專利名稱：控釋組合物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及制備控釋組合物的方法；以及，具體而言涉及通過(guò)乳化方法使包含生物活性劑和聚合物的有機(jī)溶液與包含有機(jī)離子的含水溶液相接觸以產(chǎn)生控釋組合物的方法。本發(fā)明進(jìn)一步提供包含聚合物、有機(jī)離子和生物活性劑的控釋組合物的使用方法。
背景技術(shù)：
目前市場(chǎng)上有多種包含各種生物活性劑如GnRH類似物、人類生長(zhǎng)激素、利培酮(risperidone)和促生長(zhǎng)素抑制素類似物例如醋酸奧曲肽(octreotide acetate)的控釋組合物。這些控釋組合物代表性地是由可生物降解、生物相容性的聚合物配制而成。這種組合物由于減少了多次注射的需要而成為衛(wèi)生保健工作者及其患者的首選。此外，由于一次注射可對(duì)患者具有較長(zhǎng)時(shí)間的治療作用，因此衛(wèi)生保健機(jī)構(gòu)首選它們是因?yàn)槠淇蓽p少患者就診的次數(shù)，這有利于減少衛(wèi)生保健的費(fèi)用。
不幸的是，當(dāng)前控釋組合物的生產(chǎn)方法與配制中存在許多問(wèn)題。當(dāng)前許多制備方法不適于生產(chǎn)載藥量高的濃縮制品，從而不得不采用大體積的肌肉內(nèi)注射(2mL)，而這在給藥時(shí)令患者極不舒服。此外，許多方法在包封之前需要費(fèi)時(shí)且復(fù)雜的過(guò)程以增溶生物活性劑；并且為包封而進(jìn)行的增溶操作可導(dǎo)致有害的釋放性質(zhì)，以及生物活性劑自身的降解。例如，使用更高水溶性的生物活性劑例如在向患者給藥或被引入生理介質(zhì)中與含水溶液相接觸后，常常導(dǎo)致不良的生物活性劑的“突釋”。這種生物活性劑水平的急劇升高會(huì)對(duì)患者有害并且僅剩余少量的生物活性劑在所需的治療時(shí)間中用于以后的釋放。
曾嘗試過(guò)各種各樣的方法以解決溶解度問(wèn)題，但未曾有特別有效或有用的方法。一種嘗試是將生物活性劑與包含陰離子頭部和疏水性尾部的表面活性劑分子相結(jié)合，以在包封之前增加生物活性劑在有機(jī)相中的溶解度。另一種方法是將有機(jī)酸與生物活性劑相結(jié)合以在包封之前生成水不溶性的加成鹽。水不溶性加成鹽的使用在給藥時(shí)能減少“突釋”效應(yīng)；然而，這種方法要求額外的生產(chǎn)過(guò)程從而使得這些化合物的制備昂貴且低效。另一種方法包括對(duì)生物活性劑的醋酸鹽進(jìn)行包封從而使大量的化學(xué)修飾或降解的生物活性劑在被置于含水的生理緩沖鹽中后釋放出來(lái)?；瘜W(xué)降解是采用不理想的生物活性劑酰化的形式進(jìn)行的。
非常需要能夠生成具有載藥量高、給藥時(shí)突釋效應(yīng)很小且生物活性劑的降解很少的產(chǎn)品的控釋組合物制備方法，以實(shí)現(xiàn)這些種類的組合物作為人類或獸醫(yī)治療法的真正益處。

發(fā)明內(nèi)容
根據(jù)此處具體描述且概描的本發(fā)明目的，一方面，本發(fā)明涉及制備及使用控釋組合物的方法。
在一個(gè)具體實(shí)施方案中，該方法包括以下步驟在有機(jī)相中將生物活性劑與聚合物相結(jié)合；將有機(jī)離子結(jié)合入水相中；并使所得有機(jī)相和水相接觸以產(chǎn)生控釋組合物。
在某一具體實(shí)施方案中，該方法包括以下步驟在有機(jī)相中將生物活性劑與聚合物結(jié)合；將有機(jī)離子結(jié)合入水相中；并將所得有機(jī)相和水相經(jīng)乳化過(guò)程以產(chǎn)生控釋組合物。
在某一具體實(shí)施方案中，該方法包括使包含聚合物與生物活性劑的有機(jī)相與包含有機(jī)離子的水相接觸，其中有效量的有機(jī)離子離開水相而進(jìn)入有機(jī)相。
在一個(gè)具體實(shí)施方案中，該有機(jī)相包含一種選自但不限于二氯甲烷、乙酸乙酯、苯甲醇、丙酮、乙酸以及碳酸丙烯酯的溶劑。
在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，該有機(jī)相還包含一種共溶劑。該共溶劑可以選自但不限于二甲基亞砜、二甲基甲酰胺、n-甲基吡咯烷酮、PEG200、PEG400、甲醇、乙醇、異丙醇以及苯甲醇。
在另一具體實(shí)施方案中，該水相還包含乳化劑。該乳化劑可以選自但不限于聚(乙烯醇)、白蛋白、卵磷脂、維生素E-D-α-生育酚-聚乙二醇(TPGS)以及聚山梨醇酯。在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，該乳化劑存在的最終濃度范圍可為約0.1至10重量％。
在某一具體實(shí)施方案中，該有機(jī)離子的最終濃度在約0.1至1000mM的范圍。
在某一具體實(shí)施方案中，該控釋組合物選自但不限于微粒和納米粒。在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，該微粒和納米粒為可生物降解的。
在另一具體實(shí)施方案中，該聚合物可以選自但不限于以下組中聚(丙交酯)、聚(乙交酯)、聚(丙交酯-共-乙交酯)、聚(乳酸)、聚(羥基乙酸)、聚(乳酸-共-羥基乙酸)、聚己內(nèi)酯、聚碳酸酯、聚酯酰胺、聚酸酐、聚(氨基酸)、聚原酸酯、聚乙酰(polyacetyls)、聚氰基丙烯酸酯、聚醚酯、聚(二氧雜環(huán)己酮)、聚(亞烴基烷基化物)(poly(alkylenealkylate)s)、聚乙二醇和聚(丙交酯-共-乙交酯)的共聚物、可生物降解的聚氨基甲酸酯、它們的混合物及共聚物。
在另一具體實(shí)施方案中，該生物活性劑可以選自但不限于以下組中蛋白質(zhì)、核酸、肽、小分子藥物、免疫原、能促進(jìn)細(xì)胞和組織生長(zhǎng)和存活的代謝前體、抗腫瘤藥物、激素、抗組胺劑、心血管藥物、抗?jié)兯幬铩⒅夤軘U(kuò)張劑、血管擴(kuò)張劑、中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物、麻醉劑拮抗藥等。
在某一具體實(shí)施方案中，該乳化方法選自水包油以及水包油包水。
在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法可通過(guò)任何已知的乳化方法來(lái)實(shí)施。
在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，該有機(jī)離子選自陰離子和陽(yáng)離子物質(zhì)。在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，該有機(jī)離子選自雙羥萘酸根、三氟甲基-對(duì)-甲基苯甲酸根、膽酸根、2-萘磺酸根、2，3-萘二甲酸根、1-羥基-2-萘甲酸根、3-羥基-2-萘甲酸根、2-萘甲酸根以及水楊酰水楊酸根。
在另一具體實(shí)施方案中，降解包括?；?。在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，該酰化反應(yīng)包括生物活性劑的氨基直接親核進(jìn)攻聚酯如聚(d，l-丙交酯-共-乙交酯)的羰基碳。據(jù)猜測(cè)，本組合物中該生物活性劑是通過(guò)促進(jìn)潛在的親核體(如氨基)的質(zhì)子化來(lái)防止或減少降解，從而導(dǎo)致親核體較不易于參與同PLGA聚合物骨架或其片段的?；磻?yīng)。
在另一具體實(shí)施方案中，降解包括聚合物的溶解(lysis)。過(guò)量溶解可能導(dǎo)致聚合物分子量的快速丟失以及生物活性劑的過(guò)早釋放。
在另一具體實(shí)施方案中，相對(duì)于有機(jī)離子，該生物活性劑的摩爾化學(xué)計(jì)量范圍為約0.5至2.0。在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，相對(duì)于有機(jī)離子，該生物活性劑的摩爾化學(xué)計(jì)量范圍為約1.0至1.5。
在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種控釋組合物，其包含聚合物以及與有機(jī)離子組成復(fù)合物形式的生物活性劑。當(dāng)有機(jī)離子和生物活性劑形成緊密物理結(jié)合時(shí)即可形成該復(fù)合物。
在另一具體實(shí)施方案中，該生物活性劑含量相對(duì)于根據(jù)本發(fā)明方法在不含有機(jī)離子時(shí)制備的組合物的生物活性劑含量可有所提高。
在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明包括一種將生物活性劑與有機(jī)相結(jié)合；將聚合物與同一有機(jī)相結(jié)合；將有機(jī)離子與水相結(jié)合；以及通過(guò)利用乳化方法使所述有機(jī)相與所述水相接觸的方法，以用于生成包封形式的生物活性劑。
本發(fā)明的其它優(yōu)點(diǎn)將在下列的說(shuō)明書中部分列出，并且部分將可由說(shuō)明書明顯得出，或者將可通過(guò)本發(fā)明的實(shí)施而學(xué)到。根據(jù)所附權(quán)利要求書中具體指出的要素及組合將認(rèn)識(shí)并實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。應(yīng)理解前述的概述以及以下的詳述都只是示例性和解釋性，而并非對(duì)如權(quán)利要求書所要求的本發(fā)明的限制。
具體實(shí)施例方式
定義為本發(fā)明目的，下列術(shù)語(yǔ)應(yīng)具有以下含義為本發(fā)明目的，術(shù)語(yǔ)“可生物降解的”是指聚合物在特定治療環(huán)境可接受的一段時(shí)期內(nèi)于體內(nèi)溶解或降解。這種溶解或降解的產(chǎn)品可能包括更小的化學(xué)物種。可通過(guò)如酶促、化學(xué)和/或物理方法導(dǎo)致降解。在暴露于生理pH和溫度如pH范圍為6至9且溫度范圍為22℃至38℃后，生物降解典型地需消耗少于五年，通常少于1年。
為本發(fā)明目的，術(shù)語(yǔ)“有機(jī)相”和“非連續(xù)相”可以互換并且是指本發(fā)明方法中建立的溶劑、聚合物以及生物活性劑的溶液，之后它將通過(guò)乳化方法與水相接觸以生成本發(fā)明的控釋組合物。
為本發(fā)明目的，術(shù)語(yǔ)“降解”是指對(duì)生物活性劑的任何不需要的修飾，如酰化，或?qū)酆衔锏男揎?，如溶解?br> 為本發(fā)明目的，術(shù)語(yǔ)“水相”和“連續(xù)相”可以互換并且是指本發(fā)明方法中建立的水與有機(jī)離子劑的溶液，之后它將通過(guò)乳化方法與有機(jī)相接觸以用于生成本發(fā)明的控釋組合物。
為本發(fā)明目的，術(shù)語(yǔ)“結(jié)合”是指任何將兩種或更多種物質(zhì)置于一起的方法。這種方法包括但不限于攪拌、摻和、混合、調(diào)合、均質(zhì)化、摻入、摻混、熔合、接合、摻雜、攪動(dòng)、合并、結(jié)合、混淆、接合、組合等。
為本發(fā)明目的，范圍在此處可表示為從“大約”或“近似地”某一特定值，和/或到“大約”或“近似地”另一特定值。當(dāng)表示這種范圍時(shí)，另一具體實(shí)施方案包括從該特定值和/或到另一特定值。類似地，當(dāng)利用修飾語(yǔ)(antecedent)“大約”將數(shù)值表示為近似值時(shí)，應(yīng)理解為該特定值形成另一具體實(shí)施方案。還應(yīng)進(jìn)一步理解為各范圍的端點(diǎn)不但關(guān)于另一端點(diǎn)具有重要意義而且獨(dú)立于另一端點(diǎn)具有重要意義。
為本發(fā)明目的，術(shù)語(yǔ)“生物活性劑”是指在體內(nèi)或在體外具有生物活性的任何物質(zhì)，其中生物活性可以作為全身健康狀況或者至少一種健康標(biāo)記(即，癥狀)的可見變化、作為相關(guān)的替代生物學(xué)標(biāo)記的變化、或者作為化學(xué)結(jié)構(gòu)或生理相關(guān)分子的構(gòu)型的變化而被檢測(cè)到。
為本發(fā)明目的，術(shù)語(yǔ)“有機(jī)離子”是指陽(yáng)離子或陰離子物質(zhì)。有機(jī)離子可以其鹽或酸的形式存在。示例性的有機(jī)離子包括雙羥萘酸根、萘甲酸根、膽酸根等。
為本發(fā)明目的，“控釋組合物”應(yīng)該是指與自然的生物活性劑相比具有不同的釋放性質(zhì)的任何組合物。典型的釋放性質(zhì)將包括在至少一周、至少一月、至少45天、或者長(zhǎng)于45天的一段時(shí)間內(nèi)的生物活性劑的生理學(xué)可檢測(cè)的濃度。
此外，為本發(fā)明目的，術(shù)語(yǔ)“一個(gè)”(a、an)實(shí)體是指一個(gè)或更多個(gè)實(shí)體；如“一種蛋白質(zhì)”或“一種肽”是指一種或多種那些化合物或者至少一種化合物。同樣地，術(shù)語(yǔ)“一”、“一個(gè)或更多個(gè)”以及“至少一個(gè)”在此處可以互相替換使用。還應(yīng)注意的是，術(shù)語(yǔ)“包含”、“包括”以及“含有”可以互相替換使用。而且，化合物“選自以下組中”(或選自)是指下面列出的一種或更多種化合物，包括兩種或更多種化合物的混合物(即，組合)。根據(jù)本發(fā)明，一種分離的或生物學(xué)純的生物活性劑是指已從天然環(huán)境中分離出來(lái)的化合物。同樣地，“分離的”和“生物學(xué)純的”不必反映化合物被純化的程度。本發(fā)明分離的化合物可以從其天然來(lái)源中獲得、可以利用分子生物學(xué)技術(shù)制備、或者可以通過(guò)化學(xué)合成來(lái)制備。
以下將對(duì)本發(fā)明的某些具體實(shí)施方案加以詳細(xì)的說(shuō)明，其實(shí)施例將結(jié)合圖和實(shí)施例部分詳細(xì)闡述。
此處所公開的是用于制備本發(fā)明控釋組合物的成分。這些和其它物質(zhì)在此處公開，并應(yīng)理解為當(dāng)公開這些物質(zhì)的組合、子集、相互作用、組等但可能并未明確具體提及這些化合物的各種單獨(dú)的以及共同的置換時(shí)，這些置換已于此處分別加以具體描述并涵蓋。例如，如果已公開并討論許多生物活性劑，并且討論了對(duì)許多分子包括生物活性劑可以進(jìn)行許多修飾，除非另有說(shuō)明，則應(yīng)理解為具體涵蓋了生物活性劑的各種以及所有的組合和置換以及可能的修飾。這樣，如果公開了一類分子A、B、與C以及一類分子D、E、和F以及組合分子的實(shí)例A-D，那么即使如果并未分別提及，但仍應(yīng)認(rèn)為已公開A-E、A-F、B-D、B-E、B-F、C-D、C-E和C-F，它們單獨(dú)地以及共同地被認(rèn)為都是所指的組合。同樣地，還公開了它們的任何子集或組合。這樣，應(yīng)認(rèn)為已公開例如A-E、B-F和C-E的亞組。這種觀念應(yīng)用到本說(shuō)明書的各個(gè)方面，包括但不限于制備及使用本發(fā)明的方法中的各個(gè)步驟。
生物活性劑在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述生物活性劑選自蛋白質(zhì)、核酸、糖類、肽以及小分子藥物。本發(fā)明使用的蛋白質(zhì)包括但不局限于抗體、治療性蛋白質(zhì)、人類生長(zhǎng)激素、胰島素、催產(chǎn)素、奧曲肽、促性腺素釋放激素、亮丙瑞林(leuprolide)、干擾素α、干擾素β、干擾素γ、胰島素、降血鈣素、白細(xì)胞介素-1、白細(xì)胞介素-2等。本發(fā)明使用的核酸包括DNA、RNA、化學(xué)修飾的DNA以及化學(xué)修飾的RNA、適體、反義核酸、RNA干擾、以及小RNA干擾。糖類包括肝素、低分子量肝素等。肽包括LHRH激動(dòng)劑以及合成的類似物、亮丙瑞林、促生長(zhǎng)素抑制素類似物、激素、奧曲肽、胰高血糖素樣肽、催產(chǎn)素等。小分子藥物包括但不限于抗感染藥、細(xì)胞毒素、抗高血壓藥物、抗真菌藥物、抗精神病藥、抗糖尿病藥、免疫刺激物、免疫抑制劑、抗生素、抗病毒藥、抗驚厥藥、抗組胺劑、心血管藥物、抗凝血?jiǎng)?、激素、抗瘧藥、止痛劑、麻醉劑、甾體、非甾體抗炎藥、止吐藥。
在另一具體實(shí)施方案中，該生物活性劑為免疫原。該免疫原可以選自但不限于用于刺激抗肝炎、抗流感、抗麻疹、抗風(fēng)疹、抗破傷風(fēng)、抗小兒麻痹癥、抗狂犬病等的抗體的免疫原。
在另一具體實(shí)施方案中，該生物活性劑是能夠促進(jìn)細(xì)胞或組織生長(zhǎng)和存活或增強(qiáng)細(xì)胞功能的物質(zhì)或代謝前體。這種物質(zhì)或代謝前體可以選自但不限于神經(jīng)生長(zhǎng)促進(jìn)物質(zhì)如神經(jīng)節(jié)苷脂、神經(jīng)生長(zhǎng)因子等；硬或軟組織生長(zhǎng)促進(jìn)劑如纖連蛋白、人類生長(zhǎng)激素、集落刺激因子、骨形態(tài)發(fā)生蛋白、血小板衍生生長(zhǎng)因子(platelet-derived growth factor)、胰島素衍生生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β、表皮生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、白細(xì)胞介素-1、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子、骨粉物質(zhì)(dried bone material)等。
在另一具體實(shí)施方案中，該生物活性劑為抗腫瘤藥物。在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，該抗腫瘤藥物選自但不限于甲氨喋呤、5-氟尿嘧啶、阿霉素(adriamycin)、長(zhǎng)春堿、順鉑、結(jié)合至毒素的腫瘤特異性抗體、腫瘤壞死因子等。
在其它具體實(shí)施方案中，該生物活性劑選自但不限于抗組胺劑如苯海拉明等；心血管藥物如罌粟堿(papverine)、鏈激酶等；抗?jié)兯幬锶绠惐怃@等；支氣管擴(kuò)張劑如metaproternal sulfate、氨茶堿等；血管擴(kuò)張劑如茶堿、煙酸、米諾地爾等；中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物如安定藥、β-腎上腺素能阻滯劑、多巴胺等；抗精神病藥如利培酮；麻醉劑拮抗藥如納曲酮、納洛酮、丁丙諾啡；以及其它類似物質(zhì)。
在某一具體實(shí)施方案中，該生物活性劑在其所施用的生物系統(tǒng)中能夠提供局部或全身生物學(xué)、生理學(xué)或治療作用。例如，該物質(zhì)可以用于控制感染或炎癥、改善細(xì)胞生長(zhǎng)和組織再生、控制腫瘤生長(zhǎng)和提高骨生長(zhǎng)、以及其它功能。
在另一具體實(shí)施方案中，控釋組合物可以包含兩種或更多種生物活性劑的組合。在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，控釋組合物包含五種或更少的生物活性劑。在另一具體實(shí)施方案中，控釋組合物包含一種生物活性劑。
在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，該生物活性劑是與有機(jī)離子的復(fù)合物形式。
在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的生物活性劑可包含各種鹽形式以及包括共價(jià)結(jié)合到親水性聚合物如聚(乙二醇)和聚(丙二醇)上的衍生物。
本發(fā)明包括生物活性劑的藥物學(xué)等價(jià)物。藥物學(xué)等價(jià)物在體外表現(xiàn)出類似于或高于生物活性劑本身的活性。在一個(gè)特定的實(shí)例中，藥物學(xué)等價(jià)物可以具有與生物活性劑相似的化學(xué)結(jié)構(gòu)，它僅僅包含生物活性劑的生物活性部分或者是生物活性劑的合成類似物。
在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，該生物活性劑可表現(xiàn)至少一個(gè)正電荷或負(fù)電荷或者同時(shí)表現(xiàn)正電荷和負(fù)電荷。
在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，該生物活性劑為水溶性的。
在另一特定的具體實(shí)施方案中，該生物活性劑溶于任選地包含一種共溶劑的有機(jī)溶劑中。該生物活性劑可以溶于水或有機(jī)溶劑或者可溶于該兩者。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)意識(shí)到在特定的情況下所利用的生物活性劑的實(shí)際劑量將根據(jù)所利用的特定化合物、所配制的特定組合物、施用方法、以及所治療的特定位點(diǎn)和患者的不同而改變。對(duì)給定患者的劑量可以利用常規(guī)考慮因素來(lái)確定，例如通過(guò)適當(dāng)?shù)某Ｒ?guī)藥理學(xué)方案對(duì)目標(biāo)化合物與已知的生物活性劑的不同活性的常規(guī)比較。確定藥物化合物劑量領(lǐng)域的醫(yī)師和配方設(shè)計(jì)師將很容易根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)推薦來(lái)確定劑量。
有機(jī)離子本發(fā)明使用的有機(jī)離子包括陰離子和陽(yáng)離子物質(zhì)。陰離子物質(zhì)包括但不局限于下列有機(jī)酸及其鹽雙羥萘酸、十二烷基硫酸、膽酸、三氟甲基-對(duì)-甲基苯甲酸、2-萘磺酸、2，3-萘二甲酸、1-羥基-2-萘甲酸、3-羥基-2-萘甲酸、2-萘甲酸以及水楊酰水楊酸。此外有機(jī)形式的硫酸根、磺酸根、磷酸根、以及膦酸根是合適的有機(jī)離子。陰離子物質(zhì)的鹽形式可以包括鈉、銨、鎂、鈣鹽等。
陽(yáng)離子分子包括但不局限于那些含有銨基或胍基或被取代的銨基的基團(tuán)。有機(jī)陰離子物質(zhì)與具有一種或更多種含有或者能夠接受正電荷如銨基或胍基的官能團(tuán)的生物活性劑一起使用。有機(jī)陽(yáng)離子物質(zhì)可以與具有一種或更多種含有或者能夠接受負(fù)電荷如羧基、硫酸根、磺酸根、磷酸根、或膦酸根的官能團(tuán)的生物活性劑一起使用。
本發(fā)明使用的有機(jī)離子物質(zhì)可以提高包封率以及載藥量所需的程度溶于水并有機(jī)相中。在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，提高包封率和載藥量可以通過(guò)減少生物活性劑的降解來(lái)實(shí)現(xiàn)。在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，有機(jī)離子物質(zhì)在水相中的濃度范圍為約0.5至100mM。在另一特定的具體實(shí)施方案中，該有機(jī)離子為約5至40mM。
可生物降解的微粒在某一具體實(shí)施方案中，該控釋組合物為微粒。
在某一具體實(shí)施方案中，生物活性劑以微粒形式與可生物降解的聚合物結(jié)合。在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，微粒具有低于1.0mm的直徑并且代表性地介于1.0至200.0微米之間。微粒包括微球和微囊兩者，并且可以近似為球形或者具有其它幾何形狀。微球代表性地在組成上近似均一而微囊包含組成不同于周圍的外殼的核。為本公開的目的，術(shù)語(yǔ)微球、微粒和微囊可相互替換使用。
在某些具體實(shí)施方案中，微?？捎筛鞣N不同的可生物降解的聚合物制備。適當(dāng)?shù)纳锵嗳菪?、可生物降解的聚合物包括如?丙交酯)、聚(乙交酯)、聚(丙交酯-共-乙交酯)、聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚己內(nèi)酯、聚碳酸酯、聚酯酰胺、聚酸酐、聚(氨基酸)、聚原酸酯、聚乙酰、聚氰基丙烯酸酯、聚醚酯、聚(二氧雜環(huán)己酮)、聚(亞烴基烷基化物)、聚乙二醇與聚(丙交酯)或者聚(丙交酯-共-乙交酯)的共聚物、可生物降解的聚氨基甲酸酯、它們的混合物以及共聚物。
在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，該微粒是由聚(d，l-丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)制備。當(dāng)暴露于生理pH狀態(tài)時(shí)PLGA降解并水解形成乳酸和乙醇酸，它們是細(xì)胞代謝的正常副產(chǎn)物。PLGA聚合物的分解速率取決于聚合物分子量、聚合物鏈中丙交酯與乙交酯單體的比例、以及單體亞單位的立構(gòu)規(guī)整性。破壞聚合物結(jié)晶性的L與D立體異構(gòu)體的混合物將提高聚合物的分解速率。此外，微球可以包含兩種或更多種不同分子量和/或不同單體比例的可生物降解聚合物的混合物。
在其它可選擇的具體實(shí)施方案中，包括連接到PLGA的親水性聚合物的衍生化的可生物降解聚合物可以用于制備微球。在特定的具體實(shí)施方案中，該親水性聚合物選自但不限于聚(乙二醇)、聚(丙二醇)、以及聚(乙二醇)和聚(丙二醇)的共聚物。
可生物降解的納米粒在某些具體實(shí)施方案中，所述控釋組合物為納米粒。
在某些具體實(shí)施方案中，連接或不連接親水性聚合物的生物活性劑與用于控制生物活性劑釋放的可生物降解的亞微顆粒結(jié)合。納米粒的直徑范圍為20.0納米至約2.0微米，并且代表性地介于100.0納米與1.0微米之間。
納米?？梢圆捎门c微粒相同的方式制備，但利用高速混合或勻化以將聚合物/生物活性劑乳滴的大小降低至低于2.0微米并且代表性地低于1.0微米。制備納米粒的其它方法為本領(lǐng)域所熟知并且可以用于本發(fā)明。
控釋組合物的生產(chǎn)在一個(gè)具體實(shí)施方案中，包含一種或更多種溶劑、生物活性劑以及聚合物的有機(jī)相與包含有機(jī)離子的水相接觸。在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，所述有機(jī)相還包含共溶劑。在另一特定具體實(shí)施方案中，水相還包含乳化劑。在另一特定具體實(shí)施方案中，該有機(jī)離子為有機(jī)酸的鹽。
在另一具體實(shí)施方案中，該有機(jī)相與水相接觸形成乳液，其中該乳液包括分散于水相中的有機(jī)相小液滴。隨后從乳液小液滴中將溶劑除去以形成硬化的微粒。在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，溶劑是通過(guò)蒸發(fā)除去。在另一特定具體實(shí)施方案中，溶劑是通過(guò)萃取至萃取液中而除去；例如，該萃取液可以為水。在另一特定具體實(shí)施方案中，溶劑是通過(guò)過(guò)濾來(lái)除去。之后，可以從水相中回收硬化的微粒并干燥。
在另一具體實(shí)施方案中，該乳液是通過(guò)攪拌有機(jī)相和水相獲得。在另一具體實(shí)施方案中，該乳液是通過(guò)使用攪拌器來(lái)制備。在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，該攪拌器為靜態(tài)攪拌器。在某一具體實(shí)施方案中，該乳液是通過(guò)湍流混合來(lái)制備。在另一具體實(shí)施方案中，該乳液未通過(guò)湍流混合而制備。
所述乳化方法可以在介于組分的沸點(diǎn)和凝固點(diǎn)之間的任何溫度下實(shí)施。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，該溫度范圍為約0℃至100℃并且典型地為5℃至75℃之間。在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，該乳化方法是在約15℃至約60℃之間實(shí)施。
本發(fā)明的有機(jī)相可以包含但不局限于以下溶劑二氯甲烷、乙酸乙酯、苯甲醇、丙酮、乙酸、碳酸丙烯酯以及其它可生物降解的聚合物可溶于其中的溶劑。在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，該有機(jī)相的溶劑可以選自乙酸乙酯和二氯甲烷。
在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，水相可以包括水和乳化劑。
在某一具體實(shí)施方案中，可將共溶劑加入到有機(jī)相中。它們可以任選地使用以提高生物活性劑在有機(jī)相中的溶解度。在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，它們可以選自但不限于二甲基亞砜、二甲基甲酰胺、n-甲基吡咯烷酮、PEG200、PEG400、甲醇、乙醇、異丙醇、以及苯甲醇。在另一特定具體實(shí)施方案中，該共溶劑可以有機(jī)相溶劑的0至90％重量比的量存在。在另一特定具體實(shí)施方案中，該共溶劑為有機(jī)相溶劑的0至50％重量比。該生物活性劑可以首先溶于適當(dāng)體積的溶劑中，之后將其加入至任選地溶有可生物降解聚合物的有機(jī)相溶劑中，從而形成有機(jī)相所有組分的溶液。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可調(diào)節(jié)各組分的體積及加入的順序以獲得所需要的生物活性劑和可生物降解聚合物的溶液。在某一具體實(shí)施方案中，該生物活性劑將以1-20重量％的濃度存在于有機(jī)相中。在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，該可生物降解聚合物將以2-40重量％的濃度存在于有機(jī)相中。在另一特定的具體實(shí)施方案中，該可生物降解聚合物將以5-20重量％的濃度存在于有機(jī)相中。
有機(jī)離子被溶于水相中。在某一具體實(shí)施方案中，它們以約0.1mM至約1000mM的濃度溶解。在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，它們以約1mM至約100mM的濃度溶解?？梢愿鶕?jù)各特殊的有機(jī)離子物質(zhì)以及生物活性劑調(diào)節(jié)該濃度以獲得所需的載藥量及包封率。
可以向水相中加入一種或更多種乳化劑以穩(wěn)定乳液。乳化劑可以選自但不限于聚(乙烯醇)、白蛋白、卵磷脂、維生素E TPGS以及聚山梨醇酯。該乳化劑在水相中存在的濃度為0至10重量％。在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，它們存在的濃度為0.5至5重量％。
本發(fā)明的有機(jī)離子包括但不局限于下列有機(jī)酸及其鹽雙羥萘酸、十二烷基硫酸、膽酸、三氟甲基-對(duì)-甲基苯甲酸、2-萘磺酸、2，3-萘二甲酸、1-羥基-2-萘甲酸、3-羥基-2-萘甲酸、2-萘甲酸、以及水楊酰水楊酸或硫酸鹽、磺酸鹽、磷酸鹽、以及膦酸鹽的有機(jī)衍生物。
藥物劑型除配制為非胃腸道給藥如靜脈內(nèi)或肌肉內(nèi)注射的化合物以外，也可以使用本發(fā)明的其它可選的給藥方法，包括但不局限于皮內(nèi)給藥、肺部給藥、含服給藥、透皮給藥、透粘膜給藥。透粘膜給藥可以包括但不局限于眼、陰道、直腸以及鼻內(nèi)給藥。所有這些給藥方法為本領(lǐng)域所熟知。
在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的控釋組合物可以如通過(guò)鼻用溶液劑或噴霧劑、氣霧劑或吸入劑鼻內(nèi)給藥。鼻用溶液劑為通常設(shè)計(jì)為以液滴或噴霧形式向鼻腔給藥的含水溶液。制備鼻用溶液劑使之在各方面與鼻分泌液類似。這樣，含水鼻用溶液劑通常為等滲并稍加緩沖以維持5.5至6.5的pH。
如果需要，類似于用于眼科制劑的抗菌防腐劑以及適當(dāng)?shù)乃幬锓€(wěn)定劑可以包含在所有劑型中。防腐劑和其它添加劑可以選自但不限于抗菌劑、抗氧化劑、螯合劑、惰性氣體等。已知各種商業(yè)鼻用制劑，它們包括如抗生素與抗組胺劑，并用于預(yù)防哮喘。
在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的控釋組合物用于局部施用。這種控釋組合物包括但不局限于洗液、軟膏、乳膏、凝膠、滴劑、栓劑、噴霧劑、液體制劑以及散劑。常用的藥物載體、含水、粉末或油性基質(zhì)、增稠劑等可能是必須或有利的。
賦形劑、載體以及稀釋劑本發(fā)明的控釋組合物可以在生物系統(tǒng)或?qū)嶓w所能夠耐受的任何賦形劑中配制。這種賦形劑的實(shí)例包括水、鹽水、林格氏溶液、葡萄糖溶液、Hank′s溶液以及其它含水生理學(xué)平衡鹽溶液。非水載體也可以使用，如不揮發(fā)性油、聚乙二醇以及可注射有機(jī)酯如油酸乙酯。其它有用的劑型包括包含增粘劑如羧甲基纖維素鈉、山梨醇或右旋糖酐的混懸劑。
賦形劑還可以包含少量添加劑，如提高等滲性和化學(xué)穩(wěn)定性的物質(zhì)。緩沖液的實(shí)例包括磷酸緩沖液、碳酸氫鹽緩沖液、以及Tris緩沖液，而防腐劑的實(shí)例包括硫柳汞(thimerosal)、甲酚、福爾馬林、苯甲醇。
本發(fā)明用于控釋組合物的藥物載體為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。最常用的那些載體很可能為用于向人類給藥的標(biāo)準(zhǔn)載體，包括溶液如無(wú)菌水、鹽水以及生理pH的緩沖溶液。
本發(fā)明的控釋組合物可以混懸在任何含水溶液或者其它用于向需要治療的人類或動(dòng)物患者注射的稀釋劑中。含水稀釋劑溶液可以進(jìn)一步包含選自羧甲基纖維素鈉、蔗糖、甘露醇、葡萄糖、海藻糖的增粘劑以及其它生物相容性粘度增強(qiáng)劑。粘度可以調(diào)節(jié)至介于2厘泊(cp)與100cp之間，更優(yōu)選為介于4和40cp之間。
在一個(gè)特定的具體實(shí)施方案中，在稀釋劑中可以包含表面活性劑以提高控釋組合物的可懸浮性。表面活性劑可以選自但不限于聚山梨醇酯以及其它生物相容性表面活性劑。表面活性劑使用的濃度為0至5重量％，優(yōu)選為0.1至1重量％。
實(shí)施例下列實(shí)施例是用于闡述本發(fā)明的具體實(shí)施方案。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)意識(shí)到，以下實(shí)施例中所公開的技術(shù)代表發(fā)明者所發(fā)現(xiàn)的在本發(fā)明實(shí)踐中作用良好的技術(shù)，因此可以認(rèn)為組成了其實(shí)踐的特定模式。然而，根據(jù)本發(fā)明公開的內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)意識(shí)到，在不偏離本發(fā)明的宗旨和范圍的情況下，所公開的特定具體實(shí)施方案中可以存在許多變化，并且仍然可得到相同或相似的結(jié)論。
實(shí)施例1根據(jù)先前使用的方法使用共溶劑的包封于聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)微粒中的醋酸奧曲肽的常規(guī)制法制備醋酸奧曲肽微粒制劑以考察有機(jī)相中不同共溶劑的作用。制劑A-F是使用水包油型乳液/溶劑萃取技術(shù)進(jìn)行制備，在表1中進(jìn)行總結(jié)。將PLGA聚合物(50∶50丙交酯/乙交酯，MW 24,000，180mg)溶于乙酸乙酯(EtOAc，900μL)，并將溶于共溶劑(表1)的醋酸奧曲肽(20mg)加入到該聚合物溶液中。將所得的均一有機(jī)相加入至含有1％聚乙烯醇(PVA)的水相(2mL)中并將該混合物渦旋15-30秒。將該乳液倒入溶劑萃取液(10mM的磷酸鈉，pH8.0，150mL)中并攪拌四小時(shí)以萃取EtOAc。通過(guò)過(guò)濾分離微粒、用水洗滌并風(fēng)干過(guò)夜。將該制劑以粒徑、掃描電子顯微鏡(SEM)形態(tài)學(xué)、奧曲肽核載藥量及體外釋放特征來(lái)表征。
使用乳化裝置再次制備制劑D，例如在PCT申請(qǐng)?zhí)朠CT/US04/11485中所公開的，將由醋酸奧曲肽(20mg)、MeOH(100μL)、PLGA聚合物(50∶50丙交酯/乙交酯，MW 24,000，180mg)及EtOAc(1.9mL)的均一有機(jī)相(2mL)與1％PVA水相(4mL)結(jié)合。然后將該乳液加入到溶劑萃取液中并攪拌四小時(shí)以萃取EtOAc。該方法制備得到制劑D2(表1)。
所考察的共溶劑對(duì)粒徑和核載藥量有微小的影響。聚乙二醇(PEG)共溶劑粘度越高，粒徑越大。相反，核載藥量則與甲醇(MeOH)和PEG作為共溶劑(制劑A-C)相似。使用pH8緩沖乳化步驟并以MeOH作為共溶劑以及以二甲基亞砜(DMSO)作為共溶劑(制劑F)獲得了最大的核載藥量。
體外釋放動(dòng)力學(xué)在磷酸鹽緩沖鹽水(PBS，pH7.2，37℃)或100mM乙酸鈉(NaOAc，pH4.0，37℃)中測(cè)定。實(shí)例如表2所示(制劑D2)。PEG共溶劑系統(tǒng)具有最高的初始肽突釋率(8-10％)，而其它制劑的初始突釋率范圍為2-3％。盡管相對(duì)于其它制劑來(lái)說(shuō)用極性非質(zhì)子溶劑制備的制劑(制劑E-F)的相對(duì)釋放速率有所減小從而引起肽釋放總量降低，但所有制劑釋放肽至少達(dá)6周。
在釋放介質(zhì)(PBS，pH7.2，37℃)中溫育49天后，通過(guò)高效液相測(cè)定作為游離肽的醋酸奧曲肽95％完好。相比之下，在釋放介質(zhì)(PBS，pH7.2，37℃，表2)中溫育70天之后，醋酸奧曲肽PLGA微粒制劑生成55％的改性的肽。HPLC分析顯示新的肽實(shí)體比天然的醋酸奧曲肽更疏水。HPLC/MS分析顯示質(zhì)量與PLGA聚合物對(duì)母體肽的?；恢隆Ｋ鶛z測(cè)的質(zhì)量與隨機(jī)?；嘁恢拢?，肽加上一個(gè)或兩個(gè)乙醇酸或乳酸單體的任意組合。?；a(chǎn)物可能產(chǎn)生于奧曲肽中的親核部分對(duì)PLGA片段或聚合物骨架的進(jìn)攻。在較低pH時(shí)，這些部分可能被質(zhì)子化而減少其親核性，進(jìn)而減少?；a(chǎn)物的量。據(jù)觀察，在100mM乙酸鈉(NaOAc，pH4.0)緩沖液中溫育的醋酸奧曲肽PLGA微粒的?；碑a(chǎn)物的形成在49天時(shí)降低到1.25％，這與PBS緩沖液所得結(jié)果(55％)形成鮮明對(duì)比。
表1.PLGA微粒包封的醋酸奧曲肽膠囊

表2.制劑D2和AG的體外釋放率。NaOAc緩沖液含有100mM NaOAc(pH4.0)、0.02％吐溫-20及0.05％ NaN3。PBS為含有0.02％吐溫-20和0.05％NaN3的磷酸鹽緩沖液(pH7.2)。樣品于37℃在振搖(150Hz)的水浴溫育箱中進(jìn)行溫育。肽和?；碾牡尼尫胖蛋蠢塾?jì)釋放百分比列出。




實(shí)施例2根據(jù)先前使用的方法制備奧曲肽的水不溶性有機(jī)酸鹽(復(fù)合物)并包封于PLGA微粒中考察有機(jī)離子物質(zhì)，其中有機(jī)離子首先與醋酸奧曲肽復(fù)合形成水不溶性鹽之后被包封于PLGA微粒中。
十二烷基硫酸鈉(SDS)通過(guò)將醋酸奧曲肽(100mg)溶于H2O(500μl)中制備奧曲肽-SDS復(fù)合物。在室溫、渦旋下將溶于H2O(500μl)的SDS(1.5當(dāng)量，43.2mg)滴加到醋酸奧曲肽溶液中。立即生成沉淀。將樣品在10,000轉(zhuǎn)/分鐘下離心1分鐘，用移液管將上清液移除。沉淀經(jīng)冷水洗滌并凍干得到奧曲肽-SDS復(fù)合物(95.3mg)。RP-HPLC分析顯示奧曲肽峰明顯加寬，表明形成了奧曲肽/SDS復(fù)合物。制劑G-I使用水包油乳液/溶劑萃取技術(shù)進(jìn)行制備。將PLGA聚合物(MW24,000，180mg)溶于EtOAc(900μL)。將奧曲肽/SDS復(fù)合物溶于MeOH(100μL)并加入至聚合物溶液中，形成了非均一的有機(jī)相。就制劑I(表3)而言，額外加入MeOH等分試樣(100μL)以形成均一的有機(jī)相。將所得有機(jī)相加入到含有1％PVA的水相(2mL)中，然后將混合物渦旋15-30秒。將該乳液倒入溶劑萃取液(10mM磷酸鈉，pH 8.0，150mL)中并攪拌四小時(shí)以萃取EtOAc。通過(guò)過(guò)濾分離顆粒、用水洗滌并風(fēng)干過(guò)夜。將該制劑以粒徑、SEM形態(tài)學(xué)、奧曲肽核載藥量及體外釋放特征來(lái)表征。
測(cè)得的由奧曲肽-SDS復(fù)合物制備的制劑G-I的核載藥量相對(duì)較低，介于0.6-2.6％之間(表3)。中值粒徑相對(duì)于用醋酸奧曲肽制備的制劑(A-F)減小約40％。
制劑G-I在PBS中的體外釋放特征非常相似。各自具有大約20％的初始突釋率，隨后三周每周釋放1.5％。三周后釋放速率增加到約7.0％/周，最后在9周時(shí)累計(jì)達(dá)到約為80％的肽釋放總量。
與醋酸奧曲肽(制劑A-F)相比，這些制劑的體外PBS釋放試驗(yàn)導(dǎo)致釋放了相似量的?；?40-55％)及總肽。
表3.有機(jī)相中的奧曲肽-SDS復(fù)合物

苯甲酸制劑(J-M)使用一到十當(dāng)量的與PLGA共溶于有機(jī)相中的苯甲酸來(lái)制備。將PLGA聚合物(MW 24,000，180mg)和苯甲酸(2.4-24mg)溶于EtOAc(900μL)中。將醋酸奧曲肽溶于MeOH(100μL)并加入到聚合物溶液中形成均一的有機(jī)相。將所得均一有機(jī)相加入到含有1％PVA的水相(2mL)中并將該混合物渦旋15-30秒。將該乳液倒入至溶劑萃取液(10mM的磷酸鈉，pH 8.0，150mL)中并攪拌四小時(shí)以萃取EtOAc。通過(guò)過(guò)濾分離顆粒、用水洗滌并風(fēng)干過(guò)夜。在每當(dāng)量醋酸奧曲肽加入的1-10當(dāng)量苯甲酸范圍內(nèi)，核載藥量測(cè)定為介于0.88-1.67％之間(表4)。
雙羥萘酸奧曲肽-雙羥萘酸鹽復(fù)合物通過(guò)將雙羥萘酸(19.4mg，0.05mmol)溶解于0.2N NaOH(500μL)中得到雙羥萘酸鈉鹽來(lái)制備。將醋酸奧曲肽(100mg，0.10mmol)溶于去離子水(100μL)并在輕微渦旋下滴加至雙羥萘酸鈉鹽溶液中，產(chǎn)生一種絮狀淺黃色沉淀。通過(guò)離心使沉淀呈球狀并用移液管移除上清液。將該小球用水洗(1.0mL)、重新懸浮于水中并凍干成淺黃色粉末(113mg)。用RP-HPLC測(cè)量該制劑中奧曲肽/雙羥萘酸酯的比例為1.71。
另一種奧曲肽-雙羥萘酸酯復(fù)合物是通過(guò)將雙羥萘酸(19.4mg，0.05mmol)溶于0.4N NaOH(250μL)及二氧六環(huán)(250μL)中以形成雙羥萘酸鈉在二氧六環(huán)/水(1∶1)中的溶液來(lái)制備。將醋酸奧曲肽(50mg，0.05mmol)溶于二氧六環(huán)/水(1∶1，200μL)中。攪拌下將該醋酸奧曲肽溶液滴加至雙羥萘酸鈉中得到淺黃色、均一的溶液。將其凍干成淺黃色粉末(65mg)。用RP-HPLC測(cè)量該制劑中奧曲肽/雙羥萘酸鹽的比例為1.02。這兩種制劑用于制備新的PLGA微粒制劑。
表4.有機(jī)相中的苯甲酸和醋酸奧曲肽

利用水包油乳液/溶劑萃取方法制備微粒制劑(表5，Q-W)。將PLGA聚合物(MW 24,000，180mg)溶于EtOAc(1000μL)中。將奧曲肽雙羥萘酸鹽(20或40mg)溶于苯甲醇(BnOH，1000μL)并加入到聚合物溶液中形成均一的有機(jī)相。將所得有機(jī)相與含有1％PVA的水相以1∶2的比例結(jié)合得到乳液。將該乳液直接收集到0.3％PVA溶劑萃取液(150mL)中并攪拌四小時(shí)以萃取EtOAc。經(jīng)過(guò)濾收集硬化的微粒、用水洗滌、風(fēng)干并于4℃貯存。
制劑特征(表5)顯示相對(duì)于用比例為1.02的奧曲肽/雙羥萘酸鹽制備的制劑，最初奧曲肽/雙羥萘酸鹽比例為1.7對(duì)包封率和核載藥量影響很小。相反，將共溶劑改變?yōu)楸郊状己笙鄬?duì)于甲醇使包封率增加了大約60％(例如，制劑S與T相比)。
這些制劑在PBS中的體外釋放特征表明肽釋放總量(79-92％，表5，Q-T)與用常規(guī)方法(制劑D、F，表1)制備的PLGA醋酸奧曲肽微粒相當(dāng)，而?；尼尫帕?28-40％，表5Q-T)相對(duì)于常規(guī)制劑(44-55％，表1，A-D)稍有減少。
使用比例為1∶1的奧曲肽/雙羥萘酸鹽制備的制劑與上述比例為1.7的制劑不同，包封率和核包封量對(duì)共溶劑的性質(zhì)并未顯示出強(qiáng)烈的依賴性。比例不同的奧曲肽/雙羥萘酸鹽復(fù)合物在共溶劑中溶解度的差異可以用來(lái)解釋這種結(jié)果。奧曲肽/雙羥萘酸鹽比例越高，其在苯甲醇中的溶解度與在甲醇中相比增加，從而產(chǎn)生較高的包封率。相反，發(fā)現(xiàn)對(duì)于1∶1的奧曲肽/雙羥萘酸鹽復(fù)合物在甲醇與苯甲醇中的溶解度沒有明顯差別。這產(chǎn)生不依賴于共溶劑的相似的包封率和核載藥量。
這些1∶1的制劑(U-W)的體外釋放特征顯示具有如上所述的相似趨勢(shì)，即，肽釋放總百分比(85-110％，表5U-W)再次與常規(guī)制劑(實(shí)施例1)(約85％，表2)相當(dāng)，而相對(duì)于常規(guī)制劑(44-55％，表1，A-D2)?；a(chǎn)物的釋放量(35-44％，表5U-W)稍微減少。
對(duì)最終奧曲肽/雙羥萘酸鹽摩爾比的分析顯示所測(cè)試的制劑(表5)具有較大差異，從2.1∶1(制劑W)到高于200∶1(制劑R)不等。在所有樣品中，該比例為起始肽鹽復(fù)合物的奧曲肽/雙羥萘酸鹽比例的兩倍多。因此使用預(yù)先形成的奧曲肽雙羥萘酸鹽在最終緩釋制劑中產(chǎn)生高度變化的奧曲肽/雙羥萘酸鹽摩爾比。
表5.使用預(yù)先形成的復(fù)合物制備的奧曲肽-雙羥萘酸鹽微粒

實(shí)施例3根據(jù)本發(fā)明使用含水乳液中的有機(jī)酸鹽將醋酸奧曲肽包封于PLGA微球中發(fā)明人出人意料地發(fā)現(xiàn)，在乳化方法的水相中使用有機(jī)酸鹽允許使用水溶性的肽并且消除了在制備該制劑之前的獨(dú)立步驟中制備復(fù)合物的需要。本發(fā)明提供了更多的優(yōu)勢(shì)例如增加了藥物的核載藥量、一致的奧曲肽/有機(jī)離子的比例及減少了肽在體外釋放期間的降解。
微粒制劑是通過(guò)水包油乳液/溶劑萃取方法制備。將PLGA聚合物(MW 24,000，140-180mg)溶于EtOAc(1000μL)。將奧曲肽雙羥萘酸鹽(20-60mg)溶于BnOH(1000μL)并加入至聚合物溶液中，形成均一的有機(jī)相。將所得有機(jī)相與含有10-50mM雙羥萘酸二鈉的1％PVA水相結(jié)合得到乳液。將該乳液直接收集到0.3％PVA的溶劑萃取液(150mL)中并攪拌四小時(shí)以萃取EtOAc。通過(guò)過(guò)濾收集硬化的微粒、用水洗滌、風(fēng)干并于4℃貯存，使得通過(guò)RP-HPLC測(cè)量微粒制劑中奧曲肽/雙羥萘酸鹽的最終比例大約為1-1.5(表6)。
考察不同實(shí)驗(yàn)參數(shù)對(duì)核載藥量的影響，包括有機(jī)相與水相的比例、共溶劑的性質(zhì)及共溶劑的體積。發(fā)現(xiàn)BnOH是比MeOH更為適合的共溶劑。由于MeOH會(huì)引起有機(jī)相中聚合物沉淀，有可能使用的BnOH體積大于MeOH。與MeOH相比，BnOH也可引起核載藥量的少量增加(制劑Y，AB，表6)。然而，使用BnOH而水相中不含有機(jī)離子不能獲得高的核載藥量或包封率(AI，表6)。還發(fā)現(xiàn)當(dāng)用BnOH作為共溶劑時(shí)，增加水相與有機(jī)相的比例會(huì)略微增加包封率(制劑AE，AF，表6)。與實(shí)施例2中使用預(yù)先形成的奧曲肽/雙羥萘酸鹽復(fù)合物導(dǎo)致奧曲肽/雙羥萘酸鹽的最終比例從2.1至高于200的大范圍變化的制劑(表5)不同，所有制劑中奧曲肽與雙羥萘酸鹽的比例都集中于1.0至1.5之間。
重要的是，與獲得的最大藥物核載藥量為約8％(表5-S)，平均為2-6％(表1-5)的實(shí)施例1和2中的現(xiàn)有技術(shù)方法不同，本發(fā)明方法可以制備具有可預(yù)知的及5-17.5％的提高的藥物核載藥量的產(chǎn)品(制劑AD、AG、AH，表6)。另外，本發(fā)明的組合物的生物活性劑與有機(jī)離子的摩爾比具有一致的化學(xué)計(jì)量(表6)。這與使用先前方法制備的組合物不同(表5)。而且，與使用預(yù)先制備的奧曲肽-雙羥萘酸鹽(表5)或醋酸奧曲肽(表2)制備的微粒相比，用在水相中的有機(jī)離子制備的微粒的?；南鄬?duì)生成較少。
表6.通過(guò)原位方法制備的奧曲肽—雙羥萘酸鹽復(fù)合物微粒

考察水相中有機(jī)酸濃度的影響用以確定最佳工藝參數(shù)。將PLGA聚合物(MW 24,000，160mg)溶于EtOAc(1000μL)中。將醋酸奧曲肽(40mg)溶于BnOH(1000μL)并加入到聚合物溶液中，形成均一的有機(jī)相。將所得的有機(jī)相與含20或50mM雙羥萘酸鈉的1％PVA水相結(jié)合得到乳液。將該乳液直接收集到0.3％PVA溶劑萃取液(150mL)中并攪拌四小時(shí)以萃取EtOAc。通過(guò)過(guò)濾收集硬化的微粒、用水洗滌、風(fēng)干并于4℃貯存。制劑AJ-AL顯示相對(duì)于10mM的雙羥萘酸二鈉來(lái)說(shuō)，20或50mM的雙羥萘酸二鈉對(duì)核載藥量沒有影響(表7)。然而，雙羥萘酸二鈉在水相中的濃度對(duì)于“第一天”的體外PBS釋放具有可測(cè)量的影響。與使用20mM有機(jī)離子制備的制劑產(chǎn)生小于4％的突釋率(制劑AJ、AK，表7)相比，使用50mM雙羥萘酸二鈉制備的制劑產(chǎn)生15％的突釋率(制劑AL，7)。這說(shuō)明在水相中過(guò)量的有機(jī)離子對(duì)于制劑的體外釋放性能是有害的。
表7.有機(jī)離子濃度對(duì)奧曲肽-雙羥萘酸鹽微粒形成的影響

除雙羥萘酸根之外還考察了其它有機(jī)離子來(lái)探索本發(fā)明的一般用途。微粒制劑是通過(guò)水包油乳液/溶劑萃取法制備。將PLGA聚合物(MW 24,000，160mg)溶于EtOAc(1000μL)中。將醋酸奧曲肽(40mg)溶于BnOH(1000μL)并加入到聚合物溶液中形成均一的有機(jī)相。將所得的有機(jī)相與含有10-20mM有機(jī)酸鈉鹽的1％PVA水相結(jié)合得到乳液。將該乳液直接收集到0.3％PVA溶劑萃取液(150mL)中并攪拌四小時(shí)以萃取EtOAc。通過(guò)過(guò)濾收集硬化的微粒、用水洗滌、風(fēng)干并于4℃貯存。通過(guò)RP-HPLC測(cè)量所得微粒制劑的核載藥量介于6.8至15.3％(表8)。這顯示出受試有機(jī)離子對(duì)核載藥量的影響。相對(duì)于含雙羥萘酸鈉的對(duì)照組(制劑AT、AU、AY，表8)，制劑AM-AP的所測(cè)量的核載藥量未增加。相反，應(yīng)用膽酸及雙環(huán)芳族化合物作為有機(jī)酸的制劑AQ-AS、AV-AX和AZ-BB提供了與雙羥萘酸相當(dāng)?shù)碾暮溯d藥量(表8)。這些結(jié)果意味著具有適當(dāng)物理化學(xué)性質(zhì)的有機(jī)酸可以代替雙羥萘酸以產(chǎn)生相當(dāng)?shù)奈⒘Ｖ苿?br> 表8.水相中各種有機(jī)酸(鈉鹽)對(duì)奧曲肽-復(fù)合物微粒形成的影響

實(shí)施例4根據(jù)本發(fā)明使用在水乳濁液相中有機(jī)酸鹽將額外的肽包封于PLGA微球中如下列實(shí)施例中所述，根據(jù)本發(fā)明將醋酸催產(chǎn)素和醋酸亮丙瑞林配制成PLGA微粒。與常規(guī)方法相比，這些研究結(jié)果證明了本發(fā)明在提高核載藥量和包封率方面的效用(制劑BI對(duì)BJ-Bk及BL對(duì)BM)(表9)。
制劑BI(亮丙瑞林)—常規(guī)包封方法將PLGA聚合物(MW 24,000，160mg)溶于CH2Cl2(1000μL)中。將醋酸亮丙瑞林(40mg)溶于BnOH(1000μL)并加入到聚合物溶液中形成均一的有機(jī)相。將所得有機(jī)相與1％PVA水相結(jié)合生成乳液。將該乳液直接收集到0.3％PVA溶劑萃取液(150mL)中并攪拌四小時(shí)以萃取EtOAc。通過(guò)過(guò)濾收集硬化的微粒、用水洗滌、風(fēng)干并于4℃貯存。該法獲得中值粒徑為50.1μm的制劑BI(140mg，收率70.0％)。通過(guò)RP-HPLC分析測(cè)定核載藥量(1.99％)、包封率(9.95％)及體外突釋率(1.63％)。
制劑BJ(亮丙瑞林)—有機(jī)離子輔助的包封方法將PLGA聚合物(MW 24,000，160mg)溶于CH2Cl2(1000μL)中。將醋酸亮丙瑞林(40mg)溶于BnOH(1000μL)并加入到聚合物溶液中形成均一的有機(jī)相。將所得有機(jī)相與含有10mM雙羥萘酸二鈉的1％PVA水相結(jié)合生成乳液。將該乳液直接收集到0.3％PVA溶劑萃取液(100mL)中并攪拌10分鐘。加入由2％異丙醇(200mL)組成的二次萃取液并另外再攪拌四小時(shí)。通過(guò)過(guò)濾收集硬化的微粒、用水洗滌、風(fēng)干并于4℃貯存。這樣制得中值粒徑為54.0μm的制劑BJ(157mg，收率78.5％)。通過(guò)RP-HPLC分析測(cè)定核載藥量(9.4％)、包封率(47.0％)及體外突釋率(5.31％)。
制劑BK(亮丙瑞林)—有機(jī)離子輔助的方法使用水包油乳液/溶劑萃取法制備微粒制劑。將PLGA聚合物(MW24,000，160mg)溶于CH2Cl2(1000μL)中。將醋酸亮丙瑞林(40mg)溶于BnOH(1000μL)并加入到聚合物溶液中形成均一的有機(jī)相。將所得有機(jī)相與含50mM雙羥萘酸二鈉的1％PVA水相結(jié)合生成乳液。將該乳液直接收集到0.3％PVA溶劑萃取液(100mL)中并攪拌10分鐘。加入由2％異丙醇(200mL)組成的二次萃取液并另外再攪拌四小時(shí)。通過(guò)過(guò)濾收集硬化的微粒、用水洗滌、風(fēng)干并于4℃貯存。這樣制得中值粒徑為43.1μm的制劑BK(120mg，收率60.0％)。通過(guò)RP-HPLC分析測(cè)定核載藥量(10.6％)、包封率(53.0％)及體外突釋率(21.1％)。
制劑BL(催產(chǎn)素)—常規(guī)包封方法將PLGA聚合物(MW 13,000，180mg)溶于EtOAc(900μL)中。將醋酸催產(chǎn)素(20mg)溶于MeOH(100μL)并加入到聚合物溶液中形成乳狀懸濁液有機(jī)相。將所得有機(jī)相與含有5％EtOAc的1％PVA水相結(jié)合得到乳液。將該乳液直接收集到10mM磷酸鈉(pH8，0℃，150mL)溶劑萃取液中并在升至室溫時(shí)攪拌四小時(shí)以萃取EtOAc。通過(guò)過(guò)濾收集硬化的微粒、用水洗滌、風(fēng)干并于4℃貯存。這樣制得中值粒徑為44.0μm的制劑BL(143mg，收率71.5％)。通過(guò)RP-HPLC分析測(cè)定核載藥量(1.67％)、包封率(16.7％)及體外突釋率(46.3％)。
制劑BM(催產(chǎn)素)—有機(jī)離子輔助的包封方法將PLGA聚合物(MW 24,000，180mg)溶于EtOAc(1800μL)中。將醋酸催產(chǎn)素(40mg)溶于MeOH(200μL)并加入到聚合物溶液中形成乳狀懸濁液有機(jī)相。將所得有機(jī)相與含有10mM雙羥萘酸二鈉的1％PVA水相結(jié)合得到乳液。將該乳液直接收集到0.3％PVA溶劑萃取液(150mL)中并攪拌四小時(shí)以萃取EtOAc。通過(guò)過(guò)濾收集硬化的微粒、用水洗滌、風(fēng)干并于4℃貯存。這樣制得中值粒徑為144μm的制劑BM(158mg，收率79.0％)。通過(guò)RP-HPLC分析測(cè)定核載藥量(8.9％)、包封率(44.5％)及體外突釋率(21.1％)。表9表明，由于有機(jī)離子的存在兩種不同肽的核載藥量和包封率增大。
表9.通過(guò)原位方法制備的肽-雙羥萘酸鹽復(fù)合物微粒

實(shí)施例5利用含水乳液相中的有機(jī)酸鹽將胰島素包封于PLGA微粒中十二烷基硫酸鈉使用水包油乳液/溶劑萃取方法制備微粒制劑。將由PLGA聚合物(MW 11,800，150mg)及PEG化的胰島素(50mg)組成的有機(jī)相溶于CH2Cl2(2mL)中。水相由1％PVA及14mM SDS組成。將均一的有機(jī)相與水相以1∶5的比例混合形成在水相中的有機(jī)乳液。將該乳液直接收集到0.3％PVA溶劑萃取液(100mL)中并攪拌10分鐘，之后加入100mL 2％IPA。之后將該溶劑萃取液另外再攪拌3小時(shí)以萃取CH2Cl2。通過(guò)過(guò)濾收集硬化的微粒、用水洗滌、風(fēng)干并于-20℃貯存。所得微粒具有21％的核載藥量(包封率84％)。這些微粒的特征為于37℃在PBS中24h時(shí)具有較大的50％的體外突釋率。
雙羥萘酸二鈉利用水包油乳液/溶劑萃取方法制備微粒制劑。將由PLGA聚合物(MW 11,800，75mg)及PEG化的胰島素(25mg)組成的有機(jī)相溶于CH2Cl2(1mL)中。水相由1％PVA及10mM雙羥萘酸二鈉組成。將均一的有機(jī)相及水相以1∶5的比例混合形成在水相中的有機(jī)乳液。將該乳液直接收集到0.3％PVA溶劑萃取液(50mL)中并攪拌10分鐘，之后加入水(100mL)。之后將該溶劑萃取液另外再攪拌3小時(shí)以萃取CH2Cl2。通過(guò)過(guò)濾收集硬化的微粒、用水洗滌、風(fēng)干并于-20℃貯存。所得微粒具有18％的核載藥量(包封率78％)及最終PEG化的胰島素/雙羥萘酸鹽比例為1∶2。與使用SDS制備的微粒相比，這些微粒于37℃在PBS中具有較低的5％的體外突釋率。
實(shí)施例6向Sprague Dawley大鼠給藥后PLGA微粒中奧曲肽的藥物動(dòng)力學(xué)評(píng)價(jià)測(cè)定從大鼠皮下注射給藥的PLGA微粒制劑中釋放的奧曲肽的血清水平。通過(guò)皮下注射單劑量水平(～8-10mg/kg)的六種不同的奧曲肽PLGA微粒制劑處理動(dòng)物(n＝6/組)一次。在第1和6小時(shí)及第1、4、7、11、14、20、28、42和54天，從每只動(dòng)物獲得血清樣品以評(píng)價(jià)奧曲肽的藥物動(dòng)力學(xué)。通過(guò)可商購(gòu)的無(wú)需萃取的放射性免疫測(cè)定試劑盒(#S-2211)(Peninsula Labs)測(cè)定血清濃度。該分析的定量限(LOQ)為0.1ng/mL。表10中報(bào)告每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的平均奧曲肽血清濃度。受試奧曲肽PLGA制劑的制備如下所述。
表10.大鼠單次皮下處理后的平均奧曲肽血漿水平(ng/mL)

在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中使用的奧曲肽制劑的制備及特性。
制劑BC將PLGA聚合物(MW 24,000，720mg)溶于EtOAc(4000μL)中。將醋酸奧曲肽(80mg)溶于BnOH(4000μL)并加入到聚合物溶液中形成均一的有機(jī)相。將所得有機(jī)相與含有10mM雙羥萘酸二鈉的1％PVA水相結(jié)合得到乳液。將該乳液直接收集到0.3％PVA溶劑萃取液(600mL)中并攪拌四小時(shí)以萃取EtOAc。通過(guò)過(guò)濾收集硬化的微粒、用水洗滌、風(fēng)干并于4℃貯存。這樣制得中值粒徑為55.0μm的制劑BC(754mg，收率94％)。通過(guò)RP-HPLC分析測(cè)定核載藥量(8.5％)、包封率(85.0％)及體外突釋率(7.4％)。
制劑BD將PLGA聚合物(MW 24,000，680mg)溶于EtOAc(4000μL)中。將醋酸奧曲肽(120mg)溶于BnOH(4000μL)并加入到聚合物溶液中形成均一的有機(jī)相。將所得有機(jī)相與含有10mM雙羥萘酸二鈉的1％PVA水相結(jié)合得到乳液。將該乳液直接收集到0.3％PVA溶劑萃取液(600mL)中并攪拌四小時(shí)以萃取EtOAc。通過(guò)過(guò)濾收集硬化的微粒、用水洗滌、風(fēng)干并于4℃貯存。這樣制得中值粒徑為58.7μm的制劑BD(694mg，收率94％)。通過(guò)RP-HPLC分析測(cè)定核載藥量(11.8％)、包封率(78.7％)及體外突釋率(4.1％)。
制劑BE將PLGA聚合物(MW 24,000，680mg)溶于EtOAc(4000μL)中。將醋酸奧曲肽(120mg)溶于BnOH(4000μL)并加入到聚合物溶液中形成均一的有機(jī)相。將所得有機(jī)相與含有10mM雙羥萘酸二鈉的1％PVA水相結(jié)合得到乳液。將該乳液直接收集到0.3％PVA溶劑萃取液(600mL)中并攪拌四小時(shí)以萃取EtOAc。通過(guò)過(guò)濾收集硬化的微粒、用水洗滌、風(fēng)干并于4℃貯存。這樣制得中值粒徑為52.2μm的制劑BE(727mg，收率91％)。通過(guò)RP-HPLC分析測(cè)定核載藥量(11.6％)、包封率(77.3％)及體外突釋率(2.75％)。
制劑BF將PLGA聚合物(MW 24,000，640mg)溶于EtOAc(4000μL)中。將醋酸奧曲肽(160mg)溶于BnOH(4000μL)并加入到聚合物溶液中形成均一的有機(jī)相。將所得的有機(jī)相與含10mM雙羥萘酸二鈉的1％PVA水相結(jié)合得到乳液。將該乳液直接收集到0.3％PVA溶劑萃取液(600mL)中并攪拌四小時(shí)以萃取EtOAc。通過(guò)過(guò)濾收集硬化的微粒、用水洗滌、風(fēng)干并于4℃貯存。這樣制得中值粒徑為47.7μm的制劑BF(766mg，收率95.8％)。通過(guò)RP-HPLC分析測(cè)定核載藥量(14.7％)、包封率(73.5％)及體外突釋率(5.5％)。
制劑BG將PLGA聚合物(MW 28,000，640mg)溶于EtOAc(4000μL)中。將醋酸奧曲肽(160mg)溶于BnOH(4000μL)并加入到聚合物溶液中形成均一的有機(jī)相。將所得有機(jī)相與含有10mM雙羥萘酸二鈉的1％PVA水相結(jié)合得到乳液。將該乳液直接收集到0.3％PVA溶劑萃取液(600mL)中并攪拌四小時(shí)以萃取EtOAc。通過(guò)過(guò)濾收集硬化的微粒、用水洗滌、風(fēng)干并于4℃貯存。這樣制得中值粒徑為48.7μm的制劑BG(715mg，收率89.3％)。通過(guò)RP-HPLC分析測(cè)定核載藥量(11.9％)、包封率(59.5％)及體外突釋率(2.3％)。
制劑BH將PLGA聚合物(MW 14,000，560mg)溶于EtOAc(4000μL)中。將醋酸奧曲肽(240mg)溶于BnOH(4000μL)并加入到聚合物溶液中形成均一的有機(jī)相。將所得有機(jī)相與含有10mM雙羥萘酸二鈉的1％PVA水相結(jié)合得到乳液。將該乳液直接收集到0.3％PVA溶劑萃取液(600mL)中并攪拌四小時(shí)以萃取EtOAc。通過(guò)過(guò)濾收集硬化的微粒、用水洗滌、風(fēng)干并于4℃貯存。這樣制得中值粒徑為40.6μm的制劑BH(680mg，收率85.0％)。通過(guò)RP-HPLC分析測(cè)定核載藥量(17.4％)、包封率(58.0％)及體外突釋率(6.8％)。
在所有情況下，生物活性劑在體內(nèi)釋放至少42天，在某些情況下達(dá)54天之久。
根據(jù)本公開的內(nèi)容，此處公開并要求權(quán)利的所有組合物和方法可以無(wú)需過(guò)度的實(shí)驗(yàn)而制備和實(shí)施。雖然本發(fā)明組合物及方法已經(jīng)參考特定的具體實(shí)施方案進(jìn)行了描述，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)明白在不偏離本發(fā)明的觀念、主旨和范圍的情況下可以對(duì)此處所述的組合物、方法和步驟或方法的步驟的次序進(jìn)行改變。更具體而言，應(yīng)意識(shí)到化學(xué)和生理兩者都相關(guān)的某些物質(zhì)可以代替此處所述的物質(zhì)而獲得相同或相似的結(jié)果。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言顯而易見的所有這些替代和更改都被認(rèn)為是落在如權(quán)利要求書所定義的本發(fā)明的主旨、范圍和觀念以內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種制備控釋組合物的方法，其包括將包含生物活性劑和聚合物的有機(jī)相與包含有機(jī)離子的水相結(jié)合，其中所述有機(jī)離子存在于水相中以減少所述生物活性劑的降解；并回收所述組合物。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中在所述有機(jī)相中進(jìn)一步包含共溶劑。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述共溶劑選自以下組中二甲基亞砜、二甲基甲酰胺、n-甲基吡咯烷酮、PEG200、PEG400、甲醇、乙醇、異丙醇以及苯甲醇。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中在水相中進(jìn)一步包含乳化劑。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述乳化劑選自以下組中聚(乙烯醇)、白蛋白、卵磷脂維生素E-TPGS以及聚山梨醇酯。
6.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述乳化劑的最終濃度范圍為約0.1至10重量％。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述有機(jī)相包含選自以下組中的溶劑二氯甲烷、乙酸乙酯、苯甲醇、丙酮、乙酸以及碳酸丙烯酯。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述有機(jī)離子的最終濃度范圍為約0.1至1000mM。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述控釋組合物選自微粒和納米粒。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述微粒和納米粒是可生物降解的。
11.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述聚合物選自以下組中聚(丙交酯)、聚(乙交酯)、聚(丙交酯-共-乙交酯)、聚(乳酸)、聚(羥基乙酸)、聚(乳酸-共-羥基乙酸)、聚己內(nèi)酯、聚碳酸酯、聚酯酰胺、聚酸酐、聚(氨基酸)、聚原酸酯、聚乙酰、聚氰基丙烯酸酯、聚醚酯、聚(二氧雜環(huán)己酮)、聚(亞烴基烷基化物)、聚乙二醇和聚原酸酯的共聚物、可生物降解的聚氨基甲酸酯、它們的混合物以及共聚物。
12.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述生物活性劑選自以下組中蛋白質(zhì)、核酸、糖類、肽、LHRH激動(dòng)劑及其合成類似物、亮丙瑞林、催產(chǎn)素、促生長(zhǎng)素抑制素及其合成類似物、小分子藥物、免疫原、能促進(jìn)細(xì)胞和組織生長(zhǎng)和存活的代謝前體、抗腫瘤藥物、激素、抗組胺劑、心血管藥物、抗?jié)兯幬?、支氣管擴(kuò)張劑、血管擴(kuò)張劑、中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物以及麻醉劑拮抗藥。
13.如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述蛋白質(zhì)或所述肽選自以下組中奧曲肽、催產(chǎn)素、胰島素、亮丙瑞林、以及其合成變體。
14.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述有機(jī)相和水相是利用乳化方法相結(jié)合。
15.如權(quán)利要求14所述的方法，其中所述乳化方法選自水包油和水包油包水。
16.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述有機(jī)離子選自以下組中羧酸根、硫酸根、磷酸根、雙羥萘酸根、十二烷基硫酸根、三氟甲基-對(duì)-甲基苯甲酸根、膽酸根、2-萘磺酸根、2，3-萘二甲酸根、1-羥基-2-萘甲酸根、3-羥基-2-萘甲酸根、2-萘甲酸根以及水楊酰水楊酸根。
17.一種由權(quán)利要求1所述的方法制備的控釋組合物。
18.一種制備在聚合物中包含生物活性劑的微粒的方法，其包括以下步驟a)將可生物降解的聚合物與有機(jī)相結(jié)合；b)將生物活性劑與所述有機(jī)相結(jié)合；c)將有機(jī)離子與水相結(jié)合；d)通過(guò)利用乳化方法使有機(jī)相和水相接觸；以及e)回收所述微粒。
19.根據(jù)權(quán)利要求18獲得的微粒。
20.如權(quán)利要求18所述的方法，其中在有機(jī)相中進(jìn)一步包含共溶劑。
21.如權(quán)利要求20所述的方法，其中所述共溶劑選自以下組中二甲基亞砜、二甲基甲酰胺、n-甲基吡咯烷酮、PEG200、PEG400、甲醇、乙醇、異丙醇以及苯甲醇。
22.如權(quán)利要求18所述的方法，其中在所述水相中進(jìn)一步包含乳化劑。
23.如權(quán)利要求22所述的方法，其中所述乳化劑選自以下組中聚(乙烯醇)、白蛋白、卵磷脂維生素E-TPGS以及聚山梨醇酯。
24.如權(quán)利要求22所述的方法，其中所述乳化劑的最終濃度范圍為約0.1至10重量％。
25.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述有機(jī)相包含選自以下組中的溶劑二氯甲烷、乙酸乙酯、苯甲醇、丙酮、乙酸以及碳酸丙烯酯。
26.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述有機(jī)離子的最終濃度范圍為約0.1至1000mM。
27.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述控釋組合物選自微粒和納米粒。
28.如權(quán)利要求27所述的方法，其中所述微粒和納米粒是可生物降解的。
29.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述聚合物選自以下組中聚(丙交酯)、聚(乙交酯)、聚(丙交酯-共-乙交酯)、聚(乳酸)、聚(羥基乙酸)、聚(乳酸-共-羥基乙酸)、聚己內(nèi)酯、聚碳酸酯、聚酯酰胺、聚酸酐、聚(氨基酸)、聚原酸酯、聚乙酰、聚氰基丙烯酸酯、聚醚酯、聚(二氧雜環(huán)己酮)、聚(亞烴基烷基化物)、聚乙二醇和聚原酸酯的共聚物、可生物降解的聚氨基甲酸酯、它們的混合物及共聚物。
30.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述生物活性劑選自以下組中蛋白質(zhì)、核酸、糖類、肽、LHRH激動(dòng)劑及其合成類似物、亮丙瑞林、催產(chǎn)素、促生長(zhǎng)素抑制素及其合成類似物、小分子藥物、免疫原、能促進(jìn)細(xì)胞和組織生長(zhǎng)和存活的代謝前體、抗腫瘤藥物、激素、抗組胺劑、心血管藥物、抗?jié)兯幬?、支氣管擴(kuò)張劑、血管擴(kuò)張劑、中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物以及麻醉劑拮抗藥。
31.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述蛋白質(zhì)或所述肽選自?shī)W曲肽、催產(chǎn)素、胰島素、亮丙瑞林及其合成變體。
32.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述乳化方法選自水包油和水包油包水。
33.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述有機(jī)離子選自以下組中羧酸根、硫酸根、磷酸根、雙羥萘酸根、十二烷基硫酸根、三氟甲基-對(duì)-甲基苯甲酸根、膽酸根、2-萘磺酸根、2，3-萘二甲酸根、1-羥基-2-萘甲酸根、3-羥基-2-萘甲酸根、2-萘甲酸根以及水楊酰水楊酸根。
34.一種由權(quán)利要求18所述的方法制備的控釋組合物。
35.一種通過(guò)乳化方法制備在聚合物中包含生物活性劑的微粒的改良方法，其中所述改進(jìn)之處是在水相中提供有機(jī)離子以減少生物活性劑的降解。
36.一種方法，其包括a)將生物活性劑與有機(jī)相結(jié)合；b)將聚合物與所述有機(jī)相結(jié)合；c)將有機(jī)離子與水相結(jié)合；以及d)通過(guò)利用乳化方法使所得到的有機(jī)相和水相接觸以制備包含有機(jī)離子-生物活性劑復(fù)合物的控釋組合物。
37.如權(quán)利要求36所述的方法，其中在有機(jī)相中進(jìn)一步包含共溶劑。
38.如權(quán)利要求37所述的方法，其中所述共溶劑選自以下組中二甲基亞砜、二甲基甲酰胺、n-甲基吡咯烷酮、PEG200、PEG400、甲醇、乙醇、異丙醇以及苯甲醇。
39.如權(quán)利要求36所述的方法，其中在所述水相中進(jìn)一步包含乳化劑。
40.如權(quán)利要求39所述的方法，其中所述乳化劑選自以下組中聚(乙烯醇)、白蛋白、卵磷脂維生素E-TPGS以及聚山梨醇酯。
41.如權(quán)利要求39所述的方法，其中所述乳化劑的最終濃度范圍為約0.1至10重量％。
42.如權(quán)利要求36所述的方法，其中所述有機(jī)相包含選自以下組中的溶劑二氯甲烷、乙酸乙酯、苯甲醇、丙酮、乙酸以及碳酸丙烯酯。
43.如權(quán)利要求36所述的方法，其中所述有機(jī)離子的最終濃度范圍為約0.1至1000mM。
44.如權(quán)利要求36所述的方法，其中所述控釋組合物選自微粒和納米粒。
45.如權(quán)利要求44所述的方法，其中所述微粒和納米粒是可生物降解的。
46.如權(quán)利要求36所述的方法，其中所述聚合物選自以下組中聚(丙交酯)、聚(乙交酯)、聚(丙交酯-共-乙交酯)、聚(乳酸)、聚(羥基乙酸)、聚(乳酸-共-羥基乙酸)、聚己內(nèi)酯、聚碳酸酯、聚酯酰胺、聚酸酐、聚(氨基酸)、聚原酸酯、聚乙酰、聚氰基丙烯酸酯、聚醚酯、聚(二氧雜環(huán)己酮)、聚(亞烴基烷基化物)、聚乙二醇和聚原酸酯的共聚物、可生物降解的聚氨基甲酸酯、它們的混合物及共聚物。
47.如權(quán)利要求36所述的方法，其中所述生物活性劑選自以下組中蛋白質(zhì)、核酸、糖類、肽、LHRH激動(dòng)劑及其合成類似物、亮丙瑞林、催產(chǎn)素、促生長(zhǎng)素抑制素及其合成類似物、小分子藥物、免疫原、能促進(jìn)細(xì)胞和組織生長(zhǎng)和存活的代謝前體、抗腫瘤藥物、激素、抗組胺劑、心血管藥物、抗?jié)兯幬铩⒅夤軘U(kuò)張劑、血管擴(kuò)張劑、中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物以及麻醉劑拮抗藥。
48.如權(quán)利要求47所述的方法，其中所述蛋白質(zhì)或所述肽選自以下組中奧曲肽、催產(chǎn)素、胰島素、亮丙瑞林及其合成變體。
49.如權(quán)利要求36所述的方法，其中所述乳化方法選自水包油和水包油包水。
50.如權(quán)利要求36所述的方法，其中所述有機(jī)離子選自以下組中羧酸根、硫酸根、磷酸根、雙羥萘酸根、十二烷基硫酸根、三氟甲基-對(duì)-甲基苯甲酸根、膽酸根、2-萘磺酸根、2，3-萘二甲酸根、1-羥基-2-萘甲酸根、3-羥基-2-萘甲酸根、2-萘甲酸根以及水楊酰水楊酸根。
51.一種由權(quán)利要求36所述的方法制備的控釋組合物。
全文摘要
此處公開的方法用于制備控釋組合物，具體而言，本方法提供將包含生物活性劑和聚合物的有機(jī)相與包含有機(jī)離子的水相的接觸以制備包含生物活性劑的控釋組合物。本發(fā)明還包括包含聚合物、有機(jī)離子以及生物活性劑的控釋組合物。本發(fā)明還包括使用這種控釋組合物的方法。本發(fā)明的有效性在于該方法可用于制備包含生物活性劑的控釋組合物，該組合物能夠采用濃縮低劑量形式給藥、具有低突釋率并且生物活性劑的降解產(chǎn)物減少。
文檔編號(hào)A61K9/50GK1852687SQ200480026606
公開日2006年10月25日 申請(qǐng)日期2004年7月15日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月15日
發(fā)明者P·庫(kù)克·蓋瑞 申請(qǐng)人:Pr藥品有限公司