專利名稱：一種抗白血病藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗白血病藥物，特別是采用表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)為主要原料的抗白血病藥物。
白血病的發(fā)病除遺傳因素之外，還與環(huán)境因素密切相關(guān)。我國每年新增白血病人4-5萬，白血病復(fù)發(fā)病人15萬以上。在急性早幼粒白血病治療方面，目前多采用全反式維甲酸(ATRA)作為分化誘導(dǎo)劑，可使大多數(shù)患者病情緩解。但維甲酸耐藥及維甲酸綜合癥可導(dǎo)致患者短期復(fù)發(fā)，再使用ATRA治療則因耐藥產(chǎn)生而達(dá)不到治療效果。骨髓移植是治療慢性粒細(xì)胞白血病較理想的方法之一，但供體困難，加之異基因或自體移植都需經(jīng)預(yù)處理殺滅惡性增殖的克隆后，才能植入新的干/祖細(xì)胞，臨床上較多應(yīng)用的干擾素療法其療效也不甚滿意。1992年以來，我國學(xué)者將三氧化二砷(As2O3)用于治療急、慢性，耐藥性白血病臨床，獲得了很好的療效，在國際上引起很大反響。進(jìn)一步的基礎(chǔ)研究表明，As2O3抗白血病的機(jī)制是，可顯著誘導(dǎo)白血病細(xì)胞的凋亡。然而As2O3為重金屬化合物，有極強(qiáng)細(xì)胞毒效應(yīng)，在體內(nèi)易蓄積且不易代謝，接受治療的病人存在強(qiáng)烈的毒性反應(yīng)。
本發(fā)明的目的是提供一種抗白血病的作用、機(jī)制一致，但無蓄積、無毒性反應(yīng)的抗白血病藥物。
本發(fā)明以茶葉中兒茶素單體-表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)為原料，按常規(guī)制劑工藝，制備成濃度范圍為50-500μg/ml的制劑，可以是口服藥，也可以是注射劑。更優(yōu)選范圍為250-500μg/ml。
EGCG是茶中兒茶素最主要的一個單體，具有極強(qiáng)的供氫能力，其分子結(jié)構(gòu)式如下 本發(fā)明為適合于治療白血病人的臨床藥物劑型，特別是注射劑，用以治療急性早幼粒白血病，慢性粒細(xì)胞白血病，維甲酸耐藥早幼粒細(xì)胞白血病。本發(fā)明可以是口服藥，也可以是注射劑。
本發(fā)明是一種白血病基因調(diào)控劑，具有顯著抑制急性早幼粒白血病細(xì)胞HL-60的生長，并可誘導(dǎo)其凋亡的作用，且無積蓄、無任何毒副作用，具有高效、低毒的抗急性、慢性、耐藥性的特點，是一種理想的白血病治療藥物。
實施例1.EGCG對白血病細(xì)胞生長影響的實驗將人急性早幼粒白血病NK4細(xì)胞，人急性早幼粒白血病HL-60細(xì)胞，慢性粒細(xì)胞白血病K562細(xì)胞，維甲酸耐藥早幼粒白血病MR-2細(xì)胞分別接種于RPMI-1640培養(yǎng)液中，于37℃含5％CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)傳代，接種于96孔培養(yǎng)板，接種時加不同濃度EGCG，每濃度平行4孔，48小時后MTT還原反應(yīng)測定腫瘤生長抑制率，結(jié)果見表1。
表1 不同濃度EGCG對白血病細(xì)胞生長的影響(x±s)
從表1結(jié)果看到，EGCG對各種白血病細(xì)胞的生長都有較強(qiáng)的抑制作用，而且呈明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系，即隨EGCG濃度的提高，對白血病細(xì)胞生長的抑制作用也逐步增強(qiáng)。
細(xì)胞凋亡是當(dāng)前腫瘤學(xué)研究的一個熱點，尤其在篩選抗腫瘤的藥物時被廣泛運用。細(xì)胞凋亡有著獨特的生化和形態(tài)學(xué)特征，通過對被EGCG作用后的各種白血病細(xì)胞的死亡形式進(jìn)行了觀察，結(jié)果如下被250-500μg/ml濃度間EGCG作用后各種白血病細(xì)胞均出現(xiàn)細(xì)胞凋亡所特有的形態(tài)學(xué)特征核皺折，染色質(zhì)凝集，裂解成碎片后形成由膜包繞的凋亡小體。
被250-500μg/ml濃度間EGCG作用后各種白血病細(xì)胞，在以核小體間DNA降解為標(biāo)志的凝膠電泳觀察中，均可見典型的DNA條帶，證實EGCG的誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡作用。
流式細(xì)胞術(shù)是一種先進(jìn)、精確的定量檢測凋亡細(xì)胞的方法。實驗觀察表明，EGCG在250-500μg/ml濃度范圍內(nèi)，誘導(dǎo)人急性早幼粒白血病NK4細(xì)胞，人急性早幼粒白血病HL-60細(xì)胞，慢性粒細(xì)胞白血病K562細(xì)胞，維甲酸耐藥早幼粒白血病MR-2細(xì)胞凋亡率分別達(dá)到71.85％、75.63％、81.22％、69.12％。結(jié)果還表明，EGCG對癌細(xì)胞分化阻斷作用主要發(fā)生在細(xì)胞分化早期。
權(quán)利要求
1.一種抗白血病藥物，其特征在于本發(fā)明以茶葉中兒茶素單體-表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)為原料，按常規(guī)制劑工藝，制備成濃度范圍為50-500μg/ml的制劑，可以是口服藥，也可以是注射劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其特征在于更優(yōu)選的濃度范圍為250-500μg/ml。
全文摘要
一種抗白血病藥物。本發(fā)明采用表沒食子兒荼素沒食子酸酯(EGCG)為主要原料的抗白血病藥物,按常規(guī)制劑工藝,制備成濃度范圍為50－500μg/ml的制劑。本發(fā)明為適合于治療白血病人的臨床藥物劑型,特別是注射劑,用以治療急性早幼粒白血病,慢性粒細(xì)胞白血病,維甲酸耐藥早幼粒細(xì)胞白血病;是一種白血病基因調(diào)控劑,具有顯著抑制急性早幼粒白血病細(xì)胞HL－60的生長,并可誘導(dǎo)其凋亡的作用,且無積蓄、無任何毒副作用,具有高效、低毒的抗急性、慢性、耐藥性的特點,是一種理想的白血病治療藥物。
文檔編號A61P35/00GK1377644SQ0110698
公開日2002年11月6日 申請日期2001年4月2日 優(yōu)先權(quán)日2001年4月2日
發(fā)明者曹進(jìn), 趙燕, 劉箭衛(wèi) 申請人:中南大學(xué)