專利名稱：作為組蛋白脫乙酰酶的新穎抑制劑的羰基氨基衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明有關(guān)具有組蛋白脫乙酰酶(HDAC)抑制酶活性的化合物。并有關(guān)其制法、含其的組合物、及其于活體內(nèi)及活體外抑制HDAC的用途及其作為藥物的用途，例如作為抑制增生性狀況如癌癥與牛皮癬的藥物的用途。
所有真核細(xì)胞中，染色質(zhì)中的基因組DNA與組蛋白結(jié)合形成核小體。每個(gè)核小體由兩個(gè)拷貝的各組蛋白H2A、H2B、H3與H4形成的蛋白質(zhì)八聚體組成。DNA環(huán)繞此蛋白質(zhì)核，組蛋白的堿性氨基酸與DNA的帶負(fù)電磷酸根交互作用。此等核組蛋白最常見(jiàn)的翻譯后修飾作用為保留的高堿性N-端賴氨酸殘基的ε-氨基的可逆性乙?；饔谩Ｓ筛?jìng)爭(zhēng)組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶與本文中稱為“HDAC”的組蛋白脫乙酰酶之間的動(dòng)態(tài)平衡建立組蛋白乙酰化作用的穩(wěn)定狀態(tài)。組蛋白乙?；饔门c脫乙酰化作用長(zhǎng)久以來(lái)即與轉(zhuǎn)錄控制相關(guān)聯(lián)。近來(lái)克隆出編碼不同組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶及組蛋白脫乙酰酶的基因提供組蛋白乙?；饔门c轉(zhuǎn)錄控制之間關(guān)系的可能解釋。組蛋白的可逆性乙?；饔每稍斐扇旧|(zhì)再模造并照此作為基因轉(zhuǎn)錄的控制機(jī)制。通常，組蛋白的過(guò)度乙酰化作用會(huì)促使基因表現(xiàn)，而組蛋白脫乙酰化作用則與轉(zhuǎn)錄阻抑相關(guān)。已知組蛋白乙酰基轉(zhuǎn)移酶具有作為轉(zhuǎn)錄輔激活物的作用，而組蛋白脫乙酰酶則屬于轉(zhuǎn)錄阻抑途徑。
組蛋白乙?；c脫乙?；g的動(dòng)態(tài)平衡系正常細(xì)胞生長(zhǎng)所必需。抑制組蛋白脫乙酰酶則可造成細(xì)胞周期停滯、細(xì)胞分化、細(xì)胞程序死亡及轉(zhuǎn)化表型的逆轉(zhuǎn)。因此，HDAC抑制劑在治療細(xì)胞增生疾病或狀況上具有極大醫(yī)療潛力(Marks等人，Nature ReviewsCancer 1194-202，2001)。
有關(guān)組蛋白脫乙酰酶(HDAC)的抑制劑研究顯示，此等酶的確在細(xì)胞增生及分化上扮演重要角色。抑制劑Trichostatin A(TSA)造成G1與G2期的細(xì)胞周期停滯，使不同細(xì)胞系的轉(zhuǎn)化表型逆轉(zhuǎn)，并誘導(dǎo)弗羅德白血病細(xì)胞及其他細(xì)胞分化。已有文獻(xiàn)指出，TSA(與N-辛二酰苯胺異羥肟酸SAHA)在小鼠體內(nèi)，可制抑細(xì)胞生長(zhǎng)，誘導(dǎo)終末分化，及防止腫瘤形成(Finnin等人，Nature，401188-193，1999)。
亦有文獻(xiàn)指出，TSA適用于治療纖維變性例如肝纖維變性與肝硬變(Geerts等人，1998年3月11日公告的歐洲專利申請(qǐng)EP 0 827742)。
2001年5月31日公告的專利申請(qǐng)WO 01/38322揭示除了別的以外，通式Cy-L1-Ar-Y1-C(O)-NH-Z的組蛋白脫乙酰酶抑制劑，并提供治療細(xì)胞增生疾病與狀況的組合物與方法。
2001年9月27日公告的專利申請(qǐng)WO 01/70675揭示如式Cy2- Cy1-X-Y1-W與Cy-S(O)2-NH-Y3-W的組蛋白脫乙酰酶抑制劑，并進(jìn)一步提供治療細(xì)胞增生疾病與狀況的組合物與方法。
所要解決的問(wèn)題為提供具有高酶活性的組蛋白脫乙酰酶抑制劑，亦需具備有利性質(zhì)，如細(xì)胞活性及提高的生體可用率，最好提高口服的生體可用率，且副作用很小或沒(méi)有。
本發(fā)明新穎化合物可解決上述問(wèn)題。本化合物的結(jié)構(gòu)式不同于現(xiàn)有技術(shù)。
本發(fā)明化合物展現(xiàn)優(yōu)越的活體外組蛋白脫乙酰酶抑制酶活性。本發(fā)明化合物在細(xì)胞活性上具有有利性質(zhì)，且針對(duì)抑制G1與G2關(guān)卡處的細(xì)胞周期進(jìn)展具有特異性質(zhì)(p21誘導(dǎo)力)。本發(fā)明化合物具有良好代謝穩(wěn)定性及高度生體可用率，更特定言的，其展現(xiàn)口服生體可用性。
本發(fā)明是有關(guān)式(I)化合物 其N-氧化物型、其藥理上可接受的加成鹽及立體化學(xué)異構(gòu)型，其中n為0、1、2、或3，且當(dāng)n為0時(shí)，則指的是直接鍵；m為0或1，且當(dāng)m為0時(shí)，則指的是直接鍵；t為0、1、2、3或4，且當(dāng)t為0時(shí)，則指的是直接鍵；各Q為氮或-C≤；各X為氮或-C≤；各Y為氮或-C≤；
R1為-C(O)NR8R9、-NHC(O)R10、-C(O)C1-5烷二基SR10、-NR11C(O)N(OH)R10、-NR11C(O)C1-6烷二基SR10、-NR11C(O)C＝N(OH)R10或另一個(gè)Zn-螯合基，其中R8與R9分別獨(dú)立選自氫、羥基、C1-6烷基、羥基C1-6烷基、氨基C1-6烷基或氨基芳基；R10為氫、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、芳基C1-6烷基、C1-6烷基吡嗪基、吡啶酮、吡咯烷酮或甲基咪唑基；R11為氫或C1-6烷基；R2為氫、鹵基、羥基、氨基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、三氟甲基、二(C1-6烷基)氨基、羥氨基或萘(naphtalenyl)磺酰吡嗪基；-L-為直接鍵或選自下列的二價(jià)基團(tuán)C1-6烷二基、C1-6烷二基氧、氨基、羰基、或氨基羰基；各R3分別獨(dú)立代表氫原子，且其中一個(gè)氫原子可被選自芳基的取代基代替；R4為氫、羥基、氨基、羥基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、芳基C1-6烷基、氨基羰基、羥羰基、氨基C1-6烷基、氨基羰基C1-6烷基、羥羰基C1-6烷基、羥氨基羰基、C1-6烷氧羰基、C1-6烷基氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；R5為氫、C1-6烷基、C3-10環(huán)烷基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或芳基； 為選自下列的基團(tuán)
其中各s分別為0、1、2、3、4或5；各R6與R7分別獨(dú)立選自氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵代C1-6烷基；三鹵代C1-6烷氧基；C1-6烷基；經(jīng)芳基與C3-10環(huán)烷基取代的C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷氧基C1-6烷氧基；C1-6烷基羰基；C1-6烷氧羰基；C1-6烷基磺酰基；氰基C1-6烷基；羥基C1-6烷基；羥基C1-6烷氧基；羥基C1-6烷基氨基；氨基C1-6烷氧基；二(C1-6烷基)氨基羰基；二(羥基C1-6烷基)氨基；(芳基)(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基氨基C1-6烷基；芳基磺?；环蓟酋；被?；芳氧基；芳氧基C1-6烷基；芳基C2-6鏈烯二基；二(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；氨基磺酰基氨基(C1-6烷基)氨基；氨基磺?；被?C1-6烷基)氨基C1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基磺?；被?C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基磺酰基氨基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；氰基；硫代苯基；
經(jīng)下列基團(tuán)取代的硫代苯基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、羥基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基磺酰基哌嗪基C1-6烷基、C1-6烷氧基哌啶基、C1-6烷氧基哌啶基C1-6烷基、嗎啉基C1-6烷基、羥基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、或二(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基；呋喃基；經(jīng)羥基C1-6烷基取代的呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；噁唑基；經(jīng)芳基與C1-6烷基取代的噁唑基；C1-6烷基三唑基；四唑基；吡咯烷基；吡咯基；哌啶基C1-6烷氧基；嗎啉基；C1-6烷基嗎啉基；嗎啉基C1-6烷氧基；嗎啉基C1-6烷基；嗎啉基C1-6烷基氨基；嗎啉基C1-6烷基氨基C1-6烷基；哌嗪基；C1-6烷基哌嗪基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷氧基；哌嗪基C1-6烷基；萘磺?；哙夯?；萘磺酰基哌啶基；萘磺酰基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基氨基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基氨基C1-6烷基；C1-6烷基哌嗪基磺?；话被酋；哙夯鵆1-6烷氧基；氨基磺?；哙夯?；氨基磺酰基哌嗪基C1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基磺?；哙夯?；二(C1-6烷基)氨基磺?；哙夯鵆1-6烷基；羥基C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；C1-6烷氧基哌啶基；C1-6烷氧基哌啶基C1-6烷基；哌啶基氨基C1-6烷基氨基；哌啶基氨基C1-6烷基氨基C1-6烷基；(C1-6烷基哌啶基)(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基氨基；(C1-6烷基哌啶基)(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基氨基C1-6烷基；羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；(羥基C1-6烷基)(C1-6烷基)氨基；(羥基C1-6烷基)(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；羥基C1-6烷基氨基C1-6烷基；二(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基；吡咯烷基C1-6烷基；吡咯烷基C1-6烷氧基；吡唑基；硫代吡唑基；經(jīng)選自C1-6烷基或三鹵代C1-6烷基中的兩個(gè)取代基取代的吡唑基；吡啶基；經(jīng)C1-6烷氧基、芳氧基或芳基取代的吡啶基；嘧啶基；四氫嘧啶基哌嗪基；四氫嘧啶基哌嗪基C1-6烷基；喹啉基；吲哚基；苯基；經(jīng)分別獨(dú)立選自下列的1、2或3個(gè)取代基取代的苯基鹵基、氨基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-4烷基、三氟甲基、三氟甲氧基、羥基C1-4烷氧基、C1-4烷基磺?；?、C1-4烷氧基C1-4烷氧基、C1-4烷氧羰基、氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基羰基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、氨基磺?；被?C1-4烷基)氨基、氨基磺?；被?C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基磺酰基氨基(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基磺酰基氨基(C1-4烷基)氨基C1-6烷基、氰基、哌啶基C1-4烷氧基、吡咯烷基C1-4烷氧基；氨基磺?；哙夯被酋；哙夯鵆1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基磺?；哙夯⒍?C1-4烷基)氨基磺?；哙夯鵆1-4烷基、羥基C1-4烷基哌嗪基、羥基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、C1-4烷氧基哌啶基、C1-4烷氧基哌啶基C1-4烷基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、(羥基C1-4烷基)(C1-4烷基)氨基、(羥基C1-4烷基)(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(羥基C1-4烷基)氨基、二(羥基C1-4烷基)氨基C1-4烷基、呋喃基、經(jīng)以下取代的呋喃基-CH＝CH-CH＝CH-、吡咯烷基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷氧基、嗎啉基、嗎啉基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷基、嗎啉基C1- 4烷基氨基、嗎啉基C1-4烷基氨基C1-4烷基、哌嗪基、C1-4烷基哌嗪基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷氧基、哌嗪基C1-4烷基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基氨基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基氨基C1-6烷基、四氫嘧啶基哌嗪基、四氫嘧啶基哌嗪基C1-4烷基、哌啶基氨基C1-4烷基氨基、哌啶基氨基C1-4烷基氨基C1-4烷基，(C1-4烷基哌啶基)(羥基C1-4烷基)氨基C1-4烷基氨基，(C1-4烷基哌啶基)(羥基C1-4烷基)氨基C1-4烷基氨基C1-4烷基，吡啶基C1-4烷氧基、羥基C1-4烷基氨基、羥基C1-4烷基氨基C1-4烷基，二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基氨基、氨基噻二唑基，氨基磺酰基哌嗪基C1-4烷氧基、或硫代苯基C1-4烷基氨基；各R6與R7可置于氮上替代氫；上述芳基為苯基，或經(jīng)一個(gè)或多個(gè)分別獨(dú)立選自鹵基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、三氟甲基、氰基或羥基羰基的取代基取代的苯基。
術(shù)語(yǔ)“組蛋白脫乙?；敢种苿毕抵缚膳c組蛋白脫乙酰酶交互作用且可抑制其活性，更特定言的抑制其酶活性的化合物。抑制組蛋白脫乙酰酶酶活性意指降低組蛋白脫乙酰酶脫除組蛋白的乙?；哪芰?。優(yōu)選，此等抑制作用為特異性，亦即組蛋白脫乙酰酶抑制劑降低組蛋白脫乙酰酶脫除組蛋白的乙酰基的能力時(shí)的濃度低于該抑制劑為了產(chǎn)生一些其他不相關(guān)的生物效果時(shí)所需的濃度。
如上文與下文中定義所使用的鹵基通指氟、氯、溴與碘；C1-4烷基指含有1至4個(gè)碳原子的直鏈與支鏈飽和烴基，例如甲基、乙基、丙基、丁基、1-甲基乙基、2-甲基丙基，等等；C1-6烷基包括C1-4烷基及含有5至6個(gè)碳原子的高級(jí)同系物，例如戊基、2-甲基-丁基、己基、2-甲基戊基，等等；C1-6烷二基指含有1至6個(gè)碳原子的二價(jià)直鏈與支鏈飽和烴基，例如亞甲基、1，2-乙二基、1，3-丙二基、1，4-丁二基、1，5-戊二基、1，6-己二基，及其分支的異構(gòu)體，如2-甲基戊二基、3-甲基戊二基、2，2-二甲基丁二基、2，3-二甲基丁二基，等等；三鹵代C1-6烷基指含有三個(gè)相同或相異鹵基取代基的C1-6烷基，例如三氟甲基；C2-6鏈烯二基指含有一個(gè)雙鍵及2至6個(gè)碳原子的二價(jià)直鏈與支鏈烴基，例如乙烯二基、2-丙烯二基、3-丁烯二基、2-戊烯二基、3-戊烯二基、3-甲基2-丁烯二基，等等；氨基芳基指經(jīng)氨基取代的芳基；及C3-10環(huán)烷基包括含有3至10個(gè)碳原子的環(huán)狀烴基，如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)戊烯基、環(huán)己基、環(huán)己烯基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、等等。
術(shù)語(yǔ)“另一個(gè)Zn-螯合基”指可與Zn-離子交互作用的基團(tuán)，其可存在于酶結(jié)合部位。
藥理上可接受的加成鹽包括藥理上可接受的酸加成鹽及藥理上可接受的堿加成鹽。如上述的藥理上可接受的酸加成鹽包括式(I)化合物可形成的具治療活性的無(wú)毒性酸加成鹽型。具有堿性性質(zhì)的式(I)化合物可通過(guò)將其堿型經(jīng)過(guò)適當(dāng)酸處理后，可轉(zhuǎn)化成其藥理上可接受的酸加成鹽。適當(dāng)?shù)乃岚ɡ鐭o(wú)機(jī)酸類，如氫鹵酸，例如鹽酸或氫溴酸；硫酸；硝酸；磷酸，等等酸類；或有機(jī)酸類，例如乙酸、三氟乙酸、丙酸、羥乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸(亦即丁二酸)、馬來(lái)酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、對(duì)甲苯磺酸、環(huán)己烷基氨基磺酸、水楊酸、對(duì)氨基-水楊酸、雙羥萘酸，等等酸類。
具有酸性性質(zhì)的式(I)化合物可通過(guò)將其酸型經(jīng)過(guò)適當(dāng)有機(jī)或無(wú)機(jī)堿處理后，轉(zhuǎn)化成其藥理上可接受的堿加成鹽。適當(dāng)?shù)膲A鹽型包括例如銨鹽、堿金屬與堿土金屬鹽，例如鋰、鈉、鉀、鎂、鈣鹽等等，與有機(jī)堿形成的鹽例如benzathine、N-甲基-D-葡糖胺、hydrabamine的鹽類，及與氨基酸(例如精氨酸、賴氨酸等等形成的鹽類。
術(shù)語(yǔ)“酸或堿加成鹽”亦包括式(I)化合物可形成的水合物及溶劑加成型。此等型式的實(shí)例為例如水合物與醇鹽，等等。
本文所采用術(shù)語(yǔ)“式(I)化合物的立體化學(xué)異構(gòu)型”指式(I)化合物可能具有的由相同原子按相同鍵順序組成但具有無(wú)法互換的不同立體結(jié)構(gòu)的所有可能化合物。除非另有說(shuō)明或指出，否則化合物的化學(xué)名稱包括該化合物可能出現(xiàn)的所有可能立體化學(xué)異構(gòu)型的混合物。該混合物可包含該化合物基本分子結(jié)構(gòu)的所有非對(duì)映異構(gòu)體與/或?qū)τ钞悩?gòu)體。呈純型或彼此混合物的式(I)化合物的所有立體化學(xué)異構(gòu)型均涵括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
式(I)化合物的N-氧化物型包括式(I)中一個(gè)或數(shù)個(gè)氮原子被氧化成所謂的N-氧化物的化合物，特定言的，式中一個(gè)或多個(gè)哌啶基、哌嗪基或噠嗪基的氮被N-氧化的N-氧化物。
有些式(I)化合物亦可呈其互變異構(gòu)型。此等型式雖然未明顯示于上式中，但亦包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
本文中無(wú)論何時(shí)使用“式(I)化合物”一詞時(shí)，意指還包括藥理上可接受的加成鹽及所有立體異構(gòu)型。
本文所采用術(shù)語(yǔ)“組蛋白脫乙酰酶”與“HDAC”意指可自組蛋白的N-末端賴氨酸殘基的ε-氨基上脫除乙?；拿缸迦褐械娜我环N。除非本文中另有說(shuō)明，否則“組蛋白”一詞意指來(lái)自任何物種的任何組蛋白的蛋白質(zhì)，包括H1、H2A、H2B、H3、H4與H5。人類HDAC蛋白質(zhì)或基因產(chǎn)物包括(但不限于)HDAC-1、HDAC-2、HDAC-3、HDAC-4、HDAC-5、HDAC-6、HDAC-7、HDAC-8、HDAC-9與HDAC-10。組蛋白脫乙酰酶亦可衍生自原蟲或真菌來(lái)源。
第一組值得注意的化合物包括式(I)中符合下列一項(xiàng)或多項(xiàng)限制的化合物
a)n為1；b)m為0或1；c)t為0、1或2；d)各Q為 e)R1為-C(O)NH(OH)；f)R2為氫或C1-6烷基；g)-L-為直接鍵；h)R4為氫；i)R5為氫；j) 為選自(a-1)、(a-20)、(a-25)、(a-27)、(a-28)、(a-29)、(a-41)或(a-42)的基團(tuán)；k)各s分別獨(dú)立為0、1、2或3；l)各R6分別獨(dú)立選自氫、鹵基、C1-6烷基或C1-6烷氧基。
第二組值得注意的化合物包括式(I)中符合下列一項(xiàng)或多項(xiàng)限制的化合物a)n為1；b)為0或1；c)t為0、1或2；d)各Q為 e)R1為-C(O)NH(OH)；f)R2為氫；g)-L-為直接鍵；h)R4為氫；i)R5為氫；j) 為選自(a-1)、(a-20)、(a-25)、(a-27)、(a-28)、(a-29)、(a-41)或(a-42)的基團(tuán)；k)各s分別獨(dú)立為0、1、2或3；l)各R6分別獨(dú)立選自氫、鹵基、C1-6烷基或C1-6烷氧基。
第三組值得注意的化合物包括式(I)中R1為-C(O)NH(OH)的化合物。
第四組值得注意的化合物包括式(I)中R1為-C(O)NH(OH)且-L-為直接鍵的化合物。
第五組值得注意的化合物包括式(I)中R1為-C(O)NH(OH)且R2為氫的化合物。
第六組值得注意的化合物包括式(I)中R1為-C(O)NH(OH)，R2為氫，且-L-為直接鍵的化合物。
第七組值得注意的化合物包括式(I)中符合下列一項(xiàng)或多項(xiàng)限制的化合物a)t為0；b)m為0；c)R1為-C(O)NR8R9、-C(O)C1-6烷二基SR10、-NR11C(O)N(OH)R10、-NR11C(O)C1-6烷二基SR10、-NR11C(O)C＝N(OH)R10、或另一個(gè)Zn-螯合基，其中R8與R9分別獨(dú)立選自氫、羥基、羥基C1-6烷基或氨基C1-6烷基；d)R2為氫、鹵基、羥基、氨基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、三氟甲基或二(C1-6烷基)氨基；e)-L-為直接鍵或選自下列的二價(jià)基團(tuán)C1-6烷二基、C1-6烷二基氧、氨基或羰基；f)R4為氫、羥基、氨基、羥基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、芳基C1-6烷基、氨基羰基、氨基C1-6烷基、C1-6烷基氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；g)R5為氫；h) 為選自下列的基團(tuán)(a-1)，(a-3)，(a-4)，(a-5)，(a-6)，(a-7)，(a-8)，(a-9)，(a-10)，(a-11)，(a-12)，(a-13)，(a-14)，(a-15)，(a-16)，(a-17)，(a-18)，(a-19)，(a-20)，(a-21)，(a-22)，(a-23)，(a-24)，(a-25)，(a-26)，(a-28)，(a-29)，(a-30)，(a-31)，(a-32)，(a-33)，(a-34)，(a-35)，(a-36)，(a-37)，(a-38)，(a-39)，(a-40)，(a-41)，(a-42)，(a-44)，(a-45)，(a-46)，(a-47)，(a-48)或(a-51)；i)各s分別為0、1、2、3或4；j)R6為氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵代C1-6烷基；三鹵代C1-6烷氧基；C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷基羰基；C1-6烷氧羰基；C1-6烷基磺?；?；羥基C1-6烷基；芳氧基；二(C1-6烷基)氨基；氰基；硫代苯基；呋喃基；經(jīng)羥基C1-6烷基取代的呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；噁唑基；經(jīng)芳基與C1-6烷基取代的噁唑基；C1-6烷基三唑基；四唑基；吡咯烷基；吡咯基；嗎啉基；C1-6烷基嗎啉基；哌嗪基；C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷基哌嗪基；C1-6烷氧基哌啶基；吡唑基；經(jīng)選自C1-6烷基或三鹵代C1-6烷基中的一或兩個(gè)取代基取代的吡唑基；吡啶基；經(jīng)C1-6烷氧基、芳氧基或芳基取代的吡啶基；嘧啶基；喹啉基、吲哚基；苯基；或經(jīng)分別獨(dú)立選自鹵基、C1-6烷基、C1-6烷氧基或三氟甲基中的1或2個(gè)取代基取代的苯基；k)R7為氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵代C1-6烷基；三鹵代C1-6烷氧基；C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷基羰基；C1-6烷氧羰基；C1-6烷基磺?；?；羥基C1-6烷基；芳氧基；二(C1-6烷基)氨基；氰基；吡啶基；苯基；或經(jīng)分別獨(dú)立選自鹵基、C1-6烷基、C1-6烷氧基或三氟甲基中的1或2個(gè)取代基取代的苯基。
第八組值得注意的化合物包括式(I)中符合下列一項(xiàng)或多項(xiàng)限制的化合物a)R8與R9分別獨(dú)立選自氫、羥基、羥基C1-6烷基、氨基C1-6烷基或氨基芳基；b)R5為氫、C1-6烷基、C3-10環(huán)烷基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；c) 為選自下列的基團(tuán)(a-1)，(a-2)，(a-3)，(a-4)，(a-5)，(a-6)，(a-7)，(a-8)，(a-9)，(a-10)，(a-11)，(a-12)，(a-13)，(a-14)，(a-15)，(a-16)，(a-17)，(a-18)，(a-19)，(a-20)，(a-21)，(a-22)，(a-23)，(a-24)，(a-25)，(a-26)，(a-27)，(a-28)，(a-29)，(a-30)，(a-31)，(a-32)，(a-33)，(a-34)，(a-35)，(a-36)，(a-37)，(a-38)，(a-39)，(a-40)，(a-41)，(a-42)(a-43)或(a-44)；d)各R6與R7分別獨(dú)立選自氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵代C1-6烷基；三鹵代C1-6烷氧基；C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷氧基C1-6烷氧基；C1-6烷基羰基、C1-6烷基磺?；?；氰基C1-6烷基；羥基C1-6烷基；羥基C1-6烷氧基；羥基C1-6烷基氨基；氨基C1-6烷氧基；二(C1-6烷基)氨基羰基；二(羥基C1-6烷基)氨基；芳基(C1-6烷基)氨基；二(C1- 6烷基)氨基C1-6烷氧基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基氨基；芳基磺?；环蓟酋；被环佳趸环蓟鵆2-6鏈烯二基；二(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；氰基；硫代苯基；經(jīng)下列基團(tuán)取代的硫代苯基二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基或二(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基；呋喃基；咪唑基；C1-6烷基三唑基；四唑基；吡咯烷基；哌啶基C1-6烷氧基；嗎啉基；C1-6烷基嗎啉基；嗎啉基C1-6烷氧基；嗎啉基C1-6烷基；C1-6烷基哌嗪基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷氧基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；C1-6烷基哌嗪基磺酰基；氨基磺?；哙夯鵆1-6烷氧基；氨基磺?；哙夯?；氨基磺?；哙夯鵆1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基磺?；哙夯欢?C1-6烷基)氨基磺?；哙夯鵆1-6烷基；羥基C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；C1-6烷氧基哌啶基；C1-6烷氧基哌啶基C1-6烷基；羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；(羥基C1-6烷基)(C1-6烷基)氨基；(羥基C1-6烷基)(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；吡咯烷基C1-6烷氧基；吡唑基；硫代吡唑基；經(jīng)選自C1-6烷基或三鹵代C1-6烷基中兩個(gè)取代基取代的吡唑基；吡啶基；經(jīng)C1-6烷氧基或芳基取代的吡啶基；嘧啶基；喹啉基；吲哚基；苯基；經(jīng)分別獨(dú)立選自下列1、2或3個(gè)取代基取代的苯基鹵基、氨基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-4烷基、三氟甲基、三氟甲氧基、羥基C1-4烷氧基、C1-4烷氧基C1-4烷氧基、氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、哌啶基C1-4烷氧基、吡咯烷基C1-4烷氧基、氨基磺?；哙夯?、氨基磺?；哙夯鵆1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基磺?；哙夯?、二(C1-4烷基)氨基磺酰基哌嗪基C1-4烷基、羥基C1-4烷基哌嗪基、羥基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、C1-4烷氧基哌啶基、C1-4烷氧基哌啶基C1-4烷基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、(羥基C1-4烷基)(C1-4烷基)氨基、(羥基C1-4烷基)(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷基、C1-4烷基哌嗪基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷氧基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、羥基C1-4烷基氨基、二(羥基C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基氨基、氨基噻二唑基、氨基磺?；哙夯鵆1-4烷氧基、或硫代苯基C1-4烷基氨基。
一組優(yōu)選化合物系由式(I)中如下說(shuō)明的化合物組成；R8與R9分別獨(dú)立選自氫、羥基、羥基C1-6烷基、氨基C1-6烷基或氨基芳基；R5為氫、C1-6烷基、C3-10環(huán)烷基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基； 為選自下列的基團(tuán)(a-1)，(a-2)，(a-3)，(a-4)，(a-5)，(a-6)，(a-7)，(a-8)，(a-9)，(a-10)，(a-11)，(a-12)，(a-13)，(a-14)，(a-15)，(a-16)，(a-17)，(a-18)，(a-19)，(a-20)，(a-21)，(a-22)，(a-23)，(a-24)，(a-25)，(a-26)，(a-27)，(a-28)，(a-29)，(a-30)，(a-31)，(a-32)，(a-33)，(a-34)，(a-35)，(a-36)，(a-37)，(a-38)，(a-39)，(a-40)，(a-41)，(a-42)(a-43)或(a-44)；及各R6與R7分別獨(dú)立選自氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵代C1-6烷基；三鹵代C1-6烷氧基；C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷氧基C1-6烷氧基；C1-6烷基羰基、C1-6烷基磺?；?；氰基C1-6烷基；羥基C1-6烷基；羥基C1-6烷氧基；羥基C1-6烷基氨基；氨基C1-6烷氧基；二(C1-6烷基)氨基羰基；二(羥基C1-6烷基)氨基；芳基(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基氨基；芳基磺?；?；芳基磺酰基氨基；芳氧基；芳基C2-6鏈烯二基；二(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；氰基；硫代苯基；經(jīng)下列基團(tuán)取代的硫代苯基二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基或二(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基；呋喃基；咪唑基；C1-6烷基三唑基；四唑基；吡咯烷基；哌啶基C1-6烷氧基；嗎啉基；C1-6烷基嗎啉基；嗎啉基C1-6烷氧基；嗎啉基C1-6烷基；C1-6烷基哌嗪基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷氧基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；C1-6烷基哌嗪基磺?；?；氨基磺?；哙夯鵆1-6烷氧基；氨基磺?；哙夯话被酋；哙夯鵆1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基磺酰基哌嗪基；二(C1-6烷基)氨基磺?；哙夯鵆1-6烷基；羥基C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；C1-6烷氧基哌啶基；C1-6烷氧基哌啶基C1-6烷基；羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；(羥基C1-6烷基)(C1-6烷基)氨基；(羥基C1-6烷基)(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；吡咯烷基C1-6烷氧基；吡唑基；硫代吡唑基；經(jīng)選自C1-6烷基或三鹵代C1-6烷基中兩個(gè)取代基取代的吡唑基；吡啶基；經(jīng)C1-6烷氧基或芳基取代的吡啶基；嘧啶基；喹啉基；吲哚基；苯基；經(jīng)分別獨(dú)立選自下列1、2或3個(gè)取代基取代的苯基鹵基、氨基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-4烷基、三氟甲基、三氟甲氧基、羥基C1-4烷氧基、C1-4烷氧基C1-4烷氧基、氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、哌啶基C1-4烷氧基、吡咯烷基C1-4烷氧基、氨基磺酰基哌嗪基、氨基磺?；哙夯鵆1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基磺?；哙夯?、二(C1-4烷基)氨基磺?；哙夯鵆1-4烷基、羥基C1-4烷基哌嗪基、羥基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、C1-4烷氧基哌啶基、C1-4烷氧基哌啶基C1-4烷基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、(羥基C1-4烷基)(C1-4烷基)氨基、(羥基C1-4烷基)(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷基、C1-4烷基哌嗪基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷氧基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、羥基C1-4烷基氨基、二(羥基C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基氨基、氨基噻二唑基、氨基磺?；哙夯鵆1-4烷氧基、或硫代苯基C1-4烷基氨基。
另一組優(yōu)選化合物系由式(I)中如下說(shuō)明的化合物組成其中t為0；m為0；R1為-C(O)NR8R9、-C(O)C1-6烷二基SR10、-NR11C(O)N(OH)R10、-NR11C(O)C1-6烷二基SR10、-NR11C(O)C＝N(OH)R10或另一個(gè)Zn螯合基，其中R8與R9分別獨(dú)立選自氫、羥基、羥基C1-6烷基或氨基C1-6烷基；R2為氫、鹵基、羥基、氨基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、三氟甲基或二(C1-6烷基)氨基；-L-為直接鍵或選自下列的二價(jià)基團(tuán)C1-6烷二基、C1-6烷二基氧、氨基或羰基；R4為氫、羥基、氨基、羥基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、芳基C1-6烷基、氨基羰基、氨基C1-6烷基、C1-6烷基氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；R5為氫； 為選自下列的基團(tuán)(a-1)，(a-3)，(a-4)，(a-5)，(a-6)，(a-7)，(a-8)，(a-9)，(a-10)，(a-11)，(a-12)，(a-13)，(a-14)，(a-15)，(a-16)，(a-17)，(a-18)，(a-19)，(a-20)，(a-21)，(a-22)，(a-23)，(a-24)，(a-25)，(a-26)，(a-28)，(a-29)，(a-30)，(a-31)，(a-32)，(a-33)，(a-34)，(a-35)，(a-36)，(a-37)，(a-38)，(a-39)，(a-40)，(a-41)，(a-42)，(a-44)，(a-45)，(a-46)，(a-47)，(a-48)或(a-51)；各s分別為0、1、2、3或4；R6為氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵代C1-6烷基；三鹵代C1-6烷氧基；C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷基羰基；C1-6烷氧羰基；C1-6烷基磺?；?；羥基C1-6烷基；芳氧基；二(C1-6烷基)氨基；氰基；硫代苯基；呋喃基；經(jīng)羥基C1-6烷基取代的呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；噁唑基；經(jīng)芳基與C1-6烷基取代的噁唑基；C1-6烷基三唑基；四唑基；吡咯烷基；吡咯基；嗎啉基；C1-6烷基嗎啉基；哌嗪基；C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷基哌嗪基；C1-6烷氧基哌啶基；吡唑基；經(jīng)選自C1-6烷基或三鹵代C1-6烷基中1或2個(gè)取代基取代的吡唑基；吡啶基；經(jīng)C1-6烷氧基或芳基取代的吡啶基；嘧啶基；喹啉基、吲哚基；苯基；或經(jīng)分別獨(dú)立選自鹵基、C1-6烷基、C1-6烷氧基或三氟甲基中的1或2個(gè)取代基取代的苯基；且R7為氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵代C1-6烷基；三鹵代C1-6烷氧基；C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷基羰基；C1-6烷氧羰基；C1-6烷基磺酰基；羥基C1-6烷基；芳氧基；二(C1-6烷基)氨基；氰基；吡啶基；苯基；或經(jīng)分別獨(dú)立選自鹵基、C1-6烷基、C1-6烷氧基或三氟甲基中的1或2個(gè)取代基取代的苯基；一組更優(yōu)選化合物系由式(I)中如下說(shuō)明的化合物組成其中n為1；m為0或1；t為0、1或2；各Q為-C≤；R1為-C(O)NH(OH)；R2為氫或C1-6烷基；-L-為直接鍵；R4為氫；R5為氫； 為選自(a-1)、(a-20)、(a-25)、(a-27)、(a-28)、(a-29)、(a-41)或(a-42)的基團(tuán)；各s分別獨(dú)立為0、1或2；且各R6分別獨(dú)立選自氫、鹵基、C1-6烷基或C1-6烷氧基。
另一組還更佳化合物系由該等式(I)中如下說(shuō)明的化合物組成；其中n為1；m為0或1；t為0、1或2；各Q為-C≤；R1為-C(O)NH(OH)；R2為氫或；-L-為直接鍵；R4為氫；R5為氫； 為選自(a-1)、(a-20)、(a-27)、(a-28)、(a-29)、(a-41)或(a-42)的基團(tuán)；各s分別獨(dú)立為0、1或2；且各R6分別獨(dú)立選自氫、鹵基、C1-6烷基或C1-6烷氧基。
最優(yōu)選化合物為No.3化合物。
式(I)化合物及其藥理上可接受的鹽與N-氧化物及立體化學(xué)異構(gòu)型可依一般方式制備。其一般合成途徑包括例如a)式(I)中R1為-C(O)NH(OH)的異羥肟酸(稱為式(I-a)化合物)的制法可由式(II)中間體與適當(dāng)酸，例如三氟乙酸(CF3COOH)反應(yīng)。該反應(yīng)系于適當(dāng)溶劑中進(jìn)行，例如甲醇。
b)式(II)中間體的制法可由式(III)中間體與式(IV)中間體于適當(dāng)試劑的存在下反應(yīng)，如N’-(乙基carbonimicloyl)-N，N-二甲基-1，3-丙二胺單鹽酸鹽(EDC)與1-羥基-1H-苯并三唑(HOBT)。該反應(yīng)可于合適溶劑中進(jìn)行，如DCM與THF的混合物。
c)式(III)中間體的制法可由式(V)中間體與適當(dāng)堿(如NaOH)，于合適溶劑的存在下反應(yīng)，如乙醇。
式(I)化合物亦可使用固相合成技術(shù)方便地制備。通常，固相合成法涉及由中間體于合成法中與聚合物載體反應(yīng)。此由聚合物承載的中間體可再進(jìn)行許多合成步驟。每一步驟之后，過(guò)濾樹(shù)脂，以各種溶劑洗滌數(shù)次，以除去雜質(zhì)。每一步驟中，樹(shù)脂可以拆開(kāi)，以在下一個(gè)步驟中與不同中間體反應(yīng)，以合成大量化合物。流程中最后一個(gè)步驟之后，以試劑或方法處理樹(shù)脂以從樣本上斷裂樹(shù)脂。固相化學(xué)中所使用技術(shù)的更詳細(xì)說(shuō)明示于例如“The Combinatorial Index”(B.Bunin，Academic Press)及Novabiochem′s 1999 Catalogue &Peptide Synthesis Handbook(瑞士Novabiochem AG)，其內(nèi)容已以引用的方式引入本文中。
式(I)化合物及一些中間體在其結(jié)構(gòu)中具有至少一個(gè)致立體中心。此致立體中心可呈R或S構(gòu)型。
依上述制法制備的式(I)化合物可以為對(duì)映異構(gòu)體的外消旋混合物，其可依現(xiàn)有技術(shù)已知的拆分法彼此分離。式(I)的外消旋化合物可經(jīng)由與合適的手性酸反應(yīng)而轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的非對(duì)映異構(gòu)鹽型。該非對(duì)映異鹽型再經(jīng)例如選擇性或分級(jí)結(jié)晶法分離，使用堿釋出對(duì)映異構(gòu)體。另一種分離式(I)化合物的對(duì)映異構(gòu)型的方法涉及使用手性固定相進(jìn)行液相色譜。若該反應(yīng)為立體專一性反應(yīng)時(shí)，該純立體化學(xué)異構(gòu)型亦可衍生自適當(dāng)起始物質(zhì)的相應(yīng)純立體化學(xué)異構(gòu)型。若需要特定的立體異構(gòu)體時(shí)，最好以立體專一性制法合成該化合物。此等方法最好使用對(duì)映異構(gòu)純的起始物質(zhì)。
式(I)化合物、其藥理上可接受的酸加成鹽及立體異構(gòu)型具有組蛋白脫乙酰酶(HDAC)抑制效果的有價(jià)值的藥物性質(zhì)。
本發(fā)明提供一種抑制細(xì)胞(包括轉(zhuǎn)化細(xì)胞)異常生長(zhǎng)的方法，其系給藥有效量的本發(fā)明化合物。細(xì)胞的異常生長(zhǎng)指細(xì)胞不依賴于正常的調(diào)節(jié)機(jī)制生長(zhǎng)(比如，喪失接觸抑制作用)。其包括直接造成癌細(xì)胞生長(zhǎng)停滯、終末分化及/或細(xì)胞程序死亡，及間接抑制腫瘤的新血管形成來(lái)抑制腫瘤生長(zhǎng)。
本發(fā)明亦提供一種抑制腫瘤生長(zhǎng)的方法，其系對(duì)有此治療需要的受試者例如哺乳動(dòng)物(更特定言的人類)給藥有效量的本發(fā)明化合物。特定言之，本發(fā)明提供一種抑制腫瘤生長(zhǎng)的方法，其系給藥有效量的本發(fā)明化合物?？墒芤种频哪[瘤實(shí)例(但不限于)肺癌(比如腺癌，并包括非小細(xì)胞性肺癌)、胰癌(例如胰管癌，如，外分泌胰癌)、結(jié)腸癌(例如結(jié)腸直腸癌，例如結(jié)腸腺癌與結(jié)腸腺瘤)、前列腺癌包括晚期疾病、淋巴譜系血細(xì)胞生成腫瘤(例如急性淋巴細(xì)胞性白血病、B-細(xì)胞淋巴瘤、伯基氏淋巴瘤)、骨髓白血病(例如急性骨髓白血病(AML))、甲狀腺濾泡癌、脊髓發(fā)育不良綜合征(MDS)、起因間質(zhì)的腫瘤(例如纖維肉瘤與橫紋肌肉瘤)、黑素瘤、惡性畸胎瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、良性皮膚腫瘤(例如大角化棘皮瘤)、乳腺癌(例如晚期乳腺癌)、腎癌、卵巢癌、膀胱癌、與表皮癌。
根據(jù)本發(fā)明化合物可用于其他醫(yī)療目的，例如a)在治療癌癥的腫瘤放射法之前、期間或之后給藥根據(jù)本發(fā)明化合物，使腫瘤對(duì)放射療法致敏；b)治療關(guān)節(jié)病與骨病狀況，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、青年期類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)、多關(guān)節(jié)炎、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)強(qiáng)直性脊椎炎與全身性紅斑狼瘡；
c)抑制平滑肌細(xì)胞增生，包括血管增生癥、動(dòng)脈粥樣硬化及再狹窄；d)治療炎性狀況與皮膚狀況，如潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩氏病、過(guò)敏性鼻炎、移植物抗宿主病、結(jié)膜炎、氣喘、ARDS、貝賽特氏病、移植排斥、uticaria、過(guò)敏性皮炎、局限性脫發(fā)、硬皮病、疹病、濕疹、皮膚肌炎、痤瘡、糖尿病、全身性紅斑狼瘡、川崎氏病、多發(fā)性硬化、肺氣腫、囊性纖維變性和慢性支氣管炎；e)治療子宮內(nèi)膜異位、子宮肌瘤、功能性子宮出血及子宮內(nèi)膜增生。
f)治療眼血管形成，包括影響視網(wǎng)膜與脈絡(luò)膜血管的血管??；g)治療心機(jī)能障礙；h)抑制免疫抑制狀況，如治療HIV感染；i)治療腎機(jī)能障礙；j)阻抑內(nèi)分泌紊亂；k)抑制糖原異生機(jī)能障礙；l)治療神經(jīng)病變，例如帕金森氏病或造成認(rèn)知障礙的神經(jīng)病變，例如阿爾茨海默氏病或與多谷酰胺有關(guān)的神經(jīng)元??；m)抑制神經(jīng)肌肉病變，例如肌萎縮性側(cè)索硬化；n)治療脊髓病性肌萎縮；o)治療易于通過(guò)增強(qiáng)基因表達(dá)而治療的其他病理狀況；p)增強(qiáng)基因療法。
因此，本發(fā)明揭示以式(I)化合物作為藥物的用途及以式(I)化合物制造藥物供治療上述一種或多種狀況的用途。
式(I)化合物、其藥理上可接受的酸加成鹽及立體異構(gòu)型基于其可用于生物樣本中，檢測(cè)或鑒定HDAC，而具有有價(jià)值的診斷性質(zhì)，其包括檢測(cè)或測(cè)定有標(biāo)記的化合物與HDAC之間復(fù)合體的形成。
該檢測(cè)或鑒定法可使用標(biāo)記了如放射性同位素、酶、熒光物質(zhì)、發(fā)光物質(zhì)，等等的標(biāo)記試劑的化合物。放射性同位素實(shí)例包括125I、131I、3H與14C。酶的檢測(cè)通常與適當(dāng)?shù)孜锝Y(jié)合后，再催化可檢測(cè)的反應(yīng)。其實(shí)例包括例如β-半乳糖甙酶、β-葡糖苷酶、堿性磷酸酶、過(guò)氧化酶與蘋果酸脫氫酶，以辣根過(guò)氧化酶優(yōu)選。發(fā)光物質(zhì)包括例如魯米諾及魯米諾衍生物、熒光素、水母發(fā)光蛋白與熒光素酶。
生物樣本的定義為體組織或體液。體液實(shí)例為腦脊液、血液、血漿、血清、尿液、痰、唾液，等等。
就其實(shí)用的藥療性質(zhì)而言，本化合物可調(diào)制成不同的給藥治療型。
為了制備本發(fā)明的藥物組合物，使用有效量的堿或酸加成鹽型特定化合物作為活性成分，與藥理上可接受的載體均勻混合，該載體可呈多種不同形式，取決于投藥所需制劑型式而定。此等藥物組合物最好呈單位劑量，其適合，優(yōu)選針對(duì)例如經(jīng)口、直腸、經(jīng)皮投藥或胃腸外注射給藥。例如制備口服劑型的組合物時(shí)，任何常用的醫(yī)藥介質(zhì)均可使用，例如水、二醇類、油類、醇類、等等，可用于制備口服用液體制劑，如懸液、糖漿、酏劑與溶液；或固態(tài)載體如淀粉、糖類、高嶺土、潤(rùn)滑劑、粘合劑、崩解劑，等等，可用于制備散劑、丸劑、膠囊、與片劑。
由于片劑與膠囊方便投藥，因此代表最有利的口服單位劑型，此時(shí)當(dāng)然使用固態(tài)藥物載體。胃腸外組合物中的載體通常包括無(wú)菌水，至少占大部分，但亦可包含其他成份，例如有助于溶解的成份。可制備注射液，例如其中載體則包括鹽水溶液、葡萄糖溶液或鹽水與葡萄糖溶液的混合物。亦可制備注射用懸液，此時(shí)則可使用適當(dāng)液態(tài)載體、懸浮劑，等等。適合經(jīng)皮膚投藥的組合物中，載體可視需要包含滲透加強(qiáng)劑及/或合適的潤(rùn)濕劑，可視需要與任何性質(zhì)的少量合適添加劑組合，該添加劑不對(duì)皮膚引起顯著的不良效應(yīng)。此等添加劑可促進(jìn)投藥至皮膚及/或可能有助于制備所需組合物。此等組合物可依各種方法投藥，例如經(jīng)皮膏藥、滴劑(spot-on)、或軟膏。
特別有利的是以劑量單位型調(diào)配上述藥物組合物，以方便投藥且劑量一致性。本說(shuō)明書與權(quán)利要求所使用的單位劑型指物理上分開(kāi)適合作為單位劑量的單位，每單位包含經(jīng)計(jì)算可產(chǎn)生所需治療效果的預(yù)定量活性成分，與所需的藥物載體組合。此等單位劑型實(shí)例為片劑(包括刻痕或包衣片劑)、膠囊、丸劑、散劑包、糯米紙囊劑、注射用溶液或懸液、滿茶匙劑，滿大湯匙劑，等等，及分開(kāi)的多重劑型。
本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易即可由下文出示的試驗(yàn)結(jié)果決定有效量。通常，治療有效量預(yù)期為每公斤體重0.005毫克至100毫克，特定言之每公斤體重0.005毫克至10毫克。適宜的是在一天內(nèi)將所需劑量分成2、3、4或更多個(gè)亞劑量按適當(dāng)間隔給藥。該亞劑量可調(diào)配成單位劑型，例如每單位劑型包含0.5至500毫克，特定言之10至500毫克活性成分。
本發(fā)明另一方面，預(yù)期HDAC-抑制劑與其它抗癌劑的組合，尤其用為藥物，更具體言之，用于治療癌癥或相關(guān)疾病。
治療上述狀況時(shí)，本發(fā)明化合物宜用于與一種或多種其他醫(yī)藥劑組合，更特定言之，與其他抗癌劑組合?？拱﹦┑膶?shí)例為-鉑配位化合物，例如順鉑，碳化鉑或oxalyplatin；-紫杉烷(taxane)化合物，例如paclitaxel或docetaxel；-拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑，如喜樹(shù)堿(camptothecin)化合物，例如irinotecan或topotecan；-拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑，如抗腫瘤鬼臼毒素衍生物，例如etoposide或teniposide；-抗腫瘤長(zhǎng)春花生物堿，例如長(zhǎng)春花堿、長(zhǎng)春花新堿或vinorelbine；-抗腫瘤核苷衍生物，例如5-氟尿嘧啶、gemcitabine或capecitabine；-烷基化劑，如氮芥或亞硝基脲，例如環(huán)磷酰胺、苯丁酸氮芥、亞硝脲氮芥或羅氮介；-抗腫瘤蒽環(huán)類抗生素衍生物，例如紅比霉素、阿霉素、去甲氧柔紅霉素或mitoxantrone；-HER2抗體，例如trastuzumab；-雌激素受體拮抗劑或選擇性雌激素受體調(diào)制劑，例如它莫西芬、托若米芬、droloxifene、faslodex或raloxifene；-芳香酶(aromatase)抑制劑，如exemestane、anastrozole、letrazole與vorozole；-分化劑，如視黃醛衍生物、維生素D與視黃酸代謝抑制劑(RAMBA)例如阿克特恩；-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑，例如氮胞苷；-激酶抑制劑，例如flavoperidol、imatinib甲磺酸鹽或gefitinib；-法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑；或
-其他HDAC抑制劑。
“鉑配位化合物”一詞在本文中指可抑制任何腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的鉑配位化合物，其提供離子形式的鉑。
“紫杉烷基化合物”一詞指一類具有紫杉烷環(huán)系且與某些種類紫杉(紅豆杉)樹(shù)木的提取物相關(guān)或其所衍生的化合物。
“拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑”一詞系指可改變真核細(xì)胞中DNA拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的酶。其對(duì)重要細(xì)胞功能及細(xì)胞增生具有重要性。真核細(xì)胞中有兩類拓?fù)洚悩?gòu)酶，亦即I與II型。拓?fù)洚悩?gòu)酶I為一種分子量約100,000的單體酶。該酶結(jié)合DNA，引入暫時(shí)單鏈斷裂，解旋雙螺旋(或使之解旋)，然后使斷裂再封密后，再自DNA鏈上解離。拓?fù)洚悩?gòu)酶II的作用機(jī)制類似，其涉及引入DNA鏈斷裂或形成游離基。
“喜樹(shù)堿化合物”系指與喜樹(shù)堿母體化合物有關(guān)或其所衍生的化合物，其系衍生自中國(guó)樹(shù)種Camptothecin acuminata及印度樹(shù)種Nothapodytes foetida的不可溶于水的生物堿。
“鬼臼毒素化合物”一詞指與毒參茄植物提取的鬼臼毒素母體化合物有關(guān)或其所衍生的化合物。
“抗腫瘤長(zhǎng)春花生物堿”一詞指與自蔓長(zhǎng)春花(Vinca rosea)植物的提取物有關(guān)或其所衍生的化合物。
“烷基化劑”一詞包括不同類共同特征為在生理?xiàng)l件下有能力將烷基供給生物活性大分子如DNA的化學(xué)物。大多數(shù)的較重要制劑如氮芥及亞硝基脲，活性烷基化部分系于活體內(nèi)經(jīng)復(fù)雜降解反應(yīng)(其中有些為酶催的)之后產(chǎn)生。烷基化劑的最重要醫(yī)藥作用為特別在DNA合成與細(xì)胞分裂過(guò)程中干擾與細(xì)胞增生有關(guān)的基本機(jī)制。烷基化劑在快速增生組織中干擾DNA功能與整合性的能力作為其治療用途及其許多毒性特性的基礎(chǔ)。
“抗腫瘤蒽環(huán)類抗生素衍生物”一詞包括得自霉菌Strep.peuticus var.caesius的抗生素及其衍生物，其特征在于具有四環(huán)素環(huán)結(jié)構(gòu)，利用糖苷鍵結(jié)合了稀有糖六碳氨糖。
已知初期乳腺癌中人類表皮生長(zhǎng)因子受體2蛋白質(zhì)(HER2)的擴(kuò)增作用與某些患者的臨床預(yù)后不佳有相關(guān)性。Trastuzumab為一種高純的重組DNA-衍生的人源化單克隆IgG1卡巴抗體，其與HER2受體的胞外域高度親合性而特異性地結(jié)合。
許多乳癌有雌激素受體，且此等腫瘤的生長(zhǎng)可受到雌激素刺激?！按萍に厥荏w拮抗劑”及“選擇性雌激素受體調(diào)制劑”系指與雌激素受體(ER)結(jié)合的雌二醇的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑。選擇性雌激素受體調(diào)制劑與ER結(jié)合時(shí)，會(huì)誘導(dǎo)受體三維形狀改變，抑制其與DNA上雌激素反應(yīng)元素(ERE)的結(jié)合。
停經(jīng)后婦女的循環(huán)雌激素主要來(lái)源泉為腎上腺與卵巢雄激素(雄烯二醇與睪酮)經(jīng)由外周組織中芳香酶轉(zhuǎn)化成雌激素(雌酮與雌二醇)。經(jīng)由抑制芳香酶或失活而剝奪雌激素可有效且選擇性治療患與激素相關(guān)的乳癌的某些停經(jīng)后的患者。
“抗雌激素劑”一詞不僅包括雌激素受體拮抗劑與選擇性雌激素受體調(diào)制劑，而且如上述包括芳香酶抑制劑。
“分化劑”一詞包括可依不同方式抑制細(xì)胞增生及誘導(dǎo)分化的化合物。已知維生素D與視黃醛衍生物在調(diào)節(jié)多種正常及惡性細(xì)胞類型的生長(zhǎng)與分化上扮演重要角色。視黃酸代謝抑制劑(RAMBA)藉由抑制細(xì)胞色素P450介導(dǎo)的視黃酸代謝而提高內(nèi)源視黃酸含量。
DNA的甲基化變化為人類瘤形式中最常見(jiàn)的異?，F(xiàn)象。選定基因的啟動(dòng)子中過(guò)度甲基化通常與所涉及的基因失活有關(guān)?！癉NA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑”一詞指通過(guò)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的藥理抑制效果及使腫瘤抑制基因表達(dá)再活化而發(fā)揮作用的化合物。
“激酶抑制劑”一詞包括細(xì)胞周期進(jìn)展及程序性細(xì)胞死亡中所涉及的激酶的強(qiáng)力抑制劑。
“法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑”一詞指其設(shè)計(jì)用于防止Ras及其他細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的法尼基化的化合物。已知其可影響惡性細(xì)胞增生與存活。
“其他HDAC抑制劑”一詞包括(但不限于)-短鏈脂肪酸，例如丁酸酯、4-苯基丁酸酯或丙戊酸；-異羥肟酸，例如N-辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)、二芳基異羥肟酸酯A-161906、雙環(huán)芳基-N-羥基羧酰胺、pyroxamide、CG-1521、PDX-101、磺酰胺異羥肟酸、LAQ-824、trichostatin A(TSA)、oxamflatin、scriptaid、間羧基肉桂酸雙異羥肟酸或trapoxin-異羥肟酸類似物；-環(huán)狀四肽，例如trapoxin、apidicin或depsipeptide；-苯甲酰胺，例如MS-275或CI-994或depudecin。
為治療癌癥，根據(jù)本發(fā)明化合物可配合照射，依上述給藥患者。照射指電離輻射，特定言之指迦瑪輻射，尤指由直線加速器發(fā)射的或由現(xiàn)在常用的核素發(fā)射的。核素照射腫瘤可外用或內(nèi)用。
本發(fā)明亦有關(guān)抗癌劑與根據(jù)本發(fā)明HDAC抑制劑的根據(jù)本發(fā)明的組合。
本發(fā)明亦有關(guān)以根據(jù)本發(fā)明的組合于例如抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的治療上的用途。
本發(fā)明亦有關(guān)抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的根據(jù)本發(fā)明的組合。
本發(fā)明亦有關(guān)抑制人體受試者中腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的方法，其包括對(duì)該受試者給藥有效量的根據(jù)本發(fā)明的組合。
本發(fā)明亦有關(guān)抑制細(xì)胞(包括轉(zhuǎn)化細(xì)胞)異常生長(zhǎng)的方法，其系給藥有效量的根據(jù)本發(fā)明的組合。
其他醫(yī)藥劑與HDAC抑制劑可同時(shí)(例如分開(kāi)或單一組合物)或按任何次序先后投藥。后項(xiàng)作法中，兩種化合物將在一段時(shí)期內(nèi)投藥，其用量與方式應(yīng)足以確保達(dá)成有利或協(xié)同效用。要明白，該組合中各成分的優(yōu)選投藥法與投藥順序及各自劑量與規(guī)程將依所給藥的特定的其他醫(yī)藥劑及HDAC抑制劑、其投藥途徑、所治療的特定腫瘤及所治療的特定宿主而定。理想的投藥方法及順序及劑量與規(guī)程很容易由本領(lǐng)域技術(shù)人員使用常用方法，依據(jù)本文中所示的信息決定。
鉑配位化合物的合宜投藥劑量為每平方米體表面積使用1至500毫克(mg/m2)，例如50至400mg/m2，特定言之，每次治療過(guò)程的順鉑劑量為約75mg/m2，碳化鉑劑量約300mg/m2。
紫杉烷基化合物的合宜投藥劑量為每平方米體表面積使用50至400毫克(mg/m2)，例如75至250mg/m2，特定言之，每次治療過(guò)程的paclitaxel劑量為約175至250mg/m2，及docetaxel的劑量為約75至150mg/m2。
喜樹(shù)堿化合物的合宜投藥劑量為每平方米體表面積使用0.1至400毫克(mg/m2)，例如1至300mg/m2，特定言之，每次治療過(guò)程的irinotecan劑量為約100至350mg/m2，topotecan劑量為約1至2mg/m2。
抗腫瘤鬼臼毒素衍生物的合宜投藥劑量為每平方米體表面積使用30至300毫克(mg/m2)，例如50至250mg/m2，特定言之，每次治療過(guò)程的etoposide劑量為約35至100mg/m2，teniposide劑量為約50至250mg/m2。
骯腫瘤長(zhǎng)春花生物堿的合宜投藥劑量為每平方米體表面積使用2至30毫克(mg/m2)，特定言之，每次治療過(guò)程的長(zhǎng)春花堿劑量為約3至12mg/m2，長(zhǎng)春花新堿劑量為約1至2mg/m2，vinorelbine劑量為約10至30mg/m2。
抗腫瘤核苷衍生物的合宜投藥劑量為每平方米體表面積使用200至2500毫克(mg/m2)，例如700至1500mg/m2，特定言之，每次治療過(guò)程的5-FU劑量為200至500mg/m2，gemcitabine劑量為約800至1200mg/m2，capecitabine劑量為約1000至2500mg/m2。
烷基化劑，如氮芥或亞硝基脲的合宜投藥劑量為每平方米體表面積使用100至500毫克(mg/m2)，例如120至200mg/m2，特定言之，每次治療過(guò)程的環(huán)磷酰胺劑量為約100至500mg/m2，苯丁酸氮芥劑量為約0.1至0.2mg/m2，亞硝腺氮芥劑量為約150至200mg/m2，羅氮介劑量為約100至150mg/m2。
抗腫瘤蒽環(huán)類抗生素衍生物的合宜投藥劑量為每平方米體表面積使用10至75毫克(mg/m2)，例如15至60mg/m2，特定言之，每次治療過(guò)程的阿霉素劑量為約40至75mg/m2，紅比霉素劑量為約25至45mg/m2，去甲氧柔紅霉素劑量為約10至15mg/m2。
Trastuzumab的合宜投藥劑量為每平方米體表面積使用1至5毫克(mg/m2)，特定言之，每次治療過(guò)程劑量為2至4mg/m2。
抗雌激素劑的合宜投藥劑量為每天約1至100毫克，依所使用的特定藥劑及所治療狀況而定。它莫西芬的合宜口服劑量為一天服用兩次5至50毫克，優(yōu)選為10至20毫克，持續(xù)治療一段足夠時(shí)間，以達(dá)成及維持治療效果。托若米芬的合宜口服劑量為一天服用一次約60毫克，持續(xù)治療一段足夠時(shí)間，以達(dá)成及維持治療效果。Anastrozole的合宜口服劑量為一天服用一次約1毫克。Droloxifene的合宜口服劑量為一天服用一次約20-100毫克。Raloxifene的合宜口服劑量為一天服用一次約60毫克。Exemestane的合宜口服劑量為一天服用一次約25毫克。
此等劑量可以比如每次治療過(guò)程投藥一次、兩次或多次，可以比如每7、14、21或28天重復(fù)。
就其有用的藥物性質(zhì)而言，根據(jù)本發(fā)明的組合中的成分(亦即其他醫(yī)藥劑與HDAC抑制劑)可調(diào)配成各種投藥用藥物型式。各成分可于獨(dú)立的藥物組合物中單獨(dú)調(diào)配，或于單一藥物組合物中調(diào)配，其含有兩種成分。
因此本發(fā)明亦有關(guān)包含其他醫(yī)藥劑與HDAC抑制劑及一種或多種藥物用載體的藥物組合物。
本發(fā)明亦有關(guān)呈藥物組合物形式的根據(jù)本發(fā)明的組合，其包含抗癌劑與根據(jù)本發(fā)明HDAC抑制劑及一種或多種藥物用載體。
本發(fā)明亦有關(guān)根據(jù)本發(fā)明的組合于制造抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的藥物組合物上的用途。
本發(fā)明亦有關(guān)一種產(chǎn)品，其包含根據(jù)本發(fā)明HDAC抑制劑作為第一活性成分，及包含抗癌劑作為第二活性成分，作為組合制劑，供同時(shí)、獨(dú)立或順序用于治療癌癥患者。
實(shí)驗(yàn)部分下列實(shí)施例供說(shuō)明用。
下文中，“BINAP”指2，2′-雙(二苯基膦基)-1，1-聯(lián)萘，“Boc”指叔丁氧羰基，“BSA”指牛血清白蛋白，“DCM”指二氯甲烷，“DIC”指二異丙基碳二亞胺，“DIEA”指二異丙基乙胺，“DIPE”指二異丙基醚，“DMAP”指二甲氨基吡啶，“DMF”指二甲基甲酰胺，“DMSO”指二甲亞砜，“EDC”指N′-(乙基carbonimidoyl)-N，N-二甲基-1，3-丙二胺單鹽酸鹽，“EDTA”指乙二胺四乙酸，“EtOAc”指乙酸乙酯，“Hepes”指4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸，“HOBT”指羥基苯并三唑，“MeOH”指甲醇，“MTT”指3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基-2H-四唑鎓溴化物，“NMP”指N-甲基吡咯烷酮，“PBS”指磷酸鹽緩沖鹽水，“TEA”指三乙胺，“TFA”指三氟乙酸，“TIS”指三異丙基硅烷，“THF”指四氫呋喃，“THP”指四氫吡喃基，及“TMSOTf”指三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯。
A.中間體的制備實(shí)施例A1a)中間體1的制備
將4-甲氧基-2-喹啉羧酸(0.00024mol；1.2當(dāng)量)、DMF(2ml)、樹(shù)脂聯(lián)碳二亞胺(0.200g；2當(dāng)量)(供應(yīng)商Argonaut 800369)與1-羥基苯并三唑(0.040g；1.5當(dāng)量)在DCM(3ml)中的混合物于室溫下振蕩15分鐘，添加6-(4-氨基-1-哌啶基)-3-吡啶羧酸乙酯(0.0002mol)。反應(yīng)混合物于室溫下振蕩20小時(shí)。添加MP-碳酸酯(0.150g；4.5當(dāng)量)(供應(yīng)商Argonaut 800267)，反應(yīng)混合物于室溫下振蕩20小時(shí)?；旌衔镞^(guò)濾，濾液蒸發(fā)，產(chǎn)生中間體1(定量收率)。
b)中間體2的制備 將中間體1(最高0.0002mol)的氫氧化鈉(1.5ml)，THF(4ml)與MeOH(1ml)混合物于60℃下攪拌6小時(shí)，然后于室溫下度過(guò)整個(gè)周末。反應(yīng)混合物經(jīng)1N HCl中和后，添加DCM(4ml)。混合物經(jīng)extrelute(Isolute HM-N 3ml體積，供應(yīng)商IST 800-0220-EM)過(guò)濾，濾液蒸發(fā)，產(chǎn)生中間體2(定量收率)。
c)中間體3的制備 添加N，N-二甲基-4-吡啶胺(0.018g)至含有樹(shù)脂聯(lián)HOBT(0.200g)(供應(yīng)商N(yùn)ovabiochem 01-64-0425)的DCM/DMF 5/1(6ml)中。添加中間體2(最高0.0002mol)，混合物振蕩15分鐘。添加N，N′-甲烷四基雙-2-丙胺(0.070ml)，反應(yīng)混合物于室溫下振蕩4小時(shí)。濾出樹(shù)脂，依序以DCM(3x)，DMF(3x)，DCM(3x)，DMF(3x)及DCM(3x)洗滌。添加O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.030g，0.00026mol)的DCM(5ml)溶液至樹(shù)脂中，反應(yīng)混合物于室溫下振蕩一夜。濾出樹(shù)脂過(guò)濾，以DCM(3x)洗滌，濾液蒸發(fā)。殘留物溶于DCM(5ml)中。添加樹(shù)脂聯(lián)甲苯磺酰氯(0.100g)(供應(yīng)商Argonaut800276)與樹(shù)脂聯(lián)嗎啉(0.100g)(嗎啉代甲基聚苯乙烯HL供應(yīng)商N(yùn)ovabiochem 01-64-0171)。反應(yīng)混合物振蕩48小時(shí)。濾出樹(shù)脂，DCM洗滌，濾液蒸發(fā)，產(chǎn)生中間體3(定量收率)。
實(shí)施例A2a)中間體4的制備 于0℃下添加2-萘碳酰氯(0.0102mol)的DCM(40ml)溶液至4-(氨基甲基)-1-哌啶羧酸1，1-二甲基乙酯(0.0093mol)與TEA(0.0158mol)的DCM(40ml)混合物中?；旌衔镉谑覝叵聰嚢枰灰梗怪帘?，以DCM萃取。有機(jī)層經(jīng)10％K2CO3洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾及蒸發(fā)溶劑。殘留物(3.1g)自乙醚中結(jié)晶。濾出沉淀，干燥，產(chǎn)生2.52g(74％)中間體4，熔點(diǎn)153℃。
b)中間體5的制備 將中間體4(0.0068mol)的HCL 3N(25ml)與THF(5ml)混合物于80℃下攪拌12小時(shí)，倒至冰水中，以NH4OH堿化，以DCM萃取。有機(jī)層以水洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾，蒸發(fā)溶劑。殘留物(1g)自乙醚/CH3CN中結(jié)晶。濾出沉淀及干燥，產(chǎn)生0.8g(44％)中間體5，熔點(diǎn)209℃。
c)中間體6的制備
于0℃下在N2氣流下添加氫化鈉(0.0044mol)至，中間體5(0.0029mol)的THF(10ml)混合物中?；旌衔飻嚢?小時(shí)。添加2-(甲磺酰基)-5-嘧啶羧酸乙酯(0.0035mol)的THF(10ml)溶液?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?小時(shí)，倒至冰水中，以EtOAc萃取。有機(jī)層經(jīng)水洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾，蒸發(fā)溶劑。殘留物自CH3CN/乙醚中結(jié)晶。濾出沉淀，干燥，產(chǎn)生0.56g中間體6，熔點(diǎn)161℃。
d)中間體7的制備 將中間體6(0.0013mol)與氫氧化鈉(0.0026mol)的乙醇(15ml)混合物回流攪拌12小時(shí)后冷卻。濾出沉淀，以乙醚洗滌，干燥，產(chǎn)生0.44g(83％)中間體7。
e)中間體8的制備 于室溫下依序添加1-羥基苯并三唑(0.0014mol)的THF(10ml)溶液及N′-(乙基carbonimidoyl)-N，N-二甲基-1，3-丙二胺單鹽酸鹽(0.0014mol)的DCM(10ml)溶液至中間體7(0.0011mol)與O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.0014mol)的DCM(10ml)與THF(10ml)混合物中。混合物于室溫下攪拌12小時(shí)，倒至水中，以DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過(guò)濾，蒸發(fā)溶劑。殘留物(0.9g)經(jīng)硅膠柱色譜法純化(洗脫液CH2Cl2/CH3OH/NH4OH 97/3/0.1；15-40μm)。收集純級(jí)分，蒸發(fā)溶劑。殘留物(0.47g)自乙醚/DIPE中結(jié)晶。濾出沉淀，干燥，產(chǎn)生0.4g中間體8，熔點(diǎn)149℃。
B.最終化合物的制備實(shí)施例B1a)樹(shù)脂(1)的制備將Novabiochem 01-64-0261商品樹(shù)脂(200mg，負(fù)載量0.94mmol/g)、單N-Boc-4-氨基哌啶(188mg)與異丙醇鈦(IV)(Ti(OiPr)4)(277μl)的DCM(4ml)混合物于室溫下溫和振蕩90分鐘。添加三乙酰氧基氫硼化鈉(199mg)，反應(yīng)混合物于室溫下溫和振蕩一夜后，濾出樹(shù)脂，以DCM洗滌一次，以MeOH洗滌一次后，以DCM/DIEA 10％洗滌2次，再先以DCM洗滌3次后，以甲醇洗滌3次，以3xDCM，3xMeOH，3xDCM，3xMeOH，3xDCM，3xMeOH，3xDCM，3xMeOH洗滌。結(jié)果產(chǎn)生的樹(shù)脂鑒定為樹(shù)脂(1)，未進(jìn)一步純化即用于下一個(gè)反應(yīng)步驟。
b)樹(shù)脂(2)的制備樹(shù)脂(1)經(jīng)DCM洗滌3次。在樹(shù)脂(1)中添加2-萘碳酰氯(175mg)的4ml DCM混合物與DIEA(307μl)混合物，溫和振蕩樹(shù)脂一夜，濾出樹(shù)脂，以3xDCM，3xMeOH，3xDCM，3xMeOH，3xDCM，3xMeOH，3xDCM，3xMeOH，3xDCM，3xMeOH，3xDCM，3xMeOH洗滌。結(jié)果產(chǎn)生的樹(shù)脂為樹(shù)脂(2)，未進(jìn)一步純化即用于下一個(gè)反應(yīng)步驟。
c)樹(shù)脂(3)的制備樹(shù)脂(2)經(jīng)DCM洗滌3次。在樹(shù)脂(2)中添加4ml TMSOTf-2，6-二甲基吡啶(1M/1.5M)的DCM混合物，樹(shù)脂于室溫下溫和振蕩3小時(shí)，濾出樹(shù)脂，以3xDCM，3xMeOH，3xDCM，3xMeOH，3xDCM，3xMeOH，3xDCM，3xMeOH，，3xDCM，3xMeOH，3xDCM，3xMeOH洗滌。結(jié)果產(chǎn)生的樹(shù)脂為樹(shù)脂(3)，未進(jìn)一步純化即用于下一個(gè)反應(yīng)步驟。
d)樹(shù)脂(4)的制備樹(shù)脂(3)經(jīng)甲苯洗滌3次。在樹(shù)脂(3)中添加4-溴甲基苯甲酸酯(606mg)的3ml甲苯溶液及BINAP(117mg)與Cs2CO3(326mg)，樹(shù)脂于室溫與氮?dú)庀聹睾驼袷?5分鐘。添加含Pd(OAc)2的1ml甲苯至反應(yīng)混合物中。樹(shù)脂于110℃與氮?dú)庀聹睾驼袷?8小時(shí)。趁熱濾出樹(shù)脂，樹(shù)脂經(jīng)80℃3xDMF，80℃3xH2O，80℃3xDMF洗滌，于室溫下以3xDMF，3xH2O，3xDMF，3x MeOH，3xDCM，3xMeOH，3xDCM洗滌。結(jié)果產(chǎn)生的樹(shù)脂為樹(shù)脂(4)，未進(jìn)一步純化即用于下一個(gè)反應(yīng)步驟。
e)樹(shù)脂(5)的制備樹(shù)脂(4)經(jīng)NMP洗滌3次。在樹(shù)脂(4)中添加含三甲基硅烷醇鉀(KOSiMe3)(240mg)的4ml NMP，樹(shù)脂于50℃下溫和振蕩24小時(shí)，濾出樹(shù)脂，以3xDCM，3xMeOH，3xDCM，3xMeOH，3xDCM，3xMeOH，3xDCM，3xMeOH，3xDCM，3xMeOH，3xDCM，3xMeOH洗滌。結(jié)果產(chǎn)生的樹(shù)脂為樹(shù)脂(5)，未進(jìn)一步純化即用于下一個(gè)反應(yīng)步驟。
f)中間體9的制備樹(shù)脂(5)經(jīng)DCM洗滌3次。在樹(shù)脂(5)中添加5mlTFA/TIS/DCM(5∶2∶93)，樹(shù)脂于室溫下溫和振蕩2小時(shí)，濾出樹(shù)脂，以DCM洗滌。濾液于氮?dú)庀略?0℃下吹干，添加DCM(2ml)，再于氮?dú)庀录?0℃下吹干，添加DCM(2ml)，然后于氮?dú)庀略?0℃吹干。結(jié)果產(chǎn)生游離羧酸(中間體30)的TFA-鹽，收量58mg。
g)樹(shù)脂(6)的制備，方法A中間體9于50℃與氮?dú)庀?，與亞硫酰氯(SOCl2)(1ml)濃縮，添加DCM(2ml)，于氮?dú)庀录?0℃下吹干，添加DCM(2ml)，再于氮?dú)庀录?0℃下吹干。添加DCM(3ml)，溶液加至樹(shù)脂聯(lián)HOBT中(300mg，負(fù)載量1.3mmol/g)(供應(yīng)商N(yùn)ovabiochem 01-64-0425)，在混合物中添加1ml of 2，6-二甲基吡啶與1ml DCM。樹(shù)脂溫和振蕩1小時(shí)，濾出樹(shù)脂，以3xDMF，3xDCM，3xDMF洗滌。結(jié)果產(chǎn)生樹(shù)脂(7)，未進(jìn)一步純化即用于下一個(gè)反應(yīng)步驟。
h)樹(shù)脂(6)的制備，方法B中間體9經(jīng)DCM、NEt3與H2O及幾滴MeOH處理，經(jīng)extrelute干燥(Isolute HM-N 3ml體積，供應(yīng)商IST 800-0220-EM)，于氮?dú)庀录?0℃下吹干。添加DCM(3ml)3次及于氮?dú)庀录?0℃下吹干。游離堿溶于DCM/DMF 4ml/1ml中，溶液加至樹(shù)脂聯(lián)HOBT中(300mg，負(fù)載量1.3mmol/g)(供應(yīng)商N(yùn)ovabiochem 01-64-0425)，在混合物中添加DMAP(10mg)。樹(shù)脂于室溫下溫和振蕩15分鐘，添加DIC(70μl)。樹(shù)脂于室溫下溫和振蕩4小時(shí)，濾出樹(shù)脂，以3xDMF，3xDCM，3xDMF洗滌。結(jié)果產(chǎn)生樹(shù)脂(7)，未進(jìn)一步純化即用于下一個(gè)反應(yīng)步驟。
i)中間體10的制備在樹(shù)脂(6)中添加含O-(四氫-2H-吡喃基)-羥基胺(60mg)的4ml DCM，樹(shù)脂于室溫下溫和振蕩18小時(shí)，濾出樹(shù)脂，以DCM(2ml)洗滌。過(guò)濾及于氮?dú)庀录?0℃下吹干。結(jié)果產(chǎn)生中間體10。
j)化合物1的制法中間體10于含5％TFA的MeOH(5ml)中攪拌一夜，將反應(yīng)混合物倒至4ml H2O與NaHCO3(300mg)中，以DCM(5ml)萃取產(chǎn)物2次，DCM層經(jīng)MgSO4干燥，過(guò)濾及于氮?dú)庀录?0℃下吹干。結(jié)果產(chǎn)生最終化合物1，收量2.3mg。
實(shí)施例B2化合物2的制法 中間體3(最高0.0002mol)于5％CF3COOH/CH3OH(q.s.)中，于室溫下攪拌一周末。蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生(模型反應(yīng))0.058g(純度87％)化合物2。
實(shí)施例B3化合物3的制法 于0℃添加三氟乙酸(0.5ml)至含中間體8(0.0006mol)的MeOH(5ml)混合物中。使混合物回升室溫后，攪拌48小時(shí)。濾出沉淀，以MeOH洗滌后，以乙醚洗滌，干燥，產(chǎn)生0.168g(65％)化合物3，熔點(diǎn)226℃。
表F-1列出根據(jù)上述一種實(shí)施例制備的化合物。表中采用下列縮寫Co.No.代表化合物編號(hào)，Ex.[Bn°]指與Bn°實(shí)施例中所述的相同方法。有些化合物已用熔點(diǎn)(mp.)表征。
C.藥物實(shí)施例組蛋白脫乙酰酶抑制作用的活體外測(cè)定(參見(jiàn)實(shí)施例C.1)系測(cè)定式(I)化合物所得的HDAC酶活性抑制效果。
式(I)化合物的細(xì)胞活性系于A2780腫瘤細(xì)胞上，采用細(xì)胞毒性或存活率的比色測(cè)定法測(cè)定(Mosmann Tim，Journal of ImmunologicalMethods 6555-63，1983)(參見(jiàn)實(shí)施例C.2)。
于水性介質(zhì)中的動(dòng)態(tài)溶解性系測(cè)定該化合物于稀釋時(shí)保持在含水溶液中的能力(參見(jiàn)實(shí)施例C.3)。
DMSO母液經(jīng)單一水性緩沖溶劑，于連續(xù)3個(gè)步驟中稀釋。每次稀釋的濁度均使用濁度計(jì)測(cè)定。
藥物的通透性表現(xiàn)其由一種介質(zhì)移動(dòng)至或通過(guò)另一種介質(zhì)的能力。具體言之，其移動(dòng)通過(guò)腸膜進(jìn)入血流與/或自血流進(jìn)入革巴的能力。通透性(參見(jiàn)實(shí)施例C.4)的測(cè)定法可測(cè)定濾器固定化的人工膜磷脂雙層的形成。濾器固定化的人工膜測(cè)定法中，與96孔微量滴定板和96孔過(guò)濾板形成“夾層”，使得每個(gè)復(fù)合孔被分成兩個(gè)室，底部為供體溶液，頂部為受體溶液，由125微米微量濾片(0.45微米孔徑)分隔，涂以2％(重量/體積)二油?；字Ｄ憠A的十二烷溶液，其條件是，當(dāng)該系統(tǒng)接觸到水性緩沖液時(shí)，濾器通道內(nèi)會(huì)形成多層的雙層。測(cè)定通過(guò)此人工膜的化合物通透性，以厘米/秒表示。其目的為檢視藥物在兩種不同pH4.0與7.4下通過(guò)平行人工膜的通透情況。采用UV光譜測(cè)定法，于250至500nm之間的最適當(dāng)波長(zhǎng)下進(jìn)行化合物檢測(cè)。
藥物的代謝指脂溶性生外化合物或生物體內(nèi)生化合物經(jīng)酶催轉(zhuǎn)化成極性、水溶性且可排泄的代謝物。藥物代謝作用的主要器官為肝臟。代謝產(chǎn)物的活性通常低于母體化合物或無(wú)活性。然而，有些代謝物可能具有加強(qiáng)活性或毒性效果。因此，藥物代謝作用可包括“解毒”與“中毒”過(guò)程。一個(gè)決定生物處理藥物與化學(xué)物的能力的主要酶系統(tǒng)代表為細(xì)胞色素P450單加氧酶，其系依賴NADPH的酶。化合物的代謝穩(wěn)定性可于活體外，使用亞細(xì)胞人類組織測(cè)定(參見(jiàn)實(shí)施例C.5)。本文中化合物的代謝穩(wěn)定性系由此等化合物與微粒體培育15分鐘后的藥物代謝百分率表示。以LC-MS分析法為化合物定量。
腫瘤抑制劑p53可響應(yīng)DNA損傷，轉(zhuǎn)錄激活許多基因，包括WAF1/CIP1基因。WAF1基因的21kDa產(chǎn)物出現(xiàn)在正常細(xì)胞中包括細(xì)胞周期蛋白、依賴于細(xì)胞周期蛋白的激酶(CDK)及增生細(xì)胞核抗原(PCNA)的復(fù)合體中，但不出現(xiàn)在轉(zhuǎn)化細(xì)胞中，且似乎為CDK活性的通用抑制劑。p21WAF1結(jié)合并抑制CDK的一種后果為防止依賴CDK的磷酸化反應(yīng)及隨后使Rb蛋白質(zhì)失活，后者系細(xì)胞周期進(jìn)展所必要的。因此，響應(yīng)于與HDAC抑制劑細(xì)胞接觸而誘導(dǎo)p21WAF1為G1與G2兩個(gè)關(guān)卡處細(xì)胞周期進(jìn)展抑制作用的強(qiáng)力且特異性的指示。
化合物誘導(dǎo)p21WAF1的能力系采用p21WAF1酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法測(cè)定(致癌基因的WAF1 ELISA)。p21WAF1測(cè)定法為一種兼使用小鼠單克隆抗體與兔子多克隆抗體的“夾心”酶免疫測(cè)定法。對(duì)人類WAF1蛋白質(zhì)具特異性的兔子多克隆抗體已固定在試劑盒中提供的塑料孔表面上。樣本中所要測(cè)定的任何存在的p21WAF會(huì)與捕捉抗體結(jié)合。生物素化檢測(cè)物單克隆抗體亦識(shí)別人類p21WAF1蛋白質(zhì)，而且會(huì)與捕捉抗體所滯留的任何p21WAF1結(jié)合。檢測(cè)物抗體則隨后被辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合鏈霉抗生物素結(jié)合。辣根過(guò)氧化物酶催化顯色底物四甲基聯(lián)苯胺從無(wú)色溶液轉(zhuǎn)化成藍(lán)色溶液(或當(dāng)添加終止反應(yīng)劑后，則轉(zhuǎn)成黃色)，其強(qiáng)度與結(jié)合在板上的p21WAF1蛋白質(zhì)的量成比例。采用分光光度計(jì)定量有色反應(yīng)產(chǎn)物。使用已知濃度的p21WAF1(冷凍干燥形式)從標(biāo)準(zhǔn)曲線的結(jié)構(gòu)進(jìn)行定量(參見(jiàn)實(shí)施例C.6)。
實(shí)施例C.1組蛋白脫乙酰酶的抑制作用的活體外測(cè)定法將60μg/ml HeLa核提取物(供應(yīng)商Biomol)與2×10-8M放射性標(biāo)記肽底物培養(yǎng)。測(cè)定HDAC活性所使用的底物為合成肽，亦即組蛋白H4的氨基酸14-21。該底物的NH2末端部分經(jīng)6-氨基己酸間隔進(jìn)行生物素化，其COOH-末端部分則被酰胺基保護(hù)，并于賴氨酸16上特異性[3H]乙?；?。添加底物生物素-(6-氨基己酸)Gly-Ala-([H3]-乙?；?Lys-Arg-His-Ary-Lys-Val-NH2)至含25mM Hepes、1M蔗糖、0.1mg/ml BSA與0.01％Triton X-100的pH7.4緩沖液中。30分鐘后，添加HCl與乙酸終止脫乙?；磻?yīng)(終濃度分別為0.035mM與3.8mM)。反應(yīng)停止后，以乙酸乙酯萃取游離的3H-乙酸酯。混合與離心后，于β-計(jì)數(shù)器上計(jì)算上層有機(jī)相等分試樣的放射性。每個(gè)實(shí)驗(yàn)均平行進(jìn)行對(duì)照組(含HeLa核提取物與DMSO，但不含化合物)、空白培養(yǎng)組(含DMSO，但不含HeLa核提取物或化合物)及樣本試驗(yàn)組(含溶于DMSO中的化合物與HeLa核提取物)。第一種情況中，化合物的試驗(yàn)濃度為10-5M。當(dāng)化合物于10-5M展現(xiàn)活性時(shí)，則在10-5M與10-12M之間濃度測(cè)試化合物，制成濃度響應(yīng)曲線。每個(gè)試驗(yàn)中，對(duì)照組與樣本組的值均扣除空白組值。對(duì)照組樣本代表100％底物脫乙?；?。各樣本的放射性以對(duì)照組平均值的百分比表示。若適當(dāng)時(shí)，采用概率分析法對(duì)分級(jí)數(shù)據(jù)計(jì)算IC50值(使代謝物量下降至對(duì)照組的50％時(shí)所需藥物濃度)。此時(shí)，以pIC50(IC50值的負(fù)對(duì)數(shù)值)表示試驗(yàn)化合物的效果。所有試驗(yàn)化合物在10-5M的試驗(yàn)濃度下均展現(xiàn)酶活性，有13種化合物的pIC50＞5(參見(jiàn)表F-2)。
實(shí)施例C.2于A2780細(xì)胞上測(cè)定抗增生活性所有試驗(yàn)化合物均溶于DMSO中，再于培養(yǎng)基中進(jìn)一步稀釋。細(xì)胞增生測(cè)定法中的最終DMSO濃度不可超過(guò)0.1％(v/v)。對(duì)照組含有A2780細(xì)胞及DMSO，不含化合物，而空白組則含有DMSO，但不含細(xì)胞。取MTT溶于PBS中，5mg/ml。制備甘氨酸緩沖液，其包含0.1M甘氨酸與0.1M NaCl，經(jīng)1N NaOH緩沖至pH10.5(所有試劑均來(lái)自Merck)。
取人類A2780卵巢癌細(xì)胞(系美國(guó)賓州Fox Chase癌癥中心T.C.Hamilton博士的熱心捐贈(zèng))于補(bǔ)充2mM L-谷氨酰胺、50μg/ml慶大霉素與10％胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。細(xì)胞按常規(guī)于37℃保持為單層培養(yǎng)物，在加濕5％CO2氣氛中。每周使用胰蛋白酶/EDTA溶液傳代細(xì)胞一次，分裂比為1∶40。所有培養(yǎng)基與補(bǔ)充物均得自Life Technologies。采用Gen-Probe支原體組織培養(yǎng)物試劑盒(供應(yīng)商BioMerieux)測(cè)得細(xì)胞沒(méi)有支原體污染。
將細(xì)胞接種在NUNCTM96孔培養(yǎng)平板中(供應(yīng)商LifeTechnologies)，使之粘著在塑料上一夜。用于平板接種的密度為每孔1500個(gè)細(xì)胞，總體積為200μl培養(yǎng)基。細(xì)胞粘著在培養(yǎng)平板上后，改變培養(yǎng)基，添加藥物與/或溶劑至最終體積200μl。培養(yǎng)4天后，以200μl新鮮培養(yǎng)基更換培養(yǎng)基，采用基于MTT的測(cè)定法評(píng)價(jià)細(xì)胞密度與活力。每孔中添加25μlMTT溶液，細(xì)胞再于37℃下培養(yǎng)2小時(shí)。小心吸出培養(yǎng)基，依序添加25μl甘氨酸緩沖液及100μlDMSO，使藍(lán)色MTT-甲產(chǎn)物溶解。微量培養(yǎng)板于微量培養(yǎng)板搖動(dòng)器上振搖10分鐘，使用Emax96孔分光光度計(jì)(供應(yīng)商Sopachem)測(cè)定540nm的吸光度。實(shí)驗(yàn)中，各實(shí)驗(yàn)條件的結(jié)果均為3個(gè)重復(fù)孔的平均值。為初始篩選，化合物系于單一固定濃度10-6M下測(cè)試。活性化合物則重復(fù)試驗(yàn)，以建立完整的濃度-響應(yīng)曲線。每個(gè)實(shí)驗(yàn)的對(duì)照組(不含藥物)及空白培養(yǎng)組(不含細(xì)胞或藥物)均平行進(jìn)行。所有對(duì)照組與樣本組值均扣除空白組值。每個(gè)樣本的細(xì)胞生長(zhǎng)平均值(以吸光度為單位)均以對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)平均值的百分比表示。若適當(dāng)時(shí)，采用概率分析法對(duì)分級(jí)數(shù)據(jù)(Finney，D.J.，Probit Analyses，第2版，第10章，GradedResponses，Cambridge University Press，Cambridge，1962)計(jì)算IC50值(使細(xì)胞生長(zhǎng)下降至對(duì)照組的50％時(shí)所需藥物濃度)。本文中以pIC50(IC50值的負(fù)對(duì)數(shù)值)表示試驗(yàn)化合物的效果。大多數(shù)試驗(yàn)化合物在10-6M的試驗(yàn)濃度下展現(xiàn)細(xì)胞活性且有12種化合物的pIC50≥5(參見(jiàn)表F-2)。
實(shí)施例C.3干水性介質(zhì)中的動(dòng)態(tài)溶解性第一個(gè)稀釋步驟中，10μl活性化合物的濃縮母液，溶于DMSO中(5mM)，加至100μl磷酸鹽檸檬酸鹽緩沖液pH7.4中，混合。第二個(gè)稀釋步驟中，第一個(gè)稀釋步驟的等分試樣(20μl)進(jìn)一步分液至100μl磷酸鹽檸檬酸鹽緩沖液pH7.4中，混合。最后，第三個(gè)稀釋步驟中，取一部分(20μl)第二個(gè)稀釋步驟樣品再加至100μl磷酸鹽檸檬酸鹽緩沖液pH7.4中稀釋，混合。所有稀釋均于96孔板中進(jìn)行。最后一個(gè)稀釋步驟后，立即使用濁度計(jì)測(cè)定相繼3個(gè)稀釋步驟的濁度。每種化合物的稀釋均進(jìn)行三次重復(fù)，以排除偶然誤差。依據(jù)濁度測(cè)定值，評(píng)分成3級(jí)。高溶解度的化合物得到3分，此等化合物的第一次稀釋呈澄清。中度溶解度的化合物得到2分。此等化合物的第一次稀釋不澄清，但第二次稀釋即澄清。低溶解度的化合物得到1分。此等化合物的第一次與第二次稀釋均不澄清。測(cè)定52種化合物的溶解度。其中有9種化合物得到3分，及1種化合物得到1分(參見(jiàn)表F-2)。
實(shí)施例C.4平行人工膜通透性分析于含2ml水性緩沖液系統(tǒng)pH4或pH7.4(PSR4系統(tǒng)溶液濃縮物(pION))的深孔或預(yù)混合板中稀釋母液樣本(10μl于100％DMSO中5mM母液的等分試樣)。添加樣本至參考板中之前，先添加150μl緩沖液至孔中，測(cè)定空白UV值。之后，丟棄緩沖液，此板用為參考板。所有測(cè)定均于耐UV的板上進(jìn)行(供應(yīng)商Costar或Greiner)。
測(cè)定參考板的空白值后，添加150μl稀釋的樣本至參考板中，添加200μl稀釋樣本至供體板1中。使用4μl人工膜形成溶液(1，2-二油?；?sn-Glycer-3-磷酸膽堿處于含0.1％2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚的十二碳烷中)涂布受體濾板1(供應(yīng)商Millipore，類型MAIPN45)，置于供體板1頂上，形成“夾層”。分液緩沖液(200μl)至上方的受體孔中。此夾層加蓋，保存在室溫與黑暗中18小時(shí)。
添加150μl緩沖液至孔中后，測(cè)定UV值，由此測(cè)定受體板2的空白值。受體板2測(cè)定空白值后，丟棄緩沖液，自受體濾板1中將150μl受體溶液移至受體板2中。然后自?shī)A層中取出受體濾板1。測(cè)定供體板2的空白值(如上述)后，自供體板1中將150μl供體溶液移至供體板2中。掃描供體板2、受體板2及參考板孔的UV光譜(使用SpectraMAX190)。所有光譜均經(jīng)PSR4p Command軟件處理以計(jì)算通透性。所有化合物均進(jìn)行三次重復(fù)。每個(gè)實(shí)驗(yàn)均使用卡馬西平、灰黃霉毒、acycloguanisine、氨酰心安、速尿、氯噻嗪作為標(biāo)準(zhǔn)物?；衔镌u(píng)級(jí)成三類低通透性(平均效應(yīng)＜0.5×10-6cm/s；得分1)，中通透性(1×10-6cm/s＞平均效應(yīng)≥0.5×10-6cm/s；得分2)或高通透性(≥0.5×10-6cm/s；得分3)。試驗(yàn)一種化合物，其在兩種測(cè)定pH下只得到1分。
實(shí)施例C.5代謝穩(wěn)定性依據(jù)Gorrod等人(Xenobiotica 5453-462，1975)制備亞細(xì)胞組織制劑，其系使組織經(jīng)過(guò)機(jī)械勻漿后離心分離。肝組織于冰冷0.1MTris-HCl(pH7.4)緩沖液中漂洗，以洗除過(guò)量血液。隨后吸干組織，稱重，使用手術(shù)剪刀粗略剪斷。組織碎片于3體積冰冷的0.1M磷酸鹽緩沖液(pH7.4)中，使用裝有特氟隆研杵的Potter-S(意大利Braun公司)或Sorvall Omni-Mix勻漿器勻漿7×10秒。在兩種情況下，在勻漿過(guò)程中容器保持在冰中/上。
組織勻漿于4℃下，使用Sorvall離心機(jī)或Beckman超速離心機(jī)，于9000xg下離心20分鐘。所得上清液保存在-80℃下，稱為“S9”。
此S9部分再使用Beckman超速離心機(jī)，于100.000xg下離心60分鐘(4℃)。小心吸出所得上清液，等分并稱為“細(xì)胞溶膠”。沉淀再懸浮于0.1M磷酸鹽緩沖液中(pH7.4)，終體積為每0.5克原始組織重量為1ml，稱為“微粒體”。
所有亞細(xì)胞部分等分后，立即于液態(tài)氮中冷凍，保存在-80℃下，直到使用時(shí)為止。
對(duì)于試驗(yàn)樣本，培養(yǎng)混合物含有PBS(0.1M)、化合物(5μM)、微粒體(1mg/ml)與NADPH-生成系統(tǒng)(0.8mM葡萄糖-6-磷酸、0.8mM氯化鎂及0.8單位葡萄糖-6-磷酸脫氫酶)。對(duì)照組樣本含有相同材料，但微粒體改為熱失活(95℃下10分鐘)的微粒體。對(duì)照組樣本中化合物的回收率總是100％。
混合物于37℃下預(yù)培養(yǎng)5分鐘。添加0.8mM NADP的零時(shí)間點(diǎn)(t＝0)開(kāi)始反應(yīng)，樣本培養(yǎng)15分鐘(t＝15)。添加2體積DMSO停止反應(yīng)。樣本隨后于900xg下離心10分鐘，分析前貯存在室溫下的上清液不可超過(guò)24小時(shí)。所有培養(yǎng)均進(jìn)行二次重復(fù)。采用LC-MS分析法分析上清液。于Xterra MS C18(50×4.6mm，5μm，美國(guó)Waters公司)上洗脫樣本。采用Alliance 2790(供應(yīng)商美國(guó)Waters公司)HPLC系統(tǒng)。洗脫使用緩沖液A(含于H20/乙腈(95/5)中的25mM乙酸銨(pH5.2))，溶劑B為乙腈，且溶劑C為甲醇，流速為2.4ml/分鐘。所使用的梯度為以線性方式，在5分鐘內(nèi)使有機(jī)相濃度由0％提高超過(guò)50％B和至50％C，于1分鐘內(nèi)至100％B，并且再保持有機(jī)相濃度穩(wěn)定1.5分鐘。樣本總注射體積為25μl。
采用配有ESI源的Quattro(供應(yīng)商英國(guó)曼徹斯特市Micromass公司)三重四極質(zhì)譜儀作為檢測(cè)器。源與去溶劑化溫度分別設(shè)定在120與350℃，使用氮?dú)庾鳛殪F化劑及干燥氣體。以正掃描模式取得數(shù)據(jù)(單離子反應(yīng))，錐電壓設(shè)定在10V，采樣時(shí)間為1秒。
代謝穩(wěn)定性用化合物于活性微粒體(E(act))的存在下15分鐘培養(yǎng)后的代謝％表示(代謝％＝100％-((E(act)于t＝15時(shí)的總離子電流(TIC)/E(act)于t＝0時(shí)的TIC)×100)。代謝百分比小于20％的化合物則定義為具高度代謝穩(wěn)定性。代謝百分比在20與70％之間的化合物則定義為具中度穩(wěn)定性，而代謝百分比高于70％的化合物則定義為具低度代謝穩(wěn)定性。當(dāng)進(jìn)行代謝穩(wěn)定性篩選時(shí)，總是包含3種參考化合物。使用Verapamil作為低度代謝穩(wěn)定性的化合物(代謝％＝73％)。使用Cisapride作為中度代謝穩(wěn)定性的化合物(代謝％＝45％)。使用丙醇作為中度至高度代謝穩(wěn)定性的化合物(代謝％＝25％)。使用此等參考化合物確認(rèn)代謝穩(wěn)定性測(cè)定法的有效性。
試驗(yàn)2種化合物，其代謝％均小于20％。
實(shí)施例C.6p21誘導(dǎo)能力采用下列方案，于人類A2780卵巢癌細(xì)胞中測(cè)定p21蛋白質(zhì)表達(dá)水平。將A2780細(xì)胞(20000個(gè)細(xì)胞/180μl)接種在96微孔板中，至補(bǔ)充2mM L-谷氨酰胺、50μg/ml慶大霉素與10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中。溶解細(xì)胞前24小時(shí)，添加化合物使最終濃度為10-5、10-6、10-7與10-8M。所有試驗(yàn)化合物均溶在DMSO中，再于培養(yǎng)基中稀釋。添加化合物24小時(shí)后，從細(xì)胞除去的上清液。以200μl冰冷PBS洗滌細(xì)胞。抽吸孔，添加30μl溶胞緩沖液(50mM Tris.HCl(pH7.6)，150mMNaCl，1％Nonidet p40與10％甘油)。板于-70℃下培養(yǎng)一夜。
自箔袋中取出適當(dāng)數(shù)目的微量滴定孔，置入空的孔固定器中。制備洗滌緩沖液(20x板洗滌濃縮液100ml PBS與界面活性劑的20倍濃縮液。含有2％氯乙酰胺)的工作液(1x)。冷凍干燥的p21WAF標(biāo)準(zhǔn)物用蒸餾水重組，再經(jīng)樣本稀釋液(由試劑盒中供應(yīng))稀釋。
樣本經(jīng)在樣本稀釋液中稀釋1∶4而制備。將樣本(100μl)與p21WAF1標(biāo)準(zhǔn)物(100μl)移液至適當(dāng)孔中，于室溫下培養(yǎng)2小時(shí)。以1x洗滌緩沖液洗滌孔3次后，移液100μl檢測(cè)物抗體試劑(生物素化單克隆p21WAF1抗體溶液)加至各孔中?？子谑覝叵屡囵B(yǎng)1小時(shí)后，以1x洗滌緩沖液洗滌3次。稀釋400x結(jié)合物(過(guò)氧化物酶鏈霉抗生物素結(jié)合物400倍濃縮溶液)，取100μl 1x溶液加至孔中?？子谑覝叵屡囵B(yǎng)30分鐘后，以1x洗滌緩沖液洗滌3次，以蒸餾水洗滌1次。添加底物溶液(顯色底物)(100μl)至孔中，于黑暗中室溫下將孔培養(yǎng)30分鐘。依前述添加的底物溶液的相同順序添加終止溶液至各孔中。采用分光光度板讀出器，于450/595nm雙波長(zhǎng)下測(cè)定各孔吸光度。每個(gè)實(shí)驗(yàn)均平行進(jìn)行對(duì)照組(不含藥物)與空白培養(yǎng)組(不含細(xì)胞或藥物)。所有對(duì)照組與樣本組值均扣除空白組值。各樣本的p21WAF1誘導(dǎo)值(單位為吸光度)以對(duì)照組中存在的p21WAF1的值的百分比表示。誘導(dǎo)百分比高于130％時(shí)，定義為顯著誘導(dǎo)。本測(cè)定法中，試驗(yàn)3種化合物，其中2種展現(xiàn)顯著的誘導(dǎo)作用。
表F-2表F-2出示依據(jù)實(shí)施例C.1、C.2與C.3試驗(yàn)的化合物的結(jié)果。
D.組合物實(shí)施例膜衣片劑片劑核的制備將100g式(I)化合物、570g乳糖與200g淀粉的混合物混合均勻后，用5g十二烷基硫酸鈉及10g聚乙烯基吡咯烷酮的約200ml水溶液潤(rùn)濕。濕粉末混合物經(jīng)過(guò)篩、干燥及再過(guò)篩。然后添加100g微晶纖維素與15g氫化植物油。全部混合均勻，壓成片劑，產(chǎn)生10.000片片劑，每片含10mg式(I)化合物。
包衣添加5g乙基纖維素的150ml二氯甲烷溶液至10g甲基纖維素的75ml變性乙醇溶液中。然后添加75ml二氯甲烷與2.5ml 1，2，3-丙三醇。取10g聚乙二醇熔化及溶解于75ml二氯甲烷中。后項(xiàng)溶液加至前項(xiàng)溶液中，然后添加2.5g十八烷酸鎂、5g聚乙烯吡咯烷酮與30ml濃縮色料懸浮液，全部均質(zhì)化。于包覆設(shè)備中，以所得混合物包覆片劑核。
權(quán)利要求
1.式(I)化合物 其N-氧化物型、其藥理上可接受的加成鹽及立體化學(xué)異構(gòu)型，其中n為0、1、2或3，且當(dāng)n為0時(shí)，則指的是直接鍵；m為0或1，且當(dāng)m為0時(shí)，則指的是直接鍵；t為0、1、2、3或4，且當(dāng)t為0時(shí)，則指的是直接鍵；各Q為氮或-C≤；各X為氮或-C≤；各Y為氮或-C≤；R1為-C(O)NR8R9、-NHC(O)R10、-C(O)-C1-6烷二基SR10、-NR11C(O)N(OH)R10、-NR11C(O)C1-6烷二基SR10、-NR11C(O)C＝N(OH)R10或另一個(gè)Zn-螯合基，其中R8與R9分別獨(dú)立選自氫、羥基、C1-6烷基、羥基C1-6烷基、氨基C1-6烷基或氨基芳基；R10為氫、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、芳基C1-6烷基、C1-6烷基吡嗪基、吡啶酮、吡咯烷酮或甲基咪唑基；R11為氫或C1-6烷基；R2為氫、鹵基、羥基、氨基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、三氟甲基、二(C1-6烷基)氨基、羥氨基或萘磺酰吡嗪基；-L-為直接鍵或選自下列的二價(jià)基團(tuán)C1-6烷二基、C1-6烷二基氧、氨基、羰基、或氨基羰基；各R3分別獨(dú)立代表氫原子，且其中一個(gè)氫原子可被選自芳基的取代基代替；R4為氫、羥基、氨基、羥基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、芳基C1-6烷基、氨基羰基、羥基羰基、氨基C1-6烷基、氨基羰基C1-6烷基、羥基羰基C1-6烷基、羥基氨基羰基、C1-6烷氧羰基、C1-6烷基氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；R5為氫、C1-6烷基、C3-10環(huán)烷基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或芳基； 為選自下列的基團(tuán) 其中各s分別為0、1、2、3、4或5；各R6與R7分別獨(dú)立選自氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵代C1-6烷基；三鹵代C1-6烷氧基；C1-6烷基；經(jīng)芳基與C3-10環(huán)烷基取代的C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷氧基C1-6烷氧基；C1-6烷基羰基；C1-6烷氧羰基；C1-6烷基磺酰基；氰基C1-6烷基；羥基C1-6烷基；羥基C1-6烷氧基；羥基C1-6烷基氨基；氨基C1-6烷氧基；二(C1-6烷基)氨基羰基；二(羥基C1-6烷基)氨基；(芳基)(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基氨基C1-6烷基；芳基磺酰；芳基磺酰氨基；芳氧基；芳氧基C1-6烷基；芳基C2-6鏈烯二基；二(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；氨基磺?；被?C1-6烷基)氨基；氨基磺?；被?C1-6烷基)氨基C1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基磺?；被?C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基磺?；被?C1-6烷基)氨基C1-6烷基；氰基；硫代苯基；經(jīng)下列基團(tuán)取代的硫代苯基二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、羥基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基磺?；哙夯鵆1-6烷基、C1-6烷氧基哌啶基、C1-6烷氧基哌啶基C1-6烷基、嗎啉基C1-6烷基、羥基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、或二(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基；呋喃基；經(jīng)羥基C1-6烷基取代的呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；噁唑基；經(jīng)芳基與C1-6烷基取代的噁唑基；C1-6烷基三唑基；四唑基；吡咯烷基；吡咯基；哌啶基C1-6烷氧基；嗎啉基；C1-6烷基嗎啉基；嗎啉基C1-6烷氧基；嗎啉基C1-6烷基；嗎啉基C1-6烷基氨基；嗎啉基C1-6烷基氨基C1-6烷基；哌嗪基；C1-6烷基哌嗪基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷氧基；哌嗪基C1-6烷基；萘磺?；哙夯?；萘磺酰哌啶基；萘磺酰基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基氨基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基氨基C1-6烷基；C1-6烷基哌嗪基磺?；话被酋；哙夯鵆1-6烷氧基；氨基磺酰基哌嗪基；氨基磺?；哙夯鵆1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基磺?；哙夯欢?C1-6烷基)氨基磺?；哙夯鵆1-6烷基；羥基C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；C1-6烷氧基哌啶基；C1-6烷氧基哌啶基C1-6烷基；哌啶基氨基C1-6烷基氨基；哌啶基氨基C1-6烷基氨基C1-6烷基；(C1-6烷基哌啶基)(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基氨基；(C1-6烷基哌啶基)(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基氨基C1-6烷基；羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；(羥基C1-6烷基)(C1-6烷基)氨基；(羥基C1-6烷基)(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；羥基C1-6烷基氨基C1-6烷基；二(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基；吡咯烷基C1-6烷基；吡咯烷基C1-6烷氧基；吡唑基；硫代吡唑基；經(jīng)選自C1-6烷基或三鹵代C1-6烷基中的兩個(gè)取代基取代的吡唑基；吡啶基；經(jīng)C1-6烷氧基、芳氧基或芳基取代的吡啶基；嘧啶基；四氫嘧啶基哌嗪基；四氫嘧啶基哌嗪基C1-6烷基；喹啉基；吲哚基；苯基；經(jīng)分別獨(dú)立選自下列的1、2或3個(gè)取代基取代的苯基鹵基、氨基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-4烷基、三氟甲基、三氟甲氧基、羥基C1-4烷氧基、C1-4烷基磺?；?、C1-4烷氧基C1-4烷氧基、C1-4烷氧羰基、氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基羰基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、氨基磺?；被?C1-4烷基)氨基、氨基磺?；被?C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基磺?；被?C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基磺?；被?C1-4烷基)氨基C1-6烷基、氰基、哌啶基C1-4烷氧基、吡咯烷基C1-4烷氧基、氨基磺酰基哌嗪基、氨基磺?；哙夯鵆1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基磺酰基哌嗪基、二(C1-4烷基)氨基磺酰基哌嗪基C1-4烷基、羥基C1-4烷基哌嗪基、羥基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、C1-4烷氧基哌啶基、C1-4烷氧基哌啶基C1-4烷基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、(羥基C1-4烷基)(C1-4烷基)氨基、(羥基C1-4烷基)(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(羥基C1-4烷基)氨基、二(羥基C1-4烷基)氨基C1-4烷基、呋喃基、經(jīng)以下取代的呋喃基-CH＝CH-CH＝CH-、吡咯烷基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷氧基、嗎啉基、嗎啉基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷基、嗎啉基C1-4烷基氨基、嗎啉基C1-4烷基氨基C1-4烷基、哌嗪基、C1-4烷基哌嗪基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷氧基、哌嗪基C1-4烷基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基氨基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基氨基C1-6烷基、四氫嘧啶基哌嗪基、四氫嘧啶基哌嗪基C1-4烷基、哌啶基氨基C1-4烷基氨基、哌啶基氨基C1-4烷基氨基C1-4烷基、(C1-4烷基哌啶基)(羥基C1-4烷基)氨基C1-4烷基氨基、(C1-4烷基哌啶基)(羥基C1-4烷基)氨基C1-4烷基氨基C1-4烷基、吡啶基C1-4烷氧基、羥基C1-4烷基氨基、羥基C1-4烷基氨基C1-4烷基，二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基氨基、氨基噻二唑基、氨基磺?；哙夯鵆1-4烷氧基、或硫代苯基C1-4烷基氨基；各R6與R7可置于氮上替代氫；上述芳基為苯基，或經(jīng)一個(gè)或多個(gè)分別獨(dú)立選自鹵基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、三氟甲基、氰基或羥基羰基的取代基取代的苯基。
2.根據(jù)權(quán)利要求第1項(xiàng)的化合物，其中R8與R9分別獨(dú)立選自氫、羥基、羥基C1-6烷基、氨基C1-6烷基或氨基芳基；R5為氫、C1-6烷基、C3-10環(huán)烷基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基； 為選自下列的基團(tuán)(a-1)，(a-2)，(a-3)，(a-4)，(a-5)，(a-6)，(a-7)，(a-8)，(a-9)，(a-10)，(a-11)，(a-12)，(a-13)，(a-14)，(a-15)，(a-16)，(a-17)，(a-18)，(a-19)，(a-20)，(a-21)，(a-22)，(a-23)，(a-24)，(a-25)，(a-26)，(a-27)，(a-28)，(a-29)，(a-30)，(a-31)，(a-32)，(a-33)，(a-34)，(a-35)，(a-36)，(a-37)，(a-38)，(a-39)，(a-40)，(a-41)，(a-42)(a-43)或(a-44)；并且各R6與R7分別獨(dú)立選自氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵代C1-6烷基；三鹵代C1-6烷氧基；C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷氧基C1-6烷氧基；C1-6烷基羰基；C1-6烷基磺酰基；氰基C1-6烷基；羥基C1-6烷基；羥基C1-6烷氧基；羥基C1-6烷基氨基；氨基C1-6烷氧基；二(C1-6烷基)氨基羰基；二(羥基C1-6烷基)氨基；芳基C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基氨基；芳基磺酰；芳基磺?；被环佳趸?；芳基C2-6鏈烯二基；二(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；氰基；硫代苯基；經(jīng)下列基團(tuán)取代的硫代苯基二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基或二(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基；呋喃基；咪唑基；C1-6烷基三唑基；四唑基；吡咯烷基；哌啶基C1-6烷氧基；嗎啉基；C1-6烷基嗎啉基；嗎啉基C1-6烷氧基；嗎啉基C1-6烷基；C1-6烷基哌嗪基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷氧基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；C1-6烷基哌嗪基磺?；?；氨基磺?；哙夯鵆1-6烷氧基；氨基磺?；哙夯?；氨基磺酰基哌嗪基C1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基磺酰基哌嗪基；二(C1-6烷基)氨基磺酰基哌嗪基C1-6烷基；羥基C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；C1-6烷氧基哌啶基；C1-6烷氧基哌啶基C1-6烷基；羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；(羥基C1-6烷基)(C1-6烷基)氨基；(羥基C1-6烷基)(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；吡咯烷基C1-6烷氧基；吡唑基；硫代吡唑基；經(jīng)選自C1-6烷基或三鹵代C1-6烷基中兩個(gè)取代基取代的吡唑基；吡啶基；經(jīng)C1-6烷氧基或芳基取代的吡啶基；嘧啶基；喹啉基；吲哚基；苯基；經(jīng)分別獨(dú)立選自下列的1、2或3個(gè)取代基取代的苯基鹵基、氨基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-4烷基、三氟甲基、三氟甲氧基、羥基C1-4烷氧基、C1-4烷氧基C1-4烷氧基、氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、哌啶基C1-4烷氧基、吡咯烷基C1-4烷氧基、氨基磺?；哙夯?、氨基磺酰基哌嗪基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基磺?；哙夯?、二(C1-4烷基)氨基磺酰基哌嗪基C1-4烷基、羥基C1-4烷基哌嗪基、羥基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、C1-4烷氧基哌啶基、C1-4烷氧基哌啶基C1-4烷基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、(羥基C1-4烷基)(C1-4烷基)氨基、(羥基C1-4烷基)(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷基、C1-4烷基哌嗪基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷氧基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、羥基C1-4烷基氨基、二(羥基C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基氨基、氨基噻二唑基、氨基磺?；哙夯鵆1-4烷氧基、或硫代苯基C1-4烷基氨基。
3.根據(jù)權(quán)利要求第1項(xiàng)的化合物，其中t為0；m為0；R1為-C(O)NR8R9、-C(O)-C1-6烷二基SR10、-NR11C(O)N(OH)R10、-NR11C(O)C1-6烷二基SR10、-NR11C(O)C＝N(OH)R10或另一個(gè)Zn螯合基，其中R8與R9分別獨(dú)立選自氫、羥基、羥基C1-6烷基或氨基C1-6烷基；R2為氫、鹵基、羥基、氨基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、三氟甲基或二(C1-6烷基)氨基；-L-為直接鍵或選自下列的二價(jià)基團(tuán)C1-6烷二基、C1-6烷二基氧、氨基或羰基；R4為氫、羥基、氨基、羥基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、芳基C1-6烷基、氨基羰基、氨基C1-6烷基、C1-6烷基氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；R5為氫； 為選自下列的基團(tuán)(a-1)，(a-3)，(a-4)，(a-5)，(a-6)，(a-7)，(a-8)，(a-9)，(a-10)，(a-11)，(a-12)，(a-13)，(a-14)，(a-15)，(a-16)，(a-17)，(a-18)，(a-19)，(a-20)，(a-21)，(a-22)，(a-23)，(a-24)，(a-25)，(a-26)，(a-28)，(a-29)，(a-30)，(a-31)，(a-32)，(a-33)，(a-34)，(a-35)，(a-36)，(a-37)，(a-38)，(a-39)，(a-40)，(a-41)，(a-42)，(a-44)，(a-45)，(a-46)，(a-47)，(a-48)或(a-51)；各s分別為0、1、2、3或4；R6為氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵代C1-6烷基；三鹵代C1-6烷氧基；C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷基羰基；C1-6烷氧羰基；C1-6烷基磺?；?；羥基C1-6烷基；芳氧基；二(C1-6烷基)氨基；氰基；硫代苯基；呋喃基；經(jīng)羥基C1-6烷基取代的呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；噁唑基；經(jīng)芳基與C1-6烷基取代的噁唑基；C1-6烷基三唑基；四唑基；吡咯烷基；吡咯基；嗎啉基；C1-6烷基嗎啉基；哌嗪基；C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷基哌嗪基；C1-6烷氧基哌啶基；吡唑基；經(jīng)選自C1-6烷基或三鹵代C1-6烷基中1或2個(gè)取代基取代的吡唑基；吡啶基；經(jīng)C1-6烷氧基、芳氧基或芳基取代的吡啶基；嘧啶基；喹啉基；吲哚基；苯基；或經(jīng)分別獨(dú)立選自鹵基、C1-6烷基、C1-6烷氧基或三氟甲基中的1或2個(gè)取代基取代的苯基；且R7為氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵代C1-6烷基；三鹵代C1-6烷氧基；C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷基羰基；C1-6烷氧羰基；C1-6烷基磺酰基；羥基C1-6烷基；芳氧基；二(C1-6烷基)氨基；氰基；吡啶基；苯基；或經(jīng)分別獨(dú)立選自鹵基、C1-6烷基、C1-6烷氧基或三氟甲基中的1或2個(gè)取代基取代的苯基。
4.根據(jù)權(quán)利要求第1與2項(xiàng)的化合物，其中n為1；m為0或1；t為0、1或2；各Q為-C≤；R1為-C(O)NH(OH)；R2為氫或C1-6烷基；-L-為直接鍵；R4為氫；R5為氫； 為選自(a-1)、(a-20)、(a-25)、(a-27)、(a-28)、(a-29)、(a-41)或(a-42)的基團(tuán)；各s分別獨(dú)立為0、1或2；且各R6分別獨(dú)立選自氫、鹵基、C1-6烷基或C1-6烷氧基。
5.根據(jù)權(quán)利要求第1、2與4項(xiàng)的化合物，其中n為1；m為0或1；t為0、1或2；各Q為-C≤；R1為-C(O)NH(OH)；R2為氫；-L-為直接鍵；R4為氫；R5為氫； 為選自(a-1)、(a-20)、(a-27)、(a-28)、(a-29)、(a-41)或(a-42)的基團(tuán)；各s分別獨(dú)立為0、1或2；且各R6分別獨(dú)立選自氫、鹵基、C1-6烷基或C1-6烷氧基。
6.根據(jù)權(quán)利要求第1、2、4與5項(xiàng)的化合物，其中該化合物為No.3化合物。
7.藥物組合物，其包含藥理上可接受的載體及作為活性成分的治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求第1至6項(xiàng)的化合物。
8.制備根據(jù)權(quán)利要求第8項(xiàng)的藥物組合物的方法，其中充分混合藥理上可接受的載體及根據(jù)權(quán)利要求第1至6項(xiàng)的化合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求第1至6項(xiàng)中任一項(xiàng)的化合物用作藥物。
10.根據(jù)權(quán)利要求第1至6項(xiàng)中任一項(xiàng)的化合物用于制造藥物的用途，供治療增生性疾病。
11.制備根據(jù)權(quán)利要求第1項(xiàng)的化合物的方法，其特征在于由式(II)中間體與適當(dāng)酸如三氟乙酸(CF3COOH)反應(yīng)，產(chǎn)生式(I-a)異羥肟酸，其中R1為-C(O)NH(OH)。
12.檢測(cè)或鑒定生物樣本中HDAC的方法，其包括檢測(cè)或測(cè)定如權(quán)利要求第1項(xiàng)所定義的標(biāo)記化合物與HDAC之間復(fù)合體的形成。
13.抗癌劑與根據(jù)權(quán)利要求第1至6項(xiàng)中任一項(xiàng)的HDAC抑制劑的組合。
全文摘要
本發(fā)明包括一種新穎的式(I)化合物其中n、m、t、R
文檔編號(hào)A61K31/53GK1642907SQ03805884
公開(kāi)日2005年7月20日 申請(qǐng)日期2003年3月11日 優(yōu)先權(quán)日2002年3月13日
發(fā)明者K·范埃梅倫, M·G·C·費(fèi)爾東克, S·F·A·范布蘭德特, L·J·J·巴克斯 申請(qǐng)人:詹森藥業(yè)有限公司