專利名稱：柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體注射劑及其制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素的制劑，具體說是涉及一種柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體注射劑，本發(fā)明還涉及該藥物的制備工藝。
背景技術(shù)：
柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素為蒽環(huán)類廣譜抗腫瘤抗生素，其作用機(jī)制主要是通過它嵌入DNA雙螺旋中與DNA結(jié)合，使其模板發(fā)生改變，這種嵌合可導(dǎo)致DNA空間結(jié)構(gòu)的障礙，從而抑制DNA和RNA聚合酶，阻止DNA和RNA的合成。鹽酸柔紅霉素具有廣譜的抗實(shí)驗(yàn)性腫瘤的作用，主要用于對常用抗腫瘤藥耐藥的急性淋巴細(xì)胞或粒細(xì)胞白血病。對淋巴肉瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、骨肉瘤、骨骼肌肉瘤及絨癌等也有一定療效。雖然鹽酸柔紅霉素抗瘤譜廣，療效好，但是由靜脈注射后毒副作用較大，除有骨髓抑制、胃腸道反應(yīng)外，并具有心臟毒性，表現(xiàn)為突發(fā)性心動過速，呼吸困難，心臟擴(kuò)大，急性心力衰竭，肺水腫等，嚴(yán)重者可致心力衰竭。臨床上還出現(xiàn)蛋白尿、皮疹、脫發(fā)等，漏出血管外時可致局部壞死。上述毒副作用嚴(yán)重限制了鹽酸柔紅霉素的臨床應(yīng)用。
脂質(zhì)體(Liposome)最初是由英國學(xué)者Bangham和Standish將磷脂分散在水中進(jìn)行電鏡觀察時發(fā)現(xiàn)的。磷脂分散在水中自然形成多層囊泡，每層均為脂質(zhì)的雙分子層；囊泡中央和各層之間被水相隔開，雙分子層厚度約為4納米。后來，將這種具有類似生物膜結(jié)構(gòu)的雙分子層小囊稱為脂質(zhì)體。脂質(zhì)體可分為單室脂質(zhì)體和多室脂質(zhì)體。單室脂質(zhì)體又分為小單室脂質(zhì)體和大單室脂質(zhì)體。Bangham和Standish最初發(fā)現(xiàn)的就是多室脂質(zhì)體，它們較易制備，尺寸一般為佳0.5-5微米。小單室脂質(zhì)體為球形，尺寸一般為佳20-50納米；大單室脂質(zhì)體的尺寸為微米數(shù)量級。1971年英國萊門等人開始將脂質(zhì)體用于藥物載體，主要作用機(jī)理是將藥物粉末或溶液包裹在脂質(zhì)體雙層脂質(zhì)膜所封閉的水相中或嵌入脂質(zhì)體雙層脂質(zhì)膜中，這種微粒具有類細(xì)胞結(jié)構(gòu)，進(jìn)入人體內(nèi)主要被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬而激活機(jī)體的自身免疫功能，并改變被包封藥物的體內(nèi)分布，使藥物主要在肝、脾、肺和骨髓等組織器官中積蓄，從而提高藥物的治療指數(shù)，減少藥物的治療劑量和降低藥物的毒性。目前用作藥物載體的脂質(zhì)體多為大單室脂質(zhì)體，粒徑一般位于100-1000納米之間。70年代中后期，人們開始研究將脂質(zhì)體用作蒽環(huán)類抗癌藥物，包括鹽酸柔紅霉素的有效載體，80年代末已有臨床實(shí)驗(yàn)開始進(jìn)行，到90年代中期歐美已有脂質(zhì)體藥物上市。這些藥物被包裹在特定的脂質(zhì)體再通過靜脈注射進(jìn)入人體后，臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明其毒副作用明顯減少，藥物半衰期顯著延長，但其藥效卻并不減弱反而得到加強(qiáng)。
目前世界上研制成功并上市的脂質(zhì)體產(chǎn)品有美國Alza Pharmaceuticals醫(yī)藥公司研制的Doxil和Caelyx，主要用于治療復(fù)發(fā)性卵巢癌和AIDS相關(guān)的Kaposi’s肉瘤；美國伊蘭醫(yī)藥公司(Elan Pharmaceuticals，Inc.)主要用于治療乳腺癌的MyocetTM。Doxil，Caelyx和MyocetTM的藥學(xué)活性成分都為阿霉素或鹽酸阿霉素，其中Doxil和Caelyx是運(yùn)用“隱形”(stealth)技術(shù)將鹽酸阿霉素包裹在脂質(zhì)體微粒中，同時在每個脂質(zhì)體微粒表面再包裹上聚乙二醇(PEG)以進(jìn)一步延長其在體內(nèi)循環(huán)半衰期，它們的半衰期可達(dá)55小時。另外美國的APHOIS公司已經(jīng)成功的將紫杉醇(paclitaxel)和喜樹堿(camptothecin)等難溶性藥物制成了脂質(zhì)體制劑并用于乳腺癌的治療。到目前為止，世界上還只有一只柔紅霉素脂質(zhì)體產(chǎn)品在市場上銷售，它就是美國Gilead生產(chǎn)的DaunoXome，主要用于白血病和淋巴瘤的治療。我國目前尚無自行研制和生產(chǎn)的脂質(zhì)體鹽酸柔紅霉素產(chǎn)品在市場上銷售，患者只能使用進(jìn)口產(chǎn)品。本發(fā)明不僅添補(bǔ)了我國自行研制和生產(chǎn)鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體制劑的空白，而且將使我國在這個產(chǎn)品的研發(fā)和生產(chǎn)技術(shù)上處于國際先進(jìn)地位。另外，本發(fā)明柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體制劑的制備采用了國產(chǎn)原料，大大降低了其生產(chǎn)成本，使我國癌癥患者最終能使用這種藥效高且毒副作用低的抗癌新藥。
國內(nèi)外已有的研究結(jié)果表明，有三個因素提高鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體藥效和降低毒副作用有重要的影響。一是脂質(zhì)體的粒徑和均勻度；二是形成脂質(zhì)體的脂質(zhì)和脂質(zhì)體內(nèi)所包裹藥物的化學(xué)降解程度；三是脂質(zhì)體藥物中非包裹藥物的存在量，也即藥物在脂質(zhì)體中包裹率的控制和非包裹藥物的去除技術(shù)。到目前為止，解決上述三個因素的工藝條件均不理想。本發(fā)明提供的柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體注射劑的新配方和制備工藝很好地解決了這三個制備脂質(zhì)體藥物的關(guān)鍵因素。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種穩(wěn)定性好、包裹率高、成本低、毒副作用少的柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體注射劑。
本發(fā)明另一個目的是提供該注射劑的制備工藝。
本發(fā)明的技術(shù)方案是根據(jù)脂質(zhì)體的特性，選用特殊比例的磷脂混合物制備包裹柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素的空白脂質(zhì)體，配方中還加入膽固醇和自由基捕捉劑維生素E來增加柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，采用pH梯度法促進(jìn)藥物包裹，藥物包裹率達(dá)97％以上，并通過特殊的加工工藝來控制該制劑注射入人體后柔紅霉素從脂質(zhì)體中釋放到人體內(nèi)的速度，降低了柔紅霉素的毒副作用而使其藥效增加。
脂質(zhì)體主要由天然和/或合成磷脂組成，這些磷脂可分為三大類，即中性磷脂，帶正電磷脂和帶負(fù)電磷脂，本發(fā)明脂質(zhì)體制備主要選用中性磷脂。但由于含有磷脂的脂質(zhì)體的粒徑在貯存期間會發(fā)生改變而影響其藥效，本發(fā)明在配方中加入帶負(fù)電荷的磷脂可使脂質(zhì)體粒經(jīng)在貯存期間的變化減小到最低程度。帶負(fù)電荷磷脂和中性磷脂的比例為0.1∶1-0.4∶1。另外，配方中還加入膽固醇，它使脂質(zhì)體雙分子層膜固化，從而減少自由基的生成，降低了氧化水平，使脂質(zhì)體穩(wěn)定性顯著增強(qiáng)。膽固醇和中性磷脂的比例為0.1∶1-1∶1。同時為了進(jìn)一步降低形成脂質(zhì)體的磷脂和脂質(zhì)體所包裹藥物的化學(xué)降解，配方中還加入了維生素E。維生素E是一種有效的抗氧化劑，被認(rèn)為是通過與磷脂過氧化自由基反應(yīng)并猝滅單一態(tài)的氧分子和對磷脂的雙分子層進(jìn)行排序(如限制類脂層分子的流動性)等分子機(jī)制而發(fā)揮其抗氧化作用。維生素E和磷脂的摩爾比例為0.001∶1-0.1∶1。已有的研究結(jié)果表明，卵磷脂、飽和大豆磷脂和磷脂酰甘油酯等的水解都受pH值的影響，而且水解產(chǎn)物可以使脂質(zhì)體混懸液的pH值下降，加速脂質(zhì)體的進(jìn)一步水解。這些磷脂成分均在pH6.5時最穩(wěn)定，水解速度常數(shù)最小。因此，本發(fā)明在把柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素有效地包裹在空白脂質(zhì)體中后，又將柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體置于加入緩沖劑的脂質(zhì)體分散液中，進(jìn)一步增強(qiáng)了柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。
柔紅霉素或柔紅霉素可采用“離子梯度法”來包裹到空白脂質(zhì)體中，它通過脂質(zhì)體雙分子脂質(zhì)層內(nèi)外離子濃度的差異來使藥物更容易被包裹到脂質(zhì)體中，這些離子包括Na+，K+，Li+，NH4+，H+等，使用H+時的方法被稱作“pH梯度法”。本發(fā)明將采用“離子梯度法”中效果較好的“pH梯度法”來包裹柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素。該方法通過調(diào)節(jié)脂質(zhì)體內(nèi)外環(huán)境的pH差異來使脂質(zhì)體外的柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素較易進(jìn)入脂質(zhì)體內(nèi)，而脂質(zhì)體內(nèi)的柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素不易釋放到脂質(zhì)體外，從而使藥物包裹率很高，一般可達(dá)97％以上。具體措施通過將柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素在被包裹到空白脂質(zhì)體時用堿粉沫或堿水溶液來調(diào)節(jié)空白脂質(zhì)體脂質(zhì)雙層膜外液相環(huán)境中的pH值來增加藥物包裹率，藥物處于脂質(zhì)體雙層脂質(zhì)膜所包裹的酸性水溶液中，酸性水溶液由0.01M-0.5M的有機(jī)酸制備。脂質(zhì)體的粒度及均勻度可通過高壓均粒機(jī)制備，也可通過擠壓設(shè)備把空白脂質(zhì)體懸浮液在壓力下擠過相應(yīng)孔徑的微孔膜來達(dá)到。在包裹藥物后通過滲析過濾法然后將柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體置于與人體生理環(huán)境類似的脂質(zhì)體分散液中。
空白脂質(zhì)體的制備可采用薄膜分散法(TFV)，也可用逆相蒸發(fā)法(REV)、乙醇注入法來制備。制備過程中確切溫度隨脂質(zhì)體組份不同而不同。成品鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體的分散液中為增加其在儲存期間的穩(wěn)定性加入了緩沖劑。
本發(fā)明的目的可以通過以下措施來為實(shí)現(xiàn)一種柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體注射劑，每1000ml制劑的原料配方為柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素500mg～5.0g中性磷脂 500mg～50g負(fù)電荷磷脂50mg～20g膽固醇25mg～15.4g抗氧化劑 0.3mg～4.6g有機(jī)酸33mg～84g堿28mg～118g糖28g～200g緩沖劑1g～100g注射用水 定容至1000ml同時滿足柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素和磷脂的摩爾比例為0.05∶1-0.5∶1，帶負(fù)電荷磷脂和中性磷脂的摩爾比例為0.1∶1-0.4∶1，膽固醇和中性磷脂的摩爾比例為0.1∶1-1∶1。
所述的柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體注射劑，其中中性磷脂可以是蛋黃卵磷脂(EPC)、氫化蛋黃卵磷脂(HEPC)、雙硬脂酸卵磷脂(DSPC)、大豆卵磷脂(soy PC)、氫化大豆卵磷脂(HSPC)、雙軟脂酸卵磷脂(DPPC)或雙肉豆寇酸卵磷脂(DMPC)。
所述的柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體注射劑，其中帶負(fù)電荷磷脂可以是雙肉豆寇酸磷脂酰甘油(DMPG)、雙月桂酸磷脂酰甘油(DLPG)、雙軟脂酸磷脂酰甘油(DPPG)、雙硬脂酸磷脂酰甘油(DSPG)、雙肉豆寇酸磷脂酸(DMPA)、雙硬脂酸磷脂酸(DSPA)、雙月桂酸磷脂酸(DLPA)、雙軟脂酸磷脂酸(DPPA)、雙油酸磷脂酰絲氨酸(DOPS)或雙亞油酸磷脂酰肌醇(DLPI)。
所述的柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體注射劑，其中抗氧化劑可以是維生素E，維生素E和磷脂的摩爾比例為0.001∶1-0.1∶1。
所述的柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體注射劑，其中有機(jī)酸可以是檸檬酸、琥珀酸、乙酸、草酸、葡萄酸、乳糖酸、葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸。
所述的柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體注射劑，其中堿可以是碳酸鈉、碳酸氫鈉、磷酸鉀、磷酸氫鉀、磷酸鈉、磷酸氫鈉或氫氧化鈉。
所述的柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體注射劑，其中糖為乳糖、麥芽糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖或棉白糖。
所述的柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體注射劑，其中緩沖劑可以是左氨酸、組氨酸或緩血酸胺。
所述的柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體注射劑，其劑型可以是注射液、凍干粉。
所述的柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體注射劑的制備方法，包含下列步驟1)制備空白脂質(zhì)體根據(jù)配方選用磷脂、膽固醇和維生素E溶于氯仿或氯仿-甲醇混合溶劑中混合均勻；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶液中溶劑減壓除去，形成脂質(zhì)薄膜；配制0.01M-0.5M的有機(jī)酸溶液，用酸溶液來水化脂質(zhì)薄膜，水化溫度一般在40℃-70℃之間，得空白脂質(zhì)體懸浮液；2)均化空白脂質(zhì)體水化完全后用高壓均粒機(jī)制備脂質(zhì)體至所需粒徑和均勻度，也可通過擠壓設(shè)備把空白脂質(zhì)體懸浮液在壓力下擠過相應(yīng)孔徑的微孔膜來達(dá)到，脂質(zhì)體的粒徑控制在40-200nm，脂質(zhì)體粒徑和均勻度可用多角度納米粒子分析器來檢測；3)包裹柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素配制堿水溶液或準(zhǔn)備堿粉末；將柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素溶于無菌水或濃度為3％-15％的糖水溶液，加熱到40℃-70℃；用堿水溶液或堿粉末調(diào)節(jié)空白脂質(zhì)體懸浮液至堿性；將柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素溶液和堿性空白脂質(zhì)體懸浮液混合均勻并在40℃-70℃下保溫一段時間；4)純化和固化脂質(zhì)體按重量百分比配制濃度為3％-15％的糖水溶液并加入緩沖劑，調(diào)節(jié)至pH5-pH7，得脂質(zhì)體的分散液，緩沖劑的含量為0.2％-10％；然后采用脂質(zhì)體分散液洗滌含柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體，利用滲析過濾法使柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體外溶液置換為pH5-pH7的脂質(zhì)體分散液，使柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體分散在與人體生理環(huán)境類似的糖水溶液中，得柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體；5)定容、除菌、分裝、保存用注射用水定容；將柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體懸浮液用微孔膜過濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或凍干保存至使用。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明的脂質(zhì)體的粒徑位于40nm-200nm之間，藥物包裹率達(dá)97％以上，非包裹柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素含量少，一般小于3％。同時，配方加入膽固醇和抗氧化劑維生素E，使得柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體的穩(wěn)定性大大提高。另外，由于柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體的生產(chǎn)過程中關(guān)鍵的均粒步驟可由高效的高壓均粒機(jī)來完成，而且該制劑也可通過凍干制成凍干劑型來保存，這不僅使柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體的穩(wěn)定性進(jìn)一步提高，并且使該制劑的工業(yè)化生產(chǎn)成為可能。本發(fā)明凍干粉在2℃-8℃下的一年穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明其平均粒徑變化率小于8％，藥物包裹率的變化率小于5％，顯示了本發(fā)明柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體制劑優(yōu)異的穩(wěn)定性。
本發(fā)明的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果脂質(zhì)體鹽酸柔紅霉素對小鼠P1798淋巴肉瘤的藥效實(shí)驗(yàn)脂質(zhì)體鹽酸柔紅霉素(L-DNR)制劑按實(shí)例2制備，濃度為2.0mg/ml的，傳統(tǒng)鹽酸柔紅霉素(F-DNR)制劑由鹽酸柔紅霉素溶于無菌生理鹽水配制，濃度為2.0mg/ml。P1798淋巴肉瘤注入小鼠體內(nèi)四天后由小鼠尾靜脈注入脂質(zhì)體鹽酸柔紅霉素(L-DNR)，對照組的小鼠在同樣條件下注射傳統(tǒng)鹽酸柔紅霉素(F-DNR)，實(shí)驗(yàn)期為90天。傳統(tǒng)鹽酸柔紅霉素(F-DNR)在95％置信限時的LD50為10.36mg/Kg±1.12mg/Kg，脂質(zhì)體鹽酸柔紅霉素(L-DNR)在95％置信限時的LD50為19.41mg/Kg±1.34mg/Kg。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明脂質(zhì)體鹽酸柔紅霉素抗小鼠P1798淋巴肉瘤的LD50是傳統(tǒng)鹽酸柔紅霉素的1.87倍。
上述藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明脂質(zhì)體鹽酸柔紅霉素對P1798淋巴肉瘤的療效顯著優(yōu)于傳統(tǒng)鹽酸柔紅霉素。
具體實(shí)施例方式
以下通過實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步闡明，實(shí)施例不是對本發(fā)明的限制。
實(shí)施例1制劑處方(1000ml容量)鹽酸柔紅霉素500mg雙硬脂酸卵磷脂(DSPC)5.3g
雙硬脂酸磷脂酰甘油(DSPG) 1.7g膽固醇1.0g維生素E 7.5mg檸檬酸1150mg無水碳酸鈉800mg蔗糖 90g甘氨酸5g注射用水 定容至所需容量制劑工藝如下根據(jù)配方選用磷脂、膽固醇和維生素E溶于氯仿中混合均勻；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶液中氯仿減壓除去，形成脂質(zhì)薄膜；配制0.05M的檸檬酸溶液，用檸檬酸溶液來水化脂質(zhì)薄膜，水化溫度在60℃-65℃之間，得空白脂質(zhì)體懸浮液；水化完全后用高壓均粒機(jī)制備脂質(zhì)體至平均粒徑為80nm，脂質(zhì)體粒徑和均勻度用多角度納米粒子分析器來檢測；將鹽酸柔紅霉素溶于9％的蔗糖水溶液，加熱到60℃-65℃；用0.5M的無水碳酸鈉水溶液調(diào)節(jié)空白脂質(zhì)體懸浮液pH為7.5±0.3；將鹽酸柔紅霉素溶液和堿性空白脂質(zhì)體懸浮液在60℃-70℃混合均勻并保溫1 0-30分鐘；配制9％的蔗糖水溶液并加入0.5％的甘氨酸，得脂質(zhì)體分散液；采用脂質(zhì)體分散液洗滌含鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體，利用滲析過濾法使鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體外溶液置換為pH為5.0-6.0的脂質(zhì)體分散液，用注射用水定容并調(diào)節(jié)至鹽酸柔紅霉素的濃度為0.5mg/ml溶液，將鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體懸浮液用0.22微米孔徑的微孔膜過濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或凍干保存至使用。
實(shí)施例2制劑處方(1000ml容量)鹽酸柔紅霉素 2000mg雙硬脂酸卵磷脂(DSPC) 21g雙硬脂酸磷脂酰甘油(DSPG) 7g膽固醇 3.8g維生素E30mg檸檬酸 4600mg無水碳酸鈉 3200mg
蔗糖 90g甘氨酸 5g注射用水 定容至所需容量制劑工藝如下根據(jù)配方選用磷脂、膽固醇和維生素E溶于氯仿中混合均勻；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶液中氯仿減壓除去，形成脂質(zhì)薄膜；配制0.3M的檸檬酸溶液，用檸檬酸溶液來水化脂質(zhì)薄膜，水化溫度在60℃-65℃之間，得空白脂質(zhì)體懸浮液；水化完全后用高壓均粒機(jī)制備脂質(zhì)體至平均粒徑為80nm，脂質(zhì)體粒徑和均勻度用多角度納米粒子分析器來檢測；將鹽酸柔紅霉素溶于9％的蔗糖水溶液，加熱到60℃-65℃；用0.5M的無水碳酸鈉水溶液調(diào)節(jié)空白脂質(zhì)體懸浮液pH為7.5±0.3；將鹽酸柔紅霉素溶液和堿性空白脂質(zhì)體懸浮液在60℃-70℃混合均勻并保溫10-30分鐘；配制9％的蔗糖水溶液并加入0.5％的甘氨酸，得脂質(zhì)體分散液；采用脂質(zhì)體分散液洗滌含鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體，利用滲析過濾法使鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體外溶液置換為pH為5.0-6.0的脂質(zhì)體分散液，用注射用水定容并調(diào)節(jié)至鹽酸柔紅霉素的濃度為2.0mg/ml溶液，將鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體懸浮液用0.22微米孔徑的微孔膜過濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或凍干保存至使用。
實(shí)施例3制劑處方(1000ml容量)鹽酸柔紅霉素 1000mg氫化大豆卵磷脂(HSPC) 9g雙肉豆寇酸磷脂酰甘油(DMPG)5g膽固醇1.6g維生素E 15mg檸檬酸2300mg無水碳酸鈉1600mg乳糖 90g甘氨酸5g注射用水 定容至所需容量制劑工藝如下根據(jù)配方選用磷脂、膽固醇和維生素E溶于2∶1氯仿-甲醇中混合均勻；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶液中氯仿和甲醇減壓除去，形成脂質(zhì)薄膜；配制0.30M的檸檬酸溶液，用檸檬酸溶液來水化脂質(zhì)薄膜，水化溫度一般在65℃±3℃之間，得空白脂質(zhì)體懸浮液；水化完全后用高壓均粒機(jī)制備脂質(zhì)體至平均粒徑為60nm，脂質(zhì)體粒徑和均勻度用多角度納米粒子分析器來檢測，將鹽酸柔紅霉素溶于9％的乳糖水溶液，加熱到60℃-70℃；用0.5M的無水碳酸鈉水溶液調(diào)節(jié)空白脂質(zhì)體懸浮液pH為7.3±0.3；將鹽酸柔紅霉素溶液和堿性空白脂質(zhì)體懸浮液在60℃-70℃混合均勻并保溫10-30分鐘；配制9％的乳糖水溶液并加入0.5％的甘氨酸，得脂質(zhì)體的分散液；采用脂質(zhì)體分散液洗滌含鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體，利用滲析過濾法使鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體外溶液置換為pH為5.0-6.0的脂質(zhì)體分散液，用注射用水定容并調(diào)節(jié)至鹽酸柔紅霉素的濃度為1.0mg/ml溶液，將鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體懸浮液用0.22微米孔徑的微孔膜過濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或凍干保存至使用。
實(shí)施例4制劑處方(1000ml容量)鹽酸柔紅霉素 2000mg雙肉豆寇酸卵磷脂(DMPC)17g雙硬脂酸磷脂酰甘油(DSPG) 11g膽固醇3.0mg維生素E 30mg檸檬酸4600mg無水碳酸鈉3200mg蔗糖 90g甘氨酸5g注射用水 定容至所需容量制劑工藝如下根據(jù)配方選用磷脂、膽固醇和維生素E溶于氯仿中混合均勻；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶液中氯仿減壓除去，形成脂質(zhì)薄膜；配制0.3M的檸檬酸溶液，用檸檬酸溶液來水化脂質(zhì)薄膜，水化溫度一般在60℃-65℃之間，得空白脂質(zhì)體懸浮液；水化完全后用高壓均粒機(jī)制備脂質(zhì)體至平均粒徑為80nm，脂質(zhì)體粒徑和均勻度用多角度納米粒子分析器來檢測；將鹽酸柔紅霉素溶于9％的蔗糖水溶液，加熱到60℃-65℃；用2.0M的無水碳酸鈉水溶液調(diào)節(jié)空白脂質(zhì)體懸浮液pH為7.5±0.3；將鹽酸柔紅霉素溶液和堿性空白脂質(zhì)體懸浮液在60℃-70℃混合均勻并保溫10-30分鐘；配制9％的蔗糖水溶液并加入0.5％的甘氨酸，得脂質(zhì)體分散液；采用脂質(zhì)體分散液洗滌含鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體，利用滲析過濾法使鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體外溶液置換為pH為5.0-6.0的脂質(zhì)體分散液，用注射用水定容并調(diào)節(jié)至鹽酸柔紅霉素的濃度為2.0mg/ml溶液，將鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體懸浮液用0.22微米孔徑的微孔膜過濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或凍干保存至使用。
實(shí)施例5制劑處方(1000ml容量)鹽酸柔紅霉素 2000mg雙軟脂酸卵磷脂(DPPC) 16g蛋黃磷脂酰甘油(EPG)12g膽固醇 2.8g維生素E30mg檸檬酸 4600mg無水碳酸鈉 3200mg乳糖 90g甘氨酸 5g注射用水 定容至所需容量制備工藝根據(jù)配方選用磷脂、膽固醇和維生素E溶于氯仿中混合均勻；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶液中氯仿減壓除去，形成脂質(zhì)薄膜；配制0.25M的檸檬酸溶液，用檸檬酸溶液來水化脂質(zhì)薄膜，水化溫度一般在50℃-55℃之間，得空白脂質(zhì)體懸浮液；水化完全后用高壓均粒機(jī)制備脂質(zhì)體至平均粒徑為100nm，脂質(zhì)體粒徑和均勻度用多角度納米粒子分析器來檢測；將鹽酸柔紅霉素溶于9％的乳糖水溶液，加熱到50℃-55℃；加入配方量的無水碳酸鈉粉末調(diào)節(jié)空白脂質(zhì)體懸浮液pH為7.5±0.3；將鹽酸柔紅霉素溶液和堿性空白脂質(zhì)體懸浮液在50℃-60℃混合均勻并保溫10-30分鐘；配制9％的乳糖水溶液并加入0.5％的甘氨酸，得脂質(zhì)體分散液；采用脂質(zhì)體分散液洗滌含鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體，利用滲析過濾法使鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體外溶液置換為pH為5.0-6.0的脂質(zhì)體分散液，用注射用水定容并調(diào)節(jié)至鹽酸柔紅霉素的濃度為2.0mg/ml溶液，將鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體懸浮液用0.22微米孔徑的微孔膜過濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或凍干保存至使用。
實(shí)施例6制劑處方(1000ml容量)鹽酸柔紅霉素5000mg雙軟脂酸卵磷脂(DPPC)40g蛋黃磷脂酰甘油(EPG) 30g膽固醇 7.0g維生素E 75mg檸檬酸 11.5mg無水碳酸鈉 8.0mg乳糖90g甘氨酸 5g注射用水定容至所需容量制備工藝根據(jù)配方選用磷脂、膽固醇和維生素E溶于氯仿中混合均勻；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶液中氯仿減壓除去，形成脂質(zhì)薄膜；配制0.25M的檸檬酸溶液，用檸檬酸溶液來水化脂質(zhì)薄膜，水化溫度一般在50℃-55℃之間，得空白脂質(zhì)體懸浮液；水化完全后用高壓均粒機(jī)制備脂質(zhì)體至平均粒徑為100nm，脂質(zhì)體粒徑和均勻度用多角度納米粒子分析器來檢測；將鹽酸柔紅霉素溶于9％的乳糖水溶液，加熱到50℃-55℃；加入配方量的無水碳酸鈉粉末調(diào)節(jié)空白脂質(zhì)體懸浮液pH為7.5±0.3；將鹽酸柔紅霉素溶液和堿性空白脂質(zhì)體懸浮液在50℃-60℃混合均勻并保溫10-30分鐘；配制9％的乳糖水溶液并加入0.5％的甘氨酸，得脂質(zhì)體分散液；采用脂質(zhì)體分散液洗滌含鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體，利用滲析過濾法使鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體外溶液置換為pH為5.0-6.0的脂質(zhì)體分散液，用注射用水定容并調(diào)節(jié)至鹽酸柔紅霉素的濃度為5.0mg/ml溶液，將鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體懸浮液用0.22微米孔徑的微孔膜過濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或凍干保存至使用。
權(quán)利要求
1.一種柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體注射劑，其特征在于每1000ml制劑的原料配方為柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素 500mg～5.0g中性磷脂 500mg～50g負(fù)電荷磷脂 50mg～20g膽固醇 25mg～15.4g抗氧化劑 0.3mg～4.6g有機(jī)酸 33mg～84g堿 28mg～118g糖 28g～200g緩沖劑 1g～100g注射用水 定容至1000ml同時滿足柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素和磷脂的摩爾比例為0.05∶1-0.5∶1，帶負(fù)電荷磷脂和中性磷脂的摩爾比例為0.1∶1-0.4∶1，膽固醇和中性磷脂的摩爾比例為0.1∶1-1∶1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體注射劑，其特征在于制備脂質(zhì)體的中性磷脂可以是蛋黃卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂、雙硬脂酸卵磷脂、大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、雙軟脂酸卵磷脂或雙肉豆寇酸卵磷脂。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體注射劑，其特征在于制備脂質(zhì)體的帶負(fù)電荷磷脂可以是雙肉豆寇酸磷脂酰甘油、雙月桂酸磷脂酰甘油、雙軟脂酸磷脂酰甘油、雙硬脂酸磷脂酰甘油、雙肉豆寇酸磷脂酸、雙硬脂酸磷脂酸、雙月桂酸磷脂酸、雙軟脂酸磷脂酸、雙油酸磷脂酰絲氨酸或雙亞油酸磷脂酰肌醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體注射劑，其特征在于抗氧化劑可以是維生素E，維生素E和磷脂的摩爾比例為0.001∶1-0.1∶1。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體注射劑，其特征在于有機(jī)酸可以是檸檬酸、琥珀酸、乙酸、草酸、葡萄酸、乳糖酸、葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體注射劑，其特征在于堿可以是碳酸鈉、碳酸氫鈉、磷酸鉀、磷酸氫鉀、磷酸鈉、磷酸氫鈉或氫氧化鈉。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體注射劑，其特征在于糖為乳糖、麥芽糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖或棉白糖。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體注射劑，其特征在于緩沖劑可以是甘氨酸、組氨酸或緩血酸胺。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體注射劑，其特征在于其劑型可以是注射液、凍干粉。
10.權(quán)利要求1所述的柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體注射劑的制備方法，其特征在于包含下列步驟1)制備空白脂質(zhì)體根據(jù)配方選用磷脂、膽固醇和維生素E溶于氯仿或氯仿-甲醇混合溶劑中混合均勻；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶液中溶劑減壓除去，形成脂質(zhì)薄膜；配制0.01M-0.5M的有機(jī)酸溶液，用酸溶液來水化脂質(zhì)薄膜，水化溫度一般在40℃-70℃之間，得空白脂質(zhì)體懸浮液；2)均化空白脂質(zhì)體水化完全后用高壓均粒機(jī)制備脂質(zhì)體至所需粒徑和均勻度，也可通過擠壓設(shè)備把空白脂質(zhì)體懸浮液在壓力下擠過相應(yīng)孔徑的微孔膜來達(dá)到，脂質(zhì)體的粒徑控制在40-200nm，脂質(zhì)體粒徑和均勻度可用多角度納米粒子分析器來檢測；3)包裹柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素配制堿水溶液或準(zhǔn)備堿粉末；將柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素溶于無菌水或濃度為3％-1 5％的糖水溶液，加熱到40℃-70℃；用堿水溶液或堿粉末調(diào)節(jié)空白脂質(zhì)體懸浮液至堿性；將柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素溶液和堿性空白脂質(zhì)體懸浮液混合均勻并在40℃-70℃下保溫一段時間；4)純化和固化脂質(zhì)體按重量百分比配制濃度為3％-15％的糖水溶液并加入緩沖劑，調(diào)節(jié)至pH5-pH7，得脂質(zhì)體的分散液，緩沖劑的含量為0.2％-10％；然后采用脂質(zhì)體分散液洗滌含柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素的脂質(zhì)體，利用滲析過濾法使柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體外溶液置換為pH5-pH7的脂質(zhì)體分散液，使柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體分散在與人體生理環(huán)境類似的糖水溶液中，得柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體；5)定容、除菌、分裝、保存用注射用水定容；將柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體懸浮液用微孔膜過濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或凍干保存至使用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素脂質(zhì)體注射劑及其制備工藝。該注射劑由柔紅霉素或鹽酸柔紅霉素、中性磷脂、負(fù)電荷磷脂、膽固醇、抗氧化劑、有機(jī)酸、堿、糖、緩沖劑、注射用水制備而成，該制備工藝包括制備空白脂質(zhì)體、均化脂質(zhì)體、包裹藥物、純化和固化脂質(zhì)體、定容、除菌、分裝、保存等步驟。該注射劑穩(wěn)定性好、包裹率高、成本低、毒副作用少，該制備工藝簡單易行。
文檔編號A61K31/7028GK1626100SQ20041004167
公開日2005年6月15日 申請日期2004年8月12日 優(yōu)先權(quán)日2004年8月12日
發(fā)明者賀明, 賀欣, 周金鴻 申請人:常州太平洋藥物研究所有限公司