專(zhuān)利名稱(chēng)：一種體內(nèi)用放射性核素磁性微球的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于磁性材料技術(shù)領(lǐng)域，特別是提供了一種體內(nèi)用放射性核素磁性微球的制備方法，用于腫瘤血管栓塞和腫瘤治療。
背景技術(shù)：
磁性微球其由核心四氧化三鐵或單一構(gòu)型的三氧化二鐵構(gòu)成，外面包有高分子材料，并在高分子外面偶聯(lián)各種生物大分子，如偶聯(lián)單克隆抗體則為免疫微球。磁性微球用于生物分離始于20世紀(jì)70年代，目前廣泛應(yīng)用于細(xì)胞分離，蛋白質(zhì)分離與純化，核酸分離，抗生素以及微生物分離等方面。近年來(lái)，許多研究人員致力于將磁性微球用于靶向給藥的新載體，尤其在腫瘤藥物方面，有廣闊的應(yīng)用前景。
體內(nèi)應(yīng)用放射性藥物可以追溯到20世紀(jì)20年代。放射性治療藥物主要是利用核素發(fā)出的β射線(xiàn)和α粒子引起的電離輻射效，能抑制和破壞局部病變組織，對(duì)周?chē)＝M織損傷少?，F(xiàn)在，臨床上常用的核素有198Au，211At，131I，111In，32P，109Pd，197Pt，186Re，35S，90Sr，90Y等。以131I為例，其半衰期為8.04天，釋放β-射線(xiàn)能量Emax(Mev)0.607.臨床上用131I治療甲狀腺功能亢進(jìn)和甲狀腺癌已經(jīng)積累大量經(jīng)驗(yàn)，如治療甲狀腺腫瘤的一般劑量在0-150mCi。但是，體內(nèi)放療尚未找到較理想的路徑，其中靶組織的準(zhǔn)確定位和給藥，放射性核素的擴(kuò)散等問(wèn)題一直在困擾臨床應(yīng)用。
臨床上常用的放射治療方法如下1)特殊性?xún)?nèi)照射治療如Na131I治療甲狀腺功能亢進(jìn)及甲狀腺癌，32P治療某些血液病，35S治療軟骨肉瘤；2)腔內(nèi)治療，如32P或198Au制成膠體注入病變的胸腔或滑膜腔內(nèi)；3)敷貼治療如32P或90Sr敷貼在皮膚上或粘膜上，治療淺表腫瘤；4)組織間插植治療如將封閉的小棒狀放射源直接插入瘤組織中；5)免疫“導(dǎo)向治療”如單克隆抗體偶聯(lián)111In或90Y，注入血循環(huán)，以實(shí)現(xiàn)免疫球蛋白制導(dǎo)和濃聚，靶向定位殺傷。
而惡性腫瘤原發(fā)和轉(zhuǎn)移病灶靶向定位采用先進(jìn)的影像學(xué)儀器和手段，能準(zhǔn)確識(shí)別并定位腫瘤，如用X光，B超，CT，ECT，MRI，介入放射造影，內(nèi)窺鏡等手段，可檢出體內(nèi)0.5-1cm大小的腫瘤。實(shí)施靶向放療的主要手段包括1)免疫“靶向治療”在體內(nèi)注入標(biāo)記放射性核素相關(guān)單克隆抗體，借助抗體的特異識(shí)別，將放射性核素腫瘤組織。但是，由于腫瘤組織抗原高度異質(zhì)性和可變性，異源性抗體的排異反應(yīng)，免疫球蛋白分子較大，通透性差等原因，至今臨床尚未應(yīng)用免疫“靶向治療”。2)腫瘤介入治療現(xiàn)多用于放射治療，至于介入放療，需要有效制導(dǎo)放射性核素載體。3)體外照射治療應(yīng)用較廣，但設(shè)施昂貴，技術(shù)難度大。而放射劑量大，正常組織損傷大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種體內(nèi)用放射性核素磁性微球，粒徑在1μm-200μm范圍內(nèi)的磁性微球，該微球通過(guò)偶聯(lián)標(biāo)記放射性131I的蛋白質(zhì)，以及制備核素微球的方法；解決了異源性抗體的排異反應(yīng)，正常組織損傷大等問(wèn)題。
本發(fā)明的主要技術(shù)方案是磁性微球的制備，包括以下幾個(gè)步驟(1)磁性四氧化三鐵顆粒的制備將三氯化鐵、二氯化鐵和硝酸鋁的水溶液，攪拌下加入氨水溶液，充氮?dú)獗Ｗo(hù)，在室溫(25-35℃)下，攪拌速度500-3000轉(zhuǎn)/分，然后升溫至70-85℃，保溫30-90分鐘后，冷卻，通過(guò)分離得到磁性四氧化三鐵顆粒?？梢约尤敕稚┢鸱稚⒆饔?。
(2)磁性微球制備將上述制得的四氧化三鐵顆粒用苯乙烯分散，取20ml，加入6ml二乙烯苯，0.3g過(guò)氧化苯甲?；旌希恳唤M份分別加入，持續(xù)超聲波分散60-90分鐘，調(diào)PH至10-11.5，水溫控制在60-70℃，輕輕攪拌。然后加入單體甲苯丙烯酸1ml，3-5ml過(guò)硫酸鉀溶液，用純化水定容100ml。反應(yīng)5-8小時(shí)后即可制得磁性微球。加入表面活性劑十二烷苯磺酸鈉0.18g，懸浮劑甲基纖維素醚G600.5g于100ml水溶液中。
(3)蛋白質(zhì)的131I標(biāo)記采用氯氨T法，稱(chēng)取5mg蛋白質(zhì)，溶于PB PH7.4溶液中，加入氯氨T100mg混合，反應(yīng)1-5分鐘，加入200mg過(guò)硫酸鈉中止反應(yīng)，三種物質(zhì)的組成比例為1∶20∶40，用Sephdex C50分離純化得到標(biāo)記的蛋白質(zhì)。
(4)放射性核素的制備取(2)制得的磁性微球，通過(guò)離心分得直徑1μm-200μm范圍的部分4ml(50-100mg/ml)，用4-8ml純化水清洗三遍，最后加入4ml純化水，400μl131I蛋白質(zhì)(5mg/ml)，400ul人血清白蛋白(10mg/ml)，室溫下混勻16-24小時(shí)。用0.1mmol/l鹽酸清洗三次，加入4ml 0.1mmol/l鹽酸及20-100mg乙二醇乙二醛二聚體，室溫下混勻15-50分鐘，加入0.5-2N氫氧化鈉10-50μl混勻后，室溫下混勻16-24小時(shí)，加入L-氨基酸500-4000mg后，37℃混勻2-8小時(shí)。用0.1mm鹽酸清洗三次。最后用0.9％氯化鈉清洗三次，用4ml 0.9％氯化鈉復(fù)溶，于4℃保存。用到的所有溶液均用0.2μm的過(guò)濾器過(guò)濾。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于將放射性核素通過(guò)蛋白質(zhì)標(biāo)記后，以化學(xué)偶聯(lián)的形式荷載在磁性微球上，并可以將核素微球用于腫瘤的治療上，解決了異源性抗體的排異反應(yīng)，正常組織損傷大等問(wèn)題。


圖1是本發(fā)明的通過(guò)離心分離得到的微球在光學(xué)顯微鏡下的照片(X1000)具體實(shí)施方式
例1稱(chēng)取2700g二氯化鐵，0.5g三氯化鐵，0.1g硝酸鋁配成溶液，充氮?dú)獗４婧?，滴加氨水，室溫下攪拌，速度?000rpm，氨水滴加10ml后，升溫至75℃，以同樣速度攪拌，反應(yīng)90分鐘，然后加入油酸使之分散，并用純化水洗滌，即得磁性四氧化三鐵顆粒。
例2.
稱(chēng)取2g四氧化三鐵顆粒，加入20ml苯乙烯，6ml二乙烯苯，過(guò)氧化苯甲酸0.3g，每一組份分別加入，超聲波分散90分鐘，調(diào)PH至11.0，溫育為67℃，混合，加入甲基苯烯酸1ml，5ml過(guò)硫酸鉀溶液，用純花水定容1001。加入十二烷苯磺酸鈉0.18g，乳化劑甲苯纖維素醚0.5g于100ml水溶液中，攪拌500rpm。8小時(shí)后制得磁性微球。
例3.
核素微球制備根據(jù)說(shuō)明書(shū)(3)制備131I標(biāo)記人血清蛋白15mg，稱(chēng)取磁性微球1g，通過(guò)離心分離得到4μm左右的磁性微球200mg，用純化水清洗三遍，加入4ml純化水，400μl 5mg/ml的131I-人血清蛋白，2g人血清蛋白，室溫下攪拌20小時(shí)。用0.1mmol/l鹽酸清洗三遍，加入4ml0.1mmol/l鹽酸，混勻后，加入20mg乙二醇乙二醛二聚體，室溫下放置60分鐘，加入2N氫氧化鈉10μl后，繼續(xù)混勻16小時(shí)。加入L-甘氨酸2000mg后，37℃混勻2小時(shí)。用0.1mmol/l鹽酸清洗三次，然后用0.9％氯化鈉清洗至上溶液中無(wú)放射性為止，用4ml 0.9％氯化鈉復(fù)溶，于4℃保存。
權(quán)利要求
1.一種體內(nèi)用放射性核素磁性微球的制備方法，其特征在于具體制備，步驟為a、磁性四氧化三鐵顆粒的制備將三氯化鐵、二氯化鐵和硝酸鋁的水溶液，攪拌下加入氨水溶液，充氮?dú)獗Ｗo(hù)，在室溫25-35℃下，攪拌速度500-3000轉(zhuǎn)/分，然后升溫至70-85℃，保溫30-90分鐘后，冷卻，通過(guò)分離得到磁性四氧化三鐵顆粒；b、磁性微球制備將上述制得的四氧化三鐵顆粒用苯乙烯分散，取20ml，加入6ml二乙烯苯，0.3g過(guò)氧化苯甲酰混合，每一組份分別加入，持續(xù)超聲波分散60-90分鐘，調(diào)PH至10-11.5，水溫控制在60-70℃，輕輕攪拌；然后加入單體甲苯丙烯酸1ml，3-5ml過(guò)硫酸鉀溶液，用純化水定容100ml；反應(yīng)5-8小時(shí)后即可制得磁性微球；加入表面活性劑十二烷苯磺酸鈉0.18g，懸浮劑甲基纖維素醚G60 0.5g于100ml水溶液中；c、蛋白質(zhì)的131I標(biāo)記采用氯氨T法，稱(chēng)取5mg蛋白質(zhì)，溶于PB PH7.4溶液中，加入氯氨T100mg混合，反應(yīng)1-5分鐘，加入200mg過(guò)硫酸鈉中止反應(yīng)，三種物質(zhì)的組成比例為1∶20∶40，用Sephdex C50分離純化得到標(biāo)記的蛋白質(zhì)；d、放射性核素的制備取b制得的磁性微球，通過(guò)離心分得直徑1μm-200μm范圍的部分4ml，50-100mg/ml，用4-8ml純化水清洗三遍，最后加入4ml純化水，400μl 131I蛋白質(zhì)5mg/ml，400ul人血清白蛋白10mg/ml，室溫下混勻16-24小時(shí)；用0.1mmol/l鹽酸清洗三次，加入4ml 0.1mmol/l鹽酸及20-100mg乙二醇乙二醛二聚體，室溫下混勻15-60分鐘，加入0.5-2N氫氧化鈉10-50μl混勻后，室溫下混勻16-24小時(shí)，加入L-氨基酸500-4000mg后，37℃混勻2-8小時(shí)；用0.1mm鹽酸清洗三次，最后用0.9％氯化鈉清洗三次，用4ml 0.9％氯化鈉復(fù)溶，于4℃保存，用到的所有溶液均用0.2μm的過(guò)濾器過(guò)濾。
2.按照權(quán)利要求1所述的微球的制備方法，其特征在于磁性四氧化三鐵顆粒的制備時(shí)，可以加入分散劑起分散作用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種體內(nèi)用放射性核素磁性微球的制備方法，用于腫瘤血管栓塞和腫瘤治療。本發(fā)明制備包括以下幾個(gè)步驟磁性四氧化三鐵顆粒的制備，磁性微球制備，蛋白質(zhì)的
文檔編號(hào)A61K9/14GK1593665SQ20041000923
公開(kāi)日2005年3月16日 申請(qǐng)日期2004年6月22日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月22日
發(fā)明者劉振世, 幺崇正, 張玉慶 申請(qǐng)人:北京倍愛(ài)康生物技術(shù)股份有限公司