專利名稱：吡咯－2,5－二酮衍生物及其作為gsk－3抑制劑的用途的制作方法
糖原合酶激酶-3(GSK-3)為絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，是首先發(fā)現(xiàn)的能夠使糖原合酶磷酸化和鈍化的激酶中的一種，所述糖原合酶為哺乳動物中糖原合成的調(diào)節(jié)酶(Embi等人，Eur.J.Biochem.，107，519-527(1980))。存在兩種同工型GSK-3α和GSK-3β，GSK-3在體外使多種蛋白質(zhì)磷酸化。這些蛋白質(zhì)的多樣性提示GSK-3在控制細胞代謝、生長和發(fā)育中的作用。
I型糖尿病的特征是胰腺中產(chǎn)生胰島素的細胞被破壞而引起了胰島素缺乏。II型糖尿病的特征在于有缺陷的胰島素分泌和作用。胰島素與其受體結(jié)合引發(fā)一連串問題，引起磷酸化和GSK-3的抑制，促進胰島素誘導(dǎo)的對糖原和蛋白質(zhì)合成的刺激。GSK-3抑制劑已經(jīng)表現(xiàn)出模擬胰島素的作用(Coghlan等人，Chem.Biol.，7，793-803(2000))，包括降低體內(nèi)血糖水平的能力(Norman，Drug News Perspect.，14，242-247(2001))。這些最近的發(fā)現(xiàn)表明GSK-3抑制劑有潛在的治療糖尿病的作用。
阿爾茨海默癥的特征在于微管相關(guān)蛋白質(zhì)Tau以異常高度的磷酸化狀態(tài)存在(Cohen和Frame，Nature ReviewsMolecular CellBiology，2，769-776(2001年10月)<www.nature.com/reviews/molcellbio>。體外實驗表明，GSK-3使Tau上的許多高度磷酸化位點磷酸化，防止其與微管結(jié)合，使其可能發(fā)生異常的絲體裝配，這可能是在阿爾茨海默癥和其它神經(jīng)學(xué)病癥中觀察到的神經(jīng)元變性的原因。GSK-3抑制劑如胰島素和鋰離子已表現(xiàn)出誘導(dǎo)神經(jīng)元細胞中Tau的部分去磷酸化作用(Cross等人，J.Neurochem.，77，94-102(2001))。這些發(fā)現(xiàn)啟示GSK-3抑制劑有潛在的治療退行性神經(jīng)學(xué)病癥如阿爾茨海默癥的作用。
WO 98/16528描述了嘌呤衍生物、WO 99/65897描述了嘧啶和吡啶的衍生物、WO 00/38675描述了順丁烯二酰亞胺、和WO 01/56567描述了二氨基噻唑衍生物，被告知它們都是GSK-3的抑制劑。需要提供另外的GSK-3抑制劑用于治療GSK-3介導(dǎo)的內(nèi)分泌和神經(jīng)學(xué)病癥。本發(fā)明提供GSK-3的抑制劑。
本發(fā)明提供式I化合物或其藥學(xué)可接受的鹽 其中，Ar為任選地在苯環(huán)上被R8和R9取代的苯并呋喃-7-基、1-(R7)-吲哚-4-基、苯并呋喃-4-基、喹啉-5-基、喹啉-7-基、異喹啉-5-基、異喹啉-3-基、咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基、咪唑并[1，2-a]吡啶-5-基、呋喃并[3，2-c]吡啶-7-基、苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-4-基(benzo[1，3]dioxol-4-y1)、2，2-二氟苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-4-基、或任選地在苯環(huán)上被R8和R9取代和在二氫呋喃環(huán)上被C1-C4烷基取代的2，3-二氫苯并呋喃-7-基；R1a為氫、C1-C4烷氧基、-(CH2)m-G、-O-(CH2)m-G、鹵素、任選地被一個到三個鹵素取代的C1-C4烷基、任選地被-(CO2)n-(C1-C4烷基)取代一至兩次的哌嗪-1-基、或-(CH2)-O-(CH2)-O-(CH3)；R1b為氫或鹵素；R1c為氫或鹵素；G在每種情況中獨立地為羥基、NR11R12或哌啶-4-基；R2為氫、C1-C4烷基、-(CH2)m-G、四氫吡喃-4-基、4-(NR4R5)環(huán)己-1-基、4-羥基環(huán)己-1-基、2-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-5-基、
環(huán)己烷-1-酮-4-基、吡啶-4-基；且R3為氫、鹵素、C1-C4烷基或環(huán)丙基；或R2和R3一起表示 R4為氫且R5為氫或C1-C4烷基，或R4和R5與和它們連接的氮一起形成吡咯烷環(huán)；R6為氫、芐基、-CO2(C1-C4烷基)、-C(O)-(C1-C4烷基)n-NR14R15、-C(O)四氫吡喃-4-基、-C(O)嗎啉-4-基、-CH2-四氫吡喃-4-基、氨基酸殘基、-C(O)吡啶-2-基，-C(O)吡啶-3-基、-C(O)吡啶-4-基、-C(O)嘧啶-5-基、C1-C4烷基、-C(O)吡嗪-2-基、或-CO2-(C1-C4烷基)-(C1-C4烷氧基)；R7為氫、C1-C4烷基或-(CH2)m-G；R8為-NHCO2(C1-C4烷基)、-NHSO2(C1-C4烷基)、鹵素、氨基、-O-(CH2)m-G、-NHC(O)(C1-C4烷基)、C1-C4烷氧基、羥基、-O-R10、C1-C4烷基，C1-C4烷硫基或-(CH2)m-G；R9為鹵素；R10為哌啶-3-基、哌啶-4-基、或吡咯烷-3-基；R11和R12獨立地選自氫、C1-C4烷基、環(huán)丙基甲基、芐基、或與和它們連接的氮一起形成哌啶、4-羥基哌啶、4-(C1-C4烷基)哌啶、N-(R13)-哌嗪、或嗎啉環(huán)；R13為氫、C(O)-(C1-C4烷基)、或C1-C4烷基；R14和R15獨立地為氫或C1-C4烷基；R16在每種情況中獨立地為氫、偕二甲基、偕二乙基、螺環(huán)稠合的C3-C6環(huán)烷基、或任選地被羥基取代的C1-C4烷基；R17表示氫、C1-C4烷基、或偕二甲基，前提是R16和R17之間的碳原子總數(shù)不超過五個；
m在每種情況中獨立地為2、3、4、或5；n在每種情況中獨立地為0或1；但具有以下條件i)當(dāng)G為羥基時，R1a、R2、R7、或R8中不超過兩個可為-(CH2)m-G、或-O-(CH2)m-G；和(ii)當(dāng)G為NR11R12時，R1a、R2、R7、或R8中不超過一個可為-(CH2)m-G、或-O-(CH2)m-G。
本發(fā)明還提供治療哺乳動物糖尿病的方法，其包括對需要這種治療的哺乳動物給予有效量的式I化合物。
本發(fā)明還提供治療哺乳動物阿爾茨海默癥的方法，其包括對需要這種治療的哺乳動物給予有效量的式I化合物。
本發(fā)明另外提供抑制哺乳動物GSK-3的方法，其包括對需要這種治療的哺乳動物給予有效量的式I化合物。
本發(fā)明還提供一種藥物制劑，其包括式I化合物以及藥學(xué)可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
本發(fā)明另外提供刺激哺乳動物的骨沉積的方法，其包括對需要這種治療的哺乳動物給予有效量的GSK-3抑制劑。
本發(fā)明另外提供刺激哺乳動物的骨沉積的方法，其包括對需要這種治療的哺乳動物給予有效量的式I化合物。
另外，本發(fā)明提供式I化合物在制備用于治療糖尿病的藥物中的用途。本發(fā)明還提供式I化合物在制備用于治療阿爾茨海默癥的藥物中的用途。本發(fā)明還提供式I化合物在制備用于抑制GSK-3的藥物中的用途。
本發(fā)明還提供式I化合物在制備用于抑制GSK-3的藥物中的用途。另外，本發(fā)明提供了含式I化合物的治療糖尿病的藥物制劑。此外，本發(fā)明提供式I化合物在制備用于治療糖尿病的藥物中的用途。本發(fā)明還提供式I化合物在制備用于治療阿爾茨海默癥的藥物中的用途。本發(fā)明還提供適于刺激哺乳動物的骨沉積的制劑，其包含式I化合物。本發(fā)明另外提供式I化合物在制備用于刺激骨沉積的藥物中的用途。
以下定義用于表示本文中使用的幾個術(shù)語的含義和范圍。本文使用的通用術(shù)語具有它們通常的含義。
術(shù)語“GSK-3”指GSK-3α和/或GSK-3β。
術(shù)語“糖尿病”指I型和/或II型糖尿病。
術(shù)語“有效量的式I化合物”中的“有效量”指能夠抑制GSK-3的本發(fā)明化合物的量。
本文中使用的通用化學(xué)術(shù)語具有它們常用的含義。例如，如本文中所使用的，術(shù)語“C1-C4烷基”，單獨使用或組合使用，表示由碳和氫原子組成的直鏈或支鏈的C1-C4烷基，其例子為甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲丁基、叔丁基等。術(shù)語“偕二甲基”表示連接在同一取代位置上的兩個甲基。術(shù)語“C3-C6環(huán)烷基”是指環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基。術(shù)語“螺環(huán)稠合的C3-C6環(huán)烷基”是指通過螺鍵與-個碳原子連接的如上定義的C3-C6環(huán)烷基。
術(shù)語“C1-C4烷氧基”，單獨使用或組合使用，表示如前所述的通過一個氧原子連接的烷基，諸如例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基等。術(shù)語“C1-C4烷硫基”，單獨使用或組合使用，表示如前所述的通過一個硫原子連接的烷基，包括甲硫基、乙硫基、異丁硫基等。
術(shù)語“羥基”，單獨使用或組合使用，表示-OH基團。如本文中所使用的，術(shù)語“鹵代”或“鹵素”表示氟、氯、溴或碘。
術(shù)語“氨基酸殘基”是指選自通過酸羰基連接的以下的氨基酸殘基丙氨?；?、精氨酰基、天冬酰胺酰基、天冬氨?；腚装滨；?、谷氨酰胺?；⒐劝滨；?、甘氨?；?、組氨?；?、異亮氨酰基、亮氨酰基、賴氨?；?、甲硫氨?；⒈奖滨；⒈交拾滨；⒏滨；?、絲氨酰基、蘇氨酰基、色氨?；?、酪氨?；?、和纈氨?；?。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解本發(fā)明的大多數(shù)或所有化合物能夠形成鹽。在所有的情況中，在其名稱中也包括所有化合物的藥學(xué)可接受鹽。本發(fā)明的化合物是胺，因此與多種無機酸和有機酸中的任何一種反應(yīng)形成藥學(xué)可接受的酸加成鹽。優(yōu)選的藥學(xué)可接受鹽是與鹽酸形成的那些鹽。
雖然所有式I的化合物可用作GSK-3的抑制劑，但優(yōu)選某些化合物。下段描述這些優(yōu)選的類別a)Ar為苯并呋喃-7-基；
b)Ar為任選地在苯環(huán)上被鹵素取代的2，3-二氫苯并呋喃-7-基；c)Ar為2，3-二氫-6-氟苯并呋喃-7-基；d)Ar為咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基；e)R1a為-(CH2)m-G；f)R1a為-O-(CH2)m-G；g)R1b為氫；h)R1b為氟；i)R1c為氫；j)R1c為氟；k)G為羥基；l)G為NR11R12；m)G為哌啶-4-基；n)R2為-(CH2)m-G；o)R2為1-(R6)-哌啶-4-基；p)R2為進一步被甲基取代的1-(R6)-哌啶-4-基；q)R3為鹵素；r)R2和R3一起表示 s)R6為氫；t)R6為-C(O)嗎啉-4-基；u)R6為-C(O)吡嗪-2-基；v)R7為甲基；w)R7為-(CH2)m-G；x)R8為-O-(CH2)m-G；y)R8為鹵素；z)R8為氟；aa)R8為甲氧基；bb)R8為羥基；cc)R9為氟；
dd)R9為氯；ee)R11為氫；ff)R11為甲基；gg)R11為乙基；hh)R12為氫；ii)R12為甲基；jj)R12為乙基；kk)R13為氫；ll)R14和R15都是氫；mm)R14為氫且R15為甲基；nn)R16為甲基；oo)R16為偕二甲基，pp)R17為偕二甲基；qq)化合物為游離堿；rr)化合物為鹽；ss)化合物為鹽酸鹽。
上段可組合形成另外優(yōu)選類別的化合物。
式I的化合物為GSK-3的抑制劑。因此，本發(fā)明還提供抑制哺乳動物GSK-3的方法，其包括對需要所述治療的哺乳動物給予GSK-3抑制量的式I的化合物。據(jù)信本發(fā)明的化合物可用于治療I型和/或II型糖尿病。此外，據(jù)信本發(fā)明的化合物可用于治療神經(jīng)學(xué)病癥如癡呆，特別是阿爾茨海默型癡呆。還認(rèn)為本發(fā)明的化合物可用于治療雙相性精神障礙。
本發(fā)明的另一個實施方案為GSK-3抑制劑在迅速骨沉積中的應(yīng)用。這種刺激迅速骨沉積的能力為治療多種疾病和癥狀提供了新手段，這種方法有利于新骨骼的生長。這些疾病包括骨質(zhì)疏松和骨脆癥(fraility)以及由于牙周病引起的骨損失。表現(xiàn)出這種活性的化合物也可用于促進傷口愈合和骨折修復(fù)。預(yù)計介導(dǎo)骨沉積的GSK-3抑制劑可通過增強人工關(guān)節(jié)和患者骨骼的附著來改善患者在關(guān)節(jié)置換手術(shù)中的結(jié)果。優(yōu)選本發(fā)明的化合物用于誘導(dǎo)迅速骨沉積的應(yīng)用。通過給藥式I化合物治療的哺乳動物優(yōu)選是人。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以知道某些取代基的引入會使式I的化合物產(chǎn)生不對稱現(xiàn)象。本發(fā)明涵蓋了所有的對映異構(gòu)體和對映異構(gòu)體混合物，包括外消旋體。包含手性中心的本發(fā)明的化合物優(yōu)選為單一的對映異構(gòu)體。
可通過多種過程制備本發(fā)明的化合物，以下方案敘述了其中的一些。應(yīng)理解為，本領(lǐng)域技術(shù)人員若改變以下方案中的個別步驟也可以得到式I化合物。生成式I化合物所需步驟的具體順序取決于欲合成的具體化合物，起始化合物，以及某些取代基的相對易變性。以下方案中未出現(xiàn)某些取代基，如R1a、R1b、和R1c，是為了清楚地說明，并不意味著以任何方式限制本方案的說明。
方案I方法A 方法B 方案I描述了通過方法A和B形成式I的雙芳基順丁烯二酰亞胺的合成方法。該反應(yīng)為本領(lǐng)域公知的。參見例如，F(xiàn)aul等人，J.Org.Chem.，63，6053-6058(1998)。在適當(dāng)?shù)娜軇?如二甲基甲酰胺或四氫呋喃)和適當(dāng)?shù)膲A(如氫化鈉或優(yōu)選叔丁醇鉀)存在下，式(1)或(4)的氧代乙酸酯分別與式(2)或(3)的乙酰胺反應(yīng)。該反應(yīng)在0℃到室溫下進行，反應(yīng)物攪拌1-24小時。用適當(dāng)?shù)乃崛琨}酸處理反應(yīng)混合物，然后在約環(huán)境溫度下攪拌混合物1-24小時。得到的式I的順丁烯二酰亞胺可通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)分離，并根據(jù)需要或期望通過結(jié)晶或色譜法純化。
所需的式(1)和(4)的氧代乙酸酯可從適當(dāng)取代的吲哚和芳基基團制備。氧代乙酸酯的形成在方案IIa和IIb中描述。
方案IIa 方案IIb 式(1)的3-吲哚基氧代乙酸酯為市售的或可用方案IIa的方法制備。適當(dāng)取代的吲哚與草酰鹵化物(如草酰氯)在有機堿如2，6-二甲基吡啶或三乙胺的存在下在適當(dāng)?shù)娜軇?如二氨甲烷或乙醚)中反應(yīng)，得到式(1)的化合物。該反應(yīng)在低溫下進行，混合物攪拌1-24小時。當(dāng)使用草酰鹵化物時，混合物進一步冷卻到約-78℃并加入醇鹽來源如甲醇鈉，同時加入適當(dāng)?shù)娜軇┤缂状?。得到的氧代乙酸酯可通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)分離，并根據(jù)需要或期望通過結(jié)晶或色譜法純化。方案II中式(1)的形成為本領(lǐng)域公知的，參見例如，F(xiàn)aul等人，J.Org.Chem.，63，6053-6058(1998)。
在方案IIb中，式(4)的化合物從適當(dāng)取代的式(11)芳基鹵制備，其中X為鹵素。式(11)的化合物經(jīng)過鋰-鹵素交換，隨后如方案IIa中所述，用草酸酯，如二烷基草酸酯淬滅鋰陰離子，得到式(4)的化合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員還知道可選擇的合成方法還有使用格氏試劑，該格氏試劑草酸酯在低溫下淬滅。
乙酰胺的形成在方案III中描述。
方案IIIa 方案IIIb 在方案IIIa中，在步驟i中，式(11)的化合物通過鋰-鹵素交換轉(zhuǎn)化為式(12)的化合物，然后用N，N′-二甲基甲酰胺停止反應(yīng)。通過將式(12)的化合物、氰基磷酸二乙酯和氰化鋰在適當(dāng)?shù)娜軇┤缢臍溥秽蟹磻?yīng)原位形成的磷酸化的羥腈，在步驟f中形成式(13)的化合物。對于該轉(zhuǎn)化的類似的例子，參見Yoneda等人，TetrahedronLett.，30，3681-3684(1989)；Yoneda等人，J.Org.Chem.，56，1827-1832(1991)。步驟g中的乙腈基團的堿水解得到式(3)的乙酰胺。
此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員知道，作為可選擇的方法，使用2-乙氧基-2-氧代乙基溴化鋅與鈀催化劑在適當(dāng)?shù)娜軇┤缢臍溥秽型ㄟ^步驟j，可以得到式(14)的化合物。然后式(14)的化合物經(jīng)過步驟k的堿水解條件，得到式(15)的化合物。式(15)的化合物在步驟I中在標(biāo)準(zhǔn)偶聯(lián)條件下在氨源如氫氧化銨或氨氣的存在下轉(zhuǎn)化為式(2)的化合物。適當(dāng)?shù)呐悸?lián)試劑包括N，N′-羰基二咪唑(CDI)、N，N′-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和1-(3-(1-吡咯烷基)丙基)-3-乙基碳二亞胺(PEPC)。適當(dāng)任選的用于偶聯(lián)反應(yīng)的催化劑包括N，N-[二甲基]-4-氨基吡啶(DMAP)。所有試劑在適當(dāng)?shù)娜軇?典型的為二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、二氧雜環(huán)己烷、或乙醚-中合并，并在環(huán)境溫度到約溶劑的回流溫度下攪拌1到72小時?？赏ㄟ^標(biāo)準(zhǔn)萃取和結(jié)晶技術(shù)分離期望的產(chǎn)物，并根據(jù)需要或期望通過色譜法或結(jié)晶純化。
作為選擇，在步驟m中，本領(lǐng)域技術(shù)人員知道式(14)的化合物可直接地反應(yīng)形成式(2)的化合物。將式(14)的化合物在已經(jīng)用氨氣飽和的適當(dāng)溶劑如甲醇中放入密封容器中并在高溫下反應(yīng)形成式(2)的化合物。
用于形成式(2)或(4)所需的芳基中間體為市售的或按本文中所述合成制備。
與方案IIIa的步驟g類似，式(10)的化合物轉(zhuǎn)化為式(3)的化合物的轉(zhuǎn)化，包括用適當(dāng)取代的吲哚乙腈進行堿水解，為本領(lǐng)域熟知且可理解的，參見例如，Larock，Comprehensive OrganicTransformations，第二版，John Wiley & Sons，New York，第1988-1989頁(1999)。得到的式(3)的3-吲哚基乙酰胺可通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)分離，并根據(jù)需要或期望通過結(jié)晶或色譜法純化。該反應(yīng)產(chǎn)生適當(dāng)?shù)?-取代的吲哚。
方案IV 式(18)的苯并呋喃可由式(16)的化合物得到。如步驟n中所示，用溴代乙醛和適當(dāng)?shù)膲A如碳酸鉀使適當(dāng)取代的酚發(fā)生O-烷基化。在步驟o中，在回流溫度下，環(huán)合在適當(dāng)?shù)娜軇┤缏缺街型瓿?，其中水可以是共沸物?br> 方案V 式(21)的化合物可如方案V所示形成。步驟p描述了任選取代的2-氨基吡啶與氧丁烯酸乙酯在乙腈中在回流條件下進行[2+3]環(huán)合，得到式(20)的化合物。如前述步驟m中所述，式(20)可轉(zhuǎn)化為式(21)乙酰胺。
方案VI 方案VI的過程為式(5)的N-甲基吡咯-2，5-二酮向式(6)相應(yīng)的呋喃-2，5-二酮的轉(zhuǎn)換。如步驟b所示，該反應(yīng)可通過適當(dāng)?shù)膲A進行，其中式(5)和(6)是用于操縱R取代基的合成穩(wěn)定的中間體。式(6)的呋喃二酮可在步驟c中通過使用烷基-二硅氮烷轉(zhuǎn)化為式(I)的1H-吡咯-2，5-二酮。這種類型的轉(zhuǎn)化是本領(lǐng)域熟知的，參見例如，Davis等人，Tetrahedron Lett.，31(36)，5201-5204(1990)；和Mayer等人，Tetrahedron Lett.，37(26)，4483-4486(1996)。
方案IIa和IIIb所需的吲哚為市售的或可通過本領(lǐng)域熟知的方法制備。吲哚合成的描述在Robinson，The Fischer IndoleSynthesis，John Wiley & Sons，New York(1983)；Hamel等人，J.Org.Chem.，59，6372(1994)；和Russell等人，Org.Prep.andProcedures Int1.，17，391(1985)。
本發(fā)明的許多化合物不僅是GSK-3的抑制劑，而且是可用于制備本發(fā)明另外的化合物的中間體。例如，仲胺可以被乙?；?、烷基化或與簡單的羧酸或氨基酸在標(biāo)準(zhǔn)條件下偶聯(lián)。此外，酯基團可被還原成相應(yīng)的醇，然后這些醇被活化并被各種親核試劑取代形成本發(fā)明的其它化合物。
本領(lǐng)域技術(shù)人員知道其他各種可應(yīng)用到所述合成方法中用于生產(chǎn)制備本發(fā)明其他化合物的有用活性中間體的轉(zhuǎn)化方法。這些轉(zhuǎn)化方法包括但不限于用適當(dāng)?shù)陌愤M行鹵素親核置換(參見Larock，Comprehensive Organic Transformations，第二版，John Wiley &Sons，New York，779-780(1999))。適當(dāng)?shù)陌返耐榛蛞阴；?、羥基中間體的O-烷基化、或羥基-鹵素交換(參見Larock，Comprehensive Organic Transformations，第二版，John Wiley &Sons，New York，689-697(1999))。另外，化合物可與適當(dāng)?shù)脑噭┓磻?yīng)，以引入適當(dāng)?shù)陌被Ｗo基如甲?；?、乙酰基、或優(yōu)選叔丁氧羰基。用于引入這些基團的技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。
另外，為用相應(yīng)胺取代醇衍生物，本領(lǐng)域技術(shù)人員知道必要的中間體會帶有某些適當(dāng)?shù)碾x去基團。這種離去基團包括但不限于鹵化物、氧鎓離子、高氯酸烷基酯、氨合烷基磺酸酯、氟代磺酸烷基酯、九氟丁磺酸酯、2，2，2-三氟乙磺酸酯、三氟甲磺酸酯和磺酸酯，優(yōu)選甲磺酸酯或?qū)妆交撬狨?。用于引入這些基團的技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，參見例如，March，“Advanced Organic Chemistry，”第五版，John Wiley and Sons，New York，445-449頁(2001)。本領(lǐng)域技術(shù)人員知道氮保護基可在合成本發(fā)明的化合物中任何方便的時候除去。形成和除去氨基保護基的方法是本領(lǐng)域公知的，參加例如，Greene和Wuts，“Protective Groups in Organic Synthesis，”第三版，John Wiley and Sons，New York，N.Y.，第7章(1991)。
本領(lǐng)域技術(shù)人員還知道式I的化合物中不是所有取代基都能夠經(jīng)受得住合成化合物使用的某些反應(yīng)條件。這些基團可根據(jù)需要和期望在合成中方便的時候引入，或被保護，然后脫保護。此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員知道，在許多情況中，引入基團的順序不是關(guān)鍵的。形成式I的化合物需要的步驟的具體順序取決于要合成的具體化合物、起始化合物，和被取代的基團的相對易變性。
以下制備例和實施例進一步說明本發(fā)明化合物的制備，但不應(yīng)解釋為以任何方式限制本發(fā)明的范圍。本領(lǐng)域技術(shù)人員知道可以作多種改進而不脫離本發(fā)明的精神實質(zhì)和范圍。說明書中提及的所有出版物表示本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員的水平。
除非另外指定，本發(fā)明的制備例和實施例中使用的術(shù)語和縮寫具有它們普通的含義。例如“℃”、“N”、“mmol”、“g”、“mL”、“M”、“HPLC”、“IR”、“MS(FD)”、“MS(IS)”、“MS(FIA)”、“MS(FAB)”、“MS(EI)”、“MS(ES)”、“UV”、和“1H NMR”分別指的是攝氏溫度、常態(tài)、毫摩爾、克、毫升、摩爾濃度、高效液相色譜法、紅外光譜測定法、場解吸質(zhì)譜法、離子噴射質(zhì)譜法、流量注射分析質(zhì)譜法、快原子轟擊質(zhì)譜法、電子撞擊質(zhì)譜法、電噴霧質(zhì)譜法、紫外光譜測定法、和質(zhì)子核磁共振波譜法。另外，紅外吸收光譜中列出的吸收峰值只是所關(guān)注的峰值，并非觀察到的所有峰值。
氧代乙酸甲酯中間體的制備制備例12-(1H-吲哚-7-基)乙醇a)2-(2-硝基苯基)-1-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙烷把2-硝基苯乙醇(20g，120mmol)和咪唑(11.4g，167mmol)加入到二氯甲烷(200mL)中。冷卻到0℃并加入固體叔丁基二甲基甲硅烷基氯(23.4g，155mmol)。在20℃攪拌2小時并用1∶1的乙酸乙酯∶乙醚稀釋。用蒸餾水、3％乙酸水溶液、0.5M的碳酸氫鈉水溶液、和飽和氯化鈉水溶液洗。無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮，得到32.4g(96％)的標(biāo)題化合物，為淺黃色油狀物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.89(dd，1H，J＝8.0，1.2Hz)，7.50(dt，1H，J＝7.2，1.6Hz)，7.37(m，2H)，3.89(t，2H，J＝6.4Hz)，3.12(t，2H，J＝6.4Hz)，0.83(s，9H)，0.06(s，6H)。
b)2-(1H-吲哚-7-基)乙醇在氮氣下把1.0M乙烯基溴化鎂的四氫呋喃(430mL，430mmol)溶液緩慢加入到攪拌的2-(2-硝基苯基)-1-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙烷(27.4，97.3mmol)的無水四氫呋喃(300mL)溶液中，保持反應(yīng)的內(nèi)溫為-48℃到-43℃。在-45℃攪拌45分鐘。傾入到1.5升攪拌的飽和氯化銨水溶液中并用50％已烷-50％乙醚萃取。無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。在二氧化硅上進行急驟色譜純化，用純己烷到7％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫，得到14.4g的褐色油狀物，其為叔丁基二甲基甲硅烷基保護的產(chǎn)物和起始物質(zhì)的混合物。
把褐色油狀物溶解于四氫呋喃(500mL)中，加入蒸餾水(100mL)，并冷卻混合物到15℃。加入1M鹽酸水溶液(100mL)，然后在15℃攪拌2小時。加入固體碳酸氫鈉直到反應(yīng)混合物為堿性，通過加入固體氯化鈉飽和。分液，過濾并減壓濃縮，得到9.3的褐色油狀物，其為標(biāo)題化合物和2-硝基苯乙醇的混合物。
把褐色油狀物溶解于四氫呋喃(100mL)中，加入絕對乙醇(50mL)，然后加入10％的鈀/碳，并在氫氣(1atm)下在20℃攪拌混合物2小時。用乙酸乙酯稀釋混合物并通過Celite墊片過濾。用0.2M鹽酸水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗。無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。在二氧化硅上進行急驟色譜純化，用乙酸乙酯-已烷洗脫，得到6.9g(44％)的標(biāo)題化合物，為灰白色固體。HRMS(M+H)＝162.0924。
制備例21-(1，4-二氧雜-螺[4.5]癸-8-基)-4-氟-1H-吲哚a)N-(橋-8-乙酯基-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷-3-基)-吲哚把N-乙酯基-4-托品酮(11.97g，60.71mmol)和2-(2，2-二甲氧基乙基)苯胺(10.0g，55.19mmol)溶解于乙酸(60mL)中，并用三乙酰氧基硼氫化鈉(17.54g，82.78mmol)處理。室溫攪拌4天，然后在70℃攪拌6小時。用水(400mL)和氫氧化鈉洗，用乙酸乙酯萃取。有機層用硫酸鈉干燥并蒸發(fā)。殘余的油狀物通過急驟色譜法(二氯甲烷/乙醇95∶5)純化，得到13.36g(34％)的標(biāo)題化合物，為白色結(jié)晶。MS299.1 M++1。
b)1-(1，4-二氧雜-螺[4.5]癸-8-基)-4-氟-1H-吲哚把2-(2’，2’-二甲氧基乙基)-3-氟苯胺(10g，50.2mmol)和1，4-環(huán)己烷二酮單縮酮(8.62g，55.2mmol)溶解于冰乙酸(100mL)中，加入三乙酰氧基硼氫化鈉(15.96g，75.3mmol)，并加熱混合物到70℃，加熱20小時。在冰浴中冷卻反應(yīng)混合物并用5N氫氧化鈉水溶液調(diào)成堿性。用二氯甲烷萃取混合物，用水、鹽水洗并硫酸鈉干燥，得到黃褐色油狀物(14g)。通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫，得到純產(chǎn)物，為固體(11.14g，77.14％)。ESMSm/z(相對豐度)276.2(M++1，100)。
制備例31-(2，2-二甲氧基乙基)-3-甲基-2-硝基苯使2-硝基間二甲苯(5mL，0.037mol)、N，N-二甲基甲酰胺二甲基縮醛(5.4mL，1.1當(dāng)量)和N，N-二甲基甲酰胺(60mL)在燒瓶中合并并在氮氣下回流2天。使其冷卻到室溫，然后濃縮到約一半的體積。加入甲醇(40mL)和三甲基甲硅烷基氯(6.6mL，1.4當(dāng)量)?；亓鬟^夜。冷卻到室溫后用乙酸乙酯稀釋，然后用飽和碳酸氫鈉萃取，然后用鹽水萃取。硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。通過柱層析純化(己烷∶乙酸乙酯為9∶1)，得到1.15g(14％)產(chǎn)品，為淺黃色油狀物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ2.23(s，3H)，2.80(d，J＝5.36Hz，2H)，3.19(s，6H)，4.45(m，1H)，7.32(m，2H)，7.42(m，1H)。
制備例42-(2，2-二甲氧基乙基)-6-甲基苯胺向含有1-(2，2-二甲氧基乙基)-3-甲基-2-硝基苯(1.1g)的甲醇(50mL)溶液的圓底燒瓶中加入10％鈀/碳(0.13g)。用氮氣沖洗，然后利用氫氣球置于氫氣氛圍下。室溫下攪拌過夜。通過硅藻土過濾，用甲醇洗。濃縮得到產(chǎn)物(0.98g，103％)，為澄清的油狀物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ2.05(s，3H)，2.71(d，J＝5.36Hz，2H)，3.23(s，6H)，4.52(m，3H)，6.42(m，1H)，6.80(d，J＝7.31Hz，2H)。
制備例51-乙氧基-2-氧代乙基溴化鋅將酸洗的鋅粉(3.28g，50.06mmol)和氯化亞銅(0.5g，5.06mmol)在無水四氫呋喃(10mL)中混和并回流40分鐘。升溫到室溫并加入溴乙酸乙酯(2.09g，1.4mL，12.52mmol)。混合物攪拌1小時并靜置(不攪拌) 過夜以利于鋅的沉降。使用前，過濾試劑溶液。
制備例65-甲基-1H-吲哚-7-甲醛a)5-甲基-2-硝基苯甲醛把(5-甲基-2-硝基苯基)甲醇(10g，59.88mmol)溶解于二氯甲烷(210mL)中。加入3分子篩(54g)和重鉻酸吡啶鎓鹽(22.53g，59.88mmol)。室溫攪拌6小時。將粗反應(yīng)混合物通過短的硅膠柱，并減壓除去。殘余物通過急驟色譜(硅膠，10-20％乙酸乙酯∶己烷)純化，得到7.84g(79％)的標(biāo)題化合物，為無色油狀物。1H NMR(CDCl3)δ10.41(m，1H)，8.02(m，1H)，7.69(s，1H)，7.53(d，1H)，2.51(s，3H)。
b)2-二丁氧基甲基-4-甲基-1-硝基苯把5-甲基-2-硝基苯甲醛(7.84g，47.52mmol)、1-丁醇(10.55g，142.6mmol)和甲苯-4-磺酸(0.5g)溶解于甲苯(200mL)中。加熱回流，并使用迪安-斯達克裝置除去水。加熱3小時。加入水，并用乙酸乙酯萃取水層。合并有機層，硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮，并通過急驟色譜純化(1％v/v三乙胺緩沖的硅膠，5％乙酸乙酯/己烷)，得到14g(99％)的標(biāo)題化合物，為無色油狀物。
c)5-甲基-1H-吲哚-7-甲醛在氮氣下把2-二丁氧基甲基-4-甲基-1-硝基苯(13.957g，47.373mmol)溶解于無水四氫呋喃(474mL)中，并冷卻到-40℃。在-40℃攪拌下加入乙烯基溴化鎂(190mL，190mmol，1.0M的四氫呋喃溶液)。攪拌40分鐘并加入飽和氯化銨水溶液。水層用乙酸乙酯萃取。合并有機層，硫酸鈉干燥并濃縮。粗產(chǎn)物不經(jīng)純化直接用于下一步。
把以上粗產(chǎn)物溶解于四氫呋喃(160mL)中并冷卻到0℃。加入0.5M的鹽酸水溶液(20mL)并在0℃下攪拌化合物1小時。加入飽和碳酸氫鈉水溶液(200mL)并用乙酸乙酯(3×200mL)萃取水層。合并有機層，硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮，并通過急驟柱色譜(硅膠，5％乙酸乙酯/己烷)純化，得到4.04g(2步收率54％)的標(biāo)題化合物，為白色固體。1H NMR(CDCl3)δ10.10(s，1H)，10.06(s，1H)，7.72(s，1H)，7.40(s，1H)，7.28(m，1H)，6.54(m，1H)，2.50(s，3H)。
制備例7
(5-羥基苯并呋喃-7-基)乙腈把[5-(四氫吡喃-2-基氧)苯并呋喃-7-基]乙腈(3.89g，0.015mol)溶解于甲醇(100mL)中，并加入對甲苯磺酸一水合物(0.288g，0.1當(dāng)量)。20分鐘后用乙酸乙酯和水萃取，然后用鹽水洗。真空濃縮，得到2.5g(95.5％)的標(biāo)題化合物，為灰白色固體。HRMS(m/z)計算值173.0465，測量值173.0477。
制備例85-溴代咪唑并[1，2-a]吡啶把2-溴-1，1-二乙氧基乙烷(3.64g，18.48mmol)加入到6-溴吡啶-2-基胺(1.0g，5.77mmol)的正丁醇(40ml)溶液中。回流過夜并冷卻。反應(yīng)混合物過濾，得到1.3g(81％)的5-溴代咪唑并[1，2-a]吡啶氫溴酸鹽，為白色固體。ESMS(M++1)198.9m/z。
把飽和碳酸氫鈉(300ml)加入到5-溴代咪唑并[1，2-a]吡啶氫溴酸鹽(13.0g，46.96mmol)的乙酸乙酯懸浮液中。分離有機層，用飽和碳酸氫鈉洗，硫酸鎂干燥并減壓濃縮，得到9.7g(100％)的標(biāo)題化合物，為白色固體。
制備例92-{4-[2-(四氫吡喃-2-基氧)乙氧基]苯并呋喃-7-基}乙酰胺a)7-溴-4-[2-(四氫吡喃-2-基氧)乙氧基]苯并呋喃在氮氣下把碳酸鉀(6.399g，46.299mmol)加入到7-溴苯并呋喃-4-醇(3.266g，15.331mmol)的DMF(30ml)溶液中。加入2-(2-溴乙氧基)四氫吡喃(2.22mL，18.386mmol)并在80℃回流16小時。反應(yīng)混合物用乙酸乙酯稀釋并用水和鹽水洗，硫酸鈉干燥，過濾，并濃縮。通過急驟色譜純化，用己烷∶乙酸乙酯洗脫，得到3.538g(68％)的標(biāo)題化合物，為油狀物。MS(ES)(m/z)211(M+-1-129)，255(M+-1-85)。
b){4-[2-(四氫吡喃-2-基氧)乙氧基]苯并呋喃-7-基}乙酸乙酯在氮氣下將7-溴-4-[2-(四氫吡喃-2-基氧)乙氧基]苯并呋喃(2.598g，7.61mmol)、雙(二苯亞甲基丙酮)鈀(0.461g，0.802mmol)、和2-二環(huán)己基膦-2-(N，N-二甲氨基)聯(lián)苯(0.308g，0.783mmol)在四氫呋喃(15ml)中合并。加入(2-乙氧基-2-氧代乙基)溴化鋅(2當(dāng)量)，并在80℃加熱混合物16小時。(Knochel，P.、Honed，P.編輯，Organozinc ReagentsA Practical Approach，Oxford UniversityPress，Inc，London，1999)。混合物冷卻到室溫，通過二氧化硅短柱過濾，用乙酸乙酯洗脫，并濃縮。通過急驟色譜純化，用己烷∶乙酸乙酯洗脫，得到1.422g(54％)的標(biāo)題化合物，為油狀物。質(zhì)譜電噴霧(m/z)265(M++1-85)。
c){4-[2-(四氫吡喃-2-基氧)乙氧基]苯并呋喃-7-基}乙酸向冷卻(0℃)的{4-[2-(四氫吡喃-2-基氧)乙氧基]-苯并呋喃-7-基}乙酸乙酯(1.363g，3.912mmol)的二甲基甲酰胺(20ml)溶液中加入2M氫氧化鈉水溶液(10ml)，并在室溫下攪拌混合物1.5小時。用乙酸乙酯稀釋混合物并用水萃取。用二氯甲烷(50ml)稀釋并用0.1M鹽酸水溶液(100ml)中和。分離各層，并用二氯甲烷萃取水層。合并二氯甲烷層，硫酸鈉干燥，過濾，并濃縮，得到0.920g(68％)的標(biāo)題化合物，為油狀物。質(zhì)譜電噴霧(m/z)319(M-1).
d)2-{4-[2-(四氫吡喃-2-基氧)乙氧基]苯并呋喃-7-基}乙酰胺把{4-[2-(四氫吡喃-2-基氧)乙氧基]苯并呋喃-7-基}乙酸(0.920g，2.872mmol)與1，1’-羰基二咪唑(2.365g，14.585mmol)在四氫呋喃(15ml)中合并，并在氮氣下攪拌1小時?；旌衔锢鋮s到0℃，并加入濃氫氧化銨水溶液(2ml)。撤去冰浴，并在室溫下攪拌混合物16小時。用乙酸乙酯稀釋混合物，用水和鹽水洗，硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。使用急驟色譜純化，用己烷∶乙酸乙酯洗脫，得到0.732g(80％)的標(biāo)題化合物，為白色固體。質(zhì)譜電噴霧(m/z)236(M++1-85)。
制備例102-(苯并呋喃-4-基)乙酰胺在氮氣下把1，1’-羰基二咪唑(2.3g，14.2mmol)加入到苯并呋喃-4-基乙酸(2.5g，14.2mmol)的無水四氫呋喃(12mL)溶液中并在20℃攪拌4小時，在溶液中通入無水氨氣泡，用無水四氫呋喃(10mL)稀釋并在20℃攪拌18小時。減壓濃縮，并用硫酸氫鈉水溶液和蒸餾水洗固體。真空干燥得到2.3g(93％)的標(biāo)題化合物，為淺黃色固體。質(zhì)譜(ES，m/z)(M+H)＝176.1。
制備例11N-(7-氰基甲基苯并呋喃-4-基)乙酰胺a)2-(2，2-二甲氧基乙氧基)-1-甲基-4-硝基苯把溴代乙醛縮二甲醇(30.3g，179mmol)加入到2-甲基-5-硝基苯酚(25g，163mmol)和碳酸鉀(50g，362mmol)的二甲基甲酰胺(200mL)溶液中。攪拌混合物并在氮氣下回流2.5小時。冷卻混合物到20℃并加入氫氧化鈉水溶液(200mL，1M)。用己烷和乙醚(1∶1)稀釋混合物，然后用0.2M氫氧化鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗。無水硫酸鎂干燥，過濾，并減壓濃縮。產(chǎn)物從己烷沉淀，得到30.6g(77％)的標(biāo)題化合物，為棕黃色固體。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.78(dd，1H，J＝8.4，2.4Hz)，7.66(d，1H，J＝2.4Hz)，7.26(dd，1H，J＝8.4，0.8Hz)，4.76(t，1H，J＝4.8Hz)，4.09(d，2H，J＝5.2Hz)，3.48(s，6H)，2.32(s，3H)。
b)7-甲基-4-硝基苯并呋喃把Amberlyst15離子交換樹脂(36g)加入到氯苯(700mL)中，并加熱混合物到回流并共沸脫水，以干燥樹脂。把2-(2，2-二甲氧基乙氧基)-1-甲基-4-硝基苯(34.8g，144mmol)溶解于氯苯(125mL)中，并在氮氣下在15分鐘的時間內(nèi)把該混合物滴加到攪拌的回流的反應(yīng)混合物中，繼續(xù)回流1.5小時，然后冷卻到室溫。過濾除去樹脂并減壓濃縮。把殘余物溶解于己烷和乙醚(1∶1)中，然后用0.5M氫氧化鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗。無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。在硅膠上進行急驟色譜純化，用己烷和乙酸乙酯(9∶1)洗脫，并從己烷和甲苯(1∶1)沉淀，得到9.7g(42％)的標(biāo)題化合物，為黃色固體(42％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.36(d，1H，J＝2.0Hz)，8.12(d，1H，J＝8.4Hz)，7.44(d，1H，J＝2.4Hz)，7.38(d，1H，J＝8.8Hz)，2.59(s，3H)。
c)二甲基[2-(4-硝基苯并呋喃-7-基)乙烯基]胺把7-甲基-4-硝基苯并呋喃(3.5g，19.7mmol)加入到叔丁氧基雙(二甲氨基)甲烷(10.3g，59.1mmol)中并在氮氣下回流混合物40分鐘。減壓濃縮，溶解于二甲苯(50mL)中，減壓濃縮并真空干燥，得到4.9g(100％)的標(biāo)題化合物，為深紅棕色固體。
HRMS(M+H)＝233.0928。
d)(4-硝基苯并呋喃-7-基)乙腈把二甲基[2-(4-硝基苯并呋喃-7-基)乙烯基]胺(4.8g，20.6mmol)和羥胺-O-磺酸(4.6g，40.6mmol)加入到二甲基甲酰胺(45mL)中，并在室溫下攪拌15分鐘。在氮氣下在100℃加熱1小時，冷卻到室溫，用乙醚稀釋，并用水和飽和氯化鈉水溶液洗，無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。在二氧化硅上進行急驟色譜純化，用85％己烷-15％乙酸乙酯洗脫，得到2.9g(64％)的標(biāo)題化合物，為淺褐色固體。質(zhì)譜(ES，m/z)(M-1)＝200.9。
d)N-(7-氰基甲基苯并呋喃-4-基)乙酰胺把(4-硝基苯并呋喃-7-基)乙腈(600mg，2.96mmol)、乙酸酐(600mg，5.88mmol)、和5％鈀/碳(300mg)加入到四氫呋喃(25mL)中。在氫氣(1atm)下攪拌45分鐘。用乙酸乙酯稀釋，通過Celite墊片過濾并減壓濃縮。在二氧化硅上進行急驟色譜純化，用75％乙酸乙酯-25％己烷洗脫，得到430mg(67％)的標(biāo)題化合物，為灰白色固體。HRMS(M+H)＝215.0816。
氧代乙酸的形成制備例12{5-[3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)丙氧基]-1-異丙基-1H-吲哚-3-基}氧代乙酸甲酯把5-[3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)丙氧基]-1-異丙基-1H-吲哚(0.43g，0.124mmol)溶解于四氫呋喃(40mL)中。加入2，6-二甲基吡啶(0.43mL，3當(dāng)量)并冷卻到0℃。滴加草酰氯并攪拌1.5小時，然后冷卻到-78℃，加入甲醇(0.1mL，2當(dāng)量)并用甲醇鈉(25％w/w的甲醇溶液，22.5mL)處理。攪拌1小時，然后用乙酸乙酯稀釋，并用飽和碳酸氫鈉萃取，然后用鹽水萃取。硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。通過柱色譜純化(4∶1己烷∶乙酸乙酯)得到標(biāo)題化合物，為淺黃色油狀物。MS(ES，m/z)434.3(M+1)。
以類似的方式制備以下化合物
制備例23(5-氟苯并呋喃-7-基)氧代乙酸乙酯在氮氣下把7-溴-5-氟苯并呋喃(2g，9.3mmol)溶解于5ml四氫呋喃中。加入鎂屑(0.25g，1.1當(dāng)量)并加熱回流，以形成格氏試劑。在另一個燒瓶中加入草酸二乙酯(1.3mL，2當(dāng)量)的四氫呋喃(3mL)溶液并在氮氣下冷卻到0℃。當(dāng)格氏試劑的形成完成后，通過導(dǎo)管將其加入到草酸二乙酯溶液中。反應(yīng)物攪拌2-4小時，同時緩慢升溫到20℃。用乙醚萃取。有機層用鹽水洗，硫酸鎂干燥，過濾并濃縮，得到淺黃色油狀物。通過柱色譜純化(4∶1己烷∶乙酸乙酯)，得到1.74g(79％)的油狀物，放置后固化。MS(ES，m/z)237.0(M+1)。
以類似的方式制備以下化合物
制備例33{1-[3-(叔丁基二甲基-甲硅烷氧基)丙基]-1H-吲哚-4-基)-氧代乙酸甲酯在-78℃下把叔丁基鋰(88.1ml，149.8mmol，1.7M的己烷溶液)加入到4-溴-1-[3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)丙基]-1H-吲哚(22.0g，59.92mmol)的無水四氫呋喃(100ml)溶液中。反應(yīng)在-78℃攪拌20分鐘。在-40℃通過干冰冷卻的套管把混合物轉(zhuǎn)移到草酸二乙酯(24.8g，209.72mmol)的四氫呋喃(400ml)溶液中。加入完畢后，在-78℃攪拌反應(yīng)物15分鐘，然后緩慢升溫到室溫。用飽和氯化銨水溶液停止反應(yīng)，并萃取到乙酸乙酯中。合并有機層，硫酸鎂干燥，并減壓濃縮。通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯和己烷梯度洗脫(在90分鐘的時間內(nèi)從100％己烷到含15％乙酸乙酯的己烷)得到標(biāo)題化合物(16.89g，75％)，為淺褐色油狀物。ESMS(M++1)376.2m/z。
使用如上類似方法制備并分離以下化合物
制備例40(異喹啉-5-基)氧代乙酸甲酯在500mL圓底燒瓶中把5-氨基異喹啉(20g，139mmol)溶解于氫溴酸(48％，100mL)中，然后在0℃小心加入亞硝酸鈉(9.6g，139mol)的水(50mL)溶液。在鹽的加入完成后，白色漿狀物即變?yōu)轷r紅色，然后把溶液轉(zhuǎn)移到另一個500mL容器中，該容器含有在75℃下在氫溴酸(48％，200mL)中攪拌的CuBr(25g，174mmol)，此轉(zhuǎn)移應(yīng)緩慢并小心地進行。加入完成后，混合物在75℃攪拌1小時，然后冷卻到室溫，并保持?jǐn)嚢柽^夜。然后把混合物放在冰浴上并向溶液中加入一些冰，然后使用氫氧化鈉水溶液(20％，250mL)堿化。過濾漿狀物，然后用乙醚萃取濾液。然后合并固體和萃取液并在氯仿中超聲處理1小時。淤漿通過硅藻土短柱過濾，并通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿。通過色譜柱在氯仿中以36％收率得到最終化合物的純品，為10.4g(50mmol)的5-溴異喹啉。MS(ES，m/z)208.0(M+(79Br)+1)，210.0(M+(81Br)+1)。
在-78℃把叔丁基鋰(1.7M的正戊烷溶液，27.2mL，46.3mmol)加入到無水THF(195mL)中，幾分鐘后，通過注射器滴加5-溴異喹啉(6.42g，30.86mmol)的THF(5mL)溶液。得到的溶液在-78℃攪拌45分鐘，然后一次加入草酸二乙酯(11g，93mmol)，在-78℃反應(yīng)30分鐘后，使用飽和氯化銨水溶液終止反應(yīng)，用200mL EtOAc稀釋，然后通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去THF。殘余物用飽和氯化銨溶液稀釋，用EtOAc(2×200mL)萃取。合并有機層并用1×75mL水和1×75mL鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，然后濃縮。所得物質(zhì)通過急驟柱層析純化，用20％EtOAC/己烷洗脫，得到3.91g，59％的異喹啉-5-基氧代乙酸甲酯。MS(ES，m/z)(M++1)216.1。
制備例42(5-甲氧基苯并呋喃-7-基)乙酸乙酯把7-溴-5-甲氧基苯并呋喃(6.0g，26.43mmol)、雙(二苯亞甲基丙酮)鈀(1.32g，2.3mmol)和2-二環(huán)己基膦基-2’-(N，N-二甲氨基)聯(lián)苯(2.7g，6.86mmol)溶解于無水四氫呋喃(36mL)中，加入新制備的2-乙氧基-2-氧代乙基溴化鋅的四氫呋喃(66mL)溶液。在50-60℃加熱5小時。冷卻，并通過硅藻土過濾混合物，蒸發(fā)成為粘稠的紅棕色油狀物(30g)。通過急驟色譜純化，使用乙酸乙酯的己烷溶液洗脫，得到純化合物，為粘稠的黃色油狀物(6.2g，定量)。ESMS m/z(相對豐度)235.2(M++H+，10)，161.1(M+-C02Et+H+，100)。
乙酰胺的形成制備例434，5-二氟苯并呋喃-7-甲醛在氮氣下把7-溴-4，5-二氟苯并呋喃(5.0g，23.5mmol)溶解于無水四氫呋喃(15mL)中，并加入金屬鎂屑(712mg，29.3mmol)。攪拌并升溫到50℃，以引發(fā)格氏試劑的形成。放熱反應(yīng)平息后，回流30分鐘。用四氫呋喃(15ml)稀釋溶液并冷卻到25℃。在-78℃在氮氣下通過套管把格氏試劑滴加到攪拌的N，N-二甲基甲酰胺(10.2g，139mmol的四氫呋喃(25mL)溶液中。溶液在0℃攪拌1小時，用飽和氯化銨水溶液終止反應(yīng)。用乙醚稀釋，用蒸餾水和飽和氯化鈉溶液洗。有機相用無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。在二氧化硅上進行急驟色譜純化，用純己烷到含50％乙酸乙酯的已烷溶液梯度洗脫，得到2.65g(69％)的標(biāo)題化合物，為灰白色固體。HRMS(M+)＝182.0179。
使用類似過程制備和分離以下醛
制備例491-[3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)丙基]-1H-吲哚-4-甲醛在-78℃把叔丁基鋰(27.07ml，46.03mmol，1.7M的正戊烷溶液)加入到4-溴-1-[3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)丙基]-1H-吲哚(6.76g，18.41mmol)的無水四氫呋喃(100ml)溶液中。反應(yīng)在-78℃攪拌30分鐘，用N，N-二甲基甲酰胺(4.7ml，64.45mmol)終止反應(yīng)，升溫到0℃，用pH7緩沖液終止反應(yīng)并萃取到乙酸乙酯中。合并有機層，硫酸鎂干燥并減壓濃縮。通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯∶己烷梯度洗脫(在45分鐘內(nèi)從100％己烷到含50％乙酸乙酯的己烷)，得到標(biāo)題化合物(4.81g，82％)，為澄明的油狀物。ESMS(M++1)318.2m/z。
使用類似過程制備和分離以下醛
制備例56{1-[3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)丙基]-1H-吲哚-4-基}乙腈在氮氣下把1-[3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)丙基]-1H-吲哚-4-甲醛(2.34g，14.4mmol)和氰化鋰-四氫呋喃絡(luò)合物(LiCN*1.5THF，204mg，1.44mmol)加入到四氫呋喃(40mL)中。向攪拌的反應(yīng)混合物中滴加純的氰基磷酸二乙酯(2.8mL，18.4mmol)。在氮氣下在室溫攪拌60小時。加入2-甲基-2-丙醇(1.4mL，14.6mmol)。在25℃下在氮氣下通過套管把反應(yīng)混合物加入到0.1M的碘化釤(II)的四氫呋喃(360mL，36.0mmol)溶液中。如果得到的反應(yīng)混合物不是深藍色，加入另外的碘化釤(II)溶液直到保持深藍色。反應(yīng)在25℃攪拌1小時。減壓濃縮，用乙酸乙酯-乙醚(1∶1)稀釋，用0.1M的鹽酸水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗。有機相用無水硫酸鎂干燥，過濾，并減壓濃縮。在二氧化硅上進行急驟色譜純化，用從純己烷到含25％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫，得到2.1g(84％)的標(biāo)題化合物，為灰白色固體。1H NMR(400MHz，DMSO-dd)7.43(d，J＝8Hz，1H)，7.38(m，1H)，7.14(m，1H)，7.0(d，J＝8Hz，1H)，6.54(m，1H)，4.23(t，J＝7，2H)，4.18(s，3H)，3.5(t，J＝7Hz，2H)，1.9(m，2H)，0.85(s，9H)，0.0(s，6H)。
使用類似方法制備和分離以下腈
制備例682-{1-[3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)丙基]-1H-吲哚-4-基}乙酰胺把(1-[3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)丙基]-1H-吲哚-4-基}乙腈(1.9g，11.0mmol)加入到2-甲基-2-丙醇(20mL)中。在氮氣下加熱回流并加入氫氧化鉀小球(7.4g，132mmol)。在氮氣下攪拌回流30分鐘。傾析溶液除去過量的氫氧化鉀并用乙酸乙酯稀釋。用飽和氯化鈉水溶液和飽和碳酸氫鈉水溶液(1∶1)的混合物洗。有機相用無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。用冷乙醚漂洗固體并真空干燥，得到1.62g(77％)的標(biāo)題化合物，為灰白色固體。ESMS(M++1)347.2。
使用如上類似的方法制備并分離以下乙酰胺
制備例842-(8-羥基甲基-6，7，8，9-四氫吡啶并[1，2-a]吲哚10-基)乙酰胺把所述吲哚(3.54mmol)和N，N-二甲基亞甲基氯化銨(0.372g，4.00mmol)溶解于二氯甲烷(15mL)中?；旌衔镌谑覝卦诘獨庀聰嚢?4-72小時。用水(5mL)洗，然后加入堿以中和酸(3.6mL，1M NaOH)。用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，用飽和NaCl洗，然后無水硫酸鎂干燥。真空除去溶劑，得到(1H-吲哚-3-基甲基)二甲基胺。
把(1H-吲哚-3-基甲基)二甲胺(3.54mmol)、氰化鈉(0.500g，10.62mmol)和乙酸乙酯(1.7mL，17.7mmol)的混合物溶解于無水二甲亞砜(12mL)中，并在氮氣下加熱至80℃3小時。反應(yīng)混合物冷卻到室溫，用乙酸乙酯(150mL)稀釋，并用水(50mL)洗。無水硫酸鎂干燥有機層，并真空除去溶劑，得到0.850g(1H-吲哚-3-基)乙腈(96％)。
把(1H-吲哚-3-基)乙腈(3.40mmol)溶解于無水二甲亞砜(3.0mL)中，在冰浴中冷卻，與無水碳酸鉀(0.200g)和30％過氧化氫(0.6mL)合并，保持反應(yīng)溫度低于20℃。升溫到室溫，加入水(10mL)并過濾得到的固體，真空干燥。
MS(ES，m/z)257.3(M+-1)。
制備例852-(咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)乙酰胺a)咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基乙酸乙酯把(E)氧丁烯酸乙酯(14.3g，111.66mmol)加入到2-氨基吡啶(10.0g，106.4mmol)的乙腈(270ml)溶液中。反應(yīng)在80℃加熱6小時。減壓濃縮反應(yīng)混合物。得到的油狀物通過急驟色譜純化，并用100％己烷到95％的乙酸乙酯∶甲醇梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基乙酸乙酯(10.95g，50.0％-通過NMR測定)和2-氨基吡啶(共洗脫物)，為褐色固體。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)83(m，1H)，7.53(m，1H)，7.46(s，1H)，6.9(m，1H)，6.42(m，1H)，4.1(q，J＝7Hz，2H)，1.15(t，J＝7Hz，3H)。
b)2-(咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)乙酰胺在0℃使氨氣鼓泡通過(咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)乙酸乙酯(10.0g，48.96mmol)的甲醇(30ml)溶液。在100℃在密封管中加熱反應(yīng)混合物2小時。反應(yīng)混合物減壓濃縮。在乙酸乙酯中研磨，得到標(biāo)題化合物(5.0g，58.2％)，為白色固體。ESMS(M++1)176.1m/z。
制備例86(R)-2-[5-(1-芐基吡咯烷-3-基氧)苯并呋喃-7-基]乙酰胺a)(R)-2-[5-(1-芐基吡咯烷-3-基氧)苯并呋喃-7-基]乙酰胺在-5到-10℃向干燥氯化銨(0.26g，4.87mmol)的無水甲苯(3mL)溶液中加入2.0M三甲基鋁的甲苯(2.4mL)溶液，并使混合物升溫到環(huán)境溫度。當(dāng)反應(yīng)混合物變澄清時，加入(R)-[5-(1-芐基吡咯烷-3-基氧)苯并呋喃-7-基]乙酸乙酯 (0.51g，1.34mmol)的甲苯(6mL)溶液并加熱到50℃并持續(xù)3小時。把反應(yīng)混合物傾入到濃鹽酸(1mL)和水(3mL)的混合物中，用5N氫氧化鈉溶液調(diào)成堿性并用乙酸乙酯萃取。用水、鹽水洗有機萃取液，干燥并蒸發(fā)至干，得到產(chǎn)物(0.42g，90％)，不經(jīng)純化即可直接使用。
b)2-[4-(2-羥基乙氧基)苯并呋喃-7-基]乙酰胺向2-(4-[2-(四氫吡喃-2-基氧]苯并呋喃-7-基}乙酰胺(0.216g，0.676mmol)的甲醇(7ml)溶液中加入對甲苯磺酸一水合物(催化量)，并攪拌混合物1小時。用乙酸乙酯稀釋混合物，用1N碳酸氫鈉、水、和鹽水洗，硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，得到0.05g(31％)的標(biāo)題化合物，為灰白色固體。質(zhì)譜電噴霧(e/z)236(M++1)。
制備例872-[1-(1-芐基哌啶-4-基)-1H-吲哚-3-基]-2-羥基乙酰胺把[1-(1-芐基哌啶-4-基)-1H-吲哚-3-基]氧代乙酸甲酯(1.29g，3.43mmol)溶解于2M氨∶甲醇(35mL)中并在氮氣下室溫攪拌1.5小時。濃縮為白色固體并在絕對乙醇(40mL)中打漿。加入硼氫化鈉(0.65g，5當(dāng)量)并在氮氣下室溫攪拌3小時。濃縮，然后用乙酸乙酯稀釋并用水終止反應(yīng)，有機層用鹽水洗。硫酸鎂干燥，過濾并濃縮，得到粗產(chǎn)物(1.28g，103％).MS(ES，m/z)364.2(M+1)。
中間體合成轉(zhuǎn)化O-烷基化制備例885-(2-(叔丁氧基)乙氧基)-1H-吲哚在0℃下把三苯膦(600mg，2.29mmol)加入到偶氮二羧酸二乙酯(0.36mL，2.29mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中，然后加入乙二醇單叔丁基醚(0.30mL，2.29mmol)，混合物在0℃攪拌20分鐘。加入5-羥基吲哚(200mg，1.5mmol)，除去冰浴，并攪拌5小時。加入水(2mL)，把得到的混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗中分離各層。用0.1N鹽酸水溶液和鹽水洗有機層，然后硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。通過急驟色譜純化，用己烷∶乙酸乙酯洗脫，得到127mg(36％)的標(biāo)題化合物，為淺黃色固體。質(zhì)譜電噴霧(m/z)232(M--1)。
使用如上類似的方法制備并分離以下化合物
制備例934-溴-1-[3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)丙基]-1H-吲哚把氫化鈉(4.89g，122.4mmol，60％的礦物油分散液)加入到4-溴-1H-吲哚(12g，61.2mmol)的二甲基甲酰胺(100ml)溶液中。反應(yīng)冷卻到0℃并加入(2-溴乙氧基)-叔丁基二甲基硅烷(17.04g，67.32mmol)。反應(yīng)在室溫下攪拌1小時，用飽和碳酸氫鈉水溶液停止反應(yīng)并萃取到乙酸乙酯中。合并有機層并用飽和氯化鈉水溶液洗，硫酸鎂干燥。減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物(22.45g，100％)，為無色油狀物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)7.48(d，J＝8，1H)，7.4(d，J＝3Hz，1H)，7.22(d，J＝8Hz，1H)，7.05(dd，J＝8，1Hz，1H)，6.4(d，J＝3Hz，1H)，4.25(t，J＝7Hz，2H)，3.49(t，J＝7Hz，2H)，1.9(五重峰，2H)，0.82(s，9H)，0.0(s，6H)。
使用以上方法制備并分離以下化合物。
醇轉(zhuǎn)化為溴化物制備例1063-[1-(4-溴丁基)-1H-吲哚-3-基]-4-(4-甲氧基苯并呋喃-7-基)吡咯-2，5-二酮把3-[1-(4-羥基丁基)-1H-吲哚-3-基]-4-(4-甲氧基苯并呋喃-7-基)吡咯-2，5-二酮(0.1g，0.232mmol)溶解于10mL二氯甲烷中。加入四溴化碳(0.077g，1當(dāng)量)和三苯膦(0.061g，1當(dāng)量)。攪拌10分鐘，再加入同樣當(dāng)量的上述兩種試劑。攪拌10分鐘，然后用二氯甲烷稀釋并用水洗，然后用鹽水洗。硫酸鎂干燥，然后過濾并濃縮。通過柱色譜純化(2％甲醇∶二氯甲烷)得到標(biāo)題化合物。MS(ES，m/z)493.0(M-1)。
以類似方式制備以下化合物
還原氨化制備例1221-(1-芐基哌啶-4-基)-7-甲基-1H-吲哚把2-(2，2-二甲氧基乙基)-6-甲基苯胺(0.95g，4.9mmol)溶解于乙酸(20mL)中并加入1-芐基哌啶-4-酮(1mL，1.1當(dāng)量)。攪拌5分鐘，然后加入三乙酰氧基硼氫化鈉(1.55g，1.5當(dāng)量)并在室溫下攪拌45分鐘。安裝回流冷凝器并加熱回流2.5小時。使其冷卻到室溫，然后用乙酸乙酯稀釋，用5N氫氧化鈉洗，然后用鹽水洗。硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。通過柱色譜純化(1∶1己烷∶乙酸乙酯)得到1.26g產(chǎn)物(85％)，為澄清的油狀物。MS(ES，m/z)305.2(M+1)。
使用類似的方法制備以下化合物
N-烷基化制備例1345-[3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)丙氧基]-1-異丙基-1H-吲哚在氮氣下把5-[3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)丙氧基]-1H-吲哚(1.0g，0.327mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(20mL)中。加入3.6mL叔丁醇鉀(1M的THF溶液，1.1當(dāng)量)并攪拌10分鐘，然后加入2-碘丙烷(0.36mL，1.1當(dāng)量)并攪拌30分鐘。用乙酸乙酯稀釋并用水洗，然后用鹽水洗。硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。通過柱色譜純化(從己烷到4∶1己烷∶乙酸乙酯)，得到0.43g產(chǎn)物(38％)，為澄清的油狀物。1H NMR(400MHz，DMS0-d6)δ0.00(s，6H)，0.83(s，9H)，1.40(d，J＝6.83Hz，6H)，1.86(m，2H)，3.74(m，2H)，3.98(m，2H)，4.64(m，1H)，6.29(d，J＝2.93Hz，1H)，6.71(m，1H)，6.99(d，J＝1.95Hz，1H)，7.36(m，2H)。
使用類似的方法制備以下化合物
吲哚還原為二氫吲哚制備例1426-氯-2，3-二氫-1H-吲哚在氮氣下把6-氯-1H-吲哚(2g，0.013mol)溶解于乙酸(10mL)中。加入氰基硼氫化鈉(1.24g，1.5當(dāng)量)并在室溫攪拌20分鐘。用乙酸乙酯稀釋并用氫氧化鈉(5N水溶液)萃取。硫酸鎂干燥，過濾并濃縮，得到2.35g(116％)粗產(chǎn)物。MS(ES，m/z)154.0(M+1)。
使用類似的方法制備以下化合物
二氫吲哚氧化為吲哚制備例1484-(6-氯吲哚-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯把4-(6-氯-2，3-二氫吲哚-1-基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(3.1g，9.2mmol)溶解于四氫呋喃(50mL)中，并在氮氣下冷卻到0℃。把DDQ(2.1g，1當(dāng)量)溶解于四氫呋喃(25mL)中，并在15分鐘的時間內(nèi)滴加到反應(yīng)中。在0℃攪拌30分鐘。用乙酸乙酯稀釋，然后用飽和碳酸氫鈉洗，然后用鹽水洗。硫酸鎂干燥，過濾并濃縮，得到3.15g(102％)粗產(chǎn)物。MS(ES，m/z)279.1(M+1，產(chǎn)物-叔丁基)。
使用上述類似的方法制備以下化合物
通用轉(zhuǎn)化制備例156(5-羥基苯并呋喃-7-基)乙酸乙酯在-78℃把(5-甲氧基苯并呋喃-7-基)乙酸乙酯(0.20g，0.86mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)中，加入三溴化硼(1.08g，0.41mL，4.3mmol)并使其升溫到環(huán)境溫度。3小時后，把反應(yīng)混合物傾入到冰和水的混合物中并用二氯甲烷萃取。用水、鹽水洗有機萃取液，硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)至干，得到產(chǎn)物(188mg，定量)。ESMS m/z(相對豐度)221.0(M++H+85)。
制備例1572-[1-(1-芐基哌啶-4-基)-1H-吲哚-3-基]乙酰胺把三甲基甲硅烷基氯(2.1mL，6當(dāng)量)和碘化鈉(2.5g，6當(dāng)量)溶解于乙腈(15mL)中并在氮氣下冷卻到0℃。把2-[1-(1-芐基哌啶-4-基)-1H-吲哚-3-基]-2-羥基乙酰胺(1.0g，2.75mmol)溶解于乙腈(10mL)中并滴加到反應(yīng)液中。攪拌過夜并逐漸升溫到室溫。用5％NaHSO3萃取乙酸乙酯層，然后用鹽水洗。用飽和碳酸氫鈉堿化水層并再用乙酸乙酯洗一次。合并有機層并用硫酸鎂干燥。過濾并濃縮。在熱乙醚中研磨得到產(chǎn)物(0.64g，67％)，為白色固體。MS(ES，m/z)348.0(M+1)。
制備例1582-[4-(2-二乙氨基乙氧基)苯并呋喃-7-基]乙酰胺將2-[4-(2-溴乙氧基)苯并呋喃-7-基]乙酰胺(0.102g，0.342mmol)與純二乙胺(3ml，過量)合并，并在55℃加熱18小時。用乙酸乙酯稀釋混合物并用水和鹽水洗。硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，得到0.098g(99％)的標(biāo)題化合物，為褐色固體。質(zhì)譜電噴霧(m/z)264(M++1)。
制備例1593-(5-芐氧基苯并呋喃-7-基)-4-[1-(3-吡咯烷-1-基丙基)-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮把甲磺酸3-{3-[4-(5-芐氧基苯并呋喃-7-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-1H-吡咯-3-基]吲哚-1-基}丙基酯(220mg，0.39mmol)和吡咯烷(411mg，5.78mmol)溶解于1-甲基吡咯烷(6ml)中，并在55℃加熱5小時。反應(yīng)冷卻到室溫并攪拌過夜。反應(yīng)用乙酸乙酯稀釋，用水和鹽水洗，硫酸鈉干燥。通過急驟色譜純化，得到標(biāo)題化合物(200mg，95％)。MS(ES+)546.13。
制備例1603-(苯并呋喃-7-基-4-[1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)-4-氟-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮把2-(苯并呋喃-7-基)乙酰胺(632mg，3.61mmol)溶解于無水二甲基甲酰胺(DMF)(7.0mL)中并在氮氣下攪拌。一次加入固體的[1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)-4-氟-1H-吲哚-3-基]氧代乙酸甲酯(1.56g，4.33mmol)?；旌衔镒兊镁鶆蚝?，一次加入叔丁醇鉀的四氫呋喃(THF)(1.0M，14.4mL)溶液(注射器推注)。使反應(yīng)升溫到60℃，反應(yīng)變?yōu)樯罴t色。在60℃加熱反應(yīng)1小時，使其冷卻到室溫。通過HPLC和TLC監(jiān)測反應(yīng)，用200mL乙酸乙酯稀釋反應(yīng)物，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×100mL)、水(1×50mL)、和鹽水(1×50mL)洗，無水硫酸鎂干燥。通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙酸乙酯，并濃縮。通過使用急驟色譜純化(乙酸乙酯/己烷)，得到1.49g(85％)的標(biāo)題化合物。MS(ES，m/z)487.12(M++1)，485.08(M+-1)。
以類似的方式制備以下化合物
制備例1633-(苯并呋喃-7-基)-4-{1-[1-[N-(叔丁氧羰基)丙氨酰基]哌啶-4-基]吲哚-3-基}吡咯-2，5-二酮在氮氣下把3-(苯并呋喃-7-基)-4-(1-哌啶-4-基-1H-吲哚-3-基)吡咯-2，5-二酮的鹽酸鹽(0.179g，0.36mmol)溶解于7.2mL N，N-二甲基甲酰胺。加入EDCI(0.104g，1.5當(dāng)量)、HOBT(0.073g，1.5當(dāng)量)、L-Boc-Ala-OH(0.068g，1當(dāng)量)、和三乙胺(0.15mL，3當(dāng)量)，反應(yīng)在20℃攪拌3小時。用乙酸乙酯萃取，用1N鹽酸、飽和碳酸氫鈉溶液洗，然后用鹽水洗。硫酸鎂干燥，然后過濾并濃縮，得到0.21g(1009％)的標(biāo)題化合物，為橙色固體。MS(ES，m/z)583.1(M+1)，581.2(M-1)。
N-甲基吡咯二酮轉(zhuǎn)化為苯并呋喃制備例1643-(三氟甲磺酸苯并呋喃-7-基酯)-4-[1-甲基-1H-吲哚-3-基]-1-甲基吡咯-2，5-二酮向攪拌的7-[4-(1-甲基吲哚-3-基)-2，5-二氧代-3-吡咯啉-3-基]苯并[b]呋喃-4-基(三氟甲基)磺酸酯(400mg，0.82mmol)的無水N，N-二甲基甲酰胺(10ml)溶液中加入碳酸鉀(420mg)，然后加入碘甲烷(0.2ml，3.0mmol)。反應(yīng)在70℃加熱15分鐘。用乙酸乙酯稀釋，用水、鹽水洗，硫酸鎂干燥，過濾并濃縮，得到標(biāo)題化合物(404mg，98％)，為黃色固體。MS(ES+)505.0制備例1653-(三氟甲磺酸苯并呋喃-4-基酯)-4-[1-甲基-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮按制備例164的方法，從7-[4-(1-甲基吲哚-3-基)-2，5-二氧代-3-吡咯啉-3-基]苯并[b]呋喃-4-基(三氟甲基)磺酸酯制備。ES(M+1)491.1。
制備例1663-(5-甲氧基苯并呋喃-7-基)-1-甲基-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮根據(jù)制備例164的方法，從3-(5-甲氧基苯并呋喃-7-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)吡咯-2，5-二酮(6.9g，18.6mmol)制備。HRMS計算值387.1345測量值387.1344。
制備例1673-[4-(二苯亞甲基氨基)苯并呋喃-7-基]-1-甲基-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)吡咯-2，5-二酮在氮氣下將7-[1-甲基-4-(1-甲基吲哚-3-基)-2，5-二氧代-3-吡咯啉-3-基]苯并[b]呋喃-4-基(三氟甲基)磺酸酯(100mg，0.2mmol)、二苯甲酮亞胺(0.037ml，0.22mmol)、三(亞芐基丙酮)二鈀(0)(9mg，0.01mmol)、外消旋2，2’-雙(二苯基膦基)-1，1’-聯(lián)萘(19mg，0.03mmol)、和碳酸銫(91mg，0.28mmol)在無水甲苯(1ml)中的混合物加熱至80℃，保持19小時。使反應(yīng)冷卻到室溫，用乙醚稀釋并通過硅藻土過濾。用水、鹽水洗濾液，硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。在硅膠上進行急驟色譜純化(乙酸乙酯∶己烷)得到標(biāo)題化合物，為紅色油狀物。MS(ES+)536.1。
制備例1683-[5-(2-羥基乙氧基)苯并呋喃-7-基]-1-甲基-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)吡咯-2，5-二酮向3-(5-羥基苯并呋喃-7-基)-1-甲基-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)吡咯-2，5-二酮(2.5g，6.7mmol)和碳酸鉀(2.78g，20.1mmol)的混合物在N，N-二甲基甲酰胺(40ml)的溶液中加入2-(2-溴乙氧基)四氫吡喃(3.04ml，20.1mmol)?；旌衔镌诘獨庀录訜岬?0℃過夜。用乙酸乙酯稀釋，用水、鹽水洗，硫酸鎂干燥，過濾并濃縮為紅色固體。把固體溶解于甲醇(40ml)中，加入對甲苯磺酸(3g)，攪拌20分鐘。用乙酸乙酯稀釋，用水、鹽水洗，硫酸鎂干燥，過濾并濃縮，得到標(biāo)題化合物(1.88g，67％)，為紅色固體。HRMS計算值417.1450，測量值417.1462。
使用上述方法，以基本上類似的方式制備以下化合物
制備例1703-[5-(2-溴乙氧基)苯并呋喃-7-基]-1-甲基-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)吡咯-2，5-二酮向3-[5-(2-羥基乙氧基)苯并呋喃-7-基]-1-甲基-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)吡咯-2，5-二酮(1.87g，4.49mmol)的二氯甲烷(30ml)溶液中加入三苯膦(1.41g，5.39mmol)和四溴化碳(1.79g，5.39mmol)。反應(yīng)在氮氣下攪拌15分鐘。加入另外的2.2mmol的三苯膦和2.2mmol的四溴化碳并再攪拌15分鐘。用二氯甲烷稀釋，用水、鹽水洗，硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。在硅膠上進行急驟色譜純化(1％甲醇∶二氯甲烷)，得到標(biāo)題化合物，為橙色固體。MS(ES+)479.0，481.0。
使用上述方法，以基本上類似的方式制備以下化合物
制備例1733-[5-(2-二乙氨基乙氧基)苯并呋喃-7-基]-1-甲基-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)吡咯-2，5-二酮向3-[5-(2-溴乙氧基)苯并呋喃-7-基]-1-甲基-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)吡咯-2，5-二酮(600mg，1.25mmol)的1-甲基吡咯烷(8ml)溶液中加入二乙胺(0.65ml，6.28mmol)。在氮氣下攪拌過夜。在60℃加熱反應(yīng)4小時。用乙酸乙酯稀釋，用水、鹽水洗，硫酸鎂干燥，過濾并濃縮為紅色油狀物。通過SCX柱進行急驟色譜，得到標(biāo)題化合物，為紅色油狀物。MS(ES+)472.1；HRMS計算值472.2236，測量值472.2235。
使用上述方法，以基本上類似的方式制備以下化合物
制備例1773-(1-(3-甲磺酰氧基丙-1-基)吲哚-3-基)-4-(5-芐氧基苯并呋喃-7-基)吡咯-2，5-二酮把3-(5-芐氧基苯并呋喃-7-基)-4-[1-(3-羥基丙基)-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮(380mg，0.77mmol)和三乙胺(0.43ml，3.1mmol)溶解于四氫呋喃(15ml)并在冰浴中冷卻。滴加甲磺酰氯(0.066ml，0.85mmol)并攪拌4小時，用乙酸乙酯稀釋反應(yīng)物，用水、鹽水洗，硫酸鎂干燥，過濾并濃縮，得到標(biāo)題化合物(440mg，100％)。MS(ES+)571.14。
制備例1783-[5-(2-二乙氨基乙氧基)苯并呋喃-7-基]-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)呋喃-2，5-二酮在60℃加熱3-[5-(2-二乙氨基乙氧基)苯并呋喃-7-基]-1-甲基-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)吡咯-2，5-二酮(525mg，1.12mmol)和氫氧化鉀顆粒(625mg，11.2mmol)在絕對乙醇(20ml)中的混合物5小時。冷卻反應(yīng)，用乙酸乙酯和水稀釋并分離各層。用1N鹽酸酸化水層，濃縮為橙色固體。把固體溶解于二氯甲烷中，用水、鹽水洗，硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，得到標(biāo)題化合物(500mg，98％)為橙色泡沫狀物。MS(ES+)491.3。
使用上述方法，以基本上類似的方式制備以下化合物
制備例182N-{7-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫呋喃-3-基]苯并呋喃-4-基)乙酰胺a)3-(4-氨基苯并呋喃-7-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)呋喃-2，5-二酮在70℃加熱7-[1-甲基-4-(1-甲基吲哚-3-基)-2，5-二氧代-3-吡咯啉-3-基]苯并[b]呋喃-4-基(三氟甲基)磺酸酯(60mg，0.11mmol)和氫氧化鉀小球(62mg，1.1mmol)在絕對乙醇(2ml)中的混合物3小時。用二氯甲烷稀釋反應(yīng)，用1N鹽酸酸化，用水、鹽水洗，硫酸鎂干燥，過濾并濃縮為紅色固體。把粗品固體溶解于四氫呋喃(5ml)中并加入濃鹽酸(2滴)。攪拌反應(yīng)5分鐘，濃縮為油狀物。通過硅膠進行急驟色譜純化，得到標(biāo)題化合物(40mg，100％)，為深紅色固體。MS(ES+)359.0。
b)N-(7-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫呋喃-3-基]苯并呋喃-4-基}乙酰胺向3-(4-氨基苯并呋喃-7-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)呋喃-2，5-二酮(40mg，0.11mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液中加入三乙胺(0.046ml，0.34mmol)，然后加入乙酰氯(0.016ml，0.22mmol)。反應(yīng)在氮氣下攪拌10分鐘，用二氯甲烷稀釋，用1N鹽酸、鹽水洗，硫酸鎂干燥，過濾并濃縮，得到標(biāo)題化合物(40mg，90％)，為紅色固體。MS(ES+)401.0。
制備例18310-氧代-7-氮雜螺[4.5]癸烷-7-甲酸叔丁酯把7-氮雜螺[4.5]癸烷-10-酮(0.43g，0.124mmol)溶解于四氫呋喃(40mL)中。加入碳酸氫鈉(5mL，飽和溶液)和二碳酸二叔丁酯(di-tert-butyldicarbonate)(0.50g，0.30mmol)并在室溫下攪拌過夜.用水和鹽水洗溶液，用乙酸乙酯(3×25mL)萃取。硫酸鎂干燥，過濾并濃縮，得到標(biāo)題化合物。ES(M++H)198。
制備例1841-(1-叔丁氧羰基-3-乙基-哌啶-4-基)-1H-吲哚把1H-吲哚(10g，50.2mmol)和2，6-二甲基-4-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯(8.62g，55.2mmol)溶解于冰乙酸(100mL)中，加入三乙酰氧基硼氫化鈉(15.96g，75.3mmol)并加熱反應(yīng)混合物至70℃保持20小時。在冰浴中冷卻反應(yīng)混合物并用5N氫氧化鈉溶液調(diào)成堿性。用二氯甲烷萃取混合物，用水、鹽水洗，硫酸鈉干燥，得到標(biāo)題化合物。急驟色譜純化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫，得到純產(chǎn)物。ESMS m/z(相對豐度)ES(M++H)329.1。
使用上述方法，以基本上類似的方式制備以下化合物
制備例1884-(3-甲氧基草?；胚?1-基)-2，6-二甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯把4-吲哚-1-基-2，6-二甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.43g，0.124mmol)溶解于四氫呋喃(40mL)中。加入2，6-二甲基吡啶(0.43mL，3當(dāng)量)并冷卻到0℃。滴加草酰氯并攪拌1.5小時，然后冷卻到-78℃，加入甲醇(0.1mL，2當(dāng)量)并用甲醇鈉(25％w/w的甲醇溶液，22.5mL)處理。攪拌1小時，然后用乙酸乙酯稀釋，并用飽和碳酸氫鈉萃取然后用鹽水萃取。硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。通過柱色譜純化(4∶1己烷∶乙酸乙酯)，得到標(biāo)題化合物。MSES(M++H)415.2。使用上述方法，以基本上類似的方式制備以下化合物
制備例19210-氧代-7-氮雜螺[4.5]癸烷-7-甲酸叔丁酯把7-氮雜螺[4.5]癸烷-10-酮(0.43g，0.124mmol)溶解于四氫呋喃(40mL)中。加入碳酸氫鈉(5mL，飽和溶液)和二碳酸二叔丁酯(0.50g，0.30mmol)，并在室溫攪拌過夜。用水和鹽水洗溶液，用乙酸乙酯(3×25mL)萃取。硫酸鎂干燥，過濾并濃縮，得到標(biāo)題化合物。ES(M++H)198。
制備例1934-氯-2-(2，2-二甲氧基乙基)-1-硝基苯把(甲氧基甲基)三苯基氯化鏻(32.3g，93.7mmol)在四氫呋喃(350ml)中打漿并在冰水浴中冷卻。通過加料漏斗向反應(yīng)中滴加1.0M KOtBu(94ml，94mmol)的四氫呋喃溶液。反應(yīng)攪拌1小時，然后滴加5-氯-2-硝基苯甲醛(14.5g，78.1mmol)的100ml四氫呋喃溶液。繼續(xù)在冰浴中攪拌20分鐘，然后使其升溫到環(huán)境溫度。用0.1N HCl終止反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取，用水和鹽水洗。硫酸鈉干燥，過濾，濃縮為褐色油狀物。通過急驟色譜純化(1％EtOAc∶己烷)，得到三個點的粗品混合物。把粗品油狀物溶解于甲醇(200ml)中，在冰浴中冷卻，加入4N HCl的二氧雜環(huán)己烷(30ml)溶液，攪拌過夜，升溫到環(huán)境溫度。濃縮為褐色油狀物。通過急驟色譜純化，用從己烷到3％的EtOAc∶己烷梯度洗脫。得到標(biāo)題化合物(3.7g，15.1mmol，19％)。
制備例1943-羥基甲基-4-吲哚-1-基哌啶-1-甲酸叔丁酯把1-(1-叔丁氧羰基-3-乙基哌啶-4-基)-1H-吲哚(2.86g，7.7mmol)溶解于THF(25ml)中并在環(huán)境溫度下攪拌。通過注射器滴加1M的氫化鋁鋰的THF(8.5ml，8.5mmol)溶液。攪拌兩小時，然后用0.34ml水、0.26ml的5N氫氧化鈉、1.2ml水終止反應(yīng)。通過Celite墊片過濾，濃縮為油狀物。通過急驟色譜純化，得到標(biāo)題化合物(1.15g，45％).ES(M++1)275.1制備例1953-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基甲基)-4-吲哚-1-基哌啶-1-甲酸叔丁酯把3-羥基甲基-4-吲哚-1-基哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.1g，3.3mmol)溶解于二氯甲烷(20ml)中。加入咪唑(340mg，5.0mmol)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯(754mg，5.0mmol)并在環(huán)境溫度下攪拌72小時。用二氯甲烷稀釋，用1N HCl、水、鹽水洗。硫酸鈉干燥，過濾并濃縮為油狀物。通過急驟色譜純化(10％乙酸乙酯∶己烷)，得到標(biāo)題化合物(1.48g，100％)。ES(M++1)389.2。
制備例196(7-[芐基-(叔丁氧羰基)氨基甲基]-1-(吡啶-4-基)-1H-吲哚-3-基甲基)氧代乙酸甲酯a)芐基-(1H-吲哚-7-基甲基)胺把芐胺(7.5g，69.7mmol)、三乙酰氧基硼氫化鈉(20.7g，97.5mmol)和乙酸(6.0mL，104.6mmol)加入到1H-吲哚-7-甲醛(10.1g，69.7mmol)的1，2-二氯乙烷(100mL)溶液中。在環(huán)境溫度下攪拌24小時。用二氯甲烷稀釋并用水洗有機層。硫酸鎂干燥并濃縮。通過色譜純化(硅膠；乙酸乙酯/甲醇；10∶0.3到10∶1)，得到淺黃色固體(13.5g，82％)。MS(ESI)m/z 237(M+H)+。
b)芐基-(1H-吲哚-7-基甲基)氨基甲酸叔丁酯把三乙胺(24mL，172mmol)、二碳酸二叔丁酯(12.4g，57.2mmol)和4-二甲基氨基吡啶(0.7g，5.7mmol)加入到芐基-(1H-吲哚-7-基甲基)胺(13.5g，57.2mmol)的二氯甲烷溶液中。在環(huán)境溫度下攪拌2小時。蒸發(fā)溶劑并通過色譜純化殘余物(硅膠；己烷/乙酸乙酯；1∶0到1∶1)，得到固體(10.0g，52％)。MS(ESI)m/z337(M+H)+。
c)芐基-(2，3-二氫-1H-吲哚-7-基甲基)氨基甲酸叔丁酯把氰基硼氫化鈉(3.0g，47.6mmol)加入到芐基-(1H-吲哚-7-基甲基)氨基甲酸叔丁酯(10.0g，29.8mmol)的乙酸溶液中?；衔镌诃h(huán)境溫度下攪拌3小時。用乙酸乙酯稀釋并用冰浴冷卻?；衔镉?.0N氫氧化鈉水溶液洗，直到pH為8。硫酸鎂干燥有機層并濃縮。通過色譜純化(硅膠；己烷/乙酸乙酯；3∶1到0∶1)，得到固體，為標(biāo)題化合物(5.0g，50％)。MS(ESI)m/z 3 39(M+H)+。
d)芐基-[1-(吡啶-4-基)-2，3-二氫-1H-吲哚-7-基甲基]氨基甲酸叔丁酯用密封管將氮氣通入芐基-(2，3-二氫-1H-吲哚-7-基甲基)氨基甲酸叔丁酯(3.7g，10.9mmol)的1，4-二氧雜環(huán)己烷(50mL)溶液。與4-溴吡啶鹽酸鹽(4.3g，21.9mmol)、二乙酸鈀(0.5g，2.18mmol)、2-(二環(huán)己基膦基)聯(lián)苯(0.76g，2.18mmol)和叔丁醇鈉(3.1g，32.7mmol)混和?；旌衔镌?10℃攪拌16小時。冷卻并過濾，然后濃縮濾液。通過色譜純化(硅膠；己烷/乙酸乙酯；3∶1到0∶1)，分離得到固體，為標(biāo)題化合物(1.5g，33％)。MS(ESI)m/z416(M+H)+。
e)芐基-[1-(吡啶-4-基)-1H-吲哚-7-基甲基]氨基甲酸叔丁酯把活性二氧化錳(0.8g，9.0mmol)加入到芐基-[1-(吡啶-4-基)-2，3-二氫-1H-吲哚-7-基甲基]氨基甲酸叔丁酯(0.39mg，0.94mmol)的甲苯溶液中。混合物在90℃攪拌16小時。冷卻并過濾，然后濃縮濾液。通過色譜純化(硅膠；己烷/乙酸乙酯；3∶1到0∶1)，分離得到固體，為標(biāo)題化合物(200mg，50％)。MS(ESI)m/z 414(M+H)+。
f){7-[芐基-(叔丁氧羰基)氨基甲基]-1-(吡啶-4-基)-1H-吲哚-3-基甲基)氧代乙酸甲酯向芐基-[1-(吡啶-4-基)-1H-吲哚-7-基甲基]氨基甲酸叔丁酯(700mg，1.7mmol)加入5滴二氯甲烷，然后冷卻到-10℃。向混合物緩慢加入草酰氯(4.0mL，46.6mmol).混合物在環(huán)境溫度下攪拌4小時。用二氯甲烷稀釋并冷卻到-78℃。小心加入三乙胺(16.3mL，0.12mol)和甲醇(15mL)。用水洗有機層，硫酸鎂干燥并濃縮。通過色譜純化(硅膠；己烷/乙酸乙酯；1∶1到0∶1)，分離得到的固體，為標(biāo)題產(chǎn)物(0.36mg，42％)。MS(ESI)m/z 500(M+H)+。
制備例1974-(7-甲氧基甲氧基甲基-3-甲氧基草?；胚?1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯a)3-(3，3-二甲氧基丙基)-2-硝基苯甲酸甲酯從3-甲基-2-硝基苯甲酸甲酯開始，基本上按照制備例3的方法制備標(biāo)題化合物。ES(M++1)270。
b)4-(7-羥基甲基吲哚-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯使3-(3，3-二甲氧基丙基)-2-硝基苯甲酸甲酯(7.8g，0.029mol)的100mL四氫呋喃溶液與0.743g 5％Pd/C在60psi壓力下氫化24小時。過濾并濃縮。把所得產(chǎn)物溶解于30mL四氫呋喃中，并將其在0℃滴加到氫化鋁鋰(2.2g，0.058mol)的四氫呋喃(100mL)懸浮液中。使反應(yīng)升溫到室溫，并攪拌2小時。用飽和羅謝爾鹽溶液終止反應(yīng)并用乙酸乙酯萃取。干燥并濃縮。把產(chǎn)物溶解于30mL乙酸中并加入4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(6.3g，0.032mol)。10分鐘后，加入氰基硼氫化鈉(9.2g，0.032mol)并攪拌混合物1小時?；旌衔镌?00℃加熱3小時，冷卻并傾入水中。用碳酸鉀中和溶液并用乙酸乙酯萃取。濃縮并干燥。把粗品混合物溶解于100mL甲醇中并用20mL的1N氫氧化鈉溶液處理3小時。真空除去甲醇并用乙酸乙酯萃取混合物。干燥并濃縮。通過急驟色譜純化，用4∶1己烷/乙酸乙酯洗脫，得到4.1g的4-(7-羥基甲基吲哚-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。FABMS 330。
c)4-(7-甲氧基甲氧基甲基-吲哚-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯把4-(7-羥基甲基吲哚-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.25g，0.76mmol)溶解于5mL的四氫呋喃中并在室溫下加入氫化鈉(36mg，1.5mmol)。40分鐘后，加入甲氧甲基氯(0.11mL，1.5mmol)并攪拌混合物4小時。反應(yīng)濃縮并經(jīng)過急驟色譜純化，用5∶1的己烷∶乙酸乙酯洗脫，得到0.23g產(chǎn)物。FAB MS 374。
d)4-(7-甲氧基甲氧基甲基-3-甲氧基草酰基吲哚-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯把4-(7-甲氧基甲氧基甲基-吲哚-1-基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.36g，0.96mmol)溶解于20mL二氯甲烷中，冷卻到0℃并加入草酰氯(0.093mL，1.1mmol)。1小時后，加入5mL甲醇和三乙胺(0.38g，4mmol)并攪拌過夜.急驟色譜純化，用2∶1的己烷∶乙酸乙酯洗脫，得到0.30g標(biāo)題化合物。
實施例13-(1-甲基-1H-吲哚-4-基)-4-[1-(3-羥基丙基)-1H-吲哚-3-基]-吡咯-2，5-二酮向2-[1-(3-羥基丙基)-1H-吲哚-3-基]乙酰胺(0.32g，1.38mmol)和(1-甲基-1H-吲哚-4-基)氧代乙酸甲酯(0.30g，1.38mmol)的二甲基甲酰胺(10ml)懸浮液中加入叔丁醇鉀(4.1ml，4.1mmol，1M的四氫呋喃溶液)。反應(yīng)在室溫攪拌12小時，用1N HCl終止反應(yīng)，并萃取到乙酸乙酯中。用5％氯化鋰水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗有機萃取液。硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。在二氧化硅上通過急驟色譜純化，用純己烷到100％的乙酸乙酯∶己烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物(0.3g，54％)，為紅色固體。ES(M++1)400.2 ES(M-1)398.6基本上按照實施例1中的描述制備以下化合物
表1
c)氫化設(shè)備用于氫化的壓力設(shè)備包括蒸發(fā)器、反應(yīng)器、具有驟冷進料的冷凝器、氫氣入口、廢氣管線和循環(huán)氣體鼓風(fēng)機。該設(shè)備中的壓力保持恒定。
將熔化的MA與氫氣并流泵送入預(yù)熱的(245℃)蒸發(fā)器中并氣化。新鮮氫氣和循環(huán)氣體的混合物同樣從頂部流經(jīng)蒸發(fā)器。因此氫氣和MA從底部流入加熱的反應(yīng)器。反應(yīng)器內(nèi)容物包括玻璃環(huán)和催化劑的混合物。氫化后，形成的反應(yīng)產(chǎn)物與氫氣一起離開反應(yīng)器并在冷凝器中冷凝。在與新鮮氫氣混合的殘余部分流回蒸發(fā)器之前放出部分循環(huán)氣體。
通過氣相色譜定量地分析冷凝的液體反應(yīng)流出物、廢氣和循環(huán)氣體。
d)由正丁烷制備的馬來酸酐的氫化實施例1將220ml催化劑A(以類似于催化劑C的方式制備的)和126ml拉西環(huán)裝入1c中描述的氫化設(shè)備的反應(yīng)器。按照1b中所述的方式進行活化。
使用的反應(yīng)物是由正丁烷制備的馬來酸酐，其包含500ppm丙烯酸、1500ppm醋酸和100ppm鄰苯二甲酸二丁酯組成。反應(yīng)進行1000小時。在整個持續(xù)期間，沒有觀察到催化劑失活，即馬來酸酐的轉(zhuǎn)化率和/或GBL和四氫呋喃的產(chǎn)率沒有減少。表2概述了氫化反應(yīng)參數(shù)和結(jié)果。
以類似于實施例67的方式制備以下化合物
實施例983-(5-甲氧基苯并呋喃-7-基)-4-[1-(3-二甲基氨基丙基)-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮把3-(5-甲氧基苯并呋喃-7-基)-4-[1-(3-羥基丙基)-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮(0.058g，0.118mmol)溶解于10mL二氯甲烷中。加入四溴化碳(0.077g，1當(dāng)量)和三苯膦(0.061g，1當(dāng)量)。攪拌10分鐘，另加入同一等當(dāng)量的上述兩種試劑。攪拌10分鐘，然后用二氯甲烷稀釋并用水洗，然后用鹽水洗。硫酸鎂干燥然后過濾并濃縮。通過柱色譜純化(2％甲醇∶二氯甲烷)，得到3-(5-甲氧基苯并呋喃-7-基)-4-[1-(3-溴丙基)-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮。把3-(5-甲氧基苯并呋喃-7-基)-4-[1-(3-溴丙基)-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮溶解于1.5mL 1-甲基-2-吡咯烷酮中并加入二甲胺(2M的四氫呋喃溶液，0.3mL，5當(dāng)量)。在60℃加熱16小時。用乙酸乙酯對水萃取。濃縮有機層。再溶解于盡可能少量的甲醇中，并裝載到SCXTMVarian柱(用5％乙酸∶甲醇溶液預(yù)處理)上。用甲醇和乙酸乙酯洗，以除去雜質(zhì)，用2M氨的甲醇溶液沖洗，回收產(chǎn)物。ES(M++H)444.0。
以類似于上述的方式制備以下化合物。

實施例1263-[5-(氨基甲酸甲酯)苯并呋喃-7-基]-4-[1-甲基-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮冷卻3-(5-氨基苯并呋喃-7-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)呋喃并-2，5-二酮(30mg，0.084mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液到-78℃，滴加三乙胺(0.035ml，0.25mmol)和氯甲酸甲酯(0.013ml，0.17mmol)。反應(yīng)攪拌10分鐘，升溫到20℃。用乙酸乙酯稀釋，用水、鹽水洗，硫酸鎂干燥，過濾并濃縮為橙色固體。把粗品固體溶解于N，N-二甲基甲酰胺(1ml)、甲醇(0.1ml)中，加入1，1，1，3，3，3-六甲基二硅氮烷(0.2ml)。反應(yīng)在80℃加熱5小時，用乙酸乙酯稀釋，用水、0.1N鹽酸、鹽水洗，硫酸鎂干燥，過濾并濃縮為橙色薄膜。在硅膠上進行急驟色譜純化(40％乙酸乙酯∶己烷)，得到標(biāo)題化合物(6mg)，為橙色固體。
HRMS(M+H)416.1248實施例1273-(5-(N-甲磺酰胺)苯并呋喃-7-基)-4-[1-甲基-1H-吲哚-3-基]-吡咯-2，5-二酮按照類似于實施例96中的過程，用3-(5-氨基苯并呋喃-7-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)呋喃-2，5-二酮(20mg，0.056mmol)和甲磺酰氯(0.004ml，0.056mmol)作為起始物。在硅膠上進行急驟色譜純化(40％乙酸乙酯∶己烷)，得到標(biāo)題化合物(8mg)，為橙色固體。
HRMS(M+H)436.0939。
實施例1283-(6-氟苯并呋喃-7-基)-4-{1-[1-(2-甘氨酰基)哌啶-4-基]-1H-吲哚-3-基}吡咯-2，5-二酮把3-(6-氟苯并呋喃-7-基)-4-[1-(哌啶-4-基)-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮(90mg，0.22mmol)、叔丁氧羰基氨基乙酸(40mg，0.22mmol)、4-N，N-二甲基氨基吡啶(10mg)、三乙胺(0.091ml，0.66mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(63mg，0.33mmol)在二氯甲烷(5ml)中合并，并室溫攪拌過夜。粗品反應(yīng)混合物通過10克SCXTMVarian柱純化，用甲醇洗柱，然后用2.0M氨的甲醇溶液洗脫產(chǎn)物。濃縮產(chǎn)物部分為黃色固體，與乙醚研磨得到標(biāo)題化合物，為黃色固體。HRMS(ES+)487.1779。
使用實施例128中描述的方法，以基本上類似的方式制備以下化合物
實施例1313-(4-羥基苯并呋喃-7-基)-4-[1-(3-羥基丙基)-1H-吲哚-3-基]-吡咯-2，5-二酮在氮氣下于-78℃把3-(4-甲氧基苯并呋喃-7-基)-4-[1-(3-羥基丙基)-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮(0.1g，0.24mmol)溶解于2.5mL二氯甲烷中。滴加三溴化硼(0.11mL，1.16mmol，5當(dāng)量)并在-78℃攪拌1小時，升溫到室溫并攪拌1小時。用冰終止反應(yīng)反應(yīng)，然后用乙酸乙酯萃取。用鹽水洗有機相，硫酸鈉干燥，過濾，真空濃縮。通過柱色譜純化(25％乙酸乙酯∶己烷到50％的乙酸乙酯∶己烷)，得到0.050g(52％)的標(biāo)題產(chǎn)物。高分辨率質(zhì)譜(m/z)計算值403.1301，測量值403.1294。
以類似于實施例131中的方式制備以下化合物
實施例1363-(5-羥基苯并呋喃-7-基)-4-[1-(哌啶-4-基)-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮在氮氣下把3-(5-甲氧基苯并呋喃-7-基)-4-[1-(哌啶-4-基)-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮(0.125g，0.24mmol)和吡啶鹽酸鹽(2.2g，18倍重量過量)合并。使用加熱罩并加熱至190℃保持45分鐘。冷卻到20℃，然后用乙酸乙酯對水萃取。用鹽水洗，硫酸鎂干燥有機層，過濾并濃縮。通過柱色譜純化(5％甲醇∶二氯甲烷)，得到0.085g(70％)產(chǎn)物。高分辨率質(zhì)譜(m/z)計算值518.2080，測量值518.2080。
實施例1373-[5-(哌啶-4-基氧)苯并呋喃-7-基]-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)吡咯-2，5-二酮在氮氣下把3-[5-(1-芐基哌啶-4-基氧)苯并呋喃-7-基]-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)吡咯-2，5-二酮(0.050g，0.094mmol)溶解于1，2-二氯乙烷(10mL)中并加入氯代甲酸1-氯乙酯(61μL)。加熱回流4小時，然后加入甲醇(20mL)，再加熱1.5小時。冷卻到20℃，然后濃縮并再溶解于1mL N，N-二甲基甲酰胺中。通過反相純化，得到0.018g的標(biāo)題產(chǎn)物，為其鹽酸鹽。高分辨率質(zhì)譜(m/z)計算值442.1767，測量值442.1762。
以類似于實施例137中的方式制備以下化合物
實施例1463-(苯并呋喃-7-基)-4-[N-(橋-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷-3-基)-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮鹽酸鹽向3-(苯并呋喃-7-基)-4-[N-(橋-8-乙酯基-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷-3-基)-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮(220mg，0.43mmol)中加入吡啶鹽酸鹽(1g，8.65mmol)并在氬氣下加熱至160℃保持2小時。冷卻反應(yīng)混合物并傾入水(100ml)中。加入氫氧化鈉(1g，25mmol)后，用二氯甲烷萃取水溶液。蒸發(fā)有機層并把殘余固體在10％HCl的二氧雜環(huán)己烷(3mL)溶液中攪拌。過濾得到的固體并真空干燥，得到160mg的標(biāo)題化合物，為紅色結(jié)晶。ES(M++H)438.2。
實施例1473-(4-羥基苯并呋喃-7-基)-4-(2-氯-1-甲基-1H-吲哚-3-基)吡咯-2，5-二酮在氮氣下把3-(4-羥基苯并呋喃-7-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)吡咯-2，5-二酮(0.25g，0.70mmol)溶解于50mL氯仿中。加入0.093g(0.70mmol，1當(dāng)量)的N-氯代琥珀酰亞胺并安裝回流冷凝器。加熱到50℃并過夜。使其冷卻到室溫，然后用乙酸乙酯對水萃取。用鹽水洗，然后硫酸鈉干燥。過濾并真空濃縮。通過柱色譜純化(20％乙酸乙酯∶己烷)，得到0.034g(12％)產(chǎn)物。高分辨率質(zhì)譜(m/z)計算393.0655，測量393.0642。
實施例1483-(苯并呋喃-7-基)-4-[1-(4-氧代環(huán)己基)-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮把3-(苯并呋喃-7-基)-4-[1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)-4-氟-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮(1.40g，2.88mmol)溶解于四氫呋喃(20mL)中并在室溫下攪拌過夜。加入1N鹽酸(20mL)并加熱反應(yīng)回流24小時。結(jié)束后，過濾產(chǎn)物，用冷水漂洗并真空干燥。得到的橙色固體無需進一步純化即可直接使用，1.1g(87％)。MS(ES，m/z)443.18(M++1)，441.13(M+-1)。
以實施例148中的方式制備以下化合物
實施例1503-(苯并呋喃-7-基)-4-[4-氟-1-(4-反式-異丁基氨基環(huán)己基)-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮鹽酸鹽向3-(苯并呋喃-7-基)-4-[4-氟-1-(4-氧代環(huán)己基)-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮(1.26mmol，0.678g)的無水四氫呋喃(3mL)懸浮液中加入異丁基胺(12.6mmol)和一滴冰乙酸，在氮氣下在室溫攪拌幾小時。分兩次加入三乙酰氧基硼氫化鈉(2.52mmol，0.534g)，并在室溫下攪拌過夜。TLC(用1∶1的乙酸乙酯/已烷，含10％三乙胺)監(jiān)測到反應(yīng)完成后，用乙酸乙酯(300mL)稀釋反應(yīng)，并用飽和碳酸氫鈉水溶液(100mL)洗，分出兩相，有機層用水(50mL)、鹽水(50mL)洗，無水硫酸鈉干燥并濃縮。殘余物通過急驟色譜純化(乙酸乙酯/己烷，含10％三乙胺)，分離得到游離胺產(chǎn)物。把胺(0.556mmol)溶解于甲醇(3mL)中并加入濃鹽酸(0.030g，0.600mmol)，在氮氣下加熱反應(yīng)至45℃保持30分鐘。冷卻到室溫，然后在冰浴中冷卻。過濾鹽酸鹽結(jié)晶并干燥，得到標(biāo)題化合物。MS(ES，m/z)C30H30FN3O3。ClH500.38(M++1)，498.11(M+-1)。
按照實施例150制備以下化合物
實施例156順式和反式3-(6-氟苯并呋喃-7-基)-4-[1-(4-羥基環(huán)己基)-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮使3-(6-氟苯并呋喃-7-基)-4-[1-(4-氧代環(huán)己基)-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮(395mg，0.89mmol)的四氫呋喃(20ml)溶液在冰浴中冷卻。加入一份硼氫化鈉(10mg，0.27mmol)并攪拌5分鐘。加入另一份硼氫化鈉(10mg，0.27mmol)并在冰浴中攪拌10分鐘。用水終止反應(yīng)反應(yīng)，然后用乙酸乙酯稀釋，用水、1N HCl、鹽水洗，硫酸鎂干燥，過濾，濃縮為紅色泡沫狀物。通過急驟色譜純化分離順式和反式異構(gòu)體，得到順式3-(6-氟苯并呋喃-7-基)-4-[1-(4-羥基環(huán)己基)-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮和反式3-(6-氟苯并呋喃-7-基)-4-[1-(4-羥基環(huán)己基)-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮，為紅色固體。ES(M++H)445.1。
實施例1573-[5-(2-二乙氨基乙氧基)苯并呋喃-7-基]-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)吡咯-2，5-二酮鹽酸鹽向攪拌的3-[5-(2-二乙氨基乙氧基)苯并呋喃-7-基]-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)呋喃并-2，5-二酮(490mg，1.07mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(20ml)溶液中加入甲醇(0.2ml)和1，1，1，3，3，3-六甲基二硅氮烷(2.25ml，10.7mmol)。反應(yīng)加熱至60℃過夜。繼續(xù)反應(yīng)兩夜，同時另外加入1，1，1，3，3，3-六甲基二硅氮烷(3×1ml)，直到反應(yīng)完成。用乙酸乙酯稀釋，用水、鹽水洗，硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，得到紅色油狀物。反相色譜純化(乙腈∶0.1％鹽酸/H2O)，得到產(chǎn)物，為橙色固體。在5％甲醇∶二氯甲烷中加乙醚研磨，然后過濾，得到標(biāo)題化合物(230mg，43％)，為橙色固體。HRMS計算值458.2080，測量值458.2069。
使用上述方法，以基本上類似的反式制備以下化合物
實施例1623-(咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)-4-{1-[1-(N，N-二甲基乙酰胺)哌啶-4-基]吲哚-3-基}吡咯-2，5-二酮把3-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-4-[1-(哌啶-4-基)-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮鹽酸鹽(200mg，0.45mmol)溶解于甲醇(2ml)中。加入三乙胺(0.19ml，1.34mmol)，然后加入N，N-二甲基氨基甲酰氯(0.06ml，0.67mmol)并在氮氣下攪拌1小時。濃縮為紅色油狀物。通過急驟色譜純化(乙酸乙酯)，得到180mg(83％)的標(biāo)題化合物，為橙色固體。ES(M+1)483.2基本上如上所述制備以下化合物
實施例1663-(咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)-4-[1-(1-丙?；哙?4-基)-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮把3-(咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)-4-[1-(哌啶-4-基)-1H-吲哚-3-基]-吡咯-2，5-二酮鹽酸鹽(90mg，0.22mmol)和1.0M鹽酸溶解于10mL的8∶2甲醇∶蒸餾水中。加入丙酸酐(0.1mL，0.078mmol)，然后立即加入三乙胺(0.3mL，2.1mmol)。反應(yīng)在20℃攪拌30分鐘，過濾固體，用冷甲醇沖洗并在70℃減壓干燥，得到標(biāo)題化合物。ES(M++H)468.2。
實施例1673-(6-氟-2，3-二氫苯并呋喃-7-基)-4-{1-[1-(1-甲酸-2-甲氧基乙酯)哌啶-4-基]-1H-吲哚-3-基}-吡咯-2，5-二酮把三乙胺(0.1mL，0.7mmol)和氟代甲酸2-甲氧基乙酯(50μM，0.46mmol)加入到3-(6-氟-2，3-二氫苯并呋喃-7-基)-4-[1-(哌啶-4-基)-1H-吲哚-3-基]-吡咯-2，5-二酮(100mg，0.23mmol)的甲醇(3mL)溶液中。反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌2小時。用乙酸乙酯稀釋并用水洗有機層，干燥(MgSO4)，濃縮，并色譜純化(硅膠；己烷/EtOAc，1∶1到0∶1)。分離得到橙色固體(55mg，45％)。MS(ESI)m/z 534(M+H)+。
用基本如上所述方法制備以下化合物
實施例1703-(6-氟-2，3-二氫苯并呋喃-7-基)-4-{1-[1-(吡嗪-2-羰基)哌啶-4-基]-1H-吲哚-3-基}吡咯-2，5-二酮把3-(6-氟-2，3-二氫苯并呋喃-7-基)-4-[1-(哌啶-4-基]-1H-吲哚-3-基)吡咯-2，5-二酮(180mg，0.42mmol)的二甲基甲酰胺溶液與三乙胺(0.2mL，1.4mmol)、2-吡嗪甲酸(57mg，0.46mmol)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(106mg，0.55mmol)、1-羥基苯并三唑(74mg，0.55mmol)混和。反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌18小時。用乙酸乙酯稀釋并用水/鹽水洗有機層(4次)，硫酸鎂干燥并濃縮。通過色譜純化(硅膠；己烷/EtOAc；1∶1到0∶1)，得到橙色固體(105mg，49％)。MS(ESI)m/z 538(M+H)+。
基本上如上所述方法制備以下化合物
實施例1753-(6-氟-2，3-二氫苯并呋喃-7-基)-4-[1-(1-甲基哌啶-4-基)-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮從3-(6-氟-2，3-二氫苯并呋喃-7-基)-4-{1-[1-(Boc)哌啶-4-基]-1H-吲哚-3-基}吡咯-2，5-二酮開始，基本上按照制備例134中的描述制備標(biāo)題化合物。MS(M+H)＝446。
實施例1763-(咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)-4-[1-(1-異丙基哌啶-4-基)-1H-吲哚-3-基]吡咯-2，5-二酮從3-(咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)-4-{1-[1-(Boc)哌啶-4-基]-1H-吲哚-3-基}吡咯-2，5-二酮開始，基本上按照制備例134中的描述制備標(biāo)題化合物。MS(M+H)＝454。
激酶抑制試驗一個重要的體外試驗是測定化合物抑制GSK-3β酶活性的能力。測試根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進行(參見Fiol等人，A Secondary Phosphorylationof CREB341at Ser129is Required for the cAMP-Mediated Control ofGene ExpressionA Role for Glycogen Synthase Kinase-3 in theControl of Gene Expression，J. Biol.Chem.，269，32187-32193(1994))。
在包括50mM的MOPS(4-嗎啉丙烷磺酸)pH7.0；50μM的phosphoCREB肽；50μM的ATP；0.5μCi的ATP[γ-33P]；12.5mM的MgCl2；0.03％的Triton-X；4％的DMSO；和1nM重組人GSK-3β的反應(yīng)混合物中測定GSK-3β對以下反應(yīng)的催化作用
通過加入酶開始反應(yīng)。最終的反應(yīng)體積是100μL。反應(yīng)在室溫下進行60分鐘，并通過加入75μL的10％磷酸終止。為捕獲反應(yīng)中形成的KRREIL(33pS)RRP(pS)YR和除去未反應(yīng)的AT33P，把終止反應(yīng)的160μL的反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到預(yù)先潤濕的(0.75％磷酸)磷酸纖維素微量過濾板[Millipore Cat.#MAPH NOB 50]，在板上培養(yǎng)90分鐘之后，使用Titertek Map Extractor.使終止反應(yīng)的混合物通過過濾器。用220μL的0.75％磷酸沖洗含已捕獲KRREIL(33pS)RRP(pS)YR的過濾器，吸干濾板以除去下排水系統(tǒng)的液滴。從過濾器中除去下排水系統(tǒng)并把過濾器放入透明的板襯里(Wallac，Inc.)中。向每個孔中加入100μL的Microscint 20(Packard)。
至少靜置六小時之后(優(yōu)選靜置過夜)，用Trilux閃爍計數(shù)器(Wallac，Inc.)對板進行計數(shù)。通過向反應(yīng)混合物中加入不同濃度的化合物，并將產(chǎn)生的信號與未加入化合物的反應(yīng)混合物中產(chǎn)生的信號進行比較，以測定化合物抑制GSK-3β的能力。
從所述試驗得到對GSK-3β酶活性產(chǎn)生50％抑制作用的測試化合物摩爾濃度。這些測試中的數(shù)值越低，則測試化合物的活性越高。示例性的化合物表現(xiàn)出IC50≤1μM。
在本發(fā)明中，優(yōu)選顯示出50％有效濃度(IC50)約為200nM或更低的抑制劑。進而，按照FIOL，Carol J.等人在J.Biol.Chem.，269，32187-32193(1994)中描述的測定方法，還優(yōu)選顯示出50％有效濃度為50nM或更低的抑制劑，更優(yōu)選顯示出50％有效濃度為20nM或更低的抑制劑，最優(yōu)選50％有效濃度為10nM或更低的抑制劑。在本發(fā)明的實踐中，還優(yōu)選達到血漿暴露值＞1000ng*hr/mL的GSK-3抑制劑。另外，那些顯示出低IC50值，如低于10nm，和血漿暴露值＜1000ng*hr/mL的GSK-3抑制劑代表本發(fā)明更加優(yōu)選的實施例。
代表性的實施例如表II中所示。
表II
糖原合成試驗本試驗測定細胞中有或沒有胰島素存在時糖原產(chǎn)生的增加。此測試按照標(biāo)準(zhǔn)方案進行(參見Berger和Hayes，A High-Capacity assayfor Activators of Glucose Incorporation into Glycogen in L6Muscle Cells，Analytical Biochemistry，261，159-163(1998))。
方法簡述將3T3-L1脂肪細胞置于96孔板上，25,000細胞/孔，使其分化。將此板以無血清的方式放置過夜。除去無血清的培養(yǎng)基后立即開始測定，用100μl/孔的Krebs-Ringer-Hepes緩沖液(KRBH)沖洗該板。除去KRBH，并在試驗板上加50μl的化合物(終濃度量的兩倍)。接下來，以0.1μCi/孔在試驗板上加50μl的14C標(biāo)記的葡萄糖。然后將板在37℃培養(yǎng)2小時。
用PBS洗板，100μL/孔，并用1N NaOH(75μl/孔)溶解細胞。在70℃下加熱板20分鐘。從試驗板取部分(50μl)上清液轉(zhuǎn)移到含120μl/孔的冰冷乙醇的Millipore FC濾板上。板在4℃下放置2小時以利于形成沉淀。經(jīng)真空歧管從濾板除去乙醇，并用冰冷的70％乙醇，以100uL/孔洗板。使板干燥過夜，并向濾板上以75μl/孔加入Microscint-20。然后將用Packard Topcount進行計數(shù)。
葡萄糖降低試驗本試驗測定受試化合物相對于胰島素對血糖和甘油三酯的影響(參見，Eldar-Finkleman等人，Expression and Characterization ofGlycogen Synthase Kinase-3 Mutants and Their Effect on GlycogenSynthase Activity in Intact Cells，Proc.Nat.Acad.Sci.，93，10228-10233(1996))。
六周齡的ZDF大鼠(Charles River，Inc.)單獨圈養(yǎng)，并自由進食和飲水。大鼠經(jīng)口灌胃給藥，每日一次，使用的化合物制備成含1％羧甲基纖維素/0.25％吐溫80(CMC-Tween)的懸浮液。媒介物對照組只給CMC-Tween。研究的持續(xù)時間根據(jù)使用的方案而不同，短期用藥研究進行一天，劑量增加的研究持續(xù)七天。進行七日研究時還進行一周一次體重和食物消耗量的測量。為測量血糖和甘油三酯，通過剪尾方法收集600μl的血樣。(用于采血的剪尾方法如下用鋒利的刀片剪斷1-2mm的尾部。收集血液之后，在傷口位置形成痂。除去痂并輕輕地按摩尾部以進行其它的隨后采血)。用Hitachi 912代謝分析器進行葡萄糖和甘油三酯測定，用Trinder方法使用試劑盒進行。在研究末期，切除特定的組織(例如心臟、胰腺、脂肪組織和肝臟)以評價這些藥物對它們代謝作用的影響。
腦離體試驗本試驗評價測試化合物在大腦皮質(zhì)組織中的GSK-3β激酶活性。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進行(Wang等人，Anal.Biochem.，220，397-402(1994))。
對2到3個月大的PDAPP或CD-1小鼠口服給藥，測定化合物的離體GSK-3β激酶活性。以20mg/kg，24小時給藥之后，繼之以另外的三小時給藥，剖解大腦皮質(zhì)組織并在新制備的溶解緩沖液(10mM的K2HPO4pH7.2、1mM的EDTA、5mM的EGTA、10mM的MgCl2、50mM的β-甘油磷酸酯、1mM的Na3VO4、2mM的DTT、1μM的Microcystin、COMPLETE蛋白酶抑制劑片，沒有洗滌劑)中勻漿。在冰上放置三十分鐘后，皮層勻漿樣品在4℃下離心(100,000G)30分鐘。使用BCA方法(Pierce)測定勻漿的總蛋白質(zhì)濃度。然后檢測用對照物和用化合物處理的小鼠的細胞胞質(zhì)勻漿中的GSK-3β活性。在含20mM的MOPSpH7.4、25mM的β-磷酸甘油酯、5mM的EGTA、1mM的NA3VO4、1mM的DTT、15mm的MgCl2、100μM的冷ATP、200μM的CREB肽、10μL的細胞胞質(zhì)腦皮層勻漿、和5μCi的γ-33P-ATP的50μl的總體積中發(fā)生激酶反應(yīng)。使用Costar圓形-96聚丙烯板在30℃下培養(yǎng)反應(yīng)物三十分鐘。然后通過加入10％H3PO4終止反應(yīng)，并轉(zhuǎn)移到MilliporeMAPH-NOB 96-孔磷酸纖維素板。接下來，反應(yīng)物在室溫下培養(yǎng)1.5小時，過濾并用320μl的0.75％H3PO4洗，過濾并使用真空歧管用相同濃度的160μl的H3PO4洗。然后把濾板放入載體板中，向每個孔中加入100μl的Microscint 20。用密封帶將板密封并在室溫下培養(yǎng)過夜。第二天，用Top Count(Packard)讀取濾板的33P。最后，按標(biāo)準(zhǔn)方法計算CPM，得出每μg總蛋白的CPM。
β-連環(huán)蛋白保護試驗本試驗測量基礎(chǔ)β-連環(huán)蛋白上的折疊誘導(dǎo)(fold induction)，按照標(biāo)準(zhǔn)方法(Hedgepeth，C.M.，Dev.Biol.，185，82-91(1997)；Chen，G.等人，J.Neurochem.，72，1327-1330(1999)；Hong，M.等人，J.Biol.Chem.，272，25326-25332(1997))進行。
將人家族性阿爾茨海默癥(FAD)presenilin-1 AG04160C原淋巴細胞系(Coriell Cell Repository，Camden，NJ)作為懸浮培養(yǎng)物，置于補充有10％胎牛血清和1％青霉素-鏈霉素的RPMI 1640(有L-谷氨酰胺)中，保持在37℃和5％CO2的環(huán)境中。將AG04160C FAD原淋巴細胞以10ml的總體積，在T-25cm2燒瓶中以2.5到5.0×105細胞/毫升接種。生長16-18小時之后，用0.1μM、1.0μM、和10μM濃度的化合物處理細胞，然后再培養(yǎng)24小時。在24小時的培養(yǎng)結(jié)束后收獲細胞，用PBS洗，并用新制備的溶解緩沖液(10mM的K2HPO4pH7.2、1mM的EDTA、5mM的EGTA、10mM的MgCl2、50mM的β-甘油磷酸酯、1mM的Na3VO4、2mM的DTT、1μM的微囊藻毒素(Microcystin)、1mM的PMSF、10μg/ml的亮肽素、1μg/ml的抑胃肽、1μg/ml的抑肽酶、1％的Triton X-100)中溶解。在冰上放置三十分鐘之后，細胞在4℃下離心(14,000rpm)30分鐘，得到的上清液用作全細胞溶胞產(chǎn)物。使用BCA方法(Pierce)測定全細胞溶胞產(chǎn)物樣品中的總蛋白質(zhì)濃度。接下來，把15μg的樣品加載到10％的Bis-Tris NuPage凝膠上并轉(zhuǎn)移到純硝基纖維素膜上，然后使用β-連環(huán)蛋白特異性抗體(Transduction Labs)進行β-連環(huán)蛋白免疫印跡分析。然后定量β-連環(huán)蛋白積聚/穩(wěn)定性，繼之以蛋白質(zhì)帶的密度測定法分析。最終得出基礎(chǔ)β-連環(huán)蛋白上的折疊誘導(dǎo)的結(jié)果。
代表性的實施例如表III中所示。
表III
卵巢切除大鼠試驗將六月齡未曾配種的Sprague-Dawley大鼠在22℃下保持12小時照明、12小時黑暗的周期循環(huán)下，不限制進食和水(食物為TD89222，含有0.5％鈣和0.4％磷酸鹽，Teklad，Madison，WI)。對大鼠進行雙側(cè)的或假卵巢切除手術(shù)，使它們骨損失1個月。當(dāng)大鼠7月齡時，選擇假切除卵巢和切除卵巢的(Ovx)(7只動物/組)作為對照，給予口服媒介物(1％的羧甲基纖維素/0.25％的吐溫80)，另一組的7只Ovx動物口服有受試化合物的媒介物。每日給藥一次，共2個月。2個月末時，用二氧化碳使大鼠無痛致死，除去左側(cè)股骨和椎骨，清除掉軟組織并保存在50％的乙醇/鹽水中。用前述通QCT方法測定骨骼(Sato M.，Comparative x-ray densitometry of bones from ovariectomizedrats.，Bone17157S-162S(1995)；Sato M.、Kim J.、Short L.L.、Slemenda C.W、Bryant H.U.，Longitudinal and cross-sectionalanalysis of raloxifene effects on tibiae from ovariectomizedaged rats.，J Pharmacol Exp Ther2721252-1259(1995))。
式I的化合物在具體情況中可由口服、經(jīng)皮、皮下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、陰道內(nèi)或直腸內(nèi)的途徑給藥。給藥途徑可以任何不同方式變化，取決于藥物的物理性質(zhì)以及患者和護理人員的方便和其它有關(guān)情況(參見Remington′s Pharmaceutical Sciences，第十八版，MackPublishing Co.(1990))。
藥物組合物以制藥技術(shù)熟知的方式制備。載體或賦形劑可以是能用作活性成分的媒介物或介質(zhì)的固體、半固體或液體材料。適當(dāng)?shù)妮d體或賦形劑在本領(lǐng)域中是熟知的。藥物組合物可調(diào)整為用于口服、吸入、非腸道或局部使用，并可以以片劑、膠囊、氣霧劑、吸入劑、栓劑、溶液、懸浮劑等形式給予患者用藥。
本發(fā)明的化合物可口服給藥，如使用惰性稀釋劑，或膠囊形式，或壓成片劑的形式。作為口服治療給藥，化合物可與賦形劑組合，并以片劑、錠劑、膠囊、酏劑、懸浮劑、糖漿、糯米紙囊劑、咀嚼膠等形式使用。這些制劑應(yīng)包含至少4％的本發(fā)明的化合物作為活性成分，但可根據(jù)具體劑型不同而有所不同，可方便地為單位劑量的4％到約70％重量。組合物中的所述化合物的量應(yīng)能夠使患者得到適宜的劑量。本發(fā)明優(yōu)選的組合物和制劑可由本領(lǐng)域熟練的技術(shù)人員確定。
片劑、丸劑、膠囊、錠劑等也可含有一種或多種以下輔劑粘合劑如微晶纖維素、黃蓍膠或明膠；賦形劑如淀粉、乳糖；崩解劑如藻酸、Primogel、玉米淀粉等；潤滑劑如硬脂酸鎂或Sterotex；助流劑如膠態(tài)二氧化硅；甜味劑如蔗糖或糖精；或可加入調(diào)味劑如薄荷、水楊酸甲酯或橙味調(diào)味劑。當(dāng)劑型是膠囊時，除上述類型材料之外，還可包含液體載體如聚乙二醇或脂肪油。其它的劑型可含其它各種不同的改進劑型物理性狀的材料，例如，作為包衣。因此，片劑或丸劑可用糖、蟲膠或其它包衣劑包衣。除本發(fā)明的化合物以外，糖漿劑還可含有蔗糖作為甜味劑和某些防腐劑、染料和著色劑、以及調(diào)味劑。用于制備這些不同組合物的材料應(yīng)是藥學(xué)純的，并且在使用量下為無毒的。
為了非腸道治療給藥，可使本發(fā)明的化合物引入到溶液或懸浮液中。這些制劑一般含至少0.1％的本發(fā)明的化合物，但可以在0.1％～約90％(重量)內(nèi)變化。這種組合物中的式I的化合物的量是能夠使患者得到適宜劑量的含量。溶液或懸浮液還可包括一種或多種以下助劑無菌稀釋劑如注射用水、鹽水、不揮發(fā)的油類、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶劑；抗菌劑如芐醇或羥苯甲酸甲酯；抗氧化劑如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑如乙二胺四乙酸；緩沖劑如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；和用于調(diào)整滲漲度的試劑如氯化鈉或葡萄糖。非腸道制劑可裝在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多劑量小瓶中。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以確定優(yōu)選的組合物和制劑。
本發(fā)明的化合物還可局部給藥，局部用藥時適當(dāng)?shù)妮d體包括溶液、膏劑、或凝膠基質(zhì)?；|(zhì)可包括以下舉例的一種或多種礦物油、羊毛脂、聚乙二醇、蜂蠟、礦物油、稀釋劑如水和醇、以及乳化劑和穩(wěn)定劑。局部用制劑可含式I化合物或其可藥用鹽的濃度約為0.1％-10％w/v(每單位體積的重量)。
式I的化合物在較寬的劑量范圍內(nèi)普遍有效。例如，日劑量通常約為0.0001-30mg/千克體重。在有些情況下，低于上述范圍下限的劑量水平已足以有效，而在另外的情況下可能使用更大的劑量而并不引起任何有害的副作用，因此上述的劑量范圍不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。應(yīng)理解，由醫(yī)生根據(jù)有關(guān)的情況決定實際的化合物給藥量，這些情況包括需要治療的癥狀、選擇的給藥途徑、具體用藥的化合物、患者個體的年齡、體重、反應(yīng)，以及患者癥狀的嚴(yán)重程度。
權(quán)利要求
1.式I的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽 其中，Ar為任選地在苯環(huán)上被R8和R9取代的苯并呋喃-7-基、1-(R7)-吲哚-4-基、苯并呋喃-4-基、喹啉-5-基、喹啉-7-基、異喹啉-5-基、異喹啉-3-基、咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基、咪唑并[1，2-a]吡啶-5-基、呋喃并[3，2-c]吡啶-7-基、苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-4-基、2，2-二氟苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-4-基、或任選地在苯環(huán)上被R8和R9取代和在二氫呋喃環(huán)上被C1-C4烷基取代的2，3-二氫苯并呋喃-7-基；R1a為氫、C1-C4烷氧基、-(CH2)m-G、-O-(CH2)m-G、鹵素、任選地被一個到三個鹵素取代的C1-C4烷基、任選地被-(CO2)n-(C1-C4烷基)取代一至兩次的哌嗪-1-基、或-(CH2)-O-(CH2)-O-(CH3)；R1b為氫或鹵素；R1c為氫或鹵素；G在每種情況中獨立地為羥基、NR11R12或哌啶-4-基；R2為氫、C1-C4烷基、-(CH2)m-G、四氫吡喃-4-基、4-(NR4R5)環(huán)己-1-基、4-羥基環(huán)己-1-基、2-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-5-基、 環(huán)己烷-1-酮-4-基、吡啶-4-基；且R3為氫、鹵素、C1-C4烷基或環(huán)丙基；或R2和R3一起表示 R4為氫且R5為氫或C1-C4烷基，或R4和R5與和它們連接的氮一起形成吡咯烷環(huán)；R6為氫、芐基、-CO2(C1-C4烷基)、-C(O)-(C1-C4烷基)n-NR14R15、-C(O)四氫吡喃-4-基、-C(O)嗎啉-4-基、-CH2-四氫吡喃-4-基、氨基酸殘基、-C(O)吡啶-2-基，-C(O)吡啶-3-基、-C(O)吡啶-4-基、-C(O)嘧啶-5-基、C1-C4烷基、-C(O)吡嗪-2-基、或-CO2-(C1-C4烷基)-(C1-C4烷氧基)；R7為氫、C1-C4烷基或-(CH2)m-G；R8為-NHCO2(C1-C4烷基)、-NHSO2(C1-C4烷基)、鹵素、氨基、-O-(CH2)m-G、-NHC(O)(C1-C4烷基)、C1-C4烷氧基、羥基、-O-R10、C1-C4烷基，C1-C4烷硫基或-(CH2)m-G；R9為鹵素；R10為哌啶-3-基、哌啶-4-基、或吡咯烷-3-基；R11和R12獨立地選自氫、C1-C4烷基、環(huán)丙基甲基、芐基、或與和它們連接的氮一起形成哌啶、4-羥基哌啶、4-(C1-C4烷基)哌啶、N-(R13)-哌嗪、或嗎啉環(huán)；R13為氫、C(O)-(C1-C4烷基)、或C1-C4烷基；R14和R15獨立地為氫或C1-C4烷基；R16在每種情況中獨立地為氫、偕二甲基、偕二乙基、螺環(huán)稠合的C3-C6環(huán)烷基、或任選地被羥基取代的C1-C4烷基；R17表示氫、C1-C4烷基、或偕二甲基，前提是R16和R17之間的碳原子總數(shù)不超過五個；m在每種情況中獨立地為2、3、4、或5；n在每種情況中獨立地為0或1；但具有以下條件i)當(dāng)G為羥基時，R1a、R2、R7、或R8中不超過兩個可為-(CH2)m-G、或-O-(CH2)m-G；和ii)當(dāng)G為NR11R12時，R1a、R2、R7、或R8中不超過一個可為-(CH2)m-G、或-O-(CH2)m-G。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中Ar為任選地在苯環(huán)上被R8和R9取代的苯并呋喃-7-基。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中Ar為任選地在苯環(huán)上被鹵素取代的2，3-二氫苯并呋喃-7-基。
4.權(quán)利要求1、2或3中任一項的化合物，其中R2為
5.權(quán)利要求4的化合物，其中R6為-C(O)嗎啉-4-基或-C(O)吡嗪-2-基。
6.一種治療哺乳動物糖尿病的方法，其包括對需要這種治療的哺乳動物給予有效量的權(quán)利要求1、2、3、4、或5中任一項的化合物。
7.一種治療哺乳動物阿爾茨海默癥的方法，其包括對需要這種治療的哺乳動物給予有效量的權(quán)利要求1、2、3、4、或5中任一項的化合物。
8.一種抑制哺乳動物GSK-3的方法，其包括對需要這種抑制的哺乳動物給予有效量的權(quán)利要求1、2、3、4、或5中任一項的化合物。
9.一種藥物制劑，其包括權(quán)利要求1、2、3、4、或5中任一項的化合物與藥學(xué)可接受的載體、稀釋劑或賦形劑組合。
全文摘要
本發(fā)明提供了式I的激酶抑制劑。
文檔編號A61K31/4709GK1639152SQ03805453
公開日2005年7月13日 申請日期2003年3月5日 優(yōu)先權(quán)日2002年3月8日
發(fā)明者P·A·阿保, J·阿門, T·P·博克霍克德, J·R·克萊頓, S·E·康納, B·E·昆寧哈姆, T·A·恩格勒, K·W·福爾內(nèi)斯, J·R·亨利, Y·李, S·馬爾霍特拉, M·J·特貝, G·朱, B·R·貝里奇, C·E·呂格, J·M·沙利文 申請人:伊萊利利公司