專利名稱：Fsh和lh以及非離子表面活性劑的液體藥物制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及卵泡刺激素(FSH)藥物制劑、黃體生成激素(LH)制劑以及FSH和LH混合物的領(lǐng)域，本發(fā)明還涉及這些制劑的生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
卵泡刺激素(FSH)、黃體生成激素(LH)和絨毛膜促性腺激素(CG)都是可注射的蛋白質(zhì)，屬于促性腺激素類。FSH、LH和hCG可單獨(dú)使用或聯(lián)用，用于治療男女病人不孕癥及生殖障礙。
天然的FSH和LH由垂體腺產(chǎn)生。在藥學(xué)上使用的FSH和LH及其變體可通過重組技術(shù)生產(chǎn)(rFSH和rLH)，或者它們可從絕經(jīng)后婦女的尿液中生產(chǎn)(uFSH和uLH)。
輔助生殖技術(shù)(ART)中女病人使用FSH用于排卵誘導(dǎo)(OI)及控制性超排卵(COH)。排卵誘導(dǎo)的典型治療方案是給病人每日注射FSH或變體(約75至300 IU FSH/日)，持續(xù)約6至12天?？刂菩猿怕训牡湫椭委煼桨甘墙o病人每日注射FSH或變體(約150至600 IU FSH/日)，持續(xù)約6至12天。
FSH也用于精子過少的男病人，誘導(dǎo)精子發(fā)生。以每周給予3次150 IUFSH，結(jié)合每周給予2次2,500 IU hCG的方案在低促性腺素生功能減退癥男病人取得成功，其精子數(shù)量有明顯提高1。
使用LH并結(jié)合FSH用于女病人的OI和COH，特別是那些內(nèi)源性LH水平極低或者對LH有抗性的病人，譬如低促性腺素生功能減退癥婦女(HH，世界衛(wèi)生組織第I組)或者年紀(jì)大的病人(即35歲或以上)，以及不易胚胎著床或早期流產(chǎn)的病人?，F(xiàn)時(shí)已經(jīng)有了LH與FSH結(jié)合的制劑，稱人絕經(jīng)后促性腺激素(hMG)，提取自絕經(jīng)后婦女。hMG的FSH∶LH活性為1∶1。
CG與LH作用于同一個(gè)受體，引發(fā)同樣的應(yīng)答。CG的循環(huán)半衰期比LH長，因此通常用作長效LH活性源。CG用于OI和COH方案，模擬天然LH峰并引發(fā)排卵。用FSH或FSH與LH混合物刺激結(jié)束時(shí)，注射人絨毛膜促性腺激素(hCG)可以引發(fā)排卵。在OI和COH刺激期間也可一起使用CG與FSH，為需要LH活性的病人如上述的那些病人在刺激期間提供LH活性。
FSH、LH和CG都是異二聚體糖蛋白激素家族的成員，該家族還包括促甲狀腺激素(TSH)。此家族的成員都是異二聚體，包含α-和β-亞基。這些亞基通過非共價(jià)相互作用連在一起。人FSH(hFSH)二聚體由以下亞基組成(i)成熟的92個(gè)氨基酸糖蛋白α亞基，這也與其他人家族成員(即絨毛膜促性腺激素(″CG″)、黃體生成激素(″LH″)以及促甲狀腺激素(″TSH″)相同)；及(ii)成熟的111個(gè)氨基酸β亞基，此亞基是FSH獨(dú)有的2。人LH二聚體由以下亞基組成(i)成熟的92個(gè)氨基酸糖蛋白α亞基；及(ii)成熟的112個(gè)氨基酸β亞基，此亞基是LH獨(dú)有的3。糖蛋白的α和β亞基由于在制劑中與防腐劑、表面活性劑或其他賦形劑相互作用而傾向于離解。亞基的離解導(dǎo)致生物效力消失4。
FSH配制成適合肌內(nèi)(IM)或皮下(SC)注射。FSH以凍干(固體)形式放在小瓶或安瓿(75IU/小瓶和150IU/小瓶)中供給，若于2-25℃儲存可保存1.5年至2年。將凍干產(chǎn)物與注射水(WFI)重構(gòu)，可配成注射溶液。要排卵誘導(dǎo)或控制性超排卵，建議每日注射，起始劑量為75IU至600IU，持續(xù)最多約10天。根據(jù)病人的反應(yīng)，可增加FSH劑量進(jìn)行處理，不超過3個(gè)循環(huán)。使用凍干制劑時(shí)，病人需要用稀釋劑重構(gòu)一瓶新的凍干材料，并且要每日重構(gòu)，然后立即使用[皮下注射用的FertinexTM說明書單張N1700101A，Serono Laboratories，Inc.于1996年2月發(fā)表，Randolph，MA]。
FSH也可配成在小瓶或安瓿中的單劑或多劑液體形式。單劑形式在使用前的儲存期間必須保持穩(wěn)定和有效。多劑形式不僅要求在使用前的儲存期間必須保持穩(wěn)定和有效，而且當(dāng)安瓿密封開啟后，在多劑使用給藥方案期間亦必須保護(hù)穩(wěn)定、有效，相對地?zé)o菌。為此，多劑形式通常含有抑菌劑。
LH可配制成肌內(nèi)(IM)或皮下(SC)注射。LH以凍干(固體)形式放在小瓶或安瓿(75IU/小瓶)中供給，若于2-25℃儲存可保存1.5年至2年。將凍干產(chǎn)物與注射水(WFI)重構(gòu)，可配成注射溶液，用于。要排卵誘導(dǎo)或控制性超排卵，建議與FSH結(jié)合，每日注射LH，起始劑量為75IU至600IU，持續(xù)最多約10天。
EP 0 618 808(Applied Research Systems ARS Holding N.V.)公開了一種藥物組合物，它僅含有由促性腺激素和穩(wěn)定量的蔗糖形成的固體均質(zhì)混合物，或者再摻入甘氨酸。
EP 0 814 841(Applied Research Systems ARS Holding N.V.)公開了一種穩(wěn)定的液體藥物組合物，它含有重組人絨毛膜促性腺激素(hCG)和穩(wěn)定量的甘露醇。
EP 0 448 146(AKZO N.V.)公開了一種含促性腺激素的穩(wěn)定凍干物質(zhì)，它含有一份(重量)促性腺激素和200至10,000份(重量)與促性腺激素相關(guān)的二羧酸鹽穩(wěn)定劑。
EP 0 853 945(Akzo Nobel N.V.)公開了一種含促性腺激素的液體制劑，該制劑的特點(diǎn)在于，它含有促性腺激素和穩(wěn)定量的多羧酸或其鹽以及硫醚化合物。
WO 00/04913(Eli Lilly and Co.)公開了一種制劑，它的FSH或FSH變體含有α-和β-亞基，而它的防腐劑選自以下物質(zhì)的水稀釋液苯酚、間甲酚、對甲酚、鄰甲酚、氯化甲酚、苯甲醇、對羥基苯甲酸烷基酯類(如甲酯、乙酯、丙酯、丁酯等等)、苯扎氯銨、芐索氯銨、脫氫醋酸鈉和硫柳汞或其混合物。
目前人們?nèi)匀恍枰€(wěn)定的FSH或FSH變體以及FSH和LH混合物的液體制劑，用于單劑或多劑給藥。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供新穎的FSH或FSH變體、LH或LH變體的凍干和液體制劑，還提供它們的制備方法以及它們治療不孕癥的藥物或獸醫(yī)上的使用方法。
本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供新穎的FSH與LH混合物的凍干和液體制劑，還提供它們的制備方法以及它們治療不孕癥的藥物或獸醫(yī)上的使用方法。
本發(fā)明的第一方面提供一種凍干和液體藥物組合物，該組合物含有FSH或其變體和表面活性劑，所述表面活性劑選自環(huán)氧乙烷-環(huán)氧丙烷嵌段聚合物，優(yōu)選PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68。
本發(fā)明的第二方面提供一種制備液體藥物組合物的方法，該方法包括形成FSH或其變體和表面活性劑的溶液，所述表面活性劑選自環(huán)氧乙烷-環(huán)氧丙烷嵌段聚合物，優(yōu)選PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88、Pluronic F68和WFI。
本發(fā)明的第三方面提供一種制備包裝藥物組合物的方法，該方法包括將含有FSH和表面活性劑的溶液分配入一個(gè)容器內(nèi)，所述表面活性劑選自環(huán)氧乙烷-環(huán)氧丙烷嵌段聚合物，優(yōu)選PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68。
本發(fā)明的第四方面提供一種供人藥學(xué)上使用的制品，該制品包括一個(gè)含F(xiàn)SH或其變體和表面活性的溶液的小瓶，所述表面活性劑選自環(huán)氧乙烷-環(huán)氧丙烷嵌段聚合物，優(yōu)選PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和PluronicF68；以及說明此溶液可在首次使用后保存約24小時(shí)或以上的書面說明書。
本發(fā)明的第五方面提供一種凍干和液體藥物組合物，該組合物含有FSH和LH以及表面活性劑，所述表面活性劑選自環(huán)氧乙烷-環(huán)氧丙烷嵌段聚合物，優(yōu)選PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68。
本發(fā)明的第六方面提供一種制備凍干和液體藥物組合物的方法，該方法包括形成FSH、LH和表面活性劑的溶液，所述表面活性劑選自環(huán)氧乙烷-環(huán)氧丙烷嵌段聚合物，優(yōu)選PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和PluronicF68。
本發(fā)明的第七方面提供一種制備包裝藥物組合物的方法，該方法包括將含有FSH、LH和表面活性劑的溶液分配入一個(gè)容器內(nèi)，所述表面活性劑選自環(huán)氧乙烷-環(huán)氧丙烷嵌段聚合物，優(yōu)選PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68。
本發(fā)明的第八方面提供一種供人藥學(xué)上使用的制品，該制品包括一個(gè)含F(xiàn)SH、LH和表面活性劑的溶液的小瓶，所述表面活性劑選自環(huán)氧乙烷-環(huán)氧丙烷嵌段聚合物，優(yōu)選PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和PluronicF68；以及說明此溶液可在首次使用后保存約24小時(shí)或以上的書面說明書。
本發(fā)明的第九方面提供一種供人藥學(xué)上使用的制品，該制品包括含有凍干FSH或FSH變體和表面活性劑的第一容器，所述表面活性劑選自環(huán)氧乙烷-環(huán)氧丙烷嵌段聚合物，優(yōu)選PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68；以及第二容器，含有用于重構(gòu)的溶劑，優(yōu)選含抑菌劑的水溶液，抑菌劑最好是間甲酚。
本發(fā)明的第十方面提供一種供人藥學(xué)上使用的制品，該制品包括含有凍干LH或LH變體和表面活性劑的第一容器，所述表面活性劑選自環(huán)氧乙烷-環(huán)氧丙烷嵌段聚合物，優(yōu)選PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68；以及第二容器，含有用于重構(gòu)的溶劑，優(yōu)選含抑菌劑的水溶液，抑菌劑最好是間甲酚。
本發(fā)明的第十一方面提供一種供人藥學(xué)上使用的制品，該制品包括含有凍干FSH和LH或者FSH或LH變體以及表面活性劑的第一容器，所述表面活性劑選自環(huán)氧乙烷-環(huán)氧丙烷嵌段聚合物，優(yōu)選PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68；以及第二容器，含有用于重構(gòu)的溶劑，優(yōu)選含間甲酚的水溶液。


圖1所示為含有Pluronic F68、10μg/ml甲硫氨酸(“甲硫氨酸10mcg/ml”)和100μg/ml甲硫氨酸(“甲硫氨酸100mcg/ml”)的FSH制劑與不含甲硫氨酸(“無甲硫氨酸”)的制劑在0時(shí)間、1周和2周時(shí)的氧化α-亞基百分率。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的液體和凍干FSH或FSH和LH制劑具有改進(jìn)的或更適合的性能或穩(wěn)定性，用于男女不孕癥治療中。這些制劑和制品還適用于注射和可替換的傳送系統(tǒng)，例如但不限于鼻、肺、跨粘膜、經(jīng)皮、口服、皮下、肌內(nèi)或腸胃外緩釋傳送系統(tǒng)。在一特別優(yōu)選的實(shí)施例中，本發(fā)明的制劑用于皮下和/或肌內(nèi)注射。由于阻止或減少了活性或穩(wěn)定性的喪失，或者由于改善了給藥效率或需要性(例如至少改善了使用模式、頻率、劑量、舒適度、方便、體內(nèi)外生物活性等等其中一項(xiàng))，所以本發(fā)明所提供的FSH或FSH和LH變體溶液及制劑與已知的市售產(chǎn)品相比，在體內(nèi)發(fā)生效力的時(shí)間得到了延長。
本文使用的卵泡刺激素或FSH指的是作為全長成熟蛋白質(zhì)獲得的FSH，包括但不限于重組生產(chǎn)或自人來源(例如絕經(jīng)期婦女尿液)分離得到的人FSH或″hFSH″。人糖蛋白α亞基的蛋白質(zhì)序列如SEQ ID NO1所示，人FSHβ亞基的蛋白質(zhì)序列如SEQ ID NO2所示。
術(shù)語“FSH變體”指的是包括氨基酸序列、糖基化模式或者亞基間連接與人FSH不同但表現(xiàn)出FSH活性的那些分子。例如CTP-FSH，它是一個(gè)長效改性的重組FSH，由野生型α-亞基和雜交型β-亞基組成，其中hCG的羧基末端肽與FSH的β-亞基C末端融合，見LaPolt等(Endocrinology；1992，131，2514-2520)或Klein等(Development and characterization of a long-actingrecombinant hFSH agonist；Human Reprod.2003，18，50-56)的描述。還包括單鏈CTP-FSH，它是一個(gè)單鏈分子，由以下序列(從N末端至C末端)組成

其中，βFSH代表FSH的β-亞基，βhCG CTP(113-145)代表hCG的羧基末端肽，αFSH代表FSH的α-亞基，描述見Klein等5。其他FSH變體包括α-和/或β-亞基上含有附加糖基化位點(diǎn)的FSH分子，參見WO 01/58493(Maxygen)，特別是WO 01/58493的權(quán)利要求10和11所述的那些；以及具有亞基間S-S鍵的FSH分子，參見WO 98/58957。
本文所用的FSH變體還包括β-亞基的羧基末端缺失，它們比SEQ ID NO2所示的全長成熟蛋白質(zhì)短。人β-亞基的羧基末端缺失如SEQ ID NO3、4和5所示。應(yīng)當(dāng)理解，β鏈的羧基末端變體與已知的α-亞基形成二聚體，從而形成FSH變體異二聚體。
FSH異二聚體或FSH變體異二聚體都可通過適當(dāng)?shù)姆椒ㄉa(chǎn)，例如重組技術(shù)、從天然來源分離或純化得到，或通過化學(xué)合成，或其任意組合。
術(shù)語“重組”的使用是指采用重組DNA技術(shù)(例如參見WO 85/01958)生產(chǎn)的FSH、LH或FSH和LH變體。已經(jīng)知道一些物種α和β亞基的FSH基因組或cDNA克隆的序列6。例如，一種利用重組技術(shù)表達(dá)FSH或LH的方法是通過編碼FSH或LH的α和β亞基的DNA序列轉(zhuǎn)染真核生物細(xì)胞，而不管把具有單個(gè)啟動子的每個(gè)亞基裝在一個(gè)載體還是兩個(gè)載體上，描述見歐洲專利申請?zhí)朎P 0 211 894和EP 0 487 512。另一個(gè)利用重組技術(shù)生產(chǎn)FSH或LH的例子是用同源重組插入異源調(diào)節(jié)片段，該片段與編碼FSH或LH的亞基的內(nèi)源序列操作性相連，描述見歐洲專利申請?zhí)朎P 0 505 500(Applied ResearchSystems ARS Holding NV)。
本發(fā)明使用的FSH或FSH變體不僅可通過包括對哺乳動物細(xì)胞實(shí)施的重組方法生產(chǎn)，而且可通過其他生物來源例如尿液純化得到?？山邮艿姆椒òㄒ韵挛墨I(xiàn)描述的那些Hakola，K.Molecular and Cellular Endocrinology，12759-69，1997；Keene等，J.Biol.Chem.，2644769-4775，1989；Cerpa-Poljak等，Endocrinology，132351-356，1993；Dias等，J.Biol.Chem.，26925289-25294，1994；Flack等，J.Biol.Chem.，26914015-14020，1994；Valove等，Endocrinology，1352657-2661，1994，以及美國專利3,119,740和5,767,067。
本文使用的黃體生成激素或LH指的是作為全長成熟蛋白質(zhì)獲得的LH，包括但不限于重組生產(chǎn)或自人來源(例如絕經(jīng)期婦女尿液)分離得到的人LH或″hLH″。人糖蛋白α亞基的蛋白質(zhì)序列如SEQ ID NO1所示，人LHβ亞基7的蛋白質(zhì)序列如SEQ ID NO6所示。在一優(yōu)選實(shí)施例中LH是重組的。
術(shù)語“LH變體”指的是包括氨基酸序列、糖基化模式或者亞基間連接與人LH不同但表現(xiàn)出LH活性的那些分子。
LH異二聚體或LH變體異二聚體都可通過適當(dāng)?shù)姆椒ㄉa(chǎn)，例如重組技術(shù)、從天然來源分離或純化得到，或通過化學(xué)合成，或其任意組合。
術(shù)語“給藥”或“給予”指的是把本發(fā)明的制劑送入需要治療疾病或病癥的病人體內(nèi)。
術(shù)語“病人”指的是接受疾病或病癥治療的哺乳動物。沒有任何限制，病人可以是人、綿羊、豬、馬、牛、兔等等。
與FSH活性有關(guān)的術(shù)語“效力或功效”指的是FSH制劑或混合制劑引發(fā)FSH相關(guān)性生物反應(yīng)的能力，例如用Steelman-Pohley分析法8測得卵巢增加的重量或者女病人的卵泡生長。女病人的卵泡生長情況可通過超聲波進(jìn)行評價(jià)，例如刺激第8日平均直徑約16mm的卵泡數(shù)。相對于可接受的FSH標(biāo)準(zhǔn)來評價(jià)FSH的生物活性。
與LH活性有關(guān)的術(shù)語“效力或功效”指的是LH制劑或混合制劑引發(fā)LH相關(guān)性生物反應(yīng)的能力，例如精囊增重法9。相對于可接受的LH標(biāo)準(zhǔn)來評價(jià)LH的生物活性。
術(shù)語“水性稀釋劑”指的是含有水的液體溶劑。水性溶劑系統(tǒng)可以僅由水組成，也可以由水和一或多種易混合的溶劑組成，并且可以含有可溶解的溶質(zhì)如糖、緩沖液、鹽或其他賦形劑。較常用的非水溶劑是諸如甲醇、乙醇、丙醇等短鏈有機(jī)醇，諸如丙酮等短鏈酮，諸如甘油等多元醇。
術(shù)語“等滲劑”指的是生理耐受的并帶給制劑適當(dāng)?shù)膹埗纫宰柚顾畠袅鬟^與制劑接觸的細(xì)胞膜的化合物。通常用甘油等化合物用作等滲劑(濃度已知)。其他合適的等滲劑包括但不限于氨基酸或蛋白質(zhì)(例如甘氨酸或白蛋白)、鹽(例如氯化鈉)以及糖(例如葡萄糖、蔗糖和乳糖)。
術(shù)語“抑菌的”或“抑菌劑”指的是在制劑中加入作為抗菌劑的化合物或組合物。本發(fā)明含F(xiàn)SH或FSH變體或者FSH和LH的儲存制劑最好符合關(guān)于商業(yè)實(shí)施的多用途產(chǎn)品特別是供人用的產(chǎn)品之防腐有效性的法定或規(guī)定指引。例如，抑菌劑包括苯酚、間甲酚、對甲酚、鄰甲酚、氯化甲酚、苯甲醇、對羥基苯甲酸烷基酯類(如甲酯、乙酯、丙酯、丁酯等等)、苯扎氯銨、芐索氯銨、脫氫醋酸鈉和硫柳汞。
術(shù)語“緩沖液”或“生理上可接受的緩沖液”指的是已知對制劑在藥學(xué)或獸醫(yī)上的應(yīng)用是安全的以及具有維持或控制制劑的pH值在該制劑的理想pH值范圍內(nèi)的作用的化合物溶液?？刂苝H值在中等酸性pH值至中等堿性pH值的可接受緩沖液包括但不限于以下化合物磷酸鹽、醋酸鹽、檸檬酸鹽、精氨酸、TRIS和組氨酸?！錞RIS″指的是2-氨基-2-羥甲基-1，3-丙二醇及其藥物上可接受的鹽。優(yōu)選的緩沖液是磷酸緩沖液生理鹽水及其可接受的鹽。
術(shù)語“磷酸緩沖液”指的是含有磷酸或磷酸鹽并被調(diào)至理想pH值的溶液。一般地，磷酸緩沖液是從磷酸或磷酸鹽(包括但不限于磷酸鈉和磷酸鉀)制備的。本領(lǐng)域已經(jīng)知道一些磷酸鹽，例如磷酸二氫鈉和磷酸二氫鉀、磷酸一氫鈉和磷酸一氫鉀以及磷酸鈉和磷酸鉀。已經(jīng)知道磷酸鹽是以鹽的水合物存在的。磷酸緩沖液的pH值范圍很寬，例如約pH4至約pH10的范圍，較好是約pH5至約pH9的范圍，更好是約pH6至約pH8的范圍，最好是約pH7.0。
術(shù)語“小瓶”泛指適合以密封無菌狀態(tài)保存固體或液體形式FSH的貯存器。例如，此處使用的小瓶包括安瓿、注射筒、泡沫包裝或其他適合通過注射器、泵送(包括等滲)、導(dǎo)管、透皮貼片、肺或跨粘膜噴射等方式將FSH送到病人體內(nèi)的貯存器。適合腸胃外、肺、跨粘膜和透皮給藥包裝產(chǎn)品用的小瓶已為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知和確認(rèn)。
術(shù)語“穩(wěn)定性”指的是本發(fā)明制劑中FSH和LH的物理、化學(xué)和構(gòu)象穩(wěn)定性(包括生物效力的維持)。蛋白質(zhì)分子的化學(xué)降解或聚集形成更高數(shù)量級的聚合物、異二聚體離解成單聚體、脫糖基化、糖基化修飾、氧化(特別是α-亞基氧化)或任何減少本發(fā)明所包括的FSH多肽的至少一種生物活性的其他結(jié)構(gòu)修飾，都能導(dǎo)致蛋白質(zhì)制劑不穩(wěn)定。
術(shù)語“穩(wěn)定的”溶液或制劑是指這樣的溶液或制劑其中的蛋白質(zhì)降解、修飾、聚集、生物活性喪失等方面的程度是可接受地控制，而且不會隨著時(shí)間而變得不可接受的增加。較佳地，制劑在約2-8℃溫度下，較好約4-5℃溫度下在6個(gè)月時(shí)間內(nèi)保留至少約80％標(biāo)記的FSH活性和至少約80％標(biāo)記的LH活性。FSH活性可通過Steelman-Pohley卵巢增重生物分析法測定5。LH活性可通過精囊增重生物分析法測定10。
術(shù)語“治療”指的是病人的給藥、追蹤、處理和/或護(hù)理，其中該病人被給予FSH和/或LH目的是刺激卵泡或睪丸或者任何FSH和/或LH調(diào)節(jié)的生理反應(yīng)。因此，治療可包括但不限于給予FSH和/或LH以誘導(dǎo)或提高精子質(zhì)量、刺激男人釋放睪丸激素、或者刺激婦女卵泡發(fā)育或誘導(dǎo)排卵。
術(shù)語“多劑量使用”包括單個(gè)小瓶、安瓿或注射筒的FSH制劑或FSH和LH制劑的使用超過一次，例如注射2、3、4、5、6次或以上。較佳地，在至少約12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)等時(shí)間內(nèi)，最多在約12天的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行注射。也可按時(shí)間間隔來進(jìn)行注射，例如隔6、12、24、48或72小時(shí)注射。
蛋白質(zhì)的“鹽”是酸或堿加成鹽。這些鹽最好在蛋白質(zhì)的任一個(gè)或多個(gè)帶電基團(tuán)與生理上可接受的無毒性陽離子或陰離子之間形成。例如，有機(jī)鹽和無機(jī)鹽包括由鹽酸、硫酸、磺酸、酒石酸、富馬酸、氫溴酸、乙醇酸、檸檬酸、馬來酸、磷酸、琥珀酸、乙酸、硝酸、苯甲酸、抗壞血酸、對甲苯磺酸、苯磺酸、萘磺酸、丙酸、碳酸等酸，或者由銨、鈉、鉀、鈣或鎂等制備的鹽。
本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，把FSH與FSH和LH的混合物以及表面活性劑混合配制，所述表面活性劑選自環(huán)氧乙烷-環(huán)氧丙烷嵌段聚合物，優(yōu)選PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88，特別優(yōu)選Pluronic F68(BASF，Pluronic F68也稱Poloxamer 188)，它們可以獲得穩(wěn)定的制劑，能使小瓶和/或傳送裝置(例如注射器、泵、導(dǎo)管等)表面吸收引起的有效成分(FSH或FSH和LH)喪失減至最小。
本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)，把FSH與FSH和LH的混合物以及表面活性劑混合配制，所述表面活性劑選自環(huán)氧乙烷-環(huán)氧丙烷嵌段聚合物，優(yōu)選PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88，特別優(yōu)選Pluronic F68(BASF，Pluronic F68也稱Poloxamer 188)，它們可以獲得穩(wěn)定的制劑，由于有了間甲酚和苯酚等抑菌劑而避免了沉淀問題。當(dāng)TWEEN 20與間甲酚或苯酚一起使用時(shí)發(fā)生沉淀，形成混濁或乳狀溶液。
普流尼克(Pluronic)表面活性劑是環(huán)氧乙烷(EO)-環(huán)氧丙烷(PO)嵌段聚合物。環(huán)氧丙烷(PO)嵌在兩個(gè)環(huán)氧乙烷(EO)段之間，呈夾心狀。


Pluronic表面活性劑可通過兩步法合成1.在丙二醇中的兩個(gè)羥基中以控制方式加入環(huán)氧丙烷，產(chǎn)生具有所希望分子量的疏水物；以及2.加入環(huán)氧乙烷，使所述疏水物夾在兩個(gè)親水基團(tuán)之間。
PluronicF77的聚氧乙烯(親水)百分率是70％，疏水物(聚氧丙烯)分子量約為2,306Da。
PluronicF87的聚氧乙烯(親水)百分率是70％，疏水物(聚氧丙烯)分子量約為2,644Da。
PluronicF88的聚氧乙烯(親水)百分率是80％，疏水物(聚氧丙烯)分子量約為2,644Da。
PluronicF68的聚氧乙烯(親水)百分率是80％，疏水物(聚氧丙烯)分子量約為1,967Da。
Pluronic F77的典型性能如下平均分子量6600；熔/傾點(diǎn)48℃；20℃物理形式固體；粘度(Brookfield)cps480[液體25℃，膏狀60℃，固體77℃]；25℃表面張力，dynes/cm；
0.1％濃度47.00.01％濃度49.30.001％濃度52.825℃界面張力，dynes/cm(相對于Nujol)；0.1％濃度17.70.01％濃度20.80.01％濃度25.525℃德拉夫斯?jié)櫇駮r(shí)間(秒)1.0％濃度＞3600.1％濃度＞360泡沫高度Ross Miles法，0.1％，mm50℃100Ross Miles法，0.1％，mm26℃47動態(tài)，0.1％，mm，400ml/min＞600水溶液中的濁點(diǎn)，℃1％濃度＞10010％濃度＞100HLB(親水親油平衡)25Pluronic F87的典型性能如下平均分子量7700；熔/傾點(diǎn)49℃；20℃物理形式固體；粘度(Brookfield)cps700[液體25℃，膏狀60℃，固體77℃]；25℃表面張力，dynes/cm；0.1％濃度44.00.01％濃度47.00.001％濃度50.225℃界面張力，dynes/cm(相對于Nujol)；0.1％濃度17.4
0.01％濃度20.30.01％濃度23.325℃德拉夫斯?jié)櫇駮r(shí)間(秒)1.0％濃度＞3600.1％濃度＞360泡沫高度Ross Miles法，0.1％，mm50℃80Ross Miles法，0.1％，mm26℃37動態(tài)，0.1％，mm，400ml/min＞600水溶液中的濁點(diǎn)，℃1％濃度＞10010％濃度＞100HLB(親水親油平衡)24Pluronic F88的典型性能如下平均分子量11400；熔/傾點(diǎn)54℃；20℃物理形式固體；粘度(Brookfield)cps23.0[液體25℃，膏狀60℃，固體77℃]；25℃表面張力，dynes/cm；0.1％濃度48.50.01％濃度52.60.001％濃度55.725℃界面張力，dynes/cm(相對于Nujol)；0.1％濃度20.50.01％濃度23.30.01％濃度27.025℃德拉夫斯?jié)櫇駮r(shí)間(秒)1.0％濃度＞3600.1％濃度＞360
泡沫高度Ross Miles法，0.1％，mm50℃80Ross Miles法，0.1％，mm26℃37動態(tài)，0.1％，mm，400ml/min＞600水溶液中的濁點(diǎn)，℃1％濃度＞10010％濃度＞100HLB(親水親油平衡)28Pluronic F68的典型性能如下平均分子量8400；熔/傾點(diǎn)52℃；20℃物理形式固體；粘度(Brookfield)cps1000[液體25℃，膏狀60℃，固體77℃]；25℃表面張力，dynes/cm；0.1％濃度50.30.01％濃度51.20.001％濃度53.625℃界面張力，dynes/cm(相對于Nujol)；0.1％濃度19.80.01％濃度24.00.01％濃度26.025℃德拉夫斯?jié)櫇駮r(shí)間(秒)1.0％濃度＞3600.1％濃度＞360泡沫高度Ross Miles法，0.1％，mm50℃35Ross Miles法，0.1％，mm26℃40動態(tài)，0.1％，mm，400ml/min＞600水溶液中的濁點(diǎn)，℃
1％濃度＞10010％濃度＞100HLB(親水親油平衡)29本發(fā)明制劑也可使用具有與上面列出的那些性能相似的其他聚合物。優(yōu)選的表面活性劑是Pluronic F68以及具有相似性能的表面活性劑。
制劑所含Pluronic表面活性劑，特別是Pluronic F68，的濃度最好要足以在所希望的儲存期內(nèi)(例如6至12或至24個(gè)月)維持FSH和/或LH穩(wěn)定性，這一濃度也要足以防止諸如小瓶、針筒或注射筒表面吸收導(dǎo)致蛋白質(zhì)喪失。
較佳地，液體制劑中Pluronic表面活性劑，特別是Pluronic F68，的濃度在約0.01mg/ml至約1mg/ml范圍內(nèi)，較好在約0.05mg/ml至約0.5mg/ml范圍內(nèi)，更好在約0.2mg/ml至約0.4mg/ml范圍內(nèi)，最好約0.1mg/ml。
凍干制劑內(nèi)卵泡刺激素(FSH)的濃度(w/w)最好為每毫克制劑總量約0.1至10微克。在一實(shí)施例中，卵泡刺激素(FSH)的濃度為每毫克制劑總量約0.3至5微克。在另一實(shí)施例中，卵泡刺激素(FSH)的濃度為每毫克制劑總量約0.37至2微克。
凍干制劑內(nèi)黃體生成激素(LH)的濃度(w/w)最好為每毫克制劑總量約0.1至3微克。在一實(shí)施例中，黃體生成激素(LH)的濃度為每毫克制劑總量約0.1至1微克。在另一實(shí)施例中，黃體生成激素(LH)的濃度為每毫克制劑總量約0.1至0.6微克。
在含有FSH的液體制劑中，包括重構(gòu)制劑在內(nèi)，所述制劑的FSH濃度優(yōu)選在約150IU/ml至約2,000IU/ml范圍內(nèi)，更好在約300IU/ml至約1,500IU/ml范圍內(nèi)，特別好是在約450IU/ml至約750IU/ml范圍內(nèi)，最好約600IU/ml。
在含有LH的液體制劑中，包括重構(gòu)制劑在內(nèi)，所述制劑的LH濃度優(yōu)選在約50IU/ml至約2,000IU/ml范圍內(nèi)，更好在約150IU/ml至約1,500IU/ml范圍內(nèi)，特別好是在約300IU/ml至約750IU/ml范圍內(nèi)，最好約625IU/ml。
在含有FSH和LH的制劑中，F(xiàn)SH與LH之比率(FSH∶LH，IU∶IU，F(xiàn)SH以大鼠卵巢增重分析法測得，LH以大鼠精囊增重分析法測得)優(yōu)選在約6∶1至約1∶6范圍內(nèi)，更好在約4∶1至約1∶2范圍內(nèi)，特別好是在約3∶1至約1∶1范圍內(nèi)，最好1∶1和2∶1。
凍干制劑內(nèi)表面活性劑(如Pluronic F68)的濃度最好是每毫克制劑總量約0.001至0.1毫克，更好是每毫克制劑總量約0.01至0.075毫克。
較佳地，重構(gòu)制劑的Pluronic表面活性劑，特別是Pluronic F68的濃度在約0.01mg/ml至約1mg/ml范圍內(nèi)，更好在約0.05mg/ml至約0.5mg/ml范圍內(nèi)，特別好是在約0.2mg/ml至約0.4mg/ml范圍內(nèi)，最好約0.1mg/ml。
FSH和LH最好通過重組技術(shù)生產(chǎn)，特別是用含有編碼FSH或LH的人糖蛋白α-亞基和β-亞基的DNA的一或多個(gè)載體轉(zhuǎn)染中國倉鼠卵巢細(xì)胞，再用此細(xì)胞生產(chǎn)FSH和LH。編碼α-和β-亞基的DNA可存在于相同或不同載體上。
重組FSH和LH相對于它們的尿?qū)?yīng)物有一些優(yōu)點(diǎn)。使用重組細(xì)胞的培養(yǎng)和分離技術(shù)可以保持批量生產(chǎn)的一致性。相反，不同批量生產(chǎn)之間尿FSH和LH的特性(如純度、糖基化模式、唾液酸化和亞基氧化)相差很大。由于重組FSH和LH批量之間能保持較高一致性和純度，所以采用諸如同位素電子聚焦(isoelectric focussing，IEF)等技術(shù)很容易對這些激素進(jìn)行鑒定和定量分析。重組FSH和LH的鑒定和定量分析容易，也可以實(shí)現(xiàn)往小瓶灌充大量激素(fill-by-mass)而不是通過生物試驗(yàn)進(jìn)行灌充。
較佳地，本發(fā)明FSH制劑的pH在約6.0至約8.0范圍內(nèi)，更好在約6.8至約7.8范圍內(nèi)，包括約pH7.0、pH7.2和7.4。優(yōu)選緩沖液是磷酸緩沖液，優(yōu)選平衡離子是鈉或鉀離子。磷酸鹽水緩沖液已為本領(lǐng)域所公知，例如Dulbecco′s磷酸鹽水緩沖液?？?cè)芤褐芯彌_液的濃度可以是約5mM、9.5mM、10mM、50mM、100mM、150mM、200mM、250mM和500mM。較佳地，緩沖液濃度約10mM。特別優(yōu)選的情況是10mM pH7.0磷酸緩沖液。
較佳地，本發(fā)明FSH和LH混合物制劑的pH在約6.0至約9.0范圍內(nèi)，更好在約6.8至約8.5范圍內(nèi)，包括約pH7.0、pH8.0和8.2，最好約pH8.0。
本發(fā)明涉及液體制劑以及可以重構(gòu)的凍干制劑，其中(重構(gòu)的)溶劑是注射水。液體制劑可以是單劑或多劑。本發(fā)明用于多劑目的的液體以及凍干FSH和/或LH制劑最好含有一種抑菌劑，例如苯酚、間甲酚、對甲酚、鄰甲酚、氯化甲酚、苯甲醇、對羥基苯甲酸烷基酯類(如甲酯、乙酯、丙酯、丁酯等等)、百里酚、苯扎氯銨、芐索氯銨、脫氫醋酸鈉和硫柳汞。特別優(yōu)選的是苯酚、苯甲醇和間甲酚，更好是苯甲醇和間甲酚，最好是間甲酚。抑菌劑的用量是獲得的濃度能夠有效地維持制劑在多劑注射期間基本上沒有細(xì)菌(適合注射)，所述多劑注射期可以約12或24小時(shí)至約12或14天，較好約6天至12天。較佳地，抑菌劑的濃度在約0.1％(抑菌劑/溶劑，質(zhì)量/質(zhì)量)至約2.0％范圍內(nèi)，更好在約0.2％至約1.0％范圍內(nèi)。對于苯甲醇，它的優(yōu)選濃度為0.9％。對于苯酚，它的優(yōu)選濃度約0.5％。對于間甲酚，它的優(yōu)選濃度約0.3％(例如在WFI中約3mg/ml)。
在一優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種液體藥物組合物，它優(yōu)選作為多劑使用，含有FSH或其變體、表面活性劑和抑菌劑，其中表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68，抑菌劑選自間甲酚和苯酚，優(yōu)選間甲酚。
在另一優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種液體藥物組合物，它優(yōu)選作為多劑使用，含有LH、表面活性劑和抑菌劑，其中表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68，抑菌劑選自間甲酚和苯酚，優(yōu)選間甲酚。
在又一優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種液體藥物組合物，它優(yōu)選作為多劑使用，含有FSH和LH、表面活性劑以及抑菌劑，其中表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68，抑菌劑選自間甲酚和苯酚，優(yōu)選間甲酚。較佳地，F(xiàn)SH與LH之比率(FSH∶LH)約2∶1至約1∶1。
在又一優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備液體藥物組合物的方法，所述組合物優(yōu)選作為多劑使用，所述方法包括形成含有FSH或其變體、表面活性劑以及抑菌劑的水溶液，其中表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68，抑菌劑選自間甲酚和苯酚，優(yōu)選間甲酚，和WFI。
在又一優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備液體藥物組合物的方法，所述組合物優(yōu)選作為多劑使用，所述方法包括形成含有LH、表面活性劑以及抑菌劑的水溶液，其中表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68，抑菌劑選自間甲酚和苯酚，優(yōu)選間甲酚和WFI。
在又一優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備液體藥物組合物的方法，所述組合物優(yōu)選作為多劑使用，所述方法包括形成含有FSH和LH、表面活性劑以及抑菌劑的水溶液，其中表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68，抑菌劑選自間甲酚和苯酚，優(yōu)選間甲酚和WFI。
在再一優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備包裝藥物組合物的方法，所述方法包括分配含有FSH、表面活性劑以及抑菌劑的溶液，其中表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68，抑菌劑選自間甲酚和苯酚，優(yōu)選間甲酚。
在再一優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備包裝藥物組合物的方法，所述方法包括分配含有FSH和LH、表面活性劑以及抑菌劑的溶液，其中表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68，抑菌劑選自間甲酚和苯酚，優(yōu)選間甲酚。
在再一優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種供人藥學(xué)上使用的制品，該制品包括一個(gè)含有FSH或FSH變體、表面活性劑和抑菌劑的溶液的小瓶，其中表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68，抑菌劑選自間甲酚和苯酚，優(yōu)選間甲酚；以及說明此溶液可在首次使用后保存約24小時(shí)或以上的書面說明書。較佳地，書面說明書說明此溶液可在首次使用后保存約最多12或14天。
在再一優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種供人藥學(xué)上使用的制品，該制品包括一個(gè)含有FSH和LH以及表面活性劑和抑菌劑的溶液的小瓶，其中表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68，抑菌劑選自間甲酚和苯酚，優(yōu)選間甲酚；以及說明此溶液可在首次使用后保存約24小時(shí)或以上的書面說明書。較佳地，書面說明書說明此溶液可在首次使用后保存約最多12或14天。
在一特別優(yōu)選實(shí)施例中，制劑含有間甲酚和Pluronic F68。本發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)含有Pluronic F68的制劑在間甲酚存在下不會產(chǎn)生沉淀，而使用其他表面活性劑則會看到沉淀現(xiàn)象。
首次使用前，即開啟小瓶、安瓿或注射筒密封之前，本發(fā)明的制劑可保存至少約6個(gè)月、12個(gè)月或24個(gè)月。在首次使用之前制劑的儲存要遠(yuǎn)離強(qiáng)光(最好于儲存于黑暗中)，儲存溫度約2-8℃，更好約4-5℃。
在一具體實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種重構(gòu)的凍干制劑，它優(yōu)選作為多劑使用，含有FSH或其變體以及表面活性劑，其中表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68，優(yōu)選Pluronic F68。
在另一具體實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種重構(gòu)的凍干制劑，它優(yōu)選作為多劑使用，含有LH和表面活性劑，其中表面活性劑選自PluronicF77、PluronicF87、Pluronic F88和Pluronic F68，優(yōu)選Pluronic F68。
在另一具體實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種重構(gòu)的凍干制劑，它優(yōu)選作為多劑使用，含有FSH和LH以及表面活性劑，其中表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68，優(yōu)選Pluronic F68。較佳地，F(xiàn)SH與LH之比率(FSH∶LH)約2∶1至約1∶1。
在又一具體實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備凍干制劑的方法，所述凍干制劑優(yōu)選在重構(gòu)后作為多劑使用，所述方法包括形成含有FSH或其變體以及表面活性劑的混合物，其中表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68；以及使所述混合物凍干。
在又一具體實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備凍干制劑的方法，所述凍干制劑優(yōu)選在重構(gòu)后作為多劑使用，所述方法包括形成含有LH和表面活性劑的混合物，其中表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68；以及使所述混合物凍干。
在又一具體實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備凍干制劑的方法，所述凍干制劑優(yōu)選在重構(gòu)后作為多劑使用，所述方法包括形成含有FSH和LH以及表面活性劑的混合物，其中表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、PluronicF88和Pluronic F68；以及使所述混合物凍干。
在再一優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備包裝藥物組合物的方法，所述方法包括把含有FSH和表面活性劑的凍干混合物分配入一個(gè)容器內(nèi)，其中表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68。
再一優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備包裝藥物組合物的方法，所述方法包括把含有LH和表面活性劑的凍干混合物分配入一個(gè)容器內(nèi)，其中表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68。
在再一優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備包裝藥物組合物的方法，所述方法包括把含有FSH和LH以及表面活性劑的凍干混合物分配入一個(gè)容器內(nèi)，其中表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和PluronicF68。
在再一優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種供人藥學(xué)上使用的制品，該制品包括一個(gè)含有凍干FSH或FSH變體以及表面活性劑的第一容器或小瓶，其中表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68。第二容器或小瓶含有重構(gòu)用的稀釋劑，優(yōu)選水和抑菌劑，所述抑菌劑選自間甲酚和苯酚，較佳為間甲酚。
在再一優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種供人藥學(xué)上使用的制品，該制品包括一個(gè)含有凍干LH或LH變體以及表面活性劑的第一容器或小瓶，其中表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68。第二容器或小瓶含有重構(gòu)用的稀釋劑，優(yōu)選水和抑菌劑，所述抑菌劑選自間甲酚和苯酚，較佳為間甲酚。
在再一優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種供人藥學(xué)上使用的制品，該制品包括一個(gè)含有凍干FSH或FSH變體和LH或LH變體以及表面活性劑的第一容器或小瓶，其中表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68。第二容器或小瓶含有重構(gòu)用的稀釋劑，優(yōu)選水和抑菌劑，所述抑菌劑選自間甲酚和苯酚，較佳為間甲酚。
在一特別優(yōu)選實(shí)施例中，用于重構(gòu)的溶劑含有間甲酚。本發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)含有Pluronic F68的凍干制劑當(dāng)用含間甲酚的稀釋劑進(jìn)行重構(gòu)時(shí)不會產(chǎn)生沉淀，而使用其他表面活性劑(如Tween)則會看到沉淀現(xiàn)象。
本發(fā)明的凍干制劑可保存至少約6個(gè)月、12個(gè)月或24個(gè)月。在首次使用之前制劑的儲存要遠(yuǎn)離強(qiáng)光(最好于儲存于黑暗中)，儲存溫度約25℃，優(yōu)選約2-8℃，更好約4-5℃。
液體或重構(gòu)多劑制劑首次使用后，它可以保存使用至少約24小時(shí)，優(yōu)選至少約4、5或6天，更好最多12或14天。制劑在首次使用后適宜儲存于室溫以下(例如約25℃以下)，較好儲存于10℃以下，更好儲存于2-8℃，最好儲存于5-0℃。
較佳地，本發(fā)明的制劑含有抗氧化劑，例如甲硫氨酸、亞硫酸氫鈉、乙二胺四乙酸(EDTA)鹽、丁基化羥基甲苯(BHT)以及丁基羥基茴香醚(BHA)。最好是甲硫氨酸?？寡趸瘎┓乐笷SH和LH(特別是α-亞基)發(fā)生氧化。
液體和/或重構(gòu)制劑的甲硫氨酸濃度在約0.01至約1.0mg/ml范圍內(nèi)，更好在約0.05至約0.5mg/ml范圍內(nèi)，最好約0.1mg/ml。
較佳地，本發(fā)明的制劑以糖醇作為穩(wěn)定劑和張度調(diào)節(jié)劑，例如蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇和/或甘油。最好是蔗糖，其優(yōu)選濃度約60mg/ml。
如上所述，本發(fā)明提供作為單劑和多劑使用的液體制劑，它或者含有抑菌劑或者重構(gòu)制劑時(shí)加入抑菌劑。本發(fā)明的制劑適合藥學(xué)或獸醫(yī)用。
如上所述，本發(fā)明的一優(yōu)選實(shí)施例提供一種制品，它含有包裝材料和小瓶，所述小瓶含有在水性稀釋劑中的FSH或FSH變體、LH、或FSH和LH、Pluronic F68以及抑菌劑，所述抑菌劑選自苯酚和間甲酚，任選地可添加緩沖液和/或其他賦形劑，其中所述包裝材料包括表明此溶液可在首次使用后保存約24小時(shí)或以上的書面說明書。本發(fā)明還包括一種制品，它含有包裝材料和小瓶，所述小瓶含有本發(fā)明的FSH或FSH變體制劑，其中所述包裝材料包括書面說明書，向病人說明用水性溶劑重構(gòu)FSH或FSH變體以形成可保存24小時(shí)或以上的溶液。
如上所述，本發(fā)明的一優(yōu)選實(shí)施例提供一種制品，它含有包裝材料和小瓶，所述小瓶含有凍干FSH或FSH變體、LH或LH變體、或者FSH和LH、Pluronic F68。第二容器內(nèi)的抑菌劑包括選自苯酚和間甲酚的稀釋劑，任選地可添加其他賦形劑，其中所述包裝材料包括表明此溶液可在首次使用后保存24小時(shí)或以上的書面說明書。
本發(fā)明制劑內(nèi)蛋白質(zhì)激素的范圍包括重構(gòu)后產(chǎn)生約1.0μg/ml至約50mg/ml濃度的數(shù)量，但是較低和較高濃度都是可行的，取決于打算送入的介質(zhì)，例如溶液制劑的蛋白質(zhì)激素含量根據(jù)透皮貼片、肺、跨粘膜或者滲透或微量泵送方法是不同的。蛋白質(zhì)激素濃度適宜在約5.0μg/ml至約2mg/ml范圍內(nèi)，更好約10.0μg/ml至約1mg/ml范圍內(nèi)，最好在約50μg/ml至約200μg/ml范圍內(nèi)。
本發(fā)明制劑內(nèi)蛋白質(zhì)激素的范圍包括重構(gòu)后產(chǎn)生約1.0μg/ml至約50mg/ml濃度的數(shù)量，但是較低和較高濃度都是可行的，取決于打算送入的介質(zhì)，例如溶液制劑的蛋白質(zhì)激素含量根據(jù)透皮貼片、肺、跨粘膜或者滲透或微量泵送方法是不同的。蛋白質(zhì)激素濃度適宜在約5.0μg/ml至約2mg/ml范圍內(nèi)，更好約10.0μg/ml至約1mg/ml范圍內(nèi)，最好在約50μg/ml至約200μg/ml范圍內(nèi)。
較佳地，本發(fā)明的制劑在24個(gè)月包裝期內(nèi)(首次使用前)保留至少約80％FSH活性和/或LH活性。FSH活性可通過Steelman-Pohley卵巢增重生物分析法測定5。LH活性可通過大鼠精囊增重生物分析法測定。
本發(fā)明的液體制劑可通過這樣的方法制備，所述方法包括使固體FSH或FSH變體、LH、或者FSH和LH合物、Pluronic F68以及選自苯酚和間甲酚的抑菌劑混合，或者在水性稀釋劑中溶解FSH或FSH變體、LH、或者FSH和LH混合物(“蛋白質(zhì)”)、Pluronic F68以及選自苯酚和間甲酚的抑菌劑。利用常規(guī)溶解和混合程序可進(jìn)行各組成成分的混合以及它們在水性稀釋劑中的溶解。為了制備適當(dāng)制劑，例如，將在緩沖液中的測定量的FSH或FSH變體、LH或者FSH和LH混合物與在緩沖液中的Pluronic F68和選自苯酚和間甲酚的抑菌劑組合，而Pluronic F68和抑菌劑的數(shù)量足夠提供所需濃度的蛋白質(zhì)、Pluronic F68和抑菌劑。然后，把得到的溶液分配入小瓶、安瓿、注射筒內(nèi)。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可對此方法作各種變化。例如，各組分的加入順序、是否需要使用附加添加劑、制備制劑的溫度和pH，所有這些因素都可以根據(jù)采用的給藥濃度和方式而最佳化。
在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明的液體制劑是這樣制成的制備該制劑全部組分(例如磷酸鈉緩沖液、蔗糖、TWEEN、甲硫氨酸、FSH和/或LH)已知濃度的各儲備液，以及將容積量等分以形成含有與最終制劑相同組分的“母液”。“母液”最好用Duropore(Millipore)0.22微米PDF濾膜過濾，以除去微生物，然后將各等分試樣分配進(jìn)入各個(gè)容器，例如小瓶、安瓿或注射筒。
本發(fā)明的凍干制劑是通過下列方法制成的該方法包括把FSH或FSH變體、LH或LH變體、或者FSH和LH混合物、Pluronic F68以及其他賦形劑如抗氧化劑和/或緩沖液混合，以及使所述混合物進(jìn)行凍干。使用常規(guī)技術(shù)混合各組分并凍干。例如，要制備合適的制劑，把測定量的FSH或FSH變體、LH或LH變體或者FSH和LH混合物與Pluronic F68混合，所得到的混合物被凍干，再分配入小瓶、安瓿或注射筒。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可對此方法作出各種變化。例如，各組分的加入順序、是否需要使用附加添加劑、制備制劑的溫度和pH，所有這些因素都可以根據(jù)采用的給藥濃度和方式而最佳化。
也可用公認(rèn)的裝置給予本發(fā)明的制劑。例如包括單瓶系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括傳送諸如EasyJect、Gonal-FPen、Humaject，NovoPen、B-DPen，AutoPen以及OptiPen等溶液的筆式注射器裝置。
本發(fā)明要求保護(hù)的產(chǎn)品包括包裝材料。該包括材料除了提供法定機(jī)構(gòu)所要求的信息外，還提供產(chǎn)品的使用條件。本發(fā)明的包裝材料為病人提供說明取兩瓶產(chǎn)品(濕/干)，然后把FSH或FSH變體加入到水性稀釋劑中配成溶液以及要在24小時(shí)或以上時(shí)間內(nèi)使用該溶液。對于單瓶溶液產(chǎn)品，它的標(biāo)簽表明此溶液可在首次使用后保存約24小時(shí)或以上，優(yōu)選不超過12或14天。本發(fā)明要求保護(hù)的產(chǎn)品可供人藥品應(yīng)用上使用。
提供給病人用的穩(wěn)定保存的制劑是澄清溶液。此溶液可單次使用也可多次再用，足夠病人治療一個(gè)或多個(gè)周期，因此比現(xiàn)有治療方案更方便。
此處所述的在穩(wěn)定或保存制劑或溶液中的FSH或FSH變體、LH、或者FSH和LH混合物可通過各種輸送方法，包括皮下或肌內(nèi)注射、經(jīng)皮、肺、跨粘膜、植入、滲透泵、注射筒、微量泵、口服、或其他本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方式給予本發(fā)明的病人。
以下提供的實(shí)施例僅作舉例說明本發(fā)明制劑和組分的制備。本發(fā)明的范圍不應(yīng)理解成限于這些實(shí)施例。
實(shí)施例1比較制劑材料


設(shè)備

以下實(shí)驗(yàn)評價(jià)了大量制劑的下列參數(shù)·表面活性劑與抑菌劑的相容性·α-亞基的氧化制劑是多劑量制劑，含有TWEEN 20或Pluronic F68和抑菌劑。評價(jià)下列抑菌劑·苯甲醇0.9％·間甲酚0.3％·苯酚0.5％TWEEN 20和Pluronic F68的濃度范圍如下·TWEEN 2010至100μg/g·Pluronic F6810至100μg/g下表1列出制備的溶液。


*制劑中加入FSH是基于FSH的生物效力而非蛋白質(zhì)含量。
對制劑進(jìn)行目測檢查，發(fā)現(xiàn)TWEEN20不能與間甲酚和苯酚一起用，這是因?yàn)楹蠺WEEN20和間甲酚或者含有TWEEN20和苯酚的FSH制劑呈現(xiàn)乳白色懸液。相反，含有Pluronic F68的FSH制劑與間甲酚和苯酚一起使用時(shí)不會產(chǎn)生這樣的問題，即Pluronic F68可以與苯酚和間甲酚一起使用。FSH和Pluronic F68以及抗氧化劑的組合評價(jià)下列抗氧化劑在Pluronic F68存在下抑制α-亞基氧化的能力·甲硫氨酸10至100μg/g·抗壞血酸10至100μg/g以蔗糖和甘露醇用作張度劑，加入100μg/g TWEEN 20或Pluronic表面活性劑。
表2列出制備的制劑。


在制劑中加入FSH是基于FSH的生物效力而非蛋白質(zhì)含量。
每種制劑取20g，制成Falcon聚丙烯試管，并經(jīng)3cm20.22μm Millex-GV注射器驅(qū)動的過濾器Durapore過濾，然后分析t＝0的數(shù)值。溶液儲存于40℃，
根據(jù)下列方案進(jìn)行測試

(X)表示進(jìn)行試驗(yàn)反相HPLC揭示，含有FSH、Pluronic F68、間甲酚和甲硫氨酸(濃度為10和100μg/ml)的制劑中，當(dāng)該制劑于40℃儲存時(shí)，其FSH的α-亞基氧化與不含甲硫氨酸的制劑相比大為減少，見圖1。根據(jù)兩個(gè)實(shí)驗(yàn)的平均值，不含甲硫氨基酸的制劑中氧化α-亞基百分率在T＝0時(shí)為2.3，第1周為4.0，第2周為7.1。含有10μg/ml甲硫氨基酸的制劑中氧化α-亞基百分率在T＝0時(shí)為2.0，第1周為3.2，第2周為3.8。含有100μg/ml甲硫氨基酸的制劑中氧化α-亞基百分率在T＝0時(shí)為1.8，第1周為1.7，第2周為1.3。
實(shí)施例2用于皮下或肌內(nèi)注射的重組FSH液體單劑制劑根據(jù)實(shí)施例1的結(jié)果，制備以下制劑。
表3列出的組分1至7是作為在WFI中的當(dāng)量標(biāo)準(zhǔn)溶液制成的。在混合容器中加入每種溶液的等分試樣，形成“母液”。將該母液分配入小瓶內(nèi)，含有10.9微克(150IU)或5.45微克(75IU)FSH。
因?yàn)槭褂昧酥亟MFSH，所以生物活性和特異性是一致的，這樣可以實(shí)現(xiàn)大量灌充FSH(fill-by-mass)而不是通過生物試驗(yàn)進(jìn)行灌充。

在無菌條件下灌充和密封小瓶。這些制劑在室溫下可保存最多2年。
實(shí)施例3用于皮下或肌內(nèi)注射的重組FSH液體多劑制劑根據(jù)實(shí)施例1的結(jié)果，制備以下多劑制劑。
表4列出的組分1至7是作為在WFI中的當(dāng)量標(biāo)準(zhǔn)溶液制成的。在混合容器中加入每種溶液的等分試樣，形成“母液”。將該母液分配入小瓶內(nèi)，含有22.2微克(305IU)、33.3微克(458IU)和66.7微克(916IU)FSH。得到的制劑輸送共300、450和900IU FSH。
在無菌條件下灌充和密封注射筒。這些多劑制劑可于約2-8℃更好在約4-5℃下保存，直至首次使用后保存最多2年。首次使用后，注射筒應(yīng)在約2-8℃更好在約4-5℃下保存，保存期可以是24小時(shí)、2天，或者最多12或14天。

實(shí)施例4用于皮下或肌內(nèi)注射的重組LH液體單劑制劑制備以下制劑。
表5列出的組分1至7是作為在WFI中的當(dāng)量標(biāo)準(zhǔn)溶液制成的。在混合容器中加入每種溶液的等分試樣，形成“母液”。將該母液分配入小瓶內(nèi)，含有3微克(75IU)LH。得到的制劑輸送單劑75IU LH。
因?yàn)槭褂昧酥亟MLH，所以生物活性和特異性是一致的，這樣可以實(shí)現(xiàn)大量灌充LH(fill-by-mass)而不是通過生物試驗(yàn)進(jìn)行灌充。


在無菌條件下灌充和密封小瓶。這些制劑在室溫下可保存最多2年。
實(shí)施例5用于皮下或肌內(nèi)注射的重組FSH和LH(2∶1)液體多劑制劑制備以下FSH和LH多劑制劑，其中FSH∶LH為2∶1。
表6列出的組分1至8是作為在WFI中的當(dāng)量標(biāo)準(zhǔn)溶液制成的。在混合容器中加入每種溶液的等分試樣，使它們混合形成“母液”。有需要的話，加入氫氧化鈉或鹽酸調(diào)母液的pH至8.0。將該母液分配入注射筒內(nèi)，含有18.3微克(457IU)LH和66.7微克(916IU)FSH，分6劑用，每劑含150IU FSH；9.2微克(230IU)LH和33.3微克(458IU)FSH，分3劑用，每劑含150IU FSH；6.1微克(152.5IU)LH和22.23微克(305IU)FSH，分2劑用，每劑含150IUFSH。
在無菌條件下灌充和密封注射筒。這些多劑制劑可于約2-8℃更好在約4-5℃下保存，直至首次使用后保存最多2年。首次使用后，注射筒應(yīng)在約2-8℃更好在約4-5℃下保存，保存期可以是24小時(shí)、2天，或者最多12或14天。


實(shí)施例6用于皮下或肌內(nèi)注射的重組FSH和LH(1∶1)液體多劑制劑制備以下FSH和LH多劑制劑，其中FSH∶LH為1∶1。
表7列出的組分1至8是作為在WFI中的當(dāng)量標(biāo)準(zhǔn)溶液制成的。在混合容器中加入每種溶液的等分試樣，使它們混合形成“母液”。有需要的話，加入氫氧化鈉或鹽酸調(diào)母液的pH至8.0。將該母液分配入注射筒內(nèi)，含有36.6微克(914IU)LH和66.7微克(916IU)FSH，分6劑用，每劑含150IU FSH；18.4微克(460IU)LH和33.3微克(458IU)FSH，分3劑用，每劑含150IU FSH；12.2微克(152.5IU)LH和22.23微克(305IU)FSH，分2劑用，每劑含150IUFSH。
在無菌條件下灌充和密封注射筒。這些多劑制劑可于約2-8℃更好在約4-5℃下保存，直至首次使用后保存最多2年。首次使用后，注射筒應(yīng)在約2-8℃更好在約4-5℃下保存，保存期可以是24小時(shí)、2天，或者最多12或14天。


實(shí)施例7FSH與LH混合物的液體多劑制劑的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)7.1.分析蛋白質(zhì)含量的反相HPLC利用反相HPLC方法評價(jià)實(shí)施例5(6劑)的制劑中蛋白質(zhì)含量。
把該制劑保存于4℃，在時(shí)間0點(diǎn)、保存1、2、3和6個(gè)月后測定它的蛋白質(zhì)含量(FSH和LH)。結(jié)果列于表8中，以每克溶劑微克FSH或LH表示。
7.2.氧化α-亞基分析利用反相HPLC(RP-HPLC)方法測定實(shí)施例5的制劑中氧化α-亞基百分率。
把該制劑保存于4℃，在時(shí)間0點(diǎn)、保存1、2、3和6個(gè)月后測定它的氧化α-亞基百分率。結(jié)果列于表8中。
7.3.FSH的體內(nèi)分析利用Steelman-Pohley卵巢增重生物分析法，在時(shí)間0點(diǎn)、4℃保存1、2、3和6個(gè)月后測試實(shí)施例5(6劑)的制劑中FSH活性。結(jié)果列于表8中，以每克溶劑國際單位(IU)表示。
7.4.LH的體內(nèi)分析利用大鼠精囊增重生物分析法，在時(shí)間0點(diǎn)、4℃保存1、2、3和6個(gè)月后測試實(shí)施例5(6劑)的制劑中LH活性。結(jié)果列于表8中，以每克溶劑國際單位(IU)表示。
7.5.自由亞基(rFSH+rLH)的評價(jià)通過SDS-PAGE評價(jià)實(shí)施例5的制劑中自由亞基百分率。
把該制劑保存于4℃，在時(shí)間0點(diǎn)、保存1、2、3和6個(gè)月后進(jìn)行測定。結(jié)果以占蛋白質(zhì)總量(rFSH+rLH)的百分率表示，列于表8中。
7.6.聚集物的評價(jià)參照上述7.5部分所述自由亞基的評價(jià)方法，通過SDS-PAGE評價(jià)實(shí)施例5的制劑中聚集物百分率，但換成測定高分子量聚集物占蛋白質(zhì)總量(rFSH+rLH)的百分率。測定是在時(shí)間0點(diǎn)、保存1、2、3和6個(gè)月后進(jìn)行。結(jié)果列于表8中。
7.7.可見顆粒在時(shí)間0點(diǎn)、4℃保存3和6個(gè)月后目測評價(jià)實(shí)施例5的制劑的顆粒。結(jié)果列于表8中。
7.8.pH值在時(shí)間0點(diǎn)、4℃保存1、2、3和6個(gè)月后測定實(shí)施例5的制劑的pH值。結(jié)果列于表8。


實(shí)施例8FSH和LH凍干多劑制劑制備含有以下組分的兩個(gè)凍干制劑A和B制劑AFSH μg32.75(450I.U.)LHμg9.0(225I.U.)蔗糖 mg15.0NaH2PO4H2Omg0.052Na2HPO42H2O mg0.825Pluronic F-68 mg0.05L-甲硫氨酸mg0.05制劑BFSH μg65.5(900I.U.)LH μg18.0(450I.U.)
蔗糖mg30.0NaH2PO4H2O mg0.104Na2HPO42H2O mg1.65Pluronic F68mg0.10L-甲硫氨酸 mg0.10制備方法包括把藥物物質(zhì)直接與各成分混合，過濾得到的溶液并凍干濾液。
以下說明制備方法各步驟-在配衡容器中加入WFI、磷酸氫二鈉二水合物、磷酸二氫鈉一水合物、蔗糖、5％Pluronic F68和L-甲硫氨酸，攪拌10分鐘，直至完全溶解。
-檢查pH值，用NaOH 10％或稀釋H3PO4調(diào)溶液至最后pH7.00±0.2。
-在上述制備的混合物中加入FSH和LH，輕輕攪拌得到的溶液10分鐘。
-再次檢查pH值，用NaOH10％或稀釋H3PO4調(diào)溶液至最后pH7.0±0.1。
-用0.22μm Durapore濾膜過濾溶液，過濾比不超過15g/cm2，通入氮?dú)猓獨(dú)獾膲毫υ?.5atm以下。
-把溶液收集在預(yù)先已滅菌的燒瓶內(nèi)。
-往玻璃容器灌充濾液，塞上塞子并將灌充后的小瓶置于不銹鋼盤子上。
-把盤子放在凍干機(jī)上，凍干產(chǎn)品，凍干循環(huán)如下·+4℃平衡約20分鐘。
·調(diào)支架溫度為-25℃，保持2小時(shí)。
·調(diào)支架溫度為-15℃，保持1小時(shí)。
·調(diào)支架溫度為-45℃，保持3小時(shí)。
·調(diào)冷凝器溫度為-65℃。
·容器室抽真空。
·當(dāng)真空到達(dá)7×10-2mBar時(shí)，把支架溫度升高至-10℃，保持4小時(shí)。
·在8小時(shí)內(nèi)把支架溫度升至+35℃，保持至該循環(huán)結(jié)束(14小時(shí))。
·暫停抽真空，向容器室充入氮?dú)狻?br> ·通過凍干機(jī)的自動化系統(tǒng)加上塞子。
·用合適的壓蓋器密封加塞子的小瓶。
制劑A和B儲存于25±2℃，按下述方法測試它們的穩(wěn)定性和生物活性。分析之前，用含有0.3％間甲酚作為抑菌劑的注射水重構(gòu)各組分。
穩(wěn)定性和生物活性的測試方法如下·FSH的體內(nèi)分析利用Steelman-Pohley卵巢增重生物分析法測試制劑的FSH活性。
·LH的體內(nèi)分析利用大鼠精囊增重生物分析法測試制劑的LH活性。
·氧化α-亞基分析利用反相HPLC(RP-HPLC)方法測定氧化α-亞基百分率。
·自由亞基(rFSH+rLH)的評價(jià)通過SDS-PAGE評價(jià)自由亞基百分率。
·聚集物的評價(jià)參照上述自由亞基的評價(jià)方法，通過SDS-PAGE評價(jià)聚集物百分率。
按照歐洲藥典的規(guī)定進(jìn)行生物試驗(yàn)。具體的試驗(yàn)見“尿促性素”專論。
表9簡要給出制劑A穩(wěn)定性和生物活性相關(guān)的分析試驗(yàn)結(jié)果。這些數(shù)值在以下4個(gè)檢測點(diǎn)測定時(shí)間0點(diǎn)、25±2℃保存后1、3和6個(gè)月。
表9

表10簡要給出制劑B穩(wěn)定性和生物活性相關(guān)的分析試驗(yàn)結(jié)果。這些數(shù)值在以下4個(gè)檢測點(diǎn)測定時(shí)間0點(diǎn)、25±2℃保存后3、6和9個(gè)月。
表10

從表9和10可以得出，制劑A和B的生物活性在儲存9個(gè)月后仍保持得很好。這些制劑具有較高的穩(wěn)定性。
重組FSH和重組LH數(shù)量多并不會影響高穩(wěn)定性。
序列SEQ ID NO.1人糖蛋白α-亞基；SEQ ID NO.2hFSHβ-亞基SEQ ID NO.3hFSHβ-亞基變體1SEQ ID NO.4hFSHβ-亞基變體2SEQ ID NO.5hFSHβ-亞基變體3SEQ ID NO.6hLHβ-亞基參考文獻(xiàn)1Burgues et al.；Subcutaneous self-administration of highly purified folliclestimulating hormone and human chorionic gonadotrophin for the treatment of malehypogonadotrophic hypogonadism.Spanish Collaborative Group on MaleHypogonadotrophic Hypogonadism；Hum.Reprod.；1997，12，980-6；2Shome et al.，J.Clin.Endocrinol.Metab.39187-205(1974)；Shome，et al.，J.Prot.Chem，7325-339，1988；2Keutmann et al.；Structure of human luteinizing hormone beta subunitevidencefor related carboxyl-terminal sequence among certain peptide hormones；Biochem.Biophys.Res.Commun.；1979，90，842-848；Talmadge et al.；Evolution of the genes forthe beta subunits of human chorionic gonadotropin and luteinizing hormone；Nature；1984，307，37-40；Fiddes & Talmadge；Structure，expression，and evolution of the genesfor the human glycoprotein hormones；Recent Prog.Horm.Res.；1984，40，43-784Reichert LE，Ramsey RB；Dissociation of human follicle-stimulating hormone；J.Biol.Chem.；1975，250，3034-30405Klein et al.；Pharmacokinetics and pharmacodynamics of single-chainrecombinant human follicle-stimulating hormone containing the human chorionicgonadotrophin carboxyterminal peptide in the rhesus monkey；Fertility & Sterility；2002，77，1248-12556a)Fiddes，J.C.，et al.，J of Mol.and Applied Genetics，13-18(1981)；b)Esch F.S.，et al.DNA 5363-369(1986)；c)Watkins P.C.，et al.，DNA 6205-212(1987)；d)Hirai T.，et al.，J.Mol.Endrocrinol.5147-158(1990)；e)Maurer，R.A.，et al.，Mol.Endocrinol.1717-723(1987)；f)Guzman K.，et al.，DNA Cell Biol.10593-601(1991)；g)Kumar TR，et al.，Gene.1995Dec 12；166(2)335-6；h)Kumar TR，et al.，Gene.1995Dec 12；166(2)333-47Biochem.Biophys.Res.Commun.；1979，90，842-8488Steelman et al.；Assay of the follicle stimulating hormone based on theaugmentation with human chorionic gonadotrophin；Endocrinology；1953，53，604-6169Van Hell et al.；Effects of human menopausal gonadotrophin preparations indifferent bioassay methods；Acta Endocrinologica；1964，47，409-41810Van Hell et al.；Effects of human menopausal gonadotrophin preparations indifferent bioassay methods；Acta Endocrinologica；1964，47，409-418
序列表<110>阿雷斯貿(mào)易股份有限公司<120>FSH和LH以及非離子表面活性劑的液體藥物制劑<130>US 847 Y<160>6<170>PatentIn版本3.1<210>1<211>91<212>PRT<213>智人(Homo sapiens)<400>1Ala Pro Asp Val Gln Asp Cys Pro Glu Cys Thr Leu Gln Glu Asn Pro1 5 10 15Phe Phe Ser Gln Pro Gly Ala Pro Ile Leu Gln Cys Met Gly Cys Cys20 25 30Phe Ser Arg Ala Tyr Pro Thr Pro Leu Arg Ser Lys Lys Thr Met Leu35 40 45Val Gln Lys Asn Val Thr Ser Glu Ser Thr Cys Cys Val Ala Lys Ser50 55 60Tyr Asn Arg Val Thr Val Met Gly Gly Phe Val Glu Asn His Thr Ala65 70 75 80Cys His Cys Ser Thr Cys Tyr Tyr His Lys Ser85 90<210>2<211>129<212>PRT<213>智人(Homo sapiens)<400>2Met Lys Thr Leu Gln Phe Phe Phe Leu Phe Cys Cys Trp Lys Ala Ile1 5 10 15Cys Cys Asn Ser Cys Glu Leu Thr Asn Ile Thr Ile Ala Ile Glu Lys20 25 30Glu Glu Cys Arg Phe Cys Ile Ser Ile Asn Thr Thr Trp Cys Ala Gly35 40 45Tyr Cys Tyr Thr Arg Asp Leu Val Tyr Lys Asp Pro Ala Arg Pro Lys50 55 60Ile Gln Lys Thr Cys Thr Phe Lys Glu Leu Val Tyr Glu Thr Val Arg
65 70 75 80Val Pro Gly Cys Ala His His Ala Asp Ser Leu Tyr Thr Tyr Pro Val85 90 95Ala Thr Gln Cys His Cys Gly Lys Cys Asp Ser Asp Ser Thr Asp Cys100 105 110Thr Val Arg Gly Leu Gly Pro Ser Tyr Cys Ser Phe Gly Glu Met Lys115 120 125Glu<210>3<211>108<212>PRT<213>智人(Homo sapiens)<400>3Asn Ser Cys Glu Leu Thr Asn Ile Thr Ile Ala Ile Glu Lys Glu Glu1 5 10 15Cys Arg Phe Cys Ile Ser Ile Asn Thr Thr Trp Cys Ala Gly Tyr Cys20 25 30Tyr Thr Arg Asp Leu Val Tyr Lys Asp Pro Ala Arg Pro Lys Ile Gln35 40 45Lys Thr Cys Thr Phe Lys Glu Leu Val Tyr Glu Thr Val Arg Val Pro50 55 60Gly Cys Ala His His Ala Asp Ser Leu Tyr Thr Tyr Pro Val Ala Thr65 70 75 80Gln Cys His Cys Gly Lys Cys Asp Ser Asp Ser Thr Asp Cys Thr Val85 90 95Arg Gly Leu Gly Pro Ser Tyr Cys Ser Phe Gly Glu100 105<210>4<211>106<212>PRT<213>智人(Homo sapiens)<400>4Asn Ser Cys Glu Leu Thr Asn Ile Ala Ile Glu Lys Glu Glu Cys Arg1 5 10 15Phe Cys Ile Ser Ile Asn Thr Trp Cys Ala Gly Tyr Cys Tyr Thr Arg20 25 30Asp Leu Val Tyr Lys Asp Pro Ala Arg Pro Lys Ile Gln Lys Thr Cys35 40 45Thr Phe Lys Glu Leu Val Tyr Glu Thr Val Arg Val Pro Gly Cys Ala50 55 60His His Ala Asp Ser Leu Tyr Thr Val Pro Val Ala Thr Gln Cys His65 70 75 80Cys Gly Lys Cys Asp Ser Asp Ser Thr Asp Cys Thr Val Arg Gly Leu
85 90 95Gly Pro Ser Tyr Cys Ser Phe Gly Glu Met100 105<210>5<211>110<212>PRT<213>智人(Homo sapiens)<400>5Asn Ser Cys Glu Leu Thr Asn Ile Thr Ile Ala Ile Glu Lys Glu Glu1 5 10 15Cys Arg Phe Cys Ile Ser Ile Asn Thr Thr Trp Cys Ala Gly Tyr Cys20 25 30Tyr Thr Arg Asp Leu Val Tyr Lys Asp Pro Ala Arg Pro Lys Ile Gln35 40 45Lys Thr Cys Thr Phe Lys Glu Leu Val Tyr Glu Thr Val Arg Val Pro50 55 60Gly Cys Ala His His Ala Asp Ser Leu Tyr Thr Tyr Pro Val Ala Thr65 70 75 80Gln Cys His Cys Gly Lys Cys Asp Ser Asp Ser Thr Asp Cys Thr Val85 90 95Arg Gly Leu Gly Pro Ser Tyr Cys Ser Phe Gly Glu Met Lys100 105 110<210>6<211>112<212>PRT<213>智人(Homo sapiens)<400>6Ser Arg Glu Pro Leu Arg Pro Trp Cys His Pro Ile Asn Ala Ile Leu1 5 10 15Ala Val Glu Lys Glu Gly Cys Pro Val Cys Ile Thr Val Asn Thr Thr20 25 30Ile Cys Ala Gly Tyr Cys Pro Thr Met Arg Val Leu Gln Ala Val Leu35 40 45Pro Pro Leu Pro Gln Val Cys Thr Tyr Arg Asp Val Arg Phe Glu Ser50 55 60Ile Arg Leu Pro Gly Cys Pro Arg Gly Val Asp Pro Val Val Ser Phe65 70 75 80Pro Val Ala Leu Ser Cys Arg Cys Gly Pro Cys Arg Arg Ser Thr Ser85 90 95Asp Cys Gly Gly Pro Lys Asp His Pro Leu Thr Cys Asp His Pro Gln100 105 110
權(quán)利要求
1.一種液體藥物組合物，其特征在于，所述組合物含有卵泡刺激素(FSH)或其變體和表面活性劑，所述表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68。
2.一種液體藥物組合物，其特征在于，所述組合物含有卵泡刺激素(FSH)或其變體和黃體生成激素(LH)或其變體以及表面活性劑，所述表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68。
3.一種液體藥物組合物，其特征在于，所述組合物含有黃體生成激素(LH)或其變體和表面活性劑，所述表面活性劑選自PluronicF77、PluronicF87、Pluronic F88和Pluronic F68。
4.如上述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的液體藥物組合物，其特征在于，卵泡刺激素(FSH)的濃度在約150IU/ml至約1,200IU/ml的范圍內(nèi)。
5.如權(quán)利要求4所述的液體藥物組合物，其特征在于，卵泡刺激素(FSH)的濃度在約300IU/ml至約900IU/ml的范圍內(nèi)。
6.如權(quán)利要求5所述的液體藥物組合物，其特征在于，卵泡刺激素(FSH)的濃度約600IU/ml。
7.如權(quán)利要求2或3中任一項(xiàng)所述的液體藥物組合物，其特征在于，黃體生成激素(LH)的濃度在約150IU/ml至約1,200IU/ml的范圍內(nèi)。
8.如權(quán)利要求7所述的液體藥物組合物，其特征在于，黃體生成激素(LH)的濃度在約300IU/ml至約750IU/ml的范圍內(nèi)。
9.一種凍干制劑，其特征在于，所述制劑含有卵泡刺激素(FSH)或其變體和表面活性劑，所述表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、PluronicF88和Pluronic F68。
10.一種凍干制劑，其特征在于，所述制劑含有黃體生成激素(LH)或其變體和表面活性劑，所述表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、PluronicF88和Pluronic F68。
11.一種凍干制劑，其特征在于，所述制劑含有卵泡刺激素(FSH)或其變體和黃體生成激素(LH)或其變體以及表面活性劑，所述表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68。
12.如權(quán)利要求9-11中任一項(xiàng)所述的凍干制劑，其特征在于，卵泡刺激素(FSH)的濃度(w/w)約每毫克制劑總量0.1至10微克。
13.如權(quán)利要求12所述的凍干制劑，其特征在于，卵泡刺激素(FSH)的濃度(w/w)約每毫克制劑總量0.3至5微克。
14.如權(quán)利要求13所述的凍干制劑，其特征在于，卵泡刺激素(FSH)的濃度(w/w)約每毫克制劑總量0.37至2微克。
15.如權(quán)利要求9-11中任一項(xiàng)所述的凍干制劑，其特征在于，黃體生成激素(LH)的濃度(w/w)約每毫克制劑總量0.1至3微克。
16.如權(quán)利要求15所述的凍干制劑，其特征在于，黃體生成激素(LH)的濃度(w/w)約每毫克制劑總量0.1至1微克。
17.如權(quán)利要求16所述的凍干制劑，其特征在于，黃體生成激素(LH)的濃度(w/w)約每毫克制劑總量0.1至0.6微克。
18.如權(quán)利要求1至17中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，所述表面活性劑是Pluronic F68。
19.如上述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，卵泡刺激素是人卵泡刺激素和/或黃體生成激素是人黃體生成激素。
20.如權(quán)利要求19所述的藥物組合物，其特征在于，卵泡刺激素是人尿卵泡刺激素和/或黃體生成激素是人尿黃體生成激素。
21.如權(quán)利要求19所述的藥物組合物，其特征在于，卵泡刺激素是重組人卵泡刺激素和/或黃體生成激素是重組人黃體生成激素。
22.如上述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，F(xiàn)SH∶LH在約6∶1至約1∶6范圍內(nèi)。
23.如權(quán)利要求22所述的藥物組合物，其特征在于，F(xiàn)SH∶LH在約4∶1至約1∶2范圍內(nèi)。
24.如權(quán)利要求23所述的藥物組合物，其特征在于，F(xiàn)SH∶LH在約3∶1至約1∶1范圍內(nèi)。
25.如權(quán)利要求24所述的藥物組合物，其特征在于，F(xiàn)SH∶LH在約2∶1至約1∶1范圍內(nèi)。
26.如上述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物還包括抑菌劑，該抑菌劑選自苯酚和間甲酚。
27.如權(quán)利要求26所述的藥物組合物，其特征在于，所述抑菌劑是間甲酚。
28.如權(quán)利要求27所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物的間甲酚濃度約0.3％(質(zhì)量/質(zhì)量溶劑)。
29.如上述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物還包括蔗糖。
30.如上述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物還包括甲硫氨酸。
31.如上述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物還包括磷酸緩沖液，該緩沖液的pH值在約6.0至約8.0范圍內(nèi)。
32.如權(quán)利要求31所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物還包括磷酸緩沖液，該緩沖液的pH值約7.0。
33.如權(quán)利要求32所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物包括以下成分rFSH、Pluronic F68、蔗糖、甲硫氨酸、間甲酚和pH值約7.0的磷酸緩沖水溶液。
34.如權(quán)利要求33所述的藥物組合物，其特征在于，rFSH的濃度約600IU/ml、Pluronic F68的濃度約0.1mg/ml、蔗糖的濃度約60mg/ml、甲硫氨酸的濃度約0.1mg/ml、間甲酚的濃度約3mg/ml，以及磷酸緩沖液的磷酸鹽濃度約10mM。
35.如權(quán)利要求11所述的凍干制劑，其特征在于，所述制劑包含的重組FSH為32.75μg、重組LH為9.0μg、蔗糖為15.0mg、NaH2PO4·H2O為0.052mg、Na2HPO4·2H2O為0.825mg、Pluronic F68為0.05mg、以及L-甲硫氨酸為0.05mg。
36.如權(quán)利要求11所述的凍干制劑，其特征在于，所述制劑包含的重組FSH為65.5μg、重組LH為18.0μg、蔗糖為30.0mg、NaH2PO4·H2O為0.104mg、Na2HPO4·2H2O為1.65mg、Pluronic F68為0.10mg、以及L-甲硫氨酸為0.10mg。
37.一種制備藥物組合物的方法，其特征在于，所述方法包括形成含有FSH、表面活性劑和液體稀釋劑的溶液的步驟，所述表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68。
38.如權(quán)利要求37所述的方法，其特征在于，所述表面活性劑是PluronicF68。
39.如權(quán)利要求37或38所述的方法，其特征在于，所述方法還包括加入抑菌劑的步驟，所述抑菌劑選自苯酚和間甲酚。
40.一種制備包裝藥物組合物的方法，其特征在于，該方法包括將含有FSH和表面活性的溶液分裝入一個(gè)小瓶、安瓿或注射筒內(nèi)，所述表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68。
41.如權(quán)利要求40所述的方法，其特征在于，所述表面活性劑是PluronicF68。
42.一種制品，其特征在于，所述制品包括第一容器，該容器灌充了如權(quán)利要求9至11中任一項(xiàng)所述的凍干制劑；以及第二容器，該容器含有重構(gòu)溶劑。
43.如權(quán)利要求42所述的制品，其特征在于，所述第二容器含有包含間甲酚的水性稀釋劑。
44.一種制備如權(quán)利要求9至11中任一項(xiàng)所述凍干制劑的方法，其特征在于，所述方法包括形成單獨(dú)FSH、或者FSH與LH、或者單獨(dú)LH以及表面活性劑的混合物并使所述混合物凍干的步驟，所述表面活性劑選自PluronicF77、Pluronic F87、Pluronic F88和Pluronic F68。
45.如權(quán)利要求44所述的方法，其特征在于，所述表面活性劑是PluronicF68。
全文摘要
本發(fā)明涉及卵泡刺激素(FSH)、黃體生成激素(LH)以及FSH和LH混合物的藥物制劑領(lǐng)域及這些制劑的生產(chǎn)方法。本發(fā)明還提供FSH、或LH、或FSH與LH的液體或凍干制劑，它們含有選自Pluronic
文檔編號A61K38/24GK1795012SQ200480014504
公開日2006年6月28日 申請日期2004年4月2日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月2日
發(fā)明者F·薩馬利塔尼, P·多納蒂 申請人:阿雷斯貿(mào)易股份有限公司