專利名稱：用于中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的疾病的治療方法的組胺結(jié)合化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的疾病的新方法。該方法包括將組胺結(jié)合化合物以治療有效量給予患有這樣一種疾病的患者。
所有此處引用的出版物、專利及專利申請均通過引用完全結(jié)合到本文中。
許多炎癥的及自身免疫性疾病都以中性粒細(xì)胞匯聚于疾病部位為特征。在一些情況下這種匯聚并不適當(dāng)而且損害正常組織。
在中性粒細(xì)胞-介導(dǎo)的許多類型疾病中，組織損傷被認(rèn)為與活化的中性粒細(xì)胞釋放的氧化自由基有關(guān)(Dahlgren C，Karlsson A.Respiratory burst in human neutrophils(人類中性粒細(xì)胞中呼吸功能的打斷)，J Immunol Methods 1999 Dec 17；232(1-2)3-14)并且可用組織髓過氧化物酶(MPO)活性對(duì)此進(jìn)行定量。
中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的疾病的實(shí)例包括成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)；嬰兒呼吸窘迫綜合征(IRDS)；嚴(yán)重急性呼吸綜合征(SARS)；慢性阻塞性氣道疾病(COPD)；囊性纖維化；呼吸機(jī)誘發(fā)的肺損傷(VILI)；毛細(xì)血管漏綜合征；再灌注損傷，包括血栓性中風(fēng)、冠狀動(dòng)脈血栓形成、心肺分流術(shù)(CPB)、冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)(CABG)、四肢或指(趾)再植術(shù)、器官移植術(shù)、分流術(shù)腸炎、分流術(shù)關(guān)節(jié)炎、熱損傷及擠壓傷之后的損傷；術(shù)后炎癥或邊緣性浸潤，牛皮癬；牛皮癬性關(guān)節(jié)??；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；Crohn’s病；潰瘍性結(jié)腸炎；免疫性血管炎，包括Wegener’s肉芽腫病及Churg-Strauss病；酒精性肝病；中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的腎小球腎炎；系統(tǒng)性紅斑狼瘡；狼瘡性腎炎；動(dòng)脈粥樣硬化；系統(tǒng)性硬化?。煌达L(fēng)；牙周病，眼部炎癥包括干眼、Sjogren’s綜合征、隱形眼鏡相關(guān)的乳頭狀結(jié)膜炎(CLAPC)、隱形眼鏡相關(guān)的邊緣性浸潤，術(shù)后炎癥包括白內(nèi)障、青光眼、角膜移植術(shù)及激光原位角膜磨鑲術(shù)(LASIK)的手術(shù)后炎癥，嚴(yán)重過敏性結(jié)膜炎，春季角結(jié)膜炎(VKC)，彌漫性片狀角膜炎，傳染性及非特異性結(jié)膜炎，角膜炎及瞼炎，及shield ulcers。
雖然已知組胺涉及事實(shí)上所有過敏性及炎癥性過程，但以前并沒有暗示組胺在中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的疾病中有任何作用。雖然已有某些抗組胺劑被測試用來拮抗這種天然的疾病，但是這些藥物的靶位是組胺受體，而不是組胺本身。而且，即使被用于聯(lián)合其它藥物治療，在內(nèi)毒素-誘導(dǎo)的肺損害動(dòng)物模型的測試中這樣的藥物作用也有限(Byrne K，Sielaff TD，Michna B，Carey PD，Blocher CR，Vasquez A，Sugerman HJ.Crit Care Med.1990 Mar；18(3)303-8；Byrne K，SielaffTD，Carey PD，Tatum JL，Blocher CR，Vasquez A，Hirsh JI，Sugerman HJ，Circ Shock.1990 Feb；30(2)117-27；Sielaff TD，Sugerman HJ，Tatum JL，Kellum JM，Blocher CR.，J Trauma.1987 Dec；27(12)1313-22；SielaffTD，Sugerman HJ，Tatum JL，Blocher CR.，Surgery.1987 Aug；102(2)350-7)。人類治療方案不包括用組胺阻斷劑治療這種性質(zhì)的疾病(Bernard GR，Artigas A，Brigham KL，Carlet J，F(xiàn)alke K，Hudson L，LamyM，Legall JR，Morris A，Spragg R.Am J Respir Crit Care Med 1994 Mar；149(3 Pt 1)818-24)。
中性粒細(xì)胞-介導(dǎo)的疾病是重要的健康問題并且與顯著的發(fā)病率及死亡率有關(guān)?，F(xiàn)有的治療這些疾病的方法不是很有效?，F(xiàn)在本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)用直接結(jié)合于組胺的藥物并逐漸將血管活性胺滴定至系統(tǒng)外可非常有效地治療這些疾病。
因此，本發(fā)明提供治療患者中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的疾病的方法，包括將治療有效量的組胺結(jié)合化合物給予病人。
本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)通過將組胺從疾病部位完全清除，就可抵消中性粒細(xì)胞-介導(dǎo)的疾病。這種情況只可能發(fā)生在用與組胺有高度親和力的藥物結(jié)合的時(shí)候，這部分解釋了為何先前沒有識(shí)別出這些狀態(tài)下組胺的作用；這類組胺結(jié)合劑只是最近才發(fā)現(xiàn)而沒有被廣泛使用。雖然先前的研究利用結(jié)合于組胺受體的藥物探討組胺的潛在作用，但只注意到邊緣效應(yīng)?，F(xiàn)回顧分析，沒能影響測試狀態(tài)可能是因?yàn)榇嬖诓煌M胺受體(H1、H2、H3、H4及其它可能尚未發(fā)現(xiàn)的受體)。藥物的靶位是組胺受體而不是組胺分子本身，因此，藥物無效并忽略了組胺在這些疾病中的作用。
中性粒細(xì)胞在骨髓中產(chǎn)生及發(fā)育成熟并從該組織移行到其作用部位。一旦它們到達(dá)這一部位，它們的正常作用是破壞入侵的病原體，表現(xiàn)為通過例如調(diào)理作用或補(bǔ)體系統(tǒng)等過程的清除。它們通過釋放細(xì)胞毒性氧化自由基及吞噬作用來完成。它們還清除調(diào)亡的損傷組織細(xì)胞。只有當(dāng)它們被數(shù)量或質(zhì)量上不適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)引誘劑信號(hào)吸引時(shí)它們才會(huì)攻擊正常細(xì)胞并引起以中性粒細(xì)胞介導(dǎo)疾病為特征的損害。我們所注意到的是組胺在引發(fā)這樣的不適當(dāng)化學(xué)引誘劑信號(hào)發(fā)生中可能很重要。
已知中性粒細(xì)胞表達(dá)組胺受體(Wescott S，Kaliner M.，Inflammation1983 Sep；7(3)291-300；Burde R，Seifert R，Buschauer A，SchultzG.，Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacoll 989 Dec；340(6)671-8)。但是，因?yàn)檫@種化合物被代謝及從循環(huán)中很快清除，所以組胺不可能在中性粒細(xì)胞從它們在骨髓中產(chǎn)生及發(fā)育成熟的部位移行中起重要作用(Ferreira SH，Ng KK，Vane JR.，Br J Pharmacol.1973 Nov；49(3)543-53)。雖然本發(fā)明者不希望受任何特殊理論的約束，但認(rèn)為更可能的是組胺可能通過吸引中性粒細(xì)胞至疾病部位的其它不同機(jī)制發(fā)揮作用，而已知它們本身至少部分是組胺依賴性的。這些機(jī)制可包括，特別是血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子的表達(dá)(Jones DA，Abbassi O，McIntireLV，McEver RP，Smith CW.，Biophys J 1993 Oct；65(4)1560-9)，對(duì)趨化因子細(xì)胞因子-誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞化學(xué)引誘劑的抑制(Harris JG，F(xiàn)lower RJ，Watanabe K，Tsurufuji S，Wolitzky BA，Perretti M.，BiochemBiophys Res Commun 1996 Apr 25；221(3)692-6)，LTB4的釋放(Takeshita K，Sakai K，Bacon KB，Gantner F.J Pharmacol Exp Ther.2003 Dec；307(3)1072-8)及T淋巴細(xì)胞IL-16的釋放(Gantner F，SakaiK，Tusche MW，Cruikshank WW，Center DM，Bacon KB，J Pharmacol ExpTher.2002 Oct；303(1)300-7)。以前已證明這些活化作用通過不同組胺受體介導(dǎo)并存在相當(dāng)多重疊以致于，例如，IL-16的釋放可能由H2和H4受體控制。可能還有更多組胺受體有待鑒別。
此外，現(xiàn)在有證據(jù)說明在酵母多糖-誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞從骨髓移行過程中，在血管內(nèi)皮及組胺H4受體上L-選擇素粘附分子表達(dá)中組胺的重要作用(Takeshita K，Bacon KB，Gantner F.J Pharmacol ExpTher.2004 Mar 2[Epub ahead of print])。這些新近數(shù)據(jù)共同支持組胺通過許多受體，但最重要的是H4受體，在中性粒細(xì)胞募集和活化及它們所涉及的人類疾病不同模式中所發(fā)揮的作用。
由于系統(tǒng)的重復(fù)和雜亂，所以阻斷單一組胺受體類型不可能防止中性粒細(xì)胞的募集而這可能是至今為止測試的組胺拮抗劑明顯失敗的原因之一。相反，清除游離組胺的化合物將防止藥物與其任何受體接觸，包括那些尚未發(fā)現(xiàn)的受體。這一特性使其能作為有用的治療劑而起效。
許多疾病由中性粒細(xì)胞介導(dǎo)，包括過敏性、炎癥性及自身免疫性疾病。具體地說，重要的中性粒細(xì)胞-介導(dǎo)的疾病包括成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)；嬰兒呼吸窘迫綜合征(IRDS)；嚴(yán)重急性呼吸綜合征(SARS)；慢性阻塞性氣道疾病(COPD)；囊性纖維化；呼吸機(jī)誘發(fā)的肺損傷(VILI)；毛細(xì)血管漏綜合征；再灌注損傷，包括但不限于血栓性中風(fēng)、冠狀動(dòng)脈血栓形成、心肺分流術(shù)(CPB)、冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)(CABG)、四肢或指(趾)再植術(shù)、器官移植術(shù)、分流術(shù)腸炎、分流術(shù)關(guān)節(jié)炎、熱損傷及擠壓傷之后的損傷；術(shù)后炎癥或邊緣性浸潤，牛皮癬；牛皮癬性關(guān)節(jié)病；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；Crohn’s?。粷冃越Y(jié)腸炎；免疫性血管炎，包括但不限于Wegener’s肉芽腫病及Churg-Strauss??；酒精性肝病；中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的腎小球腎炎；系統(tǒng)性紅斑狼瘡；狼瘡性腎炎；動(dòng)脈粥樣硬化；系統(tǒng)性硬化病；痛風(fēng)；牙周病，眼部炎癥包括干眼、Sjogren’s綜合征、隱形眼鏡相關(guān)的乳頭狀結(jié)膜炎(CLAPC)、隱形眼鏡相關(guān)的邊緣性浸潤，術(shù)后炎癥包括白內(nèi)障、青光眼、角膜移植術(shù)及激光原位角膜磨鑲術(shù)(LASIK)的手術(shù)后炎癥，嚴(yán)重過敏性結(jié)膜炎，春季角結(jié)膜炎(VKC)，彌漫性片狀角膜炎，傳染性及非特異性結(jié)膜炎，角膜炎及瞼炎，及shield ulcers。本領(lǐng)域技術(shù)人員將了解其它的中性粒細(xì)胞-介導(dǎo)的疾病。根據(jù)本發(fā)明可治療這些疾病中的任何一種。
本發(fā)明的方法中所用的組胺結(jié)合化合物應(yīng)充當(dāng)組胺清除劑，結(jié)合于組胺分子從而將組胺滴定至系統(tǒng)外。這樣的清除劑如此“mopsup”出現(xiàn)在疾病或損傷部位系統(tǒng)的組胺。
優(yōu)選組胺結(jié)合化合物應(yīng)以至少10-5M的親和力結(jié)合于組胺，更優(yōu)選小于10-6M，小于10-7M，小于10-8M，小于10-9M，小于10-10M或更小。國際專利申請WO97/44451中給出了允許測試試驗(yàn)化合物對(duì)組胺親和力的合適的組胺結(jié)合測定法。
優(yōu)選組胺結(jié)合化合物應(yīng)對(duì)血管活性胺，特別是組胺有特異性。測量特異性的方法將為本領(lǐng)域技術(shù)人員所了解并包括競爭測定法等。優(yōu)選地，組胺結(jié)合化合物表現(xiàn)出的對(duì)組胺的親和力與無關(guān)化合物所表現(xiàn)出的相比大100倍，更優(yōu)選大103倍，104倍，105倍，106倍或更大。
本發(fā)明用的組胺結(jié)合化合物可以是合成化合物，或天然化合物例如蛋白質(zhì)。已知許多蛋白質(zhì)對(duì)組胺表現(xiàn)出特異性的高親和力結(jié)合。一種可能是用組胺特異性抗體，或抗體片段。優(yōu)選蛋白質(zhì)是參考國際專利申請WO97/44451中血管活性胺結(jié)合分子的化合物，該專利申請的內(nèi)容通過引用完全結(jié)合到本文中。術(shù)語“血管活性胺結(jié)合分子”欲包括(a)任何以小于10-7M的解離常數(shù)特異結(jié)合于組胺、并和國際專利申請?zhí)朩O97/44451中公開的蛋白MS-HBP1、FS-HBP1及FS-HBP-2屬于同一蛋白質(zhì)家族的血管活性胺結(jié)合蛋白，其中如果蛋白質(zhì)初級(jí)的、成熟的單體序列不超過260個(gè)氨基酸并且在該蛋白質(zhì)全序列中至少30個(gè)氨基酸被作為同一殘基保存在那種蛋白質(zhì)及蛋白質(zhì)MS-HBP1、FS-HBP1和FS-HBP-2排列中，那么就認(rèn)為該蛋白質(zhì)屬于這個(gè)蛋白質(zhì)家族，優(yōu)選該排列用ClustalW(Thompson等，1994，NAR，22(22)，4673-4680)或類似的序列排列程序獲得；(b)以小于10-7M的解離常數(shù)特異結(jié)合于組胺的吸血節(jié)肢動(dòng)物的蛋白質(zhì)，并且其中包含序列基元D/E AW K/R(優(yōu)選DAWK，更優(yōu)選QDAWK)及Y/C E/D L/I/F W(優(yōu)選Y/C ELW)；(c)上文(a)或(b)中定義的蛋白質(zhì)的天然生物變異體，例如等位基因變異體或地理學(xué)的變異體；(d)上文(a)、(b)或(c)中定義的蛋白質(zhì)的功能等價(jià)物，包括不影響對(duì)組胺結(jié)合的生物學(xué)功能的野生型蛋白質(zhì)序列中單個(gè)或多個(gè)氨基酸的取代、添加、插入和/或缺失，和/或化學(xué)修飾氨基酸的取代；(e)上文(a)、(b)、(c)或(d)中定義的蛋白質(zhì)的活性片段，其中“活性片段”表示保留有對(duì)組胺結(jié)合的生物學(xué)功能的截短的蛋白質(zhì)；和(f)含有與肽或其它蛋白質(zhì)，例如標(biāo)記物，可以是例如生物活性的、放射性的、酶的或熒光的、或抗體融合的上文(a)、(b)、(c)、(d)或(e)中定義的蛋白質(zhì)的融合蛋白質(zhì)。
特別優(yōu)選在WO97/44451中提到的蛋白質(zhì)FS-HBP2(也稱為EV131)，或其在上文(a)、(b)、(c)、(d)或(e)中所敘述的變異體或活性片段。該蛋白質(zhì)以高親和力及特異性結(jié)合于組胺并且此處顯示在中性粒細(xì)胞-介導(dǎo)疾病的動(dòng)物模型中是有效的。
根據(jù)上文(e)的活性片段應(yīng)包含至少n個(gè)負(fù)責(zé)結(jié)合于組胺的蛋白質(zhì)序列的連續(xù)氨基酸，并根據(jù)具體系列，優(yōu)選n為7或更多(例如，8，10，12，14，16，18，20，50，100，150，200，250或更多)。這樣的片段可以是“獨(dú)立存在的(free-standing)”，即不是其它氨基酸或多肽的一部分或不與它們?nèi)诤?，或它們可以形成一個(gè)部分或區(qū)域被包含在更大的多肽內(nèi)。當(dāng)被包含在更大的多肽內(nèi)時(shí)，本發(fā)明的片段最優(yōu)選形成單個(gè)連續(xù)的區(qū)域。此外，幾個(gè)片段可以被包含在單個(gè)更大的多肽內(nèi)。
本發(fā)明用的組胺結(jié)合蛋白可通過它們的編碼核酸分子在宿主細(xì)胞內(nèi)包含的載體的表達(dá)制備成重組體的形式。這樣的表達(dá)方法已為本領(lǐng)域技術(shù)人員所了解并且許多方法由Sambrook等(同上)及Fernandez&Hoeffler(1998，eds.“Gene expression systems，Using nature for the artof expression(基因表達(dá)系統(tǒng)。表達(dá)領(lǐng)域的使用性能)”。Academic出版社，San Diego，London，Boston，New York，Sydney，Tokyo，Toronto)進(jìn)行了詳細(xì)描述。國際專利申請WO97/44451中列出上文提及的血管活性胺結(jié)合蛋白的編碼序列。在該專利申請中還描述生產(chǎn)這些分子，包括合適的載體、宿主細(xì)胞的方法及蛋白質(zhì)的純化方法。
組胺結(jié)合化合物可配制成藥用組合物，例如，以在單位-劑量或多-劑量容器中的形式出現(xiàn)。例如，密封的安瓿和小玻璃瓶可貯存在冷凍-干燥的狀態(tài)中，使用前只需要立即加入無菌液體載體即可。劑量取決于組胺結(jié)合化合物的特異性，并很容易通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)法確定。
為了治療劑的給藥，藥用組合物還可包含藥學(xué)上可接受的載體。這樣的載體包括抗體及其它多肽、基因及其它治療劑例如脂質(zhì)體，前提是載體本身不會(huì)引起對(duì)接受組合物的個(gè)體產(chǎn)生有害抗體，并且給藥后毒性不會(huì)過大。合適的載體可以是大的、緩慢代謝的高分子例如蛋白質(zhì)、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚氨基酸、氨基酸共聚物及無活性的病毒顆粒。
其中可用藥學(xué)上可接受的鹽，例如，無機(jī)酸鹽例如氫氯酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽等；及有機(jī)酸鹽例如醋酸鹽、丙酸鹽、丙二酸鹽、苯甲酸鹽等。在Remington’s Pharmaceutical Sciences(MackPub.Co.，N.J.1991)中對(duì)藥學(xué)上可接受的載體有充分的討論。
治療組合物中藥學(xué)上可接受的載體還可包含液體例如水、鹽水、甘油及乙醇。此外，輔助物質(zhì)，例如潤濕劑或乳化劑、pH緩沖物質(zhì)等可出現(xiàn)在這樣的組合物中。這樣的載體使藥用組合物配制成片劑、丸劑、錠劑、膠囊、液體、凝膠劑、糖漿、膏劑、懸浮劑等以便患者攝取。
一旦配制完成，本發(fā)明的組合物就可直接給藥于患者。被治療的患者可以是動(dòng)物；尤其是，可治療人類患者。
本發(fā)明所用的組胺結(jié)合化合物或藥用組合物可通過任何途徑給藥，包括但不限于，口服、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、髓內(nèi)、鞘內(nèi)、心室內(nèi)、經(jīng)皮或透皮應(yīng)用(例如，見WO98/20734)、皮下、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)、腸內(nèi)、局部、舌下、陰道內(nèi)或直腸的方式。至于組胺結(jié)合蛋白，因?yàn)榈鞍卓稍谖竷?nèi)被分解，所以最好胃腸外給藥(例如，皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)或皮內(nèi)注射)。適合胃腸外給藥的制劑包括可含有抗氧化劑、緩沖液、制菌劑及使制劑和接受者血液等滲的溶質(zhì)的含水及非水無菌注射溶液，以及可包括懸浮劑或增稠劑的含水及非水無菌懸浮液。
通常由皮下、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)或肌內(nèi)注射直接傳遞組合物，或?qū)⒔M合物傳遞至組織間質(zhì)腔。還可將組合物給藥于損傷部位。劑量治療可以是單劑量方案或多劑量方案。
本文所用術(shù)語“治療有效量”是指治療、改善或預(yù)防目標(biāo)中性粒細(xì)胞-介導(dǎo)的疾病，或有能被觀察到的治療或預(yù)防效果需要的組胺結(jié)合化合物的量。對(duì)任何化合物，既可在細(xì)胞(例如瘤細(xì)胞)培養(yǎng)測定，也可在動(dòng)物模型(通常是小鼠、兔、狗或豬)中估計(jì)最初的治療有效量。還可用動(dòng)物模型確定合適的濃度范圍及給藥途徑。然后這樣的信息就可用于確定給藥于人體的有用的劑量及途徑。
對(duì)人類患者的確切有效量取決于疾病的嚴(yán)重度、患者的一般健康情況、及患者的年齡、體重、性別、飲食、給藥時(shí)間及頻率、聯(lián)合用藥、反應(yīng)敏感性及對(duì)治療的耐受/反應(yīng)。這個(gè)量由常規(guī)實(shí)驗(yàn)確定并由臨床醫(yī)師判斷。通常，有效的劑量從0.005mg/kg至50mg/kg，優(yōu)選0.125mg/kg至20mg/kg。例如，血管活性胺結(jié)合分子例如本文所提及的EV131及EV504的特別優(yōu)選劑量為0.1至20mg/kg之間，更優(yōu)選地，0.5至10mg/kg，而更優(yōu)選1至2mg/kg。組合物可單獨(dú)給藥于患者或可與其它藥劑、藥物或激素聯(lián)合給藥。
基因治療可用于影響患者特殊細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)源性組胺結(jié)合蛋白。基因治療既可發(fā)生在體內(nèi)也可發(fā)生在體外。體外基因治療需要分離及純化患者細(xì)胞、引入治療基因及將遺傳學(xué)改變后的細(xì)胞再引入回到患者體內(nèi)。相反，體內(nèi)基因治療不需要分離及純化患者的細(xì)胞。
治療的基因通常被“包裝”給藥于患者。基因傳遞的載體可以是非病毒的，例如脂質(zhì)體，或復(fù)制-缺陷病毒，例如Berkner，K.L.，在Curr.Top.Microbiol.Immunol.，158，39-66(1992)描述的腺病毒，或Muzyczka，N.，在Curr.Top.Microbiol.Immunol.，158，97-129(1992)及美國專利5,252,479號(hào)描述的腺-相關(guān)病毒(AAV)載體。例如，編碼組胺結(jié)合蛋白的核酸分子可對(duì)復(fù)制-缺陷逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的表達(dá)進(jìn)行基因工程改造。然后這種表達(dá)構(gòu)成物被分離并引入用含有編碼多肽RNA的逆轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)的包裝細(xì)胞(packaging cell)中，以便包裝細(xì)胞產(chǎn)生含有所述基因的傳染性病毒顆粒。這些生產(chǎn)細(xì)胞可給藥于患者，以便在體內(nèi)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行基因工程改造及表達(dá)多肽(見20章，基因治療及其它分子遺傳學(xué)基礎(chǔ)上的治療方法，(并參考引用其中內(nèi)容)人類分子遺傳學(xué)(1996)，T Strachan和A P Read，BIOS ScientficPublishers Ltd)。
另一方法是“裸DNA”的給藥，其中治療的組胺結(jié)合化合物直接注射入血流或肌肉組織內(nèi)。
根據(jù)本發(fā)明，還提供上文描述的本發(fā)明任一方面所敘述的組胺結(jié)合化合物在制造治療中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的疾病的藥物中的用途，尤其是本文清楚敘述的那些疾病。
現(xiàn)在本發(fā)明將以實(shí)施例的方式描述，清楚地提及EV131蛋白在內(nèi)毒素-誘導(dǎo)的ARDS小鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭械氖褂?。?yīng)當(dāng)理解在不脫離本發(fā)明范圍的前提下可做細(xì)節(jié)上的修改。
附圖簡述

圖1內(nèi)毒素(LPS)誘發(fā)支氣管狹窄及被EV131抑制。LPS 1mg經(jīng)鼻內(nèi)途徑給藥而EV131為360μg、180μg及90μg。測量PenH值3小時(shí)。在3小時(shí)時(shí)分析對(duì)乙酰甲基膽堿的反應(yīng)。代碼S01、S02等各自代表一個(gè)小鼠個(gè)體(souris)。
圖2EV131抑制BAL中內(nèi)毒素-誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞募集。LPS以1μg經(jīng)鼻內(nèi)途徑給藥而EV131為360μg、180μg及90μg?？偧?xì)胞數(shù)不變，而180μg及90μg EV131降低BAL中的中性粒細(xì)胞。
圖3經(jīng)MPO活性測定，EV131抑制內(nèi)毒素-誘導(dǎo)的肺內(nèi)中性粒細(xì)胞募集。EV131在180μg及90μg而不在360μg水平抑制肺內(nèi)MPO活性。
圖4內(nèi)毒素(LPS)誘發(fā)支氣管狹窄并被腹膜內(nèi)注射給予的EV131抑制。LPS 1μg經(jīng)鼻內(nèi)途徑給藥而EV131為182μg。測量PenH值3小時(shí)。
圖5當(dāng)rEV131及布地奈德腹膜內(nèi)給藥時(shí)BAL液中募集的細(xì)胞總數(shù)。
圖6當(dāng)rEV131及布地奈德腹膜內(nèi)給藥時(shí)BAL液中募集的細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞類型區(qū)分。
圖7當(dāng)rEV131及布地奈德腹膜內(nèi)給藥時(shí)BAL液中募集的所有細(xì)胞。
圖8rEV131腹膜內(nèi)給藥后BAL液中TNF減少。
圖9在背部皮膚皮內(nèi)注射1-8個(gè)位點(diǎn)的示意圖。1、2陰性對(duì)照(生理鹽水)；7、8陽性對(duì)照(抗-Ova)；3-6與抗-Ova血清皮內(nèi)注射同時(shí)給藥的EV蛋白(濃度逐漸下降)對(duì)Ova效應(yīng)的抑制。
圖10WB/ReJ C57B1/6j-kitw小鼠(w/w)中rEV131對(duì)血管漏的抑制。
圖11免疫復(fù)合物介導(dǎo)血管漏的分光光度定量。EV131及EV504抑制效應(yīng)的劑量依賴。
圖12Arthus反應(yīng)部位的PMN浸潤。在6小時(shí)對(duì)注射部位的顯微鏡觀察。陰性對(duì)照(生理鹽水；A)；陽性反應(yīng)(抗-Ova；B)；EV131總的抑制(抗-Ova+EV131；C)；及EV504的部分抑制(抗-Ova+EV504；D)。
圖13淚液樣本的中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)提示未防腐的rEV131在人類患者受到結(jié)膜過敏原攻擊時(shí)或之后立即明顯減少募集于眼部的中性粒細(xì)胞的數(shù)量。
實(shí)施例1過敏性哮喘重組體，節(jié)肢動(dòng)物衍生的組胺結(jié)合蛋白EV131與組胺高親和力結(jié)合(Paesen，G.C.，P.L.Adams，K.Harlos，P.A.Nuttall，和D.I.Stuart.1999，Mol Cell 3661；Paesen，G.C.，P.L.Adams，P.A.Nuttall，和D.L.Stuart.2000，Biochim Biophys Acta 148292)。
最初，進(jìn)行測試是為了確定EV131能否抑制組胺介導(dǎo)的病理學(xué)變化。因此用EV131測試過敏性哮喘。在接種的小鼠接受抗原攻擊之前給予EV131，發(fā)現(xiàn)可預(yù)防70％氣道高反應(yīng)性，消除支氣管周的炎癥、肺的嗜酸性粒細(xì)胞增多、粘液分泌過多及IL-4分泌(Couilllin等提出)。EV131對(duì)支氣管高反應(yīng)性的抑制作用可與糖皮質(zhì)激素相比。這些結(jié)果證明組胺是過敏性哮喘的重要介質(zhì)。
這些測試結(jié)果促使我們研究急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)，其表現(xiàn)出某些與過敏性哮喘相同的特性。用E.coli(大腸桿菌)內(nèi)毒素單獨(dú)給予建立ARDS模型(Lefort，J.，L.Motreff，和B.B.Vargaftig.2001，AmJ Respir Cell Mol Biol 24345.)。此處顯示EV131明顯抑制支氣管狹窄及中性粒細(xì)胞募集。
方法大腸桿菌內(nèi)毒素誘發(fā)急性支氣管狹窄能產(chǎn)生最大氣道反應(yīng)而又不致死小鼠的內(nèi)毒素最佳劑量首先通過單獨(dú)用鹽水作為對(duì)照來確立。確定最佳劑量為1μg(數(shù)據(jù)未顯示)。使大腸桿菌內(nèi)毒素(O55:B5，Sigma)溶于鹽水并以1μg溶于40μl鹽水的劑量經(jīng)鼻內(nèi)途徑給予靜脈注射氯胺酮麻醉(防止咳嗽)的C57BL/6小鼠。經(jīng)相同途徑在給予內(nèi)毒素之前立即將三種劑量水平(90、180及360μg，4.5-18mg/Kg)rEV131給予不同組別小鼠，對(duì)照組只接受鹽水。
在采用該模型的第二組實(shí)驗(yàn)中，腹膜內(nèi)注射350μg布地奈德(陽性對(duì)照)、鹽水(陰性對(duì)照)及182μg rEV131，1小時(shí)后給予1μg LPS，也是經(jīng)鼻吸入給予。
氣道阻力體積描記器內(nèi)毒素給藥后用全身體積描記器評(píng)價(jià)氣道阻力3小時(shí)。在恢復(fù)期后觀察對(duì)氣霧化乙酰甲膽堿的支氣管高反應(yīng)性(BHR)。首先將接受內(nèi)毒素及活性或?qū)φ账幬锏牟皇芟拗频那逍研∈蠓庞谌眢w積描記室中(Buxco Electronic，Sharon，CO，USA)。小鼠被放在兩個(gè)測定氣壓的體積描記室中的一個(gè)，這些室與抽吸泵相連以保證恒定氣流。動(dòng)物被引入與第二室分離的第一室，其中壓力相當(dāng)于大氣壓。每一隔室都與一個(gè)微分壓力捕獲器的兩部分相連，壓力捕獲器本身與電子放大器連接并由軟件對(duì)信號(hào)進(jìn)行分析。該系統(tǒng)允許在連續(xù)的呼吸周期過程中對(duì)許多參數(shù)進(jìn)行定量。用該系統(tǒng)以增強(qiáng)的呼吸暫停(Penh)為氣道阻力指標(biāo)評(píng)估支氣管狹窄3小時(shí)。
Penh可理解為胸廓?dú)饬骷氨菤饬髁髁壳€的相移；相移增加與呼吸系統(tǒng)阻力增加相關(guān)。Penh通過公式Penh＝(Te/RT-1)×PEF/PIF計(jì)算，其中Te為呼氣時(shí)間，RT為松弛時(shí)間，PEF為呼氣峰流速，而PIF為吸氣峰流速。Penh值相應(yīng)于在觀察期間每5秒11個(gè)事件(周期)的平均數(shù)。
180分鐘后終止實(shí)驗(yàn)，在測定殘留BHR之前可允許小鼠高濃度氧通氣以便恢復(fù)。
在實(shí)驗(yàn)的這個(gè)時(shí)期300mM乙酰甲膽堿被氣霧化并引入體積描記室20秒，并在一段15分鐘的時(shí)間(乙酰甲膽堿誘發(fā)BHR的持續(xù)時(shí)間)后獲得由Penh測定的平均氣道支氣管狹窄讀數(shù)。
經(jīng)數(shù)據(jù)分析，內(nèi)毒素給藥后36個(gè)時(shí)間點(diǎn)及乙酰甲膽堿噴霧后5個(gè)時(shí)間點(diǎn)的Penh值如圖1所示。每一點(diǎn)的Penh值對(duì)應(yīng)于該點(diǎn)之前5分鐘及之后3分鐘之間的平均Penh值。(NB在圖1中恢復(fù)期對(duì)應(yīng)于180分鐘時(shí)Penh的明顯下降)。
支氣管肺泡灌洗(BAL)內(nèi)毒素鼻內(nèi)給藥后3.5小時(shí)在大量氯胺酮及賽拉嗪麻醉下進(jìn)行BAL，將4倍體積0.5ml冰冷卻磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)灌洗氣道。將灌洗液離心，再懸浮，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀進(jìn)行總細(xì)胞計(jì)數(shù)并用Shandon細(xì)胞離心儀制備細(xì)胞離心標(biāo)本。在用May-Gruenwald-Giemsa染色區(qū)分之后，分析細(xì)胞。
肺髓過氧化物酶測定(MPO)如前所述，為測定肺內(nèi)中性粒細(xì)胞含量我們分析肺內(nèi)髓過氧化物酶(中性粒細(xì)胞主要的酶)的量(也可見Hoy A，Leininger-MullerB，Kutter D，Siest G，Visvikis S.Clin Chem Lab Med 2002；40(1)2-8.)肺組織學(xué)在支氣管肺泡灌洗后，致死小鼠。摘除全肺并固定在4％緩沖甲醛中以用H&E染色進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)顯微鏡分析。由兩個(gè)獨(dú)立的觀察者用半定量評(píng)分(0-3)評(píng)價(jià)支氣管周浸潤及平滑肌異常增生。
結(jié)果內(nèi)毒素誘發(fā)的支氣管狹窄被EV131抑制首先我們建立一種誘發(fā)非致死性支氣管狹窄的內(nèi)毒素劑量-反應(yīng)作用(1-100μg)。發(fā)現(xiàn)內(nèi)毒素在15-30分鐘內(nèi)誘發(fā)實(shí)質(zhì)上的支氣管狹窄(數(shù)據(jù)未顯示)。我們選擇劑量為1μg的內(nèi)毒素做進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)以測定rEV131的作用。
在對(duì)照組LPS誘發(fā)實(shí)質(zhì)上的支氣管狹窄，在約80分鐘達(dá)到高峰并持續(xù)180分鐘直到小鼠被允許在高濃度氧中恢復(fù)。當(dāng)鼻內(nèi)給予劑量為360μg的rEV131時(shí)部分抑制這種反應(yīng)，而90μg和180μg抑制作用更大(圖1)。起初這結(jié)果使人感到奇怪，但隨后認(rèn)識(shí)到給予360μg rEV131的小鼠遭受感染及可能受到中性粒細(xì)胞預(yù)處理，因此這種情況不認(rèn)為是典型的。隨后的分析不包括該小鼠的結(jié)果。
這些數(shù)據(jù)提示內(nèi)源性組胺在內(nèi)毒素誘導(dǎo)的支氣管狹窄中有作用，因此用rEV131中和組胺可改善ARDS。
圖4顯示腹膜內(nèi)給予rEV131有類似作用，說明rEV131不能直接結(jié)合于LSP。這也證明rEV131經(jīng)這種途徑給藥是有效的。
支氣管高反應(yīng)性(BHR)被EV131抑制我們還在內(nèi)毒素給藥及在高濃度氧下恢復(fù)后3小時(shí)測試乙酰甲膽堿-誘發(fā)的BHR。首先我們證明與鹽水對(duì)照相比在內(nèi)毒素給藥后發(fā)生乙酰甲膽堿-介導(dǎo)的BHR(數(shù)據(jù)未顯示)。此后我們觀察在給予rEV131及對(duì)照小鼠中乙酰甲膽堿的作用。在對(duì)照小鼠中乙酰甲膽堿激發(fā)支氣管狹窄而在用任何劑量水平rEV131處理的小鼠中則沒有激發(fā)(圖1)。因此，該數(shù)據(jù)提示內(nèi)毒素-誘發(fā)的高反應(yīng)性是組胺依賴性的并能被rEV131減弱。
BAL及肺內(nèi)中性粒細(xì)胞募集減少內(nèi)毒素的給予導(dǎo)致BAL液中中性粒細(xì)胞明顯募集。內(nèi)毒素吸入后3小時(shí)在對(duì)照動(dòng)物的BAL液中我們回收到約105個(gè)白細(xì)胞。rEV131的給藥沒有改變BAL液中總細(xì)胞數(shù)，但相反，180及90μg的rEV131減少中性粒細(xì)胞募集，即使這種減少?zèng)]達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.2)。雖然360μg劑量沒有效應(yīng)(圖2)；但是，在該劑量只有一個(gè)動(dòng)物接受評(píng)價(jià)并且如上文所說，該動(dòng)物隨后被認(rèn)定罹患感染。
我們還觀察肺內(nèi)活化中性粒細(xì)胞的募集是否改變。為定量中性粒細(xì)胞募集，我們測試新鮮肺組織勻漿的MPO活性。顯示180μgrEV131(p＜0.05)及90μg rEV131(p＜0.01)明顯降低中性粒細(xì)胞活性(圖3)。在感染的小鼠中，給藥360μg沒有效應(yīng)。
圖5、6及7都是在腹膜內(nèi)給予rEV131及布地奈德時(shí)為評(píng)價(jià)BAL液中細(xì)胞募集所進(jìn)行的等同實(shí)驗(yàn)。從這些圖中明顯看出，rEV131明顯減少BAL中總細(xì)胞數(shù)，尤其是中性粒細(xì)胞。而且，rEV131還減少BAL液中TNF的量(見圖8)。
肺組織病理學(xué)接受內(nèi)毒素小鼠的肺臟顯示支氣管周顯著浸潤大量中性粒細(xì)胞(數(shù)據(jù)未顯示)。rEV131基本上在180μg及90μg劑量減少中性粒細(xì)胞募集(數(shù)據(jù)未顯示)。
結(jié)論本數(shù)據(jù)證明在ARDS鼠科模型中組胺結(jié)合蛋白rEV131明顯抑制內(nèi)毒素-誘發(fā)的支氣管狹窄、BHR及中性粒細(xì)胞募集。這種作用在鼻內(nèi)給藥及腹膜內(nèi)給藥時(shí)都很明顯。
實(shí)施例2反向被動(dòng)阿圖斯氏反應(yīng)(Arthus reaction)方法經(jīng)典的反向被動(dòng)阿圖斯氏反應(yīng)(局部過敏反應(yīng))在小鼠中進(jìn)行，表示經(jīng)皮膚內(nèi)注射抗血清，然后靜脈內(nèi)注射抗原誘發(fā)的局部免疫復(fù)合物病理學(xué)。所用方法如下被動(dòng)Arthus反應(yīng)的誘發(fā)C57/BL6(129或FVB)小鼠(6-8周齡，雄性或雌性)背部備皮。首先，在異氟烷麻醉下將25μl小雞抗-卵清蛋白IgG(抗-Ova)(12.5-200μg)或鹽水皮內(nèi)注射于背部皮膚。其后立即將100μl卵清蛋白(Ova)(1mg含有0.2％伊凡斯藍(lán))注射于尾部靜脈內(nèi)。對(duì)照小鼠接受皮內(nèi)注射鹽水或小牛血清白蛋白或靜脈內(nèi)注射BSA鹽水(0.2％伊凡斯藍(lán))。
在圖9中描述的圖敘述了用于測試EV蛋白對(duì)被動(dòng)Arthus反應(yīng)抑制作用的方案將最佳數(shù)量的用于被動(dòng)Arthus抑制的抗-卵清蛋白IgG(25μg)或鹽水伴或不伴測試蛋白進(jìn)行皮內(nèi)注射。
血管漏的定量免疫復(fù)合物的形成及局部沉淀誘發(fā)急性炎癥反應(yīng)。作為與血管舒張及內(nèi)皮損害相連續(xù)的血漿蛋白滲出的征候，15分鐘內(nèi)在接受靜脈注射含有0.2％伊凡斯藍(lán)的Ova小鼠的皮內(nèi)注射抗-Ova血清部位可看到藍(lán)色褪色。用數(shù)碼相機(jī)記錄褪色情況(圖10)。
30分鐘時(shí)切除注射部位，剪刀絞碎并在甲酰胺中消化過夜，并用ELISA讀數(shù)平板測量在OD 610nm的吸收值。
顯微鏡評(píng)價(jià)注射部位細(xì)胞的反應(yīng)在注射后6小時(shí)切除注射部位，固定在4％緩沖甲醛中，植入石蠟中，在Leica切片機(jī)上作5μm切片，用H&E染色并用顯微鏡以評(píng)分系統(tǒng)(0，無浸潤，1，最輕度，2，中度及3多形核中性粒細(xì)胞(PMN)重度浸潤)進(jìn)行半定量分析。
結(jié)果血管漏陽性對(duì)照。在缺乏測試蛋白的情況下皮膚注射部位15分鐘內(nèi)染成深藍(lán)色說明存在血管漏(結(jié)果未顯示)。
陰性對(duì)照。靜脈內(nèi)注射含有0.2％伊凡斯藍(lán)的鹽水(無抗原)不引起任何血管漏，例如沒有藍(lán)色褪色(結(jié)果未顯示)。
EV131及EV504對(duì)血管漏的抑制將測試蛋白單獨(dú)或與抗-Ova抗體(每部位12.5μg)一起注射于皮膚。當(dāng)與抗-Ova抗體一起注射時(shí)，幾乎全部保護(hù)作用都由EV131產(chǎn)生，而只有一部分保護(hù)作用由EV504產(chǎn)生(未顯示)。估計(jì)EV131及EV504的IC50各自為16及31μg范圍。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性很高。相反，單獨(dú)皮內(nèi)注射測試蛋白，沒有導(dǎo)致任何血管漏(數(shù)據(jù)未顯示)。
EV131及EV504的劑量依賴性抑制抑制作用的劑量依賴由切除及消化皮膚的分光光度測定來定量。EV131及EV504的IC50各自為20μg及60μg范圍(圖11)。
中性粒細(xì)胞浸潤在抗-Ova注射后6小時(shí)切除皮膚注射部位并作組織學(xué)處理。注射抗-Ova的對(duì)照小鼠真皮顯示明顯外周血管中性粒細(xì)胞浸潤。注射鹽水的對(duì)照小鼠沒有發(fā)現(xiàn)浸潤(圖12)。EV131及EV504明顯減少免疫復(fù)合物誘發(fā)的PMN皮膚內(nèi)募集(62.5μg)，其中EV504作用程度較小。為精確定量，由于在皮膚取樣過程中出現(xiàn)一些技術(shù)失敗需要重復(fù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果總結(jié)在以下表1中。
因此，兩種測試蛋白對(duì)反向Arthus反應(yīng)早期血管漏均有抑制作用。EV131看來在這種免疫復(fù)合物小鼠模型中比EV504更有效。EV131及EV504抑制血管漏的IC50各自為20μg及60μg(圖11)。在高劑量時(shí)PMN浸潤幾乎消失。
表1PMN浸潤(反向Arthus反應(yīng))
實(shí)施例3過敏性結(jié)膜炎有研究評(píng)估FS-HBP2(rEV131)在預(yù)防結(jié)膜過敏原刺激模型誘發(fā)過敏性結(jié)膜炎的先兆及癥狀中的安全性及有效性(Abelson MB，Chambers WA和LM Smith；眼科學(xué)，1990；10884-88)。應(yīng)用4種治療方法，包括將rEV131溶媒與3種濃度rEV131(0.06％、0.12％及0.24％眼科用溶液)比較。本研究包括60名患者。
測量的初級(jí)有效性變量包括眼癢及發(fā)紅。測定中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)作為次級(jí)有效性變量的一部分。收集23名參與本研究的患者的淚液標(biāo)本。在那些標(biāo)本中，19名患者有可檢測的中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)。在一側(cè)眼接受濃度為0.12％(N＝3)及0.24％(N＝7)rEV131而另一側(cè)眼接受安慰劑的患者中，藥物治療的眼的中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯減少(見圖13)。然而，在一側(cè)眼接受0.06％rEV131而另一側(cè)眼接受安慰劑的組中，接受藥物的眼中的中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯增加。在雙側(cè)接受溶媒的眼睛(N＝5)中，中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)沒有發(fā)現(xiàn)顯著差異。
這些結(jié)果提示未防腐的rEV131可在結(jié)膜過敏原攻擊時(shí)或之后立即明顯減少中性粒細(xì)胞募集于眼部的數(shù)量。
結(jié)合在實(shí)施例1及2中出現(xiàn)的結(jié)果，這些結(jié)果提示未防腐的rEV131(即不包含可能有合成蛋白質(zhì)的防腐劑苯扎氯銨的rEV131溶液)可能在眼部急性過敏反應(yīng)中，在減輕炎癥及隨后的與更多具體中性粒細(xì)胞-介導(dǎo)的疾病相關(guān)的組織損傷中發(fā)揮重要作用。晚期過敏反應(yīng)由白細(xì)胞通過肥大細(xì)胞在急性反應(yīng)早期釋放的趨化因子浸潤進(jìn)入組織來介導(dǎo)。在眼部，雖然可能存在細(xì)胞浸潤生理學(xué)晚期，但多數(shù)過敏性結(jié)膜炎病例并沒有相應(yīng)的臨床晚期。在眼部，只有重度、慢性過敏性反應(yīng)包括晚期反應(yīng)，其達(dá)到某一閾值并誘發(fā)臨床先兆及癥狀，例如在春季角結(jié)膜炎中看到的角膜炎及shield ulcers。但是，鼻及肺顯示臨床晚期反應(yīng)比眼更明顯。這可以解釋先前一個(gè)臨床研究在結(jié)膜過敏原攻擊(CAC)誘發(fā)鼻癥狀中所看到的rEV131的作用。在CAC之后鼻內(nèi)的過敏反應(yīng)，及滴入眼部藥劑對(duì)鼻癥狀的作用均是意料不到的，因?yàn)檫^敏原、調(diào)節(jié)劑及活性藥物都可從眼表面，通過鼻淚管，進(jìn)入鼻腔的下鼻甲，在此其可對(duì)鼻組織發(fā)揮作用。
以后的研究將集中在組胺結(jié)合分子例如rEV131減少特別是中性粒細(xì)胞-介導(dǎo)的反應(yīng)例如術(shù)后炎癥或邊緣性浸潤的效能。
權(quán)利要求
1.一種在患者中治療由中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的疾病的方法，它包括給予患者治療有效量的組胺結(jié)合化合物。
2.一種根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病是過敏性疾病、炎性疾病或自身免疫性疾病。
3.一種根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的方法，其中所述疾病選自成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)；嬰兒呼吸窘迫綜合征(IRDS)；嚴(yán)重急性呼吸綜合征(SARS)；慢性阻塞性氣道疾病(COPD)；囊性纖維化；呼吸機(jī)誘發(fā)的肺損傷(VILI)；毛細(xì)血管漏綜合征；再灌注損傷，包括血栓性中風(fēng)、冠狀動(dòng)脈血栓形成、心肺分流術(shù)(CPB)、冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)(CABG)、四肢或指(趾)再植術(shù)、器官移植術(shù)、術(shù)后炎癥或邊緣性浸潤、分流術(shù)腸炎、分流術(shù)關(guān)節(jié)炎、熱損傷及擠壓傷之后的損傷；牛皮癬；牛皮癬性關(guān)節(jié)?。活愶L(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；Crohn’s?。粷冃越Y(jié)腸炎；免疫性血管炎，包括Wegener’s肉芽腫病及Churg-Strauss?。痪凭愿尾。恢行粤＜?xì)胞介導(dǎo)的腎小球腎炎；系統(tǒng)性紅斑狼瘡；狼瘡性腎炎；動(dòng)脈粥樣硬化；系統(tǒng)性硬化病；痛風(fēng)；牙周病，眼部炎癥包括干眼、Sjogren’s綜合征、隱形眼鏡相關(guān)的乳頭狀結(jié)膜炎(CLAPC)、隱形眼鏡相關(guān)的邊緣性浸潤，術(shù)后炎癥包括白內(nèi)障、青光眼、角膜移植術(shù)及激光原位角膜磨鑲術(shù)(LASIK)的手術(shù)后炎癥，嚴(yán)重過敏性結(jié)膜炎，春季角結(jié)膜炎(VKC)，彌漫性片狀角膜炎，傳染性及非特異性結(jié)膜炎，角膜炎及瞼炎、shield ulcers。
4.一種根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中所述組胺結(jié)合化合物是組胺清除劑。
5.一種根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中所述組胺清除劑以大于10-7/M的解離常數(shù)與組胺結(jié)合。
6.一種根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中所述組胺結(jié)合化合物是蛋白質(zhì)。
7.一種根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述組胺結(jié)合蛋白是血管活性胺結(jié)合蛋白。
8.一種根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中所述血管活性胺結(jié)合蛋白是(a)任何以小于10-7M的解離常數(shù)特異性結(jié)合于組胺、并和國際專利申請?zhí)朩O97/44451中公開的蛋白MS-HBP1、FS-HBP1及FS-HBP-2屬于同一蛋白質(zhì)家族的血管活性胺結(jié)合蛋白，其中如果所述蛋白質(zhì)初級(jí)的、成熟的單體序列不超過260個(gè)氨基酸并且在該蛋白質(zhì)全序列中的至少30，優(yōu)選至少40、50、60、70、80、90、100或更多個(gè)氨基酸被作為同一殘基保存在該蛋白質(zhì)及蛋白質(zhì)MS-HBP1、FS-HBP1和FS-HBP-2的排列中，那么就認(rèn)為該蛋白質(zhì)屬于這個(gè)蛋白質(zhì)家族，優(yōu)選該排列用ClustalW(Thompson等，1994，NAR，22(22)，4673-4680)獲得；(b)以小于10-7M的解離常數(shù)特異性結(jié)合于組胺，并且包含序列基元D/E A W K/R(優(yōu)選DAWK，更優(yōu)選QDAWK)及Y/C E/D L/I/F W(優(yōu)選Y/C ELW)的來自吸血節(jié)肢動(dòng)物的蛋白質(zhì)；(c)如在上文(a)或(b)中所定義的蛋白質(zhì)的天然生物變異體，例如等位基因變異體或地理上的變異體；(d)如在上文(a)、(b)或(c)中所定義的蛋白質(zhì)的功能等價(jià)物，其包含不影響對(duì)組胺結(jié)合的生物學(xué)功能的野生型蛋白質(zhì)序列中單個(gè)或多個(gè)氨基酸的取代、添加、插入和/或缺失，和/或化學(xué)修飾氨基酸的取代；(e)如在上文(a)、(b)、(c)或(d)中所定義的蛋白質(zhì)的活性片段，其中“活性片段”表示保留有對(duì)組胺結(jié)合的生物學(xué)功能的截短的蛋白質(zhì)；和(f)含有與肽或其它蛋白質(zhì)，或抗體融合的如在上文(a)、(b)、(c)、(d)或(e)中定義的蛋白質(zhì)的融合蛋白質(zhì)，所述蛋白質(zhì)，例如標(biāo)記物，可以是例如生物活性的、放射性的、酶的或熒光的。
9.一種根據(jù)權(quán)利要求7或權(quán)利要求8的方法，其中所述血管活性胺結(jié)合蛋白是EV131或其片段。
10.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的組胺結(jié)合化合物在制備治療由中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的疾病的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的疾病的新方法。該方法包括將組胺結(jié)合化合物以治療有效量給予患有這種疾病的患者。
文檔編號(hào)A61P37/08GK1795008SQ200480014569
公開日2006年6月28日 申請日期2004年4月1日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月1日
發(fā)明者W·維斯頓－達(dá)維斯 申請人:發(fā)展技術(shù)有限公司