專(zhuān)利名稱(chēng)：依達(dá)拉奉的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及使用3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮(通用名依達(dá)拉奉，Edaravone)治療各種原因?qū)е碌膬?nèi)毒素血癥引起的相關(guān)疾病。
背景技術(shù)：
嚴(yán)重創(chuàng)傷、燒傷、休克和外科大手術(shù)后，易感染引起菌體膜主要成分內(nèi)毒素(脂多糖，LPS)釋放入血導(dǎo)致內(nèi)毒素血癥，LPS通過(guò)炎性細(xì)胞可引起一系列級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)，使細(xì)胞因子生成增加、中性粒細(xì)胞呼吸爆發(fā)功能增強(qiáng)、微循環(huán)及凝血功能紊亂等，引起全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory responsesyndrome，SIRS)、多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction syndrome，MODS)。中性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞呼吸爆發(fā)所產(chǎn)生的活性氧物質(zhì)(reactive oxygenspecies，ROS)在分泌到細(xì)胞外殺滅病原體的同時(shí)，造成了周?chē)?xì)胞和組織損傷，成為大部分炎癥和缺血再灌注損傷性疾病的主因。在臨床上可見(jiàn)于膿毒病、重癥膿毒病、膿毒性休克、創(chuàng)傷性休克、低血容量性休克等。
膿毒病、重癥膿毒病、膿毒癥休克、創(chuàng)傷性休克、低血容量性休克及其他各類(lèi)休克是外科病人和危重病人的主要死因，外源性和/或內(nèi)源性?xún)?nèi)毒素作為菌體膜成分，崩解入血后可引起一系列級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)，導(dǎo)致全身性炎癥反應(yīng)綜合征、多器官功能失常綜合征及死亡。據(jù)估計(jì)美國(guó)每年約有膿毒病患者40萬(wàn)人，20萬(wàn)人發(fā)生膿毒病休克，其中10萬(wàn)人死亡。隨著人口的老齡化、介入治療及抗生素濫用耐藥菌增多、放療、化療等因素，膿毒病的發(fā)病有繼續(xù)增長(zhǎng)的趨勢(shì)。2002年10月，歐洲危重病協(xié)會(huì)(ESICM)、危重病協(xié)會(huì)(SCCM)和國(guó)際膿毒病論壇提出了《巴塞羅那宣言》，共同呼吁采取措施減少世界最古老、最具殺傷力的疾病--膿毒病，爭(zhēng)取在今后5年內(nèi)將膿毒病的死亡率降低25％。
應(yīng)用抗內(nèi)毒素抗體、抗TNF抗體、IL21受體拮抗劑等治療膿毒病臨床試驗(yàn)相繼失敗，有的甚至顯示有害作用。2001年美國(guó)FDA批準(zhǔn)了重組活化蛋白C(APC，又名Drotrecogin alfa，商品名XigrisTM)用于臨床重度膿毒癥的治療，但進(jìn)一步的分析顯示，APC僅對(duì)死亡危險(xiǎn)大的重癥病人(APACHE II病情評(píng)分≥25者)有顯著意義，可使病死率降低(13％)。
盡管研究者們作了大量的工作，但是膿毒癥的臨床試驗(yàn)性治療中并未能獲得令人鼓舞的結(jié)果。
臨床研究發(fā)現(xiàn)，膿毒病及MODS的生存率與體內(nèi)抗氧化能力密切相關(guān)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也證實(shí)抗氧化劑如谷胱甘肽、N-乙酰半胱氨酸可提高內(nèi)毒素血癥動(dòng)物的生存率，降低細(xì)胞因子和黏附分子表達(dá)，減少活性氧生成并抑制細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧化，保護(hù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能，抑制細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB激活。雖然臨床治療證實(shí)大劑量谷胱甘肽加N-乙酰半胱氨酸可明顯減少膿毒癥休克病人血液中活性氧濃度，改善心功能指數(shù)及減少并發(fā)成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)病人肺損傷，但是對(duì)減少死亡率作用不明顯。
依達(dá)拉奉(edaravone)，化學(xué)名3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮，作為一種新型強(qiáng)效的自由基清除劑及抗氧化劑，作為一種有效的神經(jīng)元保護(hù)劑(自由基清除劑)具有分布廣、半衰期短、安全、毒性低等特點(diǎn)，為臨床缺血性腦卒中有效的一線(xiàn)治療藥物。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，亦有依達(dá)拉奉作為自由基清除劑治療出血性腦卒中、心肌梗死、脊髓損傷、肝移植、腦外傷發(fā)揮作用的研究報(bào)道。但依達(dá)拉奉治療嚴(yán)重創(chuàng)傷、燒傷、休克和外科大手術(shù)后并發(fā)內(nèi)毒素血癥，以及在膿毒病、重癥膿毒病、膿毒性休克、創(chuàng)傷性休克、低血容量性休克方面的應(yīng)用未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的提供了3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮或其藥學(xué)上可接受的鹽或含有它們中任何一種的藥物組合物在制備治療內(nèi)毒素血癥引起的相關(guān)疾病藥物中的應(yīng)用。特別是3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮在制備治療內(nèi)毒素血癥引起的相關(guān)疾病藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明所述的相關(guān)疾病包括膿毒病、重癥膿毒病、膿毒性休克、創(chuàng)傷性休克、低血容量性休克。特別是3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮在制備治療膿毒病、重癥膿毒病、膿毒性休克藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明人在研究中意外發(fā)現(xiàn)依達(dá)拉奉治療內(nèi)毒素血癥引發(fā)的膿毒病、重癥膿毒病、膿毒性休克療效好，特別是在降低死亡率方面具有特別突出的治療效果，在本發(fā)明的實(shí)施例中有實(shí)驗(yàn)予以進(jìn)一步的說(shuō)明。引起內(nèi)毒素血癥的原因可為嚴(yán)重創(chuàng)傷、燒傷、休克和外科大手術(shù)等。
本發(fā)明提供了依達(dá)拉奉治療膿毒病、重癥膿毒病、膿毒性休克的合適的給藥途徑。因?yàn)椴∪瞬∏槲Ｖ?、最好通過(guò)靜脈注射給藥。
在依達(dá)拉奉治療膿毒病、重癥膿毒病、膿毒癥休克的各種藥物組合物，包括凍干粉針、粉針劑、注射液等等普通技術(shù)人員可認(rèn)定的各種劑型，其中優(yōu)選注射液用以治療膿毒病、重癥膿毒病、膿毒癥休克。
具體實(shí)施例方式
下述實(shí)施例舉例說(shuō)明本發(fā)明，不應(yīng)被認(rèn)為是對(duì)本發(fā)明的限制。
實(shí)施例1采用大腸桿菌內(nèi)毒素注射法制備膿毒癥休克模型。
大鼠禁食12小時(shí)后，將大腸桿菌內(nèi)毒素(lipopolysaccharide，LPS)O111:B4，美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品，用生理鹽水溶解并稀釋至8mg/kg，自尾靜脈注射。模型組在內(nèi)毒素注射后1小時(shí)，可觀察到大鼠精神萎靡，進(jìn)食、水量減少，4小時(shí)后出現(xiàn)腹瀉、立毛、角膜充血等癥狀，12小時(shí)后部分大鼠眼角可見(jiàn)暗紅色分泌物，口鼻、爪趾處出現(xiàn)紫疳后陸續(xù)抽搐死亡。尸解肺表面可見(jiàn)散在出血斑點(diǎn)，空回腸有節(jié)段性淤血、腫脹，腸腔內(nèi)有暗紅色液體，胸腹腔無(wú)明顯積液，肝、心、腎肉眼下觀察未見(jiàn)明顯出血、腫脹等病理變化。表明造模成功.
實(shí)施例2靜脈注射不同劑量的依達(dá)拉奉對(duì)膿毒癥休克模型大鼠死亡率的影響依達(dá)拉奉分為6mg/kg，3mg/kg，1.5mg/kg三個(gè)劑量組大鼠50只，隨機(jī)分為5組膿毒癥休克組、依達(dá)拉奉治療組(劑量為6mg/kg組、3mg/kg組，1.5mg/kg組)，陽(yáng)性對(duì)照組依達(dá)拉奉注射液，無(wú)色，規(guī)格5ml∶10mg，南京先聲東元制藥有限公司出品，術(shù)前用生理鹽水稀釋到所需要的濃度。造模后一小時(shí)尾靜脈緩慢注射，注射時(shí)間為5min.陽(yáng)性對(duì)照組注射重組人活性蛋白C(商品名Xigris)凍干粉，美國(guó)禮來(lái)公司產(chǎn)品，術(shù)前用生理鹽水溶解并稀釋?zhuān)o藥量為58.34mg/kg，造模后一小時(shí)尾靜脈緩慢注射。
上述三組動(dòng)物分別記錄24小時(shí)死亡率，大鼠死亡后解剖觀察重要臟器病理變化。
表1各劑量組依達(dá)拉奉對(duì)膿毒癥休克大鼠死亡率的影響

*p＜0.05，**p＜0.01，與模型組比較。
各組依達(dá)拉奉使膿毒癥休克大鼠死亡率明顯降低，6mg/kg組和3mg/kg組更顯著。
實(shí)施例3靜脈注射不同劑量的依達(dá)拉奉對(duì)心肌收縮力的影響60只大鼠，隨機(jī)分為假手術(shù)組，膿毒癥休克模型組，依達(dá)拉奉治療組(劑量為6mg/kg組、3mg/kg組，1.5mg/kg組)，陽(yáng)性對(duì)照組(注射Xigris)，各組大鼠行左心室插管手術(shù)檢測(cè)左心室收縮壓。
表2各劑量組依達(dá)拉奉對(duì)膿毒癥休克大鼠心肌收縮力的影響

▲p＜0.05，▲▲p＜0.01，與假手術(shù)組比較；*p＜0.05，**p＜0.01，與模型組膿毒癥休克時(shí)由于受到細(xì)胞因子如腫瘤壞死因子(TNF)、一氧化氮(NO)作用，心肌的收縮力發(fā)生改變，在早期代償性升高后出現(xiàn)心室擴(kuò)張、心室射血功能下降。表2所示，膿毒癥休克后大鼠心臟左室收縮壓(LVESP)顯著下降，4小時(shí)后下降非常明顯(p＜0.01)，且呈進(jìn)行性下降趨勢(shì)，依達(dá)拉奉高、中、低劑量使LVESP升高并接近假手術(shù)組水平，與膿毒癥休克組比較升高非常顯著(p＜0.01)。
實(shí)施例4靜脈注射不同劑量的依達(dá)拉奉大鼠血液生化指標(biāo)的影響60只大鼠，隨機(jī)分為假手術(shù)組，膿毒癥休克模型組，依達(dá)拉奉治療組(劑量為6mg/kg組、3mg/kg組，1.5mg/kg組)，陽(yáng)性對(duì)照組(注射Xigris)，檢測(cè)大鼠靜脈血超氧化物岐化酶(SOD)，丙二醛(MDA)，過(guò)氧化氫酶(CAT)。
表3不同劑量依達(dá)拉奉對(duì)膿毒癥休克大鼠血液SOD、MDA、CAT的影響

x±s▲p＜0.05，▲▲p＜0.01，與假手術(shù)組比較；*p＜0.05，**p＜0.01，與模型組比較。
依達(dá)拉奉治療后由于其清除氧自由基作用機(jī)制可升高靜脈血SOD活性，依達(dá)拉奉6mg/kg，3mg/kg劑量組SOD升高非常明顯(p＜0.01)，依達(dá)拉奉1.5mg/kg組SOD升高明顯(p＜0.05)；MDA在膿毒癥休克時(shí)升高顯著(p＜0.05)，依達(dá)拉奉6mg/kg劑量組MDA濃度可非常明顯降低(p＜0.01)，依達(dá)拉奉3mg/kg，1.5mg/kg劑量組明顯降低MDA濃度(p＜0.05)；CAT在膿毒癥休克時(shí)活性明顯降低(p＜0.05)。
實(shí)施例5靜脈注射不同劑量依達(dá)拉奉對(duì)大鼠血液生化指標(biāo)的影響大鼠60只，隨機(jī)分為假手術(shù)組，膿毒癥休克模型組，依達(dá)拉奉治療組(劑量為6mg/kg組、3mg/kg組、1.5mg/kg組)，陽(yáng)性對(duì)照組(注射Xigris)，檢測(cè)大鼠靜脈血，了解依達(dá)拉奉對(duì)膿毒癥休克大鼠血液乳酸(LD)、乳酸脫氫酶(LDH)、尿氮(UN)、肌苷(Cr)的影響。
表4不同劑量依達(dá)拉奉對(duì)膿毒癥休克大鼠血液LD，LDH，UN，CR的影響

x±s▲p＜0.05，▲▲p＜0.01，與假手術(shù)組比較；*p＜0.05，**p＜0.01，與模型組比較。
休克后由于代謝性酸中毒和多器官功能障礙，如表4所示模型組動(dòng)物血LD、UN、Cr升高，其中LD、UN升高非常明顯(p＜0.01)，6 mg/kg依達(dá)拉奉劑量組可非常顯著降低LD、UN、Cr水平，3mg/kg依達(dá)拉奉劑量組使LD有所降低，但是未達(dá)到顯著水平，3mg/kg依達(dá)拉奉可明顯降低UN(p＜0.05)，3mg/kg依達(dá)拉奉降低Cr非常明顯，依達(dá)拉奉低劑量可不同程度降低LD、UN、Cr，但與模型組比較未見(jiàn)顯著差異。LDH活性在此過(guò)程中變化不明顯。
權(quán)利要求
1.3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮或其藥學(xué)上可接受的鹽或含有它們中任何一種的藥物組合物在制備治療內(nèi)毒素血癥引起的相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮在制備治療內(nèi)毒素血癥引起的相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的相關(guān)疾病包括膿毒病、重癥膿毒病、膿毒性休克、創(chuàng)傷性休克或低血容量性休克。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述的相關(guān)疾病為膿毒病、重癥膿毒病、膿毒性休克。
全文摘要
本發(fā)明涉及3－甲基－1－苯基－2－吡唑啉－5－酮在制備用于治療嚴(yán)重創(chuàng)傷、燒傷、和外科大手術(shù)并發(fā)的內(nèi)毒素血癥引起的相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。這些疾病包括膿毒病、重癥膿毒病、膿毒癥休克、創(chuàng)傷性休克或低血容量性休克。
文檔編號(hào)A61P7/00GK1954812SQ20051009506
公開(kāi)日2007年5月2日 申請(qǐng)日期2005年10月28日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月28日
發(fā)明者霍小萍, 殷曉進(jìn), 顧學(xué)蘭 申請(qǐng)人:江蘇先聲藥物研究有限公司