專利名稱：合歡總皂苷及提取方法，以該組合物為基本活性的醫(yī)藥用途及藥物制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及合歡(Albizzia julibrissin Durazz)花和皮的提取物總皂苷及提取方法，藥用用途及藥物制劑。
背景技術(shù)：
合歡(Albizzia julibrissin Durazz)在植物分類學(xué)上屬毛莨科植物。合歡含有三萜類化合物，黃酮類化合物，木質(zhì)素類化合物，生物堿及多糖類成分。我們通過近幾年的對合歡的有效成分進(jìn)行的一些藥理研究，發(fā)現(xiàn)合歡的提取物具有抗抑郁作用、抗腫瘤作用，安眠作用及鎮(zhèn)靜等作用。
然而到目前為止尚未見到有將合歡總皂苷制備成藥物的信息，發(fā)明人經(jīng)過大量的試驗研究證實，合歡總皂苷(包括合歡皮和合歡花中提取)具有明顯的抗抑郁作用、抗腫瘤作用，安眠作用及鎮(zhèn)靜等作用，完成了合歡總皂苷的提取和制備以合歡總皂苷為基本活性成分的藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種合歡總皂苷。
本發(fā)明的另一個目的是提供從合歡中提取總皂苷的方法。
本發(fā)明的又一個目的是提供合歡總皂苷的藥用用途。
本發(fā)明的最終目的是提供以合歡總皂苷為基本活性物質(zhì)的藥物。
本發(fā)明的合歡總皂苷是以合歡皮和合歡花原料經(jīng)水或醇的水溶液提取，或者水提堿沉淀提取，水煎液經(jīng)過大孔吸附樹脂柱吸附，再以30-95％濃度的醇洗脫，醇洗脫液所獲得的組分。
所獲得的組分含合歡皂苷A1、A2、A3、A4、B、C、J1、J2、J3、J4、J5、J6等多種有效成分。提取物中除含有合歡總皂苷外，還可含有在合歡總皂苷分離純化過程中殘留的合歡植物本身的少量黃酮、木質(zhì)素、肽、氨基酸、多糖，以及微量元素和揮發(fā)油。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解到，這些雜質(zhì)成分基本上不會給本發(fā)明藥物組合物中合歡總皂苷的藥理學(xué)活性帶來不利影響。
本發(fā)明的合歡總皂苷的藥用用途有合歡總皂苷在制備預(yù)防和治療抑郁癥的藥物中的應(yīng)用。
合歡總皂苷在制備預(yù)防和治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
合歡總皂苷在制備鎮(zhèn)靜催眠藥物中的應(yīng)用。
合歡總皂苷在制備治療和預(yù)防免疫力低下等癥的藥物中的應(yīng)用。
一種治療抑郁癥、腫瘤、鎮(zhèn)靜催眠的藥物組合物，由合歡總皂苷與一種或多種醫(yī)藥上可接受的載體和/或賦形劑相混合組成。
本發(fā)明的藥物組合物中合歡總皂苷占藥物組合物的50％(w/w)以上，并且所說的合歡總皂苷基本上是由三萜皂苷組成的。
本發(fā)明藥物組合物中合歡總皂苷可占總重量的1％-99％。
本發(fā)明藥物組合物中合歡總皂苷優(yōu)選含量為總重量的20％-80％。
可以將合歡總皂苷與一種或多種醫(yī)藥上可接受的載體或賦形劑按適當(dāng)比例混合，制成適用于臨床上使用的不同劑型的藥物組合物.例如可將所說的組合物配制成可供靜脈內(nèi)，肌肉內(nèi)、腹腔內(nèi)、皮下、腦脊髓腔內(nèi)等注射給藥的注射劑，或者制成適于口服給藥的片劑、顆粒劑、滴丸、沖劑、液體制劑、粉末劑。丸劑、膠囊劑和懸浮劑，以及適于局部給藥的噴霧劑、氣霧劑、霜劑、軟膏和栓劑。
為了制備適于胃腸道外途徑藥的溶液劑，例如可使用蒸餾水、注射用水、等滲氯化鈉溶液或葡萄糖溶液，或者低濃度(例如1-100mM)磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)作為載體或賦形劑?？梢栽谶@些胃腸道外給藥的制劑中加入一種或多種其他輔助成分或添加劑，例如可使用抗壞血酸作為抗氧化劑，使用苯甲酸鈉或尼泊金甲酪作為防腐劑，使用二甲基亞砜作為吸收促進(jìn)劑。
為了制備適于口服給藥的片劑、粉末劑，懸浮劑或膠囊劑，可以使用蔗糖、半乳糖、玉米淀粉、明膠、脂質(zhì)、微晶纖維素、滑石粉等作為載體或賦形劑。在這些適于口服給藥的制劑中，還可含有其他適當(dāng)?shù)奶砑觿?，例如增溶劑、崩解劑、潤滑劑、吸收促進(jìn)劑、分散劑、表面活性劑、矯味劑或著色劑等。
最好將本發(fā)明的藥物組合物制成各種適于口服紿藥的劑型，例如片劑、粉末劑、膠囊劑，或口服液或乳劑.這些口服制劑的單位劑量一般包含30-800mg合歡總皂苷。
本發(fā)明藥物組合物的另一個優(yōu)選給藥途徑是靜脈內(nèi)或肌肉內(nèi)注射適于這些給藥途徑的注射液。例如對于某些癌癥病人，可將本發(fā)明藥物組合物的注射液制劑加在等滲葡萄糖溶液或等滲氯化鈉溶液中，持續(xù)地滴注給藥。
本發(fā)明藥物的服用量口服20-1000mg/次人，每日3次；注射10-1000mg/次人，每日1次。可根據(jù)服用方式，病人的年齡、體重，病情嚴(yán)重程度及其他因素適當(dāng)變化用量。
本發(fā)明的積極效果是得到了合歡的藥用活性物質(zhì)合歡總皂苷及在制備抗抑郁、抗腫瘤、安眠鎮(zhèn)靜、提高免疫力等藥物中的應(yīng)用，并完成了相應(yīng)藥物的制備。為上述病癥的治療提供了新藥。
藥效實驗例藥理試驗1，總皂苷抗抑郁作用。
藥物合歡總皂苷，黃色粉末，經(jīng)篩選用劑量80-30mg/kg，。
動物昆明種小白鼠，體重18-22g，雌雄兼用，購自長春市綠園區(qū)科新實驗動物養(yǎng)殖場。合格證號吉動質(zhì)字10--1015。
方法1.小鼠自主活動實驗 小鼠連續(xù)灌胃7天，于末次灌胃h后放入XZC-4A小動物自主活動測定儀(山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院制造)適應(yīng)3min后，觀察5min內(nèi)的活動次數(shù)。
2.小鼠懸尾實驗 小鼠連續(xù)灌胃7天，于末次灌胃1h后將小從尼崩2cm處固定于水平面上，使其呈倒掛狀態(tài)，頭部離臺面約3cm，四周以板隔離動物視線，記錄小鼠在6min內(nèi)的不動時間。
3.小鼠強(qiáng)迫游泳實驗 剔除預(yù)實驗不合格者，連續(xù)灌胃7天。并于末次灌胃后1h，將小鼠放人直徑22cm，水深1Ocm的水桶，水溫25℃(同預(yù)實驗條件一致)，適應(yīng)2min，累計后4min內(nèi)小鼠的不動時間。實驗結(jié)果采用SPSS統(tǒng)計軟外進(jìn)行單因素方差分析和秩和檢驗。
結(jié)果見表1。
表1合歡皂苷對小鼠自主活動的影響(X±s)

表2合歡總皂苷對小鼠懸尾實驗不動時間的影響(X±s)

表3合歡總皂苷對小鼠強(qiáng)迫游泳實驗不動時間的影響(X±s)


藥理試驗2，合歡總皂苷抗腫瘤作用。
合歡總皂苷以80、30mg/kg劑量灌胃給藥，P388腹水型及S180實體肉瘤顯示較明顯的抗癌活性，對肝癌腹水型也有一定的抗癌作用。
藥物合歡總皂苷，黃色粉末，經(jīng)篩選用劑量80 30mg/kg，，用時以生理鹽水溶解，吐溫-80助溶。
動物昆明種小白鼠，體重18-22g，雌雄兼用，購自長春市綠園區(qū)科新實驗動物養(yǎng)殖場。合格證號吉動質(zhì)字10-1015。
瘤株P(guān)388腹水型、S180實體肉瘤、肝癌腹水型，均購自吉林省腫瘤研究所。
方法取接種7-10天的荷瘤動物，脫頸椎處死，在無菌條件下，消毒腹部皮膚，抽取乳白色瘤液，以生理鹽水按1∶2比例稀釋，然后給正常動物接種，每只0.2ml，腹水型接種于雌性動物腹腔，實體型接種于雄性動物腋窩皮下，接種后次日開始分組給藥，觀察對腹水型的生命延長率及對實體型的抑瘤率，結(jié)果用統(tǒng)計學(xué)t檢驗處理。見下表1。
表1合歡總皂苷對動物移植性腫瘤P388的影響

注*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001以下同略表2合歡總皂苷對動物移植性腫瘤S180的影響


表3合歡總皂苷對動物移植性腫瘤Hep-A-22的影響

由表中結(jié)果可知，合歡總皂苷對P388腹水型及S180肉瘤均顯示出較強(qiáng)的抗癌作用，與對照組比較差異顯著，其中80mg/kg劑量療效較穩(wěn)定，對Hep-A-22腹水型也顯示有一定作用。
藥理試驗3，合歡總皂苷對免疫功能的影響1.材料和方法環(huán)磷酰胺，上海第十二制藥廠生產(chǎn)，臨用時用生理鹽水配成0.5％和5％濃度。
2.動物昆明種小白鼠。雌雄兼用，體重19.0±031g。
3.方法將小鼠50只隨機(jī)分為5組.分別用生理鹽水，環(huán)磷酰胺、合歡總皂苷灌胃，每天1次，每次0.2ml/10g，連用6天。于末次給藥后24小時，每鼠腹腔注射2％雞紅細(xì)胞(CRBC)混懸液1.0ml，間隔30分鐘后腹腔注射生理鹽水2.0ml。然后頸椎脫臼處死，切開腹部皮膚，經(jīng)腹膜吸取腹腔液1.0ml，分別滴十兩片載玻片上，每片0.5ml，置37℃培養(yǎng)箱中孵育30分鐘，孵畢，于生理鹽水中漂洗，以除去未貼片細(xì)胞，涼干，用1∶1丙酮——甲醇溶液固定.用4％Giemsa-PBS液染色3分鐘，蒸餾水漂洗，涼干，油鏡下計數(shù)，每個樣本兩份，計數(shù)后馭平均值，按下列公式計算吞噬串和吞噬指數(shù)吞噬率＝(吞噬CRBC的巨噬細(xì)胞數(shù)/200個巨噬細(xì)胞)×100％
吞噬指數(shù)＝被吞噬的CRBC總數(shù)/吞噬CRBC的巨噬細(xì)胞數(shù)取用藥6天后各組小白鼠的脾臟和胸腺別稱重，計算每10g體重脾臟和胸腺的mg數(shù)脾指數(shù)和胸腺指數(shù)。
合歡總皂苷對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬CRBC的影響(x±s)

合歡總皂苷對小鼠免疫器官重量的影響(x±s)

***P＜0.001，**P＜0.01，*P＜0.05綜上所述，合歡總皂苷無論是在整體或離體條件下，均具有抗腫瘤作用和增強(qiáng)免疫功能。
試驗4鎮(zhèn)靜安眠作用1、對小白鼠自發(fā)活動的影響小白鼠的篩選標(biāo)準(zhǔn)取小白鼠11只，空腹過夜后放人自發(fā)活動光電自動打印儀的測定盒中，記錄15rain的活動量，結(jié)果為108一672次。以上下相差100為范圍，取涵蓋動物數(shù)最多為篩選標(biāo)準(zhǔn)。確定小白鼠用藥前15min的活動次數(shù)在340-440范圍內(nèi)為合格動物。小白鼠禁食過夜后按上述方法進(jìn)行篩選，合格者隨機(jī)分組，ig給藥立即故人測定盒中測定給藥后0-15，16-30，31-45，46-60rain的自發(fā)活動量分組，結(jié)果見表1，實驗證明合歡總皂苷對小白鼠的自發(fā)活動有明顯的抑制作用，且存在較明顯的量效關(guān)系，小劑量組起效較慢在給藥后10min才出現(xiàn)鎮(zhèn)靜作用，以后逐漸加強(qiáng)。
對小鼠自發(fā)活動的影響(x±s)

2、對戊巴比妥鈉睡眠作用的影響經(jīng)測試確定小白鼠戊巴比妥鈉的催眠閾上和閾下劑量分別為35和25rug/kg(中)。取小白鼠50只，隨機(jī)分為5組，做延長作用實驗，各組用藥劑量見表2。巾給藥5min后。各小白鼠戊巴比妥鈉溶液均按0.35ml/20g，以翻正反射消失時間為睡眠時間。若睡眠時間大于180min，則按180min計算。結(jié)果表明，合歡總皂苷大劑量組也能明顯延長戊巴比妥鈉的睡眠時間；另取50只小白鼠做加強(qiáng)作用實驗，分組及ig給藥情況同前。ip戊巴比妥鈉溶液按0.25ml/20g給藥，以翻正反射消失為睡眠指標(biāo)，記錄各組入睡動物數(shù)。經(jīng)X2檢驗，合歡總皂苷大，中劑量組均能非常顯著地加強(qiáng)戊巴比妥鈉的睡眠作用，提高動物的睡眠率。
表2合歡總皂苷延長戌巴比妥鈉的睡眠時間(x±s)

具體實施例方式實施例1(合歡總皂苷的制備1)
取合歡皮1kg加適量的水，加熱煮沸三次，(每次40分鐘)。收集并合并所得的水提液，過濾，將濾液加于預(yù)先用酸和堿處理的大孔吸附樹脂柱(型號可選用D101、D21、AB-8)，用去離子水洗柱直到洗出液無顏色，后用70％乙醇洗脫。收集70％乙醇洗脫液，并減壓回收，蒸干，將所得濃縮物用70％乙醇溶解，放置，并濾過，濾液減壓濃縮干燥，得到黃色粉末狀合歡總皂苷50g。
實施例2(合歡總皂苷的制備2)取合歡皮或花1kg加適量的水，加熱煮沸三次，(每次40分鐘)。收集并合并所得的水提液，濃縮之相對密度為1.20，加乙醇至醇濃度為70％，或用85％乙醇提取，濾過，回收乙醇至無醇味，將藥液加于預(yù)先用酸和堿處理的大孔吸附樹脂柱，用去離子水洗柱直到洗出液無顏色，后用80％乙醇洗脫。收集80％乙醇洗脫液，并減壓回收，蒸干，得到黃色粉末狀合歡總皂苷80g。
實施例3(合歡總皂苷注射劑的制備1)取合歡總皂苷100g，用75％乙醇溶解制成5％的合歡總皂苷溶液，用活性炭脫色，濾過，減壓濃縮干燥，加注射用水制成每ml含20mg合歡總皂苷的水溶液，用微孔濾膜(φ0.20μm)濾過至澄明，滅菌，無菌分裝于西林瓶中，每瓶5ml，置冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥，即得。
實施例4(合歡總皂苷注射劑的制備2)取合歡總皂苷100g，用75％乙醇溶解制成5％的合歡總皂苷溶液，用活性炭脫色，濾過，減壓濃縮干燥，加注射用水制成5％的水溶液，用微孔濾膜(φ0.20μm)濾過至澄明，滅菌，無菌分裝，每瓶10ml，封口，即得。
實施例5(合歡總皂苷膠囊劑的制備)取合歡總皂苷1kg，藥用淀粉0.5kg，用80％乙醇濕法制粒，整粒，裝2#膠囊，每粒0.2g。其它項目應(yīng)符合中華人民共和國藥典2000年版膠囊項下。
實施例6(合歡總皂苷片劑的制備)取合歡總皂苷1kg，藥用淀粉0.5kg，糊精1kg，50乙醇適量制粒，整粒，干燥，壓片，每片0.3g。其它項目應(yīng)符合中華人民共和國藥典2000年版片劑項下。
權(quán)利要求
1.合歡總皂苷，其特征是以合歡皮和合歡花原料經(jīng)水或醇的水溶液提取，或者水提堿沉淀提取，水煎液經(jīng)過大孔吸附樹脂柱吸附，再以30-95％濃度的醇洗脫，醇洗脫液所獲得的組分。
2.合歡總皂苷在制備預(yù)防和治療抑郁癥的藥物中的應(yīng)用。
3.合歡總皂苷在制備預(yù)防和治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
4.合歡總皂苷在制備鎮(zhèn)靜催眠藥物中的應(yīng)用。
5.合歡總皂苷在制備治療和預(yù)防免疫力低下等癥的藥物中的應(yīng)用。
6.一種治療抑郁癥、腫瘤、鎮(zhèn)靜催眠的藥物組合物，其特征是由合歡總皂苷與一種或多種醫(yī)藥上可接受的載體和/或賦形劑相混合組成。
7.根據(jù)權(quán)利要求7的治療抑郁癥、腫瘤、鎮(zhèn)靜催眠的藥物組合物，其特征是合歡總皂苷占藥物組合物的50％(w/w)以上，并且所說的合歡總皂苷基本上是由三萜皂苷組成的。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的治療抑郁癥、腫瘤、鎮(zhèn)靜催眠的藥物組合物，其特征是合歡總皂苷可占總重量的1％-99％。
9.根據(jù)權(quán)利要求7的治療抑郁癥、腫瘤、鎮(zhèn)靜催眠的藥物組合物，其特征是合歡總皂苷優(yōu)選含量為總重量的20％-80％。
全文摘要
合歡總皂苷及其提取方法和藥用用途，屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域。合歡總皂苷是以合歡皮和合歡花原料經(jīng)水或醇的水溶液提取，經(jīng)過大孔吸附樹脂柱純化，醇洗脫，濃縮成漫膏狀或干粉，醇溶解，回收醇后得到的提取物。用于制備治療抑郁癥、腫瘤、鎮(zhèn)靜催眠及提高免疫力的藥物。本發(fā)明的積極效果是得到了合歡的藥用活性物質(zhì)合歡總皂苷及為抗抑郁、抗腫瘤、安眠鎮(zhèn)靜、提高免疫力等病癥的治療和保健提供了新藥。
文檔編號A61K31/7028GK1836684SQ200510016638
公開日2006年9月27日 申請日期2005年3月22日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月22日
發(fā)明者徐東銘, 徐雅娟, 劉平 申請人:徐東銘, 徐雅娟