專利名稱：一種中藥組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物及該組合物的制備方法，特別涉及一種用于治療視網(wǎng)膜靜脈阻塞的中藥組合物及其制備方法背景技術(shù)視網(wǎng)膜靜脈阻塞是一種較為常見(jiàn)的眼底疾病，視網(wǎng)膜靜脈阻塞的特征是視網(wǎng)膜血液瘀滯、視網(wǎng)膜出血和水腫?？煞譃橐暰W(wǎng)膜中央靜脈阻塞及視網(wǎng)膜靜脈分支阻塞。Hayreh把它分成？靜脈郁滯性視網(wǎng)膜病變(中青年視力下降較少，視網(wǎng)膜靜脈循環(huán)郁滯、預(yù)后較好)。？出血性視網(wǎng)膜病變(中年以上視力高度減退，靜脈郁滯前后有中央動(dòng)脈供血不足，預(yù)后差)。
一些原因使眼底靜脈栓塞而導(dǎo)致眼底出血，病程緩慢冗長(zhǎng)，造成視力下降。少數(shù)病人可并發(fā)嚴(yán)重的合并癥，導(dǎo)致視力明顯下降，甚至失明。該病原因比較復(fù)雜，常由多種因素造成。
引起該病的原因有血管外的壓迫，靜脈血流的淤滯以及靜脈血管內(nèi)壁的損害等，血管外的壓迫多由于視神經(jīng)內(nèi)或視網(wǎng)膜動(dòng)、靜脈交叉處的視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈或分支小動(dòng)脈硬化，壓迫其鄰近的靜脈所致，因此多見(jiàn)于高血壓或動(dòng)脈硬化等老年病人；靜脈血流的淤滯則見(jiàn)于視網(wǎng)膜動(dòng)脈灌注壓不足或眼壓增高及血液粘滯度增高的病人，因而常發(fā)生于頸動(dòng)脈供血不足、大量失血、低血壓、青光眼，紅細(xì)胞增多癥等；血管內(nèi)壁的損害常由于視網(wǎng)膜血管炎所致，因此多見(jiàn)于年輕病人及糖尿病患者。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種具有益氣養(yǎng)元，扶正祛邪，活血祛瘀，通脈活絡(luò)作用、用于治療視網(wǎng)膜靜脈阻塞的中藥組合物；本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供上述中藥組合物的制備方法。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，根據(jù)中醫(yī)藥學(xué)理論，利用草藥獨(dú)特的藥性，采用黃芪、三七、燈盞細(xì)辛按照一定的配伍要求，經(jīng)過(guò)特定工藝加工而成。
制備本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成及配比如下(按重量份)黃芪80～120重量份三七20～30重量份燈盞細(xì)辛26～38重量份。
本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成優(yōu)選配比為(按重量份)
黃芪90～110重量份三七23～28重量份燈盞細(xì)辛30～35重量份。
本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成最佳配比為(按重量份)黃芪100重量份三七25重量份燈盞細(xì)辛32重量份。
本發(fā)明藥物可以將黃芪、三七和燈盞細(xì)辛混合，一起用乙醇或水提取，得提取物，加入賦形劑，制成不同的藥物劑型，也可以分別提取三種原料藥，得到三種提取物，然后，合并上述三個(gè)提取物，加入適量輔料，制成臨床上可以接受的劑型，如丸劑、散劑、膠劑、糖漿劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、貼膏劑、合劑、滴丸劑、栓劑、氣霧劑、軟膏劑、注射劑。
如果先分別提取三種原料藥得到提取物，然后再制成制劑，其制備步驟如下先分別制備上述的黃芪提取物、三七提取物和燈盞細(xì)辛提取物取黃芪藥材粗粉，加50～90％乙醇，優(yōu)選加70％乙醇，提取1～3次，優(yōu)選提取3次，濾過(guò)，提取液濃縮后通入裝有非極性或弱極性樹(shù)脂的色譜柱中，優(yōu)選AB-8樹(shù)脂，依次用水、15～25％乙醇、40～80％乙醇、85～95％乙醇洗脫，優(yōu)選依次用水、40％乙醇、70％乙醇、95％乙醇洗脫。收集40～80％乙醇洗脫部分，優(yōu)選收集70％乙醇洗脫部分，并經(jīng)過(guò)真空干燥，得黃芪總皂苷提取物；取三七粗粉，加50～90％乙醇，優(yōu)選加70％乙醇，提取1～3次，優(yōu)選提取3次，濾過(guò)，濾液濃縮后通過(guò)非極性或弱極性樹(shù)脂柱，優(yōu)選AB-8樹(shù)脂，先以蒸餾水洗至流出液不顯molish反應(yīng)，再用35～85％乙醇溶液洗脫，優(yōu)選用70％乙醇溶液洗脫，收集35～85％乙醇洗脫部分，優(yōu)選收集70％乙醇洗脫部分，濃縮并干燥，得三七提取物；取燈盞細(xì)辛藥材，加60～90％乙醇，優(yōu)選加75％乙醇，提取1～4次，優(yōu)選提取3次，提取液濃縮后，調(diào)節(jié)pH值至中性至弱堿性，優(yōu)選pH值約7～8，濾過(guò)，濾液加入稀酸溶液適量，調(diào)節(jié)pH值至酸性，優(yōu)選pH值1～2，靜置，析出黃色沉淀物。分取黃色沉淀物，干燥，得到燈盞細(xì)辛提取物。
合并上述三個(gè)提取物，加入適量輔料，制成臨床上可以接受的劑型。其中本發(fā)明藥物組合物注射劑的制備方法優(yōu)選如下取適量穩(wěn)定劑溶于注射用水中，加入燈盞細(xì)辛提取物，調(diào)pH值至7.0～7.5，加入三七提取物，得溶液A；
另取黃芪提取物，加乙醇∶丙二醇＝7～3∶3～7的溶液，優(yōu)選1∶1的溶液，攪拌使溶解，得溶液B將溶液A加入到溶液B中，混合，加注射用水，滅菌，得到注射液。
本發(fā)明的藥物產(chǎn)品可以以原料的組成表述，也可以以提取物的用量配比描述。
如果以上述三種提取物為原料制備本發(fā)明藥物組合物，用三種提取物的配比表述本發(fā)明藥物如下黃芪提取物6～10重量份、三七提取物80～120重量份、燈盞細(xì)辛提取物8～12重量份。
三種提取物的優(yōu)選配比為黃芪提取物7～9重量份、三七提取物90～110重量份、燈盞細(xì)辛提取物9～11重量份。
三種提取物的優(yōu)選配比為黃芪提取物8重量份、三七提取物100重量份、燈盞細(xì)辛提取物10重量份。
本發(fā)明藥物的優(yōu)選劑型是注射劑，以三種提取物為原料制備本發(fā)明藥物注射液的方法為取適量穩(wěn)定劑，優(yōu)選取乙二胺四醋酸鈣鈉0.5g，溶于注射用水中，加入燈盞細(xì)辛提取物，調(diào)pH值至中性至弱酸性，優(yōu)選pH值7.0～7.5，加入三七提取物，得溶液(A)。
另取黃芪提取物，加乙醇∶丙二醇＝7～3∶3～7的溶液，優(yōu)選乙醇∶丙二醇＝1∶1的溶液，攪拌使溶解，得溶液(B)。
將溶液(A)加入到溶液(B)中，混合，加注射用水滅菌，即得到本發(fā)明藥物組合物注射液。
本發(fā)明藥物用于治療視網(wǎng)膜靜脈阻塞，具益氣養(yǎng)元，扶正祛邪，活血祛瘀，通脈活絡(luò)等功效。
本發(fā)明藥物的發(fā)明人在原料藥的選擇及其配伍方面，進(jìn)行了一系列實(shí)驗(yàn)研究，通過(guò)拆方試驗(yàn)研究，確定了制備本發(fā)明藥物的原料藥組成，使其與現(xiàn)有技術(shù)相比具有明顯的突出療效優(yōu)勢(shì)，實(shí)現(xiàn)了重要配伍組合的增效目的。
下述實(shí)驗(yàn)例通過(guò)觀察本發(fā)明注射液制劑治療視網(wǎng)膜靜脈阻塞的療效，進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明藥物的醫(yī)療用途。
為了了解其組方伍用增效作用，本研究采用4種活血化瘀動(dòng)物試驗(yàn)?zāi)Ｐ停^察本發(fā)明注射液三種組分伍用對(duì)動(dòng)物藥理作用的影響。
實(shí)驗(yàn)例一 本發(fā)明注射液不同組份對(duì)家兔實(shí)驗(yàn)性視網(wǎng)膜出血、靜脈阻塞的治療作用1、受試樣品三七提取物、燈盞細(xì)辛提取物、黃芪提取物。1g提取物相當(dāng)于生藥67g。
藥物配制①三七提取物單藥組6mg/kg。稱取三七提取物600mg加蒸餾水至100ml，濃度為0.6％，靜脈注射體積0.1ml/100g體重。
②燈盞細(xì)辛提取物單藥組3mg/kg。稱取三七提取物300mg加蒸餾水至100ml，濃度為0.3％，靜脈注射體積0.1ml/100g體重。
③黃芪提取物單藥組3mg/kg，稱取黃芪提取物300mg加蒸餾水至100ml，濃度為0.3％，靜脈注射體積0.1ml/100g體重。
④三七、燈盞細(xì)辛伍用組稱取三七600mg、燈盞細(xì)辛提取物300mg加蒸餾水至100ml，靜脈注射體積0.1ml/100g體重。
⑤三七、黃芪伍用組稱取三七提取物600mg、黃芪提取物300mg加蒸餾水至100ml，靜脈注射體積0.1ml/100g體重。
⑥燈盞細(xì)辛、黃芪伍用組稱取燈盞細(xì)辛、黃芪提取物各300mg加蒸餾水至100ml，靜脈注射體積0.1ml/100g體重。
⑦三七、燈盞細(xì)辛、黃芪伍用組稱取三七600mg、燈盞細(xì)辛、黃芪提取物各300mg加蒸餾水至100ml，靜脈注射體積0.1ml/100g體重。
2、陽(yáng)性對(duì)照藥血塞通注射液(簡(jiǎn)稱血塞通)，批號(hào)020101，規(guī)格250mg/5ml，昆明興中制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)，靜脈注射。藥物配制取60ml(50mg/ml)血塞通注射液加注射用水至100.0ml，配成3％，冷藏待用。
3、檢測(cè)儀器及試劑血管造影劑熒光素鈉，配成20％溶液，100ml。
3％戊巴比妥鈉取戊巴比妥鈉3g加水至100ml，室溫保存。
1％阿托品取阿托品1g加水至100ml，室溫保存。
天平，Adventurer，AR1140，SNR1203140383。
Aγ+眼科激光治療機(jī)，型號(hào)ARGON/YAGE，西德制造。
造模用激光能量5.0WJ X0.2秒X 300μX100。
彩色熒光眼底成像系統(tǒng)機(jī)，型號(hào)TRC-50EX，日本制造。
眼底檢查鏡COWa眼底照相機(jī)，日本產(chǎn)品。
4、動(dòng)物家兔72只。
5、試驗(yàn)方法與結(jié)果取家兔72只，隨機(jī)分為9組，每組8只。
①陰性對(duì)照組，靜脈注射注射用水0.1ml/100g體重；②血塞通注射液30mg/kg，取3.0％血塞通注射液100ml，靜脈注射0.1ml/100g體重。
③三七提取物單藥組6mg/kg。取藥物濃度為0.6％溶液，靜脈注射體積0.1ml/100g體重。
④燈盞細(xì)辛提取物單藥組3mg/kg。取燈盞細(xì)辛提取物濃度為0.3％的溶液，靜脈注射體積0.1ml/100g體重。
⑤黃芪提取物單藥組3mg/kg，取黃芪提取物濃度為0.3％溶液，靜脈注射體積0.1ml/100g體重。
⑥三七、燈盞細(xì)辛伍用組取三七、燈盞細(xì)辛提取物混合藥液，靜脈注射體積0.1ml/100g體重。
⑦三七、黃芪伍用組取三七提取物、黃芪提取物混合溶液，靜脈注射體積0.1ml/100g體重。
⑧燈盞細(xì)辛、黃芪伍用組取燈盞細(xì)辛、黃芪提取物混合溶液，靜脈注射體積0.1ml/100g體重。
⑨三七、燈盞細(xì)辛、黃芪伍用組取三七、燈盞細(xì)辛、黃芪提取物混合溶液，靜脈注射體積0.1ml/100g體重。以上各組動(dòng)物每天給藥一次，連續(xù)2周，停藥后繼續(xù)觀察4周。
模型制備造模前每只兔的左眼交替點(diǎn)1％阿托品和托吡卡胺充分散瞳。3％戊巴比妥鈉耳緣靜脈注射(1ml/kg)，用氬離子激光光凝左眼視網(wǎng)膜動(dòng)脈各分支，造成缺血型視網(wǎng)膜中靜脈阻塞，光凝長(zhǎng)度為1PD，光斑大小為50μm，曝光時(shí)間為0.2秒，能量為120-170mW，直至血管內(nèi)血流中斷成白色。
觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)方法折方試驗(yàn)觀察項(xiàng)目主要有治療前和治療后6周內(nèi)隔天眼底檢查(治療前、治療后1、3、5………41天)，并記錄治療后眼底出血完全吸收時(shí)間，判斷標(biāo)準(zhǔn)及等級(jí)見(jiàn)表1，等級(jí)為0級(jí)時(shí)為出血被完全吸收。統(tǒng)計(jì)照射后出血被完全吸收的時(shí)間；用T-test統(tǒng)計(jì)軟件，給藥組與對(duì)照組出血被完全吸收時(shí)間進(jìn)行比較，評(píng)價(jià)藥物的治療效果，激光光束致視網(wǎng)膜損傷癥狀及分級(jí)見(jiàn)表1。
表1、激光光束致視網(wǎng)膜損傷癥狀及分級(jí)

兔眼底出血完全吸收時(shí)間及動(dòng)物數(shù)見(jiàn)表2。
表2、對(duì)兔眼底出血完全吸收時(shí)間的影響(X±S，n＝8)

與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；與三七、燈盞細(xì)辛組比較，#P＜0.05。
試驗(yàn)結(jié)果顯示三七提取物對(duì)動(dòng)物激光致視網(wǎng)膜出血吸收有一定的促進(jìn)作用，三七提取物與燈盞細(xì)辛提取物伍用對(duì)家兔視網(wǎng)膜促進(jìn)出血吸收作用有進(jìn)一步增強(qiáng)(P＜0.05)。當(dāng)三七提取物、燈盞細(xì)辛提取物、黃芪提取物三者合用時(shí)，其治療效果明顯增強(qiáng)，統(tǒng)計(jì)差別顯著(P＜0.05-P＜0.01)，完全吸收時(shí)間比對(duì)照組提前7天，統(tǒng)計(jì)差別顯著(P＜0.01)。
實(shí)驗(yàn)例二 本發(fā)明注射液不同組份伍用對(duì)大鼠旁路血栓形成的影響1、受試樣品同實(shí)驗(yàn)例一。
藥物配制方法同實(shí)驗(yàn)例一。
2、陽(yáng)性對(duì)照藥同實(shí)驗(yàn)例一。
3、儀器及試劑天平，Adventurer，AR1140，SNR1203140383。
聚乙稀管(內(nèi)經(jīng)1mm，2mm)，動(dòng)脈夾，絲線(4#、7#)，手術(shù)器械等。
12500μ/ml肝素注射液上海生物化學(xué)制藥廠，批號(hào)990407。
4、動(dòng)物Wister大鼠，90只，體重300～340g，雌雄各半。
5、試驗(yàn)方法與結(jié)果取大白鼠90只，隨機(jī)分為9組，每組10只，雌雄各半。
①陰性對(duì)照組，靜脈注射注射用水0.1ml/100g體重；②血塞通注射液30mg/kg，取3.0％血塞通注射液100ml，靜脈注射0.1ml/100g體重。
③三七提取物單藥組6mg/kg。取藥物濃度為0.6％溶液，靜脈注射體積0.1ml/100g體重。
④燈盞細(xì)辛提取物單藥組3mg/kg。取三七提取物濃度為0.3％的溶液，靜脈注射體積0.1ml/100g體重。
⑤黃芪提取物單藥組3mg/kg，取黃芪提取物濃度為0.3％溶液，靜脈注射體積0.1ml/100g體重。
⑥三七、燈盞細(xì)辛伍用組取三七、燈盞細(xì)辛提取物混合藥液，靜脈注射體積0.1ml/100g體重。
⑦三七、黃芪伍用組取三七提取物、黃芪提取物混合溶液，靜脈注射體積0.1ml/100g體重。
⑧燈盞細(xì)辛、黃芪伍用組取燈盞細(xì)辛、黃芪提取物混合溶液，靜脈注射體積0.1ml/100g體重。
⑨三七、燈盞細(xì)辛、黃芪伍用組取三七、燈盞細(xì)辛、黃芪提取物混合溶液，靜脈注射體積0.1ml/100g體重。以上各組動(dòng)物每天給藥一次，連續(xù)7天，于末次給藥后30分鐘，腹腔注射3％的戊巴比妥鈉0.035g/kg，氣管內(nèi)插聚乙烯管以便清除氣管內(nèi)分泌物，并分離右頸總動(dòng)脈及左頸外靜脈。在三段聚乙烯管的中段放入一段長(zhǎng)5cm的4號(hào)手術(shù)絲線。將肝素生理鹽水溶液(50μ/ml)充滿聚乙烯管。將管一端插入左頸外靜脈，另一端插入右頸總動(dòng)脈，手術(shù)完成5分鐘后開(kāi)放血流，則血流從右頸總動(dòng)脈流經(jīng)聚乙烯管，返回左頸外靜脈。開(kāi)放血流15分鐘后中斷血流，迅速取出絲線稱重，總重量減去絲線重(6mg)即血栓濕重，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理(t檢驗(yàn))。
結(jié)果見(jiàn)表3。
表3、三組方伍用靜脈注射對(duì)大鼠血栓形成的影響(X±S，n＝6)

與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與三七、燈盞細(xì)辛組比較，#P＜0.05。
結(jié)果顯示三七單藥6mg/kg組可減少動(dòng)-靜脈環(huán)路血栓的濕重，抑制率6.6％，三七分別與燈盞細(xì)辛和黃芪伍用，其抑制率提高至9.8-9.4％。三七與燈盞細(xì)辛伍和黃芪三者伍用，其抑制率提高至18.4％(P＜0.01)。提示三七提取物、燈盞細(xì)辛提取物、黃芪提取物三者合用明顯增強(qiáng)抑制血栓形成的作用，療效優(yōu)于兩味藥物的組合。
實(shí)驗(yàn)例三 本發(fā)明注射液不同組份伍用對(duì)家兔頸動(dòng)脈血栓溶栓作用的影響1、受試樣品同實(shí)驗(yàn)例一。
藥物配制同實(shí)驗(yàn)例一。
2、陽(yáng)性對(duì)照藥同實(shí)驗(yàn)例一。
3、測(cè)定試劑纖維蛋白原(FIBROTEK，F(xiàn)IB)測(cè)定試劑盒，批號(hào)527523，日本德靈公司產(chǎn)品。
凝血酶原時(shí)間(Prothrombin Time，PT)測(cè)定試劑盒，批號(hào)527062，日本德靈公司產(chǎn)品。
凝血酶時(shí)間(Thrombin Time，TT)測(cè)定試劑盒，批號(hào)611005，日本德靈公司產(chǎn)品。
白陶土激活的部分凝血活酶時(shí)間(Kaolin-Activated PartialThromboplastin Time，APTT)測(cè)定試劑盒，批號(hào)527142，日本德靈公司產(chǎn)。
戊巴比妥鈉進(jìn)口分裝，配成3％溶液備用。
肝素上海第一生化藥業(yè)公司、上海生物化學(xué)制藥廠產(chǎn)品。配制成0.5％溶液備用。
氯化鈉注射液北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品，批號(hào)020318812。
Powerlab/8SP數(shù)據(jù)記錄分析儀，澳大利亞ADInstrument Pty.Ltd.產(chǎn)品。
4、動(dòng)物家兔72只，體重2.25±0.23kg，雌雄兼用。
5、儀器Powerlab/8SP數(shù)據(jù)記錄分析儀，澳大利亞ADInstrument Pty.Ltd.產(chǎn)品。
MFV-2100電磁血流量計(jì)，日本光電公司產(chǎn)品。
SEN-7103電子刺激器，日本光電公司產(chǎn)品。
CA-6000全自動(dòng)血凝儀，日本Sysmex公司產(chǎn)品6、試驗(yàn)方法與結(jié)果(1)試驗(yàn)方法手術(shù)過(guò)程，試驗(yàn)前動(dòng)物禁食12小時(shí)，自由飲水。3％戊巴比妥鈉(30mgkg-1)麻醉動(dòng)物。動(dòng)物仰臥位固定在手術(shù)臺(tái)上，頸部正中切口，分離出一側(cè)頸動(dòng)脈，長(zhǎng)度3cm左右，將直徑2.5～3.5mm的電磁流量計(jì)探頭安放在合適位置，電磁流量計(jì)探頭連接于MFV-2100電磁流量計(jì)上，記錄頸動(dòng)脈的血流量；耳緣靜脈建立靜脈通道，供給藥、補(bǔ)液和取血用。
血栓模型制備在血流探頭近心端取長(zhǎng)度約1cm的血管，在此段血管內(nèi)用特制的血管鉗夾閉動(dòng)脈，使血管內(nèi)膜粗糙，每次夾閉20sec，間隔5min，重復(fù)6次。將頸動(dòng)脈的近心端和遠(yuǎn)心端用動(dòng)脈夾阻斷血流，向該段血管內(nèi)注入10U凝血酶，20min后去掉動(dòng)脈夾，電磁流量計(jì)讀數(shù)為零，表明頸動(dòng)脈已形成穩(wěn)定的血栓，穩(wěn)定10min后即可進(jìn)行各項(xiàng)參數(shù)的觀察和測(cè)定。
手術(shù)完畢及模型成功后，將所有信號(hào)輸入powerlab/8SP記錄儀并經(jīng)生物信號(hào)采集和處理系統(tǒng)進(jìn)行連續(xù)信號(hào)采集，試驗(yàn)參數(shù)由計(jì)算機(jī)全程進(jìn)行監(jiān)控和顯示并儲(chǔ)存于計(jì)算機(jī)上，試驗(yàn)結(jié)束后，作脫機(jī)處理進(jìn)行數(shù)據(jù)分析、打印原始記錄。
動(dòng)物分組家兔72只，雌雄兼用，按體重隨機(jī)分為9組，每組8只。陰性對(duì)照組，靜脈注射注射用水0.1ml/100g；血塞通注射液30mg/kg，取3.0％血塞通注射液100ml，靜脈注射0.1ml/100g。其它給藥組按以上給藥劑量靜脈注射給藥，靜脈注射體積0.1ml/100g體重。
給藥時(shí)間為在頸動(dòng)脈血栓形成并老化30min后，以上藥物1分鐘內(nèi)靜脈注射完，觀察時(shí)間為120min。
檢測(cè)指標(biāo)頸動(dòng)脈血流量將電磁流量計(jì)的輸出端連接至Powerlab/8SP記錄儀輸入端，顯示和儲(chǔ)存數(shù)據(jù)，同時(shí)，電磁流量計(jì)上顯示出每分鐘血流量，讀取并記錄栓塞前、栓塞后、給藥前、給藥后15、30、45、60、90和120min時(shí)的血流量值。
心電圖將針狀電極插入四肢，經(jīng)ML-132心電放大器測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)心電圖。記錄栓塞前、栓塞后、給藥前、給藥后15、30、45、60、90和120min時(shí)的心率變化。
栓塞動(dòng)脈再通的判定連續(xù)記錄頸動(dòng)脈血流量，以給藥后血流量回升達(dá)到基礎(chǔ)值的50％以上，為頸動(dòng)脈血管再通，再灌注后血流量再次降至零為再栓塞。統(tǒng)計(jì)給藥后120min血管再通動(dòng)物數(shù)，并計(jì)算血管再通率(％)。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用配對(duì)t檢驗(yàn)比較給藥前后均數(shù)差異顯著性，非配對(duì)t檢驗(yàn)比較組間平均數(shù)差異顯著性。
(2)、結(jié)果①對(duì)頸動(dòng)脈血栓的溶栓效果家兔靜脈注射三種提取物單藥、伍用給藥溶栓效果見(jiàn)表4。
表4、對(duì)栓塞頸動(dòng)脈再通動(dòng)物數(shù)及再通率的影響(X±S，n＝8)

試驗(yàn)結(jié)果顯示，血栓形成后，血管外觀呈暗紅色，血栓形成段血流呈終止?fàn)顟B(tài)。生理鹽水對(duì)照組在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中未見(jiàn)栓塞血管再通。三七提取物組血管再率為37.5％，與燈盞細(xì)辛伍用血管再通率分別為50％。當(dāng)三者合用時(shí)，血管再通率提高至87.5％，提示三者合用作用明顯增強(qiáng)，優(yōu)于兩藥合用。
②本發(fā)明注射液對(duì)家兔頸動(dòng)脈栓塞后血流量的影響試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5。
表5.對(duì)家兔血流量的影響(X±S，n＝6)

血流量為ml/min。與三七組比較*P＞0.05，與三七+燈盞辛組比較#P＞0.05，與三七+黃芪組比較，▲P＞0.05，▲▲P＞0.05。
于生理鹽水對(duì)照組的栓塞血管未再通，給藥后，頸動(dòng)脈血流量基本維持在栓塞后的水平，直至試驗(yàn)結(jié)束。三七、黃芪、燈盞細(xì)辛三位單藥組和三七與黃芪伍用或三七與燈盞細(xì)辛伍用組，三七+黃芪+燈盞細(xì)辛血流量明顯高于三七單藥組和三七與黃芪和三七與燈盞細(xì)辛伍用組，提示三組提取物伍用效果增強(qiáng)。
③對(duì)家兔心率影響結(jié)果見(jiàn)表6。
表6、對(duì)家兔心率的影響(X±S，n＝6)

家兔心率(次/min)。
各組動(dòng)物血栓形成后，心電圖無(wú)明顯變化，所有試驗(yàn)家兔的心率變化不大，與給藥前比較，本發(fā)明注射液各劑量組和陽(yáng)性藥血塞通對(duì)照組對(duì)心率無(wú)明顯變化，與生理鹽水對(duì)照組比較差別也不顯著(P＞0.05)，提示本發(fā)明注射液各組份在具有溶血栓劑量時(shí)對(duì)心功能無(wú)影響。
采用三氯化鐵致家兔頸動(dòng)脈血栓形成模型，溶栓結(jié)果顯示三七、燈盞細(xì)辛、黃芪單一提取物溶血栓效果不明顯。三者合用時(shí)，血管再通率明顯提高，由單藥再通率25-37.5％提高至87.5％。
實(shí)驗(yàn)例四 本發(fā)明注射液不同組份伍用對(duì)大鼠全血比粘度的影響1、受試樣品同實(shí)驗(yàn)例一。
藥物配制同實(shí)驗(yàn)例一。
2、陽(yáng)性對(duì)照藥同實(shí)驗(yàn)例一。
3、儀器及試劑普利生公司生產(chǎn)LBY-N6B錐-板粘度計(jì)。12500μ/ml肝素注射液上海生物化學(xué)制藥廠，批號(hào)990407。
4、動(dòng)物大鼠80只，雌雄各半，體重250-280g。
5、試驗(yàn)方法與結(jié)果大鼠90只，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為9組，每組10只。陰性對(duì)照組，靜脈注射注射用水體積0.1ml/100g體重。血塞通注射液，3％，30mg/kg，靜脈注射體積0.1ml/100g體重。給藥組動(dòng)物按以上給藥劑量靜脈注射給藥。以上各組給藥途徑均為靜脈注射，每日一次，連續(xù)7天。第7天給藥1小時(shí)后，用5％異戊巴比妥鈉麻醉動(dòng)物，腹主動(dòng)脈取血，分離血漿。采用普利生公司生產(chǎn)LBY-N6B錐-板粘度計(jì)，測(cè)定大鼠外周血血漿比粘度。降低率計(jì)算如下公式

結(jié)果見(jiàn)表7表7、對(duì)血漿比粘度的影響(X±S，n＝10)

與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與三七、燈盞細(xì)辛組比較，#＜0.05；結(jié)果顯示在本試驗(yàn)條件下，燈盞細(xì)辛、黃芪單組份及兩組份伍用均未能顯示降低血漿粘度作用。三七提取物對(duì)大鼠血漿比粘度比對(duì)照組下降12.0％(P＞0.05)。三七與燈盞細(xì)辛伍用降低血漿粘度作用增至18.7％，三七、燈盞細(xì)辛、黃芪三種組份合用，其降底全血漿比粘度作用更為明顯，其降低率提高至30.7％(P＞0.01)。
實(shí)驗(yàn)例五 本發(fā)明注射液三種組份不同配比對(duì)離體凝血時(shí)間的影響試驗(yàn)材料1、受試樣品同實(shí)驗(yàn)例一。
藥物配制分別取三七提取物5、3、1mg；燈盞細(xì)辛提取物5、3、1mg；黃芪提取物1.6、0.8、0.4mg，按L9(33)正交表進(jìn)行正交試驗(yàn)方法(見(jiàn)表8)分別溶解于10ml生理鹽水，并用0.1Mol/L的碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)pH～7.2，各取0.5ml置于5ml玻璃管中，因素試管號(hào)為1-9?，F(xiàn)配現(xiàn)用。
表8、本發(fā)明注射液抗凝血作用的因素和水平

2、血液樣品Beagle狗后肢靜脈取血18ml。動(dòng)物由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SCXK-(軍)2002-001號(hào)，動(dòng)物設(shè)施條件認(rèn)可證號(hào)SYXK-(軍)2002-001號(hào)。
3、測(cè)量?jī)x器天平，Adventurer，AR1140，SNR1203140383。
4、實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果Beagle狗后肢靜脈取血18ml，0.5ml沿試管壁注入9個(gè)試管藥液中，輕輕混勻，然后將試管放入37℃水浴中，每隔30秒鐘將試管傾斜一次，直至試管倒置時(shí)血液不流動(dòng)為止，計(jì)算凝血時(shí)間。試驗(yàn)開(kāi)始第60分鐘，取出試管內(nèi)上清液，并稱血塊重量。試驗(yàn)重復(fù)1次。
藥效評(píng)定指標(biāo)1、形成血塊時(shí)間(肉眼觀察法)及血塊的重量(稱量法)。各試驗(yàn)管形成血塊時(shí)間及血塊重量進(jìn)行比較，凝血時(shí)間的延長(zhǎng)，血塊重量變輕，均示為受試物抗凝效果。
通過(guò)試驗(yàn)找出3因素(三七、燈盞細(xì)辛、黃芪)的3個(gè)水平(高、中、低劑量)較佳組合，結(jié)果見(jiàn)表9-10。
表9、本發(fā)明提取物抗凝血塊重量正交設(shè)計(jì)及結(jié)果

表10、本發(fā)明提取物抗凝血時(shí)間正交設(shè)計(jì)及結(jié)果

結(jié)果表明，本發(fā)明提取物對(duì)纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白所需時(shí)間有明顯影響，提示該藥抗凝血作用可能與凝血的因子激活有關(guān)。另外，三七的差值絕對(duì)值最大，說(shuō)明三七對(duì)實(shí)驗(yàn)影響最大，且大劑量的抗凝血時(shí)間最長(zhǎng)，血塊重量較小。而燈盞細(xì)辛、黃芪各給藥劑量對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響較小。故其較佳組合為三七高劑量，燈盞細(xì)辛和黃芪各用低劑量。
以下是本發(fā)明藥物的制備實(shí)施例，但是，本發(fā)明藥物的劑型并不盡限于如下所說(shuō)的具體實(shí)施例1黃芪501克三七126克燈盞細(xì)辛161克取黃芪藥材粗粉，加70％乙醇，提取3次，濾過(guò)，提取液濃縮后通入裝有AB-8樹(shù)脂的色譜柱中，依次用水、40％乙醇、70％乙醇、95％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫部分并經(jīng)過(guò)真空干燥，得黃芪總皂苷提取物；取三七粗粉，加70％乙醇提取3次，濾過(guò)，濾液濃縮后通過(guò)裝有AB-8樹(shù)脂的色譜柱中，先以蒸餾水洗至流出液不顯molish反應(yīng)，再用70％乙醇溶液洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，濃縮并干燥，得三七提取物；取燈盞細(xì)辛藥材，加75％乙醇提取3次，提取液濃縮后，調(diào)節(jié)pH值至約7～8，濾過(guò)，濾液加入稀酸溶液適量，調(diào)節(jié)pH值1～2，靜置，析出黃色沉淀物。分取黃色沉淀物，干燥，得到燈盞細(xì)辛提取物。
取乙二胺四醋酸鈣鈉0.5g溶于注射用水中，加入燈盞細(xì)辛提取物，調(diào)pH值至7.0～7.5，加入三七提取物，得溶液(A)。
另取黃芪提取物，加乙醇∶丙二醇(1∶1)溶液，攪拌使溶解，得溶液(B)。
將溶液(A)加入到溶液(B)中，混合，加注射用水滅菌，即得到本發(fā)明藥物組合物注射液。每日一次，每次10～20ml。
實(shí)施例2黃芪1200克三七300克燈盞細(xì)辛380克取黃芪藥材粗粉，加90％乙醇，提取2次，濾過(guò)，提取液濃縮后通入裝有D101樹(shù)脂的色譜柱中，依次用水、15％乙醇、40％乙醇、85％乙醇洗脫。收集40％乙醇洗脫部分并經(jīng)過(guò)真空干燥，得黃芪總皂苷提取物；取三七粗粉，加50％乙醇，提取2次，濾過(guò)，濾液濃縮后通過(guò)D101樹(shù)脂柱，先以蒸餾水洗至流出液不顯molish反應(yīng)，再用35％乙醇溶液洗脫，收集35％乙醇洗脫部分，濃縮并干燥，得三七提取物；取燈盞細(xì)辛藥材，加60％乙醇提取2次，提取液濃縮后，調(diào)節(jié)pH值至弱堿性，濾過(guò)，濾液加入稀酸溶液適量，調(diào)節(jié)pH值至酸性，靜置，析出沉淀物。分取沉淀物，干燥，得到燈盞細(xì)辛提取物。
合并上述三個(gè)提取物，用60％乙醇制粒，60℃以下干燥，制成片劑。每日3次，每次3～4片。
實(shí)施例3黃芪100克三七25克燈盞細(xì)辛32克。
取黃芪藥材粗粉100克，加50％乙醇，提取3次，濾過(guò)，提取液濃縮后通入裝有D101-T樹(shù)脂的色譜柱中，依次用水、25％乙醇、80％乙醇、95％乙醇洗脫。收集80％乙醇洗脫部分并經(jīng)過(guò)真空干燥，得黃芪總皂苷提取物；取三七粗粉25克，加50％乙醇，提取3次，濾過(guò)，濾液濃縮后通過(guò)D101-T樹(shù)脂柱，先以蒸餾水洗至流出液不顯molish反應(yīng)，再用85％乙醇溶液洗脫，收集85％乙醇洗脫部分，濃縮并干燥，得三七提取物；
取燈盞細(xì)辛藥材32克，加60％乙醇提取4次，提取液濃縮后，調(diào)節(jié)pH值至弱堿性，濾過(guò)，濾液加入稀酸溶液適量，調(diào)節(jié)pH值至酸性，靜置，析出沉淀物。分取沉淀物，干燥，得到燈盞細(xì)辛提取物。
合并上述三個(gè)提取物，混均，用80％乙醇制粒，60℃以下干燥，裝入膠囊，制成膠囊劑，或者壓制成軟膠囊。每日3次，每次2～3粒。
實(shí)施例4取黃芪藥材粗粉499克，加7倍量70％乙醇，回流提取3次，濾過(guò)，合并濾液。提取液減壓濃縮，即為上柱樣品液。將樣品液按1BV上樣量通入裝有D101樹(shù)脂的色譜柱中，依次用10BV的水、6BV的40％乙醇、9BV的70％乙醇、10BV的95％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫部分；70％乙醇洗脫液減壓濃縮至稠膏，60℃真空干燥，得黃芪總皂苷提取物，備用。
取三七粗粉124克，加8倍量70％乙醇提取3次。合并提取液，濾過(guò)，濾液濃縮，通過(guò)D101型大孔樹(shù)脂柱，加樣量為0.4BV，控制流速2.0BV/h，先以蒸餾水洗至流出液不顯molish反應(yīng)，棄去洗脫液，再用5BV的70％乙醇溶液洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，回收乙醇，減壓濃縮，60℃減壓干燥，得三七提取物，備用。
取燈盞細(xì)辛159克，粉碎成粗粉，加8倍量75％乙醇提取三次，合并提取液，濾過(guò)，濾液濃縮成浸膏，加5％碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至約7～8，攪拌使溶解，濾過(guò)，濾液加入稀鹽酸溶液適量，調(diào)節(jié)pH值1～2，室溫靜置12小時(shí)，析出黃色沉淀物。分取黃色沉淀物，用適量蒸餾水洗至pH值中性，再用乙醇洗至乙醇液呈淡黃色，加乙醇加熱溶解，回收乙醇至一定量，趁熱濾過(guò)，濾液靜置，待沉淀完全后，濾過(guò)，將沉淀物60℃真空干燥，備用。
取乙二胺四醋酸鈣鈉2.5g溶于注射用水500ml中，加入燈盞花提取物0.9克，攪勻，加入5％碳酸氫鈉溶液適量，調(diào)pH值至7.0～7.5，充分?jǐn)嚢枋谷芙?，加入三七提取?.9克，攪拌使溶解，得溶液(A)備用。
另取黃芪提取物0.7克，加乙醇∶丙二醇(7∶3)溶液，攪拌使溶解，得溶液(B)。
將溶液(A)加入到溶液(B)中，混合，加注射用水至1000ml，滅菌，即得到本發(fā)明藥物組合物注射液。靜脈滴注，用5～10％葡萄糖注射液250～500ml或氯化鈉注射液250～500ml，稀釋后，緩緩滴注，一日1次，一次10～20ml。
實(shí)施例5黃芪100克三七25克燈盞細(xì)辛32克。
取黃芪藥材粗粉，加70％乙醇，提取3次，濾過(guò)，提取液濃縮后通入裝有非極性樹(shù)脂的色譜柱中，依次用水、40％乙醇、70％乙醇、95％乙醇洗脫。收集70％乙醇洗脫部分并經(jīng)過(guò)真空干燥，得黃芪總皂苷提取物；取三七粗粉，加70％乙醇提取3次，濾過(guò)，濾液濃縮后通過(guò)非極性樹(shù)脂柱，先以蒸餾水洗至流出液不顯molish反應(yīng)，再用70％乙醇溶液洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，濃縮并干燥，得三七提取物；取燈盞細(xì)辛藥材，加75％乙醇提取3次，提取液濃縮后，調(diào)節(jié)pH值至約7～8，濾過(guò)，濾液加入稀酸溶液適量，調(diào)節(jié)pH值1～2，靜置，析出黃色沉淀物。分取黃色沉淀物，干燥，得到燈盞細(xì)辛提取物。
合并上述三個(gè)提取物，混均，用70％乙醇制粒，制成顆粒劑，每日3次，每次18g。
實(shí)施例6黃芪500克三七125克燈盞細(xì)辛160克。
取以上三位藥材，混合粉碎后，第一次加入7倍量水，煎煮1.5小時(shí)，濾過(guò)，濾液備用；第二次加入5倍量水，煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，濾液備用；第三次加入3倍量水，煎煮0.5小時(shí)，濾過(guò)，濾液備用。
合并三次濾液，濃縮至10000ml，加入山梨酸20克，蔗糖500克，混均，制成合劑，每日三次，每次70ml。
實(shí)施例7黃芪480克三七120克燈盞細(xì)辛150克。
取以上三位藥材，粉碎成粗粉，第一次加入4倍量50度白酒，浸漬72小時(shí)，濾過(guò)，濾液備用；第二次加入3倍量50度白酒，浸漬48小時(shí)，濾過(guò)，濾液備用；第三次加入2倍量50度白酒，浸漬24小時(shí)，濾過(guò)，濾液備用。
合并三次濾液，加入蜂蜜200ml，混均，制成酒劑，每日三次，每次30～50ml。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的黃芪80～120重量份、三七20～30重量份、燈盞細(xì)辛26～38重量份。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的黃芪90～110重量份、三七23～28重量份、燈盞細(xì)辛30～35重量份。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的黃芪100重量份、三七25重量份、燈盞細(xì)辛32重量份。
4.如權(quán)利要求1或2或3所述藥物組合物的制備方法，其特征在于取黃芪藥材粗粉，加50～90％乙醇，提取1～3次，濾過(guò)，提取液濃縮后通入裝有非極性樹(shù)脂的色譜柱中，依次用水、15～25％乙醇、40～80％乙醇、85～95％乙醇洗脫，收集40～80％乙醇洗脫部分并經(jīng)過(guò)真空干燥，得黃芪總皂苷提取物；取三七粗粉，加50～90％乙醇，提取1～3次，濾過(guò)，濾液濃縮后通過(guò)非極性樹(shù)脂柱，先以蒸餾水洗至流出液不顯molish反應(yīng)，再用35～85％乙醇溶液洗脫，收集35～85％乙醇洗脫部分，濃縮并干燥，得三七提取物；取燈盞細(xì)辛藥材，加60～90％乙醇提取1～4次，提取液濃縮后，調(diào)節(jié)pH值至弱堿性，濾過(guò)，濾液加入稀酸溶液適量，調(diào)節(jié)pH值至酸性，靜置，析出沉淀物，分取沉淀物，干燥，得到燈盞細(xì)辛提取物；合并上述三個(gè)提取物，加入適量輔料，制成藥物劑型。
5.如權(quán)利要求4所述的藥物組合物制備方法，其特征在于所說(shuō)的藥物劑型是丸劑、散劑、膠劑、糖漿劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、貼膏劑、合劑、滴丸劑、栓劑、氣霧劑、軟膏劑、注射劑當(dāng)中的一種。
6.如權(quán)利要求5所述注射劑的制備方法，其特征在于該方法為取黃芪藥材粗粉，加70％乙醇，提取3次，濾過(guò)，提取液濃縮后通入裝有AB-8樹(shù)脂的色譜柱中，依次用水、40％乙醇、70％乙醇、95％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫部分并經(jīng)過(guò)真空干燥，得黃芪總皂苷提取物；取三七粗粉，加70％乙醇提取3次，濾過(guò)，濾液濃縮后通過(guò)AB-8樹(shù)脂柱，先以蒸餾水洗至流出液不顯molish反應(yīng)，再用70％乙醇溶液洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，濃縮并干燥，得三七提取物；取燈盞細(xì)辛藥材，加75％乙醇提取3次，提取液濃縮后，調(diào)節(jié)pH值至約7～8，濾過(guò)，濾液加入稀酸溶液適量，調(diào)節(jié)pH值1～2，靜置，析出黃色沉淀物，分取黃色沉淀物，干燥，得到燈盞細(xì)辛提取物；取適量穩(wěn)定劑溶于注射用水中，加入燈盞細(xì)辛提取物，調(diào)pH值至7.0～7.5，加入三七提取物，得溶液A；另取黃芪提取物，加乙醇∶丙二醇＝7～3∶3～7的溶液，攪拌使溶解，得溶液B；將溶液A加入到溶液B中，混合，加注射用水，滅菌，得到注射液。
7.如權(quán)利要求6所述注射劑的制備方法，其特征在于所說(shuō)的穩(wěn)定劑是乙二胺四醋酸鈣鈉。
8.如權(quán)利要求6所述注射劑的制備方法，其特征在于所說(shuō)的乙醇∶丙二醇溶液的配比是1∶1。
9.如權(quán)利要求6所述注射劑的制備方法，其特征在于將A、B混合后，加入0.1％～0.5％的活性炭，煮沸5～30分鐘，濾過(guò)，得到注射液。
10.如權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于將A、B混合后，加入0.3％的活性炭，煮沸15分鐘，濾過(guò)，得到注射液。
11.如權(quán)利要求1或2或3所述的藥物組合物在制備治療視網(wǎng)膜靜脈阻塞的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種中藥組合物及其制備方法，特別是一種用于治療視網(wǎng)膜靜脈阻塞的注射劑。該藥物是以黃芪、三七、燈盞細(xì)辛為原料，按照一定的配伍要求，用乙醇對(duì)三種原料藥進(jìn)行分別或者混合提取、精制得到提取物，然后加入輔料，制備成各種藥物劑型，優(yōu)選制備成注射劑。
文檔編號(hào)A61K9/00GK1883539SQ20051020033
公開(kāi)日2006年12月27日 申請(qǐng)日期2005年6月20日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月20日
發(fā)明者張紅 申請(qǐng)人:北京華夏醫(yī)勝創(chuàng)新科技有限責(zé)任公司