專利名稱：磁熱療用納米磁粉－抗人肝癌單抗HAb18靶向藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種肝癌、胃癌和腸癌磁熱療用納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18或其片段HAb18F(ab′)2、HAb18Fab靶向藥物。
背景技術(shù)：
肝癌是我國(guó)第二大癌癥，也是我國(guó)及東南亞常見(jiàn)的癌癥，目前我國(guó)的肝癌病例約占世界總量的43％。肝癌病程短、進(jìn)展快、死亡率高，有“癌王”之稱。肝癌除部分病例可以進(jìn)行手術(shù)和介入化療外，仍有相當(dāng)一部分難治性肝癌(彌漫型、多發(fā)型、巨塊型、復(fù)發(fā)型及肝癌轉(zhuǎn)移灶)得不到有效治療。近些年，由于具有高效、低毒、副作用小等特點(diǎn)抗體靶向藥物的出現(xiàn)，抗體偶聯(lián)放射核素、毒素、化療藥物以及抗體偶聯(lián)前體藥物等靶向藥物已經(jīng)成為廣泛研究應(yīng)用的抗肝癌的新型藥物和和肝癌治療的新手段，抗體靶向藥物的為肝癌的治療和預(yù)防提供了新的機(jī)遇和效果。但上述靶向藥物中抗體偶聯(lián)的放射核素、毒素、化學(xué)藥物以及前體藥物等效應(yīng)分子仍具有共同的缺陷，它們都具有較強(qiáng)的毒副作用，雖然靶向藥物的毒性較未偶聯(lián)抗體的核素、毒素或化療藥物明顯降低，然而其應(yīng)用對(duì)人體來(lái)說(shuō)仍具有一定的非特異毒性，包括血液毒性和對(duì)正常組織的毒性，這使其在臨床應(yīng)用上仍有一定的局限性，肝癌治療用抗體靶向藥物的發(fā)展需要無(wú)毒副作用的新型效應(yīng)分子。
腫瘤磁熱療是一種利用導(dǎo)入體內(nèi)腫瘤病灶的磁熱種子(即磁性顆?；虿牧?，如納米磁粉)在體外交變磁場(chǎng)的作用下產(chǎn)生磁滯生熱效應(yīng)加熱腫瘤、利用腫瘤細(xì)胞耐熱性差選擇性殺滅腫瘤細(xì)胞、無(wú)毒副作用、安全有效治療腫瘤的熱療新方法。近幾年，大量的研究成果表明應(yīng)用磁熱療治療惡性腫瘤不僅可以有效殺滅腫瘤，使腫瘤完全消退，并且沒(méi)有毒副作用，磁熱療是一種具有廣闊應(yīng)用前景的腫瘤治療新方法。磁熱療中的磁熱種子實(shí)際上是一種無(wú)毒副作用物理效應(yīng)分子。但迄今為止，磁熱療中磁熱種子仍需通過(guò)埋植、局部注射、介導(dǎo)等方式導(dǎo)入腫瘤病灶，尚未見(jiàn)將納米磁粉與抗體偶聯(lián)制成磁熱療用將磁熱種子(即納米磁粉)主動(dòng)靶向?qū)肽[瘤病灶的靶向藥物的文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)上述不足之處提供一種磁熱療用納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18靶向藥物。由于磁熱療用納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18靶向藥物是以納米磁粉為效應(yīng)分子(即磁熱療用磁熱種子)和以抗體為導(dǎo)向分子，由抗人肝癌單克隆抗體HAb18與納米磁粉偶聯(lián)構(gòu)成的，具有抗人肝癌單克隆抗體HAb18對(duì)于肝癌、胃癌和腸癌的納米靶向功能、納米磁粉效應(yīng)分子的磁熱療無(wú)毒副作用功能和納米顆粒藥物的穿透性，能夠?qū)⒓{米磁粉主動(dòng)靶向?qū)氚┌Y病灶的磁熱療用靶向藥物。它具有偶聯(lián)抗體藥物的主動(dòng)靶向、載磁藥物的磁性靶向及納米載體藥物的被動(dòng)靶向等復(fù)合靶向功能和利用磁熱療治療腫瘤的技術(shù)功能，它的應(yīng)用可以通過(guò)動(dòng)靜脈或腹腔注射或?qū)氲冉o藥途徑，使靶向藥物主動(dòng)靶向濃聚定位在與抗體具有較高特異性和親和性的肝癌、胃癌和腸癌病灶，實(shí)現(xiàn)肝癌、胃癌和腸癌的無(wú)毒副作用的磁熱療治療，為肝癌、胃癌和腸癌的治療和預(yù)防提供一種靶向磁熱療、高效殺滅、安全無(wú)毒副作用的新手段。
本發(fā)明是采取以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種磁熱療用納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18靶向藥物，其特征在于(1)以具有磁滯生熱能力的納米磁粉為效應(yīng)分子、以抗體為導(dǎo)向分子，將納米磁粉與抗體通過(guò)溶液混合偶聯(lián)制成具有主動(dòng)靶向、磁性靶向和被動(dòng)靶向功能的磁熱療用納米靶向藥物，納米磁粉與抗體的重量配比為1∶0.0001～0.20，靶向藥物的顆粒粒徑為5～1000nm，靶向藥物的納米磁粉表面偶聯(lián)有抗體1個(gè)或多個(gè)抗體并且偶聯(lián)抗體具有生物活性；(2)靶向藥物的應(yīng)用需要制成復(fù)合溶媒或純水的靶向藥物注射劑，靶向藥物制成注射劑使藥物分散為納米顆粒，具有良好的穿透性以及與相關(guān)的肝癌、胃癌和腸癌細(xì)胞具有良好的特異性和親和性，在體內(nèi)外具有良好的導(dǎo)向作用，但和正常細(xì)胞無(wú)交叉反應(yīng)；(3)靶向藥物通過(guò)注射主動(dòng)靶向高倍濃聚定位在與抗體具有較高特異性和親和性的癌癥病灶；(4)靶向藥物在磁熱療治療儀交變磁場(chǎng)的作用下使癌癥病灶的納米磁粉產(chǎn)生磁滯生熱效應(yīng)加熱癌癥腫瘤至42-95℃，進(jìn)行高效殺滅、安全無(wú)毒副作用的靶向磁熱療治療和預(yù)防，殺滅肝癌、胃癌和腸癌腫瘤；(5)靶向藥物具有生物降解性，藥物應(yīng)用劑量通常小于100mg，用于癌癥磁熱療治療和預(yù)防沒(méi)有毒副作用。為了便于儲(chǔ)存，靶向藥物可以通過(guò)干燥制成可用于臨用前配制注射劑的固體粉體。
所述的納米磁粉為顆粒粒徑1～5nm、5～10nm、10～20nm、20～40nm、30～50nm、50～100nm、1～100nm以及100～1000nm，納米磁粉表面經(jīng)過(guò)表面活性劑、表面改性劑改性、修飾或有機(jī)、無(wú)機(jī)物質(zhì)包裹、包被或未經(jīng)改性修飾和包裹包被的鐵磁性、亞鐵磁性和超順磁性納米磁粉。納米磁粉表面經(jīng)過(guò)1次或多次表面活性劑、表面改性劑改性、修飾或有機(jī)、無(wú)機(jī)物質(zhì)包裹、包被的目的是使納米磁粉具有不同功能化的表面，如陰離子化表面、陽(yáng)離子化表面、非離子化表面、氨基化表面、巰基化表面、羥基化表面、羧基化表面、無(wú)機(jī)物表面、聚合物表面、生物表面以及其它能與抗體偶聯(lián)的功能化表面。其中的表面活性劑和表面改性包括十二烷基硫酸鈉、油酸鈉、正癸酸、聚乙二醇、葡聚糖、核苷酸、多肽，納米磁粉與表面活性劑或表面改性劑的原料重量比例為1∶0.0001～0.20。而有機(jī)物質(zhì)包括脂質(zhì)體、聚乳酸、聚己內(nèi)酯、蛋白質(zhì)；無(wú)機(jī)物質(zhì)包括二氧化硅納米顆粒、氧化鋁納米顆粒、金納米顆粒，納米磁粉與有機(jī)或無(wú)機(jī)物質(zhì)的原料重量比例為1∶0.01～5.0。
所述的抗人肝癌單克隆抗體HAb18為抗人肝癌單克隆抗體HAb18、抗人肝癌單克隆抗體HAb18片段HAb18F(ab′)2和HAb18Fab?？谷烁伟﹩慰寺】贵wHAb18是一種抗人肝癌單抗，抗人肝癌單克隆抗體HAb18及其片段HAb18F(ab′)2、HAb18Fab是對(duì)肝癌、部分胃癌和腸癌具有良好的特異性和親和性的抗體，而HAb18F(ab′)2和HAb18Fab是用酶切法制備的抗人肝癌單克隆抗體HAb18片段，分子量較小，比HAb18更易穿透到達(dá)腫瘤部位。值得指出的是，2005年由抗人肝癌單克隆抗體HAb18制成的抗人肝癌單克隆抗體-碘[131I]導(dǎo)向治療肝癌新藥已經(jīng)上市，作為肝癌導(dǎo)向抗體的抗人肝癌單克隆抗體HAb18已經(jīng)工業(yè)化生產(chǎn)，抗體的來(lái)源有可靠的保障。
所述的通過(guò)溶液混合偶聯(lián)為在水溶液、純水或有機(jī)單質(zhì)及其溶液中混合偶聯(lián)。
所述的靶向藥物在注射劑中為納米顆粒是為了使靶向藥物具有良好的穿透性，并且具有與肝癌、胃癌和腸癌細(xì)胞良好的特異性和親和性。
所述的靶向藥物通過(guò)注射主動(dòng)靶向高倍濃聚定位為靶向藥物主動(dòng)靶向濃聚定位在癌癥病灶的濃度是正常組織血液中藥物濃度的1-1000倍。
所述的靶向藥物在磁熱療治療儀的交變磁場(chǎng)作用下的磁滯生熱能力為10-7000W/gFe。
所述的靶向藥物注射劑包括靶向藥物偶聯(lián)后制成的注射劑和臨用前用靶向藥物干燥固體粉體配制的注射劑。靶向藥物制成干燥固體粉體有利于藥物長(zhǎng)期儲(chǔ)存和性能保持穩(wěn)定。
所述的復(fù)合溶媒或純水的靶向藥物注射劑為靶向藥物分散在生理鹽水、PBS、聚乙二醇、核苷酸等溶有無(wú)機(jī)、有機(jī)、生物、非生物物質(zhì)的復(fù)合溶媒中或純水中的制劑，其中靶向藥物與復(fù)合溶媒或純水的重量比例為1∶0.5～100，注射劑溶媒中純水與無(wú)機(jī)或有機(jī)或生物或非生物物質(zhì)的重量比例為1∶0～0.20。
本發(fā)明的靶向藥物是由抗人肝癌單克隆抗體HAb18或其片段HAb18F(ab′)2和HAb18Fab與不同粒徑的納米磁粉偶聯(lián)構(gòu)成的納米顆粒藥物，由于藥物實(shí)現(xiàn)了納米化，其在體內(nèi)具有良好的穿透性、生物相容性、在血液中具有長(zhǎng)循環(huán)穩(wěn)定性，使它不僅具有抗體導(dǎo)向的主動(dòng)靶向功能，而且具有載磁藥物的磁性靶向功能和利用腫瘤的EPR效應(yīng)(enhanced permeability and retention effect)的納米藥物顆粒的被動(dòng)靶向功能，是一種具有主動(dòng)靶向功能和多種其它靶向功能的復(fù)合靶向藥物。
本發(fā)明的靶向藥物中HAb18F(ab′)2和HAb18Fab是用酶切法制備的抗人肝癌單克隆抗體HAb18片段，分子量較小，比HAb18更易穿透到達(dá)癌癥病灶。采用抗人肝癌單克隆抗體HAb18片段HAb18F(ab′)2和HAb18Fab構(gòu)成的磁熱療用納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18靶向藥物具有更好穿透功能和靶向功能。
本發(fā)明的靶向藥物以納米磁粉為磁熱療用磁熱種子、抗體為導(dǎo)向分子，其中的納米磁粉可以通過(guò)動(dòng)靜脈或腹腔注射或?qū)氲冉o藥途徑，在抗體的導(dǎo)向等靶向功能作用下，實(shí)現(xiàn)藥物主動(dòng)靶向濃聚定位在肝癌、胃癌和腸癌病灶，在磁熱療治療儀交變磁場(chǎng)的作用下，患者病灶的納米磁粉產(chǎn)生顯著的磁滯生熱效應(yīng)，使癌癥病灶迅速升溫至42-95℃，對(duì)癌癥進(jìn)行42-48℃的磁熱療治療，也可以進(jìn)行高于48℃的磁熱療治療。
本發(fā)明的磁熱療用靶向藥物的應(yīng)用通?？梢酝ㄟ^(guò)1次1小時(shí)以及1小時(shí)以上的磁熱療有效殺滅肝癌、胃癌和腸癌，甚至使腫瘤完全消退；也可以通過(guò)多次1小時(shí)以及1小時(shí)以上的磁熱療有效殺滅肝癌、胃癌和腸癌，甚至使腫瘤完全消退。
本發(fā)明的靶向藥物中納米磁粉可以生物降解，通常治療用藥物劑量小于100mg，它的應(yīng)用具有生物降解性和無(wú)毒副作用的特點(diǎn)。
本發(fā)明的靶向藥物不僅可以用于肝癌、胃癌和腸癌的靶向磁熱療治療，而且可以用于肝癌、胃癌和腸癌靶向磁熱療預(yù)防，即可以用于已經(jīng)檢測(cè)到的和未檢測(cè)到的肝癌、胃癌和腸癌腫瘤的主動(dòng)靶向磁熱療治療，僅有極小肝癌、胃癌和腸癌腫瘤且影象設(shè)備無(wú)法檢測(cè)到的早期肝癌、胃癌和腸癌腫瘤的主動(dòng)靶向磁熱療治療，肝癌、胃癌和腸癌僅有幾個(gè)細(xì)胞時(shí)的早期腫瘤的主動(dòng)靶向磁熱療治療，肝癌、胃癌和腸癌轉(zhuǎn)移細(xì)胞和癌栓的主動(dòng)靶向磁熱療殺滅治療，以及正常人定期和不定期的肝癌、胃癌和腸癌細(xì)胞主動(dòng)靶向磁熱療殺滅的預(yù)防性治療。
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。
實(shí)施例1將粒徑分布范圍為1～5nm、約10nm和10～40nm、30～50nm、50～100nm、100～150nm與950nm并分別經(jīng)油酸鈉、正癸酸、聚乙二醇等進(jìn)行表面改性修飾或分別經(jīng)葡聚糖、脂質(zhì)體、納米SiO2等進(jìn)行包裹包被或未經(jīng)表面修飾改性和包裹包被的超順磁性和亞鐵磁性納米磁粉與抗人肝癌單克隆抗體HAb18片段HAb18F(ab′)2分別以重量配比為1∶0.2、1∶0.1和1∶0.1、1∶0.05、1∶0.001、1∶0.0001在水溶液中混合偶聯(lián)制得納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18靶向藥物。采用Zetasizer3000激光粒度分析儀測(cè)定表明，由粒徑分布范圍為1～5nm、約10nm和10～40nm、30～50nm、50～100nm、100～150nm與950nm的納米磁粉制得的靶向藥物粒徑分布范圍分別為15～20nm、約20nm和20～70nm、40～80nm、60～130nm、110～180nm與960～1000nm，其中納米磁粉與油酸鈉、正癸酸、聚乙二醇的原料重量投料比例分別為1∶0.0001、1∶0.05、1∶0.20，納米磁粉與葡聚糖、脂質(zhì)體、納米SiO2的原料重量投料比例分別為1∶0.01、1∶0.1、1∶5.0，納米磁粉的表面改性修飾和包裹包被對(duì)藥物的顆粒粒徑有不同程度的影響。
實(shí)施例2經(jīng)JEM-2010 UHR高分辨率透射電鏡分析表明，上述實(shí)施例1中由顆粒粒徑約10nm的超順磁性納米磁粉與抗人肝癌單克隆抗體HAb18片段HAb18F(ab′)2偶聯(lián)構(gòu)成的靶向藥物的顆粒粒徑約為20nm，藥物中納米磁粉與抗體形成了良好的偶聯(lián)，藥物的納米磁粉表面偶聯(lián)著1個(gè)抗人肝癌單克隆抗體HAb18片段HAb18F(ab′)2。
實(shí)施例3(1)將原料重量比例為1∶0.005的納米磁粉與油酸鈉在水中混合后，再將原料重量比例為1∶0.005的納米磁粉與十二烷基硫酸鈉在水中混合制成納米磁粉經(jīng)過(guò)2次修飾改性的功能化表面。(2)將原料重量比例為1∶0.01的納米磁粉與聚乙二醇在水中混合后，再將原料重量比例為1∶1.5的納米磁粉與二氧化硅納米顆粒在水中混合制成納米磁粉經(jīng)過(guò)1次改性和1次包裹的功能化表面。(3)將原料重量比例為1∶0.01的納米磁粉與聚乙二醇在水中混合后，再將溶于乙醇的脂質(zhì)體溶液與水中的聚乙二醇改性納米磁粉混合制成經(jīng)過(guò)1次改性和1次包被的功能化表面，其中納米磁粉與脂質(zhì)體的原料重量比例為1∶0.5。
實(shí)施例4將上述實(shí)施例1中的靶向藥物經(jīng)濃度1％的PBS水溶液洗滌后再離心，除去上清，分別用純水、濃度1％的PBS水溶液、核苷酸水溶液(其中注射劑溶媒中純水與核苷酸的重量比例為1∶0.20)制成靶向藥物與純水、濃度1％的PBS水溶液、核苷酸水溶液的重量比例為1∶0.5、1∶10和1∶100的靶向藥物注射劑。
實(shí)施例5將上述實(shí)施例1中的靶向藥物經(jīng)濃度1％的生理鹽水洗滌后再離心，除去上清，經(jīng)冷凍干燥制成靶向藥物固體粉體。
實(shí)施例6
(1)ELISA實(shí)驗(yàn)測(cè)得顆粒粒徑為40～80nm的納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18靶向藥物的免疫活性為57％。(2)體外穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明，顆粒粒徑為40～80nm的納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18靶向藥物注射液經(jīng)37℃孵育24小時(shí)，無(wú)論在生理鹽水中還是人血清白蛋白中，納米磁粉脫落都小于5％，納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18靶向藥物在體外穩(wěn)定。
實(shí)施例7(1)將顆粒粒徑為50～100nm的鐵磁性納米磁粉(其磁滯生熱功率為10W/gFe)-抗人肝癌單克隆抗體HAb18靶向藥物與人肝癌細(xì)胞HHCC混合，在超聲功率為1～25W時(shí)經(jīng)Zetasizer2000激光粒度分析儀檢測(cè)，納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18靶向藥物與癌細(xì)胞以及納米磁粉顆粒與抗體結(jié)合不脫落。(2)將顆粒粒徑為20～70nm的納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18靶向藥物與人肝癌細(xì)胞HHCC、血細(xì)胞、正常肝細(xì)胞混合在一起，經(jīng)磁分離后，僅有人肝癌細(xì)胞HHCC在磁場(chǎng)下滯留，血細(xì)胞和正常肝細(xì)胞與人肝癌細(xì)胞HHCC完全分離。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，納米磁粉與抗人肝癌單克隆抗體HAb18具有較強(qiáng)的偶聯(lián)結(jié)合力和穩(wěn)定性，納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18靶向藥物與人肝癌細(xì)胞HHCC具有良好的靶向性和較強(qiáng)的親和力，納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18靶向藥物與血液和肝臟等具有良好的生物相容性。
實(shí)施例8將荷人肝癌細(xì)胞HHCC裸鼠尾靜脈注射顆粒粒徑為20～50nm的納米磁粉(其磁滯生熱功率為7000W/gFe)-抗人肝癌單克隆抗體HAb18靶向藥物30mg后30分鐘后處死，取腫瘤和心、腦、脾、腎、腸、肝等重要器官進(jìn)行掃描電鏡研究。電鏡和能譜分析結(jié)果表明，注射靶向藥物的裸鼠腫瘤毛細(xì)血管血液中和腫瘤組織中Fe元素(Fe元素是納米磁粉的主要元素，約占納米磁粉重量的70％。)占組織中Fe、Ca、Si、Al、Mg、K、Na、P、O、C等10種主要元素的重量比例分別從對(duì)照組(未注射靶向藥物的)裸鼠腫瘤毛細(xì)血管血液中和腫瘤組織中的0.08％和0％提高到24.38％和0.76％，并且也高于注射靶向藥物的裸鼠非腫瘤血管血液中的0.14％、正常肝臟組織中的0.14％和其它器官中的0.14％以下。靶向藥物在裸鼠腫瘤毛細(xì)血管血液中和腫瘤組織中比對(duì)照組(未注射靶向藥物的)裸鼠腫瘤毛細(xì)血管血液中和腫瘤組織中以及注射靶向藥物的裸鼠非腫瘤血管血液中和正常肝組織中分別增高304倍和-(由于對(duì)照組腫瘤中測(cè)不到Fe，無(wú)法計(jì)算)以174倍和174倍，既靶向藥物在腫瘤中的含藥量至少高于其它部位174倍，納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18靶向藥物在體內(nèi)具有顯著的靶向性能，能使靶向藥物靶向濃聚定位在腫瘤病灶，而在其他部位不聚集。
實(shí)施例9取荷人肝癌細(xì)胞HHCC裸鼠16只，測(cè)定并計(jì)算腫瘤體積后，按腫瘤體積隨機(jī)分成兩組，第一組為對(duì)照組，每只裸鼠腫瘤部位注射純水0.3ml，第二組每只裸鼠腹腔注射含有30mg納米磁粉(其磁滯生熱功率為2000W/gFe)-抗人肝癌單克隆抗體HAb18靶向藥物的注射劑0.3ml，將第二組裸鼠置入磁熱療治療儀交變磁場(chǎng)下42-43℃治療65分鐘2次，治療10天后處死上述裸鼠、分離腫瘤，稱取腫瘤重量。結(jié)果表明，第一組瘤重2.97±0.65g，第二組瘤重1.02±0.31g，治療組的抑瘤率為66％，P值小于0.01。
實(shí)施例10取荷人肝癌細(xì)胞HHCC裸鼠16只，測(cè)定并計(jì)算腫瘤體積后，按腫瘤體積隨機(jī)分成兩組，第一組為對(duì)照組，每只裸鼠腫瘤部位注射純水0.3ml，第二組每只裸鼠尾靜脈注射含有50mg納米磁粉(其磁滯生熱功率為300W/gFe)-抗人肝癌單克隆抗體HAb18片段HAb18F(ab′)2靶向藥物的注射劑0.3ml，將第二組裸鼠置入磁熱療治療儀交變磁場(chǎng)下42-43℃治療1小時(shí)，治療10天后處死上述裸鼠、分離腫瘤，稱取腫瘤重量。結(jié)果表明，第一組瘤重2.97±0.65g，第二組瘤重0.12±0.31g，治療組的抑瘤率為96％，P值小于0.01，并且其中2只裸鼠腫瘤完全消退，2只裸鼠腫瘤殘余組織病理圖片分析發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞全部凝固性壞死，3只裸鼠腫瘤殘余組織病理圖片分析發(fā)現(xiàn)僅有少量未壞死腫瘤細(xì)胞。同時(shí)，在治療后十天對(duì)第二組裸鼠進(jìn)行體重和不良反應(yīng)觀測(cè)，未見(jiàn)明顯異常，裸鼠處死后，取心、腦、脾、腎、腸、肝等重要器官做病理檢查，未見(jiàn)明顯異常。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，采用納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18靶向藥物進(jìn)行磁熱療可以實(shí)現(xiàn)靶向、高效、安全、無(wú)毒副作用殺滅腫瘤，甚至使腫瘤完全消退，納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18靶向藥在肝癌靶向治療中有重要的應(yīng)用價(jià)值。
值得指出的是，選用納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18靶向藥用于其它與抗體具有較高特異性和親和性的肝癌、胃癌和腸癌的靶向磁熱療治療和預(yù)防也可以取得同上的治療和預(yù)防效果。
實(shí)施例11取小白鼠和豚鼠各10只，在小白鼠和豚鼠腹腔分別注射0.5ml含0.3g和1.5ml含1.0g的納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18靶向藥物，觀察7天和30天后未見(jiàn)不良反應(yīng)和體重下降，處死后，取心、腦、脾、腎、腸、肝等重要器官切片做病理檢查，未見(jiàn)明顯異常。觀察30天后處死后，取心、腦、脾、腎、腸、肝等重要器官做磁熱療治療試驗(yàn)，未見(jiàn)發(fā)熱出現(xiàn)。通常腫瘤磁熱療治療僅需要20～100mg納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18靶向藥物，從上述初步毒副實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，本發(fā)明的納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18靶向藥物具有生物降解性和無(wú)毒副作用。
權(quán)利要求
1.一種磁熱療用納米磁粉-抗人肝癌單抗HAb18靶向藥物，其特征在于(1)以具有磁滯生熱能力的納米磁粉為效應(yīng)分子、以抗人肝癌單抗HAb18為導(dǎo)向分子，將納米磁粉與抗體通過(guò)溶液混合偶聯(lián)制成具有主動(dòng)靶向、磁性靶向和被動(dòng)靶向功能的磁熱療用納米靶向藥物，納米磁粉與抗體的重量配比為1∶0.0001～0.20，靶向藥物的顆粒粒徑為5～1000nm，靶向藥物的納米磁粉表面偶聯(lián)有抗體1個(gè)或多個(gè)抗體并且偶聯(lián)抗體具有生物活性；(2)靶向藥物的劑型為注射劑，在注射劑中藥物分散為納米顆粒，具有良好的穿透性以及與相關(guān)的癌癥癌細(xì)胞具有良好的特異性和親和性；(3)靶向藥物通過(guò)注射主動(dòng)靶向濃聚定位在與抗體具有較高特異性和親和性的癌癥病灶，靶向藥物在癌癥病灶的濃度達(dá)到正常組織血液中藥物濃度的1-1000倍；(4)濃聚定位在癌癥病灶的靶向藥物在磁熱療治療儀交變磁場(chǎng)的作用下產(chǎn)生磁滯生熱效應(yīng)，磁滯生熱能力為10-7000W/gFe，加熱癌癥腫瘤至42-95℃，殺滅癌癥腫瘤；(5)靶向藥物具有生物降解功能，藥物應(yīng)用劑量通常小于100mg，用于癌癥磁熱療治療和預(yù)防沒(méi)有毒副作用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磁熱療用納米磁粉-抗人肝癌單抗HAb18靶向藥物，其特征在于所述的納米磁粉為顆粒粒徑1～5nm、5～10nm、10～20nm、20～40nm、30～50nm、50～100nm、1～100nm以及100～1000nm，納米磁粉表面經(jīng)過(guò)表面活性劑、表面改性劑改性、修飾或有機(jī)、無(wú)機(jī)物質(zhì)包裹、包被或未經(jīng)改性修飾和包裹包被的鐵磁性、亞鐵磁性和超順磁性納米磁粉。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的磁熱療用納米磁粉-抗人肝癌單抗HAb18靶向藥物，其特征在于其中的表面活性劑和表面改性包括十二烷基硫酸鈉、油酸鈉、正癸酸、聚乙二醇、葡聚糖、核苷酸、多肽，納米磁粉與表面活性劑或表面改性劑的原料重量比例為1∶0.0001～0.20。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的磁熱療用納米磁粉-抗人肝癌單抗HAb18靶向藥物，其特征在于有機(jī)物質(zhì)包括脂質(zhì)體、聚乳酸、聚己內(nèi)酯、蛋白質(zhì)；無(wú)機(jī)物質(zhì)包括二氧化硅納米顆粒、氧化鋁納米顆粒、金納米顆粒；納米磁粉與有機(jī)或無(wú)機(jī)物質(zhì)的原料重量比例為1∶0.01～5.0。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磁熱療用納米磁粉-抗人肝癌單抗HAb18靶向藥物，其特征在于所述的抗人肝癌單克隆抗體HAb18為抗人肝癌單克隆抗體HAb18、抗人肝癌單克隆抗體HAb18片段HAb18F(ab′)2和HAb18Fab。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磁熱療用納米磁粉-抗人肝癌單抗HAb18靶向藥物，其特征在于所述的通過(guò)溶液混合偶聯(lián)為在水溶液、純水或有機(jī)單質(zhì)及其溶液中混合偶聯(lián)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磁熱療用納米磁粉-抗人肝癌單抗HAb18靶向藥物，其特征在于所述的靶向藥物注射劑包括靶向藥物偶聯(lián)后制成的注射劑和臨用前用靶向藥物干燥固體粉體配制的注射劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或7所述的磁熱療用磁熱療用納米磁粉-抗人肝癌單抗HAb18靶向藥物，其特征在于所述的復(fù)合溶媒或純水的靶向藥物注射劑為靶向藥物分散在生理鹽水、磷酸鹽緩沖液(PBS)、聚乙二醇、核苷酸等溶有無(wú)機(jī)、有機(jī)、生物、非生物物質(zhì)的復(fù)合溶媒中或純水中的制劑，其中靶向藥物與復(fù)合溶媒或純水的重量比例為1∶0.5～100，注射劑溶媒中純水與無(wú)機(jī)或有機(jī)或生物或非生物物質(zhì)的重量比例為1∶0～0.20。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種肝癌、胃癌和腸癌磁熱療用納米磁粉－抗人肝癌單克隆抗體HAb18或其片段HAb18F(ab′)
文檔編號(hào)A61K39/395GK1785430SQ20051009500
公開(kāi)日2006年6月14日 申請(qǐng)日期2005年10月25日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月25日
發(fā)明者朱宏, 陳志南 申請(qǐng)人:南京工業(yè)大學(xué)