專利名稱：一種檢測精漿γ-L-谷氨酰轉肽酶試劑盒及檢測方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種生物化學試劑盒及檢測方法，具體說是一種檢測精漿Y -L-谷氨 酰轉肽酶試劑盒及檢測方法。
背景技術：
精漿富含γ -L-谷氨酰轉肽酶(Y -GT)，γ -GT是谷光苷肽(GSH)代謝的關鍵酶， 在保護精子免受氧自由基損害方面起了重要作用。精液中的Y-GT主要來自前列腺，其活 性的檢測可用于評價前列腺的功能。精漿中的Y-GT可分解Y-谷氨酰-α-萘酚為游離 的α-萘酚，α-萘酚與重氮試劑作用產生紅色，其色澤深淺與酶活性成正比。目前，開展精漿Y -GT活性檢測項目的男科實驗室極少，我們在前期建立手工檢 測精漿Y-GT方法的基礎上，又進一步建立了半自動生化分析儀檢測法。手工檢測方法的 具體操作過程中，精漿樣本需用生理鹽水進行1 200稀釋后方可檢測，稀釋后精漿樣本與 基質液在37°C溫育15min后，再加入重氮試劑，混勻后37°C再次溫育5min，然后用分光光 度計比色，手工計算獲得結果，每次檢測所需α萘胺標準液10 μ 1，基質液0. 5ml，重氮試劑 5ml。該法操作步驟較多，費時、費試劑，且精漿在檢測前需稀釋，很難在臨床常規(guī)檢測中廣 泛使用。

發(fā)明內容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的是為了提供一種能使檢測精漿Y-GT時操作簡便、省時、 節(jié)省試劑、結果穩(wěn)定可靠、能廣泛適用于臨床檢測的檢測精漿Y -GT試劑盒及檢測方法。技術方案為了解決上述技術問題，本發(fā)明所述的一種檢測精漿Y-GT試劑盒，包 括α萘胺標準液、Y-谷氨酰-α-萘胺基質液和重氮試劑；其中所述α萘胺標準液，濃度 為2. 86mg/ml ； γ -谷氨酰-α -萘胺基質液，濃度為2. 71mg/ml ；重氮試劑由lg/L亞硝酸鈉 水溶液與2g/L氨基苯磺酸溶液以1 4體積比混勻配制而成，每IOOml所述氨基苯磺酸溶 液中含有20ml醋酸。按每個試劑盒裝載100個測試所需檢測試劑計算，所述α萘胺標準液為 0. Iml 士 4 μ 1、γ -谷氨酰-α -萘胺基質液為30ml ± 1.2ml,重氮試劑為200ml 士 8ml。一種用檢測精漿、-GT試劑盒檢測精漿、-GT的方法，該方法包括如下步驟1)依據反應原理和儀器性能設定檢測參數；2)在空白管中加入基質液，在標準管中加入標準液和基質液，在樣品管中加入精 漿和基質液；3)將步驟2)中的空白管、標準管和樣品管同時進行溫育，溫育時間為15min、溫育 溫度為37°C ；4)再向步驟3)中溫育好的空白管、標準管和樣品管中加入重氮試劑，混勻后37°C 再次溫育5min，通過檢測儀器進行比色，得出結果。所述檢測儀器為半自動生化分析儀，它的參數為項目類型為終點法；主波長為5IOnm ；延遲時間為3s ；測量時間為3s ；項目單位為U/ml ；標準濃度為80U/ml ；比色皿溫度 為 37°C。步驟2)中所述的精漿是將液化精液通過3000g離心15min獲得的上清液。有益效果與我們前期建立的手工法相比，使用本發(fā)明中的試劑盒以及用該試劑 盒進行檢測的方法，能使操作簡便、省時，無需進行樣品稀釋，無需計算儀器直接給出結果； 基質液用量為原來的3/5，重氮試劑用量為原來的2/5，從而節(jié)省試劑用量；采用本發(fā)明，能 夠作同步對比試驗，使得結果穩(wěn)定可靠，能廣泛適用于各級醫(yī)院的男科實驗室。


附圖為光密度與Y-GT活性的線性關系圖。
具體實施例方式下面結合實施例對發(fā)明作進一步的詳細說明，應理解這些實施例僅用于說明本發(fā) 明而不用于限制本發(fā)明的范圍。實施例1 本發(fā)明一種檢測精漿Y-GT試劑盒，包括α萘胺標準液、谷氨 酰-α-萘胺基質液和重氮試劑。其中所述α萘胺標準液，濃度為2.86mg/ml;Y-谷氨 酰-α-萘胺基質液，濃度為2.71mg/ml ；重氮試劑由lg/L亞硝酸鈉水溶液與2g/L氨基苯 磺酸溶液以1 4體積比混勻即可，其中每IOOml氨基苯磺酸溶液中含有20ml醋酸。按每 個試劑盒裝載100個測試所需檢測試劑計算，所述α萘胺標準液為0. Iml士4μ 1、γ-谷氨 酰-α -萘胺基質液為30ml 士 1. 2ml，重氮試劑為200ml 士 8ml。實施例2 —種用實施例1中的一種檢測精漿、-GT試劑盒進行檢測精漿、-GT的 方法，該方法的具體步驟如下1)設定檢測儀器參數所述檢測儀器為半自動生化分析儀，它的參數為項目類 型為終點法；主波長為510nm ；延遲時間為3s ；測量時間為3s ；項目單位為U/ml ；標準濃度 為80U/ml ；比色皿溫度為370C ；2)在空白管中加入基質液，在標準管中加入標準液和基質液，在樣品管中加入精 漿和基質液；3)將上述空白管、標準管和樣品管同時進行溫育，溫育時間為15min、溫育溫度為 370C ；所述的精漿是將液化精液通過3000g離心15min獲得的上清液；4)向溫育好的空白管、標準管和樣品管中加入重氮試劑，混勻后37°C再次溫育 5min，通過檢測儀器進行比色，得出結果。實施例3 按照實施例2的檢測方法對適合反應體系的反應體積進行確定依據手工法檢測結果，選擇Y-GT活性在正常參考值范圍上限附近的精漿樣本1 例。分別取100、200、300、400μ 1基質液，每管用生理鹽水補足至總體積為400 μ 1，分別加 入1 μ 1精漿樣本，混勻后37°c溫育15min，加5ml重氮試劑，37°C再次溫育5min，510nm檢 測各管吸光度。根據基質應過量，能保證反應充分進行的原則，發(fā)現300 μ 1基質液與1 μ 1 精漿反應較為合適。在此基礎上，取4支試管，分別加300 μ 1基質液和1 μ 1精漿樣本，混 勻后37°C溫育15min，分別加l、2、3、4ml重氮試劑，37°C再次溫育5min，然后前三管依次加 入3、2、lml生理鹽水，以保證總體積一致，混勻后510nm檢測各管吸光度。選擇能保證充分
4反應的最小量作為重氮試劑量，故反應體系中重氮試劑用量選擇為2ml。實施例4 在實施例2和實施例3的基礎上進行批內和批間變異檢測依據手工法檢測結果，選擇Y -GT活性在正常參考值范圍為94. 90U/ml 260. 32U/ml上限和下限附近的精漿樣本各1例，均分成2份，每份500 μ 1，1份在同一批 次內用半自動生化分析儀按照實施例2的方法并按照表一中的檢測步驟和反應條件重復 檢測10次，計算批內變異系數(CV)，得CV< 15% ；另1份置于-20°C凍存，檢測方法如實 施例2，檢測步驟和反應條件如表一，每天檢測1次，共10次，計算批間變異系數(CV)，得 CV < 15%，結論批內和批間的變異檢測得到的CV接近，表示使用該試劑盒方法檢測精漿 Y-GT活性穩(wěn)定、可靠。表一反應條件
權利要求
一種檢測精漿γ L 谷氨酰轉肽酶試劑盒，其特征在于，包括α萘胺標準液、γ 谷氨酰 α 萘胺基質液和重氮試劑；其中所述α萘胺標準液的濃度為2.86mg/ml；γ 谷氨酰 α 萘胺基質液的濃度為2.71mg/ml；重氮試劑由1g/L亞硝酸鈉水溶液與2g/L氨基苯磺酸溶液以1∶4體積比混勻配制而成，每100ml所述氨基苯磺酸溶液中含有20ml醋酸。
2.根據權利要求1所述的一種檢測精漿Y-L-谷氨酰轉肽酶試劑盒，其特征在于，按每 個試劑盒裝載100個測試所需檢測試劑計算，所述α萘胺標準液為0. Iml 士 4μ 1、γ-谷氨 酰-α -萘胺基質液為30ml 士 1. 2ml，重氮試劑為200ml 士 8ml。
3.用權利要求1或2所述的一種檢測精漿Y-L-谷氨酰轉肽酶試劑盒檢測精漿Y-L-谷氨酰轉肽酶的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟1)依據反應原理和儀器性能設定檢測參數；2)在空白管中加入基質液，在標準管中加入標準液和基質液，在樣品管中加入精漿和 基質液；3)將步驟2)中的空白管、標準管和樣品管同時進行溫育，溫育時間為15min、溫育溫度 為 37°C ；4)再向步驟3)中溫育好的空白管、標準管和樣品管中加入重氮試劑，混勻后37°C再次 溫育5min，通過檢測儀器進行比色，得出結果。
4.根據權利要求3所述的一種用檢測精漿Y-L-谷氨酰轉肽酶試劑盒檢測精漿Y-L-谷氨酰轉肽酶的方法，其特征在于，所述檢測儀器為半自動生化分析儀，它的參數為 項目類型為終點法；主波長為510nm ；延遲時間為3s ；測量時間為3s ；項目單位為U/ml ；標 準濃度為80U/ml ；比色皿溫度為37°C。
5.根據權利要求3所述的一種用檢測精漿Y-L-谷氨酰轉肽酶試劑盒檢測精漿Y-L-谷氨酰轉肽酶的方法，其特征在于，步驟2)中所述的精漿是將液化精液通過3000g離 心15min獲得的上清液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種檢測精漿γ-L-谷氨酰轉肽酶試劑盒及檢測方法，該檢測精漿γ-GT試劑盒，包括α萘胺標準液、γ-谷氨酰-α-萘胺基質液和重氮試劑。該檢測方法為首先設定檢測儀器參數；在空白管中加入基質液，在標準管中加入標準液和基質液，在樣品管中加入精漿和基質液；將上述空白管、標準管和樣品管同時進行溫育，溫育時間為15min、溫育溫度為37℃；加入重氮試劑，混勻后37℃再次溫育5min，通過檢測儀器進行比色，得出結果。本發(fā)明中的試劑盒及檢測方法能使操作簡便、省時、節(jié)省試劑；采用本發(fā)明，能夠作同步對比試驗，使得結果穩(wěn)定可靠，適用于各級醫(yī)院的男科實驗室。
文檔編號G01N21/31GK101974614SQ201010501709
公開日2011年2月16日 申請日期2010年9月29日 優(yōu)先權日2010年9月29日
發(fā)明者盧坤剛, 陸金春, 陳曉慧 申請人:南京欣迪生物藥業(yè)工程有限責任公司