專利名稱：一種注射用多烯磷脂酰膽堿凍干粉針劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，具體地說(shuō)涉及一種注射用多烯磷脂酰膽堿凍干粉針劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
多烯磷脂酰膽堿(Polyene Phosphatidyl choline)是卵磷脂的甘油三酯骨架上不飽和脂肪酸鍵含有花生四烯酸(AA)和二十二碳六烯酸(DHA)的磷脂酰膽堿，為一種人體內(nèi)不能合成的必需磷脂，含有大量的不飽和脂肪酸(主要為亞油酸、亞麻酸和油酸等)。其對(duì)肝臟有很好的保護(hù)作用以及對(duì)受損的肝細(xì)胞有修復(fù)再生作用，是一種肝細(xì)胞膜保護(hù)劑，能治療多種肝臟疾病如肝炎、慢性肝炎、肝壞死、肝硬化、肝昏迷(包括前驅(qū)肝昏迷)、脂肪肝(也見(jiàn)于糖尿病人)等，此藥為目前療效最為肯定的一個(gè)保肝藥物。此外其還可用于治療膽汁阻塞、中毒；預(yù)防膽結(jié)石復(fù)發(fā)；手術(shù)前后的治療，尤其是肝膽手術(shù)、妊娠中毒。
目前多烯磷脂酰膽堿有膠囊等口服劑型，服用方便但起效慢，口服6小時(shí)后血藥濃度才能達(dá)到峰值，不能滿足急重患者的需求。公開(kāi)號(hào)為CN1602878A的中國(guó)專利公開(kāi)了一種多烯磷脂酰膽堿注射液的制備方法，其注射液中加入了大量的膽酸類增溶劑和防腐劑苯甲醇，使得此產(chǎn)品禁用于新生兒和早產(chǎn)兒，且易使患者發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)。另一方面多烯磷脂酰膽堿注射液穩(wěn)定性差，貯藏溫度必須低于8℃，給藥品貯存、運(yùn)輸，給藥等帶來(lái)不便，也帶來(lái)了用藥安全的隱患。因此，臨床迫切需要一種質(zhì)量低或無(wú)過(guò)敏反應(yīng)、質(zhì)量穩(wěn)定可靠、給藥安全、使用方便且起效快的多烯磷脂酰膽堿注射制劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供多烯磷脂酰膽堿凍干粉針劑及其制備方法。
本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供多烯磷脂酰膽堿凍干粉針劑在治療肝臟疾病如肝炎、慢性肝炎、肝壞死、肝硬化、肝昏迷、脂肪肝中的用途。
在溶液配制過(guò)程中，我們著重對(duì)增溶劑的選擇和增溶劑的用量做了研究。因多烯磷脂酰膽堿不易溶于水，需加入增溶劑，我們嘗試了多種增溶劑，包括脫/去氧膽酸鈉、脫/去氫膽酸鈉、膽酸鈉、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氫化蓖麻油、泊洛沙姆188、山梨酯類等可用于靜脈注射的增溶劑。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明膽酸類增溶劑的增溶效果最好。
由于增溶劑用量太大會(huì)產(chǎn)生刺激性等不良反應(yīng)，且隨著增溶劑量的增加，給凍干工藝帶來(lái)困難，為控制凍干制劑中固體添加物的量以及保證用藥安全，通過(guò)實(shí)驗(yàn)得到在保證凍干前溶液配制過(guò)程中多烯磷脂酰膽堿充分溶解的前提下，所添加的增溶劑與多烯磷脂酰膽堿的重量比為0.5～2.5∶1，但在隨后的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中我們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，增溶劑用量過(guò)大可能會(huì)產(chǎn)生刺激、過(guò)敏等問(wèn)題。我們分別用增溶劑與多烯磷脂酰膽堿重量比為0.5、1.5、2.0、2.5的溶液，按照藥品審評(píng)中心《化學(xué)藥物刺激性、過(guò)敏性和溶血性研究指導(dǎo)原則》(2005年3月19-21頁(yè))進(jìn)行過(guò)敏性試驗(yàn)、局部刺激性、血管刺激性和溶血性試驗(yàn)，其中我們選用了脫/去氧膽酸鈉、脫/去氫膽酸鈉、膽酸鈉這三個(gè)增溶效果較好的增溶劑，結(jié)果表明增溶劑與多烯磷脂酰膽堿重量比為0.5、1.5時(shí)為陰性，當(dāng)增溶劑與多烯磷脂酰膽堿的重量比超過(guò)1.5∶1時(shí)，會(huì)有明顯的過(guò)敏反應(yīng)，因此合適的增溶劑與多烯磷脂酰膽堿的重量比為0.5～1.5∶1。另外增溶劑水溶液有一定的粘度，其用量的增加會(huì)給凍干過(guò)程帶來(lái)困難，且凍干制劑中固體添加物的量需要控制，還有增溶劑用量盡量要少但溶解這一步不能太慢，結(jié)合這幾方面的考慮，優(yōu)選的增溶劑與多烯磷脂酰膽堿的重量比為0.7～1.2∶1。
另外，在添加了增溶劑后，溶液粘性變大，對(duì)凍干過(guò)程不利，影響凍干產(chǎn)品的外觀，為克服凍干過(guò)程存在的困難，保證凍干制品的外觀和質(zhì)量，可以進(jìn)一步加入凍干賦形劑。所用的凍干賦形劑為甘露醇、葡萄糖、乳糖、蔗糖、水解明膠、海藻糖、葡聚糖、右旋糖酐、甘氨酸、甘氨酸鈉、丙氨酸、白蛋白、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、山梨醇、麥芽糖、環(huán)糊精、枸櫞酸、枸櫞酸鈉的一種或一種以上的混合物。通過(guò)對(duì)比實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，其中甘露醇、葡萄糖、乳糖、水解明膠、蔗糖作為賦形劑能夠得到白色疏松、均勻一致、整體性好、含水量低、復(fù)水性好的凍干粉，因此凍干賦形劑優(yōu)選甘露醇、葡萄糖、乳糖、水解明膠、蔗糖中的一種或一種以上的混合物。凍干賦形劑與多烯磷脂酰膽堿的重量比為0.1～4∶1，優(yōu)選的凍干賦形劑與多烯磷脂酰膽堿的重量比為0.3～2∶1。
本發(fā)明的注射用多烯磷脂酰膽堿凍干粉針劑由溶液配制、去除熱原、分裝和凍干四個(gè)基本步驟制備而成。
1)溶液配制取最終制備量3/5～9/10體積的注射用水，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入多烯磷脂酰膽堿、增溶劑，充分?jǐn)嚢枋蛊渫耆芙猓?)去除熱原在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入上述溶液體積0.05％～0.3％的活性炭，攪拌15～30分鐘，過(guò)濾脫炭，再補(bǔ)加注射用水至足量，用0.22微米微孔濾膜或G6垂熔玻璃濾器濾過(guò)，取濾液為中間體；3)分裝中間體經(jīng)檢查合格后，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下分裝于西林瓶中，半壓蓋；4)凍干分裝半壓蓋完畢后進(jìn)入凍干箱開(kāi)始預(yù)凍，預(yù)凍方法包括慢凍法和速凍法，預(yù)凍溫度低于中間體共晶點(diǎn)5～10℃以下，凍結(jié)完全后開(kāi)啟冷凝器制冷，冷凝器溫度降至-40℃以下時(shí)，開(kāi)啟真空泵，真空度迅速降低到10Pa左右，升華開(kāi)始，對(duì)擱板加熱，控制加熱速度為2～5℃/h，當(dāng)制品溫度達(dá)到中間體共晶點(diǎn)以下5～10℃時(shí)，停止對(duì)擱板加熱而保溫升華，直至觀察到制品冰層消失且箱內(nèi)壓力恢復(fù)時(shí)開(kāi)始加熱進(jìn)入再干燥階段，控制加熱速度為4～10℃/h，加熱至制品所允許的最高溫度40℃時(shí)不再加熱而保溫干燥，干燥至各層擱板和制品的溫度趨于一致后，再保溫干燥3～6小時(shí)，最終做壓力升高試驗(yàn)判斷干燥終點(diǎn)，干燥完畢后，通入干燥高純氮?dú)?，箱?nèi)壓塞，出箱，鎖鋁蓋；以上制備過(guò)程中從膜濾或G6垂熔玻璃濾器過(guò)濾到分裝和凍干全無(wú)菌操作。
實(shí)驗(yàn)證明活性炭對(duì)多烯磷脂酰膽堿沒(méi)有吸附，將多烯磷脂酰膽堿和輔料一起進(jìn)行活性炭處理簡(jiǎn)化了工藝步驟，同時(shí)也完全能保證最終制品熱源或細(xì)菌內(nèi)毒素符合要求。
本發(fā)明的注射用多烯磷脂酰膽堿凍干粉為白色或類白色塊狀物，色澤均勻一致。對(duì)其進(jìn)行酸堿度檢查、溶液澄清度與顏色檢查、可見(jiàn)異物檢查、不溶性微粒檢查、無(wú)菌檢查、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，結(jié)果均符合中國(guó)藥典2005版的規(guī)定。
對(duì)本發(fā)明的注射用多烯磷脂酰膽堿凍干粉進(jìn)行了穩(wěn)定性考察將其分別置于光照強(qiáng)度為4500lx±500lx的照射條件下和高溫40℃條件下，于第5天和第10天取樣，按穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)。與0天相比較，各項(xiàng)指標(biāo)均未發(fā)生明顯變化，表明本發(fā)明的注射用多烯磷脂酰膽堿凍干粉針劑具有良好的穩(wěn)定性。
我們對(duì)本發(fā)明的注射用多烯磷脂酰膽堿凍干粉針劑進(jìn)行了初步的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，結(jié)果證明其對(duì)肝臟疾病，如肝炎、慢性肝炎、肝壞死、肝硬化、肝昏迷、脂肪肝具有良好的效果。
令人驚奇的是我們使用了三種膽酸類增溶劑脫/去氧膽酸鈉、脫/去氫膽酸鈉、膽酸鈉制備的樣品進(jìn)行了對(duì)比實(shí)驗(yàn)，加入了脫/去氧膽酸鈉樣品相比于使用其它膽酸類增溶劑的試樣和普通注射劑型具有更加良好的療效，這表明脫/去氧膽酸鈉與多烯磷脂酰膽堿產(chǎn)生保肝協(xié)同作用，因此更適合于多烯磷脂酰膽堿注射劑的制備。
本發(fā)明的多烯磷脂酰膽堿凍干粉針劑在制備過(guò)程中使用無(wú)菌低溫操作，避免了高溫滅菌對(duì)活性成分造成的破壞；不加入苯甲醇及其它易引起過(guò)敏的添加劑，提高了用藥的安全性；其加入的膽酸類增溶劑不僅改善了多烯磷脂酰膽堿的溶解性更增強(qiáng)了多烯磷脂酰膽堿的藥物活性，其在優(yōu)選的用量條件下不僅保證了良好的增溶效果更將可能的過(guò)敏反應(yīng)等副作用減至最低；克服了普通注射劑型中活性成分穩(wěn)定性差的技術(shù)問(wèn)題，無(wú)需低溫貯藏，得到了在安全性、質(zhì)量穩(wěn)定性和藥用活性方面與現(xiàn)有技術(shù)相比有顯著提高的注射用多烯磷脂酰膽堿凍干粉針劑。
具體實(shí)施例方式
下面以本發(fā)明的實(shí)施例為基礎(chǔ)詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明不局限于此。
實(shí)施例1制劑配方

單次制備1000瓶的制備方法如下1)溶液配制(在氮?dú)獗Ｗo(hù)下完成)將多烯磷脂酰膽堿和去氧膽酸鈉加入到最終制備量4/5注射用水中，并充分?jǐn)嚢柚寥芙夥稚⒕鶆颉?br> 2)去除熱原(在氮?dú)獗Ｗo(hù)下完成)
加入3.5g活性炭攪拌15分鐘，用抽濾漏斗鋪兩層濾紙過(guò)濾脫炭。取濾液補(bǔ)加注射用水至足量，過(guò)0.22μm濾膜，得中間體。
3)分裝(在氮?dú)獗Ｗo(hù)下完成)中間體經(jīng)檢查合格后，根據(jù)中間體含量分裝于西林瓶中，半壓蓋。
4)凍干測(cè)取中間體的共晶點(diǎn)為-25℃。分裝半壓蓋完畢后，進(jìn)箱凍干。預(yù)凍溫度-35℃，達(dá)到預(yù)凍溫度后維持2.5小時(shí)，完全凍結(jié)。開(kāi)啟冷凝器制冷，冷凝器溫度降至-40℃以下時(shí)，開(kāi)啟真空泵，真空度迅速降低到10Pa左右。升華開(kāi)始，對(duì)擱板加熱升溫，升溫速率為2℃/小時(shí)，擱板升溫至-15℃保溫升華。隨著固體冰升華進(jìn)行，箱內(nèi)壓力上升，樣品水層逐漸降低。待樣品水層消失，壓力恢復(fù)，升華階段基本結(jié)束。進(jìn)入再干燥階段，對(duì)擱板加熱，以8℃/小時(shí)的升溫速率升溫至樣品允許最高溫度40℃，保溫干燥，當(dāng)各層擱板、樣品溫度基本上一致時(shí)，再保溫干燥4小時(shí)，做壓力升高試驗(yàn)判斷干燥終點(diǎn)，終點(diǎn)達(dá)到后，結(jié)束整個(gè)干燥過(guò)程。通入干燥高純氮?dú)?，箱?nèi)壓塞。停機(jī)出箱。鎖鋁蓋。
實(shí)施例2制劑配方

單次制備1000瓶的制備方法如下1)溶液配制(在氮?dú)獗Ｗo(hù)下完成)將多烯磷脂酰膽堿、去氧膽酸鈉和乳糖加入到最終制備量7/10注射用水中，并充分?jǐn)嚢柚寥芙夥稚⒕鶆颉?br> 2)去除熱原(在氮?dú)獗Ｗo(hù)下完成)加入4g活性炭攪拌20分鐘，用抽濾漏斗鋪兩層濾紙過(guò)濾脫炭。取濾液補(bǔ)加注射用水至足量，過(guò)0.22μm濾膜，得中間體。
實(shí)施例7 本發(fā)明的體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)材料人白血病細(xì)胞株K562，陽(yáng)性對(duì)照藥阿霉素。
試劑青蒿素，純度99.18％，配制5mmol/L儲(chǔ)存液，避光4℃保存。用前由RPMI21640稀釋至所需濃度。Fluo23/AM(Sigma)。RPMI21640培養(yǎng)基含10％的新生牛血清，青霉素、鏈霉素各100U/ml。
實(shí)驗(yàn)方法細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞株K562，培養(yǎng)液，37℃、5％CO2孵箱中，常規(guī)傳代培養(yǎng)。24h后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表1、青蒿素脂肪乳體外對(duì)腫瘤細(xì)胞K562生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)

實(shí)施例8 本發(fā)明的體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法分別取生長(zhǎng)旺盛的小鼠肝癌(QGY)腫瘤、小鼠肉瘤180，用生理鹽水勻漿制備成不同濃度的細(xì)胞懸液，接種于裸鼠右腋部皮下，0.2ml～5ml/鼠，于接種后次日隨機(jī)分組并開(kāi)始給藥。接種后約10～30d解剖動(dòng)物，取瘤稱重，計(jì)算瘤重抑制率。
陽(yáng)性對(duì)照組給予環(huán)磷酰胺，取藥液20ml加注射用水20ml，稀釋<p>實(shí)施例4制劑配方

單次制備1000瓶的制備方法如下1)溶液配制(在氮?dú)獗Ｗo(hù)下完成)將多烯磷脂酰膽堿、去氫膽酸鈉和甘露醇加入到最終制備量3/4注射用水中，并充分?jǐn)嚢柚寥芙夥稚⒕鶆颉?br> 2)去除熱原(在氮?dú)獗Ｗo(hù)下完成)加入3g活性炭攪拌20分鐘，用抽濾漏斗鋪兩層濾紙過(guò)濾脫炭。取濾液補(bǔ)加注射用水至足量，過(guò)0.22μm濾膜，得中間體。
3)分裝(在氮?dú)獗Ｗo(hù)下完成)中間體經(jīng)檢查合格后，根據(jù)中間體含量分裝于西林瓶中，半壓蓋。
4)凍干測(cè)取中間體的共晶點(diǎn)為-19℃。凍干過(guò)程同實(shí)施例1，主要凍干工藝參數(shù)為預(yù)凍溫度-30℃，預(yù)凍達(dá)溫后維持時(shí)間2h，升華階段冷凝器溫度-50℃，真空度5-10Pa，擱板溫度上限-10℃，升溫速率3℃/h。再干燥階段擱板溫度上限40℃，升溫速率6℃/h。保溫干燥4小時(shí)。
實(shí)施例5制劑配方


單次制備1000瓶的制備方法如下1)溶液配制(在氮?dú)獗Ｗo(hù)下完成)將多烯磷脂酰膽堿、去氧膽酸鈉和蔗糖加入到最終制備量3/4注射用水中，并充分?jǐn)嚢柚寥芙夥稚⒕鶆颉?br> 2)去除熱原(在氮?dú)獗Ｗo(hù)下完成)加入6g活性攪拌25分鐘，用抽濾漏斗鋪兩層濾紙過(guò)濾脫炭。取濾液補(bǔ)加注射用水至足量，過(guò)0.22μm濾膜，得中間體。
3)分裝(在氮?dú)獗Ｗo(hù)下完成)中間體經(jīng)檢查合格后，根據(jù)中間體含量分裝于西林瓶中，半壓蓋。
4)凍干測(cè)取中間體的共晶點(diǎn)為-22℃。凍干過(guò)程同實(shí)施例1，主要凍干工藝參數(shù)為預(yù)凍溫度-35℃，預(yù)凍達(dá)溫后維持時(shí)間2h，升華階段冷凝器溫度-50℃，真空度5-10Pa，擱板溫度上限-12℃，升溫速率2℃/h。再干燥階段擱板溫度上限40℃，升溫速率4℃/h。保溫干燥3小時(shí)。
實(shí)施例6制劑配方

單次制備1000瓶的制備方法如下1)溶液配制(在氮?dú)獗Ｗo(hù)下完成)將多烯磷脂酰膽堿、膽酸鈉、乳糖和甘露醇加入到最終制備量4/5注射用水中，并充分?jǐn)嚢柚寥芙夥稚⒕鶆颉?br> 2)去除熱原(在氮?dú)獗Ｗo(hù)下完成)
加入3g活性炭攪拌20分鐘，用抽濾漏斗鋪兩層濾紙過(guò)濾脫炭。取濾液補(bǔ)加注射用水至足量，過(guò)0.22μm濾膜，得中間體。
3)分裝(在氮?dú)獗Ｗo(hù)下完成)中間體經(jīng)檢查合格后，根據(jù)中間體含量分裝于西林瓶中，半壓蓋。
4)凍干測(cè)取中間體的共晶點(diǎn)為-24℃。凍干過(guò)程同實(shí)施例1，主要凍干工藝參數(shù)為預(yù)凍溫度-35℃，預(yù)凍達(dá)溫后維持時(shí)間2h，升華階段冷凝器溫度-50℃，真空度5-10Pa，擱板溫度上限-14℃，升溫速率4℃/h。再干燥階段擱板溫度上限40℃，升溫速率8℃/h。保溫干燥5小時(shí)。
實(shí)施例7制劑配方

制備方法如下1)溶液配制(在氮?dú)獗Ｗo(hù)下完成)將多烯磷脂酰膽堿、去氧膽酸鈉、水解明膠、甘露醇和乳糖加入到最終制備量9/10注射用水中，并充分?jǐn)嚢柚寥芙夥稚⒕鶆颉?br> 2)去除熱原(在氮?dú)獗Ｗo(hù)下完成)加入6g活性炭攪拌20分鐘，用抽濾漏斗鋪兩層濾紙過(guò)濾脫炭。取濾液補(bǔ)加注射用水至足量，過(guò)0.22μm濾膜，得中間體。
3)分裝(在氮?dú)獗Ｗo(hù)下完成)中間體經(jīng)檢查合格后，根據(jù)中間體含量分裝于西林瓶中，半壓蓋。
4)凍干測(cè)取中間體的共晶點(diǎn)為-21℃。凍干過(guò)程同實(shí)施例1，主要凍干工藝參數(shù)為預(yù)凍溫度-35℃，預(yù)凍達(dá)溫后維持時(shí)間2h，升華階段冷凝器溫度-50℃，真空度5-10Pa，擱板溫度上限-11℃，升溫速率3℃/h。再干燥階段擱板溫度上限40℃，升溫速率10℃/h。保溫干燥5小時(shí)。
實(shí)施例8制劑配方

單次制備1000瓶的制備方法如下1)溶液配制(在氮?dú)獗Ｗo(hù)下完成)將多烯磷脂酰膽堿、去氫膽酸鈉和磷酸二氫鈉加入到最終制備量3/4注射用水中，并充分?jǐn)嚢柚寥芙夥稚⒕鶆颉?br> 2)去除熱原(在氮?dú)獗Ｗo(hù)下完成)加入1.5g活性炭攪拌15分鐘，用抽濾漏斗鋪兩層濾紙過(guò)濾脫炭。取濾液補(bǔ)加注射用水至足量，過(guò)0.22μm濾膜，得中間體。
3)分裝(在氮?dú)獗Ｗo(hù)下完成)中間體經(jīng)檢查合格后，根據(jù)中間體含量分裝于西林瓶中，半壓蓋。
4)凍干測(cè)取中間體的共晶點(diǎn)為-22℃。凍干過(guò)程同實(shí)施例1，主要凍干工藝參數(shù)為預(yù)凍溫度-35℃，預(yù)凍達(dá)溫后維持時(shí)間2h，升華階段冷凝器溫度-50℃，真空度5-10Pa，擱板溫度上限-12℃，升溫速率4℃/h。再干燥階段擱板溫度上限40℃，升溫速率5℃/h。保溫干燥4小時(shí)。
實(shí)施例9制劑配方

單次制備1000瓶的制備方法如下1)溶液配制(在氮?dú)獗Ｗo(hù)下完成)將多烯磷脂酰膽堿、膽酸鈉、磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉加入到最終制備量4/5注射用水中，并充分?jǐn)嚢柚寥芙夥稚⒕鶆颉?br> 2)去除熱原(在氮?dú)獗Ｗo(hù)下完成)加入6g活性炭攪拌20分鐘，用抽濾漏斗鋪兩層濾紙過(guò)濾脫炭。取濾液補(bǔ)加注射用水至足量，過(guò)0.22μm濾膜，得中間體。
3)分裝(在氮?dú)獗Ｗo(hù)下完成)中間體經(jīng)檢查合格后，根據(jù)中間體含量分裝于西林瓶中，半壓蓋。
4)凍干測(cè)取中間體的共晶點(diǎn)為-21℃。凍干過(guò)程同實(shí)施例1，主要凍干工藝參數(shù)為預(yù)凍溫度-35℃，預(yù)凍達(dá)溫后維持時(shí)間2h，升華階段冷凝器溫度-50℃，真空度5-10Pa，擱板溫度上限-11℃，升溫速率3℃/h。再干燥階段擱板溫度上限40℃，升溫速率8℃/h。保溫干燥5小時(shí)。
實(shí)施例10去氧膽酸鈉的安全性實(shí)驗(yàn)一、過(guò)敏性試驗(yàn)1、試驗(yàn)材料(1)受試物分別用增溶劑與多烯磷脂酰膽堿重量比為0.5、1.5、2.0、2.5的去氧膽酸鈉配制溶液(無(wú)菌操作)，溶液標(biāo)號(hào)分別為①、②、③、④。試驗(yàn)時(shí)，取溶液5ml，加入5％葡萄糖注射液稀釋4倍成11.625mg/ml液，作為受試物低劑量組，取溶液5ml，作為受試物高劑量組。
(2)陰性對(duì)照物5％葡萄糖注射液，批號(hào)0503111，由南京正大天晴制藥有限公司提供。陽(yáng)性對(duì)照物牛血清白蛋白，批號(hào)140619-200415，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。試驗(yàn)時(shí)用5％葡萄糖注射液配成15mg/ml的溶液。
(3)動(dòng)物健康豚鼠96只，體重300～400g，雌雄各半，由南京新學(xué)人科技開(kāi)發(fā)有限公司提供，動(dòng)物合格證編號(hào)蘇動(dòng)質(zhì)SCXK(蘇)2002-00028。
2、試驗(yàn)方法對(duì)于每一個(gè)樣品溶液，分別取豚鼠12只，隨機(jī)分成2組，每組6只，2組分別給予受試物低劑量組、受試物高劑量組，再取12只豚鼠也隨機(jī)分成2組，每組6只，分別給予牛血清白蛋白和5％葡萄糖注射液，按無(wú)菌操作方法，隔日腹腔注射上述四種試液，每只注射體積為0.5ml，計(jì)注射5次，致敏期間每日觀察動(dòng)物癥狀，初次，最后一次致敏測(cè)每組動(dòng)物的體重。在末次注射后第10日，測(cè)定每組動(dòng)物的體重，然后由靜脈注射上述藥品進(jìn)行攻擊，每只注射體積為2ml(一次致敏劑量的4倍)，在注射后30分鐘內(nèi)，觀察是否出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)。并按表1癥狀詳細(xì)觀察每只豚鼠的反應(yīng)，根據(jù)癥狀的出現(xiàn)及消失時(shí)間，持續(xù)觀察3小時(shí)，最后按表2的反應(yīng)分類，判斷是否產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)。并計(jì)算出豚鼠的過(guò)敏反應(yīng)率。
表1豚鼠過(guò)敏反應(yīng)癥狀

表2反應(yīng)分類

3、試驗(yàn)結(jié)果四種不同去氧膽酸鈉用量配制成的多烯磷脂酰膽堿凍干溶液的過(guò)敏試驗(yàn)結(jié)果包括過(guò)敏反應(yīng)癥狀、過(guò)敏反應(yīng)分類及過(guò)敏發(fā)生率見(jiàn)表3表3不同去氧膽酸鈉用量的過(guò)敏試驗(yàn)結(jié)果

溶液①和②的低劑量組、高劑量組和陰性對(duì)照組豚鼠在注射后30分鐘至3小時(shí)內(nèi)，過(guò)敏反應(yīng)癥狀為正常，反應(yīng)分類為過(guò)敏反應(yīng)陰性，過(guò)敏反應(yīng)率均為0％。而注射牛血清白蛋白、溶液③和④的低劑量組、高劑量組后30分鐘內(nèi)，6只豚鼠分別出現(xiàn)不安、抓鼻、咳嗽、呼吸急促、排尿、呼吸困難、步態(tài)不穩(wěn)、喘息、側(cè)臥、潮式呼吸和死亡等過(guò)敏反應(yīng)癥狀，其中溶液③低劑量組反應(yīng)分類為過(guò)敏反應(yīng)陽(yáng)性，溶液③的高劑量組和溶液④低、高劑量組反應(yīng)分類為過(guò)敏反應(yīng)強(qiáng)陽(yáng)性，牛血清白蛋白反應(yīng)分類為過(guò)敏反應(yīng)極強(qiáng)陽(yáng)性。三者過(guò)敏反應(yīng)率分別為83％、100％、100％。
二、局部刺激性、血管刺激性和溶血性試驗(yàn)再按照藥品審評(píng)中心《化學(xué)藥物刺激性、過(guò)敏性和溶血性研究指導(dǎo)原則》(2005年3月第19-21頁(yè))，對(duì)溶液①、②、③、④進(jìn)行局部刺激性、血管刺激性和溶血性試驗(yàn)，結(jié)果均為陰性。
以上試驗(yàn)結(jié)果表明對(duì)于去氧膽酸鈉，增溶劑與多烯磷脂酰膽堿重量比為0.5～1.5是安全的。
實(shí)施例11去氫膽酸鈉和膽酸鈉的安全性實(shí)驗(yàn)分別用與多烯磷脂酰膽堿重量比為0.5∶1、1.5∶1和2.0∶1的去氫膽酸鈉以及膽酸鈉配制多烯磷脂酰膽堿凍干溶液(無(wú)菌操作)，按照藥品審評(píng)中心《化學(xué)藥物刺激性、過(guò)敏性和溶血性研究指導(dǎo)原則》(2005年3月19-21頁(yè))進(jìn)行過(guò)敏性試驗(yàn)、局部刺激性、血管刺激性和溶血性試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表4。
表4去氫膽酸鈉和膽酸鈉不同用量的安全情況

由表4所列試驗(yàn)結(jié)果可以看出增溶劑去氫膽酸鈉和膽酸鈉與多烯磷脂酰膽堿重量比為0.5～1.5∶1也是其安全用量范圍。
權(quán)利要求
1.一種注射用凍干粉針劑，其特征在于該制劑含有多烯磷脂酰膽堿和增溶劑。
2.權(quán)利要求1的注射用多烯磷脂酰膽堿凍干粉針劑，所述的增溶劑是脫/去氧膽酸鈉、脫/去氫膽酸鈉、膽酸鈉。
3.權(quán)利要求2的注射用多烯磷脂酰膽堿凍干粉針劑，所述的增溶劑是脫/去氧膽酸鈉。
4.權(quán)利要求1的注射用多烯磷脂酰膽堿凍干粉針劑，所述的增溶劑與多烯磷脂酰膽堿的重量比為0.5～1.5∶1。
5.權(quán)利要求4的注射用多烯磷脂酰膽堿凍干粉針劑，所述的增溶劑與多烯磷脂酰膽堿的重量比為0.7～1.2∶1。
6.權(quán)利要求1的注射用多烯磷脂酰膽堿凍干粉針劑，該制劑可進(jìn)一步含有凍干賦形劑。
7.權(quán)利要求6的注射用多烯磷脂酰膽堿凍干粉針劑，所述的凍干賦形劑選自甘露醇、葡萄糖、乳糖、蔗糖、水解明膠、海藻糖、葡聚糖、右旋糖酐、甘氨酸、甘氨酸鈉、丙氨酸、白蛋白、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、山梨醇、麥芽糖、環(huán)糊精、枸櫞酸、枸櫞酸鈉中的一種或一種以上的混合物。
8.權(quán)利要求7的注射用多烯磷脂酰膽堿凍干粉針劑，所述的凍干賦形劑選自甘露醇、葡萄糖、乳糖、水解明膠、蔗糖中的一種或一種以上的混合物。
9.權(quán)利要求6的注射用多烯磷脂酰膽堿凍干粉針劑，所述的凍干賦形劑與多烯磷脂酰膽堿的重量比為0.1～4∶1。
10.權(quán)利要求9的注射用多烯磷脂酰膽堿凍干粉針劑，所述的凍干賦形劑與多烯磷脂酰膽堿的重量比為0.3～2∶1。
11.一種注射用多烯磷脂酰膽堿凍干粉針劑的制備方法，至少包括以下四個(gè)步驟1)溶液配制取最終制備量3/5～9/10體積的注射用水，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入多烯磷脂酰膽堿、增溶劑，充分?jǐn)嚢枋蛊渫耆芙猓?)去除熱原在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入上述溶液體積0.05％～0.3％的活性炭，攪拌15～30分鐘，過(guò)濾脫炭，再補(bǔ)加注射用水至足量，用0.22微米微孔濾膜或G6垂熔玻璃濾器濾過(guò)，取濾液為中間體；3)分裝中間體經(jīng)檢查合格后，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下分裝于西林瓶中，半壓蓋；4)凍干。
12.權(quán)利要求11的注射用多烯磷脂酰膽堿凍干粉針劑的制備方法，其溶液配制過(guò)程中還可加入凍干賦形劑。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種多烯磷脂酰膽堿凍干粉針劑及其制備方法，其特征是該制劑含有多烯磷脂酰膽堿和增溶劑，增溶劑是脫/去氧膽酸鈉、脫/去氫膽酸鈉、膽酸鈉中的一種，增溶劑與多烯磷脂酰膽堿的重量比為0.5～1.5∶1。
文檔編號(hào)A61P1/16GK1771914SQ200510094998
公開(kāi)日2006年5月17日 申請(qǐng)日期2005年10月25日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月25日
發(fā)明者程艷菊, 張來(lái)芳, 楊玲 申請(qǐng)人:江蘇正大天晴藥業(yè)股份有限公司