝置可連接于面罩)或間歇正壓呼吸機(jī)中直接吸入霧化溶液。優(yōu)選經(jīng)口或經(jīng)鼻從以適當(dāng)方式遞送該制劑的裝置給予溶液、懸液或粉末組合物。
以下劑型實(shí)施例闡明本發(fā)明的代表性藥物組合物。
劑型實(shí)施例1制備含有以下成分的硬明膠膠囊量成分 (mg/膠囊)活性成分 30.0淀粉 305.0硬脂酸鎂 5.0混合上述成分并填入硬明膠膠囊中，總量340mg。
劑型實(shí)施例2用以下成分制備片劑量成分(mg/片)活性成分25.0微晶纖維素 200.0膠體二氧化硅10.0硬脂酸 5.0混合這些組分并壓縮形成片劑，每片重240mg。
劑型實(shí)施例3制備含有以下組分的干粉吸入劑成分重量％活性成分5乳糖95將活性成分與乳糖混合，將混合物加入干粉吸入裝置中。
劑型實(shí)施例4如下所述制備片劑，每片含30mg活性成分量成分(mg/片)活性成分30.0mg淀粉45.0mg微晶纖維素 35.0mg聚乙烯吡咯烷酮 4.0mg(10％的無菌水溶液)羧甲基淀粉鈉4.5mg硬脂酸鎂0.5mg滑石粉1.0mg總計(jì)120mg
使活性成分、淀粉和纖維素通過20目美國篩(No.20 mesh U.S.sieve)，充分混合。將聚乙烯吡咯烷酮溶液與得到的粉末混合，然后使其通過16目美國篩(No.16 meshU.S.sieve)。在50℃-60℃干燥這樣產(chǎn)生的顆粒，并通過16目美國篩。羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂和滑石粉先通過30目美國篩(No.30 mesh U.S.sieve)，然后加入該顆粒中，混合后在壓片機(jī)上壓縮產(chǎn)生片劑，每片重120mg。
劑型實(shí)施例5如下所述制備膠囊，每粒膠囊含有40mg藥物量成分 (mg/膠囊)活性成分 40.0mg淀粉 109.0mg硬脂酸鎂1.0mg總計(jì) 150.0mg混合活性成分、淀粉和硬脂酸鎂，通過20目美國篩，填入硬明膠膠囊中，總量150mg。
劑型實(shí)施例6如下所述制備栓劑，每劑含有25mg活性成分成分 量活性成分 25mg飽和脂肪酸甘油酯至 2,000mg將活性成分通過60目美國篩，懸浮于之前必須用最小加熱融化的飽和脂肪酸甘油酯中。然后將該混合物傾倒入標(biāo)稱為2.0g容量的栓劑模具中，然后使之冷卻。
劑型實(shí)施例7如下所述制備懸浮劑，每5.0mL劑量含有50mg藥物成分量活性成分50.0mg黃原膠 4.0mg羧甲基纖維素鈉(11％)50.0mg微晶纖維素(89％)蔗糖1.75g苯甲酸鈉10.0mg香料和顏料 q.v.
純化水至5.0mL混合活性成分、蔗糖和黃原膠，通過10目美國篩，然后與之前制備的微晶纖維素和羧甲基纖維素鈉的水溶液混合。在攪拌下用一些水稀釋苯甲酸鈉、香料和顏料并加入。然后加入足量水以產(chǎn)生所需體積。
劑型實(shí)施例8量成分 (mg/膠囊)活性成分 15.0mg淀粉 407.0mg硬脂酸鎂 3.0mg總計(jì) 425.0mg混合活性成分、淀粉和硬脂酸鎂，通過20目美國篩，填入硬明膠膠囊中，總量425.0mg。
劑型實(shí)施例9可如下所述制備皮下劑型成分 量活性成分 5.0mg玉米油 1.0mL
劑型實(shí)施例10可如下所述制備局部劑型成分量活性成分1-10g乳化蠟 30g液體石蠟20g白色軟石蠟 至100g將白色軟石蠟加熱至融化。摻入液體石蠟和乳化蠟并攪拌至溶解。加入活性成分并繼續(xù)攪拌直到分散。然后將該混合物冷卻至固體。
劑型實(shí)施例11可如下所述制備靜脈內(nèi)劑型成分 量活性成分 250mg等滲鹽水 1000mL用于本發(fā)明方法的另一優(yōu)選劑型采用透皮遞送裝置(“貼劑”)?？捎眠@種透皮貼劑連續(xù)或不連續(xù)地輸注控制量的本發(fā)明化合物。透皮貼劑的構(gòu)建和在遞送藥物中的應(yīng)用是本領(lǐng)域熟知的。參見例如1991年6月11日公布的美國專利5,023,252，納入本文作為參考。可將這種貼劑構(gòu)建為連續(xù)遞送藥物、脈沖遞送藥物或按需遞送藥物。
常常想要或需要將藥物組合物直接或間接引入腦中。直接技術(shù)通常包括將藥物遞送導(dǎo)管置入宿主的腦室系統(tǒng)中以避開血腦屏障。納入本文作為參考的美國專利5,011,472描述了用于將生物因子輸送到身體的特定解剖區(qū)域的一種可植入遞送系統(tǒng)。
通常優(yōu)選間接技術(shù)，它通常包括配制組合物以通過將親水性藥物轉(zhuǎn)變?yōu)橹苄运幬锸顾幬餄摲?。通常通過封閉藥物上存在的羥基、羰基、硫酸根和伯胺基團(tuán)實(shí)現(xiàn)潛伏化，以使藥物的脂溶性更高并且更易于通過血腦屏障運(yùn)輸?；蛘?，可通過動(dòng)脈內(nèi)輸注可瞬時(shí)打開血腦屏障的高滲溶液增強(qiáng)親水性藥物的遞送。
可在《雷明頓藥物科學(xué)》(Remington’s Pharmaceutical Sciences)，Mace PublishingCompany，Philadelphia，PA，第17版本(1985)中發(fā)現(xiàn)適合用于本發(fā)明的其它劑型。
如上所述，本文所述化合物適合用于上述各種藥物遞送系統(tǒng)。此外，為了延長所給化合物的體內(nèi)血清半衰期，可將化合物裝入膠囊、引入脂質(zhì)體內(nèi)腔、制備為膠體或可用能延長該化合物血清半衰期的其它常規(guī)技術(shù)處理化合物?？色@得制備脂質(zhì)體的各種方法，如Szoka等，美國專利號(hào)4,235,871、4,501,728和4,837,028所述，各自納入本文作為參考。
給藥本發(fā)明化合物可用于抑制真核細(xì)胞中Akt的活性。Akt的激活與許多上游事件相關(guān)，包括磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)介導(dǎo)的事件，響應(yīng)于各種生長因子、細(xì)胞因子、胰島素、緩激肽、RANTES和內(nèi)皮縮血管肽，Akt被征集到質(zhì)膜。Akt活化也與連接于胞外基質(zhì)(ECM)和各種形式的細(xì)胞應(yīng)激(如缺氧和熱激)相關(guān)。
已知的PKB底物包括但不限于Bcl-2促調(diào)亡家族成員(BAD)；通過FasL和Bim介導(dǎo)凋亡的FOXO家族fork-head轉(zhuǎn)錄因子；癌癥相關(guān)性3’-磷酸酶PTEN；乳腺癌易感基因產(chǎn)物1(BRCA-1)；cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)；內(nèi)皮一氧化氮合酶(eNOS)；NFκB抑制劑(I-κB)；無K(Lys)蛋白激酶-1(WNKl)，與II型假醛固酮減少癥II(PHAII)相關(guān)的高血壓相關(guān)基因(Vitari等，2003)；和與細(xì)胞生長和癌癥相關(guān)的其它蛋白。根據(jù)已鑒定的Akt底物數(shù)目和這些底物在細(xì)胞增殖性病癥如癌癥中的普遍性，預(yù)計(jì)也能鑒定到其它癌癥相關(guān)性Akt底物。
抑制Akt活性的能力將允許調(diào)控Akt底物，包括本文所列底物的活性。由于已知Akt底物與特定形式的癌癥相關(guān)如BRCA-1，或通常相信與抑制凋亡相關(guān)如Bcl-2，所以抑制Akt的能力會(huì)有利于預(yù)防或治療不受控制的細(xì)胞增殖，包括癌癥。本發(fā)明可用于用本發(fā)明化合物和/或組合物治療哺乳動(dòng)物中出現(xiàn)的癌癥。哺乳動(dòng)物包括例如人和其它靈長類，寵物或伴侶動(dòng)物如犬和貓，實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物如大鼠、小鼠和兔以及家畜如馬、豬、綿羊和牛。
類似地，已知PKA能活化與細(xì)胞周期調(diào)節(jié)、膽固醇運(yùn)輸、激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)的基因表達(dá)，并已知能活化胞外基質(zhì)(ECM)蛋白酶、神經(jīng)肽、免疫基因、胰島素樣生長因子(IGF)家族成員和與精子發(fā)生、細(xì)胞生長、分化和增殖相關(guān)的其它蛋白(Tierney等，2003)。調(diào)控PKA活性的能力將能夠調(diào)控PKA底物，包括本文所列底物的活性。
此外，本發(fā)明化合物可用于治療至少部分由CDC7介導(dǎo)的病癥。在癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)CDC7水平升高。因此，考慮了本發(fā)明化合物(例如)通過抑制該酶調(diào)控CDC7活性。
腫瘤或新生物包括細(xì)胞繁殖不受控制并不斷進(jìn)行的組織細(xì)胞生長。一些所述生長是良性的，但其它稱為“惡性”并可導(dǎo)致生物死亡。惡性腫瘤或“癌癥”與良性生長的區(qū)別在于，除具有侵襲性細(xì)胞增殖以外，它們還可侵入周圍組織并轉(zhuǎn)移。而且，惡性腫瘤的特征是它們嚴(yán)重丟失了分化特性(嚴(yán)重“去分化”)以及互相的組織關(guān)系和與周圍組織的組織關(guān)系。此特性稱為“間變”。
預(yù)計(jì)可用本發(fā)明化合物和/或組合物治療的腫瘤或新生物包括但不限于實(shí)體瘤，即癌、腺癌和肉瘤。癌包括滲入(侵入)周圍組織并產(chǎn)生轉(zhuǎn)移的衍生自上皮細(xì)胞的惡性腫瘤。腺癌是衍生自粒狀組織或衍生自形成可識(shí)別粒狀結(jié)構(gòu)的組織的癌。另一大類癌癥包括肉瘤，它們是細(xì)胞包埋在纖維狀或均一性物質(zhì)如胚胎結(jié)締組織中的腫瘤。
具體說，本發(fā)明可用于治療乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、黑色素瘤等。
可通過一種或多種方法和/或用一種或多種藥物組合物(其中一些見本文所述)將本發(fā)明化合物遞送給動(dòng)物，如人患者。將有益藥理制劑遞送給人和其它動(dòng)物的其它方法是本領(lǐng)域熟知的。
可按需改性具有所需生物活性的化合物，以提供所需特性如改進(jìn)的藥理特性(如體內(nèi)穩(wěn)定性、生物利用度)或在診斷應(yīng)用被檢測(cè)的能力。可用各種方式，例如通過測(cè)量該化合物在與肽酶或人血漿或血清孵育期間的半衰期測(cè)定穩(wěn)定性。
為了診斷目的，可將各種標(biāo)記連接于該化合物，以直接或間接提供可檢測(cè)信號(hào)。因此，可為各種最終目的用各種方式改性本發(fā)明化合物和/或組合物，而仍保持其生物活性。此外，可引入各種反應(yīng)活性位點(diǎn)，以連接于顆粒、固體基材、大分子等。
標(biāo)記化合物可用于各種體內(nèi)或體外應(yīng)用?？刹捎酶鞣N標(biāo)記，如放射性核素(如發(fā)射γ射線的放射性同位素如锝-99或銦-111)、熒光劑(如熒光素)、酶、酶底物、酶輔因子、酶抑制劑、化學(xué)發(fā)光化合物、生物發(fā)光化合物等。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員知道結(jié)合于該復(fù)合物的其它合適標(biāo)記，或能夠用常規(guī)實(shí)驗(yàn)確定其它合適標(biāo)記。用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)實(shí)現(xiàn)這些標(biāo)記的結(jié)合。
本發(fā)明藥物組合物適合用于各種藥物遞送系統(tǒng)。適合用于本發(fā)明的劑型見《雷明頓藥物科學(xué)》(Remington’s Pharmaceutical Sciences)，Mace Publishing Company，Philadelphia，Pa.，第17版(1985)。
給予患者的量將因給予的藥物、給藥目的如預(yù)防或治療、病人狀態(tài)、給藥方式等而不同。在治療應(yīng)用中，將組合物給予已患有疾病的患者，給藥量足以治愈或至少部分阻滯疾病及其并發(fā)癥的進(jìn)展和癥狀。將足以完成此目的的量定義為“治療有效劑量”或“治療有效量”。此用途的有效量將取決于所治療病情以及主治醫(yī)師根據(jù)許多因素如疾病、病癥或病情的嚴(yán)重性，患者的年齡、體重和總體情況等作出的判斷。
給予患者的化合物一般是上述藥物組合物的形式?？赏ㄟ^常規(guī)殺菌技術(shù)或過濾除菌使這些組合物無菌。得到的水溶液可包裝待用或凍干，在給藥前將凍干制劑與無菌水性載體混合。該化合物制劑的pH一般為約3-11，更優(yōu)選約5-9，最優(yōu)選約7-8。應(yīng)理解用某些上述賦形劑、載體或穩(wěn)定劑將導(dǎo)致形成藥物鹽。
本發(fā)明化合物和/或組合物的治療劑量將根據(jù)(例如)治療的具體用途、給予該化合物的方式、患者的健康和病情以及處方醫(yī)生的判斷而改變。例如，對(duì)于口服給藥，劑量范圍一般為約10μg-20mg/千克體重/天，優(yōu)選約1mg-10mg/千克體重/天。另外，對(duì)于靜脈內(nèi)給藥而言，劑量范圍一般為約5μg-10,000μg/千克體重，優(yōu)選約500μg-5000μg/千克體重?？紤]的其它給藥途徑包括但不限于鼻內(nèi)、透皮、吸入、皮下和肌肉內(nèi)?？捎色@自體外或動(dòng)物模型測(cè)試系統(tǒng)的劑量反應(yīng)曲線外推有效劑量。
通常，通過用途相似的任何接受的給藥方式給予治療有效量的本發(fā)明化合物和/或組合物。可用標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)方法在細(xì)胞培養(yǎng)物或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中測(cè)定所述化合物的毒性和療效，如測(cè)定LD50(對(duì)50％群體致死的劑量)和ED50(在50％群體中有效治療的劑量)。毒性和療效的劑量比是治療指數(shù)，它可表示為LD50/ED50比。優(yōu)選治療指數(shù)大的化合物。
獲自細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定和動(dòng)物研究的數(shù)據(jù)可用于設(shè)計(jì)用于人的劑量范圍。該化合物的劑量?jī)?yōu)選在包括ED50、毒性很小或無毒性的循環(huán)濃度范圍內(nèi)。該劑量可在此范圍內(nèi)根據(jù)所用劑型和所用給藥途徑而改變。對(duì)于用于本發(fā)明方法的任何化合物和/或組合物，一開始可由細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定估計(jì)治療有效劑量。在動(dòng)物模型中設(shè)計(jì)劑量，以獲得包括細(xì)胞培養(yǎng)中測(cè)定的IC50(受試化合物實(shí)現(xiàn)半數(shù)最大抑制活性的濃度)的循環(huán)血漿濃度范圍。這些信息可用于更準(zhǔn)確地確定人中的有用劑量?？捎?例如)高效液相色譜測(cè)定血漿水平。
提供以下合成和生物實(shí)施例是為了說明本發(fā)明，不應(yīng)以任何方式解釋為限制本發(fā)明范圍。除非另有說明，所有溫度都表示為攝氏度。
實(shí)施例參照以下實(shí)施例，用本文所述方法或本領(lǐng)域熟知的其它方法合成本發(fā)明化合物。
用裝有2690分離模塊的Waters Millenium色譜系統(tǒng)(Milford，MA)進(jìn)行高效液相色譜(HPLC)，以表征化合物和/或中間體。分析柱是Alltech的Alltima C-18反相柱，4.6×250mm(Deerfield，IL)。用梯度洗脫，一般用5％乙腈/95％水起始，在40分鐘內(nèi)逐步提高到100％乙腈。所有溶劑都含有0.1％三氟乙酸(TFA)。通過220或254nm處的紫外線(UV)吸收檢測(cè)化合物。HPLC溶劑來自Burdick和Jackson(Muskegan，MI)或Fisher Scientific(Pittsburgh，PA)。在一些情況下，通過采用背覆玻璃或塑料的硅膠板，如Baker-Flex硅膠1B2-F柔性板的薄層色譜(TLC)評(píng)價(jià)純度。在紫外光下，或用已知的碘蒸氣或其它各種顯色技術(shù)不難目測(cè)TLC結(jié)果。
在兩個(gè)LCMS裝置之一上進(jìn)行質(zhì)譜分析Waters系統(tǒng)(Alliance HT HPLC和Micromass ZQ質(zhì)譜儀；柱Eclipse XDB-C18，2.1×50mm；溶劑系統(tǒng)5-95％(或35-95％或65-95％或95-95％)乙腈的水溶液(含有0.05％TFA)；流速0.8mL/分鐘；分子量范圍500-1500；錐電壓20V；柱溫度40℃)或Hewlett Packard系統(tǒng)(1100系列HPLC；柱Eclipse XDB-C18，2.1×50mm；溶劑系統(tǒng)1-95％乙腈的水溶液(含有0.05％TFA)；流速0.4mL/分鐘；分子量范圍150-850；錐電壓50V；柱溫度30℃)。所有報(bào)告質(zhì)量都是質(zhì)子化母離子的質(zhì)量。
在Hewlett Packard裝置(裝有質(zhì)量選擇性檢測(cè)器5973的HP6890系列氣相色譜；注射器體積1μL；起始柱溫度50℃；最終柱溫度250℃；升溫時(shí)間(ramp time)20分鐘；氣體流速1mL/分鐘；柱5％苯基甲基硅氧烷，型號(hào)HP190915-443，尺寸30.0m×25m×0.25m)上進(jìn)行GCMS分析。
用Varian 300MHz NMR(Palo Alto，CA)對(duì)一些化合物進(jìn)行核磁共振(NMR)分析。參比譜是溶劑的TMS或已知化學(xué)位移的溶劑。一些化合物樣品在升高溫度(如75℃)下運(yùn)行，以促進(jìn)樣品溶解性提高。
通過元素分析(Desert Analytics，Tucson，AZ)評(píng)價(jià)一些本發(fā)明化合物的純度。
在Laboratory Devices Mel-Temp裝置(Holliston，MA)上測(cè)定熔點(diǎn)。
用快速40色譜系統(tǒng)和KP-Sil，60A(Biotage，Charlottesville，VA)、或以硅膠(230-400目)為填充料的快速柱色譜，或采用C-18反相柱的HPLC進(jìn)行制備型分離。用于快速40Biotage系統(tǒng)和快速柱色譜的溶劑一般為二氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯、己烷、丙酮、水性羥胺和三乙胺。用于反相HPLC的溶劑一般為不同濃度的乙腈和水(含有0.1％三氟乙酸)。
除非另有說明，所有溫度都表示為攝氏度。同時(shí)，在這些實(shí)施例和其它地方，縮寫的含義如下aq＝水性Boc2O＝二碳酸二叔丁酯
BuLi＝丁基鋰CDI＝N，N’-羰基二咪唑d＝天DCM＝二氯甲烷DIEA＝二異丙基乙胺DMAP＝二甲基氨基吡啶DMF-DMA＝二甲基甲酰胺縮二甲醇DMSO＝二甲基亞砜EDTA＝乙二胺四乙酸eq.＝當(dāng)量ES/MS＝電子噴射質(zhì)譜Et3N＝三乙胺EtOH＝乙醇g＝克GCMS＝氣相色譜質(zhì)譜h＝小時(shí)HOAc＝乙酸HOBt＝1-羥基苯并三唑HPLC＝高效液相色譜kg＝千克L＝升M＝摩爾/升(molar)m/z＝質(zhì)量/電荷比mCPBA＝間氯過氧苯甲酸MeOH＝甲醇mg＝毫克mL＝毫升mol＝摩爾N＝當(dāng)量濃度(normal)nM＝納摩爾/升(nanomolar)NaOEt＝乙醇鈉
NaOMe＝甲醇鈉nBuLi＝正丁基鋰Pd(dppf)2＝1，1′-雙(聯(lián)苯基膦基)二茂鐵鈀Pd(PPh3)4＝四(三苯基膦)鈀(0)PyBrop＝溴代三吡咯烷代六氟磷酸鹽rt＝室溫Tf＝三氟甲磺酸酯THF＝四氫呋喃v/v＝體積/體積μM＝微摩爾/升(micromolar)以下實(shí)施例含有編號(hào)化合物。實(shí)施例中所用編號(hào)并不與表1-6中的編號(hào)對(duì)應(yīng)。
實(shí)施例1合成N-[2-(4-氟苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺 步驟1縮合為酰胺(2)N，N’-羰基二咪唑(1.00當(dāng)量)加入0.25M的化合物1的無水四氫呋喃溶液中。在室溫下攪拌該混合物2小時(shí)。加入4-氟苯乙胺(1.00當(dāng)量)，再在室溫下攪拌該反應(yīng)4小時(shí)。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。將該產(chǎn)物再溶解于二氯甲烷，依次用水和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮，產(chǎn)生化合物2。ES/MS m/z 292(MH+)，C15H14FNO2S＝291g/mol。
步驟2形成乙烯化酰胺(3)將二甲基甲酰胺縮二甲醇(1.50當(dāng)量)加入0.30M的化合物1(1.00當(dāng)量)的無水甲苯溶液中。使該反應(yīng)回流15h，然后回復(fù)到室溫。通過加入1∶1醚∶己烷來沉淀產(chǎn)物，真空過濾分離產(chǎn)物。再用1∶1醚∶己烷沖洗濾餅，然后減壓干燥，產(chǎn)生化合物3，為棕褐色固體。ES/MS m/z 347(MH+)，C18H19FN2O2S＝346g/mol。
步驟3形成嘧啶環(huán)(4)將乙醇鈉(2.10當(dāng)量)和鹽酸甲基胍(2.00當(dāng)量)加入0.2M的化合物3(1.00當(dāng)量)的無水乙醇懸液中。在80℃攪拌該反應(yīng)2天，然后回復(fù)到室溫。用二氯甲烷稀釋該混合物，依次用水和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮。用快速色譜在硅膠上純化粗產(chǎn)物(96∶4二氯甲烷∶甲醇)，產(chǎn)生化合物4。ES/MS m/z 357(MH+)，C18H17FN4OS＝356g/mol。
實(shí)施例2合成N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-{2-[(2-羥乙基)氨基]嘧啶-4-基}噻吩-2-羧酰胺 步驟1形成嘧啶環(huán)(5)注本實(shí)施例所列“化合物3”的制備方式類似于N-[2-(4-氟苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺，除了(1)在步驟1中，用2，4-二氯苯乙胺替換4-氟苯乙胺和(2)將胺加入中間體?；溥蛲?acylimidazolide)后，在50℃攪拌該反應(yīng)。
在100℃將化合物3(1.00當(dāng)量)加入到1.2M的S-甲基異硫脲半硫酸鹽(3.00當(dāng)量)的4∶1水∶吡啶溶液中。在100℃攪拌該混合物3天。冷卻到室溫后，用二氯甲烷稀釋該混合物，依次用水和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮。用快速色譜在硅膠上純化粗產(chǎn)物(1∶1∶1己烷∶乙酸乙酯∶二氯甲烷)，產(chǎn)生化合物5。ES/MS m/z424，426(MH+)，C18H15Cl2N3OS2＝424g/mol。
步驟2氧化為砜(6)在室溫下將間氯過氧苯甲酸(2.00當(dāng)量)加入0.25 M的化合物5的二氯甲烷溶液中。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?6小時(shí)。用二氯甲烷稀釋該混合物，依次用1M碳酸鈉水溶液和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮。用快速色譜在硅膠上純化粗產(chǎn)物(1∶1∶1己烷∶乙酸乙酯∶二氯甲烷)，產(chǎn)生化合物6。ES/MS m/z 456，458(MH+)，C18H15Cl2N3O3S2＝456g/mol。
步驟3用胺取代砜(4)將乙醇胺(R＝CH2CH2OH，2.00當(dāng)量)加入0.5M的化合物6(1.00當(dāng)量)的1，4-二烷溶液中。使該反應(yīng)回流4小時(shí)，然后回復(fù)到室溫。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。反相HPLC純化產(chǎn)生化合物4。ES/MS m/z 437，439(MH+)，C19H18Cl2N4O2S＝437g/mol。
實(shí)施例3合成5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]N-(2-苯基乙基)噻吩-2-羧酰胺 步驟1插烯的酰胺(7)的形成將二甲基甲酰胺縮二甲醇(2.50當(dāng)量)加入0.30M的化合物1(1.00當(dāng)量)的無水甲苯溶液中。使該反應(yīng)回流15小時(shí)，然后回復(fù)到室溫。通過加入1∶1醚∶己烷沉淀產(chǎn)物，真空過濾分離產(chǎn)物。再用1∶1醚∶己烷沖洗濾餅，然后減壓干燥，產(chǎn)生化合物7，為棕褐色固體。ES/MS m/z 240(MH+)，C11H13NO3S＝239g/mol。
步驟2環(huán)化為氨基嘧啶(8)在室溫下將乙醇鈉(2.10當(dāng)量)和鹽酸甲基胍(R＝Me，2.00當(dāng)量)加入0.2M的化合物7(1.00當(dāng)量)的無水乙醇溶液中。在70℃攪拌該混合物16小時(shí)。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。用二氯甲烷稀釋該漿液，依次用水和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮，產(chǎn)生化合物8。ES/MS m/z 264(MH+)，C12H13N3O2S＝263g/mol。
步驟3縮合為酰胺(9)方法A
將苯乙胺(R3＝苯乙基、2.50當(dāng)量)和甲醇鈉(0.500當(dāng)量)加入0.2M的化合物8(R＝Me，1.00當(dāng)量)的甲醇溶液中。使該反應(yīng)回流2天，然后回復(fù)到室溫。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。反相HPLC純化產(chǎn)生化合物9。ES/MS m/z 339(MH+)，C18H18N4OS＝338g/mol。
方法B將氫化鈉(2.00當(dāng)量)加入1.1M的2-氨基-4-氯苯并噻唑(R3＝4-氯苯并噻唑-2-基，2.20當(dāng)量)的N，N’-二甲基甲酰胺溶液中。攪拌該混合物15分鐘。在20分鐘內(nèi)逐滴加入0.5 M的化合物8(R＝Me，1.00當(dāng)量)的N，N’-二甲基甲酰胺溶液。室溫?cái)嚢柙摲磻?yīng)2小時(shí)，然后通過加入水猝滅反應(yīng)。反相HPLC純化產(chǎn)生化合物9。ES/MS m/z 402，404(MH+)，C17H12ClN5OS2＝402g/mol。
實(shí)施例4合成N-(4-甲氧基-1，3-苯并噻唑-2-基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺 步驟1保護(hù)為氨基甲酸叔丁酯(11)將二碳酸二叔丁酯(1.20當(dāng)量)、4-二甲基氨基吡啶(0.200當(dāng)量)和三乙胺(1.20當(dāng)量)加入0.5M的化合物10的四氫呋喃溶液中。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?6小時(shí)。用乙酸乙酯稀釋該混合物，依次用水和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮，產(chǎn)生化合物11，它無需進(jìn)一步純化即可使用。ES/MS m/z 364(MH+)，C17H21N3O4S＝363g/mol。
步驟2皂化為羧酸(12)將氫氧化鈉水溶液(2.00當(dāng)量)加入0.2M的化合物11的乙醇溶液中。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?6小時(shí)。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。將殘留物再溶解于二氯甲烷，依次用稀鹽酸和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮，產(chǎn)生化合物11，它無需進(jìn)一步純化即可使用。ES/MS m/z 336(MH+)，C15H17N3O4S＝335g/mol。
步驟3縮合為酰胺(13)將N，N’-羰基二咪唑(1.00當(dāng)量)加入0.2M的化合物12的無水四氫呋喃溶液中。50℃攪拌該混合物1小時(shí)。使該溶液回復(fù)到室溫，加入2-氨基-4-甲氧基苯并噻唑(R3＝4-甲氧基苯并噻唑-2-基，1.10當(dāng)量)。再在50℃攪拌該溶液15小時(shí)。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。將殘留物再溶解于二氯甲烷，依次用水和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮，產(chǎn)生化合物13，可用快速色譜進(jìn)一步純化。ES/MS m/z 498(MH+)，C23H23N5O4S2＝497g/mol。
步驟4去保護(hù)為游離胺(14)將鹽酸(30當(dāng)量)加入0.1M的化合物13的甲醇溶液中。50℃攪拌該混合物4小時(shí)。用二氯甲烷稀釋該混合物，依次用1M碳酸鈉水溶液和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮。用反相HPLC純化粗產(chǎn)物，產(chǎn)生化合物14。ES/MS m/z398(MH+)，C18H15N5O2S2＝397g/mol。
實(shí)施例5合成N-(4-氟芐基)-N′-{5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-基}脲、5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-基氨基甲酸4-氟芐基酯和3-(4-氟苯基)-N-{5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-基}丙酰胺
步驟1轉(zhuǎn)化為?；ｋ?15)將水合肼(10.0當(dāng)量)加入0.5M的化合物10的甲醇懸液中。使該混合物回流14小時(shí)，回復(fù)到室溫。通過加入水沉淀產(chǎn)物，真空過濾收集產(chǎn)物。用甲醇沖洗濾餅，，在干燥器中干燥，產(chǎn)生化合物15。ES/MS m/z 250(MH+)，C10H11N5OS＝249g/mol。
步驟2將?；ｋ罗D(zhuǎn)化為羰基疊氮(16)將0.6M鹽酸水溶液(1.05當(dāng)量)加入1.1M的化合物15的冰醋酸懸液中。在30分鐘內(nèi)逐滴加入4.0M的亞硝酸鈉水溶液(1.00當(dāng)量)。用1體積的水稀釋該漿液并過濾。將固體懸浮于水中，用6M的氫氧化鈉水溶液將pH調(diào)整到7-8。真空過濾收集沉淀，用水沖洗沉淀。在干燥器中干燥黃色固體，產(chǎn)生化合物16。ES/MS m/z261(MH+)，C10H8N6OS＝260g/mol。
步驟3a將羰基疊氮轉(zhuǎn)化為脲(17)N-(4-氟芐基)-N′-{5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-基}脲在130℃攪拌0.2 M的化合物16(1.00當(dāng)量)的二甲苯溶液30分鐘。加入4-氟芐胺(R3＝4-氟芐基，2.00當(dāng)量)，再在130℃攪拌該混合物1小時(shí)。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。用反相HPLC純化粗產(chǎn)物，產(chǎn)生化合物17。ES/MS m/z 358(MH+)，C17H16FN5OS＝357g/mol。
步驟3b將羰基疊氮轉(zhuǎn)化為氨基甲酸酯(18)5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-基氨基甲酸4-氟芐基酯在130℃攪拌0.2M的化合物16(1.00當(dāng)量)的二甲苯溶液30分鐘。加入4-氟芐基醇(R3＝4-氟芐基，2.00當(dāng)量)，再在130℃攪拌該混合物1小時(shí)。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。用反相HPLC純化粗產(chǎn)物，產(chǎn)生化合物18。ES/MS m/z 359(MH+)，C17H15FN4O2S＝358g/mol。
步驟3c將羰基疊氮重排為胺(19)在100℃攪拌0.25M的化合物16(1.00當(dāng)量)在1.5M鹽酸中的懸液14小時(shí)。用6N氫氧化鈉水溶液將混合物的pH調(diào)整為9。用二氯甲烷萃取水相。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮。用快速色譜在硅膠上純化粗產(chǎn)物(94∶6二氯甲烷∶甲醇)，產(chǎn)生化合物19。ES/MS m/z 207(MH+)，C9H10N4S＝206g/mol。
步驟4縮合為酰胺(20)3-(4-氟苯基)-N-{5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-基}丙酰胺將N，N’-羰基二咪唑(1.00當(dāng)量)加入0.25 M的4-氟苯基丙酸(R3＝4-氟苯乙基、1.00當(dāng)量)的無水四氫呋喃溶液中。50℃攪拌該混合物1小時(shí)。加入化合物19(1.00當(dāng)量)，再在50℃攪拌該反應(yīng)2小時(shí)。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。將該產(chǎn)物再溶解于二氯甲烷，依次用水和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮。用反相HPLC純化粗產(chǎn)物，產(chǎn)生化合物20。ES/MS m/z 357(MH+)，C18H17FN4OS＝356g/mol。
實(shí)施例6合成N-[2-(4-氟苯基)乙基]-5-[5-甲基-2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺
步驟1縮合為酰胺(22)將N，N’-羰基二咪唑(1.00當(dāng)量)加入0.28M的5-(二羥基硼烷基)-2-噻吩羧酸的無水四氫呋喃溶液中。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?小時(shí)。加入4-氟苯乙胺(R3＝4-氟苯乙基、1.00當(dāng)量)，再在室溫下攪拌該反應(yīng)12小時(shí)。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。將產(chǎn)物再溶解于乙酸乙酯，依次用水和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮，產(chǎn)生化合物22。ES/MS m/z 294(MH+)，C13H13BFNO3S＝293g/mol。
步驟2鈴木偶聯(lián)為酰胺(23)將Pd(dPPf)2(0.05當(dāng)量)加入0.34M的化合物22(R3＝4-氟苯乙基、1.00當(dāng)量)和化合物21(R1＝Me，1.1當(dāng)量)的無水四氫呋喃溶液中，然后加入二異丙基乙胺(2.0當(dāng)量)。用氬氣吹掃反應(yīng)混合物，加熱到80℃12小時(shí)。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。將產(chǎn)物再溶解于乙酸乙酯，依次用水、飽和偏亞硫酸氫鈉和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮。用Biotage以20％乙酸乙酯的己烷溶液純化粗產(chǎn)物，產(chǎn)生化合物23。ES/MS m/z 490(MH+)，C19H15F4N3O4S2＝489g/mol。
步驟3形成氨基嘧啶環(huán)，以產(chǎn)生N-[2-(4-氟苯基)乙基]-5-[5-甲基-2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺(24)在油浴中將甲胺(R＝Me，2.0M的四氫呋喃溶液，5.0當(dāng)量)和化合物23(R1＝Me；R3＝4-氟苯乙基、1.0當(dāng)量)的混合物加熱到150℃ 16小時(shí)。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。用Biotage以60％乙酸乙酯的己烷溶液純化粗產(chǎn)物，產(chǎn)生化合物24。ES/MS m/z371(MH+)，C19H19FN4OS＝370g/mol。
實(shí)施例7合成N-[2-(4-氟苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)吡啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺 步驟1鈴木偶聯(lián)為酰胺(25)Pd(PPh3)4(0.05當(dāng)量)加入0.37M的化合物22(R3＝4-氟苯乙基、1.0當(dāng)量)、2-氯-4-碘吡啶(1.2當(dāng)量)和碳酸鈉(2.0M水溶液，2.6當(dāng)量)的四氫呋喃溶液中。用氬氣吹掃反應(yīng)混合物，加熱到70℃18小時(shí)。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。將產(chǎn)物再溶解于乙酸乙酯，依次用水和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮。用Biotage以40％乙酸乙酯的己烷溶液純化產(chǎn)物，產(chǎn)生化合物25。ES/MS m/z 361(MH+)，C18H14ClFN2OS＝360g/mol。
步驟3形成氨基嘧啶環(huán)(26)在油浴中將甲胺(2.0M四氫呋喃溶液，45當(dāng)量)和化合物25(1.0當(dāng)量)的混合物加熱到150℃2天。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。將產(chǎn)物再溶解于乙酸乙酯，依次用5％NaOH和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮。用Biotage以90％乙酸乙酯的己烷溶液純化粗產(chǎn)物，產(chǎn)生化合物26。ES/MS m/z 356(MH+)，C19H18FN3OS＝355g/mol。
實(shí)施例8合成N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-3-羧酰胺
步驟1形成插烯的酰胺(27)將二甲基甲酰胺縮二甲醇(2.50當(dāng)量)加入0.48M的2-乙?；?4-溴噻吩(1.00當(dāng)量)的無水甲苯溶液中。使該反應(yīng)回流20小時(shí)，然后回復(fù)到室溫。通過加入1∶1醚∶己烷沉淀產(chǎn)物，真空過濾分離產(chǎn)物。再用1∶1醚∶己烷沖洗濾餅，然后減壓干燥，產(chǎn)生化合物27。ES/MS m/z 260(MH+)。
步驟2形成嘧啶環(huán)(28)將乙醇鈉(2.0當(dāng)量)和鹽酸甲基胍(R＝Me，2.00當(dāng)量)加入0.25M的化合物27(1.00當(dāng)量)的無水乙醇懸液中。在75℃攪拌該反應(yīng)18小時(shí)，然后回復(fù)到室溫。用乙酸乙酯稀釋該混合物，依次用水和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮。用己烷研磨粗產(chǎn)物，過濾產(chǎn)生化合物28。ES/MS m/z 270(MH+)。
步驟3形成羧酸(29)在-78℃，10分鐘內(nèi)將BuLi(2.5M己烷溶液，2.5當(dāng)量)加入化合物28(R＝Me，1.0當(dāng)量)在THF/醚(1∶1)中的混合物中。該反應(yīng)混合物在-78℃再攪拌10分鐘。將CO2吹入反應(yīng)溶液40分鐘。然后使反應(yīng)回復(fù)到室溫，攪拌12小時(shí)。用冰醋酸(5.0當(dāng)量)水溶液猝滅反應(yīng)混合物。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。將產(chǎn)物再溶解于乙酸乙酯，用鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮，產(chǎn)生所需產(chǎn)物29。ES/MS m/z 236(MH+)。
步驟4形成酰胺鍵以產(chǎn)生N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-3-羧酰胺(30)將二異丙基乙胺(3.0當(dāng)量)加入化合物29(R＝Me，1.0當(dāng)量)、PyBrop(1.2當(dāng)量)、HOBt(1.2當(dāng)量)混合物的四氫呋喃溶液中。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?小時(shí)。將2，4-二氯苯乙胺(R3＝2，4-二氯苯乙基、1.2當(dāng)量)加入該溶液。室溫?cái)嚢柙摲磻?yīng)溶液18小時(shí)。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。將產(chǎn)物再溶解于乙酸乙酯，用水和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮。反相HPLC純化產(chǎn)生化合物30。ES/MS m/z 407(MH+)，C18H16Cl2N4OS＝406g/mol。
實(shí)施例9合成4-[5-({[2-(4-氯苯基)乙基]氨基}甲基)噻吩-2-基]-N-甲基嘧啶-2-胺 步驟1Negishi偶聯(lián)為4-(2-噻吩基)嘧啶(32)將四(三苯基膦)鈀(0)(0.050當(dāng)量)加入脫氣的0.50M的2，4-二氯嘧啶(1.0當(dāng)量)和5-(1，3-二氧戊環(huán)-2-基)-2-噻吩基溴化鋅31(1.0當(dāng)量)的四氫呋喃溶液。在70℃攪拌該混合物16小時(shí)，然后回復(fù)到室溫，用醚稀釋。依次用0.5M pH9的EDTA水溶液和鹽水洗滌該溶液。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮。用快速色譜在硅膠上純化粗產(chǎn)物(1∶1∶1己烷∶乙酸乙酯∶二氯甲烷)，產(chǎn)生化合物32。ES/MS m/z 269(MH+)，C11H9ClN2O2S＝269g/mol。
步驟2二氧戊環(huán)去保護(hù)為醛(33)將鹽酸(6.0當(dāng)量)加入0.10M的化合物32的丙酮懸液中。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?6小時(shí)。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。將殘留物再溶解于醚，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾，濃縮，粗醛33無需進(jìn)一步純化即可使用。ES/MS m/z 225(MH+)，C9H5ClN2OS＝225g/mol。
步驟3還原性胺化為胺(34)將4-氯苯乙胺(1.1當(dāng)量)加入0.15M的化合物33(1.0當(dāng)量)的甲苯溶液中。使該混合物回流4.5小時(shí)。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。將殘留物再溶解于甲醇，制備0.15M溶液。加入硼氫化鈉(1.3當(dāng)量)。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?小時(shí)。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。用快速色譜在硅膠上純化粗產(chǎn)物(96∶4二氯甲烷∶甲醇)，產(chǎn)生化合物34。ES/MS m/z364(MH+)，C17H15Cl2N3S＝364g/mol。
步驟4親核取代為2-氨基嘧啶(35)和(36)0.05M化合物34(1.0當(dāng)量)在2.0M甲胺(R＝Me)的四氫呋喃(40當(dāng)量)溶液中的溶液回流過夜。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。用反相HPLC純化粗產(chǎn)物，產(chǎn)生化合物35，4-[5-({[2-(4-氯苯基)乙基]氨基}甲基)噻吩-2-基]-N-甲基嘧啶-2-胺。ES/MS m/z359(MH+)，C18H19ClN4S＝359g/mol。
或者，0.05M化合物34(1.0當(dāng)量)的1∶1 1，4-二烷∶氫氧化銨溶液回流過夜。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。用反相HPLC純化粗產(chǎn)物，產(chǎn)生化合物36，4-[5-({[2-(4-氯苯基)乙基]氨基}甲基)噻吩-2-基]嘧啶-2-胺。ES/MS m/z 345(MH+)，C17H17ClN4S＝345g/mol。
實(shí)施例10合成5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]噻吩-2-磺酰胺和N-[2-(4-氯苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-磺酰胺 步驟1形成磺酰胺(38)將4-氯苯乙胺(1.0當(dāng)量)和三乙胺(1.0當(dāng)量)加入0.20M的5-[2-(甲硫基)嘧啶-4-基]噻吩-2-磺酰氯37(1.0當(dāng)量)的二氯甲烷溶液中。室溫?cái)嚢柙摲磻?yīng)3小時(shí)。加入間氯過氧苯甲酸(3.0當(dāng)量)，再在室溫?cái)嚢柙摲磻?yīng)4小時(shí)。用二氯甲烷稀釋該反應(yīng)混合物，依次用1M碳酸鈉水溶液和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。粗產(chǎn)物38無需進(jìn)一步純化即可使用。ES/MS m/z 458(MH+)，C17H16ClN3O4S3＝458g/mol。
步驟2親核取代為氨基嘧啶(39)和(40)將2.0M甲胺溶液(5.0當(dāng)量，R＝Me)加入0.20M的化合物38(1.0當(dāng)量)的1，4-二烷溶液中，70℃攪拌過夜。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。用反相HPLC純化粗產(chǎn)物，產(chǎn)生化合物39，N-[2-(4-氯苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-磺酰胺。ES/MSm/z 409(MH+)，C17H17ClN4O2S2＝409g/mol。
或者，將氫氧化銨(15當(dāng)量，R＝H)加入0.20M的化合物38(1.0當(dāng)量)的1，4-二烷溶液中，回流過夜。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。用反相HPLC純化粗產(chǎn)物，產(chǎn)生化合物40，5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]噻吩-2-磺酰胺。ES/MS m/z395(MH+)，C16H15ClN4O2S2＝395g/mol。
實(shí)施例11合成3-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-6-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮和6-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]噻吩并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮
步驟1噻吩(42)的溴化將三溴化苯基三甲基銨(3.00當(dāng)量)和碳酸鈣(4.00當(dāng)量)加入0.3M的3-氨基噻吩-2-羧酸甲酯41的溶液中。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?6小時(shí)并過濾。濃縮并層析(1∶1己烷∶乙酸乙酯)濾出液，產(chǎn)生所需溴化物43。ES/MS m/z 236，238(MH+)，C6H6BrNO2S＝236g/mol。
步驟2環(huán)化為酰胺(43)將二甲基甲酰胺縮二甲醇(2.00當(dāng)量)加入0.5M的化合物42的二甲苯溶液中。在130-135℃攪拌該混合物2天。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。將剩余物再溶解于1，4-二烷中，產(chǎn)生0.3M溶液。加入2，4-二氯苯乙胺(1.00當(dāng)量)和對(duì)甲苯磺酸(0.2當(dāng)量)，再在100℃攪拌該反應(yīng)21小時(shí)。使反應(yīng)混合物回復(fù)到室溫，用乙酸乙酯稀釋，依次用飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相、過濾、濃縮并層析(1∶1己烷∶乙酸乙酯)，產(chǎn)生化合物43。ES/MS m/z 403，405(MH+)，C14H9BrCl2N2OS＝404g/mol。
步驟3Sonogashira和去保護(hù)為炔(44)將三甲基甲硅烷基乙炔(1.2當(dāng)量)、二氯雙(三苯基膦)鈀(0.04當(dāng)量)和碘化銅(0.06當(dāng)量)加入溴化物43的2∶1四氫呋喃∶三乙胺脫氣溶液中。70℃攪拌該混合物16小時(shí)，然后冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋，和通過硅膠塞過濾。濃縮濾出液并再溶解，得到0.05M的甲醇溶液。加入碳酸鉀(2.0當(dāng)量)，室溫?cái)嚢柙摶旌衔?6小時(shí)。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。將剩余物再溶解于二氯甲烷，依次用水和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥、過濾、濃縮，產(chǎn)生所需炔44。ES/MS m/z 349(MH+)，C16H10Cl2N2OS＝349g/mol。
步驟4水合為酮(45)將2.0N硫酸水溶液(20當(dāng)量)加入0.05M的炔44的1，4-二烷溶液中。使該混合物回流16小時(shí)，回復(fù)到室溫。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。加入乙酸乙酯。有機(jī)層用硫酸鈉干燥、過濾、濃縮并層析，產(chǎn)生所需酮45。ES/MS m/z 367(MH+)，C16H12Cl2N2O2S＝367g/mol。
步驟5形成插烯的酰胺(46)將二甲基甲酰胺縮二甲醇(2.0當(dāng)量)加入0.20M的化合物45(1.0當(dāng)量)的無水甲苯溶液中。使該反應(yīng)回流40h，然后回復(fù)到室溫。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。酰胺46無需進(jìn)一步純化即可使用。ES/MS m/z 422(MH+)，C19H17Cl2N3O2S＝422g/mol。
步驟6形成嘧啶環(huán)(47)乙醇鈉(3.0當(dāng)量)和鹽酸甲基胍(R＝Me，3.0當(dāng)量)或鹽酸胍(R＝H，3.0當(dāng)量)加入0.2M的化合物46的無水乙醇懸液中。70℃攪拌該反應(yīng)2天，然后回復(fù)到室溫。用反相HPLC純化粗產(chǎn)物，產(chǎn)生47。以下數(shù)據(jù)是R＝Me時(shí)的數(shù)據(jù)。ES/MS m/z 432(MH+)，C19H15Cl2N5OS＝432g/mol。
實(shí)施例12合成3-氨基-N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺 步驟1Sonogashira和去保護(hù)為炔(52)將三甲基甲硅烷基乙炔(1.2當(dāng)量)、二氯雙(三苯基膦)鈀(0.04當(dāng)量)和碘化銅(0.06當(dāng)量)加入溴化物51的2∶1四氫呋喃∶三乙胺脫氣溶液中。70℃攪拌該混合物16h，然后冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋，通過硅膠塞過濾。濃縮濾出液并再溶解，得到0.05M的甲醇溶液中。加入碳酸鉀(2.0當(dāng)量)，室溫?cái)嚢柙摶旌衔?6小時(shí)。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。將剩余物再溶解于二氯甲烷，依次用水和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥、過濾、濃縮，產(chǎn)生所需炔52。ES/MS m/z 182(MH+)，C8H7N2OS＝181g/mol。
步驟2水合為酮和保護(hù)為氨基甲酸叔丁酯(53)
將2.0N硫酸水溶液(20當(dāng)量)加入0.05M的炔52的1，4-二烷溶液中。80℃攪拌該混合物16h，回復(fù)到室溫。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。加入乙酸乙酯和飽和碳酸氫鈉水溶液。用硫酸鈉干燥有機(jī)層，過濾并濃縮。
將二碳酸二叔丁酯(2.50當(dāng)量)和4-二甲基氨基吡啶(0.200當(dāng)量)加入0.3M的粗產(chǎn)物的四氫呋喃溶液中。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?6小時(shí)。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。用快速色譜純化剩余物(2∶1己烷∶乙酸乙酯)，產(chǎn)生所需酮53。ES/MS m/z 400(MH+)，C18H25NO7S＝399g/mol。
步驟3形成插烯的酰胺(54)將二甲基甲酰胺縮二甲醇(2.5當(dāng)量)加入0.20M的化合物53(1.0當(dāng)量)的無水甲苯溶液中。使該反應(yīng)回流18h，然后回復(fù)到室溫。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。酰胺54無需進(jìn)一步純化即可使用。ES/MS m/z 455(MH+)，C21H30N2O7S＝454g/mol。
步驟4形成氨基嘧啶(55)將乙醇鈉(4.1當(dāng)量)和鹽酸甲基胍(4.0當(dāng)量)加入0.2M的化合物54的無水乙醇懸液中。70℃攪拌該反應(yīng)3天，然后回復(fù)到室溫。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。加入乙酸乙酯和飽和碳酸氫鈉水溶液。用硫酸鈉干燥有機(jī)層，過濾并濃縮。氨基嘧啶55無需進(jìn)一步純化即可使用。ES/MS m/z 465(MH+)，C21H28N4O6S＝464g/mol。
步驟5保護(hù)為氨基甲酸叔丁酯(56)將二碳酸二叔丁酯(3.0當(dāng)量)、三乙胺(2.0當(dāng)量)和4-二甲基氨基吡啶55(0.20當(dāng)量)加入0.2M的粗產(chǎn)物的四氫呋喃溶液中。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?6小時(shí)。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。用快速色譜純化剩余物(1∶1己烷∶乙酸乙酯)，產(chǎn)生所需產(chǎn)物56。ES/MS m/z565(MH+)，C26H36N4O8S＝564g/mol。
步驟6皂化為羧酸(57)將1.0M氫氧化鈉水溶液(3.0當(dāng)量)加入0.1M的氨基甲酸叔丁酯56的乙醇溶液中。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?6小時(shí)。用二氯甲烷稀釋該反應(yīng)混合物，依次用稀鹽酸和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)層，過濾并濃縮。羧酸57無需進(jìn)一步純化即可使用。ES/MSm/z 551(MH+)，C23H34N4O8S＝550g/mol。
步驟7縮合為酰胺(58)將N，N’-羰基二咪唑(1.0當(dāng)量)加入0.1M的羧酸57的無水THF溶液中。60℃攪拌該混合物3h。使該溶液回復(fù)到室溫；加入2，4-二氯苯乙胺(1.1當(dāng)量)。在60℃攪拌該溶液3天。使該混合物回復(fù)到室溫，用1體積甲醇和2體積3M鹽酸稀釋。60℃攪拌該混合物3h。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)，用反相HPLC純化剩余物，得到最終產(chǎn)物58。ES/MS m/z 422(MH+)，C18H17Cl2N5OS＝422g/mol。
實(shí)施例13合成4-{5-[(E)-2-(4-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)乙烯基]噻吩-2-基}嘧啶-2-胺和4-{5-[(4-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)乙炔基]噻吩-2-基}嘧啶-2-胺 步驟1形成插烯的酰胺(62)將二甲基甲酰胺縮二甲醇(2.50當(dāng)量)加入0.30M的化合物61(1.00當(dāng)量)的無水甲苯溶液中。使該反應(yīng)回流15h，然后回復(fù)到室溫。通過加入1∶1醚∶己烷沉淀產(chǎn)物，真空過濾分離產(chǎn)物。再用1∶1醚∶己烷沖洗濾餅，然后減壓干燥，產(chǎn)生化合物62，為棕褐色固體。ES/MS m/z 260，262(MH+)，C9H10BrNOS＝260g/mol。
步驟2環(huán)化為氨基嘧啶(63)在室溫下將乙醇鈉(2.10當(dāng)量)和鹽酸甲基胍(2.00當(dāng)量)加入0.2M的化合物62(1.00當(dāng)量)的無水乙醇溶液中。70℃攪拌該混合物16h。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。用二氯甲烷稀釋該漿液，依次用水和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮，產(chǎn)生化合物63。ES/MS m/z 256，258(MH+)，C12H13N3O2S＝256g/mol。
步驟3Sonogashira和去保護(hù)為炔(64)將三甲基甲硅烷基乙炔(1.5當(dāng)量)、二氯雙(三苯基膦)鈀(0.04當(dāng)量)和碘化銅(0.06當(dāng)量)加入溴化物63的2∶1四氫呋喃∶三乙胺脫氣溶液中。70℃攪拌該混合物16h，然后冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋，通過硅膠塞過濾。濃縮濾出液并再溶解，得到0.07M的甲醇溶液中。加入碳酸鉀(2.0當(dāng)量)，室溫?cái)嚢柙摶旌衔?h。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。層析剩余物，產(chǎn)生所需炔64。ES/MS m/z 202(MH+)，C10H7N3S＝201g/mol。
步驟4還原為烯(66)將喹啉(0.20當(dāng)量質(zhì)量(eq.by mass))和Lindlar催化劑(0.10當(dāng)量質(zhì)量)加入0.05M的炔64的乙酸乙酯懸液中。在氫氣球下攪拌該混合物過夜，過濾并濃縮。烯66無需進(jìn)一步純化即可使用。ES/MS m/z 204(MH+)，C10H7N3S＝203g/mol。
步驟5鈀-催化的偶聯(lián)(65和67)將來自步驟3的炔64或來自步驟4的烯66與2-溴-4-氯苯并噻唑(1.0當(dāng)量)、二環(huán)己基甲胺(1.1當(dāng)量)、三叔丁基膦(0.03當(dāng)量)和三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)(0.015當(dāng)量)和二烷混合在微波小瓶中。在190℃微波處理該混合物8分鐘。用乙酸乙酯稀釋該混合物，通過硅膠塞過濾，濃縮，用反相HPLC純化，產(chǎn)生所需產(chǎn)物65或67。
實(shí)施例14合成N-[(1S)-2-氨基-1-(2，4-二氯芐基)乙基]-5-(2-氨基-1H-咪唑-4-基)噻吩-2-羧酰胺
步驟1溴化為α-溴代酮(72)將溴(1.0當(dāng)量)加入0.75M的5-乙酰噻吩-2-羧酸乙酯71(1.0當(dāng)量)的1，4-二烷溶液中。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?6小時(shí)。加入醚。用水洗滌該溶液，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，產(chǎn)生α-溴代酮72。粗產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。
步驟2環(huán)化為乙酰胺基咪唑(73)將α-溴代酮72溶于乙腈。加入1-乙酰胍(2.50當(dāng)量)。80℃攪拌該混合物6h。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。將剩余物再溶解于DCM，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，產(chǎn)生乙酰胺基咪唑73。用快速色譜純化該產(chǎn)物(1∶1丙酮∶己烷)。ES/MS m/z 280(MH+)，C12H13N3O3S＝279g/mol。
步驟3切下乙?；?74)將2.0N硫酸水溶液(3.0當(dāng)量)加入0.3M的化合物73的甲醇溶液中。70℃攪拌該混合物18h。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。將剩余物再溶解于DCM，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，產(chǎn)生化合物74。粗產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。ES/MS m/z 238(MH+)，C10H11N3O2S＝237g/mol。
步驟4保護(hù)為氨基甲酸叔丁酯(75)將二碳酸二叔丁酯(3.0當(dāng)量)和4-二甲基氨基吡啶(0.20當(dāng)量)加入0.3M的化合物74的四氫呋喃溶液中。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?6小時(shí)，濃縮，用快速色譜純化(2∶1己烷∶乙酸乙酯)，產(chǎn)生氨基甲酸叔丁酯75。ES/MS m/z 538(MH+)，C25H35N3O8S＝537g/mol。
步驟5皂化為羧酸(76)將氫氧化鉀水溶液(4.0當(dāng)量)加入0.2M的氨基甲酸叔丁酯75的乙醇溶液中。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?天。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。用鹽酸將pH調(diào)節(jié)到約3。加入二氯甲烷。濾出沉淀，用水洗滌，在干燥器中干燥，產(chǎn)生羧酸76，無需進(jìn)一步純化即可使用。ES/MS m/z 410(MH+)，C18H23N3O6S＝409g/mol。
步驟6縮合為酰胺(77)將N，N’-羰基二咪唑(1.0當(dāng)量)加入0.2M的羧酸76的無水N，N-二甲基甲酰胺溶液中。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?6小時(shí)。加入1-疊氮甲基-2-(2，4-二氯苯基)乙胺(1.1當(dāng)量)。再在50℃攪拌該溶液16h，產(chǎn)生酰胺77。用快速色譜純化該混合物(1∶2己烷∶乙酸乙酯)。ES/MS m/z 636，638(MH+)，C27H31ClN7O5S＝636g/mol。
步驟7氫化和去保護(hù)(78)將10％碳載鈀(0.10當(dāng)量質(zhì)量)加入0.05M的酰胺77的甲醇脫氣溶液中。在氫氣氣氛下攪拌該混合物2h。過濾該混合物，用等體積3.0M鹽酸于50℃處理3h。濃縮產(chǎn)物并用HPLC純化，產(chǎn)生所需產(chǎn)物78。
實(shí)施例15合成2-氨基-4-苯硫基-嘧啶衍生物 步驟1保護(hù)為氨基甲酸叔丁酯(81)
將二碳酸二叔丁酯(1.20當(dāng)量)、4-二甲基氨基吡啶(0.200當(dāng)量)和三乙胺(1.20當(dāng)量)加入0.5M的80(R＝H，Me)的四氫呋喃溶液中。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?6小時(shí)。用乙酸乙酯稀釋該混合物，依次用水和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮，產(chǎn)生化合物81，它無需進(jìn)一步純化即可使用。ES/MS m/z 364(MH+)，C17H21N3O4S＝363g/mol。
步驟2皂化為羧酸(82)將氫氧化鈉水溶液(2.00當(dāng)量)加入0.2M的氨基甲酸叔丁酯81的乙醇溶液中。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?6小時(shí)。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。用鹽酸將pH調(diào)節(jié)到3-4。濾出沉淀，用水洗滌，在干燥器中干燥，產(chǎn)生羧酸82，無需進(jìn)一步純化即可使用。ES/MS m/z336(MH+)，C15H17N3O4S＝335g/mol。
步驟3縮合為酰胺(83)將N，N’-羰基二咪唑(1.00當(dāng)量)加入0.2M的羧酸的無水1，4-二烷溶液中。60℃攪拌該混合物3h。使該溶液回復(fù)到室溫，加入合適胺(1.1當(dāng)量)。再在60-100℃攪拌該溶液16h。使該混合物回復(fù)到室溫，用1體積甲醇和2體積3M鹽酸稀釋。60℃攪拌該混合物18h。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)，，用反相HPLC純化剩余物，產(chǎn)生終產(chǎn)物(83)(R3的定義如本文所述)。
步驟4任選的附加步驟當(dāng)R3是氨基甲基二氯苯乙基取代基時(shí)，需要附加步驟。來自前一步驟的產(chǎn)物不用純化。取而代之，將它再溶解于甲醇，并用惰性氣體沖洗。加入碳載鈀(0.1當(dāng)量質(zhì)量)，在氫氣下攪拌該混合物2h。過濾并濃縮該混合物，然后用HPLC純化。將氨基甲基保護(hù)為疊氮甲基。此步驟將疊氮化物還原為伯胺。
實(shí)施例16合成N-[(1S)-2-氨基-1-(2，4-二氯芐基)乙基]-5-吡啶-4-基噻吩-2-羧酰胺
R＝(1S)-2-氨基-1-(2，4-二氯芐基)乙基除了合成標(biāo)題化合物外，也用此合成方法來合成本發(fā)明的其它2-雜芳基噻吩、吡唑、氨基吡啶和酰氨基吡啶。
步驟1Negishi偶聯(lián)為4-(2-噻吩基)吡啶(85)將四(三苯基膦)鈀(0)(0.050當(dāng)量)加入0.50M的4-溴吡啶(1.0當(dāng)量)和5-乙氧基羰基-2-噻吩基溴化鋅84(1.0當(dāng)量)的四氫呋喃脫氣溶液中。70℃攪拌該混合物16h，然后回復(fù)到室溫，用醚稀釋。依次用0.5M pH9的EDTA水溶液和鹽水洗滌該溶液。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮。用快速色譜在硅膠上純化粗產(chǎn)物(1∶1∶1己烷∶乙酸乙酯∶二氯甲烷)，產(chǎn)生化合物2。ES/MS m/z 234(MH+)，C12H11NO2S＝233g/mol。
步驟2皂化為羧酸(86)將氫氧化鈉水溶液(2.00當(dāng)量)加入0.2M的酯85的乙醇溶液中。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?6小時(shí)。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。用鹽酸將pH調(diào)節(jié)到3-4。濾出沉淀，用水洗滌，在干燥器中干燥，產(chǎn)生羧酸86，無需進(jìn)一步純化即可使用。ES/MS m/z 206(MH+)，C10H7NO2S＝205g/mol。
任選步驟2’用于合成5-[2-(乙酰氨基)吡啶-4-基]-N-[(1S)-2-氨基-1-(2，4-二氯芐基)乙基]噻吩-2-羧酰胺將0.5M的NH3的二烷(2.0當(dāng)量)溶液和等體積的濃氫氧化銨加入2-氟-4-(噻吩-2-基-5-羧酸)中。在密封容器中于120℃攪拌該混合物3天。濃縮該混合物，無需進(jìn)一步純化即可使用。將乙酸酐(1.5當(dāng)量)和二異丙基乙胺(2.5當(dāng)量)加入0.1M的粗產(chǎn)物溶液。使混合物在100℃回流4天。使該混合物回復(fù)到室溫，用水稀釋。將該混合物的pH調(diào)節(jié)到3-4，加入乙酸乙酯。用硫酸鈉干燥有機(jī)層，過濾并濃縮。粗產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。
步驟3縮合為酰胺(87)將N，N’-羰基二咪唑(1.00當(dāng)量)加入0.2M的羧酸86的無水1，4-二烷溶液中。60℃攪拌該混合物3h。使該溶液回復(fù)到室溫；加入合適胺(1.1當(dāng)量)。再在60-100℃攪拌該溶液16h。使該混合物回復(fù)到室溫，用5體積甲醇稀釋。用氬氣沖洗反應(yīng)容器。加入催化性10％碳載鈀。在H2下攪拌該混合物2h，用氬氣沖洗，過濾。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)，用反相HPLC純化剩余物，得到最終產(chǎn)物87。ES/MS m/z 406(MH+)，C19H17Cl2N3OS＝406g/mol。
實(shí)施例17合成2-氨基-4-氯苯并[d]噻唑-6-腈 標(biāo)題化合物是本發(fā)明化合物制備中的有用中間體。
步驟1合成異硫氰酸酯(92)將硫光氣(1.1當(dāng)量)加入0.5M的4-氨基-3-氯苯并噻唑91(1.00當(dāng)量)的甲苯懸液中。110℃攪拌該混合物16h。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)，產(chǎn)生化合物92，它無需進(jìn)一步純化即可使用。ES/MS m/z 195(MH+)，C8H3ClN2S＝194g/mol。
步驟2合成硫脲(93)將化合物92(1.0當(dāng)量)懸浮于1，4-二烷溶液中。加入濃氫氧化銨(2.0當(dāng)量)。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?0分鐘。將該漿液濃縮到其初始體積的一半左右，然后過濾。用醚沖洗沉淀，然后在干燥器中減壓干燥，產(chǎn)生化合物93。ES/MS m/z 212(MH+)，C8H6ClN3S＝211g/mol。
步驟3環(huán)化為6-氰基苯并噻唑(94)在室溫下用15分鐘將0.6M溴(1.5當(dāng)量)的氯仿溶液加入0.4M的化合物93(1.0當(dāng)量)的氯仿懸液中。75℃攪拌該混合物16小時(shí)，然后回復(fù)到室溫。收集沉淀，并研磨成細(xì)粉。將該物質(zhì)放回濾出液中。再加入溴(0.5當(dāng)量)，75℃攪拌該混合物46h。使反應(yīng)混合物回復(fù)到室溫并過濾。用醚沖洗沉淀，減壓干燥產(chǎn)生化合物94，為HBr鹽。ES/MS m/z 210(MH+)，C8H4ClN3S＝209g/mol。
步驟4還原為6-氨基甲基苯并噻唑(95)在0℃下將化合物94(1.00當(dāng)量)加入0.4M的氫化鋁鋰(4.00當(dāng)量)的醚懸液中。室溫?cái)嚢柙摑{液過夜。使該混合物回復(fù)到0℃，用水猝滅反應(yīng)。分離層。將水相pH調(diào)整到10-11，然后用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)相用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，產(chǎn)生化合物95，它無需進(jìn)一步純化即可使用。ES/MS m/z 214(MH+)，C8H8ClN3S＝213g/mol。
步驟5轉(zhuǎn)化為N-Boc-氨基甲基苯并噻唑(96)將二碳酸二叔丁酯(1.0當(dāng)量)加入0.1M的化合物95的四氫呋喃懸液中，室溫?cái)嚢?小時(shí)。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。用快速色譜在硅膠上純化產(chǎn)物(48∶48∶4二氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲醇)，得到化合物96。ES/MS m/z 314(MH+)，C13H16ClN3O2S＝313g/mol。
實(shí)施例18合成5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(4-氯-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺 此合成也可用于制備以下化合物5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(4-氯-1-乙基-1H-苯并咪唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[4-氯-1-(3，3-二甲基丁基)-1H-苯并咪唑-2-基]噻吩-2-羧酰胺；和5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(4-氯-1-異丁基-1H-苯并咪唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺。
步驟1還原性胺化(96)
在室溫下攪拌3-氯-2-硝基苯胺95(1.0當(dāng)量)和醛(1.2當(dāng)量)混合物的二氯甲烷溶液2h。加入三乙酰氧基硼氫化鈉(1.2當(dāng)量)，然后加入乙酸(1.2當(dāng)量)。再在室溫下攪拌該反應(yīng)3h。用碳酸氫鈉飽和溶液和鹽水洗滌該混合物。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮。用Biotage以15％乙酸乙酯的己烷溶液純化粗化合物，產(chǎn)生化合物96。
步驟2氫化(97)將阮內(nèi)鎳(Raney-Ni)(25％w/w，用水和甲醇沖洗)加入化合物96的甲醇溶液中。然后在室溫下向反應(yīng)混合物中鼓入氫氣3h。通過硅藻土(Celite)過濾反應(yīng)懸液。用甲醇沖洗濾餅，減壓濃縮合并的甲醇溶液，產(chǎn)生所需產(chǎn)物97。
步驟3形成4-氯-1-烷基-1H-苯并咪唑(98)將化合物97的甲醇溶液加入溴化氰的乙腈和水(1∶10v/v)溶液中。室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物15小時(shí)。將碳酸氫鈉飽和溶液加入溶液中，以調(diào)節(jié)pH＝8。用乙酸乙酯萃取反應(yīng)混合物。用鹽水洗滌有機(jī)相，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。用己烷研磨(treaturate)粗產(chǎn)物，過濾產(chǎn)生所需產(chǎn)物98。
步驟4縮合為酰胺(100)將N，N’-羰基二咪唑(1.1當(dāng)量)加入0.1M的羧酸99(1.0當(dāng)量)的無水THF溶液中。50℃攪拌該混合物1.5h。使該溶液回復(fù)到室溫；加入4-氯-1-烷基-1H-苯并咪唑98(1.1當(dāng)量)。50℃攪拌該溶液15小時(shí)。使該混合物回復(fù)到室溫，用乙酸乙酯稀釋，用碳酸氫鈉飽和溶液和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮。用Biotage以60％乙酸乙酯的己烷溶液純化粗化合物，產(chǎn)生N-Boc保護(hù)的產(chǎn)物，在室溫下用60％三氟乙酸的二氯甲烷溶液處理該產(chǎn)物1h。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)，用反相HPLC純化剩余物，得到最終產(chǎn)物100。
實(shí)施例19合成N-(4-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)-3-羥基-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺
步驟1形成羧酸(111-A)對(duì)化合物111進(jìn)行實(shí)施例20步驟7中所列反應(yīng)，產(chǎn)生相應(yīng)羧酸111-A。
步驟2縮合為酰胺(101)將溴代-三-吡咯烷-六氟磷酸鹽(PyBrop，1.5當(dāng)量)和N-羥基苯并三唑(HOBt，1.5當(dāng)量)加入0.2M的羧酸111-A(1.0當(dāng)量)、2-氨基-4-氯苯并噻唑(4.0當(dāng)量)、N，N-二異丙基乙胺(2.0當(dāng)量)的無水THF溶液中。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?2h，用乙酸乙酯稀釋，用碳酸氫鈉飽和溶液和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮。用乙酸乙酯和己烷(1∶1，v/v)研磨(triturate)粗化合物，過濾產(chǎn)生產(chǎn)物101。ES/MS m/z432/434(MH+)，C18H14ClN5O2S2＝431g/mol。
步驟3去甲基化(102)在0℃將101的二氯甲烷懸液加入0.1M的三氯化鋁(12當(dāng)量)的乙硫醇溶液中。室溫?cái)嚢柙摲磻?yīng)5h。用二氯甲烷稀釋該混合物，依次用水、鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮，產(chǎn)生黃色固體產(chǎn)物102。ES/MS m/z 418/420(MH+)，C17H12ClN5O2S2＝418g/mol。
實(shí)施例20合成用于本發(fā)明化合物的各種中間體
步驟1溴化(104)將三溴化苯基三甲基銨(3.0當(dāng)量)加入3-羥基噻吩-2-羧酸甲酯103(1.0當(dāng)量)的甲醇和二氯甲烷(1∶1，v/v)溶液中。然后加入碳酸鈣(4.0當(dāng)量)。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?0h。過濾反應(yīng)懸液，減壓濃縮濾出液。將剩余物再溶解于乙酸乙酯中，依次用碳酸氫鈉飽和溶液和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮。用Biotage以10％乙酸乙酯的己烷溶液純化粗產(chǎn)物，產(chǎn)生化合物104。GC/MS 237(M+)，C6H5BrO3S＝237g/mol。
步驟2Mitsunobu反應(yīng)為甲氧基噻吩(105)在0℃、氬氣下將三苯基膦(1.5當(dāng)量)加入到甲醇(1.5當(dāng)量)的THF溶液中。在0℃攪拌30分鐘，形成澄清溶液。在0℃將偶氮二羧酸二乙酯(1.5當(dāng)量)緩慢加入反應(yīng)溶液中，0℃攪拌得到的黃色溶液1h。加入化合物104(1.0當(dāng)量)的THF溶液，0℃攪拌該反應(yīng)1h，室溫?cái)嚢?0h。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。用Biotage以5％乙酸乙酯的己烷溶液純化粗產(chǎn)物，產(chǎn)生化合物105。ES/MS m/z 250/252(MH+)，C7H7BrO3S＝251g/mol。
步驟3Sonogashira反應(yīng)為TMS乙炔(106)在室溫、氬氣下將二氯雙(三苯基膦)鈀(II)(0.12當(dāng)量)和碘化銅(I)(0.2當(dāng)量)分別加入105(1.0當(dāng)量)的THF和三乙胺(2∶1，v/v)溶液中。室溫?cái)嚢柙摲磻?yīng)10分鐘。緩慢加入(三甲基甲硅烷基)乙炔(6.0當(dāng)量)。在油浴中將該混合物加熱到70℃15h。用THF稀釋反應(yīng)混合物，通過硅膠過濾。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。用Biotage以4％乙酸乙酯的己烷溶液純化粗產(chǎn)物，產(chǎn)生化合物106。GC/MS 268(M+)，C12H16O3SSi＝268g/mol。
步驟4去三甲基甲硅烷基化(107)在0℃將氟化四丁基銨(1.0M的THF溶液，2.0當(dāng)量)加入106(1.0當(dāng)量)的THF溶液中。0℃攪拌該混合物24h，GCMS數(shù)據(jù)說明反應(yīng)完成。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。將粗產(chǎn)物溶解于二氯甲烷，用水、鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過濾并濃縮。用Biotage以5％乙酸乙酯的己烷溶液純化粗產(chǎn)物，產(chǎn)生化合物107。
GC/MS 196(M+)，C9H8O3S＝196g/mol。
步驟5取代炔(108)室溫?cái)嚢瓒燃淄橹械?07(1.0當(dāng)量)的25％三氟乙酸溶液4h。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。將氯化四丁基銨(0.1當(dāng)量)和二氯甲烷/水(3∶1)加入剩余物中，然后加入1.0MKOH，使水相pH＝10。室溫?cái)嚢柙摲磻?yīng)30分鐘。將二氯甲烷和水加入反應(yīng)混合物中。用鹽水洗滌有機(jī)相，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。用Biotage以8％乙酸乙酯的己烷溶液純化粗產(chǎn)物，產(chǎn)生化合物108。GC/MS 214(M+)，C9H10O4S＝214g/mol。
步驟6加入嘧啶環(huán)(109)按照實(shí)施例3的步驟1和步驟2以及實(shí)施例4的步驟1合成化合物109。
步驟7皂化為羧酸(110)將1.0M氫氧化鈉水溶液(3.0當(dāng)量)加入109(1.0當(dāng)量)的乙醇溶液中。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?h。減壓去除揮發(fā)性物質(zhì)。將剩余物溶解在乙酸乙酯中，依次用稀鹽酸和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)層，過濾并濃縮，得到化合物110。該產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。ES/MS m/z 366(MH+)，C16H19N3O5S＝365g/mol。
實(shí)施例21合成3-羥基噻吩衍生物此方案可用于制備噻吩3-位被取代的中間體。
步驟1醚的還原(112)按照實(shí)施例19的步驟，將化合物111還原為相應(yīng)醇112。
步驟2Mitsunobu反應(yīng)(113)對(duì)化合物112進(jìn)行實(shí)施例20步驟2中所列反應(yīng)，產(chǎn)生相應(yīng)醚113。
步驟3皂化為羧酸(114)對(duì)化合物113進(jìn)行實(shí)施例20步驟7中所列的皂化反應(yīng)，產(chǎn)生化合物114。
可用上述實(shí)施例中所述方法制備下表6中的化合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知并可購得用于合成的原材料，或可用已知方法制備這些原材料。用ACD/Name Batch 5.04版(Advanced Chemistry Development Inc.；Toronto，Ontario；www.acdlabs.com)命名化合物。
表6
實(shí)施例22Akt3激酶活性實(shí)驗(yàn)用基于[γ33p]-ATP的放射性實(shí)驗(yàn)或基于抗體的時(shí)間分辨的熒光實(shí)驗(yàn)測(cè)定Akt3激酶活性，它們能測(cè)定生物素標(biāo)記的肽在Akt3激酶存在下的磷酸化水平。用于這些實(shí)驗(yàn)的試劑和進(jìn)行這些實(shí)驗(yàn)的方法見下。
以下試劑用于這些實(shí)驗(yàn)重組人Akt3在昆蟲細(xì)胞中表達(dá)Histag全長Akt3蛋白，在Ni親和樹脂上純化。
生物素-肽底物生物素-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Pro-Arg-Ala-Ala-Thr-Phe-NH2(American Peptide Company，Sunnyvale，CA)；SEQ ID NO2親和純化的兔抗磷酸-肽抗體DELFIA Eu-N1標(biāo)記的抗兔抗體(PerkinElmer，F(xiàn)oster City，CA)DELFIA增強(qiáng)溶液(PerkinElmer，F(xiàn)oster City，CA)[γ33P]-ATP(PerkinElmer，F(xiàn)oster City，CA)實(shí)驗(yàn)緩沖液(50mM Tris-HCl(pH7.5)，10mM MgCl2，5mM MnCl2，5mM BGP，2mM DTT和0.01％BSA)時(shí)間分辨的熒光實(shí)驗(yàn)用DMSO稀釋受試化合物，使其為最終實(shí)驗(yàn)濃度的50倍。然后將2μl各稀釋受試化合物轉(zhuǎn)移到96孔板中，用新鮮制備的實(shí)驗(yàn)緩沖液稀釋至終體積為25μl。然后，將包含3nM Akt3酶和1μM生物素-肽底物的50μl實(shí)驗(yàn)緩沖液加入稀釋的受試化合物中。通過將25μl 800nM ATP加入實(shí)驗(yàn)緩沖液?jiǎn)?dòng)反應(yīng)，產(chǎn)生的終濃度為1.5nM酶、0.5μM生物素-肽底物和200nM ATP。
讓反應(yīng)進(jìn)行60分鐘，然后通過加入終濃度為30mM的EDTA終止反應(yīng)。將100μl的各反應(yīng)物轉(zhuǎn)移到黑色96孔Neutravidin板(Pierce Biotechnology，Rockford，Illinois)中。1小時(shí)后洗滌該板，然后加入抗磷酸肽第一抗體。孵育1小時(shí)后，再次洗滌該板，然后加入DELFIA Eu-N1-標(biāo)記的抗兔抗體，孵育1小時(shí)。洗滌最后一次，然后加入100μl DELFIA增強(qiáng)溶液(PerkinElmer，F(xiàn)oster City，CA)，同時(shí)振蕩3-5分鐘。然后用Wallac Victor 2設(shè)備(PerkinElmer)測(cè)定時(shí)間分辨的熒光。
基于[γ33P]-ATP的放射性實(shí)驗(yàn)進(jìn)行放射性實(shí)驗(yàn)所用條件類似于時(shí)間分辨的熒光實(shí)驗(yàn)的條件，除了在各反應(yīng)開始時(shí)加入[γ33P]-ATP使終濃度為5μCi/ml。通過加入EDTA終止反應(yīng)，將100μl的各反應(yīng)物轉(zhuǎn)移到鏈霉抗生物素蛋白包被的96孔Flash板(PerkinElmer)中，以捕獲生物素-肽底物。1小時(shí)后，洗滌該板并密封，用Wallac MicroBeta Trilux平板計(jì)數(shù)器測(cè)定摻入33P的量。
本發(fā)明化合物能抑制CDC7、Akt和/或PKA。為測(cè)定抑制特性，用上述實(shí)施例所列方法測(cè)定化合物對(duì)Akt的抑制，用實(shí)施例23所列方法測(cè)定化合物對(duì)PKA的抑制，用實(shí)施例24或25所列方法測(cè)定化合物對(duì)CDC7的抑制。抑制能力的一種衡量是IC50，定義為使激酶CDC7、Akt和/或PKA的活性降低50％的組合物濃度。優(yōu)選化合物的IC50值小于約1mM，優(yōu)選實(shí)施方式的IC50值小于約25μM，尤其優(yōu)選的實(shí)施方式的IC50值小于約1000nM，最優(yōu)選的實(shí)施方式的IC50值小于約100nM。
實(shí)施例23PKA活性實(shí)驗(yàn)在無細(xì)胞激酶實(shí)驗(yàn)中，在含有30mM Tris-HCl pH7.5、30mM MgCl2、1.4mMDTT、7mM EGTA、25mM β甘油磷酸酯和0.035％BSA的緩沖液中用市售PKA(Upstate#14-440)(酶的終濃度為0.1nM)和PKA的生物素化底物(Upstate#12-394)(終濃度為0.5μM)測(cè)定化合物。最終反應(yīng)體積是150μl，最終DMSO濃度為1％。
使反應(yīng)中未標(biāo)記ATP為1μM，γ[33P]-ATP為1.6nM，然后室溫孵育1小時(shí)。使磷酸化底物捕獲在白色的鏈霉抗生物素蛋白包被的96孔板上1小時(shí)，然后洗滌4次。加入閃爍液，密封該板并用閃爍計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)。
如上所述，本發(fā)明化合物也可抑制PKA。為測(cè)定抑制特性，如上述實(shí)施例所述測(cè)定化合物。優(yōu)選化合物的IC50值小于約1mM，優(yōu)選實(shí)施方式的IC50值小于約25μM，尤其優(yōu)選的實(shí)施方式的IC50值小于約1000nM，最優(yōu)選的實(shí)施方式的IC50值小于約100nM。
實(shí)施例24篩選CDC7抑制劑的實(shí)驗(yàn)以下試劑直接用于實(shí)驗(yàn)或用于制備所述溶液CDC7/DBF4酶，生物素-MCM2底物，1M Hepes pH7.2-7.5，
1M MgCl2，1M DTT，1M PBS，100mg/ml亮抑肽酶，10mg/ml(1％)BSA的PBS溶液，100mMATP，1M Tris pH7.5，4M NaCl，0.5M EDTA，吐溫20，Rx-MCM2 pSer108 BL1539抗體(1mg/ml)(1∶4000稀釋)(Bethyl，A300-094A)，α篩選蛋白A500點(diǎn)檢測(cè)試劑盒(PerkinElmer，6760671C)，白色不透明的384孔微量板(PerkinElmer，6007290)，緩沖液(10mg/ml(1％)BSA/蒸餾H2O)，20％吐溫20，實(shí)驗(yàn)緩沖液(50mM Hepes，10mM MgCl2.1mM DTT，10ug/mL亮抑肽酶和0.2mg/mLBSA)，和檢測(cè)緩沖液(25mM Tris，400mM NaCl，100mM EDTA，0.3％BSA的PBS溶液，0.05％吐溫20)。
在緩沖液中制備準(zhǔn)備測(cè)試對(duì)CDC7的抑制活性的化合物的40×儲(chǔ)存液和天然產(chǎn)生的激酶抑制劑星孢素的儲(chǔ)存液，以用于該實(shí)驗(yàn)。制備各種已知濃度的星孢素。
將受試化合物儲(chǔ)存液各0.5μl轉(zhuǎn)移到384孔測(cè)定板的“測(cè)試孔”中。類似地，將星孢素溶液各1μl轉(zhuǎn)移到“星孢素對(duì)照孔”中。
將5μl 0.5M EDTA溶液和4％DMSO轉(zhuǎn)移到“背景孔”中。將1μl含有30％DMSO的溶液轉(zhuǎn)移到“總計(jì)孔”中。
將10μL含有CDC7/DBF4酶(0.2μg/ml)和生物素-MCM2底物(0.125μg/ml)的溶液轉(zhuǎn)移到各孔中。然后將10μL 0.5μM ATP轉(zhuǎn)移到各孔中，啟動(dòng)反應(yīng)。然后在平板搖床上孵育該平板1小時(shí)。
通過用檢測(cè)緩沖液將鏈霉抗生物素蛋白包被的供體珠和偶聯(lián)于蛋白A的受體珠稀釋為54μg/ml，以及1∶4,000稀釋pSer108-特異性抗體新鮮制備檢測(cè)混合物并維持在低照度條件下。在1小時(shí)孵育結(jié)束后，在低照度條件下將10μL檢測(cè)混合物轉(zhuǎn)移到各孔中以終止反應(yīng)。
該板再在暗處孵育4小時(shí)，然后用Perkin Elmer Fusion Instrument讀數(shù)，以測(cè)定由CDC7/DBF4酶活性產(chǎn)生的磷酸化生物素-MCM2底物的相對(duì)量。將各種受試化合物產(chǎn)生的抑制量與各種已知濃度的星孢素產(chǎn)生的抑制量相比較，以確定各受試化合物的相對(duì)抑制活性。根據(jù)上述“背景孔”確定少量DMSO(存在于檢測(cè)試劑盒中提供的試劑中)產(chǎn)生的背景信號(hào)，并減去此背景信號(hào)。
在此方式中，測(cè)定了各受試化合物對(duì)CDC7激酶的抑制量。
實(shí)施例25篩選CDC7抑制劑的實(shí)驗(yàn)以下試劑直接用于實(shí)驗(yàn)或用于制備所述溶液CDC7/DBF4酶，生物素-MCM2底物，1M Hepes pH7.2-7.5，1M MgCl2，1M DTT，1M PBS，100mg/ml亮抑肽酶，10mg/ml(1％)BSA的PBS溶液，100mM ATP，1M Tris pH7.5，4M NaCl，0.5M EDTA，吐溫20，Rx-MCM2 pSer108 BL1539抗體(1mg/ml)(1∶4000稀釋)(Bethyl、A300-094A)，α篩選蛋白A500點(diǎn)檢測(cè)試劑盒(PerkinElmer，6760671C)，白色不透明的384孔微量板(PerkinElmer，6007290)，緩沖液(10mg/ml(1％)BSA/蒸餾H2O)，20％吐溫20，實(shí)驗(yàn)緩沖液(50mM Hepes，10mM MgCl2，1mM DTT，10ug/mL亮抑肽酶和0.2mg/mL BSA)，和檢測(cè)緩沖液(25mM Tris，400mM NaCl，100mM EDTA，0.3％BSA的PBS溶液，0.05％吐溫20)。
在緩沖液中制備準(zhǔn)備測(cè)試對(duì)CDC7的抑制活性的化合物的40×儲(chǔ)存液和天然產(chǎn)生的激酶抑制劑星孢素的儲(chǔ)存液，以用于該實(shí)驗(yàn)。制備各種已知濃度的星孢素。
將受試化合物儲(chǔ)存液各0.5μl轉(zhuǎn)移到384孔測(cè)定板的“測(cè)試孔”中。類似地，將星孢素溶液各1μl轉(zhuǎn)移到“星孢素對(duì)照孔”中。
將5μl 0.5M EDTA溶液和4％DMSO轉(zhuǎn)移到“背景孔”中。將1μl含有30％DMSO的溶液轉(zhuǎn)移到“總計(jì)孔”中。
將10μL含有CDC7/DBF4酶(0.2μg/ml)和生物素-MCM2底物(0.125μg/ml)的溶液轉(zhuǎn)移到各孔中。然后將10μL 0.5μM ATP轉(zhuǎn)移到各孔中，啟動(dòng)反應(yīng)。然后在平板搖床上孵育該平板1小時(shí)。
通過用檢測(cè)緩沖液將鏈霉抗生物素蛋白包被的供體珠和偶聯(lián)于蛋白A的受體珠稀釋為54μg/ml，以及1∶4,000稀釋磷酸化蘇氨酸特異性抗體(Cell Signalling，9381)新鮮制備檢測(cè)混合物并維持在低照度條件下。在1小時(shí)孵育結(jié)束后，在低照度條件下將10μL檢測(cè)混合物轉(zhuǎn)移到各孔中以終止反應(yīng)。
該板再在暗處孵育4小時(shí)，然后用Perkin Elmer Fusion Instrument讀數(shù)，以測(cè)定由CDC7/DBF4酶活性產(chǎn)生的磷酸化生物素-MCM2底物的相對(duì)量。將各種受試化合物產(chǎn)生的抑制量與各種已知濃度的星孢素產(chǎn)生的抑制量相比較，以確定各受試化合物的相對(duì)抑制活性。根據(jù)上述“背景孔”確定少量DMSO(存在于檢測(cè)試劑盒中提供的試劑中)產(chǎn)生的背景信號(hào)，并減去此背景信號(hào)。
在此方式中，測(cè)定了各受試化合物對(duì)CDC7激酶的抑制量。
如上所述，本發(fā)明化合物也可抑制CDC7。為測(cè)定抑制特性，如上面兩個(gè)實(shí)施例中所述測(cè)定化合物。優(yōu)選化合物的IC50值小于約1mM，優(yōu)選實(shí)施方式的IC50值小于約25μM，尤其優(yōu)選的實(shí)施方式的IC50值小于約1000nM，最優(yōu)選的實(shí)施方式的IC50值小于約100nM。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)上述說明書對(duì)組合物和方法進(jìn)行各種修改和改變。在所附權(quán)利要求書范圍內(nèi)的所有這些修改都包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種式I代表的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或前藥 式中環(huán)A是含有5或6環(huán)原子的含氮雜芳基，其中1-4個(gè)環(huán)原子是氮原子；n是選自0或1的整數(shù)；R選自a)氫，b)羥基，c)烷基，d)取代的烷基，e)環(huán)烷基，f)取代的環(huán)烷基，g)-SO2R7，其中R7是C1-C5烷基或取代的烷基，h)烷氧基，i)羧基，j)羧酸酯，k)硝基，l)芳基，m)取代的芳基，n)雜芳基，o)取代的雜芳基，p)雜環(huán)基，q)取代的雜環(huán)基，r)酰氨基，和s)?；?；R1各自獨(dú)立地選自a)鹵素，b)氰基，c)硝基，d)羥基，e)巰基，f)氨基，g)取代的氨基，h)烷氧基，i)取代的烷氧基，j)芳氧基，k)取代的芳氧基，l)雜芳氧基，m)取代的雜芳氧基，n)烷硫基，o)取代的烷硫基，p)-C(＝O)NR8R8，其中R8各自獨(dú)立地選自氫、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基，或者R8各自可任選地與懸掛在它上面的氮原子連接在一起形成雜環(huán)基或取代的雜環(huán)基，q)-NHC(＝O)-R9，其中R9選自氫、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基，r)芳基或雜芳基，各自可被任選取代的烷基或芳基任選取代，s)雜環(huán)基，各自可被任選取代的烷基或芳基任選取代，和t)用1-3個(gè)取代基任選取代的C1-C5烷基，所述取代基選自鹵素、羥基、氨基、芳基、C1-C5烷基單取代的氨基和C1-C5烷基雙取代的氨基，其中各烷基獨(dú)立于其它烷基；m是等于0、1或2的整數(shù)；R2和R4獨(dú)立地選自a)氫，b)環(huán)烷基，c)取代的環(huán)烷基，d)雜環(huán)基，e)取代的雜環(huán)基，f)芳基，g)取代的芳基，h)雜芳基，i)取代的雜芳基，j)任選取代的C1-C5取代的烷基，k)任選取代的C2-C5烯基，l)任選取代的C2-C5炔基，m)任選取代的C1-C5烷氧基，n)羥基，o)氨基，p)C1-C5烷基單取代的氨基，和q)C1-C5烷基雙取代的氨基，其中各烷基獨(dú)立于其它烷基，限制條件是當(dāng)R2或R4之一是環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基時(shí)，R2或R4中另一個(gè)是氫；R3選自a)氫，b)C1-C5烷基，和c)在亞烷基鏈上由1-2個(gè)取代基任選取代的-(C1-C5亞烷基)p-Z，所述取代基選自i.由1-3個(gè)取代基任選取代的C1-C5烷基，所述取代基選自羥基、羧基、羧酸酯、氨基、C1-C5烷基單取代的氨基和C1-C5烷基雙取代的氨基，其中各烷基獨(dú)立于其它烷基，ii.由1-3個(gè)取代基任選取代的C2-C5烯基，所述取代基選自羥基、羧基、羧酸酯、氨基、C1-C5烷基單取代的氨基和C1-C5烷基雙取代的氨基，其中各烷基獨(dú)立于其它烷基，限制條件是所述羥基取代基不懸掛在取代的烯基的乙烯基碳原子上，iii.由1-3個(gè)取代基任選取代的C2-C5炔基，所述取代基選自羥基、羧基、羧酸酯、氨基、C1-C5烷基單取代的氨基和C1-C5烷基雙取代的氨基，其中各烷基獨(dú)立于其它烷基，限制條件是所述羥基取代基不懸掛在取代的炔基的乙炔碳原子上，iv.C3-C6環(huán)烷基，v.C3-C6螺環(huán)烷基，vi.羧基，vii.羧酸酯，viii.鹵素，ix.羥基，x.C1-C5烷氧基，xi.氨基，xii.C1-C5烷基單取代的氨基，xiii.C1-C5烷基雙取代的氨基，xiv.芳基，和xv.雜環(huán)基；Z選自a)烷基，b)取代的烷基，c)烷基氨基，d)烷氧基，e)取代的烷氧基，f)環(huán)烷基，g)雜環(huán)基，h)取代的雜環(huán)基，i)芳基，j)取代的芳基，k)雜芳基，和l)取代的雜芳基；p是選自0或1的整數(shù)Q選自a)-C(X’)NR6-，b)-CH2NR6-，c)-NR6C(X’)-，d)-NR6C(X’)O-，e)-NR6C(X’)NR6-，f)-OC(X’)NR6-，g)-C(X’)O-，h)-CR6＝CR6-，i)-C≡C-，j)-S(O)2NR6-，和k)-S(O)NR6-，其中，X’選自氧和硫，R6各自獨(dú)立地選自氫和C1-C3烷基和C1-C3取代的烷基，或者R6與Q和其連接的碳原子加上R4和其連接的碳原子連接在一起形成雜環(huán)基或取代的雜環(huán)基，限制條件是當(dāng)Q是-C(O)NH-時(shí)，R3不是還用至少一個(gè)-C(O)基團(tuán)在-C(O)NH-的β位取代的C2烷基，進(jìn)一步的限制條件是當(dāng)Q是-S(O)2NH-時(shí)，R3不是還用至少一個(gè)-C(O)基團(tuán)取代的C2烷基；W選自-O-、-S-、-SO-和-SO2-；限制條件是當(dāng)環(huán)A是嘧啶、Q是-C(O)NR6-時(shí)，R4不是芳基或雜芳基。
2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，環(huán)A選自式IA、IB、IC、ID、IE，和IF 式中R、R1、R5、n和m的定義如上，t是0或1。
3.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，R選自氫、烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、酰氨基、雜芳基、硝基、芳基、-SO2R7，其中R7是氫或甲基、羧酸酯和?；?br> 4.如權(quán)利要求3所述的化合物，其特征在于，R選自2-(甲基氨基)乙-1-基，2-(N-甲基哌嗪-N’-基)乙-1-基，2-(N-甲基吡咯-2-基)乙-1-基，2-(N-嗎啉代)乙-1-基，2-(哌啶-N-基)乙-1-基，2-(吡啶-2-基)乙-1-基，2-(吡啶-3-基)乙-1-基，2-(吡啶-4-基)乙-1-基，2-(S)-苯基環(huán)丙基，2-氨基乙-1-基，2-羥基乙-1-基，2-苯基乙-1-基，2-螺環(huán)丙基-2-(4-氯苯基)乙-1-基，3-(咪唑-N-基)丙-1-基，3-(N-甲基哌嗪-N’-基)丙-1-基，3-(N-嗎啉代)丙-1-基，3-氨基丁-1-基，3-氨基丙-1-基，5-羧基-4-(R，S)-氨基戊-1-基，氨基羰基，芐基，芐基氨基羰基，丁基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)丙基，環(huán)丙基甲基，二甲基氨基羰基，乙基氨基羰基，氫，乙基，甲基，甲氧基羰基，甲基氨基羰基，甲基羰基，新戊基，硝基，苯基，苯基氨基羰基，丙基，丙基氨基羰基，吡啶-2-基甲基，吡啶-3-基甲基，吡啶-4-基，吡啶-4-基甲基，和SO2CH3。
5.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，R5是氫或甲基。
6.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，R1選自氫、C1-5烷基、-C(＝O)NR8R8和-NHC(＝O)-R9。
7.如權(quán)利要求6所述的化合物，其特征在于，R1選自氫、甲基、氨基羰基和甲基羰基氨基。
8.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，R2和R4獨(dú)立地選自氫、羥基、氨基、用芳基或氨基任選取代的C1-C5烷氧基。
9.如權(quán)利要求8所述的化合物，其特征在于，R2和R4選自氫、羥基、氨基、甲氧基、芐氧基和2-氨基乙氧基。
10.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，R3是氫。
11.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，R3是-(C1-C5亞烷基)p-Z，其中p是0或1。
12.如權(quán)利要求11所述的化合物，其特征在于，p是1，所述亞烷基鏈?zhǔn)俏慈〈蛴眠x自以下基團(tuán)的取代基取代的鏈C1-C5烷基，用羥基、氨基、單取代的氨基或雙取代的氨基取代的C1-C5烷基，C2-C5烯基，C2-C5炔基，C3-C6螺環(huán)烷基，羧基，羧酸酯，羥基，氨基，雜環(huán)基和芳基。
13.如權(quán)利要求11所述的化合物，其特征在于，所述亞烷基鏈?zhǔn)俏慈〈蛴眠x自以下基團(tuán)的取代基取代的鏈2-氨基乙基，2-二甲基氨基乙基，和2-羥乙基，2-甲基氨基乙基，3-甲基氨基丙基，氨基，氨基甲基，羧基，二甲基氨基，二甲基氨基甲基，乙基，甲基，甲基羧基，嗎啉代，羥甲基，苯基，丙-2-烯基，丙-2-炔基，丙基，螺環(huán)丁基，和螺環(huán)丙基。
14.如權(quán)利要求11所述的化合物，其特征在于，Z選自環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、烷基、氨基、烷基氨基和二烷基氨基。
15.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，R3選自(2-氟-4-甲氧基苯基)乙-1-基，(2-氟-4-甲基苯基)乙-1-基，[1-(4-氯苯基)環(huán)丁-1-基]甲基，[1-(4-氯苯基)環(huán)丙-1-基]甲基，1-(1-氨基乙基)-4-氯-1H-苯并咪唑-2-基，1-(2-氨基乙基)-1H-苯并咪唑-2-基，1-(2-氨基乙基)-4-氯-1H-苯并咪唑-2-基，1-(2-氨基乙基)-4-甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基，1-(2-氨基乙基)-4-苯基-1H-苯并咪唑-2-基，1-(2-氨基乙基)-7-氯-1H-苯并咪唑-2-基，1-(2-甲基丙基)-4-氯-1H-苯并咪唑-2-基，1-(3，3-二甲基丁基)-4-氯-1H-苯并咪唑-2-基，1-(3-氨基丙基)-4-氯-1H-苯并咪唑-2-基，1-(4-氯苯基)-3-(N-甲基氨基)丙-1-基，1-(4-氯苯基)-3-(N，N-二甲基氨基)丙-1-基，1-(4-氯苯基)-3-羥基丙-1-基，1-(氨基甲基)-2-(2，4-二氯苯基)乙-1-基，1-(R)-1-(2，4-二氯芐基)-4-(二甲基氨基)丁-2-基，1-(R)-1-(2，4-二氯芐基)-4-(甲基氨基)丁-2-基，1-(R)-1-(2，4-二氯芐基)-4-氨基丁-2-基，1-(R)-2-(2，4-二氯苯基)-1-甲基乙-1-基，1-(R)-4-氟苯基)乙-1-基，1-(R)-氨基-1-(2，4-二氯芐基)乙-1-基，1-(R)-氨基甲基-2-(2，4-二氯苯基)乙-1-基，1-(R)-羥甲基-2-(4-氯苯基)乙-1-基，1-(R，S)-羧基-2-(2，4-二氯苯基)乙-1-基，1-(R，S)-羥甲基-1-苯基甲基，1-(R，S)-羥甲基-2-(2，4-二氯苯基)乙-1-基，1-(R，S)-羥甲基-2-苯基乙-1-基，1-(R，S)-甲基羧基-2-(2，4-二氯苯基)乙-1-基，1-(R，S)-苯基-2-苯基乙-1-基，1-(S)-1-(2，4-二氯芐基)-4-(二甲基氨基)丁-2-基，1-(S)-1-(2，4-二氯芐基)-4-(甲基氨基)丁-2-基，1-(S)-1-(2，4-二氯芐基)-4-氨基-丁-2-基，1-(S)-氨基-1-(2，4-二氯芐基)乙-1-基，1-(S)-氨基甲基-2-(1H-吲哚-3基)乙-1-基，1-(S)-氨基甲基-2-(2，4-二氯苯基)乙-1-基，1-(S)-氨基甲基-2-(吲哚-3-基)乙-1-基，1-(S)-二甲基氨基-2-(2，4-二氯苯基)乙-1-基，1-(S)-二甲基氨基甲基-2-(2，4-二氯苯基)乙-1-基，1，2，3，4-四氫萘-1-基，1-氨基乙基-4-甲氧基苯并咪唑-2-基，1-氨基甲基-2-(2，4-二氯苯基)乙-1-基，1-氨基甲基-2-(4-氯苯基)乙-1-基，1-氨基甲基-4-氯-1H-苯并咪唑-2-基，1-芐基吡咯烷-3-基，1-二甲基氨基-3-(2，4-二氯苯基)丙-2-基，1-乙基-4-氯苯并咪唑-2-基，1-羥甲基-2-(2，4-二氯苯基)乙-1-基，1-羥甲基-2-甲基丙-1-基，1-異丁基-4-氯苯并咪唑-2-基，1-甲基-2-羥基乙-1-基，1-甲基-4-氯苯并咪唑-2-基，1-甲基苯并咪唑-2-基，1-苯基-1-(4-氯苯基)甲基，1-苯基-2-羥基乙-1-基，2-(2，4-二氯苯基)丁-1-基，2-(2，4-二氯苯基)乙-1-基，2-(2，4-二氯苯基)戊-1-基，2-(2，4-二氯苯基)戊-4-烯-1-基，2-(2，4-二氯苯基)戊-4-炔-1-基，2-(2，4-二氯苯基)丙-1-基，2-(2，5-二甲氧基苯基)乙-1-基，2-(2，6-二氯苯基)乙-1-基，2-(2-氯苯基)乙-1-基，2-(3，4-二氯苯基)乙-1-基，2-(3，4-二甲氧基苯基)乙-1-基，2-(3-氯苯基)乙-1-基，2-(3-氟苯基)乙-1-基，2-(3-甲氧基苯基)乙-1-基，2-(4-氨基苯基)乙-1-基，2-(4-氨基磺?；交?乙-1-基，2-(4-聯(lián)苯基)乙-1-基，2-(4-溴苯基)乙-1-基，2-(4-氯苯基)乙-1-基，2-(4-乙氧基苯基)乙-1-基，2-(4-乙基苯基)乙-1-基，2-(4-氟苯基)乙-1-基，2-(4-甲氧基苯基)乙-1-基，2-(4-甲基苯基)乙-1-基，2-(4-苯氧基苯基)乙-1-基，2-(N-甲基哌嗪-N’-基)乙-1-基，2-(N-甲基吡咯-2-基)乙-1-基，2-(N-嗎啉代)乙-1-基，2-(哌啶-1-基)乙-1-基，2-(哌啶-3-基)乙-1-基，2-(吡啶-2-基)乙-1-基，2-(吡啶-4-基)乙-1-基，2-(R)-(N-嗎啉代)-2-苯基乙-1-基，2-(R)-氨基-3-(吲哚-3-基)丙-1-基，2-(R)-羥基茚滿-1-基，2-(R)-甲基-2-苯基乙-1-基，2-(R，S)-氨基-2-苯基乙-1-基，2-(R，S)-羥基-2-(4-氯苯基)乙-1-基，2-(R，S)-甲基-2-苯基乙-1-基，2-(S)-氨基-3-(吲哚-3-基)丙-1-基，2-(S)-甲基-2-苯基乙-1-基，2-(三氟甲基)-4-氟苯基甲基，2，4-二氯芐基，2，4-二氯苯基甲基，2，2-二甲基-5-芐基四氫吡喃-4-基，2，2-二苯基乙-1-基，2，4-二氯芐基，2，4-二氟芐基，2，5-二氟芐基，2-氨基苯并噻唑-4-基，2-氨基乙-1-基，2-氯芐基，2-二甲基氨基乙-1-基，2-氟-4-氯芐基，2-氟-6-氨基芐基，2-甲氧基芐基，2-甲基-4-氯苯基甲基，2-甲基芐基，2-苯乙基，2-苯基芐基，2-哌啶-N-基芐基，3-(4-氟苯基)丙-1-基，3-(吡咯-N-基)丙-1-基，3，4-二氯芐基，3，5-二氯芐基，3，5-二氟芐基，3-氨基-1-(4-氯苯基)丙-1-基，3-溴芐基，3-氯芐基，3-甲氧基芐基，4-(2-氯苯基)噻唑-2-基，4-(3，4-二氟苯基)噻唑-2-基，4-(3-氯苯基)噻唑-2-基，4-(4-甲氧基苯基)噻唑-2-基，4-(氨基甲基)苯并噻唑-2-基，4-(吡啶-2-基)噻唑-2-基，4-(吡啶-3-基)噻唑-2-基，4-(三氟甲氧基)-6-(氨基甲基)苯并噻唑-2-基，4-(三氟甲基)-6-(氨基甲基)苯并噻唑-2-基，4，6-二氯苯并噻唑-2-基，4，6-二氟苯并噻唑-2-基，4-氨基-2-(4-氯苯基)丁-1-基，4-氨基芐基，4-氨基磺?；S基，4-溴-6-(氨基甲基)苯并噻唑-2-基，4-溴-6-異丙基-苯并噻唑-2-基，4-溴苯并噻唑-2-基，4-溴芐基，4-氯-[2-(S)-2-(氨基丙?；?氨基甲基]苯并噻唑-2-基，4-氯-1，3-苯并噻唑-2-基，4-氯-5-甲基羧基-苯并噻唑-2-基，4-氯-6-({[2-(S)-2-氨基-3-苯基丙?；鵠氨基}甲基)苯并噻唑-2-基，4-氯-6-(2-氨基乙基)苯并噻唑-2-基，4-氯-6-(2-硝基乙基)苯并噻唑-2-基，4-氯-6-(二甲基氨基甲基)苯并噻唑-2-基，4-氯-6-(甲基氨基甲基)苯并噻唑-2-基，4-氯-6-(甲基羰基氨基甲基)苯并噻唑-2-基，4-氯-6-(三氟甲氧基)苯并噻唑-2-基，4-氯-6-(三氟甲基)苯并噻唑-2-基，4-氯-6-[(2-氨基)乙基氨基羰基]苯并噻唑-2-基，4-氯-6-{[(氨基甲基羰基)氨基]甲基}苯并噻唑-2-基，4-氯-6-氨基甲基苯并噻唑-2-基，4-氯-6-羥甲基苯并噻唑-2-基，4-氯-6-甲基氨基甲基苯并噻唑-2-基，4-氯-6-甲基噻唑-2-基，4-氯-6-N-嗎啉代甲基-苯并噻唑-2-基，4-氯-7-氨基甲基-苯并噻唑-2-基，4-氯-7-羥甲基-苯并噻唑-2-基，4-氯苯并噻唑-2-基，4-氯苯并唑-2-基，4-氯芐基，4-二甲基氨基芐基，4-氟芐基，4-氟苯并噻唑-2-基，4-氟芐基，4-氟苯基，4-氟苯基甲基，4-羥基-2-(4-氯苯基)丁-1-基，4-羥基苯并噻唑-2-基，4-羥基苯并噻唑-4-基，4-甲氧基-6-(甲基氨基甲基)苯并噻唑-1-基，4-甲氧基苯并噻唑-2-基，4-甲氧基噻唑-2-基，4-甲基-6-氨基甲基-苯并噻唑-2-基，4-甲基芐基，4-甲基噻唑-2-基，4-苯基噻唑-2-基，5-(2-溴噻吩-5-基)噻唑-2-基，5-(3-溴-4-甲氧基苯基)噻唑-2-基，5-氯苯并咪唑-2-基，5-氯苯并噻唑-2-基，6-氨基甲基-8-氯喹啉-2-基，6-氨基甲基-苯并噻唑-2-基，6-氯苯并噻唑-2-基，6-氟苯并噻唑-2-基，7-氯苯并噻唑-2-基，苯并咪唑-2-基，苯并噻唑-2-基，苯并噻唑-6-基，苯并噻吩-2-基，芐基，茚滿-1-基，萘-1-基甲基，吡啶-2-基甲基，吡啶-3-基甲基，吡啶-4-基甲基，嘧啶-3-基，吡咯烷-3-基，喹啉-2-基，喹啉-3-基，喹啉-6-基，和噻吩-2-基甲基。
16.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，Q選自-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH-、-NHC(O)O-、-CH2NH-、-C(O)N(CH2CH2NH2)-、-C(O)N(CH3)-、-SO2NH-、-C(O)O-、-CH＝CH-和-C≡C-。
17.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，R6與Q和其連接的碳原子加上R4和其連接的碳原子連接在一起形成取代的雜環(huán)基。
18.如權(quán)利要求17所述的化合物，其特征在于，所述取代的雜環(huán)基是5，6-二氫嘧啶-4-酮。
19.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，R6是氫或被氨基任選取代的C1-3烷基。
20.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，W是-S-。
21.一種選自下組的化合物N-[2-(4-氟苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-(2-苯基乙基)噻吩-2-羧酰胺；N-(4-氟芐基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(4-氟苯基)乙基]-5-{2-[(甲磺酰基)氨基]嘧啶-4-基}噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(4-氯苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(4-溴苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-{2-[4-(氨基磺?；?苯基]乙基}-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2-氟苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2-甲氧基苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(3-氟苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(3-甲氧基苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-[(2S)-2-苯基丙基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，6-二氯苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(3，4-二氯苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[3-(4-氟苯基)丙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-[2-(乙基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-[2-(新戊基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(環(huán)丙基氨基)嘧啶-4-基]-N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(環(huán)丁基氨基)嘧啶-4-基]-N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；N-(4-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[4-(氨基磺?；?芐基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-(噻吩-2-基甲基)噻吩-2-羧酰胺；N-{[1-(4-氯苯基)環(huán)丙基]甲基}-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-[2-(1-甲基-1H-吡咯-2-基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-{2-[(2-羥乙基)氨基]嘧啶-4-基}噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(4-氟苯基)乙基]-5-[5-甲基-2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[1-(4-氟苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-(2-氯芐基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-(3-氯芐基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-(4-氯芐基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-(2，4-二氟芐基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-(2，4-二氯芐基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-(2-嗎啉-4-基-2-苯基乙基)噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-(1-萘基甲基)噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-(2-苯基丙基)噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2-氯苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(3-氯苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[1-(4-氯芐基)-2-羥乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-[(2R)-2-苯基丙基]噻吩-2-羧酰胺；N-[(2S)-2-氨基-2-苯基乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(2-氯芐基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(3-氯芐基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(4-氯芐基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(2，4-二氟芐基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(2，5-二氟芐基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(3，5-二氟芐基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(4-氯-2-氟芐基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(2，4-二氯芐基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(3，4-二氯芐基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(3，5-二氯芐基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[2-(2-氯苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[2-(3-氯苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[2-(4-氯苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[2-(3，4-二氯苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[2-(2，6-二氯苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[(2R)-2-苯基丙基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[(2S)-2-苯基丙基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(2-苯基丙基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-{[1-(4-氯苯基)環(huán)丙基]甲基}噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[2-(1-甲基-1H-吡咯-2-基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；N-[(1S)-1-(2，4-二氯芐基)-2-羥乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(4-氯苯基)-4-羥基丁基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[(2S)-2-氨基-2-苯基乙基]-5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(2-甲基芐基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(4-甲基芐基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(2-甲氧基芐基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(3-甲氧基芐基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(3-溴芐基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(4-溴芐基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[2-(2-氟-4-甲基苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[2-(2-氟-4-甲氧基苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[(2R)-2-(4-氯苯基)-2-羥乙基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[2-(2，4-二氯苯基)丙基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[2-(2，4-二氯苯基)丁基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[2-(2，4-二氯苯基)戊基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[2-(2，4-二氯苯基)戊-4-烯基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[2-(2，4-二氯苯基)戊-4-炔基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-1，3-苯并噻唑-2-基噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(4-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-{[1-(4-氯苯基)環(huán)丁基]甲基}噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[(1S)-1-(2，4-二氯芐基)-2-羥乙基]噻吩-2-羧酰胺；2，4-二氯-N-({5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-基}羰基)-L-苯丙氨酸甲酯；N-[(1S)-1-芐基-2-羥乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[(1S)-2-羥基-1-苯基乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[4-氨基-2-(4-氯苯基)丁基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[1-(4-氯苯基)-3-羥丙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[1-(2，4-二氯芐基)-2-羥乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[1-(2，4-二氯芐基)-2-羥乙基]噻吩-2-羧酰胺；2，4-二氯-N-({5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-基}羰基)-L-苯丙氨酸；N-(4-氯-2-甲基芐基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(4-氯-2-甲基芐基)噻吩-2-羧酰胺；N-[2-氨基-1-(4-氯芐基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[1-(4-氯苯基)-3-(二甲基氨基)丙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[1-(4-氯苯基)-3-(甲基氨基)丙基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[1-(4-氯苯基)-3-(二甲基氨基)丙基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(1，1′-聯(lián)苯-2-基甲基)噻吩-2-羧酰胺；N-[3-氨基-1-(4-氯苯基)丙基]-5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；N-[2-氨基-1-(2，4-二氯芐基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-(4-甲基-1，3-苯并噻唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺；N-(4-甲氧基-1，3-苯并噻唑-2-基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[2-(4-氟苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(乙基氨基)嘧啶-4-基]-N-[2-(4-氟苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(4-氟苯基)乙基]-N-甲基-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[(1R)-2-(2，4-二氯苯基)-1-甲基乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-氨基-1-(2，4-二氯芐基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-3-羧酰胺；N-[1-(2-氨基乙基)-1H-苯并咪唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[1-(2-氨基乙基)-7-氯-1H-苯并咪唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[(1R)-2-氨基-1-(2，4-二氯芐基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[(1S)-2-氨基-1-(2，4-二氯芐基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[(1R)-1-(2，4-二氯芐基)-3-(甲基氨基)丙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[(1R)-1-(2，4-二氯芐基)-3-(二甲基氨基)丙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[(1S)-1-(2，4-二氯芐基)-3-(甲基氨基)丙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[(1S)-1-(2，4-二氯芐基)-3-(二甲基氨基)丙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[(1R)-3-氨基-1-(2，4-二氯芐基)丙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[(1S)-3-氨基-1-(2，4-二氯芐基)丙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-(2-氨基乙基)-N-(4-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[1-(2-氨基乙基)-4-氯-1H-苯并咪唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[(1S)-2-氨基-1-(2，4-二氯芐基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[(1R)-2-氨基-1-(2，4-二氯芐基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[(1S)-1-(2，4-二氯芐基)-2-(二甲基氨基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[(1S)-1-(2，4-二氯芐基)-2-(二甲基氨基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；N-(4-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)-N-甲基-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-(4，6-二氟-1，3-苯并噻唑-2-基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(4，6-二氟-1，3-苯并噻唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺；N-[1-(3-氨基丙基)-4-氯-1H-苯并咪唑-2-基]-5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；N-[1-(2-氨基乙基)-4-甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[1-(2-氨基乙基)-4-甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基]-5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-喹啉-2-基噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(4-甲氧基-1，3-苯并噻唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺；3-氨基-N-[(1S)-1-(2，4-二氯芐基)-2-(二甲基氨基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[(1S)-1-(2，4-二氯芐基)-2-(二甲基氨基)乙基]-3-甲氧基-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(4-甲氧基-1，3-苯并噻唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺；3-氨基-N-(4-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[1-(羥甲基)-2-甲基丙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-(2-羥基-1-甲基乙基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(二甲基氨基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-(2-氨基乙基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-吡咯烷-3-基噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-哌啶-3-基噻吩-2-羧酰胺；N-[(2S)-2-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)丙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[(1S)-2-氨基-1-(1H-吲哚-3-基甲基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-[4-(甲基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基]噻吩-2-羧酰胺；3-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-6-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮；6-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]噻吩并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮；N-[1-(2-氨基乙基)-4-氯-1H-苯并咪唑-2-基]-5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；N-[1-(3-氨基丙基)-4-氯-1H-苯并咪唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-(4-氯-1-乙基-1H-苯并咪唑-2-基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[4-氯-1-(3，3-二甲基丁基)-1H-苯并咪唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；3-氨基-N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-(4-氯-1-異丁基-1H-苯并咪唑-2-基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[1-(2-氨基乙基)-4-乙氧基-1H-苯并咪唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[1-(2-氨基乙基)-4-乙氧基-1H-苯并咪唑-2-基]-5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；N-[1-(2-氨基乙基)-4-苯基-1H-苯并咪唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[1-(2-氨基乙基)-4-苯基-1H-苯并咪唑-2-基]-5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(4-羥基-1，3-苯并噻唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺；N-(2-氨基-6-氟芐基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[1-(2，4-二氯芐基)-2-(二甲基氨基)乙基]-3-羥基-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[(1S)-2-氨基-1-(1H-吲哚-3-基甲基)乙基]-3-甲氧基-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-(1-芐基吡咯烷-3-基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[(1S)-2-氨基-1-(2，4-二氯芐基)乙基]-3-(芐氧基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[6-(氨基甲基)-4-氯-1，3-苯并噻唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[6-(氨基甲基)-4-氯-1，3-苯并噻唑-2-基]-5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；N-{4-氯-7-[(甲基氨基)甲基]-1，3-苯并噻唑-2-基}-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[4-氯-6-(羥甲基)-1，3-苯并噻唑-2-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[4-氯-7-(羥甲基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[6-(氨基甲基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[6-(氨基甲基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；N-[6-(氨基甲基)-4-甲基-1，3-苯并噻唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[7-(氨基甲基)-4-氯-1，3-苯并噻唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-(4-溴-1，3-苯并噻唑-2-基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[4-氯-6-(嗎啉-4-基甲基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[4-氯-6-(嗎啉-4-基甲基)-1，3-苯并噻唑-2-基]噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-(4-苯基-1，3-噻唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(4-苯基-1，3-噻唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺；N-(5-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)-1-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[4-(3-氯苯基)-1，3-噻唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[4-(4-甲氧基苯基)-1，3-噻唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[4-(3，4-二氟苯基)-1，3-噻唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[5-(3-溴-4-甲氧基苯基)-1，3-噻唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(5-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[4-(3-氯苯基)-1，3-噻唑-2-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[4-(4-甲氧基苯基)-1，3-噻唑-2-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[4-(3，4-二氟苯基)-1，3-噻唑-2-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[5-(3-溴-4-甲氧基苯基)-1，3-噻唑-2-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[4-(2-氯苯基)-1，3-噻唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[4-(2-氯苯基)-1，3-噻唑-2-基]噻吩-2-羧酰胺；N-{4-氯-6-[(二甲基氨基)甲基]-1，3-苯并噻唑-2-基}-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-{4-氯-6-[(二甲基氨基)甲基]-1，3-苯并噻唑-2-基}噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(4-溴-1，3-苯并噻唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(4-氟-1，3-苯并噻唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(4，6-二氯-1，3-苯并噻唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(7-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺；N-[6-(2-氨基乙基)-4-氯-1，3-苯并噻唑-2-基]-5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[4-氯-6-(2-硝基乙基)-1，3-苯并噻唑-2-基]噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-(4-吡啶-2-基-1，3-噻唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(4-吡啶-2-基-1，3-噻唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-(4-吡啶-3-基-1，3-噻唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(4-吡啶-3-基-1，3-噻唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺；N-[6-(2-氨基乙基)-4-氯-1，3-苯并噻唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[4-氯-6-(2-硝基乙基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；4-氯-N-甲基-2-[({5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-基}羰基)氨基]-1，3-苯并噻唑-6-羧酰胺；N-(2-氨基乙基)-4-氯-2-[({5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-基}羰基)氨基]-1，3-苯并噻唑-6-羧酰胺；N-(2-氨基乙基)-2-({[5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-基]羰基}氨基)-4-氯-1，3-苯并噻唑-6-羧酰胺；N-{4-氯-6-[(甲基氨基)甲基]-1，3-苯并噻唑-2-基}-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-{4-氯-6-[(甲基氨基)甲基]-1，3-苯并噻唑-2-基}噻吩-2-羧酰胺；4-氯-2-[({5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-基}羰基)氨基]-1，3-苯并噻唑-5-羧酸甲酯；2-({[5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-基]羰基}氨基)-4-氯-1，3-苯并噻唑-5-羧酸甲酯；N-(4-氯-6-甲基-1，3-苯并噻唑-2-基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(4-氯-6-甲基-1，3-苯并噻唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(4-氯-1，3-苯并唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺；N-[6-({[(2S)-2-氨基丙?；鵠氨基}甲基)-4-氯-1，3-苯并噻唑-2-基]-5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；N-[6-(氨基甲基)-4-溴-1，3-苯并噻唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-{4-甲氧基-6-[(甲基氨基)甲基]-1，3-苯并噻唑-2-基}-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-{4-甲氧基-6-[(甲基氨基)甲基]-1，3-苯并噻唑-2-基}噻吩-2-羧酰胺；N-(4-氯-1，3-苯并唑-2-基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[6-({[(2S)-2-氨基-3-苯基丙?；鵠氨基}甲基)-4-氯-1，3-苯并噻唑-2-基]-5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；N-(6-{[(氨基乙酰基)氨基]甲基}-4-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)-5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；N-{6-[(乙酰氨基)甲基]-4-氯-1，3-苯并噻唑-2-基}-5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；N-[6-(氨基甲基)-4-(三氟甲基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[6-(氨基甲基)-4-(三氟甲基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；N-[6-(氨基甲基)-4-(三氟甲氧基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[6-(氨基甲基)-4-(三氟甲氧基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；N-[4-氯-6-(三氟甲基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[4-氯-6-(三氟甲基)-1，3-苯并噻唑-2-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[4-氯-6-(三氟甲氧基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[4-氯-6-(三氟甲氧基)-1，3-苯并噻唑-2-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[6-(氨基甲基)-4-溴-1，3-苯并噻唑-2-基]-5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；N-(4-溴-6-異丙基-1，3-苯并噻唑-2-基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(4-溴-6-異丙基-1，3-苯并噻唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺；N-[4-(氨基甲基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；N-[4-(氨基甲基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[6-(氨基甲基)-8-氯喹啉-2-基]-5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；N-[(1S)-2-氨基-1-(2，4-二氯芐基)乙基]-3-甲氧基-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-(5-芐基-2，2-二甲基四氫-2H-吡喃-4-基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(4-氟苯基)乙基]-5-[5-甲基-2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(4-氟苯基)乙基]-5-[2-(硝基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-苯胺基嘧啶-4-基)-N-[2-(4-氟苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；4-[5-({[2-(4-氟苯基)乙基]氨基}羰基)噻吩-2-基]嘧啶-2-基氨基甲酸甲酯；5-(2-{[(二甲基氨基)羰基]氨基}嘧啶-4-基)-N-[2-(4-氟苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(4-氟苯基)乙基]-5-(2-{[(甲基氨基)羰基]氨基}嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(乙酰氨基)嘧啶-4-基]-N-[2-(4-氟苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-[2-(4-甲基苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(4-乙基苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(4-甲氧基苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(1，1′-聯(lián)苯-4-基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(4-乙氧基苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-[2-(4-苯氧基苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，5-二甲氧基苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(3，4-二甲氧基苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(二甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-[2-(4-氟苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；N-(4-氟苯基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-[2-(二甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-{2-[(氨基羰基)氨基]嘧啶-4-基}-N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-[2-(丙基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(丁基氨基)嘧啶-4-基]-N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；5-{2-[(環(huán)丙基甲基)氨基]嘧啶-4-基}-N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(芐基氨基)嘧啶-4-基]-N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(環(huán)戊基氨基)嘧啶-4-基]-N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-{2-[(2-嗎啉-4-基乙基)氨基]嘧啶-4-基}噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-{2-[(3-嗎啉-4-基丙基)氨基]嘧啶-4-基}噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-(2-{[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基]氨基}嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-{2-[(2-哌啶-1-基乙基)氨基]嘧啶-4-基}噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-{2-[(2-苯基乙基)氨基]嘧啶-4-基}噻吩-2-羧酰胺；N-1H-苯并咪唑-2-基-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-1，3-苯并噻唑-2-基-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-(6-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-(6-氟-1，3-苯并噻唑-2-基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-1，3-苯并噻唑-6-基-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-喹啉-3-基噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-喹啉-6-基噻吩-2-羧酰胺；N-[5-(5-溴噻吩-2-基)-1，3-噻唑-2-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-(吡啶-2-基甲基)噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-(吡啶-3-基甲基)噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-(吡啶-4-基甲基)噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-(2-吡啶-2-基乙基)噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-(2-吡啶-4-基乙基)噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-(2-哌啶-1-基乙基)噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-(2-嗎啉-4-基乙基)噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-[3-(1H-吡咯-1-基)丙基]噻吩-2-羧酰胺；5-{2-[(氨基羰基)氨基]嘧啶-4-基}-N-[2-(4-氟苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；5-{2-[(2-氨基乙基)氨基]嘧啶-4-基}-N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；5-{2-[(3-氨基丙基)氨基]嘧啶-4-基}-N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；5-{2-[(4-氨基丁基)氨基]嘧啶-4-基}-N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；N～6～-{4-[5-({[2-(2，4-二氯苯基)乙基]氨基}羰基)噻吩-2-基]嘧啶-2-基}-L-賴氨酸；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-[2-(吡啶-4-基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-(2-{[(2S)-2-苯基環(huán)丙基]氨基}嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-{2-[(吡啶-2-基甲基)氨基]嘧啶-4-基}噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-{2-[(吡啶-3-基甲基)氨基]嘧啶-4-基}噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-{2-[(吡啶-4-基甲基)氨基]嘧啶-4-基}噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-{2-[(2-吡啶-2-基乙基)氨基]嘧啶-4-基}噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-{2-[(2-吡啶-3-基乙基)氨基]嘧啶-4-基}噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-{2-[(2-吡啶-4-基乙基)氨基]嘧啶-4-基}噻吩-2-羧酰胺；5-[2-({[1-(4-氯苯基)環(huán)丙基]甲基}氨基)嘧啶-4-基]-N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-(2-{[2-(1-甲基-1H-吡咯-2-基)乙基]氨基}嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-(2-{[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基]氨基}嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-(2-{[3-(1H-咪唑-1-基)丙基]氨基}嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；N-(1，2-二苯基乙基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-(2，2-二苯基乙基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-(2-{[(甲基氨基)羰基]氨基}嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-(2-{[(乙基氨基)羰基]氨基}嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-(2-{[(丙基氨基)羰基]氨基}嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(2-吡啶-3-基乙基)噻吩-2-羧酰胺；5-{2-[(苯胺基羰基)氨基]嘧啶-4-基}-N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-{[(芐基氨基)羰基]氨基}嘧啶-4-基)-N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；N-(4-氨基芐基)-5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[4-(二甲基氨基)芐基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(4-氨基苯基)乙基]-5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-1H-苯并咪唑-2-基噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺；N-[(2R)-2-羥基-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-2，3-二氫-1H-茚-1-基-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-1，2，3，4-四氫萘-1-基噻吩-2-羧酰胺；N-[(4-氯苯基)(苯基)甲基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[4-氟-2-(三氟甲基)芐基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(1H-苯并咪唑-2-基甲基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(1-苯并噻吩-2-基甲基)噻吩-2-羧酰胺；N-(5-氯-1H-苯并咪唑-2-基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(4-氯-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺；N-(4-氯-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(4-氯-1-乙基-1H-苯并咪唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[4-氯-1-(3，3-二甲基丁基)-1H-苯并咪唑-2-基]噻吩-2-羧酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(4-氯-1-異丁基-1H-苯并咪唑-2-基)噻吩-2-羧酰胺；N-(4-羥基-1，3-苯并噻唑-2-基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-N-(2-哌啶-1-基芐基)噻吩-2-羧酰胺；N-(4-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)-3-甲氧基-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-(4-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)-3-羥基-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；3-(2-氨基乙氧基)-N-(4-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；3-(4-氟苯基)-N-{5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-基}丙酰胺；3-(2，4-二氯苯基)-N-{5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-基}丙酰胺；N-[5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-基]-3-(2，4-二氯苯基)丙酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-基氨基甲酸芐酯；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-基氨基甲酸4-氟芐基酯；(2R)-2-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)丙基5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-基氨基甲酸酯；(2S)-2-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)丙基5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-基氨基甲酸酯；N-(4-氟芐基)-N′-{5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-基}脲；N-(2，4-二氯芐基)-N′-{5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-基}脲；4-[5-({[2-(4-氟苯基)乙基]氨基}甲基)噻吩-2-基]-N-甲基嘧啶-2-胺；4-[5-({[2-(4-氯苯基)乙基]氨基}甲基)噻吩-2-基]-N-甲基嘧啶-2-胺；4-[5-({[2-(2，4-二氯苯基)乙基]氨基}甲基)噻吩-2-基]-N-甲基嘧啶-2-胺；4-[5-({[2-(4-氯苯基)乙基]氨基}甲基)噻吩-2-基]嘧啶-2-胺；4-氯-N-({5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-基}甲基)-1，3-苯并噻唑-2-胺；N-{[5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-基]甲基}-4-氯-1，3-苯并噻唑-2-胺；N-[2-(4-氟苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-磺酰胺；N-[2-(4-氯苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-磺酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-磺酰胺；N-(4-氟芐基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-磺酰胺；N-(2，4-二氯芐基)-5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-磺酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[2-(4-氟苯基)乙基]噻吩-2-磺酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]噻吩-2-磺酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(4-氟芐基)噻吩-2-磺酰胺；5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(2，4-二氯芐基)噻吩-2-磺酰胺；5-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]噻吩-2-羧酸2-氨基-1，3-苯并噻唑-4-基酯；5-(2-氨基嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酸2-氨基-1，3-苯并噻唑-4-基酯；4-{5-[(E)-2-(4-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)乙烯基]噻吩-2-基}嘧啶-2-胺；4-{5-[(4-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)乙炔基]噻吩-2-基}嘧啶-2-胺；N-[2-(4-氟苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)吡啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-[2-(甲基氨基)吡啶-4-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(4-氟苯基)乙基]-5-(2-{[2-(甲基氨基)乙基]氨基}吡啶-4-基)噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(乙酰氨基)吡啶-4-基]-N-[(1S)-2-氨基-1-(2，4-二氯芐基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(4-氟苯基)乙基]-5-吡啶-4-基噻吩-2-羧酰胺；4-[5-({[2-(4-氟苯基)乙基]氨基}羰基)噻吩-2-基]吡啶-2-羧酰胺；N-[2-(4-氟苯基)乙基]-5-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]噻吩-2-羧酰胺；N-[(1S)-2-氨基-1-(2，4-二氯芐基)乙基]-5-吡啶-4-基噻吩-2-羧酰胺；N-[2-(4-氟苯基)乙基]-5-(1H-吡唑-3-基)噻吩-2-羧酰胺；N-[(1S)-2-氨基-1-(2，4-二氯芐基)乙基]-5-(1H-比唑-4-基)噻吩-2-羧酰胺；N-[(1S)-2-氨基-1-(2，4-二氯芐基)乙基]-5-(2-氨基-1H-咪唑-4-基)噻吩-2-羧酰胺；5-[2-(乙酰氨基)-1H-咪唑-4-基]-N-[(1S)-2-氨基-1-(2，4-二氯芐基)乙基]噻吩-2-羧酰胺；和N-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-5-嘧啶-4-基噻吩-2-羧酰胺。
22.一種含有權(quán)利要求1所述化合物或其混合物和藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑的藥物組合物。
23.一種治療患有至少部分由CDC7、PKA和/或Akt介導(dǎo)的病癥的哺乳動(dòng)物患者的方法，所述方法包括給予患有至少部分由CDC7、PKA和/或Akt介導(dǎo)的病癥的患者藥學(xué)有效量的權(quán)利要求22所述組合物。
24.如權(quán)利要求23所述的方法，其特征在于，所述方法還包括給予另一種抗癌劑。
25.一種在患有至少部分由PKA介導(dǎo)的病癥的患者中抑制PKA的方法，所述方法包括給予所述患者藥學(xué)有效量的權(quán)利要求22所述組合物。
26.如權(quán)利要求25所述的方法，其特征在于，所述病癥是癌癥。
27.一種在患有至少部分由Akt介導(dǎo)的病癥的患者中抑制Akt的方法，所述方法包括給予所述患者藥學(xué)有效量的權(quán)利要求22所述組合物。
28.如權(quán)利要求23所述的方法，其特征在于，所述病癥是癌癥。
29.一種在患有至少部分由CDC7介導(dǎo)的病癥的患者中抑制CDC7的方法，所述方法包括給予所述患者藥學(xué)有效量的權(quán)利要求22所述組合物。
30.如權(quán)利要求29所述的方法，其特征在于，所述病癥是癌癥。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的取代的五元化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或前藥，新化合物與藥學(xué)上可接受的載體的組合物，和新化合物的應(yīng)用。本發(fā)明化合物具有以下通式。
文檔編號(hào)A61K31/506GK1989131SQ200580010575
公開日2007年6月27日 申請(qǐng)日期2005年3月30日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月30日
發(fā)明者林曉東, A·里科, Y·周, A·B·杰弗森, A·瓦特, 王小京 申請(qǐng)人:希龍公司