專利名稱：包含腦膜炎奈瑟球菌血清群b和c抗原和其它抗原的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及免疫原性組合物，尤其是那些包含腦膜炎奈瑟球菌(Neisseriameningitidis)血清群B和C(NmB和NmC)的免疫原性分子的組合的組合物。
背景技術(shù)：
腦膜炎奈瑟球菌(Nm)的血清群B和C菌株一起導(dǎo)致歐洲和美國的大部分侵襲性疾病?，F(xiàn)在已有了針對各Nm血清群的疫苗。挪威國家公共衛(wèi)生研究所的NmB疫苗是安全的，在兒童和成年人中可引起菌株-特異性免疫，并能有效預(yù)防青少年的NmB疾病。典型地，將這種疫苗與腦膜炎球菌C多糖疫苗聯(lián)合并與明礬一起給藥。然而這種普通的多糖疫苗成分對嬰兒和兒童無效。啟龍股份公司的NmC偶聯(lián)物(conj.)疫苗是安全的，在2到3個月齡接受疫苗接種的嬰兒體內(nèi)引發(fā)高滴定度的血清殺菌抗體，而且對未偶聯(lián)的NmC多糖引發(fā)免疫性B細胞記憶。
為了提供能引發(fā)針對NmB和NmC血清群的聯(lián)合疫苗，國際專利申請WO99/61053公開了免疫原性組合物，這種組合物包含(a)偶聯(lián)于載體的NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白。這種聯(lián)合疫苗對這兩種血清群都引發(fā)免疫應(yīng)答，而這種免疫應(yīng)答與各單獨血清群引發(fā)的免疫應(yīng)答的差異不大。本發(fā)明的目的是將這種聯(lián)合疫苗開發(fā)成能針對更廣生物類型的免疫應(yīng)答的組合物。
發(fā)明公開本發(fā)明提供了包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，特征在于這種組合物還可含有選自以下一種或多種成分● WO99/57280公開的蛋白質(zhì)或其免疫原性片段；● WO99/36544公開的蛋白質(zhì)或其免疫原性片段；● WO99/24578公開的蛋白質(zhì)或其免疫原性片段；
● WO97/28273公開的蛋白質(zhì)或其免疫原性片段；● WO96/29412公開的蛋白質(zhì)或其免疫原性片段；● WO95/03413公開的蛋白質(zhì)或其免疫原性片段；● WO99/31132公開的蛋白質(zhì)或其免疫原性片段；● 抗腦膜炎奈瑟球菌血清群A的保護性抗原；● 抗腦膜炎奈瑟球菌血清群Y的保護性抗原；● 抗腦膜炎奈瑟球菌血清群W的保護性抗原；● 抗流感嗜血菌的保護性抗原；● 抗肺炎球菌的保護性抗原；● 抗白喉的保護性抗原；● 抗破傷風(fēng)的保護性抗原；● 抗百日咳的保護性抗原；● 抗幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori)的保護性抗原；● 抗脊髓灰質(zhì)炎的保護性抗原；和/或● 抗乙型肝炎病毒的保護性抗原。
與引發(fā)對腦膜炎奈瑟球菌B和C的免疫應(yīng)答一樣，本發(fā)明的免疫原性組合物還引發(fā)對其它生物的免疫應(yīng)答。
成分(a)成分(a)寡糖宜為啟龍股份公司的寡糖，其表示較佳地約為12-22重復(fù)單位的NmC多糖片段。
成分(a)NmC寡糖宜偶聯(lián)于載體。這種載體宜為蛋白質(zhì)，但也可以是多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、氨基酸聚合物、氨基酸共聚物、脂類聚集體或失活病毒顆粒。
更佳地，這種載體是蛋白質(zhì)。更佳地，這種載體是CRM4197，一種無毒白喉類毒素。各劑量宜為10μg寡糖對應(yīng)于12.5-33μgCRM197(即，維持寡糖/蛋白質(zhì)的比例約為0.3-0.8)。更佳地，可以使用約20μg CRM197。
NmC偶聯(lián)物或多糖的劑量以μg唾液酸表示。還可以使用包含未偶聯(lián)多糖的NmC疫苗(這里也稱為“NmC多糖”或“MenC Ps”)。MenC Ps是包含長度宜為約60-80重復(fù)單元的多糖的粗分離物。
NmC-CRM197偶聯(lián)物更詳盡的描述參見Costantino等人(1992)Vaccine10691-698。
成分(b)成分(b)NmB外膜蛋白宜包含菌株44/76部分純化的外膜蛋白(B15P1.7，16L3，7，9)。
這種外膜蛋白宜作為蛋白脂質(zhì)體小泡存在(如通過用脫氧膽酸鹽提取過程得到)。
NmB的劑量以μg蛋白質(zhì)表示。較佳地，可從挪威國家公共衛(wèi)生研究所獲得NmB疫苗組合物/疫苗成分。NmB/明礬包含0.05mg/ml NmB蛋白質(zhì)、3.33mg/mlAl(OH)3(明礬)和0.10mg/ml乙基汞硫代水楊酸鈉(thiomersalsodium)。
成分(c)成分(c)宜包含以下一種或多種成分● 含有選自以下的氨基酸序列的蛋白質(zhì)如WO99/24578所述的SEQ ID 2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98，100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132，134，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，164，166，168，170，172，174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，212，214，216，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，248，250，252，254，256，258，260，262，264，266，268，270，272，274，276，278，280，282，284，286，288，290，292，294，296，298，300，302，304，306，308，310，312，314，316，318，320，322，324，326，328，330，332，334，336，338，340，342，344，346，348，350，352，354，356，358，360，362，364，366，368，370，372，374，376，378，380，382，384，386，388，390，392，394，396，398，400，402，404，406，408，410，412，414，416，418，420，422，424，426，428，430，432，434，436，438，440，442，444，446，448，450，452，454，456，458，460，462，464，466，468，470，472，474，476，478，480，482，484，486，488，490，492，494，496，498，500，502，504，506，508，510，512，514，516，518，520，522，524，526，528，530，532，534，536，538，540，542，544，546，548，550，552，554，556，558，560，562，564，566，568，570，572，574，576，578，580，582，584，586，588，590，592，594，596，598，600，602，604，606，608，610，612，614，616，618，620，622，624，626，628，630，632，634，636，638，640，642，644，646，648，650，652，654，656，658，660，662，664，666，668，670，672，674，676，678，680，682，684，686，688，690，692，694，696，698，700，702，704，706，708，710，712，714，716，718，720，722，724，726，728，730，732，734，736，738，740，742，744，746，748，750，752，754，756，758，760，762，764，766，768，770，772，774，776，778，780，782，784，786，788，790，792，794，796，798，800，802，804，806，808，810，812，814，816，818，820，822，824，826，828，830，832，834，836，838，840，842，844，846，848，850，852，854，856，858，860，862，864，866，868，870，872，874，876，878，880，882，884，886，888，890，和892(或含有一種或多種這些SEQ ID的免疫原性片段的蛋白質(zhì)，或含有與這些SEQ ID之一有序列相同性(宜高于50％，如60％、70％、80％、90％、95％、99％或更高)的序列的蛋白質(zhì))；● 含有選自以下氨基酸序列的蛋白質(zhì)如WO99/36544所述的SEQ ID 2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，和90(或含有一種或多種這些SEQ ID的免疫原性片段的蛋白質(zhì)，或含有與這些SEQID之一有序列相同性(宜高于50％，如60％、70％、80％、90％、95％、99％或更高)的序列的蛋白質(zhì))；● 含有選自以下氨基酸序列的蛋白質(zhì)如WO99/57280所述的2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98，100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132，134，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，164，166，168，170，172，174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，212，214，216，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，248，250，252，254，256，258，260，262，264，266，268，270，272，274，276，278，280，282，284，286，288，290，292，294，296，298，300，302，304，306，308，310，312，314，316，318，320，322，324，326，328，330，332，334，336，338，340，342，344，346，348，350，352，354，356，358，360，362，364，366，368，370，372，374，376，378，380，382，384，386，388，390，392，394，396，398，400，402，404，406，408，410，412，414，416，418，420，422，424，426，428，430，432，434，436，438，440，442，444，446，448，450，452，454，456，458，460，462，464，466，468，470，472，474，476，478，480，482，484，486，488，490，492，494，496，498，500，502，504，506，508，510，512，514，516，518，520，522，524，526，528，530，532，534，536，538，540，542，544，546，548，550，552，554，556，558，560，562，564，566，568，570，572，574，576，578，580，582，584，586，588，590，592，594，596，598，600，602，604，606，608，610，612，614，616，618，620，622，624，626，628，630，632，634，636，638，640，642，644，646，648，650，652，654，656，658，660，662，664，666，668，670，672，674，676，678，680，682，684，686，688，690，692，694，696，698，700，702，704，706，708，710，712，714，716，718，720，722，724，726，728，730，732，734，736，738，740，742，744，746，748，750，752，754，756，758，760，762，764，766，768，770，772，774，776，778，780，782，784，786，788，790，792，794，796，798，800，802，804，806，808，810，812，814，816，818，820，822，824，826，828，830，832，834，836，838，840，842，844，846，848，850，852，854，856，858，860，862，864，866，868，870，872，874，876，878，880，882，884，886，888，890，892，894，896，898，900，902，904，906，908，910，912，914，916，918，920，922，924，926，928，930，932，934，936，938，940，942，944，946，948，950，952，954，956，958，960，962，964，966，968，970，972，974，976，978，980，982，984，986，988，990，992，994，996，998，1000，1002，1004，1006，1008，1010，1012，1014，1016，1018，1020，1022，1024，1026，1028，1030，1032，1034，1036，1038，1040，1042，1044，1046，1048，1050，1052，1054，1056，1058，1060，1062，1064，1066，1068，1070，1072，1074，1076，1078，1080，1082，1084，1086，1088，1090，1092，1094，1096，1098，1100，1102，1104，1106，1108，1110，1112，1114，1116，1118，1120，1122，1124，1126，1128，1130，1132，1134，1136，1138，1140，1142，1144，1146，1148，1150，1152，1154，1156，1158，1160，1162，1164，1166，1168，1170，1172，1174，1176，1178，1180，1182，1184，1186，1188，1190，1192，1194，1196，1198，1200，1202，1204，1206，1208，1210，1212，1214，1216，1218，1220，1222，1224，1226，1228，1230，1232，1234，1236，1238，1240，1242，1244，1246，1248，1250，1252，1254，1256，1258，1260，1262，1264，1266，1268，1270，1272，1274，1276，1278，1280，1282，1284，1286，1288，1290，1292，1294，1296，1298，1300，1302，1304，1306，1308，1310，1312，1314，1316，1318，1320，1322，1324，1326，1328，1330，1332，1334，1336，1338，1340，1342，1344，1346，1348，1350，1352，1354，1356，1358，1360，1362，1364，1366，1368，1370，1372，1374，1376，1378，1380，1382，1384，1386，1388，1390，1392，1394，1396，1398，1400，1402，1404，1406，1408，1410，1412，1414，1416，1418，1420，1422，1424，1426，1428，1430，1432，1434，1436，1438，1440，1442，1444，1446，1448，1450，1452，1454，1456，1458，1460，1462，1464，1466，1468，1470，1472，1474，1476，1478，1480，1482，1484，1486，1488，1490，1492，1494，1496，1498，1500，1502，1504，1506，1508，1510，1512，1514，1516，1518，1520，1522，1524，1526，1528，1530，1532，1534，1536，1538，1540，1542，1544，1546，1548，1550，1552，1554，1556，1558，1560，1562，1564，1566，1568，1570，1572，1574，1576，1578，1580，1582，1584，1586，1588，1590，1592，1594，1596，1598，1600，1602，1604，1606，1608，1610，1612，1614，1616，1618，1620，1622，1624，1626，1628，1630，1632，1634，1636，1638，1640，1642，1644，1646，1648，1650，1652，1654，1656，1658，1660，1662，1664，1666，1668，1670，1672，1674，1676，1678，1680，1682，1684，1686，1688，1690，1692，1694，1696，1698，1700，1702，1704，1706，1708，1710，1712，1714，1716，1718，1720，1722，1724，1726，1728，1730，1732，1734，1736，1738，1740，1742，1744，1746，1748，1750，1752，1754，1756，1758，1760，1762，1764，1766，1768，1770，1772，1774，1776，1778，1780，1782，1784，1786，1788，1790，1792，1794，1796，1798，1800，1802，1804，1806，1808，1810，1812，1814，1816，1818，1820，1822，1824，1826，1828，1830，1832，1834，1836，1838，1840，1842，1844，1846，1848，1850，1852，1854，1856，1858，1860，1862，1864，1866，1868，1870，1872，1874，1876，1878，1880，1882，1884，1886，1888，1890，1892，1894，1896，1898，1900，1902，1904，1906，1908，1910，1912，1914，1916，1918，1920，1922，1924，1926，1928，1930，1932，1934，1936，1938，1940，1942，1944，1946，1948，1950，1952，1954，1956，1958，1960，1962，1964，1966，1968，1970，1972，1974，1976，1978，1980，1982，1984，1986，1988，1990，1992，1994，1996，1998，2000，2002，2004，2006，2008，2010，2012，2014，2016，2018，2020，2022，2024，2026，2028，2030，2032，2034，2036，2038，2040，2042，2044，2046，2048，2050，2052，2054，2056，2058，2060，2062，2064，2066，2068，2070，2072，2074，2076，2078，2080，2082，2084，2086，2088，2090，2092，2094，2096，2098，2100，2102，2104，2106，2108，2110，2112，2114，2116，2118，2120，2122，2124，2126，2128，2130，2132，2134，2136，2138，2140，2142，2144，2146，2148，2150，2152，2154，2156，2158，2160，2162，2164，2166，2168，2170，2172，2174，2176，2178，2180，2182，2184，2186，2188，2190，2192，2194，2196，2198，2200，2202，2204，2206，2208，2210，2212，2214，2216，2218，2220，2222，2224，2226，2228，2230，2232，2234，2236，2238，2240，2242，2244，2246，2248，2250，2252，2254，2256，2258，2260，2262，2264，2266，2268，2270，2272，2274，2276，2278，2280，2282，2284，2286，2288，2290，2292，2294，2296，2298，2300，2302，2304，2306，2308，2310，2312，2314，2316，2318，2320，2322，2324，2326，2328，2330，2332，2334，2336，2338，2340，2342，2344，2346，2348，2350，2352，2354，2356，2358，2360，2362，2364，2366，2368，2370，2372，2374，2376，2378，2380，2382，2384，2386，2388，2390，2392，2394，2396，2398，2400，2402，2404，2406，2408，2410，2412，2414，2416，2418，2420，2422，2424，2426，2428，2430，2432，2434，2436，2438，2440，2442，2444，2446，2448，2450，2452，2454，2456，2458，2460，2462，2464，2466，2468，2470，2472，2474，2476，2478，2480，2482，2484，2486，2488，2490，2492，2494，2496，2498，2500，2502，2504，2506，2508，2510，2512，2514，2516，2518，2520，2522，2524，2526，2528，2530，2532，2534，2536，2538，2540，2542，2544，2546，2548，2550，2552，2554，2556，2558，2560，2562，2564，2566，2568，2570，2572，2574，2576，2578，2580，2582，2584，2586，2588，2590，2592，2594，2596，2598，2600，2602，2604，2606，2608，2610，2612，2614，2616，2618，2620，2622，2624，2626，2628，2630，2632，2634，2636，2638，2640，2642，2644，2646，2648，2650，2652，2654，2656，2658，2660，2662，2664，2666，2668，2670，2672，2674，2676，2678，2680，2682，2684，2686，2688，2690，2692，2694，2696，2698，2700，2702，2704，2706，2708，2710，2712，2714，2716，2718，2720，2722，2724，2726，2728，2730，2732，2734，2736，2738，2740，2742，2744，2746，2748，2750，2752，2754，2756，2758，2760，2762，2764，2766，2768，2770，2772，2774，2776，2778，2780，2782，2784，2786，2788，2790，2792，2794，2796，2798，2800，2802，2804，2806，2808，2810，2812，2814，2816，2818，2820，2822，2824，2826，2828，2830，2832，2834，2836，2838，2840，2842，2844，2846，2848，2850，2852，2854，2856，2858，2860，2862，2864，2866，2868，2870，2872，2874，2876，2878，2880，2882，2884，2886，2888，2890，2892，2894，2896，2898，2900，2902，2904，2906，2908，2910，2912，2914，2916，2918，2920，2922，2924，2926，2928，2930，2932，2934，2936，2938，2940，2942，2944，2946，2948，2950，2952，2954，2956，2958，2960，2962，2964，2966，2968，2970，2972，2974，2976，2978，2980，2982，2984，2986，2988，2990，2992，2994，2996，2998，3000，3002，3004，3006，3008，3010，3012，3014，3016，3018和3020(或含有一種或多種這些SEQ ID的免疫原性片段的蛋白質(zhì)，或含有與這些SEQID之一有序列相同性(宜高于50％，如60％、70％、80％、90％、95％、99％或更高)的序列的蛋白質(zhì))；● WO97/28273的圖4或

圖13所公開的蛋白質(zhì)；● 含有選自如下氨基酸序列的蛋白質(zhì)如WO96/29412公開的SEQ ID 1-8(或含有一種或多種這些SEQ ID的免疫原性片段的蛋白質(zhì)，或含有與這些SEQ ID之一有序列相同性(宜高于50％，如60％、70％、80％、90％、95％、99％或更高)的序列的蛋白質(zhì))；● 含有選自如下氨基酸序列的蛋白質(zhì)如WO95/03413公開的SEQ ID 1-23(或含有一種或多種這些SEQ ID的免疫原性片段的蛋白質(zhì)，或含有與這些SEQID之一有序列相同性(宜高于50％，如60％、70％、80％、90％、95％、99％或更高)的序列的蛋白質(zhì))；● 含有選自如下氨基酸序列的蛋白質(zhì)如WO99/31132公開的SEQ ID 2(或含有SEQ ID 2的免疫原性片段的蛋白質(zhì)，或含有與SEQ ID 2序列相同(宜高于50％，如60％、70％、80％、90％、95％、99％或更高)的序列的蛋白質(zhì))；● 抗腦膜炎奈瑟球菌血清群A的多糖抗原；● 抗腦膜炎奈瑟球菌血清群Y的多糖抗原；● 抗腦膜炎奈瑟球菌血清群W的多糖抗原；● 抗流感嗜血菌的多糖抗原；● 抗肺炎球菌的多糖抗原；● 抗白喉的保護性抗原，由白喉類毒素如CRM197突變體[如，Del Guidice等人(1998)Molecular Aspects of Medicine 191-70]構(gòu)成；● 抗破傷風(fēng)的保護性抗原，由破傷風(fēng)毒素[如Wassilak & Orenstein，疫苗，第4章(Plotkin & Mortimer編輯)，1988]構(gòu)成；● 抗百日咳的保護性抗原，包含百日咳全毒素(PT)和絲狀凝血素(FHA)，還可任選地含有百日咳桿菌粘附素(pertactin)和/或凝集原2和3[如，Gustafsson等人(1996)N.Engl.J.Med.334349-355；Rappoli等人(1991)TIBTECH 9232-238]；● 抗幽門螺旋桿菌的保護性抗原，包含一種或多種CagA(如WO93/18150)、VacA(如，WO93/18150)、NAP(如，WO99/53310)、HopX(如WO98/04702)、HopY(如，WO98/04702)、尿激酶；● 抗乙型肝炎病毒的保護性抗原，由HBV表面抗原和/或HBV核心抗原構(gòu)成。
當(dāng)成分(c)含有抗白喉的抗原時，這種組合物宜含有抗破傷風(fēng)和脊髓灰質(zhì)炎的抗原。當(dāng)成分(c)含有抗破傷風(fēng)的抗原時，該組合物宜含有抗白喉和脊髓灰質(zhì)炎的抗原。當(dāng)成分(c)含有抗脊髓灰質(zhì)炎的抗原時，該組合物宜含有抗白喉和破傷風(fēng)的抗原。
百日咳毒素是毒素蛋白，當(dāng)存在于成分(c)中時，宜將其去毒。去毒化可通過化學(xué)和/或遺傳方法進行。優(yōu)選的去過毒的突變體是9K/129G雙突變體[如，Rappuoli(1997)Nature Medicine 3374-376]。
當(dāng)成分(c)含有以不同新生和成熟形式存在的蛋白質(zhì)時，宜選用該蛋白質(zhì)的成熟形式。例如，當(dāng)含有NspA時，(WO96/29412；還可參見Martin等人(1997)J.Exp.med 185 1173-1183)宜選用沒有信號肽的蛋白質(zhì)成熟形式。
當(dāng)成分(c)含有多糖抗原時，宜將多糖偶聯(lián)于載體蛋白。
成分(c)宜不會消除對成分(a)和(b)應(yīng)當(dāng)引起的免疫應(yīng)答。
藥學(xué)上可接受的載體本發(fā)明的組合物還可包含藥學(xué)上可接受的載體。
這種載體可以是有機的、無機的或這兩者。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的適合的載體包括(但不限制于)大的、代謝緩慢的大分子，如蛋白質(zhì)、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、氨基酸聚合物、氨基酸共聚物、脂類聚集體(如油滴或脂質(zhì)體)以及無活性的病毒顆粒?？墒褂盟帉W(xué)上可接受的鹽，如無機酸鹽，如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽等；以及有機酸鹽，如乙酸鹽、丙酸鹽、丙二酸鹽、苯甲酸鹽等。在Remington′s Pharmaceutical Sciences(Mack Pub.Co.，N.J.1991)中可找到關(guān)于藥學(xué)上可接受的賦形劑的充分討論。組合物中藥學(xué)上可接受的載體可含有液體，如水、鹽水、甘油和乙醇。另外，這些載體中還可能存在輔助性的物質(zhì)，如潤濕劑或乳化劑、pH緩沖物質(zhì)等。通常，可將治療性組合物制成可注射劑，例如液體溶液或懸浮液；還可制成在注射前適合配入溶液或懸液中、液體載體的固體形式。脂質(zhì)體也包括在藥學(xué)上可接受的載體的定義中。
這種載體還可作為免疫刺激劑，如佐劑。合適的佐劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。
優(yōu)選的載體是氫氧化鋁(明礬)和MF59。
可以從Superfos(Bedbaek，Denmark)得到呈3％溶液的明礬。當(dāng)組合物中存在明礬時，每份劑量明礬的量為～1mg到～1.67mg。
當(dāng)成分(c)包含乙型肝炎抗原時，不宜將氫氧化鋁用作載體(如EP-A-0642355)。類似地，當(dāng)成分(c)中包含流感嗜血菌多糖偶聯(lián)物時，不宜將氫氧化鋁用作載體(如EP-A-0833662)。而可用磷酸鋁替代。
MF59是一種鯊烯在水中的微流化乳劑，已顯示它是安全的且增強血清抗體對多種疫苗的應(yīng)答。MF59包含約5％鯊烯、0.5％吐溫80和約0.5％Span 85。對佐劑MF59的描述參見WO90/14837?？梢园慈鏞tt等人，“疫苗設(shè)計亞基和佐劑方法”(1995，Powell和Newman編，Plenum Press，New York，第277-296頁)；Singh等人(1998)Vaccine 16，1822-1827；Ott等人(1995)Vaccine 13，1557-1562；Valensi等人(1994)J.Immunol.153，4029-39中所述的方法制備MF59。
其它可以使用的載體-佐劑包括水包油型乳劑配方(有或沒有其它特異性的免疫刺激劑，如胞壁酰肽或細菌細胞壁成分)，例如，(a)如上所述的MF59(任選地含有不同量的MTP-PE，雖然并不需要)；(b)SAF，其含有10％鯊烯、0.4％吐溫80、5％普盧蘭尼克(pluronic)嵌段聚合物L(fēng)121以及thr-MDP(見下文)，微量流化成亞微米級乳劑或渦流振蕩產(chǎn)生粒徑較大的乳劑，和(c)RibiTM佐劑系統(tǒng)(RAS)，(Ribi Immunochem，Hamilton，MT)，其含有2％鯊烯、0.2％吐溫80以及取自單磷酰脂A(MPL)、二霉菌酸海藻糖酯(TDM)、和細胞壁骨架(CWS)的一種或多種細菌細胞壁組分，較佳的是MPL+CWS(DetoxTM)；(3)皂素佐劑，例如可采用StimulonTM(Cambridge Bioscience，Worcester，MA)或從其產(chǎn)生的顆粒，如ISCOM(免疫刺激性復(fù)合物)；(4)弗氏完全佐劑(CFA)和弗氏不完全佐劑(IFA)；(5)細胞因子，如白介素(如IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12等)、干擾素(如γ干擾素)、巨噬細胞集落刺激因子(M-CFS)、腫瘤壞死因子(TNF)等；以及(6)作為免疫刺激劑來增強組合物效果的其它物質(zhì)。
如上所述，胞壁酰肽包括但不局限于，N-乙酰-胞壁酰-L-蘇氨酰-D-異谷氨酰胺(thr-MDP)、N-乙酰-去甲基胞壁酰-L-丙氨酰-D-異谷氨酰胺(nor-MDP)、N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰-D-異谷氨酰氨?；?L-丙氨酸-2-(1′-2′-二棕櫚酰-sn-甘油-3-羥基磷酰氧)-乙胺(MTP-PE)等。
免疫原性本文所用的術(shù)語“免疫原性的”指施用于脊椎動物(包括人)以后能引發(fā)產(chǎn)生抗體的物質(zhì)。
本發(fā)明的組合物通常使用免疫學(xué)有效量的成分(a)、(b)和(c)。即，組合物中包含成分(a)、(b)或(c)的量與任何存在的佐劑聯(lián)合時，能使對象產(chǎn)生特異性和充足的免疫應(yīng)答，尤其是T或B淋巴細胞應(yīng)答，從而當(dāng)對象隨后與奈瑟球菌接觸時提供保護。
“免疫學(xué)有效量”指以單劑或連續(xù)劑一部分給予個體的量對治療或預(yù)防疾病而引發(fā)抗體產(chǎn)生是有效的。該用量取決于多種因素(包括所治療個體的健康狀況)，本領(lǐng)域技術(shù)人員易確定之。
可以指定非單劑劑量標(biāo)識，以提供對用于本發(fā)明的各種抗原的特定指導(dǎo)?？乖挠行Я靠梢允撬墓逃谢钚院图兌鹊暮瘮?shù)，且可由本領(lǐng)域技術(shù)人員通過常規(guī)試驗經(jīng)驗地確定。
本發(fā)明的免疫原性組合物通常包含免疫刺激量的奈瑟球菌抗原。免疫刺激量就是足以引發(fā)可測量的體液免疫或細胞免疫的量。例如，本發(fā)明的免疫原性組合物包含約1毫微克到1000微克的抗原或約10毫微克到約800微克的抗原。在一些優(yōu)選實施例中，免疫原性組合物包含約0.1到500微克抗原。在一些優(yōu)選實施例中，免疫原性組合物包含約1到350微克抗原。在一些優(yōu)選實施例中，免疫原性組合物包含約25到250微克抗原。在優(yōu)選實施例中，免疫原性組合物包含約100微克抗原。本領(lǐng)域技術(shù)人員可輕易配制包含任何所需量抗原的免疫原性組合物，所用量可由本領(lǐng)域技術(shù)人員通過常規(guī)試驗經(jīng)驗地確定?？梢砸詥挝粍┝啃问椒奖愕厥褂妹庖咴越M合物，而且這種免疫原性組合物可以用制藥領(lǐng)域熟知的任何方法制備，如Remington′s Pharmaceutical Sciences(Mack Pub.Co.，Easton，PA，1680)中所述的方法。
疫苗本發(fā)明還涉及包含任何上述免疫原性組合物的疫苗。
本文所用的術(shù)語“疫苗”指能引發(fā)殺菌免疫應(yīng)答的免疫原性組合物。較佳地，本發(fā)明的疫苗引發(fā)殺菌抗體應(yīng)答。
本發(fā)明的疫苗可以是預(yù)防性的(即預(yù)防感染)或治療性的(即在感染后治療疾病)。
本發(fā)明還提供了引發(fā)至少針對NmB和NmC的免疫應(yīng)答或免疫接種的方法，該方法包括施用免疫學(xué)有效量的本發(fā)明的免疫原性組合物?？梢詫⑵浣o予人，而且可以采用本發(fā)明技術(shù)人員已知的任何方式(包括腸胃外、直腸、腹腔內(nèi)、肌內(nèi)或皮下途徑)。直接送遞通常由注射(皮下、腹腔內(nèi)、靜脈內(nèi)或肌內(nèi))實現(xiàn)，或送遞到組織間隙?？蓪⒔M合物給予病變處。其它施用方式包括包括口服藥和肺制劑、栓劑和透皮或經(jīng)皮施藥(如WO98/20734)、針和基因槍或無針注射。劑量治療可以是單劑量方案或多劑量方案。
本發(fā)明還提供用作藥物的組合物。還提供了將本發(fā)明的組合物用于制備治療或預(yù)防奈瑟球菌感染的藥物的用途。
作為以蛋白質(zhì)為基礎(chǔ)的疫苗的一種替代方案是，可以采用DNA疫苗接種[例如，Robinson和Torres(1997)Seminars in Immunology 9271-283；Donnelly等人(1997)Annu Rev.Immunol 15617-648]。因此本發(fā)明組合物中的一種或多種蛋白質(zhì)成分可以用編碼該蛋白質(zhì)的核酸(宜為DNA)替代。
制備方法本發(fā)明還提供了制備本發(fā)明的組合物的制備方法，該方法包括混合成分(a)、(b)和(c)。
綜述除非另有描述，本發(fā)明的實施將采用分子生物學(xué)、微生物學(xué)、重組DNA和免疫學(xué)的常規(guī)技術(shù)，這些均是本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的。這些技術(shù)在下列文獻中有全面的描述例如，Sambrook《分子克隆實驗手冊》第2版(1989)；《DNA克隆》第I和II卷(D.N.Glover編1985)；《寡核苷酸的合成》(M.J.Gait編，1984)；《核酸的雜交》(B.D.Hames和S.J.Higgins編.1984)；《轉(zhuǎn)錄和翻譯》(B.D.Hames和S.J.Higgins編，1984)；《動物細胞培養(yǎng)》(R.I.Freshney編，1986)；《固定化細胞和酶》(IRL Press，1986)；B.Perbal，《分子克隆實用指南》(1984)；《酶學(xué)方法》系列叢書(Academic Press，Inc.)，尤其是154和155卷；《哺乳動物細胞的基因轉(zhuǎn)移載體》(J.H.Miller和M.P.Calos編，1987，Cold SpringHarbor Laboratory)；Mayer和Walker編(1987)，《細胞和分子生物學(xué)的免疫化學(xué)方法》(Academic Press，London)；Scopes，(1987)《蛋白質(zhì)的純化原理和實踐》第2版(Springer-Verlag，N.Y.)，以及《實驗免疫學(xué)手冊》I-IV卷(D.M.Weir和C.C.Blackwell編，1986)。
定義在本說明書中采用了核苷酸和氨基酸的標(biāo)準(zhǔn)縮寫。
術(shù)語“包含”指“含有”和“由......構(gòu)成”，例如“包含”X的組合物可以完全由X構(gòu)成，或者可以含有X之外的物質(zhì)，例如X+Y。
兩個序列之間的相同性宜用Smith-Waterman同源性搜尋算法確定，如在MPSRCH程序(Oxford Molecular)中，采用參數(shù)“缺口罰分(gap penalty)”為12，“缺口延伸罰分(gap extension penalty)”為1進行缺口仿射搜索。
附圖簡述在所有圖中，A組是第1次注射后28天的數(shù)據(jù)，B組是第2次注射后18天的數(shù)據(jù)。
圖1顯示了用ELISA測定的IgG抗體對(1A)NmB OMV和(1B)NmC莢膜滴定度的幾何平均數(shù)(KU/ml)。*表明(1A)第5組對第2和3組的P≤0.03，(1B)第5組對第1和4組的P≤0.02。
圖2顯示了血清殺菌抗體對(2A)NmB和(2B)NmC的滴定度(1/滴定度的幾何平均數(shù))。*表明第5組對第2組的P≤0.003。
本發(fā)明實施方式用以下說明本發(fā)明的實施例進一步描述本發(fā)明。以下實施例僅是用于說明本發(fā)明的，對本發(fā)明的范圍沒有任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該可以識別在本發(fā)明精神和范圍內(nèi)的改變。
實施例1ELISA結(jié)果豚鼠組(n＝15只)接受下表1所示的疫苗表1組成分量/劑量第1組 NmC偶聯(lián)物/明礬10μg/1mg第2組 NmB/明礬 25μg/1mg第3組 NmC多糖/NmB/明礬 10μg/25μg/1mg第4組 NmC偶聯(lián)物/NmB/明礬10μg/25μg/1mg第5組 NmC偶聯(lián)物/NmB/MF5910μg/25μg/0.5ml第6組(n＝5)包括僅接受明礬的對照動物將80只豚鼠隨機地分成以上各組，并接受六種疫苗組合物中的一種。對表2中的數(shù)據(jù)，每只動物接受2次i.m.注射，間隔28天。在每次注射之前和第2次注射后18天采集血清樣品。每只動物接受2次間隔為6周的免疫接種，獲得圖1A和圖1B的數(shù)據(jù)。每個劑量包括2次0.25ml i.m.注射。在每次注射之前和第二次注射后14或18天，采集血清樣品。
用ELISA分析血清樣品的針對NmC的IgG抗莢膜抗體濃度(表2和圖1A)和針對NmB的IgG抗外膜小泡(OMV)抗體的濃度(圖1B)。ELISA的數(shù)據(jù)是由各動物血清的典型分析產(chǎn)生的(表2)，并以多次分析的平均值表示(圖1A和1B)。因此，表2中的匯總數(shù)據(jù)以幾何平均值表示。
在ELISA中，將MCPS-ADH(NmC多糖-己二酸二酰肼)偶聯(lián)物或OMV成分包被在聚苯乙烯微量滴定板上4℃過夜，1μ/ml，100μl/孔。在各包被過的平板上，用含有75μM硫代氰酸銨緩沖液2倍連續(xù)稀釋100μl/孔的參考標(biāo)準(zhǔn)品(即，合并的豚鼠血清)、陽性對照、陰性對照和血清樣品，并在室溫培育2小時。在這些孔中加入與過氧化物酶偶聯(lián)的兔-抗豚鼠IgG抗體(100μl/孔)。2小時后，加入比色底物3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)(100μl/孔)，并顯色15分鐘。用參考標(biāo)準(zhǔn)(指定值為100 ELISA單位/ml)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線讀取對照和樣品中存在的對MCPS和OMV的抗體水平。表2和圖1A和1B列出了結(jié)果。
表2和圖1A和1B中所概括的結(jié)果表明，如分別用NmB和NmC IgG抗體滴定度測定所示聯(lián)合疫苗有免疫原性。
表2IgG NmC抗體應(yīng)答(GMT)

圖1A顯示包含NmB的疫苗組合物引發(fā)特異性抗-腦膜炎球菌B抗體應(yīng)答。圖1B顯示包含NmC的疫苗組合物引發(fā)特異性抗腦膜炎球菌C的抗體應(yīng)答。特別地當(dāng)存在MF59佐劑(第5組)時，由NmC偶聯(lián)物和NmB的組合所引發(fā)的抗體應(yīng)答，比單NmC偶聯(lián)物(第1組)或存在明礬下的NmC偶聯(lián)物與NmB組合(第4組)所引發(fā)的應(yīng)答明顯強許多。當(dāng)存在佐劑MF59時，聯(lián)合疫苗的抗體滴定度約增加6倍。
實施例2殺菌滴定度測試血清樣品對MenC菌株60E和MenB菌株44/76的補體-介導(dǎo)的殺菌滴定度。用各組混合的血清進行殺菌滴定度試驗。用人補體產(chǎn)生殺菌數(shù)據(jù)。
將試驗成分(即，緩沖液、抗體、補體和細菌)加到帶有蓋子的無菌96孔組織培養(yǎng)板(Nunc#167008)。在整個試驗中將這些平板保持于室溫。在每個孔中依次加入50μl Gey緩沖液(Gibco)(含有1％放射免疫分析級BSA(Sigma))、25μl稀釋的測試抗體、25μl細菌(用Gey緩沖液/1％BSA以1∶8000稀釋)。對照孔包括1)僅Gey緩沖液/1％BSA和細菌(用于確定在稀釋液中生物是否存活)；2)0時對照，含有75μl緩沖液、25μl熱滅活(56℃，30分鐘)人補體和25μl細菌；3)毒性對照，測試與緩沖液和細菌一起的20％和40％補體，以驗證補體源對測試菌株是無毒的。還用熱滅活的補體測試所有抗體樣品(用分析的最高濃度)，顯示存在抗體時集落形成單位(cfu)的減少是補體依賴性的。在加入所有試劑后，從各對照孔取22μl，通過讓樣品從平板的頂部流到底部，將其接種到Mueller-Hinton瓊脂平板上，來測定0分鐘時孔中的cfu。然后覆蓋此微量滴定板，用石蠟?zāi)っ芊猓⒃?7℃、4％CO2培養(yǎng)箱中緩慢地旋轉(zhuǎn)1小時。然后取出平板，將22μl各孔的樣品接種到Mueller-Hinton瓊脂上。37℃、4％CO2培育這些培養(yǎng)板約18小時。計數(shù)集落數(shù)并確定各測試孔的％存活率％存活率＝([第60分鐘時樣品孔的cfu]/[第0分鐘時熱滅活補體對照孔中的cfu]×100。記錄的殺菌滴定度是存活率為50％的那些。表3列出了單次試驗的結(jié)果。圖2A和2B也列出了結(jié)果，其中圖2B表示多次試驗的平均滴定度。
表3總結(jié)的結(jié)果表明，聯(lián)合疫苗引發(fā)高滴定度的對NmB和NmC的血清殺菌抗體。用MF59作為載體的聯(lián)合疫苗的殺菌NmC抗體的滴定度略高，但使用MF59對殺菌NmB滴定度基本沒影響。有趣的是，聯(lián)合疫苗的NmB殺菌滴定度比單用NmB疫苗高2到5倍。圖2A表明，由包含NmB的疫苗組合物引發(fā)的針對腦膜炎球菌B的抗體是殺菌的。圖2B表明，由包含NmC偶聯(lián)物的疫苗組合物引發(fā)的針對腦膜炎球菌C的抗體也是殺菌的。
表3


實施例3明礬和MF59佐劑的比較如實施例1和2那樣，將如上圖1A和圖1B所述的動物血清進行比較，并測試在明礬或MF59佐劑中的NmB/NmC偶聯(lián)物產(chǎn)生的MenC和MenB抗體應(yīng)答。表4列出了結(jié)果。

*僅測試混合血清**p≤0.001這些數(shù)據(jù)表明，在包含MF59佐劑的疫苗中針對腦膜炎球菌C的抗體應(yīng)答約高6倍。
實施例4聯(lián)合疫苗與單疫苗產(chǎn)生的應(yīng)答的比較如實施例1和2那樣，比較如上圖1A和1B所述的動物的血清，并將NmB/NmC偶聯(lián)物產(chǎn)生的MenC和MenB抗體應(yīng)答與明礬中的NmB單疫苗或NmC偶聯(lián)物單疫苗產(chǎn)生的抗體應(yīng)答相比較。表5列出了結(jié)果

*僅測試混合血清**p≤0.05這些數(shù)據(jù)表明，與各單疫苗(NmB或NmC偶聯(lián)物)引發(fā)的應(yīng)答相比，對NmB/NmC偶聯(lián)物疫苗各成分的抗體應(yīng)答沒有明顯差異。
實施例5其它抗原的添加添加針對其它致病生物的抗原(如NspA、HBsAg)，進一步優(yōu)化NmB/NmC聯(lián)合。觀察到針對NmB/NmC和針對其它抗原的良好免疫應(yīng)答。
實施例6NmB和NmC抗原混合物將菌株2996 MenB蛋白質(zhì)‘919’(如WO99/57280圖23及其SEQ ID 3069-3074)、‘287’(如WO99/57280的圖21及其SEQ ID 3103-3108)和‘ORF1’(如WO99/24578的實施例77；和WO99/55873)的三元混合物用于免疫接種小鼠。添加NmC偶聯(lián)物重復(fù)該試驗。將氫氧化鋁用作佐劑。
在殺菌試驗中測定的針對同源性菌株和異源MenB菌株的滴定度如下

可以理解本發(fā)明僅以示例的方式進行了描述，在本發(fā)明的范圍和精神內(nèi)還可進行許多改變。
權(quán)利要求
1.一種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)WO99/57289中公開的蛋白質(zhì)或其免疫原性片段。
2.如權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的成分(c)包含一種或多種選自以下的氨基酸序列如WO99/57280所述的2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98，100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132，134，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，164，166，168，170，172，174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，212，214，216，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，248，250，252，254，256，258，260，262，264，266，268，270，272，274，276，278，280，282，284，286，288，290，292，294，296，298，300，302，304，306，308，310，312，314，316，318，320，322，324，326，328，330，332，334，336，338，340，342，344，346，348，350，352，354，356，358，360，362，364，366，368，370，372，374，376，378，380，382，384，386，388，390，392，394，396，398，400，402，404，406，408，410，412，414，416，418，420，422，424，426，428，430，432，434，436，438，440，442，444，446，448，450，452，454，456，458，460，462，464，466，468，470，472，474，476，478，480，482，484，486，488，490，492，494，496，498，500，502，504，506，508，510，512，514，516，518，520，522，524，526，528，530，532，534，536，538，540，542，544，546，548，550，552，554，556，558，560，562，564，566，568，570，572，574，576，578，580，582，584，586，588，590，592，594，596，598，600，602，604，606，608，610，612，614，616，618，620，622，624，626，628，630，632，634，636，638，640，642，644，646，648，650，652，654，656，658，660，662，664，666，668，670，672，674，676，678，680，682，684，686，688，690，692，694，696，698，700，702，704，706，708，710，712，714，716，718，720，722，724，726，728，730，732，734，736，738，740，742，744，746，748，750，752，754，756，758，760，762，764，766，768，770，772，774，776，778，780，782，784，786，788，790，792，794，796，798，800，802，804，806，808，810，812，814，816，818，820，822，824，826，828，830，832，834，836，838，840，842，844，846，848，850，852，854，856，858，860，862，864，866，868，870，872，874，876，878，880，882，884，886，888，890，892，894，896，898，900，902，904，906，908，910，912，914，916，918，920，922，924，926，928，930，932，934，936，938，940，942，944，946，948，950，952，954，956，958，960，962，964，966，968，970，972，974，976，978，980，982，984，986，988，990，992，994，996，998，1000，1002，1004，1006，1008，1010，1012，1014，1016，1018，1020，1022，1024，1026，1028，1030，1032，1034，1036，1038，1040，1042，1044，1046，1048，1050，1052，1054，1056，1058，1060，1062，1064，1066，1068，1070，1072，1074，1076，1078，1080，1082，1084，1086，1088，1090，1092，1094，1096，1098，1100，1102，1104，1106，1108，1110，1112，1114，1116，1118，1120，1122，1124，1126，1128，1130，1132，1134，1136，1138，1140，1142，1144，1146，1148，1150，1152，1154，1156，1158，1160，1162，1164，1166，1168，1170，1172，1174，1176，1178，1180，1182，1184，1186，1188，1190，1192，1194，1196，1198，1200，1202，1204，1206，1208，1210，1212，1214，1216，1218，1220，1222，1224，1226，1228，1230，1232，1234，1236，1238，1240，1242，1244，1246，1248，1250，1252，1254，1256，1258，1260，1262，1264，1266，1268，1270，1272，1274，1276，1278，1280，1282，1284，1286，1288，1290，1292，1294，1296，1298，1300，1302，1304，1306，1308，1310，1312，1314，1316，1318，1320，1322，1324，1326，1328，1330，1332，1334，1336，1338，1340，1342，1344，1346，1348，1350，1352，1354，1356，1358，1360，1362，1364，1366，1368，1370，1372，1374，1376，1378，1380，1382，1384，1386，1388，1390，1392，1394，1396，1398，1400，1402，1404，1406，1408，1410，1412，1414，1416，1418，1420，1422，1424，1426，1428，1430，1432，1434，1436，1438，1440，1442，1444，1446，1448，1450，1452，1454，1456，1458，1460，1462，1464，1466，1468，1470，1472，1474，1476，1478，1480，1482，1484，1486，1488，1490，1492，1494，1496，1498，1500，1502，1504，1506，1508，1510，1512，1514，1516，1518，1520，1522，1524，1526，1528，1530，1532，1534，1536，1538，1540，1542，1544，1546，1548，1550，1552，1554，1556，1558，1560，1562，1564，1566，1568，1570，1572，1574，1576，1578，1580，1582，1584，1586，1588，1590，1592，1594，1596，1598，1600，1602，1604，1606，1608，1610，1612，1614，1616，1618，1620，1622，1624，1626，1628，1630，1632，1634，1636，1638，1640，1642，1644，1646，1648，1650，1652，1654，1656，1658，1660，1662，1664，1666，1668，1670，1672，1674，1676，1678，1680，1682，1684，1686，1688，1690，1692，1694，1696，1698，1700，1702，1704，1706，1708，1710，1712，1714，1716，1718，1720，1722，1724，1726，1728，1730，1732，1734，1736，1738，1740，1742，1744，1746，1748，1750，1752，1754，1756，1758，1760，1762，1764，1766，1768，1770，1772，1774，1776，1778，1780，1782，1784，1786，1788，1790，1792，1794，1796，1798，1800，1802，1804，1806，1808，1810，1812，1814，1816，1818，1820，1822，1824，1826，1828，1830，1832，1834，1836，1838，1840，1842，1844，1846，1848，1850，1852，1854，1856，1858，1860，1862，1864，1866，1868，1870，1872，1874，1876，1878，1880，1882，1884，1886，1888，1890，1892，1894，1896，1898，1900，1902，1904，1906，1908，1910，1912，1914，1916，1918，1920，1922，1924，1926，1928，1930，1932，1934，1936，1938，1940，1942，1944，1946，1948，1950，1952，1954，1956，1958，1960，1962，1964，1966，1968，1970，1972，1974，1976，1978，1980，1982，1984，1986，1988，1990，1992，1994，1996，1998，2000，2002，2004，2006，2008，2010，2012，2014，2016，2018，2020，2022，2024，2026，2028，2030，2032，2034，2036，2038，2040，2042，2044，2046，2048，2050，2052，2054，2056，2058，2060，2062，2064，2066，2068，2070，2072，2074，2076，2078，2080，2082，2084，2086，2088，2090，2092，2094，2096，2098，2100，2102，2104，2106，2108，2110，2112，2114，2116，2118，2120，2122，2124，2126，2128，2130，2132，2134，2136，2138，2140，2142，2144，2146，2148，2150，2152，2154，2156，2158，2160，2162，2164，2166，2168，2170，2172，2174，2176，2178，2180，2182，2184，2186，2188，2190，2192，2194，2196，2198，2200，2202，2204，2206，2208，2210，2212，2214，2216，2218，2220，2222，2224，2226，2228，2230，2232，2234，2236，2238，2240，2242，2244，2246，2248，2250，2252，2254，2256，2258，2260，2262，2264，2266，2268，2270，2272，2274，2276，2278，2280，2282，2284，2286，2288，2290，2292，2294，2296，2298，2300，2302，2304，2306，2308，2310，2312，2314，2316，2318，2320，2322，2324，2326，2328，2330，2332，2334，2336，2338，2340，2342，2344，2346，2348，2350，2352，2354，2356，2358，2360，2362，2364，2366，2368，2370，2372，2374，2376，2378，2380，2382，2384，2386，2388，2390，2392，2394，2396，2398，2400，2402，2404，2406，2408，2410，2412，2414，2416，2418，2420，2422，2424，2426，2428，2430，2432，2434，2436，2438，2440，2442，2444，2446，2448，2450，2452，2454，2456，2458，2460，2462，2464，2466，2468，2470，2472，2474，2476，2478，2480，2482，2484，2486，2488，2490，2492，2494，2496，2498，2500，2502，2504，2506，2508，2510，2512，2514，2516，2518，2520，2522，2524，2526，2528，2530，2532，2534，2536，2538，2540，2542，2544，2546，2548，2550，2552，2554，2556，2558，2560，2562，2564，2566，2568，2570，2572，2574，2576，2578，2580，2582，2584，2586，2588，2590，2592，2594，2596，2598，2600，2602，2604，2606，2608，2610，2612，2614，2616，2618，2620，2622，2624，2626，2628，2630，2632，2634，2636，2638，2640，2642，2644，2646，2648，2650，2652，2654，2656，2658，2660，2662，2664，2666，2668，2670，2672，2674，2676，2678，2680，2682，2684，2686，2688，2690，2692，2694，2696，2698，2700，2702，2704，2706，2708，2710，2712，2714，2716，2718，2720，2722，2724，2726，2728，2730，2732，2734，2736，2738，2740，2742，2744，2746，2748，2750，2752，2754，2756，2758，2760，2762，2764，2766，2768，2770，2772，2774，2776，2778，2780，2782，2784，2786，2788，2790，2792，2794，2796，2798，2800，2802，2804，2806，2808，2810，2812，2814，2816，2818，2820，2822，2824，2826，2828，2830，2832，2834，2836，2838，2840，2842，2844，2846，2848，2850，2852，2854，2856，2858，2860，2862，2864，2866，2868，2870，2872，2874，2876，2878，2880，2882，2884，2886，2888，2890，2892，2894，2896，2898，2900，2902，2904，2906，2908，2910，2912，2914，2916，2918，2920，2922，2924，2926，2928，2930，2932，2934，2936，2938，2940，2942，2944，2946，2948，2950，2952，2954，2956，2958，2960，2962，2964，2966，2968，2970，2972，2974，2976，2978，2980，2982，2984，2986，2988，2990，2992，2994，2996，2998，3000，3002，3004，3006，3008，3010，3012，3014，3016，3018和3020。
3.一種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)WO99/36544中公開的蛋白質(zhì)或其免疫原性片段。
4.如權(quán)利要求3所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的成分(c)包含一種或多種選自以下的氨基酸序列如WO99/36544所述的SEQ ID 2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，和90。
5.一種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)WO99/24578中公開的蛋白質(zhì)或其免疫原性片段。
6.如權(quán)利要求5所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的成分(c)包含一種或多種選自以下的氨基酸序列如WO99/24578所述的SEQ ID 2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98，100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132，134，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，164，166，168，170，172，174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，212，214，216，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，248，250，252，254，256，258，260，262，264，266，268，270，272，274，276，278，280，282，284，286，288，290，292，294，296，298，300，302，304，306，308，310，312，314，316，318，320，322，324，326，328，330，332，334，336，338，340，342，344，346，348，350，352，354，356，358，360，362，364，366，368，370，372，374，376，378，380，382，384，386，388，390，392，394，396，398，400，402，404，406，408，410，412，414，416，418，420，422，424，426，428，430，432，434，436，438，440，442，444，446，448，450，452，454，456，458，460，462，464，466，468，470，472，474，476，478，480，482，484，486，488，490，492，494，496，498，500，502，504，506，508，510，512，514，516，518，520，522，524，526，528，530，532，534，536，538，540，542，544，546，548，550，552，554，556，558，560，562，564，566，568，570，572，574，576，578，580，582，584，586，588，590，592，594，596，598，600，602，604，606，608，610，612，614，616，618，620，622，624，626，628，630，632，634，636，638，640，642，644，646，648，650，652，654，656，658，660，662，664，666，668，670，672，674，676，678，680，682，684，686，688，690，692，694，696，698，700，702，704，706，708，710，712，714，716，718，720，722，724，726，728，730，732，734，736，738，740，742，744，746，748，750，752，754，756，758，760，762，764，766，768，770，772，774，776，778，780，782，784，786，788，790，792，794，796，798，800，802，804，806，808，810，812，814，816，818，820，822，824，826，828，830，832，834，836，838，840，842，844，846，848，850，852，854，856，858，860，862，864，866，868，870，872，874，876，878，880，882，884，886，888，890，和892。
7.一種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)WO97/28273中公開的蛋白質(zhì)或其免疫原性片段。
8.如權(quán)利要求7所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的成分(c)包含WO97/28273的圖4或圖1 3所公開的蛋白質(zhì)。
9.一種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)WO96/29412中公開的蛋白質(zhì)或其免疫原性片段。
10.如權(quán)利要求9所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的成分(c)包含選自WO96/29412中公開的SEQ ID 1-8的氨基酸序列。
11.一種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)WO95/03413中公開的蛋白質(zhì)或其免疫原性片段。
12.如權(quán)利要求11所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的成分(c)包含選自WO95/03413中公開的SEQ ID 1-23的氨基酸序列。
13.一種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)WO99/31132中公開的蛋白質(zhì)或其免疫原性片段。
14.如權(quán)利要求13所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的成分(c)包含WO99/31132中公開的SEQ ID 2的氨基酸序列。
15.一種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)抗腦膜炎奈瑟球菌血清群A的保護性抗原。
16.一種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)抗腦膜炎奈瑟球菌血清群W的保護性抗原。
17.一種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)抗腦膜炎奈瑟球菌血清群Y的保護性抗原。
18.一種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)抗流感嗜血菌的保護性抗原。
19.一種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)抗肺炎球菌的保護性抗原。
20.如權(quán)利要求15、16、17、18或19所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的成分(c)是多糖抗原。
21.一種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)抗白喉的保護性抗原。
22.如權(quán)利要求21所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的成分(c)是白喉類毒素。
23.一種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)抗破傷風(fēng)的保護性抗原。
24.如權(quán)利要求23所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的成分(c)是破傷風(fēng)毒素。
25.一種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)抗百日咳的保護性抗原。
26.如權(quán)利要求25所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的成分(c)包含百日咳全毒素(PT)和絲狀凝血素(FHA)，還可任選地含有百日咳桿菌粘附素和/或凝集原2和3。
27.一種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)抗乙型肝炎病毒的保護性抗原。
28.如權(quán)利要求27所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的成分(c)是HBV表面抗原和/或HBV核心抗原。
29.一種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)抗幽門螺旋桿菌的保護性抗原。
30.如權(quán)利要求29所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的成分(c)是CagA、VacA、NAP、HopX、HopY和/或尿激酶。
31.一種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)抗腦膜炎奈瑟球菌血清群A的保護性抗原、抗腦膜炎奈瑟球菌血清群W的保護性抗原、抗腦膜炎奈瑟球菌血清群Y的保護性抗原、抗流感嗜血菌的保護性抗原、抗肺炎球菌的保護性抗原、抗白喉的保護性抗原、抗破傷風(fēng)的保護性抗原、抗百日咳的保護性抗原、抗乙型肝炎病毒的保護性抗原、和/或抗幽門螺旋桿菌的保護性抗原。
32.如以上任一權(quán)利要求所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的NmB外膜蛋白宜以蛋白脂質(zhì)體小泡存在。
33.一種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB蛋白919、287和/或ORF1的免疫原性組合物。
34.如以上任一權(quán)利要求所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的NmC寡糖偶聯(lián)于載體。
35.如權(quán)利要求34所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的載體是蛋白質(zhì)。
36.如權(quán)利要求35所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的載體是CRM197。
37.如以上任一權(quán)利要求所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含選自氫氧化鋁或MF59的載體。
38.一種包含以上任一權(quán)利要求所述的免疫原性組合物的疫苗。
全文摘要
國際專利申請WO99/61053公開了包含偶聯(lián)于載體的腦膜炎奈瑟球菌血清群C寡糖和腦膜炎奈瑟球菌血清群B外膜蛋白的免疫原性組合物。本申請公開了還可與其它奈瑟球菌蛋白和/或針對其它致病生物(如流感嗜血菌、DTP、HBV等)的保護性抗原進行組合。
文檔編號A61K39/116GK1507916SQ20031010467
公開日2004年6月30日 申請日期2000年11月29日 優(yōu)先權(quán)日1999年11月29日
發(fā)明者M·M·朱利亞尼, M·皮扎, R·拉普奧利, M M 朱利亞尼, 瞻呂 申請人:啟龍股份公司