專利名稱：瘡皰丙酸桿菌的抗菌劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及瘡皰丙酸桿菌(Propionibacterium acnes)的抗菌劑。更詳細(xì)地說，涉及含有后述式[I]所示的肽作為有效成分的瘡皰丙酸桿菌的抗菌劑。
背景技術(shù)：
瘡皰丙酸桿菌(P.acnes；痤瘡桿菌)是厭氧性的革蘭氏陽性無孢子桿菌，存在于皮膚、腸道上。盡管其本來被認(rèn)為是對人體致病性低的細(xì)菌，但通過最近的研究發(fā)現(xiàn)其對慢性疾病的發(fā)病、進(jìn)展起著重要的作用。瘡皰丙酸桿菌強(qiáng)烈地活化免疫系統(tǒng)，如1)活化補(bǔ)體、2)產(chǎn)生嗜中性白細(xì)胞趨化因子、3)誘導(dǎo)嗜中性白細(xì)胞釋放酶等。作為由瘡皰丙酸桿菌引發(fā)、促進(jìn)的疾病有痤瘡、肉樣瘤病、葡萄膜炎、結(jié)膜炎、角膜炎、角膜水皰、心內(nèi)膜炎、脊椎關(guān)節(jié)炎等。
因此，要求開發(fā)對瘡皰丙酸桿菌具有優(yōu)異抗菌作用的藥物。
其中，痤瘡是一種毛囊皮脂腺被侵入的慢性炎癥性疾病，皮疹多發(fā)于面部、頸部、胸背部。常見粉刺、紅色丘疹、膿皰、硬結(jié)、小結(jié)、囊腫、疤痕等多種皮疹以各種程度共存。通常，痤瘡從微小粉刺形成閉合性粉刺，然后向開放性粉刺或者炎癥性粉刺紅色丘疹、膿皰轉(zhuǎn)移，嚴(yán)重的時候會留下痤瘡疤痕等后遺癥。并且，痤瘡對于年輕人等也是精神痛苦的原因，因此需求適當(dāng)?shù)闹委煛?br> 痤瘡中，在毛囊中存在的瘡皰丙酸桿菌產(chǎn)生脂肪酶，將皮脂成分中的甘油三酯分解成游離脂肪酸。游離脂肪酸刺激毛囊漏斗部上皮，引起過度角化癥，誘導(dǎo)粉刺的形成。并且，瘡皰丙酸桿菌產(chǎn)生嗜中性白細(xì)胞趨化因子、補(bǔ)體活化因子、蛋白酶、透明質(zhì)酸酶等，誘導(dǎo)嗜中性白細(xì)胞到病變部位，破壞毛囊上皮。其結(jié)果，在病變部位產(chǎn)生膿腫(參照池田重雄監(jiān)修、《標(biāo)準(zhǔn)皮膚科學(xué)(第6版)》、第270頁～第272頁、醫(yī)學(xué)書院出版、2001年)。
因此，作為痤瘡的治療劑，除了需要對瘡皰丙酸桿菌的抗菌作用，還希望同時具有角化過度抑制作用、對由嗜中性白細(xì)胞誘導(dǎo)的炎癥的抑制作用。
但是，作為以往的痤瘡治療方法，如1)涂布抗生素外用劑、合成抗菌外用劑、視黃酸類，2)口服四環(huán)素類抗生素、大環(huán)內(nèi)酯類抗菌劑，3)涂布具有脫脂作用的硫磺樟腦洗劑，等，但具有副作用問題，在效果方面也有限，對于重癥痤瘡無效。因此，也將幾種治療方法組合，但具有藥物間相互作用導(dǎo)致副作用、就整體而言價格過高等問題。
肉樣瘤病是以非干酪樣壞死性上皮樣細(xì)胞肉芽腫為特征的全身性疾病，肺是最容易受影響的器官，但眼睛、皮膚、淋巴腺、骨和關(guān)節(jié)、心臟、神經(jīng)組織、其他內(nèi)臟也有病灶。作為肉樣瘤病的全身病變的一部分，表現(xiàn)為葡萄膜炎。肉樣瘤病是一種IV型變應(yīng)性疾病，其如下形成由于某種原因?qū)е耇細(xì)胞被活化，由此活化T細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子導(dǎo)致單核細(xì)胞在局部聚集，并分化成巨嗜細(xì)胞，最終形成類上皮樣細(xì)胞肉芽腫。盡管長期以來肉樣瘤病的原因一直不明，但近年來瘡皰丙酸桿菌作為原因被人們所關(guān)注。已經(jīng)明確從瘡皰丙酸桿菌病變部位淋巴結(jié)可高效率、大量地收集瘡皰丙酸桿菌細(xì)菌，并且瘡皰丙酸桿菌的細(xì)菌成分大量聚集于類上皮樣細(xì)胞肉芽腫內(nèi)。肉樣瘤病的有效治療方法還沒有確立，是種難治性疾病。肉樣瘤病患者中的70％左右無奈地被追蹤現(xiàn)察，將甾類激素作為第一選擇藥使用，但具有副作用等問題(參照Atarashii Ganka、第17卷(臨時增刊號)、第87頁～第89頁、2000年)。
另一方面，在WO96/12732號小冊子等公開了下式[I]所示的肽。
在WO96/12732號小冊子中公開了由式[I]所示肽(以下稱為肽[I])形成的抗生素、抗腫瘤物質(zhì)、抗炎癥物質(zhì)以及創(chuàng)傷愈合物質(zhì)。另外，公開了由肽[I]形成的抗菌劑、抗腫瘤劑、抗炎癥劑、創(chuàng)傷愈合劑、抗?jié)儎?。并且，公開了肽[I]的抗菌作用，特別是對于好氧性的革蘭式陽性菌的抗菌作用、對變應(yīng)性和非變應(yīng)性炎癥的抑制作用。
在日本特開平10-067677號公報中公開了感染性皮膚疾病治療劑，其特征在于含有肽[I]和感染性皮膚疾病治療劑。
在日本特開平10-120575號公報中公開了由油脂性基質(zhì)和白糖構(gòu)成的創(chuàng)傷愈合劑，其特征在于還含有肽[I]。
在日本特開平10-120590號公報中公開了寄生性皮膚疾病治療用外用劑，其特征在于含有寄生性皮膚疾病治療藥以及肽[I]。
在日本特開平10-259141號公報中公開了皮膚疾病治療用外用劑，其特征在于含有腎上腺皮質(zhì)激素、肽[I]、維生素E和角鯊?fù)椤?br> 鑒于上述事實，本發(fā)明以提供瘡皰丙酸桿菌的優(yōu)異抗菌劑為目的。并且，本發(fā)明的目的還在于提供瘡皰丙酸桿菌引起的疾病，如痤瘡、肉樣瘤病等的預(yù)防或治療劑。另外，本發(fā)明的目的在于提供痤瘡的預(yù)防或治療劑，其兼具對瘡皰丙酸桿菌的抗菌作用、過度角化抑制作用、對由嗜中性白細(xì)胞誘導(dǎo)的炎癥的抑制作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人為了達(dá)到上述目的進(jìn)行了深入地研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)肽[I]對瘡皰丙酸桿菌具有優(yōu)異的抗菌作用，并且發(fā)現(xiàn)肽[I]具有對表皮角化細(xì)胞增殖的抑制作用以及對伴隨有嗜中性白細(xì)胞浸潤的炎癥的抑制作用，即確認(rèn)了其對痤瘡的預(yù)防或治療有用，進(jìn)而完成本發(fā)明。
即，本發(fā)明涉及下述內(nèi)容(1)瘡皰丙酸桿菌的抗菌劑，其含有下式[I]所示的肽或其可藥用鹽作為有效成分。
(2)由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病的預(yù)防或治療劑，其含有下式[I]所示的肽或其可藥用鹽作為有效成分。
(3)如上述(2)所述的預(yù)防或治療劑，其中由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病為選自痤瘡、肉樣瘤病、葡萄膜炎、結(jié)膜炎、角膜炎、角膜水皰(corneal phlycten)、心內(nèi)膜炎以及脊椎關(guān)節(jié)炎的疾病。
(4)如上述(3)所述的預(yù)防或治療劑，其中由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病為痤瘡。
(5)如上述(4)所述的預(yù)防或治療劑，其中痤瘡為尋常痤瘡。
(6)如上述(3)所述的預(yù)防或治療劑，其中由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病為肉樣瘤病。
(7)如上述(6)所述的預(yù)防或治療劑，其中肉樣瘤病為眼肉樣瘤病。
(8)如上述(1)～(7)中任意一項所述的預(yù)防或治療劑，其劑型為外用劑。
(9)用于預(yù)防或治療痤瘡的化妝品，其含有式[I]所示的肽或其可藥用鹽作為有效成分。
(10)預(yù)防或治療瘡皰丙酸桿菌感染的方法，其中使用式[I]所示的肽或其可藥用鹽。
(11)預(yù)防或治療由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病的方法，其中使用式[I]所示的肽或其可藥用鹽。
(12)預(yù)防或治療痤瘡的方法，其中使用含有式[I]所示的肽或其可藥用鹽作為有效成分的化妝品。
(13)式[I]所示的膚或其可藥用鹽用于制備瘡皰丙酸桿菌的抗菌劑的用途。
(14)式[I]所示的肽或其可藥用鹽用于制備由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病的預(yù)防或治療劑的用途。
(15)式[I]所示的肽或其可藥用鹽用于制備預(yù)防或治療痤瘡的化妝品的用途。
(16)一種商業(yè)包裝，其包括含有式[I]所示的肽或其可藥用鹽及可藥用載體的瘡皰丙酸桿菌的抗菌劑組合物、以及記載有可以將該組合物用于或應(yīng)該用于預(yù)防或治療瘡皰丙酸桿菌感染的記載物。
(17)一種商業(yè)包裝，其包括含有式[I]所示的肽或其可藥用鹽及可藥用載體的用于預(yù)防或治療由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病的藥物組合物、以及記載有可以將該組合物用于或應(yīng)該用于預(yù)防或治療由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病的記載物。
(18)一種商業(yè)包裝，其包括含有式[I]所示的肽或其可藥用鹽及可藥用載體的用于預(yù)防或治療痤瘡的化妝品組合物、以及記載有可以將該組合物用于或應(yīng)該用于預(yù)防或治療痤瘡的記載物。
通過本發(fā)明，能夠得到瘡皰丙酸桿菌的優(yōu)異抗菌劑。并且，能夠得到痤瘡、肉樣瘤病等由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病的預(yù)防或治療劑；痤瘡的預(yù)防或治療劑，其兼具對瘡皰丙酸桿菌的抗菌作用、對過度角化的抑制作用、對由嗜中性白細(xì)胞誘導(dǎo)的炎癥的抑制作用；用于預(yù)防或治療痤瘡的化妝品。
發(fā)明的詳細(xì)說明本發(fā)明的瘡皰丙酸桿菌的抗菌劑、由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病的預(yù)防或治療劑、痤瘡的預(yù)防或治療用化妝品，含有肽[I]作為有效成分。
肽[I]可如下得到培養(yǎng)屬于鏈霉菌屬的肽[I]產(chǎn)生菌株、如放線菌高貴鏈霉菌屬(Streptomyces nobilis，以下簡寫為“S.nobilis”)，將通過有機(jī)溶劑提取所得培養(yǎng)液或培養(yǎng)液的固形物或者培養(yǎng)菌體的提取物上樣于各種柱層析，對含有目標(biāo)物的柱層析級份進(jìn)行再結(jié)晶處理，由此獲得。
生產(chǎn)肽[I]的放線菌高貴鏈霉菌屬可以從公知的保藏機(jī)構(gòu)獲得，如可使用理化學(xué)研究所的保存菌(JCM4274)(在美國以ATCC19252、在荷蘭以CBS198.65保存)等菌。
肽[I]還可通過WO96/12732號小冊子或者日本特開平10-175996號公報等中記載的方法得到。
做為肽[I]的可藥用鹽，優(yōu)選為無毒性、可藥用的常用鹽，如鈉、鉀等堿金屬鹽，鈣、鎂等堿土類金屬鹽，銨鹽等無機(jī)堿的鹽，及三乙胺、吡啶、甲基吡啶、乙醇胺、三乙醇胺、二環(huán)己胺、N，N’-二芐基乙二胺等有機(jī)胺鹽，以及鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸等無機(jī)酸鹽，甲酸、乙酸、三氟乙酸、馬來酸、酒石酸等有機(jī)羧酸鹽，甲磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸等磺酸加成鹽，與精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等堿性或酸性氨基酸的堿或酸加成鹽。
肽[I]對瘡皰丙酸桿菌具有極優(yōu)異的抗菌作用，對瘡皰丙酸桿菌感染，由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病，如痤瘡、肉樣瘤病、葡萄膜炎、結(jié)膜炎、角膜炎、角膜水皰、心內(nèi)膜炎以及脊椎關(guān)節(jié)炎，優(yōu)選痤瘡、肉樣瘤病的預(yù)防或治療有效。
上述痤瘡包括尋常痤瘡、新生兒痤瘡、聚會性痤瘡、毛囊脂螨性痤瘡(demodex acne)、痤瘡樣疹(acneiform eruption)、由外部化學(xué)物質(zhì)導(dǎo)致的痤瘡、壞死性痤瘡、夏季痤瘡等，優(yōu)選為尋常痤瘡。
上述肉樣瘤病包括肺、眼睛、皮膚、淋巴、骨、關(guān)節(jié)、心臟、神經(jīng)組織、其他內(nèi)臟的肉樣瘤病，但優(yōu)選為眼睛的肉樣瘤病。
由于痤瘡是由瘡皰丙酸桿菌引起的，伴隨有過度角化、嗜中性白細(xì)胞誘導(dǎo)引起的炎癥的疾病，因此兼具瘡皰丙酸桿菌的抗菌作用、過度角化抑制作用、對由嗜中性白細(xì)胞誘導(dǎo)引起的炎癥的抑制作用的肽[I]，對于痤瘡的預(yù)防或者治療極為有效。
本發(fā)明涉及的瘡皰丙酸桿菌的抗菌劑、由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病的預(yù)防或治療劑，能夠以以往公知的劑型給包括人在內(nèi)的哺乳動物施用，如軟膏劑、乳膏劑、凝膠劑、膠乳劑、洗劑、糊劑、搽劑、乳劑、外用液劑、硬膏劑、氣霧劑、吸入劑、噴霧劑、栓劑、灌腸劑、藥浴劑(dipping agent)、貼劑、膏劑、帶劑、滴鼻劑、滴耳劑、滴眼劑、眼軟膏劑等外用劑型，注射劑(液劑、混懸液等)、注入劑、靜脈滴注劑等非口服劑型，片劑、顆粒劑、細(xì)粒劑、膠囊劑、微膠囊劑、顆粒劑、粉末、散劑、丸劑、飲用液劑、液劑、浸劑、煎劑、浸膏劑、混懸液(如橄欖油)、糖漿劑、檸檬水劑(lemonade)、酏劑、錠劑等口服劑型。
本發(fā)明涉及的瘡皰丙酸桿菌的抗菌劑、由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病的預(yù)防或治療劑的劑型，可以在考慮病變部位、效果表現(xiàn)的有效性等的基礎(chǔ)上進(jìn)行適當(dāng)選擇，但優(yōu)選以外用劑型形式給藥。當(dāng)由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病是痤瘡時，在外用劑型中優(yōu)選為軟膏劑、乳膏劑、凝膠劑、膠乳劑、洗劑、糊劑、搽劑、乳劑、外用液劑、硬膏劑、噴霧劑、藥浴劑、貼劑、膏劑、帶劑等劑型。當(dāng)由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病是肉樣瘤病時，特別優(yōu)選滴眼劑或者眼軟膏劑等劑型。
本發(fā)明涉及的瘡皰丙酸桿菌的抗菌劑、對由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病的預(yù)防或治療劑，在使用時按照適于各種劑型的方法進(jìn)行給藥。如為外用劑型時，將其直接噴霧、貼付或涂布于皮膚或者粘膜等重要部位；為片劑、丸劑、飲用液劑、混懸液、乳劑、顆粒劑和膠囊劑時，口服給藥；為注射劑時，給藥到靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮內(nèi)、皮下、關(guān)節(jié)腔內(nèi)或者腹腔內(nèi)；為栓劑時，給藥到直腸內(nèi)。
這些藥物組合物中，可使用如可可脂、白凡士林、聚乙二醇、丙二醇、液體石蠟、蜂蠟、橄欖油、可可油、芝麻油、大豆油、山茶油、花生油、牛油、豬油、羊毛脂、對羥基苯甲酸甲酯、聚氧乙烯氫化蓖麻油、膠態(tài)烴(如plastibase、poloid等)、鯨蠟醇、硬脂醇等基質(zhì)；如蔗糖、淀粉、甘露醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖、纖維素、滑石、磷酸鈣、碳酸鈣等賦形劑；如纖維素、甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥甲基纖維素、聚丙基吡咯烷酮、明膠、阿拉伯膠、聚乙二醇、蔗糖、淀粉、羧甲基淀粉、藻酸鈉、糊精、聚乙烯醇、硬脂酸等粘合劑；如淀粉、羧甲基纖維素、羥丙基淀粉、碳酸氫鈉、磷酸鈣、檸檬酸鈣等崩解劑；如硬脂酸鎂、Aerosil、滑石、月桂基硫酸鈉等潤滑劑；如檸檬酸、薄荷醇、甘氨酸、橙子粉末等矯味劑；如苯甲酸鈉、亞硫酸氫鈉、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯等劑；如檸檬酸、檸檬酸鈉、乙酸等穩(wěn)定劑；如甲基纖維素、聚乙烯基吡咯烷酮、硬脂酸鋁等助懸劑；羥丙基甲基纖維素等分散劑；純凈水、生理鹽水、乙醇、甲醇、二甲基亞砜(DMSO)等稀釋劑；如黃著膠等增稠劑等制劑中慣用的可藥用的各種有機(jī)或無機(jī)載體，通過公知的方法制成制劑。
另外，根據(jù)需要，還可以使用高嶺土、膨潤土、氧化鋅等填充劑；甘油、丙二醇等保濕劑；載體；粘合劑；輔助劑；著色劑；香料；pH調(diào)節(jié)劑；增量劑；增溶劑；緩沖劑；潤濕劑(付質(zhì)剤)；表面活性劑；抗氧劑；拋射劑；溶劑；助溶劑等。另外，通過選用適當(dāng)?shù)娜軇?，肽[I]也可以直接以液體制劑的形式使用。
本發(fā)明涉及的瘡皰丙酸桿菌的抗菌劑、對由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病的預(yù)防或治療劑，以軟膏劑、乳膏劑、凝膠劑、膠乳劑、洗劑、糊劑、搽劑、乳劑、外用液劑、硬膏劑、噴霧劑、貼劑、膏劑、帶劑等皮膚外用劑使用時，通過含有至少一種選自N-酰基肌氨酸或其鹽、作為碳原子數(shù)10～18的高級脂肪酸與碳原子數(shù)1～20的醇的反應(yīng)產(chǎn)物的高級脂肪酸酯、碳原子數(shù)2～10的二元羧酸或其鹽、作為碳原子數(shù)3～6的羥基羧酸與碳原子數(shù)1～20的醇的反應(yīng)產(chǎn)物的羥基羧酸酯、以及脂肪酸乙醇酰胺中的經(jīng)皮吸收促進(jìn)劑，能夠使藥效成分容易地被皮膚吸收、進(jìn)一步提高治療效果。
上述N-酰基肌氨酸可以舉出N-月桂?；“彼帷-油?；“彼帷-棕櫚?；“彼?、椰子油脂肪酸肌氨酸等，其鹽可以舉出上述N-酰基肌氨酸的鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽、鋁鹽等。
上述高級脂肪酸酯為碳原子數(shù)10～18的高級脂肪酸和碳原子數(shù)1～20的醇的反應(yīng)產(chǎn)物。如果上述高級脂肪酸的碳原子數(shù)過少，則產(chǎn)物高級脂肪酸酯易揮發(fā)；而過多時，則經(jīng)皮吸收效果降低。上述醇的碳原子數(shù)過多時，經(jīng)皮吸收效果降低。
作為上述碳原子數(shù)為10～18的高級脂肪酸，可以舉出癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸等飽和脂肪族一元羧酸；棕櫚油酸、油酸、異油酸、亞油酸、亞麻酸等不飽和脂肪族一元羧酸；癸二酸等飽和脂肪族二元羧酸等。
作為上述碳原子數(shù)1～20的醇，可以舉出甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇、異丁醇、叔丁醇、戊醇、己醇、庚醇、辛醇(octyl alcohol)、辛醇(capryl alcohol)、壬醇、癸醇、月桂醇、肉豆蔻醇、棕櫚醇、硬脂醇等脂肪族飽和醇等。
作為上述高級脂肪酸酯可以舉出十四烷酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、月桂酸異丙酯、硬脂酸異丙酯等。
上述二元羧酸或其鹽，碳原子數(shù)為2～10。碳原子數(shù)過少或者過多，經(jīng)皮吸收效果都會下降。作為上述碳原子數(shù)為2～10的二元羧酸，可以舉出草酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、己二酸、庚二酸、辛二酸等飽和脂肪酸二元羧酸；富馬酸、馬來酸等不飽和脂肪族二元羧酸；鄰苯二甲酸、間苯二甲酸、對苯二甲酸等芳香族二元羧酸等。其鹽可以舉出上述二元羧酸的鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽、鋁鹽等。
上述羥基羧酸酯為碳原子數(shù)3～6的羥基羧酸和碳原子數(shù)為1～20的醇的反應(yīng)產(chǎn)物。上述羥基羧酸的碳原子數(shù)過少，則產(chǎn)物羥基羧酸酯易揮發(fā)；過多，則經(jīng)皮吸收效果下降。上述醇的碳原子數(shù)過多，則經(jīng)皮吸收效果降低。
作為上述碳原子數(shù)為3～6的羥基羧酸，可以舉出乳酸、甘油酸等一元羧酸；蘋果酸、酒石酸等二元羧酸等。作為上述碳原子數(shù)為1～20的醇，可以舉出與用于上述高級脂肪酸酯反應(yīng)中的醇相同的醇。作為上述羥基羧酸酯，可以舉出乳酸十四酯、乳酸十六酯等。
作為上述脂肪酸乙醇酰胺，可以舉出脂肪酸單乙醇酰胺、脂肪酸二乙醇酰胺；它們的環(huán)氧烷物加成物等。作為上述脂肪酸乙醇酰胺，可以舉出月桂酸單乙醇酰胺、月桂酸二乙醇酰胺、月桂酰單乙醇酰胺、棕櫚酸單乙醇酰胺、棕櫚酸二乙醇酰胺、肉豆蔻酸單乙醇酰胺、肉豆蔻酸二乙醇酰胺、月桂酸·肉豆蔻酸單乙醇酰胺、椰子油脂肪酸單乙醇酰胺、椰子油脂肪酸二乙醇酰胺、聚氧乙烯加成月桂酰單乙醇酰胺、聚氧乙烯加成椰子油脂肪酸單乙醇酰胺等。
作為在本發(fā)明涉及的瘡皰丙酸桿菌的抗菌劑、由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病的預(yù)防或治療劑中可含有的上述經(jīng)皮吸收促進(jìn)劑，特別優(yōu)選為N-月桂?；“彼?、肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、富馬酸、馬來酸、乳酸十四酯、乳酸十六酯、月桂酸二乙醇酰胺。上述經(jīng)皮吸收促進(jìn)劑優(yōu)選為上述物質(zhì)，但并不限于它們，可以使用以往公知的物質(zhì)。
在本發(fā)明涉及的瘡皰丙酸桿菌的抗菌劑、由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病的預(yù)防或治療劑中含有的肽[I]的量，沒有特別限定，可以在考慮劑型、給藥途徑等的基礎(chǔ)上在寬范圍內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)選擇，優(yōu)選肽[I]為10-10～20重量％的范圍，更優(yōu)選為10-7～10重量％的范圍。特別是作為外用劑進(jìn)行使用時，肽[I]為0.01～20重量％、優(yōu)選為0.1～5重量％的范圍。
本發(fā)明涉及的瘡皰丙酸桿菌的抗菌劑、由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病的預(yù)防或治療劑的給藥量，沒有特別限定，可以在考慮患者的體重、年齡、劑型、給藥途徑、癥狀、患病部位大小等因素的基礎(chǔ)上在寬范圍內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)選擇，但通常為每日按照肽[I]計，以10pg/kg～100mg/kg左右的范圍、優(yōu)選0.1mg/kg～10mg/kg左右的范圍分1～4次給藥。
另外本發(fā)明還涉及含有肽[I]或其可藥用鹽作為有效成分的痤瘡預(yù)防或治療用化妝品。
作為化妝品，可以舉出化妝水、雪花膏、乳液、面膜等各種組合物形式的皮膚化妝品。將含有肽[I]的組合物制成化妝品時，除了添加在將肽[I]制成藥品組合物時可以添加的上述添加物之外，還可以在不影響本發(fā)明組合物的有利特性的范圍內(nèi)，添加化妝品活性劑、防腐劑、香料、填充劑、顏料、防紫外劑、臭氧吸收劑、染料、保濕劑(甘油等)等通常在化妝品領(lǐng)域中使用的添加物。如化妝水可如下制得在精制水中溶解甘油等保濕劑、皮膚營養(yǎng)劑等，在醇中溶解防腐劑、香料等，將兩者混合在室溫下使其溶解，在醇部分中加入肽[I]或其可藥用鹽，從而得到。
本發(fā)明涉及的用于預(yù)防或治療痤瘡的化妝品，通常通過在皮膚等需要部位直接噴霧或者貼付、涂布有效量的上述化妝品進(jìn)行使用(給藥)。
本發(fā)明涉及的痤瘡預(yù)防或治療用化妝品中所含有的肽[I]的量，可以根據(jù)化妝品組合物的形態(tài)等在寬范圍內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)選擇，優(yōu)選按[I]計，為0.001～20重量％，更優(yōu)選為0.01～5重量％的范圍。
本發(fā)明涉及的痤瘡預(yù)防或治療用化妝品的用量，沒有特別限定，可以在考慮組合物的形態(tài)、使用部位等因素的基礎(chǔ)上在寬范圍內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)選擇，但通常每次使用的化妝品為0.01g～10g左右的范圍，每日分1～4次使用。
以下通過實施例更加具體地說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受下述實施例的限定。
(實施例1)用6株在1991年由日本國內(nèi)的教育醫(yī)院分離、鑒定、保存的瘡皰丙酸桿菌作為試驗菌。在GAM瓊脂培養(yǎng)基(日水制藥公司生產(chǎn))中、35℃下厭氧培養(yǎng)48小時，將繁殖的菌落接種到GAM broth(日水制藥公司生產(chǎn))，35℃下厭氧培養(yǎng)18～20小時。將其用含有明膠的緩沖生理鹽水(在1000 mL無菌水中溶解有BSG；NaCl8.5、KH2PO40.3g、Na2HPO40.6g、明膠0.1g的溶液)稀釋100倍，制成接種菌液。使用二甲基亞砜(DMSO)溶解肽[I]，用DMSO進(jìn)行2倍的梯度稀釋。將其分注到滅菌培養(yǎng)皿中使得DMSO的終濃度為1％，向其中添加9.9mL滅過菌的腦心浸液瓊脂(BBL)，按照肽[I]的終濃度為128μg/mL～0.0039μg/mL，制作2倍稀釋系列的瓊脂平板。通過影印法將接種菌液接種于瓊脂平板，35℃下厭氧培養(yǎng)48小時。根據(jù)NCCLS(M11-A4)進(jìn)行MIC的判定。結(jié)果示于表1。
表1

(結(jié)果)由表1可知，肽[I]對試驗中使用的6個瘡皰丙酸桿菌菌株都具有很強(qiáng)的抗菌活性。
(實施例2)使用正常人表皮角質(zhì)化細(xì)胞生長培養(yǎng)基(KGMz)將正常人表皮角質(zhì)化細(xì)胞(購自三光純藥株式會社)調(diào)整到2×104個細(xì)胞/mL的細(xì)胞濃度后，在96孔板中以每孔100μL進(jìn)行接種(2×103個細(xì)胞/孔)。在37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～3小時后，以100μL/孔添加溶解于0.02％甲醇-KGM2中的肽[I]。甲醇終濃度為0.01％。將細(xì)胞培養(yǎng)3天后，更換培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)3天。培養(yǎng)后以20μL/孔添加細(xì)胞計數(shù)試劑盒試劑(和光純藥(株)公司生產(chǎn))，在二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行顯色反應(yīng)。一邊觀察顯色狀態(tài)，將反應(yīng)時間定為1～4小時。反應(yīng)后，使用讀板器在450nm測定吸光度，作為細(xì)胞增殖指標(biāo)。實驗平行反復(fù)進(jìn)行了3次，與未添加肽[I]的組比較吸光度，通過Dunnet多重比較檢驗法進(jìn)行檢驗。結(jié)果示于表2。
表2

**P＜0.01(Dunnet多重比較檢驗)(結(jié)果)如表2可知，肽[I]對正常人表皮角質(zhì)化細(xì)胞增殖顯示了很強(qiáng)的抑制作用。
(實施例3)
在BDF1系雌性小鼠(7周齡)的右耳廓兩面上涂布50μg/mL的溶解于1％DMSO-丙酮溶液的TPA，每面20μL(2μg/耳)，誘發(fā)皮膚炎癥。將肽[I]溶解在丙酮/甲醇(1∶1)中后使用，分別在TPA刺激的24小時前和1小時前，涂布于右耳廓兩面，每面20μL。在TPA刺激的6小時和24小時后，使用Peacock dial thickness gauge測定右耳的厚度，作為浮腫的指標(biāo)。在TPA刺激的24小時后，采集右耳，測定MPO活性，作為嗜中性白細(xì)胞浸潤的指標(biāo)。每組各測定5只。耳的厚度、MPO活性分別通過下式作為抑制率(％)求出。
抑制率(％)＝[(未給予肽[I]的組的平均值-肽[I]給藥組的平均值)/(未給予肽[I]的組的平均值-未涂布TPA組的平均值)]×100結(jié)果由Dunnet多重比較檢驗法進(jìn)行檢驗。結(jié)果示于表3。
表3

*P＜0.05、**P＜0.01(Dunnet多重比較檢驗)(結(jié)果)由表3可知，肽[I]對TPA誘發(fā)的小鼠皮膚炎癥中的浮腫、嗜中性白細(xì)胞浸潤具有很強(qiáng)的抑制作用。該結(jié)果表明本發(fā)明的肽[I]對由嗜中性白細(xì)胞浸潤引發(fā)的炎癥具有抑制作用。
(實施例4)在BALB/c系雌性小鼠(5周齡)的右耳廓兩面上涂布1mg/mL的溶解于10％DMSO-丙酮溶液的鈣離子載體(A23187)，每面10μL(20μg/耳)，誘發(fā)皮膚炎癥。將肽[I]溶解在丙酮/甲醇(1∶1)中后使用，分別在A23187刺激的24小時前和1小時前，涂布于右耳廓兩面，每面20μL。在A23187刺激的6小時和24小時后，使用Peacockdial thickness gauge測定右耳的厚度，作為浮腫的指標(biāo)。在A23187刺激的24小時后，采集右耳，測定MPO活性，作為嗜中性白細(xì)胞浸潤的指標(biāo)。每組各測定5只。耳的厚度、MPO活性分別通過下式作為抑制率(％)求出。
抑制率(％)＝[(未給予肽[I]的組的平均值-肽[I]給藥組的平均值)/(未給予肽[I]的組的平均值-未涂布A23187的組的平均值)]×100結(jié)果由Dunnet多重比較檢驗法進(jìn)行檢驗。結(jié)果示于表4。
表4

**P＜0.01(Dunnet多重比較檢驗)(結(jié)果)由表4可知，肽[I]對A23187誘發(fā)的小鼠皮膚炎癥中的浮腫、嗜中性白細(xì)胞浸潤具有很強(qiáng)的抑制作用。該結(jié)果表明本發(fā)明的肽[I]對由嗜中性白細(xì)胞浸潤引發(fā)的炎癥具有抑制作用。
(實施例5)肽[I] 1mgplastibase(大正制藥公司生產(chǎn))1g使用乳缽將1mg肽[I]粉碎成細(xì)粉，添加1g plastibase，使用乳缽將它們充分混合，制備軟膏劑。
(實施例6)肽[I] 0.2mg甲醇12.5μL
plastibase(大正制藥公司生產(chǎn)) 1g在50μL甲醇中溶解0.8mg肽[I]后，在乳缽上將所得含有本發(fā)明肽的甲醇中的12.5μL與1g plastibase充分混合，制備軟膏劑。
(實施例7)肽[I] 0.5mgDMSO 0.1mL5重量％阿拉伯膠水溶液 1.9mL在0.5mg肽[I]中添加0.1mL DMSO將肽溶解后，一邊攪拌一邊每次少量地將0.1mL所得含有本發(fā)明肽的DMSO溶液加入至1.9mL5重量％阿拉伯膠溶液中，制備均勻混懸的液體制劑。
(實施例8)肽[I] 0.5mg生理鹽水 2mL在0.5mg肽[I]中添加少量生理鹽水，使用超聲波使其成為均勻的混懸液后，繼續(xù)添加生理鹽水使溶液量達(dá)到2mL，制備液體制劑。
(實施例9)肽[I] 25mg乙醇 2.5mL聚氧乙烯氫化蓖麻油60 1g生理鹽水 96.5mL將25mg肽[I]溶解于2.5mL乙醇中后，加入1g聚氧乙烯氫化蓖麻油60。一邊攪拌所得溶液一邊將其添加到96.5mL生理鹽水中，制備液體制劑。
(實施例10)肽[I] 10mg聚乙二醇(macrogol)400 50mL生理鹽水 適量將10mg肽[I]溶解于50mL聚乙二醇400中后，加入生理鹽水達(dá)到100mL，制備液體制劑。
產(chǎn)業(yè)實用性本發(fā)明涉及瘡皰丙酸桿菌的抗菌劑；痤瘡、肉樣瘤病等由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病的預(yù)防或治療劑；痤瘡用于預(yù)防或治療的化妝品等，在醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)上有用。
權(quán)利要求
1.瘡皰丙酸桿菌的抗菌劑，其含有下式[I]所示的肽或其可藥用鹽作為有效成分，
2.由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病的預(yù)防或治療劑，其含有下式[I]所示的肽或其可藥用鹽作為有效成分，
3.權(quán)利要求2所述的預(yù)防或治療劑，其中由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病為選自痤瘡、肉樣瘤病、葡萄膜炎、結(jié)膜鹽、角膜炎、角膜水皰、心內(nèi)膜炎及脊椎關(guān)節(jié)炎的疾病。
4.權(quán)利要求3所述的預(yù)防或治療劑，其中由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病為痤瘡。
5.權(quán)利要求4所述的預(yù)防或治療劑，其中痤瘡為尋常痤瘡。
6.權(quán)利要求3所述的預(yù)防或治療劑，其中由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病為肉樣瘤病。
7.權(quán)利要求6所述的預(yù)防或治療劑，其中肉樣瘤病為眼肉樣瘤病。
8.權(quán)利要求1～7任一項所述的預(yù)防或治療劑，其劑型為外用劑。
9.用于預(yù)防或治療痤瘡的化妝品，其含有下式[I]所示的肽或其可藥用鹽作為有效成分，
10.預(yù)防或治療瘡皰丙酸桿菌感染的方法，其中使用下式[I]所示的肽或其可藥用鹽，
11.預(yù)防或治療由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病的方法，其中使用下式[I]的所示肽或其可藥用鹽，
12.預(yù)防或治療痤瘡的方法，其中使用含有下式[I]所示的肽或其可藥用鹽作為有效成分的化妝品，
13.下式[I]所示的肽或其可藥用鹽用于制備瘡皰丙酸桿菌抗菌劑的用途，
14.下式[I]所示的肽或其可藥用鹽用于制備由瘡皰丙酸桿菌感染引發(fā)的疾病的預(yù)防或治療劑的用途，
15.下式[I]所示的肽或其可藥用鹽在制備用于預(yù)防或治療痤瘡的化妝品中的用途，
全文摘要
本發(fā)明涉及瘡皰丙酸桿菌的抗菌劑，其含有右式[I]所示的肽或其可藥用鹽作為有效成分。
文檔編號A61P27/00GK1852729SQ20048002670
公開日2006年10月25日 申請日期2004年9月15日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月16日
發(fā)明者波多野和男, 渡邊裕二, 佐久間莊三, 橫田義宏 申請人:安斯泰來制藥有限公司, 積水化學(xué)工業(yè)株式會社