專利名稱：一種提高動(dòng)物免疫功能的苷肽注射液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及細(xì)胞因子胸腺肽和轉(zhuǎn)移因子的合劑注射液，國(guó)際專利分類號(hào)C07K14/435、C07K14/47、C07K1/14。
背景技術(shù)：
在過(guò)去的一些年里，動(dòng)物疾病的治療絕大部分是采用抗生素及化學(xué)合成類藥物，其傳染性疾病多采用疫苗進(jìn)行防治，造成動(dòng)物對(duì)一些藥物的抗藥性增強(qiáng)，并造成大量藥物殘留，一些疫苗免疫也造成殘留，或因多種原因所致疫苗免疫效果不佳。目前，為提高動(dòng)物的免疫力，出現(xiàn)了很多生物制劑，例如細(xì)胞因子胸腺肽、轉(zhuǎn)移因子等，都是單方使用，但是還沒(méi)有將細(xì)胞因子胸腺肽和轉(zhuǎn)移因子合到一起作為復(fù)方來(lái)使用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種將細(xì)胞因子胸腺肽和轉(zhuǎn)移因子合到一起作為復(fù)方來(lái)使用，用以增強(qiáng)動(dòng)物的免疫力，調(diào)節(jié)動(dòng)物抗體的免疫功能，一種提高動(dòng)物免疫功能的苷肽注射液。
胸腺肽是一族具有調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)功能的多肽，能誘導(dǎo)和促進(jìn)T淋巴細(xì)胞分化、成熟，并能提高自然殺傷細(xì)胞(NK)活力；轉(zhuǎn)移因子是種具有免疫活性的小分子物質(zhì)，具有多方面的非特異性的免疫功能；用胸腺肽和轉(zhuǎn)移因子制備的本發(fā)明是免疫調(diào)節(jié)劑、增強(qiáng)劑和疫苗佐劑。
本發(fā)明的技術(shù)方案將細(xì)胞因子胸腺肽和轉(zhuǎn)移因子按照5-50∶5-50的比例混合到一起，制成復(fù)方注射液；本發(fā)明的最佳比例是將細(xì)胞因子胸腺肽和轉(zhuǎn)移因子按照1∶1比例混合到一起制成復(fù)方注射液；所述的細(xì)胞因子胸腺肽的制備方法將牛、或者豬的胸腺冷凍，自然融化，摘除脂肪和結(jié)締組織，用自來(lái)水、或蒸餾水漂洗，瀝水，稱重，用鉸肉機(jī)鉸碎，按其0.3-3.0倍量加入0.2％-0.9％的氯化鈉溶液，在膠體磨中勻漿15分鐘，在-25℃凍存24小時(shí)左右，室溫自然融化后在2000轉(zhuǎn)/分下甩干離心5-10分鐘，收集甩干液倒入攪拌夾層罐中加熱到75℃-85℃30分鐘后，用5000轉(zhuǎn)/分溫控大容量離心機(jī)10-15分鐘離心取上清夜，祛除沉淀，上清夜收集到無(wú)菌容器中進(jìn)入裝有10KD超濾膜的中空纖維超濾裝置超濾，超濾液收集無(wú)菌容器內(nèi)，測(cè)每毫升多肽含量；所述的轉(zhuǎn)移因子的制備方法將豬、或牛、或犬的脾臟冷凍，自然融化，摘除脂肪和結(jié)締組織，用自來(lái)水、或蒸餾水漂洗，瀝水，稱重，剪成組織小塊，加適量生理鹽水，利用搗隨機(jī)搗碎高速勻漿2次，每次3分鐘，加生理鹽水適量，在-20℃勻漿凍結(jié)和自然融化，反復(fù)凍融兩次，用5000轉(zhuǎn)/分溫控大容量離心機(jī)30分鐘離心取上清夜，在無(wú)菌室內(nèi)進(jìn)入裝有10KD超濾膜的中空纖維超濾裝置超濾，收集超濾液，測(cè)每毫升多肽含量；本發(fā)明注射液的配制將胸腺肽超濾液用注射用水稀釋至1mg/ml-10mg/ml，調(diào)PH值6.0-7.5；將轉(zhuǎn)移因子超濾液用生理鹽水稀釋至1mg/ml-10mg/ml，調(diào)PH值6.0-7.5；將兩種超濾液按1∶1的比例混合于一個(gè)無(wú)菌容器內(nèi)，攪勻，加適量稀釋劑，分裝于安瓶?jī)?nèi)，每支5毫升。
本發(fā)明的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢測(cè)方法本發(fā)明含多肽以小牛血清白蛋白計(jì)，應(yīng)為標(biāo)示量的90％-125％；含核苷酸以D-核糖計(jì)，應(yīng)不低于標(biāo)示量的80％。
性狀為淡黃色透明液體；鑒別1、茚三酮反應(yīng) 溶液應(yīng)呈藍(lán)紫色；2、分光光度法 在251±3nm(豬胸腺、豬脾)或260±3nm(牛胸腺、牛脾)處有最大吸收；檢查1、PH值應(yīng)為6.0-7.5；2、蛋白質(zhì)磺基水楊酸實(shí)驗(yàn)，應(yīng)不發(fā)生瀉濁或沉淀；3、高分子物質(zhì) 高效液相色譜法 大于10000道爾頓的組分不得超過(guò)5％；4、氨基氮 中位(PH計(jì))容量分析法每支應(yīng)≥2毫克；5、活力測(cè)定 T細(xì)胞活性測(cè)定脂E受體法差應(yīng)≥10％；6、異常毒性 小鼠靜注，腹腔注、皮下注，口服給藥，48小時(shí)內(nèi)不應(yīng)有死亡；7、過(guò)敏實(shí)驗(yàn) 豚鼠腹腔注射(3次)后，再靜注(2次)，15小時(shí)內(nèi)應(yīng)不出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)；8、細(xì)菌內(nèi)毒素 鱟試驗(yàn)法 每毫升，細(xì)菌內(nèi)毒素的量應(yīng)小于10EU；9、無(wú)菌檢驗(yàn) 生物制品無(wú)菌檢驗(yàn)規(guī)程，應(yīng)無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)；10、其他 應(yīng)符合注射劑項(xiàng)下有關(guān)的各規(guī)定。
含量測(cè)定1、多肽(以牛血清白蛋白計(jì))應(yīng)為20mg/支標(biāo)示量的90％-125％；2、核苷酸(以D-核糖計(jì))不低于350mg/支標(biāo)示量的80％；本發(fā)明的規(guī)格為5毫升；多肽20毫克，核糖20毫克；本發(fā)明對(duì)豬的最佳使用時(shí)機(jī)是20日齡最好，50日齡次之(對(duì)降低發(fā)病率和增重而言)；本發(fā)明最佳使用劑量幼畜0.25mg/kg.bw，成畜0.125mg/kg.bw；本發(fā)明最佳給藥途徑肌注為好；本發(fā)明最佳給藥次數(shù)幼畜20日齡首次注射，第一次給藥后7、14、21再給藥3次；成畜每周注射一次，連注4周。
本發(fā)明藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究，試驗(yàn)組除用藥第二周白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞百分率比對(duì)照組高，差異顯著，其余各項(xiàng)生理、生化指標(biāo)均與對(duì)照組相近，差異不顯著；本發(fā)明穩(wěn)定性試驗(yàn)，加速試驗(yàn)和長(zhǎng)期試驗(yàn)結(jié)果，有效期可暫定1.5年。
本發(fā)明急性、毒性試驗(yàn) 小白鼠、大白鼠試驗(yàn)，大白鼠24小時(shí)內(nèi)最大給藥量為日臨床給藥量的1200倍，小白鼠24小時(shí)內(nèi)最大給藥量為日臨床給藥量的4800倍；本發(fā)明慢性、毒性試驗(yàn) 家兔、豬試驗(yàn)，臨床劑量100倍、50倍、10倍給藥，觀察30日，試驗(yàn)組與對(duì)照組生理、生化指標(biāo)，試驗(yàn)未重，總增重，總進(jìn)食量，總飼料利用率未見(jiàn)不良影響；病理組織學(xué)觀察，各臟器和甲狀腺、胸腺、腸系膜淋巴結(jié)、性腺均未見(jiàn)病理改變；本發(fā)明對(duì)豬生產(chǎn)性能影響試驗(yàn)20日齡仔豬，間隔一周，4次用藥，0.25ml/kg.bw。至出欄(150日齡)，比對(duì)照組多增重10-15kg；50日齡開(kāi)始用藥，4次用藥，至出欄(150日齡)，比對(duì)照組多增重10kg；仔豬用藥后發(fā)病率降低(原發(fā)病數(shù)減少60％)；受試豬2萬(wàn)余頭，經(jīng)濟(jì)效益顯著。
本發(fā)明是一種新型動(dòng)物免疫增強(qiáng)劑、調(diào)節(jié)劑，安全穩(wěn)定無(wú)毒副作用，不僅可預(yù)防疾病促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，而且可避免使用化學(xué)藥品可能造成的肌體耐藥性和肉品中殘留，減少對(duì)環(huán)境的污染和對(duì)人類健康構(gòu)成的威脅；作為疫苗的優(yōu)良佐劑，可大大提高疫苗對(duì)使用對(duì)象的免疫效果；具有提高機(jī)體的免疫力，抗病毒，促生長(zhǎng)，無(wú)藥物殘留，高效無(wú)毒免疫活性高的優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1細(xì)胞因子胸腺肽的制備方法將牛、或者豬的胸腺冷凍，自然融化，摘除脂肪和結(jié)締組織，用自來(lái)水、或蒸餾水漂洗，瀝水，稱重，用鉸肉機(jī)鉸碎，按其1/2倍量加入0.4％的氯化鈉溶液，在膠體磨中勻漿15分鐘，在-25℃凍存24小時(shí)左右，室溫自然融化后在2000轉(zhuǎn)/分下甩干離心5分鐘，收集甩干液倒入攪拌夾層罐中加熱到80℃30分鐘后，用5000轉(zhuǎn)/分溫控大容量離心機(jī)10分鐘離心取上清夜，祛除沉淀，上清夜收集到無(wú)菌容器中進(jìn)入裝有10KD超濾膜的中空纖維超濾裝置超濾，超濾液收集無(wú)菌容器內(nèi)，測(cè)每毫升多肽含量；轉(zhuǎn)移因子的制備方法將豬、或牛、或犬的脾臟冷凍，自然融化，摘除脂肪和結(jié)締組織，用自來(lái)水、或蒸餾水漂洗，瀝水，稱重，剪成組織小塊，加適量生理鹽水，利用搗隨機(jī)搗碎高速勻漿2次，每次3分鐘，加生理鹽水適量，在-20℃勻漿凍結(jié)和自然融化，反復(fù)凍融兩次，用5000轉(zhuǎn)/分溫控大容量離心機(jī)30分鐘離心取上清夜，在無(wú)菌室內(nèi)進(jìn)入裝有10KD超濾膜的中空纖維超濾裝置超濾，收集超濾液，測(cè)每毫升多肽含量；本發(fā)明注射液的配制將胸腺肽超濾液用注射用水稀釋至4mg/ml，調(diào)PH值7.0；將轉(zhuǎn)移因子超濾液用生理鹽水稀釋至4mg/ml，調(diào)PH值7.0；將兩種超濾液按1∶1的比例混合于一個(gè)無(wú)菌容器內(nèi)，攪勻，加適量稀釋劑，分裝于安瓶?jī)?nèi)，每支5毫升；每支5毫升本發(fā)明注射液中，各有胸腺肽10毫克和轉(zhuǎn)移因子10毫克。
實(shí)施例2細(xì)胞因子胸腺肽的制備方法將牛、或者豬的胸腺冷凍，自然融化，摘除脂肪和結(jié)締組織，用自來(lái)水、或蒸餾水漂洗，瀝水，稱重，用鉸肉機(jī)鉸碎，按其1倍量加入0.6％的氯化鈉溶液，在膠體磨中勻漿15分鐘，在-25℃凍存24小時(shí)左右，室溫自然融化后在2000轉(zhuǎn)/分下甩干離心10分鐘，收集甩干液倒入攪拌夾層罐中加熱到85℃30分鐘后，用5000轉(zhuǎn)/分溫控大容量離心機(jī)15分鐘離心取上清夜，祛除沉淀，上清夜收集到無(wú)菌容器中進(jìn)入裝有10KD超濾膜的中空纖維超濾裝置超濾，超濾液收集無(wú)菌容器內(nèi)，測(cè)每毫升多肽含量；其它同實(shí)施例1。
權(quán)利要求
1.一種提高動(dòng)物免疫功能的苷肽注射液，其特征是將細(xì)胞因子胸腺肽和轉(zhuǎn)移因子按照5-50∶5-50的比例混合到一起，制成復(fù)方注射液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高動(dòng)物免疫功能的苷肽注射液，其特征是本發(fā)明的最佳比例是將細(xì)胞因子胸腺肽和轉(zhuǎn)移因子按照1∶1的比例混合到一起制成復(fù)方注射液。
3.制備權(quán)利要求1或2所述的一種提高動(dòng)物免疫功能的苷肽注射液，其特征是細(xì)胞因子胸腺肽的制備方法將牛、或者豬的胸腺冷凍，自然融化，摘除脂肪和結(jié)締組織，用自來(lái)水、或蒸餾水漂洗，瀝水，稱重，用鉸肉機(jī)鉸碎，按其0.3-3.0倍量加入0.2％-0.9％的氯化鈉溶液，在膠體磨中勻漿15分鐘，在-25℃凍存24小時(shí)左右，室溫自然融化后在2000轉(zhuǎn)/分下甩干離心5-10分鐘，收集甩干液倒入攪拌夾層罐中加熱到75℃-85℃30分鐘后，用5000轉(zhuǎn)/分溫控大容量離心機(jī)10-15分鐘離心取上清夜，祛除沉淀，上清夜收集到無(wú)菌容器中進(jìn)入裝有10KD超濾膜的中空纖維超濾裝置超濾，超濾液收集無(wú)菌容器內(nèi)，測(cè)每毫升多肽含量；轉(zhuǎn)移因子的制備方法將豬、或牛、或犬的脾臟冷凍，自然融化，摘除脂肪和結(jié)締組織，用自來(lái)水、或蒸餾水漂洗，瀝水，稱重，剪成組織小塊，加適量生理鹽水，利用搗隨機(jī)搗碎高速勻漿2次，每次3分鐘，加生理鹽水適量，在-20℃勻漿凍結(jié)和自然融化，反復(fù)凍融兩次，用5000轉(zhuǎn)/分溫控大容量離心機(jī)30分鐘離心取上清夜，在無(wú)菌室內(nèi)進(jìn)入裝有10KD超濾膜的中空纖維超濾裝置超濾，收集超濾液，測(cè)每毫升多肽含量；本發(fā)明注射液的配制將胸腺肽超濾液用注射用水稀釋至1mg/ml-10mg/ml，調(diào)PH值6.0-7.5；將轉(zhuǎn)移因子超濾液用生理鹽水稀釋至1mg/ml-10mg/ml，調(diào)PH值6.0-7.5；將兩種超濾液按1∶1的比例混合于一個(gè)無(wú)菌容器內(nèi)，攪勻，加適量稀釋劑，分裝于安瓶?jī)?nèi)，每支5毫升。
全文摘要
一種提高動(dòng)物免疫功能的苷肽注射液，屬于生物制藥技術(shù)領(lǐng)域，提供一種將細(xì)胞因子胸腺肽和轉(zhuǎn)移因子合到一起作為復(fù)方來(lái)使用；其制備工藝是分別采集新鮮的牛胸腺和豬的脾臟，在－20℃低溫下保留，制取時(shí)整個(gè)工藝采用自然強(qiáng)化凍融，低溫離心，超濾濃縮透析精制，濾過(guò)除菌，將細(xì)胞因子胸腺肽和轉(zhuǎn)移因子的超濾液分別稀釋、調(diào)pH后按比例混合到一起攪拌，加稀釋劑，分裝；本發(fā)明安全穩(wěn)定無(wú)毒副作用，不僅可預(yù)防疾病促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，而且可避免使用化學(xué)藥品可能造成的肌體耐藥性和肉品中殘留，減少對(duì)環(huán)境的污染和對(duì)人類健康構(gòu)成的威脅；作為疫苗的優(yōu)良佐劑，可大大提高疫苗對(duì)使用對(duì)象的免疫效果；具有提高機(jī)體的免疫力，抗病毒，促生長(zhǎng)，無(wú)藥物殘留，高效無(wú)毒免疫活性高的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61K38/19GK1683006SQ20051001662
公開(kāi)日2005年10月19日 申請(qǐng)日期2005年3月14日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月14日
發(fā)明者張中洋 申請(qǐng)人:張中洋