一種注射用磷脂酰膽堿的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥輔料生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，更確切地，本發(fā)明涉及一種注射用磷脂酰膽堿的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]磷脂酰膽堿(phosphatidylcholine簡(jiǎn)稱PC)，俗名卵磷脂(Lecithin)，是天然磷脂的主要成分，許多生理活性均與之相關(guān)，一直倍受人們的青睞。磷脂酰膽堿的攝入可顯著提高體內(nèi)乙酰膽堿的濃度，因而它可增強(qiáng)大腦活力、促進(jìn)神經(jīng)傳導(dǎo)、延緩機(jī)體衰老和抗動(dòng)脈硬化;可促進(jìn)脂類轉(zhuǎn)換的作用，可以有效防治肝硬化與脂肪肝等功效。另外磷脂酰膽堿在食品工業(yè)中可作為良好的乳化劑、抗氧化劑、柔軟劑、增濕劑等食品添加劑。
[0003]高純度磷脂酰膽堿是一種天然、安全、高效的乳化劑，可用于輸液或靜脈注射用乳化劑，是注射劑領(lǐng)域最常用、最安全的乳化劑。同時(shí)，磷脂酰膽堿由于其脂質(zhì)體的特征，可作為抗癌藥物和其他緩釋藥物的載體，顯著提高藥物的活性、降低毒副作用，與其它藥物載體相比具有低毒高效的優(yōu)點(diǎn)。當(dāng)磷脂酰膽堿用于注射、脂質(zhì)體等用途時(shí)，對(duì)磷脂酰膽堿的純度、雜質(zhì)含量、水含量均有嚴(yán)格要求，通常要求磷脂酰膽堿純度大于95-98%，同時(shí)磷脂酰乙醇胺和溶血性磷脂酰膽堿的含量小于1%，水含量低于2%，同時(shí)對(duì)熱原、重金屬含量均有限量要求。因此，這些注射級(jí)高純度磷脂酰膽堿的制備技術(shù)難度很大?，F(xiàn)有的方法通常只能得到較高含量的磷脂酰膽堿，難以獲得符合注射劑要求的磷脂酰膽堿。
[0004]磷脂酰膽堿廣泛存在于大豆、蛋黃等生物組織中，采用適當(dāng)?shù)奶崛∈侄慰蓮倪@些生物組織中獲得混合磷脂。混合磷脂中除了含有磷脂酰膽堿外，還含有如磷脂酰乙醇胺、溶血性磷脂酰膽堿等其他磷脂雜質(zhì)，需采用適當(dāng)?shù)氖侄斡枰苑蛛x純化。
[0005]到目前為止，磷脂的分離方法主要有薄層色譜分離技術(shù)、柱層析分離技術(shù)、高效液相色譜分離技術(shù)、溶劑分離技術(shù)等。還有近幾年才興起的超臨界CO2萃取法、半透膜法等。
[0006]超臨界流體萃取分離效果好，產(chǎn)品質(zhì)量高，同時(shí)可有效避免有毒溶劑的使用，且溶劑耗量少。但由于超臨界設(shè)備投資昂貴且操作費(fèi)用高，大規(guī)模工業(yè)化應(yīng)用受限。如公開號(hào)為CN103288870A，名稱為一種注射級(jí)高純度磷脂酰膽堿的制備方法;膜技術(shù)由于沒有使用化學(xué)試劑、節(jié)能，吸引了很多化學(xué)工程師的研究。目前，雖然膜抗污染的能力已經(jīng)得到了很好的改善，但處理量小、滲透量和膜的壽命等仍然制約著膜工藝的工業(yè)化。如中國專利ZL201010105688.1公開了一種膜分離與柱層析相結(jié)合分離磷脂酰膽堿的方法，得到純度為95%以上的磷脂酰膽堿產(chǎn)品。中國專利ZL200510086600.5公開了一種利用無機(jī)陶瓷膜分離制備食品級(jí)大豆卵磷脂的方法;柱色譜分離方法設(shè)備簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低，是目前唯一能夠用于大規(guī)模生產(chǎn)高純磷脂的方法，因而成為研究熱點(diǎn)。但是，大部分研究停留在分析級(jí)制備上，制備過程多選用有毒試劑或混合試劑進(jìn)行梯度洗脫，這給溶劑回收造成很大困難，并容易造成環(huán)境污染。如中國專利ZL200710052284.9、公開了一種乙醇浸取和柱層析相結(jié)合的磷脂酰膽堿純化方法;有機(jī)溶劑萃取法一是萃取純度較低，無法滿足注射劑要求，二是用到溶劑種類多，溶劑回收成本高甚至是難以回收，容易造成浪費(fèi)及環(huán)境污染，其工業(yè)應(yīng)用也受到一定限制。中國專利ZL02121550.2、ZL02149601.3和公開了一種采用乙腈和甲醇、乙醇等一元低碳醇的混合溶劑對(duì)大豆粉末磷脂進(jìn)行多級(jí)逆流浸取制備磷脂酰膽堿的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]
本發(fā)明旨在解決現(xiàn)有技術(shù)在制備磷脂酰膽堿過程中存在的:磷脂酰膽堿純度低，不能滿足注射用要求;產(chǎn)品收率低、吸附劑再生困難和溶劑有毒、溶劑難以循環(huán)利用，固定相昂貴、樣品易發(fā)生氧化降解等問題，提供一種注射用磷脂酰膽堿的制備方法，該方法制備得到的磷脂酰膽堿純度高，得率高，工藝簡(jiǎn)單，環(huán)保、成本低廉，可大規(guī)模生產(chǎn)。
[0008]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)。
[0009]—種注射用磷脂酰膽堿的制備方法，包括以下步驟:
(1)磷脂原料預(yù)處理:將磷脂原料溶于有機(jī)溶劑，經(jīng)超聲溶解后過濾，得到磷脂原料溶液;過濾時(shí)采用過0.45um的微孔濾膜；
(2)將步驟(I)所得的磷脂原料溶液均勻的加入到已用惰性氣體置換保護(hù)的色譜柱中；磷脂原料溶液采用濕法上樣;色譜柱填料裝填采用干法裝柱，色譜柱裝好后向色譜柱中充入惰性氣體置換色譜柱中的空氣；
(3)待磷脂原料溶液完全吸附到色譜柱填料上，加入有機(jī)溶劑進(jìn)行洗脫，同時(shí)向色譜柱中充入惰性氣體使色譜柱中的壓力為0.1?2MPa;惰性氣體的充入能有效合理的控制液體的流出速度在10ml/min?50ml/min;
(4)收集步驟(3)的洗脫液，檢測(cè)收集到的各流份洗脫液中磷脂酰膽堿的純度，將純度為大于99%的流份洗脫液合并，在30?50°C水浴下減壓濃縮至干即得注射用磷脂酰膽堿。檢測(cè)洗脫液純度采用高效液相色譜檢測(cè);減壓濃縮，壓力控制在-0.05?-0.1MPa。
[0010]在步驟(I)中，加有機(jī)溶劑溶解磷脂原料時(shí)，所述磷脂原料與機(jī)溶劑的重量體積比為 1:1 ?1:10。
[0011]在步驟(I)中，所述超聲溶解的超聲工作頻率為15?80KHz，在超聲條件下，樣品能夠在室溫中較短時(shí)間內(nèi)溶解在有機(jī)相里，減少樣品與空氣接觸時(shí)間，降低樣品的降解速度。
[0012]在步驟(1)、步驟(3)中，所述有機(jī)溶劑為無水酒精、食用酒精和工業(yè)酒精中的任一種，從成本及試劑中甲醇等有害物質(zhì)的含量考慮，優(yōu)先選擇食用酒精。
[0013]在步驟(2)中，所述用惰性氣體置換保護(hù)是將惰性氣體充入到色譜柱中進(jìn)行置換保護(hù)，所述置換保護(hù)進(jìn)行2?5次，每次充入惰性氣體的體積與色譜柱填料的體積相同。
[0014]所述色譜柱填料的重量為磷脂原料重量的20?100倍。
[0015]所述惰性氣體為氮?dú)狻鍤夂湍蕷庵械娜我庖环N。
[0016]所述色譜柱填料為硅膠、氧化鋁、聚酰胺和大孔樹脂中的任意一種。
[0017]為了保護(hù)制備得到的磷脂酰膽堿的純度，還包括向上述步驟(4)中制備得到的注射用磷脂酰膽堿中充入惰性氣體進(jìn)行保護(hù)。惰性氣體為氮?dú)?、氬氣和氖氣中的任意一種，充入量為I個(gè)容器體積。
[0018]還包括將使用過的色譜柱填料用甲醇進(jìn)行再生處理，所述甲醇與色譜柱填料的體積重量比為1:1?10:1，甲醇揮發(fā)干后色譜柱填料重復(fù)使用。
[0019]有益效果: 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有一下優(yōu)點(diǎn)。
[0020]1、本發(fā)明先將蛋黃粉用有機(jī)溶劑溶解，過微孔濾膜，避免其中的不溶物堵柱子，提高分離效果。在洗脫過程中，用惰性氣體保持柱子中的壓力，一方面可以控制洗脫速度，提高洗脫效率，降低成本；另一方面可以起到保護(hù)的作用，避免樣品在洗脫過程中被氧化分解。在一定溫度下濃縮樣品溶液，既可以保持試劑的回收速度，也可以避免樣品在高溫條件下發(fā)生降解。
[0021]2、在濃縮干燥樣品中充了惰性氣體，可以隔絕氧氣與樣品接觸，避免樣品發(fā)生氧化，最后得到純度大于99%的磷脂酰膽堿。
[0022]3、工藝簡(jiǎn)單，成本低廉，產(chǎn)品純度高，其中有機(jī)溶劑可以回收套用，填料通過再生處理重復(fù)使用。對(duì)設(shè)備沒有特殊要求，適宜工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明磷脂酰膽堿的制備方法操作簡(jiǎn)單、同時(shí)具有較高的收率和純度，便于工業(yè)化放大生產(chǎn)，滿足我國對(duì)高純度磷脂酰膽堿的需求。
【附圖說明】
[0023]圖1為實(shí)施例1的高效液相色譜圖；
圖2為實(shí)施例2的高效液相色譜圖；
圖3為實(shí)施例4的高效液相色譜圖。
[0024]圖1、2、3中，橫坐標(biāo)為時(shí)間(min)，縱坐標(biāo)為吸光度(AU)。
【具體實(shí)施方式】
[0025]下面結(jié)合具體實(shí)施例詳細(xì)說說明本發(fā)明。
[0026]實(shí)施例1
一種注射用磷脂酰膽堿的制備方法，包括以下步驟:
(I)溶解:稱取磷脂原料10g，加入食用酒精10ml，調(diào)節(jié)超聲工作頻率為30KHz，待磷脂原料完全溶解后，過0.45μπι微孔濾膜，得磷脂原料溶液。
[0027](2)裝柱、色譜柱的置換保護(hù)及磷脂原料溶液的上樣:
裝柱:所用色譜柱內(nèi)徑X高(8cmX 40cm)，稱取氧化招填料5kg，均勾地傾倒入色譜柱中，使填料表面平整;充惰性氣體置換保護(hù):色譜柱裝好后向色譜柱中充了氮?dú)?，打開色譜柱底下閥門，對(duì)色譜柱中的空氣進(jìn)行置換，重復(fù)3次，每次充入的氮?dú)獾捏w積與氧化鋁填料的體積相同；上樣:將步驟(I)中得到的磷脂原料溶液緩慢加入到氧化鋁的表面；
(3)洗脫:待磷脂原料溶液全部吸附在填料氧化鋁上后，向色譜柱中加入食用酒精洗脫，并向色譜柱中充入氮?dú)?，使色譜柱得到的壓力IMPa，從而使洗脫液的流速為30ml/min，洗脫液每500ml收集成一個(gè)流份；
(4)濃縮:將步驟(3)洗脫收集到的每一個(gè)流份用高效液相HPLC進(jìn)行檢測(cè)，合并純度大于99%的產(chǎn)品段，在本實(shí)施例中，按順序收集的洗脫液，第5-12個(gè)流份純度大于99%，因此將第5-12個(gè)流份合并，調(diào)節(jié)水浴溫度45°C，真空減壓(壓力-0.09MPa)濃縮至干得磷脂酰膽堿產(chǎn)品，稱重得75.3g，HPLC檢測(cè)產(chǎn)品，其色譜圖