專利名稱：土茯苓總苷提取物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥提取物、提取方法和提取物的用途，特別是土茯苓總苷提取物及其提取方法，以及土茯苓總苷提取物用于治療各種炎癥和免疫性疾病。
背景技術(shù)：
土茯苓為百合科植物光葉菝葜Smilax glabra Roxb.的干燥根莖，它是一種常用中藥材，具有除濕、解毒、通利關(guān)節(jié)的功效。主治梅毒、淋濁、筋骨攣痛、瘰疬、疥癬、癰腫等病癥。土茯苓的水提物能抑制致敏T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)；對(duì)于佐劑關(guān)節(jié)炎等炎癥反應(yīng)具有顯著的抗炎活性；對(duì)于佐劑關(guān)節(jié)炎中的遲發(fā)相，即T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)具有顯著的抑制作用，其機(jī)理與調(diào)節(jié)CD4/CD8T細(xì)胞的比值有關(guān)。它還可通過(guò)選擇性地誘導(dǎo)肝浸潤(rùn)T淋巴細(xì)胞的凋亡而發(fā)揮對(duì)細(xì)胞免疫反應(yīng)性肝損傷的改善作用。
土茯苓中所含的主要活性成分落新婦苷對(duì)各種細(xì)胞免疫反應(yīng)均有顯著的抑制活性，其作用與選擇性誘導(dǎo)活化T細(xì)胞的失能有關(guān)。
上述研究是基于土茯苓的水提物及其成分落新婦苷，但尚未有關(guān)于土茯苓總苷部位提取工藝及其活性的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
1、發(fā)明目的本發(fā)明的目的之一是提供一種土茯苓總苷提取物的提取方法，該方法通過(guò)乙醇滲漉提取、乙酸乙酯萃取、干燥等獲得土茯苓總苷的有效部位。
本發(fā)明的目的之二是提供利用上述方法所獲得的土茯苓總苷提取物。
本發(fā)明的目的之三是提供了該總苷提取物作為具有抗炎和免疫抑制作用的提取物，在制備治療具有抗炎和免疫抑制作用的藥物中的應(yīng)用。
2、技術(shù)方案本發(fā)明所述的土茯苓提取物的提取方法，包括以下步驟(1)用6-12倍于土茯苓重量的、濃度為30-95％的乙醇水溶液對(duì)土茯苓進(jìn)行滲漉提取，合并乙醇水溶液提取液；(2)回收乙醇水溶液提取液，并使之濃縮至每毫升含2-6克生藥；(3)用相當(dāng)于生藥量0.5-2.0倍體積的乙酸乙酯分次萃取，合并萃取液；(4)回收乙酸乙酯提取液，干燥得到總苷提取物。
在步驟(1)中，乙醇水溶液的濃度優(yōu)選為40-80％，更優(yōu)選是60％。
在步驟(1)中，用滲漉進(jìn)行提取，優(yōu)選將藥材浸泡過(guò)夜，提取1-12小時(shí)，更優(yōu)選3-8小時(shí)，最優(yōu)選5小時(shí)。
在步驟(2)中，提取液濃度優(yōu)選每毫升含2-6克生藥，更優(yōu)選2.5-5克/毫升，最優(yōu)選5克/毫升。
在步驟(3)中，乙酸乙酯用量?jī)?yōu)選為生藥量的0.5-2.0倍，更優(yōu)選0.8-1.5倍，最優(yōu)選1倍。
在步驟(3)中，用乙酸乙酯進(jìn)行萃取的次數(shù)優(yōu)選3-5次，最優(yōu)選4次。
在步驟(4)中，干燥方法優(yōu)選真空干燥，溫度60-80℃，最優(yōu)選70℃。
利用本發(fā)明上述提取方法所得的土茯苓總苷提取物，其中土茯苓的總苷提取物含量為50一80％，落新婦苷的含量為20-40％，均按總提取物重量計(jì)。
本發(fā)明中，可以用高效液相層析法在291nm波長(zhǎng)下，流速1.0ml/分鐘，用甲醇∶水∶冰醋酸(35∶65∶0.2)檢測(cè)落新婦苷的含量。
所述的土茯苓總苷提取物的用途，在于該提取物在制備具有抗炎和免疫抑制作用的藥物中的應(yīng)用。
特別是該提取物在制備治療各種炎癥和免疫性疾病的藥物中的應(yīng)用。如在制備治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化癥、移植排斥、過(guò)敏性皮炎、胰島素依賴性糖尿病、自身免疫性心肌炎、I、II、III和IV型變態(tài)反應(yīng)性疾病、各種結(jié)腸炎、器官移植排斥、各型病毒性肝炎、自身免疫性肝炎、化學(xué)性肝炎、酒精性肝炎、藥物性肝炎、重癥肝炎、暴發(fā)性肝衰竭、肝硬化、肝纖維化、脂肪肝等的藥物中的應(yīng)用。
3、有益效果本發(fā)明的土茯苓總苷提取方法采用乙醇作為提取試劑，與常規(guī)的乙醇回流提取及乙醇浸泡提取方法不同，用乙醇滲漉提取，無(wú)論在提取率，提取物中總苷及主要有效成分方面都有明顯優(yōu)勢(shì)。本發(fā)明提取工藝簡(jiǎn)單，提取物中總苷和有效成分的含量較高，提取物可以在制備具有抗炎和免疫抑制作用的藥物中的應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式
土茯苓是一種常用中藥材，一般以飲片的形式使用。該藥材可從各土茯苓產(chǎn)地直接購(gòu)得，也可在安徽亳州等藥材市場(chǎng)及各中藥飲片廠購(gòu)買。本發(fā)明是將藥材粉碎成粗顆粒形式提取使用。
實(shí)施例1土茯苓總苷提取物的提取方法包括以下步驟1、用8倍于土茯苓重量的、濃度為60％的乙醇水溶液對(duì)土茯苓進(jìn)行滲漉提取，合并乙醇水溶液提取液，提取時(shí)間為5小時(shí)；2、回收乙醇水溶液提取液，并使之濃縮至每毫升含2克生藥；3、用相當(dāng)于生藥量1.0倍體積的乙酸乙酯分4次萃取，合并萃取液；4、回收乙酸乙酯提取液，用真空干燥的方法干燥，干燥的溫度為60℃，干燥得到總苷提取物。
經(jīng)測(cè)試，在土茯苓總苷提取物中，土茯苓總苷提取物的含量為58％(重量)，落新婦苷的含量為28％(重量)。
實(shí)施例2土茯苓總苷提取物的提取方法包括以下步驟1、用6倍于土茯苓重量的、濃度為95％的乙醇水溶液對(duì)土茯苓進(jìn)行滲漉提取，合并乙醇水溶液提取液，提取時(shí)間為2小時(shí)；2、回收乙醇水溶液提取液，并使之濃縮至每毫升含6克生藥；3、用相當(dāng)于生藥量2倍體積的乙酸乙酯分5次萃取，合并萃取液；4、回收乙酸乙酯提取液，用真空干燥的方法干燥，干燥的溫度為80℃，干燥得到總苷提取物。
經(jīng)測(cè)試，在土茯苓總苷提取物中，土茯苓總苷提取物的含量為66％(重量)，落新婦苷的含量為27％(重量)。
實(shí)施例3土茯苓總苷提取物的提取方法包括以下步驟1、用12倍于土茯苓重量的、濃度為30％的乙醇水溶液對(duì)土茯苓進(jìn)行滲漉提取，合并乙醇水溶液提取液，提取時(shí)間為12小時(shí)；2、回收乙醇水溶液提取液，并使之濃縮至每毫升含5克生藥；3、用相當(dāng)于生藥量0.6倍體積的乙酸乙酯分3次萃取，合并萃取液；4、回收乙酸乙酯提取液，用真空干燥的方法干燥，干燥的溫度為70℃，干燥得到總苷提取物。
經(jīng)測(cè)試，在土茯苓總苷提取物中，土茯苓總苷提取物的含量為55％(重量)，落新婦苷的含量為24％(重量)。
實(shí)施例4用上述實(shí)施例1提取方法得到的土茯苓總苷提取物進(jìn)行藥理實(shí)驗(yàn)、藥理結(jié)果與分析，以證明土茯苓總苷提取物在制備具有抗炎和免疫抑制作用的藥物中的應(yīng)用。
土茯苓總苷提取物的藥理實(shí)驗(yàn)1、小鼠膠原性關(guān)節(jié)炎模型。
取昆明種小鼠，隨機(jī)分組，每組10只，用螺旋測(cè)微器測(cè)其左右后足足跖厚度作為初始值。取冰醋酸20μl，用生理鹽水稀釋成3.5ml，加II型雞膠原(CII)6.9mg混勻，混懸為CII乳劑(2mg/ml)，加弗氏完全佐劑原液3.5ml，混勻，配成1mg/ml的濃度用于致敏，于小鼠尾根部皮內(nèi)注射一次致敏(0.1ml/鼠)。另取冰醋酸20μl，用生理鹽水稀釋成3.5ml，加II型雞膠原7.0mg混勻，混懸為CII乳劑(2mg/ml)，加生理鹽水3.5ml，混勻，配成1mg/ml的濃度用于攻擊。于致敏的20天后，給小鼠腹腔注射攻擊(0.1ml/鼠)，誘導(dǎo)其關(guān)節(jié)免疫應(yīng)答。致敏后至攻擊前每4天測(cè)量小鼠足跖厚度以及體重變化，攻擊后，每2天測(cè)量模型動(dòng)物足跖以及關(guān)節(jié)部位的腫脹程度，記錄耳、尾等其它部位發(fā)病癥狀；同時(shí)檢測(cè)體重變化。
2、大鼠佐劑關(guān)節(jié)炎模型。
SD大鼠正常飼養(yǎng)兩天后，隨機(jī)分組，每組10只。致敏前用螺旋測(cè)微器預(yù)測(cè)大鼠左右后足的足跖厚度，隨后，左足足跖皮內(nèi)注射弗氏完全佐劑0.1ml致炎。每隔一天用螺旋測(cè)微器測(cè)量一次左右后足足跖厚度，以厚度的變化作為免疫反應(yīng)程度的衡量指標(biāo)；稱量大鼠體重，并觀察模型動(dòng)物的耳紅斑、尾部結(jié)節(jié)等免疫炎癥并發(fā)癥狀。于實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)分取大鼠右足，以福爾馬林固定，做病理切片檢查。
3、三硝基氯苯致小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。
取昆明種小鼠，剃去腹部之毛，涂以1％2，4，6-三硝基氯苯的乙醇溶液100μl致敏，致敏后隨機(jī)分組，5天后，用1％2，4，6-三硝基氯苯的橄欖油溶液30μl均勻涂于小鼠右耳的上下兩面攻擊。攻擊22小時(shí)后，用螺旋測(cè)微器測(cè)量小鼠左右耳廓厚度，以其差值作為炎癥反應(yīng)的強(qiáng)度。
4、雞蛋清致小鼠足跖腫脹。
取昆明種小鼠，隨機(jī)分組，將10％蛋清液50μl注射于小鼠左后足皮下致炎，并于致炎4小時(shí)后用螺旋測(cè)微器測(cè)量小鼠左右足足跖厚度，以前后差值作為炎癥反應(yīng)的強(qiáng)度。
5、二甲苯所致小鼠耳腫脹。
取昆明種小鼠，于小鼠右耳上下兩面均勻涂抹30μl的二甲苯致炎，并于致炎后2小時(shí)用螺旋測(cè)微器(0.001mm，Mitutoyo，Tokyo，Japan)測(cè)量小鼠左右耳廓的厚度，以其差值作為炎癥反應(yīng)的強(qiáng)度。
土茯苓總苷提取物的藥理結(jié)果與分析
1、土茯苓總苷對(duì)小鼠膠原性關(guān)節(jié)炎模型關(guān)節(jié)病變的影響。
于攻擊的當(dāng)天(設(shè)為d0天)起開始給藥，每天一次，持續(xù)24天。在設(shè)定日期于給藥后5h時(shí)測(cè)量模型足跖厚度以及相關(guān)各項(xiàng)指標(biāo)。Normal組為正常條件下飼養(yǎng)；Control組口服給予蒸餾水；土茯苓總苷經(jīng)口給藥，劑量為10、40和120mg/kg；環(huán)孢素A(CsA)為腹腔注射給藥，劑量為5mg/kg。
小鼠足關(guān)節(jié)的腫脹于攻擊后第2～4天即可觀測(cè)，而后有所減弱，伴隨第16天左右發(fā)生的第二次周身免疫炎癥反應(yīng)，關(guān)節(jié)的腫脹開始且持續(xù)增強(qiáng)，并于第20～24天時(shí)達(dá)到高峰。周身免疫炎癥反應(yīng)多數(shù)表現(xiàn)為前足明顯紅腫，偶見小鼠尾部成粥樣腫脹。
與對(duì)照組相比，土茯苓總苷各劑量組經(jīng)口給藥對(duì)于模型小鼠的關(guān)節(jié)腫脹均呈現(xiàn)了顯著的抑制活性，尤其是40mg/kg劑量組，在給藥后即呈現(xiàn)顯著的治療效果，且與CsA 5mg/kg(ip)的活性相當(dāng)(表1)，且動(dòng)物的整體狀況明顯優(yōu)于CsA組，CsA組動(dòng)物整體狀態(tài)不佳，尾部壞死、肢體衰殘、肝部纖維化、甚至死亡等現(xiàn)象的發(fā)生率明顯高于土茯苓總苷各劑量組。
結(jié)果表明，土茯苓總苷和CsA對(duì)小鼠的膠原性關(guān)節(jié)病變均有明顯的治療作用。
2、土茯苓總苷對(duì)大鼠佐劑關(guān)節(jié)炎模型關(guān)節(jié)病變的預(yù)防作用。
于致敏當(dāng)天給藥，此后每天一次，連續(xù)16天，給藥后5小時(shí)測(cè)量足跖厚度以及監(jiān)測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。Normal組正常條件下飼養(yǎng)；Control組口服給藥蒸餾水；土茯苓總苷的劑量為10、20和40mg/kg，口服給藥；CsA的給藥劑量為5mg/kg，腹腔注射給藥。
致敏足炎癥反應(yīng)分為兩個(gè)階段，D2時(shí)達(dá)到第一個(gè)腫脹高峰，隨后，炎癥逐漸消褪，D10起，開始繼發(fā)性炎癥反應(yīng)，再次開始持續(xù)性的腫脹。對(duì)足的足跖腫脹屬繼發(fā)性的免疫炎癥反應(yīng)，在D10開始明顯腫脹，同時(shí)，周身性的免疫炎癥反應(yīng)也開始出現(xiàn)。
與對(duì)照組相比，致敏足的腫脹度，CsA組從開始給藥時(shí)即有明顯的抑制作用，土茯苓總苷高劑量組(40mg/kg)的抑制作用在繼發(fā)性免疫炎癥反應(yīng)時(shí)開始出現(xiàn)顯著差異；而在對(duì)足的腫脹度變化上，土茯苓總苷高劑量組與CsA組的作用相當(dāng)，均在第14天開始顯效(見表2)。土茯苓總苷的低、中兩個(gè)劑量組對(duì)于大鼠的足跖腫脹有一定的抑制作用，但未出現(xiàn)顯著性的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。必須指出，CsA組有兩只動(dòng)物死亡，尸解發(fā)現(xiàn)有肝硬化的癥狀。土茯苓總苷有恢復(fù)模型動(dòng)物體重的趨勢(shì)，而CsA則使模型動(dòng)物的體重進(jìn)一步減輕。
關(guān)節(jié)組織病理切片中，對(duì)照組大鼠關(guān)節(jié)周圍軟組織內(nèi)均見大量急、慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)及炎性肉芽腫形成，局灶性軟組織壞死明顯，滑膜充血水腫，上皮細(xì)胞增生，軟骨面可見鋸齒狀破壞；土茯苓總苷各劑量組大鼠關(guān)節(jié)炎癥程度均明顯低于對(duì)照組，滑膜與軟骨形態(tài)學(xué)改變不同程度地恢復(fù)正常，以40mg/kg組效果最為明顯，炎癥狀況基本同正常組，僅3例模型動(dòng)物滑膜與軟骨形態(tài)學(xué)類似對(duì)照組；CsA組大鼠的關(guān)節(jié)滑膜與軟骨形態(tài)學(xué)均基本相同于正常組，僅1例可見滑膜輕度充血及少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。
3、土茯苓總苷對(duì)大鼠佐劑關(guān)節(jié)炎模型關(guān)節(jié)病變的治療作用。
于致敏后第19天開始給藥，此后每天一次，連續(xù)7天，給藥后5小時(shí)測(cè)量足跖厚度以及監(jiān)測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。Control組口服給藥蒸餾水；土茯苓總苷的劑量為20、40和80mg/kg，口服給藥；CsA的給藥劑量為5mg/kg，腹腔注射給藥。
與對(duì)照組相比，給藥組的足腫脹顯著受抑，對(duì)于致敏足腫脹的作用，CsA組較土茯苓總苷高劑量組顯效略早。而在對(duì)足的腫脹度變化上，土茯苓總苷高劑量組與CsA組無(wú)明顯差異，均在服藥后第七天開始顯效(見表3)。土茯苓總苷的20和40mg/kg兩個(gè)劑量組對(duì)于大鼠的致敏足足跖腫脹有一定的抑制作用，而40mg/kg劑量組對(duì)對(duì)足腫脹的抑制作用也有顯著意義。
4、土茯苓總苷對(duì)2，4，6-三硝基氯苯致小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的影響。
于攻擊同時(shí)、攻擊后5及10小時(shí)連續(xù)3次經(jīng)口給予土茯苓總苷20、40和80mg/kg，肌注地塞米松(DEX)5mg/kg。對(duì)照組經(jīng)口給予等量的蒸餾水。如表4所示，與對(duì)照組相比，土茯苓總苷的中、高兩劑量組和陽(yáng)性對(duì)照藥DEX均顯著地抑制了2，4，6-三硝基氯苯所致的小鼠耳廓腫脹，低劑量組亦有一定的抑制趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。藥物作用呈量效關(guān)系。
5、土茯苓總苷對(duì)雞蛋清所致小鼠足跖腫脹的影響。
取昆明種小鼠，經(jīng)口給予土茯苓總苷20、40和80mg/kg，連續(xù)三次；肌注DEX5mg/kg，連續(xù)兩次，每次給藥時(shí)間間隔均為三小時(shí)。對(duì)照組經(jīng)口給予等量的蒸餾水。末次給藥的同時(shí)致炎，結(jié)果如表5所示，與對(duì)照組相比，土茯苓總苷中、高兩劑量組和陽(yáng)性對(duì)照藥DEX均能顯著地抑制雞蛋清所致的小鼠左足足跖腫脹，而土茯苓總苷低劑量組有一定的抑制趨勢(shì)。藥物作用呈量效關(guān)系。
6、土茯苓總苷對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響。
取昆明種小鼠，隨機(jī)分成5組，分別經(jīng)口給予土茯苓總苷10、20和40mg/kg，連續(xù)三次；肌注DEX 5mg/kg，連續(xù)兩次，每次給藥時(shí)間間隔均為三小時(shí)。對(duì)照組經(jīng)口給予等量的蒸餾水。末次給藥的同時(shí)致炎，如表6所示，與對(duì)照組相比，土茯苓總苷的低、中劑量組對(duì)二甲苯所致的小鼠右耳腫脹有一定的抑制作用，高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照藥DEX則有顯著的抑制作用。
綜上，本研究應(yīng)用各種非特異性炎癥模型和免疫性炎癥模型，包括特異性蛋白、化學(xué)物質(zhì)等誘發(fā)的炎癥模型，大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎以及小鼠膠原性關(guān)節(jié)炎等病理模型，觀察了土茯苓總苷在抗炎以及免疫抑制方面的藥效。結(jié)果表明土茯苓總苷能顯著地抑制雞蛋清、二甲苯所致的非特異性炎癥反應(yīng)，2、4、6-三硝基氯苯(Picryl chloride，PCl)所致的免疫性炎癥反應(yīng)，減輕炎癥反應(yīng)部位的腫脹程度；對(duì)于大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎以及小鼠膠原性關(guān)節(jié)炎有明顯的預(yù)防和治療作用，能顯著減輕足跖部位關(guān)節(jié)的腫脹程度以及周身炎癥的程度，恢復(fù)模型動(dòng)物降低的脾臟重量及體重，組織病理研究顯示土茯苓總苷還可以抑制模型動(dòng)物關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞層的增生，減少炎細(xì)胞浸潤(rùn)，減輕滑膜充血水腫，降低滑膜層的損傷，進(jìn)而調(diào)整改善模型動(dòng)物的病癥。
以上結(jié)果表明，土茯苓總苷可顯著改善各種非特異性炎癥和特異性免疫炎癥，提示其可用于治療各種免疫性疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化癥、移植排斥、過(guò)敏性皮炎、胰島素依賴性糖尿病、自身免疫性心肌炎、I、II、III和IV型變態(tài)反應(yīng)性疾病、各種結(jié)腸炎、器官移植排斥、各型病毒性肝炎、自身免疫性肝炎、化學(xué)性肝炎、酒精性肝炎、藥物性肝炎、重癥肝炎、暴發(fā)性肝衰竭、肝硬化、肝纖維化、脂肪肝等。
表4.土茯苓總苷對(duì)2，4，6-三硝基氯苯所致小鼠遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)的影響

其中*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001與對(duì)照組比較表5.土茯苓總苷對(duì)雞蛋清所致小鼠足跖腫脹的影響

其中*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001與對(duì)照組比較表6.土茯苓總苷對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響

其中*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001與對(duì)照組比較表1.土茯苓總苷和CsA對(duì)CIA模型小鼠關(guān)節(jié)病變(足跖腫脹)的影響

#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001與正常組比較；*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001與對(duì)照組比較。
表2.土茯苓總苷和CsA對(duì)AA模型大鼠關(guān)節(jié)病變的預(yù)防作用

#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001與正常組比較；*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001與對(duì)照組比較。
表3.土茯苓總苷對(duì)AA模型大鼠的治療作用

*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001與對(duì)照組比較。
權(quán)利要求
1.一種土茯苓總苷提取物的提取方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)用6-12倍于土茯苓重量的、濃度為30-95％的乙醇水溶液對(duì)土茯苓進(jìn)行滲漉提取，合并乙醇水溶液提取液；(2)回收乙醇水溶液提取液，并使之濃縮至每毫升含2-6克生藥；(3)用相當(dāng)于生藥量0.5-2.0倍體積的乙酸乙酯分次萃取，合并萃取液；(4)回收乙酸乙酯提取液，干燥得到總苷提取物。
2.如權(quán)利要求1所述的土茯苓總苷提取物的提取方法，其特征在于在步驟(1)中，用滲漉提取的提取時(shí)間為1-12小時(shí)。
3.如權(quán)利要求1所述的土茯苓總苷提取物的提取方法，其特征在于在步驟(3)中，萃取次數(shù)為3-5次。
4.如權(quán)利要求1所述的土茯苓總苷提取物的提取方法，其特征在于在步驟(4)中，用真空干燥的方法干燥，干燥的溫度為60-80℃。
5.如權(quán)利要求1所述的土茯苓總苷提取物，其特征在于土茯苓總苷提取物的含量為50-80％(重量)，落新婦苷的含量為20-40％(重量)。
6.如權(quán)利要求5所述的土茯苓總苷提取物的用途，其特征在于該提取物在制備具有抗炎和免疫抑制作用的藥物中的應(yīng)用。
7.如權(quán)利要求6所述的土茯苓總苷提取物的用途，其特征在于該提取物在制備治療免疫性疾病的藥物中的應(yīng)用。
8.如權(quán)利要求7所述的土茯苓總苷提取物的用途，其特征在于該提取物在制備治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化癥、移植排斥、過(guò)敏性皮炎、胰島素依賴性糖尿病、自身免疫性心肌炎、I、II、III和IV型變態(tài)反應(yīng)性疾病、結(jié)腸炎、器官移植排斥、各型病毒性肝炎、自身免疫性肝炎、化學(xué)性肝炎、酒精性肝炎、藥物性肝炎、重癥肝炎、暴發(fā)性肝衰竭、肝硬化、肝纖維化、脂肪肝的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種土茯苓總苷提取物及其制備方法和用途，該提取方法的步驟是(1)用乙醇水溶液對(duì)土茯苓滲漉提取，合并乙醇水溶液提取液；(2)回收乙醇水溶液，濃縮至每毫升含2－6克生藥；(3)用乙酸乙酯分次萃取，合并萃取液；(4)回收乙酸乙酯提取液，干燥得到土茯苓總苷提取物。在土茯苓總苷提取物中，土茯苓總苷的含量為50－80％，落新婦苷的含量為20－40％。本發(fā)明的特點(diǎn)是土茯苓總苷提取采用乙醇提取乙酸乙酯萃取的方法，工藝簡(jiǎn)單，提取物中的總苷及有效成分的含量較高，土茯苓總苷提取物對(duì)于各種炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答具有顯著的抑制作用，可以在制備具有抗炎和免疫抑制作用的藥物中應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P29/00GK1772170SQ200510095149
公開日2006年5月17日 申請(qǐng)日期2005年11月1日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月1日
發(fā)明者陳婷, 徐強(qiáng), 王雙燕 申請(qǐng)人:南京大學(xué)