專利名稱：(－)(3－三鹵代甲基苯氧基)(4－鹵代苯基)乙酸衍生物在治療耐胰島素、2型糖尿病、高 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及(-)(3-三鹵代甲基苯氧基)(4-鹵代苯基)乙酸衍生物和組合物在治療耐胰島素、2型糖尿病、高脂血癥和高尿酸血癥中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
糖尿病指由多個(gè)病因引起的疾病過程，其表征是葡萄糖血漿濃度增高，稱為血糖過高。參見，如LeRoith，D.等(編輯)，DIABETES MELLITUS(Lippincott-Raven出版社，美國賓夕法尼亞州費(fèi)城1996)和其中引用的所有參考文獻(xiàn)。根據(jù)美國糖尿病協(xié)會(huì)的估計(jì)，糖尿病影響了全球人口的6％左右。未控制的高血糖由于增加了微血管和大血管疾病，包括腎病、神經(jīng)病、視網(wǎng)膜病、高血壓、腦血管疾病和冠心病的發(fā)病危險(xiǎn)，故與增加的和過早的死亡率有關(guān)。因此，控制葡萄糖體內(nèi)平衡是治療糖尿病的關(guān)鍵。
糖尿病有兩類主要形式1型糖尿病(以前稱為胰島素-依賴型糖尿病或IDDM)；2型糖尿病(以前稱為非胰島素依賴的糖尿病或NIDDM)。
1型糖尿病是絕對缺乏胰島素(調(diào)節(jié)葡萄糖利用的激素)的結(jié)果。該胰島素缺乏的表征是在胰腺里L(fēng)angerhans小島中β-細(xì)胞損壞，這通常引起絕對的胰島素缺乏。1型糖尿病有兩個(gè)形式免疫-介導(dǎo)的糖尿病，病因是細(xì)胞介導(dǎo)的自體免疫破壞了胰腺的β細(xì)胞；和自發(fā)性糖尿病，指沒有已知病因的疾病形式。
2型糖尿病的特征在于相對地耐胰島素，而不是絕對地胰島素缺乏。2型糖尿病范圍從帶有相對胰島素缺乏的占主導(dǎo)的耐胰島素到帶有一些耐胰島素的占主導(dǎo)的胰島素缺乏。耐胰島素是減少胰島素在很寬濃度范圍里實(shí)施其生物作用的能力。在耐胰島素個(gè)體中，機(jī)體異常地分泌大量胰島素來補(bǔ)償該缺乏。當(dāng)存在不適當(dāng)量胰島素來補(bǔ)償耐胰島素且不合適地控制葡萄糖時(shí)，就會(huì)出現(xiàn)葡萄糖不可修復(fù)的耐受狀態(tài)。在許多個(gè)體中，胰島素分泌進(jìn)一步下降，血漿中葡萄糖濃度水平上升，產(chǎn)生了糖尿病的臨床狀態(tài)。2型糖尿病可能是由于對胰島素刺激的對主要的胰島素敏感組織肌肉、肝臟和脂肪組織中葡萄糖和脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)作用有耐受性而產(chǎn)生的。此對胰島素反應(yīng)的耐受性引起了在肌肉中葡萄糖攝入、氧化和儲(chǔ)存的胰島素活化的不足，以及在脂肪組織中脂解作用和肝臟中葡萄糖產(chǎn)生和分泌的胰島素抑制的不當(dāng)。2型糖尿病中，肥胖病人和一些非肥胖病人中的游離脂肪酸水平升高，脂質(zhì)氧化增加。
患有糖尿病的病人表征是過早形成動(dòng)脈硬化癥，心血管和外周血管疾病的發(fā)病率增加。高脂血癥是這些疾病的一個(gè)重要參與因素。高脂血癥是一種疾病，其特征是血液中血清脂質(zhì)異常地增加，是形成動(dòng)脈粥樣硬化和心臟病的一個(gè)重要的危險(xiǎn)因素。對于脂質(zhì)代謝功能失調(diào)的綜述，可參見，如Wilson，J.等(編輯)，脂質(zhì)代謝失調(diào)，第23章，內(nèi)分泌學(xué)手冊(Textbook ofEndocrinology)，第9版，(W.B.Sanders公司，美國賓夕法尼亞州，費(fèi)城，1998；該應(yīng)用文獻(xiàn)和其中所引的所有文獻(xiàn)并入供參考)。血清脂蛋白是循環(huán)中脂質(zhì)的載體。它們根據(jù)其密度可分為乳糜微粒；極低密度脂蛋白(VLDL)；中密度脂蛋白(IDL)；低密度脂蛋白(LDL)；和高密度脂蛋白(HDL)。高脂血癥通常可分為原發(fā)性和繼發(fā)性的高脂血癥。原發(fā)性高脂血癥通常是由基因缺陷引起的，而繼發(fā)性高脂血癥通常由其它因素，如各種疾病狀態(tài)、藥物和飲食因素引起?；蛘?，高脂血癥是由原發(fā)性和繼發(fā)性高脂血癥合并引起的。膽固醇水平升高與許多疾病狀態(tài)，包括冠狀動(dòng)脈疾病、心絞痛、頸動(dòng)脈疾病、中風(fēng)、腦動(dòng)脈硬化和黃瘤有關(guān)聯(lián)。
血脂蛋白異常，或血漿中脂蛋白異常是糖尿病中常常發(fā)生的疾病，業(yè)已顯示出是糖尿病人中冠狀疾病死亡增加的主要因素之一(參見，如Joslin，E.Ann.Chim.Med.(1927)51061-1079)。從那時(shí)起進(jìn)行的流行學(xué)研究證實(shí)，與沒有糖尿病的對象相比，患有糖尿病的對象中因冠狀疾病死亡是前者的數(shù)倍。(參見，如Garcia，M.J.等，糖尿病(1974)23105-11(1974)；和Laakso，M.和Lehto，S.，糖尿病綜述(Diabetes Reviews)(1997)5(4)294-315)。在糖尿病人中業(yè)已出現(xiàn)了一些脂蛋白異常性(Howard B.等，Artherosclerosis(1978)30153-162)。
20世紀(jì)70年代起的研究顯示，外消旋的2-乙酰氨基乙基(4-氯苯基)(3-三氟甲基苯氧基)乙酸酯(也稱為“鹵芬酯”)是治療2型糖尿病、高脂血癥和高尿酸血癥癥的潛在有效的治療劑(參見，如Bolhofer，W.，US 3,517,050；Jain，A.等，N.Eng.J.Med.(1975)2931283-1286；Kudzma，D.等，糖尿病(Diabetes)(1977)25291-95；Kohl，E.等，糖尿病護(hù)理(DiabetesCare)(1984)719-24；McMahon，F(xiàn).G.等，Univ.Mich.Med.Center J.(1970)36247-248；Simori，C.等，脂質(zhì)(Lipids)(1972)796-99；Morgan，J.P.等，Clin.Pharmacol.Therap.(1971)12517-524，Aronow，w.S.等，Clin.Pharmacol Ther(1973)14358-365和Fanelli，G.M.等，J.Pharm.Experimental Therapeutics(1972)180377-396)。在這些以前的研究中，外消旋的鹵芬酯與磺酰脲類合并給藥時(shí)能觀察到其對糖尿病有效。單獨(dú)使用外消旋的鹵芬酯治療糖尿病人時(shí)觀察到對葡萄糖的作用極小。但是，會(huì)產(chǎn)生明顯的副作用，包括來自胃部的胃腸道出血和消化器官潰瘍(參見，如Friedberg，S.J.等，Clin.Res.(1986)第34卷，第2號(hào)682A)。
另外，也有一些外消旋鹵芬酯與諸如硫酸華法令(warfarin)(也稱為3-(α-丙酮基芐基)-4-羥基香豆素或CoumadinTM(Dupont Pharmaceuticals，E.I.Dupont de Nemours and Co.，Inc.，美國威靈頓DE)之間的藥物-藥物相互作用的證據(jù)(參見，如Vesell，E.S.和Passantanti，G.T.，F(xiàn)ed.Proc.(1972)31(2)538)。CoumadinTM是一種抗凝血?jiǎng)?，通過抑制維生素K依賴的凝血因子(包括因子II、VII、IX和X，和抗凝蛋白C和S)的合成來作用。CoumadinTM據(jù)信是被肝微粒體酶(細(xì)胞色素P450酶)進(jìn)行立體特異性地代謝。涉及Coumadin，包括2C9、2C19、2C8、2C18、1A2和3A4、2C9代謝的細(xì)胞色素P450同工酶可能是人體肝臟P450的主要形式，它在體內(nèi)調(diào)節(jié)數(shù)種藥物的藥物代謝，包括CoumadinTM的抗凝活性。(參見，如Miners，J.O.等，Bri.J.Clin.Pharmacol.(1998)45525-538)。
抑制CoumadinTM代謝的藥物使維生素K依賴的凝固因子進(jìn)一步減少，這妨礙了凝固較之病人接受該治療更甚(即，病人的下肢、心或其它部分中會(huì)有由血塊形成的肺栓塞或腦栓塞的危險(xiǎn))?？鼓?jiǎng)﹦┝康暮唵螠p少難以維持機(jī)體合適的抗凝固，預(yù)防血塊的形成。藥物-藥物相互作用使抗凝血作用增強(qiáng)對可能有從軟組織損傷、胃腸道處(即胃潰瘍或十二指腸潰瘍)或其它損傷(即大動(dòng)脈瘤)處嚴(yán)重滲血的病人有很大的危險(xiǎn)。對于太多的抗凝血的流血會(huì)構(gòu)成醫(yī)學(xué)上的急診，若不馬上進(jìn)行合適的治療會(huì)引起死亡。
細(xì)胞色素P450 2C9也已知涉及其它常用藥物，包括苯妥英鈉、磺酰尿類(如甲磺丁脲)和一些非甾族抗炎藥(如布洛芬)的代謝。對該酶的抑制除了上述對CoumadinTM描述時(shí)揭示的那些不良影響外，還引起涉及藥物-藥物相互作用的其它不良影響。(參見，如Pelkonen，等，Xenobiotica(1998)281203-1253；Linn，J.H.和Lu，A.Y.，Clin.Pharmacokinet.1998)35(5)361-390)。
在鹵芬酯用于常規(guī)治療耐胰島素、2型糖尿病、高脂血癥和高尿酸血癥前需要解決上述困難和缺陷。本發(fā)明通過提供減緩耐胰島素、2型糖尿病、高脂血癥和高尿酸血癥，同時(shí)預(yù)防副作用特性的組合物和方法。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物2型糖尿病的方法。該方法包括對哺乳動(dòng)物給予治療有效量的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的(-)立體異構(gòu)體， 其中R選自羥基、低級芳烷氧基、二低級烷基氨基-低級烷氧基、低級烷酰氨基低級烷氧基、苯甲酰氨基-低級烷氧基、脲基-低級烷氧基、N’-低級烷基-脲基-低級烷氧基、氨基甲?；?低級烷氧基、鹵代苯氧基取代的低級烷氧基、氨基甲?；〈谋窖趸Ⅳ驶?低級烷氨基、N，N-二低級烷基氨基-低級烷基氨基、鹵代低級烷基氨基、羥基取代的低級烷基氨基、低級烷?；趸〈牡图壨榘被?、脲基和低級烷氧基羰基氨基；和X是鹵素；其中化合物基本上沒有(+)立體異構(gòu)體。
一些這類方法進(jìn)一步包括式II化合物 其中R2選自苯基-低級烷基、低級烷酰氨基-低級烷基和苯甲?；?低級烷基。
一些這類方法進(jìn)一步包括式III化合物 式III優(yōu)選的化合物已知是“(-)4-氯苯基-(3-三氟甲基苯氧基)-乙酸2-乙酰氨基乙基酯”或“(-)鹵芬酯”本發(fā)明進(jìn)一步提供了調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物耐胰島素的方法。該方法包括對哺乳動(dòng)物給予治療有效量的式I化合物的(-)立體異構(gòu)體。一些這類方法進(jìn)一步包括式II化合物。一些這類方法進(jìn)一步包括式III化合物。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了改善哺乳動(dòng)物高脂血癥的方法。該方法包括對哺乳動(dòng)物給予治療有效量的式I化合物，一些這類方法包括式II化合物。一些這類方法進(jìn)一步包括式III化合物。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物高尿酸血癥的方法，該方法包括對哺乳動(dòng)物給予治療有效量的式I化合物。一些這類方法進(jìn)一步包括式II化合物。一些這類方法進(jìn)一步包括式III化合物。
本發(fā)明也提供了藥物組合物。藥物組合物包括藥學(xué)上可接受的載體和治療有效量的式I、II或III化合物。
附圖簡述

圖1顯示了通過外消旋鹵芬酸(halofenic acid)、(-)鹵芬酸和(+)鹵芬酸來抑制細(xì)胞色素P450 2C9(CYP2C9)活性。在這些化合物濃度增加下測量甲磺丁脲的羥基化。外消旋的鹵芬酸抑制CYP 2C9活性的IC50是0.45μM，(+)鹵芬酸抑制CYP 2C9的IC50是0.22μM，相反的是，(-)鹵芬酸的效力低20-倍，其表觀IC50是3.5μM。
圖2顯示了以250mg/kg的單劑給糖尿病ob/ob小鼠口服外消旋鹵芬酯、鹵芬酯的(-)對映異構(gòu)體或鹵芬酯的(+)對映異構(gòu)體。(-)對映異構(gòu)體的作用最快，作用持續(xù)的時(shí)間最長。在3-24小時(shí)中所有的點(diǎn)與對照相比(-)對映異構(gòu)體對葡萄糖的減少最有意義(p＜0.05)。外消旋鹵芬酯和(+)對映異構(gòu)體對4.524小時(shí)中所有的點(diǎn)也是有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。與用(+)對映體和外消旋處理動(dòng)物的動(dòng)物相比(其在24小時(shí)處血漿葡萄糖各自是306±28.5mg/dl和259.3±20.8mg/dl)，用(-)對映異構(gòu)體處理的動(dòng)物在24小時(shí)處的血漿葡萄糖濃度為217±16.4mg/dl。在24小時(shí)處賦形劑處理的對照組中血漿葡萄糖為408±16.2mg/dl(-)對映異構(gòu)體比(+)對映異構(gòu)體在3小時(shí)和24小時(shí)處都更為有效，且有顯著差異(p＜0.05)。
圖3顯示了外消旋鹵芬酯和鹵芬酯的(-)和(+)對映異構(gòu)體在每天口服給予糖尿病ob/ob小鼠后降低血漿葡萄糖濃度的能力。消旋體的給予劑量為250mg/kg/天，對映異構(gòu)體的給藥劑量為125mg/kg/天和250mg/kg/天。用外消旋鹵芬酯和其(-)和(+)對映異構(gòu)體處理的動(dòng)物中相對于對照動(dòng)物，其葡萄糖水平明顯減少。用低劑量(125mg/kg)(-)和(+)對映異構(gòu)體處理時(shí)，(-)對映異構(gòu)體在6小時(shí)、27小時(shí)和30小時(shí)處有顯著，而(+)對映異構(gòu)體僅在6小時(shí)和27小時(shí)處顯著。
圖4顯示了用消旋鹵芬酯和鹵芬酯的(-)和(+)對映異構(gòu)體處理糖尿病ob/ob小鼠在每日口服給藥后ob/ob小鼠的胰島素血漿濃度。外消旋體的口服劑量是250mg/kg/天，對映異構(gòu)體的口服劑量是125mg/kg/天和250mg/kg/天。相對于賦形劑對照，用鹵芬酯的外消旋體或?qū)τ钞悩?gòu)體處理過的動(dòng)物胰島素較低。高劑量下，在動(dòng)物用鹵芬酯的(-)和(+)對映異構(gòu)體處理兩天后，在27和30小時(shí)時(shí)觀察到血漿中胰島素濃度降低程度最大。
圖5顯示用賦形劑、250mg/kg/天鹵芬酯外消旋體、125mg/kg/天和250mg/kg/天的鹵芬酯(-)對映異構(gòu)體或125mg/kg/天或250mg/kg/天的鹵芬酯(+)對映異構(gòu)體5天處理后ob/ob小鼠禁食過夜后的血漿中葡萄糖濃度。對照的動(dòng)物是高脂血癥，其血漿葡萄糖濃度為185.4±12.3mg/dl。用鹵芬酯處理的所有動(dòng)物在降低葡萄糖方面有意義(p＜0.01)。兩個(gè)高劑量的對映異構(gòu)體可將葡萄糖降低到接近正常的水平(-)對映異構(gòu)體和(+)對映異構(gòu)體處理的動(dòng)物分別為127.3±8.0mg/dl和127.2±9.7mg/dl。
圖6顯示了用賦形劑、250mg/kg/天的外消旋鹵芬酯、125mg/kg/天和250mg/kg/天(-)對映異構(gòu)體或125mg/kg/天或250mg/kg/天鹵芬酯的(+)對映異構(gòu)體處理ob/ob小鼠達(dá)5天后禁食過夜的血漿胰島素濃度。接受兩種劑量的(-)對映異構(gòu)體的動(dòng)物中血漿胰島素水平明顯降低。低劑量的鹵芬酯(+)對映異構(gòu)體不降低血漿胰島素濃度，但高劑量的(+)對映異構(gòu)體使血漿胰島素濃度降低。
圖7A顯示了對Zucker肥胖大鼠(一種耐胰島素和葡萄糖耐受力受損的模型)給予口服葡萄糖后的血漿葡萄糖濃度。這些動(dòng)物在口服葡萄糖前5.5小時(shí)用賦形劑對照、外消旋的鹵芬酯、(-)鹵芬酯或(+)鹵芬酯進(jìn)行處理。外消旋的劑量為100mg/kg，兩個(gè)對映異構(gòu)體的劑量為50和100mg/kg。在對照動(dòng)物中，給予葡萄糖后30分鐘，血漿中葡萄糖上升到＞250mg/dl，這是葡萄糖耐受力受損的一個(gè)指征。在給予葡萄糖后30-60分鐘，接受外消旋鹵芬酯的大鼠的血糖濃度減少。接受100mg/kg(-)鹵芬酯的動(dòng)物使用血糖濃度降低的程度是所有處理動(dòng)物中最大的。與用外消旋體或(+)鹵芬酯處理的大鼠相比，用(-)鹵芬酯處理的動(dòng)物降低血糖濃度的作用可持續(xù)90-120分鐘。圖7B比較了每組動(dòng)物中曲線下的增加的面積(AUC)。用兩種劑量的(-)鹵芬酯處理的組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的改變(p＜0.05)。雖然相對于對照組，其它組的AUC也有所減少，但該改變是不明顯的。
圖8顯示了用賦形劑對照、(-)鹵芬酯(50mg/kg/天)或(+)鹵芬酯(50mg/kg/天)處理5天后Zucker肥胖大鼠中的短期耐胰島素試驗(yàn)。該試驗(yàn)測量了試驗(yàn)動(dòng)物的胰島素敏感性、葡萄糖斜率減少可直接代表測量胰島素反應(yīng)。(-)鹵芬酯處理過的動(dòng)物比用賦形劑處理過的動(dòng)物對胰島素敏感(p＜0.01)，也比(+)鹵芬酯處理過的動(dòng)物對胰島素敏感(p＜0.05)。
圖9A顯示用給藥量分別為50mg/kg/天、25mg/kg/天或25mg/kg/天的外消旋鹵芬酯、(-)對映異構(gòu)體或(+)對映異構(gòu)體處理Zucker糖尿病肥胖大鼠13天后大鼠相對于對照組的血漿膽固醇水平。在(-)對映異構(gòu)體和消旋體處理過的動(dòng)物中，血漿中膽固醇水平下降。(+)對映異構(gòu)體處理過的動(dòng)物的膽固醇是相對恒定的，而對照動(dòng)物中膽固醇上升。圖9B比較了對照組和處理組之間血漿膽固醇的差異。(-)對映異構(gòu)體是試驗(yàn)組中最有活性的。
圖10A顯示用12.5mg/kg/天(低劑量)或37.5mg/kg/天(高劑量)的鹵芬酯(-)對映異構(gòu)體或(+)對映異構(gòu)體對Zucker糖尿病肥胖大鼠處理14天，其相對于賦形劑對照處理組的血漿膽固醇水平。用高劑量處理的動(dòng)物中，(-)對映異構(gòu)體能最大程度上地降低膽固醇。圖10B比較了對照組和處理組之間血漿膽固醇的差異。用(-)對映異構(gòu)體處理動(dòng)物，低劑量處理7天后和高劑量處理7天和14天后被處理的動(dòng)物有顯著差異。(+)對映異構(gòu)體只是在用高劑量處理7天后才有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
圖11A顯示用12.5mg/kg/天(低劑量)或37.5mg/kg/天(高劑量)的(-)對映異構(gòu)體或(+)對映異構(gòu)體處理Zucker糖尿病肥胖大鼠后相對于賦形劑對照組的血漿甘油三酯水平。用高劑量的(-)對映異構(gòu)體處理的動(dòng)物的甘油三酯水平是所有處理組中最低的。圖11B比較了對照和處理組之間的血漿甘油三酯水平。第7天，高劑量的(+)和(-)對映異構(gòu)體都明顯降低了血漿甘油三酯。
圖12顯示了用賦形劑、(-)鹵芬酯或(+)鹵芬酯處理的Zucker糖尿病肥胖大鼠在0天、第2天、第3天時(shí)的血糖濃度。用(-)鹵芬酯與賦形劑處理的動(dòng)物相比，它明顯地降低了血糖濃度。
圖13顯示了C57BL/6J db/db小鼠對照組里和用(-)鹵芬酯處理組中的血糖濃度。對照組中血糖濃度隨著動(dòng)物的年齡增加而增加，而(-)鹵芬酯處理組中的血糖濃度的增加卻被制止或明顯減少。
圖14顯示了C57BL/6J db/db小鼠的對照組和用(-)鹵芬酯處理組中的血漿中胰島素的水平。用(-)鹵芬酯處理可保持胰島素血漿濃度，而對照組中血漿胰島素濃度進(jìn)行性地減少。
圖15顯示C57BL/6J db/db小鼠對照組和用(-)鹵芬酯處理組中的非糖尿病小鼠的百分?jǐn)?shù)。(-)鹵芬酯處理組組中約30％小鼠沒有出現(xiàn)糖尿病(血糖水平＜250mg/dl)而所有的對照組在10周齡處都沒有糖尿病。
圖16顯示了C57BL/6J db/db小鼠的對照組和用(-)鹵芬酯處理組中血漿甘油三酯水平。用(-)鹵芬酯處理改善了高脂血癥，而對照組沒有改善。
圖17顯示了在1，4，5，6-四氫-4，6-二氧-1，3，5-三嗪-2-羧酸誘導(dǎo)的高尿酸血的大鼠中(-)鹵芬酯和(+)鹵芬酯對血漿尿酸水平的作用?？诜?-)鹵芬酯可明顯降低血漿尿酸水平。(+)鹵芬酯也可降低血漿尿酸水平，但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
定義術(shù)語“哺乳動(dòng)物”非限定性地包括人、家畜(如狗或貓)、農(nóng)用動(dòng)物(母牛、馬或豬)、猴子、兔子、小鼠和實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物。
術(shù)語“耐胰島素”可一般定義為葡萄糖代謝失調(diào)。更特定的是，耐胰島素可定義為胰島素在很大濃度范圍力產(chǎn)生的生物作用能力比預(yù)期的生物效應(yīng)少。(參見，如Reaven，G.M.，J.Basic & Clin.Phys. & Pharm.(1998)9387-406和Flier，J.Ann rev.Med.(1983)34145-60)。耐胰島素的人對葡萄糖合適代謝的能力下降，對胰島素治療的反應(yīng)不良。耐胰島素的癥狀包括肌肉中葡萄糖攝入、氧化和肌肉中貯存時(shí)胰島素活化不足，和在脂肪組織中脂解、和肝臟中葡萄糖產(chǎn)生和分泌時(shí)胰島素抑制的不合適。耐胰島素會(huì)引起或?qū)е侣殉簿C合征、受損的葡萄糖耐受力(IGT)、妊娠性糖尿病、高血壓、肥胖、動(dòng)脈硬化和各種其它的疾病。最后，耐胰島素個(gè)體會(huì)發(fā)展到糖尿病的狀態(tài)。耐胰島素與耐葡萄糖的關(guān)聯(lián)，血漿甘油三酯的增高和高密度脂蛋白膽固醇濃度的降低，高血壓，高血尿酸癥，低密度脂蛋白顆粒較小、較稀，和plaminogen活化抑制劑-1)的循環(huán)水平較高，被稱為“綜合癥X”(參見，Reaven，G.M.，Physiol.Rev.(1995)75473-486)。
術(shù)語“糖尿病”表示一種疾病或病況，其表征為葡萄糖產(chǎn)生和利用中的代謝缺陷，它導(dǎo)致不能維持機(jī)體合適的血糖水平。這些缺陷的結(jié)果是血液中葡萄糖升高，稱為“高血糖癥”。糖尿病的兩個(gè)主要形式是1型糖尿病和2型糖尿病。如上所述，1型糖尿病統(tǒng)稱是胰島素(調(diào)節(jié)葡萄糖利用的激素)絕對缺乏的結(jié)果。2型糖尿病常常在胰島素水平正常，或者甚至升高時(shí)發(fā)生，是由組織對胰島素不能合適反應(yīng)引起的。大多數(shù)2型糖尿病病人是耐胰島素的，胰島素相對缺乏性，即其胰島素分泌不能補(bǔ)償外周組織對胰島素反應(yīng)的耐受性。另外，許多2型糖尿病人是肥胖的。其它類型的葡萄糖體內(nèi)平衡的疾病包括受損的葡萄糖耐受力，它是介于正常葡萄糖體內(nèi)平衡和糖尿病之間的代謝中間狀態(tài)，以及妊娠糖尿病，它是沒有1型或2型糖尿病史的婦女懷孕時(shí)產(chǎn)生的葡萄糖不耐性。
術(shù)語“繼發(fā)性糖尿病”是由其它可診斷的病因引起的糖尿病，所述的病因包括β細(xì)胞功能的基因缺陷(如，年幼人長大后發(fā)作型的糖尿病，稱為“MODY”，它是具有常染色體遺傳的2型糖尿病的早期發(fā)作形式；參見，如Fajans S.等，Diabet.Med.(1996)(9增補(bǔ)6)S90-5和Bell，G.等，Annu.Rev.Physiol.(1996)58171-86；胰島素作用的遺傳缺陷；外分泌胰島疾病(如血紅蛋白沉著、胰腺炎及其纖維變性)；某些內(nèi)分泌疾病，其中過量的激素干擾了胰島素作用(如，在肢端肥大癥中的生長激素，Cushing綜合癥中的氫化可的松)；抑制胰島素分泌的某些藥物(如苯妥英)或抑制胰島素作用的某些藥物(如雌激素和糖皮質(zhì)激素)；和由感染(如，風(fēng)疹、Coxsakie病毒和CMV)引起的糖尿?。灰约捌渌蚓C合癥。
美國糖尿病協(xié)會(huì)列舉了2型糖尿病、受損葡萄糖耐受力和妊娠性糖尿病的診斷指南(參見，如，The Expert Committee on the Diagnosis andClassification of Diabetes Mellitus，Diabetes Care，(1999)第2卷(增補(bǔ)1)S5-19)。
術(shù)語“鹵芬酸”指4-氯苯基-(3-三氟甲基苯氧基)-乙酸的酸形式。
術(shù)語“高血胰島素癥”指血液中胰島素的水平異常增高。
術(shù)語“高血尿酸癥”指血液中尿酸水平異常增高。
術(shù)語“促泌素”表示刺激分泌的物質(zhì)或化合物。例如，胰島素促泌素是刺激胰島素分泌的物質(zhì)或化合物。
術(shù)語“血紅蛋白”或“Hb”指紅細(xì)胞中存在的呼吸用染料，它主要供氧轉(zhuǎn)運(yùn)。血紅蛋白分子包括四種多肽亞單位(各自為兩個(gè)α鏈系統(tǒng)和兩個(gè)β鏈系統(tǒng))。通過使一個(gè)球蛋白和一個(gè)亞鐵血紅素分子(鐵-原卟啉絡(luò)合物)連接形成了每個(gè)亞單位。正常成年人溶血素里發(fā)現(xiàn)的血紅蛋白的主要一類是成熟血紅蛋白(稱為“HbA”；也稱為“HbA0”，以將其與糖化(glycated)血紅蛋白(下面稱為HbA1，有α2β2亞單位)區(qū)分開)。在正常的成人的溶血產(chǎn)物中也可發(fā)現(xiàn)痕量組分，如HbA2(α2δ2)。
在成熟血紅蛋白HbAs的類別中，有糖化血紅蛋白(下面稱為“HbA1”，或“糖基化的血紅蛋白”)，它可用離子交換樹脂進(jìn)一步分離為HbA1a1，HbA1a2，HbA1b，和HbA1c。所有的這些亞類具有相同的主要結(jié)構(gòu)，通過使正常血紅蛋白HbA和葡萄糖(或葡萄糖-6-磷酸鹽或果糖)的β亞單元鏈中的N-末端的纈氨酸的氨基形成醛亞胺(Schiff堿)，然后通過Amadori重排形成酮胺來穩(wěn)定該結(jié)構(gòu)。
術(shù)語“糖基化血紅蛋白”(也稱為“HbA1c”，“GHb”，“血紅蛋白-糖基化”，“糖尿病控制指數(shù)”和“糖血紅蛋白”；在此稱為“血紅蛋白A1c”)指通過血漿葡萄糖使血紅蛋白的β-鏈非酶地糖基化后得到的穩(wěn)定產(chǎn)物。血紅蛋白A1c在血中構(gòu)成糖化血紅蛋白的主要部分。糖基化血紅蛋白與血液葡萄糖水平成正比。因此，血紅蛋白A1c形成率隨著血糖濃度增加而直接增加。由于在紅細(xì)胞120-天存活期間能以穩(wěn)定的速率發(fā)生糖基化反應(yīng)，測量糖基化血紅蛋白水平反映了個(gè)體在2-3個(gè)月期間的平均血糖濃度。因此，測定糖基化血紅蛋白HbA1c的量可為碳水化合物代謝控制的一個(gè)良好指數(shù)。因此，最后兩個(gè)月的血糖水平可在HbA1c比總血紅蛋白Hb的比例基礎(chǔ)上建立。分析血液中的血紅蛋白A1c可用作測量，供長期控制血糖水平(參見，Jain，S.等，Diabetes(1989)381539-1543；Peters A.，等，JAMA(1996)2761246-1252)。
術(shù)語糖尿病的“癥狀”包括，但不限于，多尿、煩渴和多食癥?！岸嗄颉北硎驹诮o定期間有大量尿通過；“煩渴”表示慢性、過度口渴；“多食癥”表示過度攝食。其它的糖尿病癥狀包括，如對某些感染(特別是真菌和葡萄球菌感染)的易感性增加，惡心和酮酸中毒(血液中酮體產(chǎn)生增加)。
術(shù)語糖尿病的“并發(fā)癥”包括，但不限于，微血管并發(fā)癥和大血管并發(fā)癥。微血管并發(fā)癥是會(huì)引起小血管損傷的并發(fā)癥。這些并發(fā)癥包括，如視網(wǎng)膜病(由于眼睛里血管損傷引起的視力損傷或喪失)；神經(jīng)病(由于到達(dá)神經(jīng)系統(tǒng)的血管損傷引起的神經(jīng)損傷及足部疾病)；和腎病(由于腎臟里血管的損傷引起的腎損傷)。大血管并發(fā)癥是通常引起大血管損傷的并發(fā)癥。這些并發(fā)癥包括，如心血管疾病和外周血管疾病。心血管疾病指心臟血管的疾病。參見，如Kaplan，R.M.等，“心血管疾病”HEALTH AND HUMAN BEHAVIOR，206-242(McGrawHill，美國紐約，1993)。心血管疾病是幾種形式之一，包括如高血壓、冠心病、中風(fēng)和風(fēng)濕性心臟病的統(tǒng)稱。外周血管疾病指心臟外任何血管的疾病。它常常會(huì)使將血液通往腿和手臂的血管狹窄。
術(shù)語“動(dòng)脈硬化“涵蓋了相關(guān)領(lǐng)域醫(yī)生理解和明白的血管疾病和病況。動(dòng)脈硬化性的心血管疾病、冠心病(也稱為冠狀動(dòng)脈疾病或局部缺血性心臟病)，腦血管病和外周血管病是動(dòng)脈硬化的所有臨床癥狀，因此為術(shù)語“動(dòng)脈硬化”和“動(dòng)脈硬化疾病”所涵蓋。
術(shù)語“抗高脂血癥”指將血液中過量的脂質(zhì)濃度降低到所需水平。
術(shù)語“抗高尿酸血癥”將血液中過量的尿酸濃度降低到所需的水平。
術(shù)語“高脂血癥“指血液中脂質(zhì)水平異常升高。高脂血癥可以至少三個(gè)形式出現(xiàn)(1)高膽固醇血，即膽固醇水平升高；(2)高甘油三酯血，即甘油三酯水平升高；和(3)合并的高脂血癥，即高膽固醇血和高甘油三酯血的組合。
術(shù)語“調(diào)節(jié)”指治療、預(yù)防、抑制、增強(qiáng)或引起功能或病情。例如，本發(fā)明化合物可通過降低人體的膽固醇來調(diào)節(jié)高脂血癥，從而抑制高脂血癥。
術(shù)語“治療”意味著為了抵抗疾病、病況或失調(diào)對人進(jìn)行處理和護(hù)理，包括給予本發(fā)明化合物來預(yù)防癥狀或并發(fā)癥的發(fā)作，減輕癥狀或并發(fā)癥，或消除疾病、病況或失調(diào)。
術(shù)語“預(yù)防”表示對人進(jìn)行處理和護(hù)理，以便使疾病、病況或失調(diào)的癥狀不發(fā)作。
術(shù)語“膽固醇”指一種甾類醇，它是細(xì)胞膜和髓磷脂鞘的必不可少的成分。膽固醇也可作為甾族激素和膽酸的前體。
本文使用的術(shù)語“甘油三酯”(“TGs”)作為常規(guī)應(yīng)用，TGs由三個(gè)脂肪酸酯化于甘油分子構(gòu)成，它可儲(chǔ)存脂肪酸，所述的脂肪酸由肌肉細(xì)胞使用供產(chǎn)生能量或?yàn)橹窘M織攝入和儲(chǔ)存。
由于膽固醇和TGs是水不溶的，它們必須以特殊的分子絡(luò)合物(稱為“脂蛋白”)進(jìn)行包裝以轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入血漿。脂蛋白由于產(chǎn)生過多和/或除去不足而在血漿里積聚。有至少5種區(qū)分的脂蛋白，其大小、組成、密度和功能是不同的。在小腸的細(xì)胞中，食品脂質(zhì)被包裝成大的脂蛋白絡(luò)合物，稱為“乳糜微?！保銽G高，膽固醇含量低。在肝臟中，包裝TG和膽固醇酯并作為富含TG脂蛋白稱為極低密度脂蛋白(“VLDL”)來釋放入血漿，其主要功能是內(nèi)在轉(zhuǎn)運(yùn)肝臟制造的TGs，或通過脂肪組織釋放。通過酶作用，極低密度脂蛋白或降低，或被肝臟攝入，或進(jìn)一步或轉(zhuǎn)為中密度脂蛋白(“IDL”)。IDL，依次或由肝臟攝入或修飾成低密度脂蛋白(“LDL”)。LDL通過肝臟攝入或降解，或被肝外組織攝入。高密度脂蛋白(“HDL”)在膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)的過程中幫助從外周組織除去膽固醇。
術(shù)語“脂肪血不良(dyslipidemia)”指血漿中脂蛋白水平異常，包括脂蛋白水平降低和/或升高(如，LDL、VLDL水平升高，HDL水平降低)。
原發(fā)性高脂血癥的例子包括，但不限于(1)家族性高乳糜微粒血，稀有的基因失調(diào)，它引起酶，降解脂肪分子的LP脂肪酶的缺乏。LP脂酶缺乏會(huì)導(dǎo)致大量脂肪或脂蛋白在血液中積聚；(2)家族性高膽固醇血，一種相對常見的基因失調(diào)，是在LDL受體基因系列突變導(dǎo)致LDL受體發(fā)生故障和/或LDL受體不存在時(shí)所引起的疾病。該疾病使得不能有效地由LDL受體清除LDL，從而使血漿中的LDL和總膽固醇水平升高；(3)家族性組合的高脂血癥，也稱為多發(fā)性脂蛋白-型高脂血癥；一種遺傳疾病，其中病人和他們直系親屬可在不同的時(shí)間出現(xiàn)高膽固醇和高甘油三脂。HDL膽固醇水平常常適度地減少；(4)家族性阿樸脂蛋白B-100缺陷是相對常見的自噬體濕性基因異常。該缺陷是由單核苷突變，使谷氨酸替代精氨酸，從而降低LDL顆粒對LDL受體的親和力所引起的。結(jié)果，這會(huì)導(dǎo)致高的LDL血漿濃度和總膽固醇水平；
(5)家族性β脂蛋白血不良，也稱為III型高脂蛋白血，是不常見的遺傳疾病，引起血清中TG和具有異常阿樸脂蛋白E功能的膽固醇水平中度到嚴(yán)重地升高。HDL水平通常是正常的；和(6)家族性高甘油三酯血，是一種常見的遺傳疾病，其中血漿VLDL濃度升高。這可引起甘油三酯水平(通常不是膽固醇水平)微升或適度升高，常常伴有血漿HDL水平降低。
繼發(fā)性高脂血癥的危險(xiǎn)因素包括，但不限于，(1)疾病的危險(xiǎn)因素，如1型糖尿病、2型糖尿病、Cushing綜合癥、甲狀腺功能減退和一些類型的腎衰竭的病史；(2)藥物的危險(xiǎn)因素，包括控制生育藥丸；激素，如雌激素和皮質(zhì)類固醇；某些利尿劑；和各種β阻斷劑；(3)飲食危險(xiǎn)因素，包括每個(gè)總卡路里中飲食的脂肪攝入超過40％；每個(gè)總卡路里中飽和脂肪的攝入大于10％；每天膽固醇攝入大于300毫克；習(xí)慣性和過量飲酒；和肥胖。
術(shù)語“肥胖”指，根據(jù)世界衛(wèi)生組織的定義，男性的體重指數(shù)(BMI)大于27.8kg/m2，女性的體重指數(shù)大于27.3kg/m2(BMI等于體重(kg)/高度(m2))。肥胖與各種醫(yī)學(xué)疾病，包括糖尿病和高脂血癥有關(guān)。肥胖也是形成2型糖尿病的一個(gè)危險(xiǎn)因素(參見，如Barrett-Conner，E.Epidemol.rev.(1989)11172-181；和Knowler等，Am.J.Clin.Nutr.(1991)531543-1551)。
“藥學(xué)上可接受的鹽”指藥物工業(yè)常用的無毒的堿金屬、堿土金屬和銨鹽，包括鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、鈣鹽、鎂鹽、鋇鹽、銨鹽和魚精蛋白鋅鹽，它們可用本技術(shù)領(lǐng)域公知的方法制備。術(shù)語也包括無毒的酸加成鹽，通過使本發(fā)明的化合物與合適的有機(jī)酸或無機(jī)酸反應(yīng)來制備。代表性的鹽包括，但不限于，鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、乙酸鹽、草酸鹽、戊酸鹽、油酸鹽、月桂酸鹽、硼酸鹽、苯甲酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、甲苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、萘磺酸鹽(napsylate)等。
“藥學(xué)上可接受的酸加成鹽”指保留了生物效應(yīng)和游離堿性質(zhì)的鹽，它們不是生物學(xué)上不利的，與諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等的無機(jī)酸，和諸如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對-甲苯磺酸、水楊酸等有機(jī)酸形成所述的鹽。對于藥學(xué)上可接受的酸加成鹽作為前體藥物的描述可參見，如Bundgaard，H.編輯，前體藥物的設(shè)計(jì)(Elsevier Science Publishers，Amsterdam 1985)。
“藥學(xué)上可接受的酯”指在酯鍵水解時(shí)保留了羧酸或醇的生物效應(yīng)和性質(zhì)的酯，它們不是生物學(xué)上不利的。對于藥學(xué)上可接受的酯作為前體藥物的描述可參見Bundgaard，H.，(同上)。這些酯典型地從相應(yīng)的羧酸和醇中形成。一般來說，可通過常規(guī)的合成技術(shù)來形成酯。(參見，如March高等有機(jī)化學(xué)，第3版，1157頁(John Wiley & Sons，美國紐約1985)和其中引用的對比文獻(xiàn)，和Mark等，Encyclopedia of Chemical Technology，(1980)John Wiley & Sons，美國紐約)。酯的醇組分一般包括(i)可含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵、含有或不含有支鏈碳的C2-C12脂族醇；或(ii)C7-C12芳族或雜芳族醇。本發(fā)明也可使用本文揭示的酯和其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽的組分。
“藥學(xué)上可接受的酰胺”指水解酰胺鍵時(shí)保留了羧酸或胺的生物效應(yīng)和性質(zhì)的酰胺，它們不是生物學(xué)上不利的。對于藥學(xué)上可接受的酰胺作為前體藥物的描述可參見，Bundgaard，H.編輯，同上。這些酰胺典型地從相應(yīng)的羧酸和胺中形成。一般來說，通過常規(guī)的合成技術(shù)可形成酰胺。參見，如March等，高等有機(jī)化學(xué)，第3版，1152頁(John Wiley & Sons，美國紐約1985)，和Mark等，Encyclopedia of Chemical Technology(John Wiley & Sons，美國紐約1980)。本發(fā)明也預(yù)期可使用本文揭示的酰胺的組分和其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽。
發(fā)明詳述(1)概論本發(fā)明指導(dǎo)具有下式的優(yōu)選的(-)(3-三鹵代甲基苯氧基)(4-鹵代苯基)乙酸衍生物的應(yīng)用 式I式I中，R是包括下列的官能團(tuán)(但不限于)羥基，低級芳烷氧基，如諸如芐氧基、苯乙基氧基的苯基-低級烷氧基；二低級烷氨基-低級烷氧基和其無毒的藥學(xué)上可接受的酸加成鹽，如二甲基氨基乙氧基，二乙基氨基乙氧基鹽酸鹽，二乙基氨基乙氧基檸檬酸鹽，二乙基氨基丙氧基；低級烷酰氨基低級烷氧基，如甲酰氨基乙氧基，乙酰氨基乙氧基或乙酰氨基丙氧基；苯甲酰氨基-低級烷氧基，如苯甲酰氨基乙氧基或苯甲酰氨基丙氧基；脲基-低級烷氧基，如脲基乙氧基或1-甲基-2-脲基乙氧基；N’-低級烷基-脲基-低級烷氧基，如R1NH-CONH-CnH2n-O-，其中R1代表低級烷基，n是1到約5的整數(shù)，如N’-乙基-脲基乙氧基或N’-乙基-脲基丙氧基；氨基甲?；?低級烷氧基，如氨基甲?；籽趸虬被柞；已趸?；鹵代苯氧基取代的低級烷氧基，如，2-(4-氯苯氧基)乙氧基或2-(4-氯苯氧基)-2-甲基丙氧基；氨基甲酰基取代的苯氧基，如2-氨基甲?；窖趸?；羧基-低級烷氨基和其無毒的藥學(xué)上可接受的胺加成鹽，如羧甲基氨基環(huán)己基胺鹽或羧乙基胺；N，N-二-低級烷氨基-低級烷氨基和其無毒的藥學(xué)上可接受的酸溶液鹽，如N，N-二甲基氨基乙基氨基鹽酸鹽，N，N-二甲基氨基乙胺基檸檬酸鹽或N，N-二甲基氨基丙基氨基檸檬酸鹽；鹵代低級烷氨基，如，2-氯乙基氨基或4-氯丁基氨基；羥基取代的低級烷氨基，如2-羥乙基氨基或3-羥丙基氨基；低級烷?；趸〈牡图壨榘被?，乙酰氧基乙氨基或乙酰氧基丙基氨基；脲基；低級烷氧基羰基氨基，如，甲氧基羰基氨基(即-NHCOOCH3)或乙氧基羰基氨基(即CHCOOC2H5)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，這樣選擇R使它是可水解部分，如酯或酰胺，在酯鍵或酰胺鍵水解時(shí)，化合物是生物學(xué)上活性的，如藥學(xué)上可接受的酯或酰胺作為前體藥物。式I中的X是鹵素，如氯、溴、氟或碘。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及使用下式的(-)(3-三鹵代甲基苯氧基)(4-鹵代苯基)乙酸衍生物 式II在式II中，R2是包括下列，但不限于下列的官能團(tuán)氫，苯基-低級烷基，如芐基；低級烷酰氨基-低級烷基，如乙酰氨基乙基；或苯甲酰氨基-低級烷基，如苯甲酰氨基乙基。式II中的X是鹵素，如，氯、溴、氟或碘。
在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及使用下式化合物 式III式III化合物稱為“(-)2-乙酰氨基乙基4-氯苯基-(3-三氟甲基苯氧基)乙酸酯”(也稱為“(-)鹵芬酯”)。
通過抑制細(xì)胞色素P450酶介導(dǎo)藥物代謝的改變對促使病人陷入明顯不利作用有極高的效力。這類效應(yīng)以前在用消旋的鹵芬酯治療的病人中很注意。在本研究中，消旋鹵芬酸(halofenic acid)被發(fā)現(xiàn)能抑制細(xì)胞色素P450 2C9(在特定藥物的代謝中起重要作用的酶)。這會(huì)導(dǎo)致藥物與抗凝劑、抗炎劑和被該酶代謝的其它藥物的相互干擾的嚴(yán)重問題。但是，很令人驚奇的是，在不能抑制細(xì)胞色素P450 2C9的鹵芬酸(halofenic acid)對映異構(gòu)體之間可觀察到明顯差異，(-)對映異構(gòu)體的活性低約20倍，而(+)對映異構(gòu)體相當(dāng)有效(參見實(shí)施例7)。因此，使用式I、式II或式III化合物的(-)對映異構(gòu)體可避免抑制此酶，及以前從消旋鹵芬酯中觀察到的對藥物代謝的不良效應(yīng)。
本發(fā)明涵蓋了調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物耐胰島素的方法，該方法包括對哺乳動(dòng)物給予治療有效量的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，化合物具有式II結(jié)構(gòu)。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，化合物具有式III結(jié)構(gòu)。出乎意料的是，該方法通過提供不足以引起與抑制細(xì)胞色素P450 2C9有關(guān)的不良效應(yīng)量的式I、II或III化合物的(-)立體異構(gòu)體來避免與給予鹵芬酯消旋混合物有關(guān)的不良效應(yīng)。
本發(fā)明也涵蓋了調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物2型糖尿病的方法，該方法包括對哺乳動(dòng)物給予治療有效量的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，化合物具有式II結(jié)構(gòu)。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，化合物具有式III結(jié)構(gòu)。出乎意料的是，該方法通過提供不足以引起與抑制細(xì)胞色素P450 2C9有關(guān)的不良效應(yīng)量的式I、II或III化合物的(-)立體異構(gòu)體來避免與給予鹵芬酯消旋混合物有關(guān)的不良效應(yīng)。
本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋了調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物高脂血癥的方法，該方法包括對哺乳動(dòng)物給予治療有效量的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，化合物具有式II結(jié)構(gòu)。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，化合物具有式III結(jié)構(gòu)。出乎意料的是，該方法通過提供不足以引起與抑制細(xì)胞色素P450 2C9有關(guān)的不良效應(yīng)量的式I、II或III化合物的(-)立體異構(gòu)體來避免與給予鹵芬酯消旋混合物有關(guān)的不良效應(yīng)。
鹵芬酯消旋化合物(即兩種對映異構(gòu)體的1∶1消旋混合物)具有抗高脂血活性，與用于治療該疾病常用的特定其它藥物合用時(shí)可降低涉及糖尿病的高血糖。但是，該消旋混合物預(yù)期的效應(yīng)，會(huì)引起不良效應(yīng)。術(shù)語“不良效應(yīng)”包括，但不限于，惡心、胃腸道潰瘍和胃腸道滲血。業(yè)已報(bào)道的與消旋鹵芬酯有關(guān)的其它副作用包括藥物-藥物相互干擾的潛在問題，特別包括控制CoumadinTM的抗凝血作用的難度。用本發(fā)明基本純的化合物可得到更清楚的劑量-效應(yīng)相關(guān)關(guān)系，消除不良效應(yīng)，因此改進(jìn)了治療指數(shù)。業(yè)已發(fā)現(xiàn)，給予鹵芬酯(-)對映異構(gòu)體而不是消旋的鹵芬酯更為有利。
本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋了調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物高尿酸血癥的方法，該方法包括對哺乳動(dòng)物給予治療有效量的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，化合物具有式II結(jié)構(gòu)。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，化合物具有式III結(jié)構(gòu)。出乎意料的是，該方法通過提供不足以引起與抑制細(xì)胞色素P4502C9有關(guān)的不良效應(yīng)量的式I、II或III化合物的(-)立體異構(gòu)體來避免與給予鹵芬酯消旋混合物有關(guān)的不良效應(yīng)。
(2)式I、式II和式III的(-)對映異構(gòu)體許多有機(jī)化合物具有光學(xué)活性形式，即它們能旋轉(zhuǎn)平面-偏振光平面。在描述光學(xué)活性化合物時(shí)，前綴R和S可用來表示關(guān)于分子的手性中心的絕對構(gòu)型。前綴“d”和“l(fā)”或(+)和(-)用來表示化合物旋轉(zhuǎn)平面-偏振光的跡象，(-)或l表示化合物是“左旋的”，(+)或d表示化合物是右旋的。對于絕對立體化學(xué)命名法和對映異構(gòu)體的旋轉(zhuǎn)之間沒有相關(guān)性。對于給定的化學(xué)結(jié)構(gòu)，這些化合物(稱為“立體異構(gòu)體”)除了它們是另一個(gè)的鏡像外其它是相同的。特定的立體異構(gòu)體也可指“對映異構(gòu)體”，這類異構(gòu)體的混合物常被稱為“對映異構(gòu)體”或“外消旋”混合物。參見，如Streitwiesser，A.& Heathcock，C.H.，有機(jī)化學(xué)的介紹，第2版，第7章(MacMillan Publishing Co.，美國1981)。
可用美國專利3,517,050揭示的方法化學(xué)合成鹵芬酯(3-三鹵甲基苯氧基)(4-鹵苯基)乙酸衍生物的消旋混合物，在此并入本文供參考。本發(fā)明的合成在上述專利的實(shí)施例中作了進(jìn)一步闡述。用本技術(shù)領(lǐng)域已知的常規(guī)方法來拆分對映異構(gòu)體的混合混合物可得到單個(gè)對映異構(gòu)體。參見，如，Jaques，J.等，ENANTIOMERS，RACEMATES，AND RESOLUTIONS，John Wiley和Sons，美國紐約(1981)。也可使用其它本技術(shù)領(lǐng)域已知的拆分的標(biāo)準(zhǔn)方法包括，但不限于，簡單的結(jié)晶和色譜拆分(參見，如STEREOCHEMISTRY OF CARBON COMPOUNDS(1962)E.L.Eliel，McGraw Hill；Lochmuller，J.Chromatography(1975)113，283-302)。另外，本發(fā)明化合物，即光學(xué)純異構(gòu)體可通過酶生物催化拆分從消旋混合物中制備。以前已經(jīng)闡述了酶生物催化拆分(參見，如美國專利5,057,427和5,077,217，在此并入本文供參考)。其它得到對映異構(gòu)體的方法包括立體特異性合成(參見，如Li，A.J.等，Pharm.Sci.(1997)861073-1077)。
本文使用的術(shù)語“基本上沒有其(+)立體異構(gòu)體”表示組合物相對于(+)異構(gòu)體來說，含有基本上大部分鹵芬酯的(-)異構(gòu)體。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本文的術(shù)語“基本上沒有其(+)立體異構(gòu)體”表示組分中有至少90％重量的(-)異構(gòu)體和10％重量或更少的(+)異構(gòu)體。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本文的術(shù)語“基本上沒有其(+)立體異構(gòu)體”表示組分含有至少99％重量(-)異構(gòu)體和1％重量或更少的(+)異構(gòu)體。在最好的實(shí)施方案中，術(shù)語“基本上沒有其(+)立體異構(gòu)體”表示組分中含有大于99％重量(-)異構(gòu)體。這些百分?jǐn)?shù)基于組分中鹵芬酯的總量。術(shù)語“鹵芬酯的基本上光學(xué)純(l)異構(gòu)體”、“基本上光學(xué)純(l)鹵芬酯”、“鹵芬酯的光學(xué)純(l)異構(gòu)體”和“光學(xué)純(l)鹵芬酯”都指(-)異構(gòu)體，由上述含量所涵蓋。另外，術(shù)語“鹵芬酯的基本上光學(xué)純(d)異構(gòu)體”、“基本上光學(xué)純(d)鹵芬酯”、“鹵芬酯的光學(xué)純(d)異構(gòu)體”和“光學(xué)純(d)鹵芬酯”都指(+)異構(gòu)體，由上述含量所涵蓋。
術(shù)語“對映異構(gòu)體過量”或“ee”涉及測量相同顯現(xiàn)中的術(shù)語“光學(xué)純度”。ee值為0到100,0是消旋的，100是純的、單個(gè)對映異構(gòu)體。98％光學(xué)純的化合物可描述為96％ee。
(3)與其它活性劑的組合治療可用下述的相同方式配制和給予組合物?！爸苿北欢x為含有賦予化合物或藥物一種相對穩(wěn)定、需要和有用的形式的各種賦形劑和關(guān)鍵組分的混合物的藥物制劑。對于本發(fā)明，“制劑”包含在術(shù)語“組合物”的意思中。根據(jù)所需的治療目的，本發(fā)明的組合物可有效地單獨(dú)使用或與一種或多種另外的活性劑一起使用。(參見，如，Turner，N.等，Prog.Drug Res.(1998)5133-94；Haffner，S.Diabetes Care(1998)21160-178；和DeFronzo，R.等(編輯)，Diabetes Reviews(1997)第5卷第4號(hào))。許多研究顯示了口服藥劑組合治療的好處(參見，如Mahler，R.，J.Clin.Endocrinol.Metab.(1999)841165-71；英國預(yù)期糖尿病研究組UKPDS 28，DiabetesCare(1998)2187-92；Bardin，C.W.(編輯)，CURRENT THERAPY INENDOCRINOLOGY AND METABOLISM，第6版(Mosby-Year Book，Inc.，美國St.Louis MO 1997)；Chiasson J.等，Ann.Intern.Med.(1994)121928-935；Coniff，R.等，Clin.Ther.(1997)1916-26；Coniff，R.等，Am.J.Med.(1995)98443-451；和Iwamoto，Y.等，Diabet.Med.(1996)13 365-370；Kwiterovich，P.Am.J.Cardiol(1998)82(12A)3U-17U)。這些研究表明通過向治療方案中加入第二種藥劑可進(jìn)一步改善糖尿病和高脂血癥的調(diào)節(jié)。組合治療包括給予含有通式I(或式II或式III)結(jié)構(gòu)的化合物和一種或多種其它的活性劑的單劑藥劑，以及給予式I(或式II或式III)化合物和其它活性藥劑，每個(gè)藥劑都在其分開的藥物制劑里。例如，式I化合物和HMG-CoA還原酶抑制劑可在單個(gè)口服制劑組合物，如片劑或膠囊劑里給予人體，或每個(gè)藥劑可在其分開的口服制劑里給予。使用分開的制劑時(shí)，可基本上同時(shí)(即同時(shí))或分開的時(shí)間里(即先后)給予式I化合物和一種或多種另外的活性藥劑。組合治療被理解包括所有這些方案。
調(diào)節(jié)動(dòng)脈硬化(預(yù)防與動(dòng)脈硬化有關(guān)的癥狀或并發(fā)癥)的組合治療的例子中，式I化合物與一種或多種下列活性劑合用抗高脂血癥藥劑；升血漿HDL藥劑；抗高膽固醇血癥藥劑，如膽固醇生物合成抑制劑，羥甲基戊二酰(HMG)CoA還原酶抑制劑(也稱為他汀類，如洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟代他汀(fluvastatin)和阿托他汀(atorvastatin))，HMG-CoA合成酶抑制劑，角鯊烯環(huán)氧化酶抑制劑，或角鯊烯合成酶抑制劑(也稱為角鯊烯合成酶抑制劑)；?；?輔酶A膽固醇酰基轉(zhuǎn)化酶(ACAT)抑制劑，如melinamide；普羅布考；煙酸和其鹽和煙酰胺；膽固醇吸收抑制劑，如β-谷甾醇；膽酸螯合劑陽離子交換樹脂，如消膽胺、考來替泊或交聯(lián)右旋糖苷的二烷基氨基烷基衍生物；和LDL(低密度脂蛋白)受體引發(fā)劑；fibrates，如氯貝特、苯扎貝特、非諾貝特和吉非貝齊；維生素B6(也稱為吡多辛)和其藥學(xué)上可接受的鹽，如HCl鹽；維生素B12(也稱為氰鈷胺)；維生素B3(也稱為煙酸和煙酰胺，同上)；抗氧化維生素，如維生素C和E和β胡蘿卜素；β-阻斷劑；血管緊張素II拮抗劑；血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑；和血小般積聚抑制劑，如纖維蛋白原受體拮抗劑(即糖蛋白IIb/IIIa纖維蛋白原受體拮抗劑)和阿司匹林。如上所述，式I化合物可與一種以上的另外活性劑合并給藥，如式I化合物與HMG-CoA還原酶抑制劑(如；洛伐他汀、辛伐他汀(simvastatin)和普伐他汀)和阿司匹林組合，或式I化合物與HMG-CoA還原酶抑制劑和β阻斷劑合用。
另一個(gè)組合治療的例子是治療肥胖或與肥胖相關(guān)的疾病中，其中式I化合物可與下列藥劑組合，如苯丙醇胺、芬特明、安非拉酮、馬吲哚；芬氟拉明、右芬氟拉明、phentiramine、β3腎上腺素受體激動(dòng)劑；西布曲明、胃腸道脂肪酶抑制劑(如奧利司他)和leptins?？膳c式I化合物有效組合使用的其它用于治療肥胖或與肥胖相關(guān)疾病的藥物是，如，神經(jīng)肽Y、腸抑制素、縮膽囊肽、鈴蟾肽、糊精、組胺H3受體、多巴胺D2受體、促黑細(xì)胞激素、促腎上腺素皮質(zhì)激素釋放因子、galanin和γ氨基丁酸(GABA)。
在調(diào)節(jié)糖尿病(或治療糖尿病和其相關(guān)的癥狀、并發(fā)癥和失調(diào))中可見組合治療的另一個(gè)例子，其中式I化合物可有效地與下列藥物組合使用，如磺酰脲(如氯磺丙脲、甲磺丁脲、醋磺己脲、妥拉磺脲、格列胺脲、格列齊特、glynase、格列美脲和格列吡嗪)，雙胍(如二甲雙胍)，噻唑烷二酮(如環(huán)格列酮、吡格列酮(pioglitazone)、曲格列酮(troglitazone)和rosiglitazone)；去氫表雄酮(也稱為DHEA或其配位的硫酸酯，DHEA-SO4)；抗糖皮質(zhì)激素；TNFα抑制劑；α-葡萄糖苷酶抑制劑(如阿卡糖、米格列醇和伏格列波糖(voglibose))，普藍(lán)林肽(pramlintide，人激素糊精的合成類似物)，其它的胰島素促分泌素(如瑞格列奈(rapaglinide)、格列喹酮和那替列奈(nateglinide))，胰島素，以及上述討論的用于治療動(dòng)脈硬化的活性劑。
調(diào)節(jié)高脂血癥(治療高脂血癥和其相關(guān)的并發(fā)癥)中組合治療的進(jìn)一步例子中，式I化合物可與下列藥物有效地組合使用，例如，他汀類(如氟代他汀、洛伐他汀、普伐他汀或辛伐他汀)，膽酸結(jié)合的樹脂(如降脂2號(hào)樹脂或降脂1號(hào)樹脂)，煙酸，丙丁酚，β胡蘿卜素，維生素E或維生素C。
根據(jù)本發(fā)明，治療有效量的式I(或式II或式III)化合物可用來制備用于治療糖尿病、治療高脂血癥、治療高尿酸血癥、治療肥胖、降低甘油三酯水平、降低膽固醇水平、升高高密度脂蛋白血漿水平和用于治療、預(yù)防或減少形成動(dòng)脈硬化危險(xiǎn)的藥物組合物。
另外，有效量的式I(或式II或式III)化合物和治療有效量的一種或多種選自下組的活性劑抗高脂血癥劑；升血漿HDL的藥劑；抗高膽固醇藥劑，如膽固醇生物合成抑制劑，例如，HMG-CoA還原酶抑制劑，HMG-CoA合成酶抑制劑，角鯊烯環(huán)氧化酶抑制劑，或角鯊烯合成酶抑制劑(也稱為角鯊烯合成酶抑制劑)；?；?輔酶A膽固醇酰基轉(zhuǎn)化酶抑制劑；普羅布考；煙酸和其鹽；煙酰胺；膽固醇吸收抑制劑；膽酸螯合劑陽離子交換樹脂；低密度脂蛋白受體引發(fā)劑；氯貝特，非諾貝特和吉非貝齊；維生素B6和其藥學(xué)上可接受的鹽；維生素B12；抗氧化維生素；β-阻斷劑；血管緊張素II拮抗劑；血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑；血小般積聚抑制劑；纖維蛋白原受體拮抗劑；阿司匹林；phentiramines，β3腎上腺素能受體激動(dòng)劑；磺酰脲類，雙胍，α-葡萄糖苷酶抑制劑，其它胰島素促分泌素和胰島素，可一起用于制備用于上述治療中的藥物組合物。
(4)藥物制劑和給藥方法在本發(fā)明方法中，式I、式II和式III化合物可以其藥學(xué)上可接受的鹽或其可水解的前體形式單獨(dú)，或以治療有效量的化合物與合適的載體或賦形劑混合的藥物組合物形式釋放或給予哺乳動(dòng)物，如病人或?qū)ο?。“治療有效劑量”、“治療有效量”或可互換的是“藥學(xué)上可接受的劑量”或“藥學(xué)上可接受的量”表示存在了足量的基本上沒有(+)立體異構(gòu)體的本發(fā)明化合物或組合物，例如基本上沒有(+)立體異構(gòu)體的本發(fā)明化合物和藥學(xué)上可接受的載體的組合，以達(dá)到所需的結(jié)果，如，減輕2型糖尿病的癥狀或并發(fā)癥。
用于本發(fā)明方法的式I、式II和式III化合物可摻入各種制劑供治療用。更具體的是，式I(或式II或式III)化合物可通過與合適的藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑組合配制成藥物組合物，可配制成固體、半固體、液體或氣體形式的制劑，如片劑、膠囊劑、丸劑、粉末劑、顆粒劑、糖衣劑、凝膠劑、漿劑、軟膏劑、溶液劑、栓劑、注射劑、吸入劑和氣霧劑。這樣，可用各種方式，包括口服、頰部、直腸、非胃腸道、腹腔內(nèi)、皮內(nèi)、透皮、器官內(nèi)給藥來給予化合物。此外，化合物可以貯庫或緩釋制劑來局部給藥而不是全身給藥。另外，化合物可以脂質(zhì)體形式給藥。
另外，式I、式II或式III化合物可用常規(guī)的賦形劑、稀釋劑或載體配制，并壓制成片劑，或配制成酏劑或溶液劑供常規(guī)口服，或通過肌注或靜注途徑給藥?；衔锟赏钙そo藥，也可配制成緩釋劑型等。
式I、式II或式III可單獨(dú)給予，彼此組合給予，或它們與其它已知化合物(如上所討論的)組合使用。在藥物劑型中，化合物可以它們藥學(xué)上可接受的鹽形式給予。它們可含有可水解的部分。它們也可單獨(dú)使用，或與其它藥物活性化合物組合使用。
用于本發(fā)明的合適制劑可參見Remington’s PharmaceuticalSciences(Mack Publishing Company(1985)美國賓夕法尼亞，費(fèi)城，第17版)，在此并入本文供參考。此外，對于藥物輸遞釋放的方法可參見Langer，Science(1990)2491527-1533，在此并入本文供參考。本文揭示的藥物組合物可用本技術(shù)領(lǐng)域公知的方法制備，即通過常規(guī)的混合，溶解，制粒，包糖衣，捻成細(xì)粉，乳化，封入膠囊，包陷或凍干方法來制備。下列方法和賦形劑僅供例舉，并非用來限定。
對于注射，可通過將化合物溶解、懸浮或乳化入含水溶劑或非水溶劑，如植物油或其它相似的油、合成脂肪酸甘油酯、高級脂肪酸酯或丙二醇來配制化合物，需要時(shí)可加入常規(guī)的添加劑，如增溶劑、等滲劑、懸浮劑、乳化劑、穩(wěn)定劑和防腐劑。優(yōu)選的是，本發(fā)明化合物可配料在水溶液中，優(yōu)選的是在生理學(xué)上相容的緩沖液，如Hanks溶液，Ringer溶液或生理鹽水緩沖液中配制。對于經(jīng)粘膜給藥，制劑中使用適合于穿越屏障的滲透劑。這類滲透劑是本技術(shù)領(lǐng)域已知的。
對于口服，式I、式II或式III化合物可通過與本技術(shù)領(lǐng)域公知的藥學(xué)上可接受的載體混合物來容易地配制。這類載體能使化合物配制成片劑、丸劑、糖衣劑、膠囊劑、乳劑、親脂和親水懸浮劑、液體、凝膠劑、糖漿劑、漿劑、懸浮液等供被治療病人口服攝入。通過使化合物與固體賦形劑混合，任選地研磨所得的混合物，并在需要時(shí)加入合適的輔劑后加工顆?；旌衔?，得到片劑或糖衣片芯，從而得到口服的藥物制劑。合適的賦形劑是，諸如糖(包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇)的填料；纖維素制品，如玉米淀粉、小麥淀粉、稻淀粉、土豆淀粉、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)。需要時(shí)，可加入諸如交聯(lián)聚乙烯基吡咯烷酮、瓊脂或藻酸或其鹽(如藻酸鈉)的崩解劑。
糖衣片芯需要合適的包衣。為了包衣，可使用濃縮糖溶液，它任選地含有阿拉伯膠、滑石粉、聚乙烯基吡咯烷酮、卡波醇膠(carbopol gel)、聚乙二醇和/或二氧化鈦、漆溶液和合適的有機(jī)溶劑或溶劑混合物。可向片劑或糖衣包衣中加入著色劑或色素來識(shí)別或表征不同活性化合物的劑型。
可口服的藥物制劑包括由明膠制成的壓入-固定的膠囊，以及由明膠和增塑劑(如甘油或山梨醇)制成的軟密封膠囊。壓入-固定膠囊可含有活性成分和諸如乳糖的填料、諸如淀粉的粘合劑和/或諸如滑石粉或硬脂酸鎂的潤滑劑，以及任選的穩(wěn)定劑的混合物。在軟膠囊中，活性化合物可溶于或懸浮在合適的液體，如脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇中。另外，可加入穩(wěn)定劑。所有口服制劑應(yīng)當(dāng)是適合這樣給藥的劑型。
對于頰部給藥，組合物可為常規(guī)方式配制的片劑或錠劑。
對于吸入給藥，本發(fā)明使用的化合物以加壓包裝或噴嘴，使用合適的推進(jìn)劑，如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷，二氧化碳或其它合適的氣體的氣霧劑噴霧形式，或以沒有推進(jìn)劑、干燥粉末的吸入劑形式常規(guī)地輸遞。對于加壓的氣霧劑，通過對釋放的劑量提供計(jì)量的閥來決定劑量單位。用于吸入劑或吹入器的明膠的膠囊和藥筒可配制成含有化合物和合適粉末基底(如乳糖或淀粉)的粉末混合物。
化合物可配制成通過注射(如大劑量注射或連續(xù)輸注)給藥的非胃腸道給藥的制劑。注射制劑可以單位劑量型(如在安瓿或多劑量容器里)帶有加入的防腐劑形式存在。組合物可為在油或含水賦形劑里的懸浮劑、溶液或乳劑形式，可含有諸如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑的配制劑。
非胃腸道給藥的藥物制劑包括水溶形式的活性化合物的水溶液。另外，活性化合物的懸浮液可制備成合適的油性注射懸浮液。合適的親脂溶劑或賦形劑包括脂肪油，如蓖麻油，或合成的脂肪酸酯，如油酸乙酯或甘油三酯或脂質(zhì)體。水性的注射懸浮劑可含有增加懸浮液粘度的物質(zhì)，如羧甲基纖維素、山梨醇或右旋糖。任選的是，懸浮劑也可含有合適的穩(wěn)定劑或增加化合物溶解度以制備高濃度溶液的試劑?；蛘撸钚越M分可為使用前用合適賦形劑，如無菌、無熱原的水構(gòu)建的粉末形式。
化合物也可配制成直腸用組合物，如栓劑或保持灌腸劑，它們可含有如常規(guī)栓劑基底(可可脂、碳蠟(carbowaxes)，聚乙二醇或其它甘油酯)，所有這些的物質(zhì)在體溫下熔融，在室溫下固化。
除了前述的制劑外，化合物也可配制成貯庫制劑。這類長效制劑可通過植入給藥(例如皮下植入或肌內(nèi)植入)或通過肌注給藥。這樣，可用合適的聚合物或疏水材料(如在可接受油中的乳劑)或離子交換樹脂，或幾乎不溶的衍生物(如幾乎不溶的鹽)來配制化合物。
或者，可用疏水藥物化合物的其它輸遞系統(tǒng)。脂質(zhì)體和乳劑是疏水藥物中輸遞賦形劑的共知例子。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，可用長時(shí)間循環(huán)(即隱秘的)脂質(zhì)體。這類脂質(zhì)體在Woodle等，美國專利5,013,556中作了一般的揭示，在此并入本文供參考。本發(fā)明化合物也可通過控釋方式和/或輸遞裝置(如美國專利3,845,770；3,916,899；3,536,809；3,598,123；和4,008,719中揭示，在此并入本文供參考)。
也可使用某些有機(jī)溶劑，如二甲亞砜(DMSO)，但毒性較大。另外，可用緩釋系統(tǒng)，如含有治療劑的固體疏水聚合物的半滲透基質(zhì)來輸遞化合物。本技術(shù)領(lǐng)域業(yè)已建立了和已知了各種緩釋物質(zhì)。緩釋膠囊根據(jù)其化學(xué)性質(zhì)可在幾小時(shí)直至100天里釋放化合物。
藥物組合物也包含合適的固體或凝膠相載體或賦形劑。這類載體或賦形劑的例子包括，但不限于，碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖、淀粉、纖維素衍生物、明膠和諸如乙二醇的聚合物。
適用于本發(fā)明的藥物組合物包括其中包含治療有效量活性組分的組合物。組合物的給藥量當(dāng)然會(huì)根據(jù)被治療的對象、對象的體重、疾病的嚴(yán)重程度、給藥方式和醫(yī)生的判定而定。該技術(shù)領(lǐng)域人員，根據(jù)本文提供的內(nèi)容，能很好地決定有效量。
對于用于本發(fā)明方法的任何化合物，可從細(xì)胞培養(yǎng)分析或動(dòng)物模式中建立治療有效劑量。
此外，本文揭示的化合物的毒性和治療效應(yīng)可通過標(biāo)準(zhǔn)的藥物方法在細(xì)胞培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中，通過測量LD50(50％群體的致死劑量)和ED50(50％群體的治療有效的劑量)來測定。毒性和治療效應(yīng)的劑量比是治療指數(shù)，可表示為LD50和ED50的比。優(yōu)選的是治療指數(shù)高的化合物。從這些細(xì)胞培養(yǎng)分析和動(dòng)物研究中得到的數(shù)據(jù)可用來配制用于人體無毒的劑量范圍。這類化合物的劑量在于循環(huán)系統(tǒng)中的濃度范圍包括了ED50，幾乎沒有或完全沒有毒性。劑量可根據(jù)所用的劑型和給藥途徑在該范圍里改變。由醫(yī)生根據(jù)病人的病情來選擇確切的制劑、給藥途徑和劑量。(參見，如Fingl等，1975 In治療學(xué)的藥理基礎(chǔ)，第1章)。
于載體材料組成形成單劑型的活性化合物的用量可根據(jù)被治療的疾病、哺乳動(dòng)物的種類和特定的給藥模式而改變。但是，作為一個(gè)普遍的指導(dǎo)，本發(fā)明化合物合適的單位劑量優(yōu)選地含有100毫克到約3000毫克活性化合物。優(yōu)選的單位劑量是500毫克到約1500毫克。更優(yōu)選的單位劑量是500毫克到約1000毫克。種類單位劑量可一天給予多次，如每天給予2、3、4、5或6次，但優(yōu)選的是每天1次或2次，至約70kg成年人的每天總劑量為0.1至約250mg/kg體重/給藥。優(yōu)選的劑量是5至約250mg/kg對象體重/給藥，這類治療可持續(xù)數(shù)周或數(shù)月，有時(shí)可持續(xù)數(shù)年。但是，應(yīng)當(dāng)明白，任何特定病人的特定劑量水平應(yīng)根據(jù)各種因素(該領(lǐng)域公知的)，包括所用特定化合物的活性；被治療個(gè)體的年齡、體重、一般健康狀況、性別和飲食；給藥時(shí)間和途徑；排泄速率；前面已經(jīng)給予的其它藥物；和被治療疾病的嚴(yán)重程度而定。
典型的劑量為10到約1500毫克片劑每天一片，或每天多次，或每天多次，或每天攝入一個(gè)一次釋放的膠囊或片劑(含有相對較高比例的活性組分)。一次釋放的效應(yīng)可由于在不同pH下溶解的膠囊材料，在滲透壓下慢慢釋放的膠囊，或用其它已知的控釋方式來得到。
在一些病理中必須使用這些范圍外的劑量的情況對本技術(shù)領(lǐng)域人員來說是很明顯的。此外，注意到臨床醫(yī)生或治療醫(yī)生會(huì)結(jié)合單個(gè)病人的反應(yīng)了解如何和何時(shí)介入、調(diào)節(jié)或終止治療。
(5)保護(hù)基團(tuán)具有式I和II結(jié)構(gòu)的某些化合物需要使用保護(hù)基團(tuán)，從而能成功地得到所需的結(jié)構(gòu)。保護(hù)基團(tuán)可參照選自Greene，T.W.等，有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)，John Wiley & Sons，Inc.，1991中揭示的保護(hù)基團(tuán)。阻塞基團(tuán)是易于除去的，即它們能除去而不會(huì)使分子的剩余部分發(fā)生斷裂或其它中斷。這類過程包括化學(xué)和酶水解，在溫和的條件下用化學(xué)還原劑或氧化劑處理，用氟離子處理，用過渡金屬催化劑和親核劑處理，和催化氫化。
合適的羥基保護(hù)基的離子是三甲基甲硅烷基，三乙基甲硅烷基，鄰-硝基芐基氧基羰基，對-硝基芐基氧基羰基，叔丁基二苯基甲硅烷基，叔丁基二甲基甲硅烷基，芐基氧基羰基，叔丁基氧基羰基，2，2，2-三氯乙基氧基羰基和烯丙基氧基羰基。合適羧基保護(hù)基的例子是二苯甲基、鄰-硝基芐基、對-硝基芐基、2-萘基甲基、烯丙基、2-氯烯丙基、芐基、2，2，2-三氯乙基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基聯(lián)苯基甲硅烷基、2-(三甲基甲硅烷基)乙基、苯酰基、對-甲氧基芐基、丙酮基、對-甲氧基苯基、4-吡啶基甲基和叔丁基。
(6)方法用于制備本發(fā)明的方法如流程1和2所示(在實(shí)施例中作進(jìn)一步描述)流程1
流程2 根據(jù)流程1，取代苯基乙腈被轉(zhuǎn)化為取代苯基乙酸。取代苯基乙酸被轉(zhuǎn)化為活化的酸衍生物(如，酰氯)，然后在α-碳處鹵代，用醇酯化。用取代苯酚(如，3-三氟甲基苯酚)處理鹵代酯，得到芳基醚，將其水解形成羧酸衍生物。衍生的酸被轉(zhuǎn)化為活性酸衍生物，接著以親核劑(如，N-乙酰基乙醇胺)處理得到所需的產(chǎn)物。
根據(jù)流程2.取代的苯基2酸轉(zhuǎn)化為活化的酸衍生物(如，酰氯)，然后在α-碳處鹵代，分子的活化酸部分與親核劑(如，N-2?；掖及?反應(yīng)得到保護(hù)的酸。用取代苯酚(如，3-三氟甲基苯酚)處理鹵代、保護(hù)的酸得到所需的產(chǎn)物。
通過常規(guī)方法(如上和實(shí)施例所討論)拆分立體異構(gòu)體混合物中，使用單個(gè)對映異構(gòu)體形式的試劑或催化劑得到本發(fā)明化合物的立體異構(gòu)體。一些優(yōu)選的方法包括微生物拆分，用手性酸或手性堿形成鹽和使用手性支持物的層析拆分出非對映異構(gòu)體。
(7)試劑盒另外，本發(fā)明提供了具有式I、式II或式III化合物口服或注射劑型的單位劑型的試劑盒。除了包含單位劑型的容器外，還有描述藥物在緩解與2型糖尿病有關(guān)的癥狀和/或并發(fā)癥和緩解高脂血癥和高尿酸血癥中的應(yīng)用和益處的資料性包裝說明書。優(yōu)選的化合物和單位劑型如上所述。
實(shí)施例用上述流程1和下列實(shí)施例可容易地制備本發(fā)明的式I、式II或式III化合物。
實(shí)施例1該實(shí)施例涉及溴-(4-氯苯基)乙酸甲酯的制備 流程1中的起始化合物，即4-氯苯基乙酸可容易地購得(如購自Akdrich和Fluka)。
裝有磁攪拌器、反應(yīng)器溫度控制器和加料漏斗的5升Morton反應(yīng)器通過氣體洗滌器開口，并加入對-氯苯基乙酸(720克，4.2摩爾)和SOCl2(390毫升，630克，5.3摩爾)。攪拌反應(yīng)物，加熱維持1小時(shí)，在20分鐘內(nèi)加入溴(220毫升，670克，5.3摩爾)在55±5℃下攪拌16小時(shí)。將溫度升到80℃達(dá)7小時(shí)，然后在冰水浴中冷卻到9℃。然后小心加入甲醇(2.0升，1.6kg，49.4摩爾)。汽提溶劑，得到2個(gè)液體重1.28kg。它們?nèi)苡?.84升水和2.1升醚的混合物中，分離。有機(jī)相用0.78升25％(w∶w)NaCl水溶液洗滌一次，用0.13kgMgSO4干燥。經(jīng)Whatman#1濾紙過濾，汽提溶劑，得到0.985kg橙色液體。質(zhì)子NMR顯示有80％產(chǎn)物和19％非溴代酯。HPLC顯示有82％產(chǎn)物和18％非溴代酯。在30℃的Zorbax SB-C8柱(250×4.6mm，粒徑5μ)上進(jìn)行HPLC。流動(dòng)相是60∶40(v∶v)乙腈0.1％H3PO4，1.5ml/分鐘。在210nm下檢測。注入的樣品1微升溶于乙腈，其濃度為10mg/ml。產(chǎn)物的保留時(shí)間5.0分鐘，非溴代酯是3.8分鐘。該粗制品經(jīng)真空蒸餾純化，得到96％純度的產(chǎn)物，得率84％。產(chǎn)品質(zhì)子NMR(CDCl3，300MHz)顯示位移值為3.79(s，3H)，5.32(s，1H)和7.20-7.55(m，4H)ppm。實(shí)施例2該實(shí)施例涉及4-氯苯基-(3-三氟甲基苯氧基)乙酸甲酯的制備 該步驟除了用叔丁醇鉀代替甲醇鈉以防止產(chǎn)生相應(yīng)的甲酯外，其它與美國專利3,517,050的相同步驟相似。向在氮?dú)夥障?，裝有在頭上的攪拌器、反應(yīng)器溫度檢測器和加料漏斗的5升Morton反應(yīng)器中加入溴-(4-氯苯基)-乙酸甲酯(830克，3.0摩爾)和THF(600毫升)。在冰水浴中將反應(yīng)器冷卻到14±3℃，然后加入相似冷卻的三氟甲基-間-甲酚(530克，3.3摩爾)在1.0M的叔丁醇鉀在THF中(3.1升，3.1摩爾)中的溶液。反應(yīng)放熱，將溫度升高到超過25℃，控制加料，使溫度維持在15±2℃，在氛圍溫度下攪拌2小時(shí)。在30℃的Zorbax SB-C8柱(250×4.6mm，粒徑5μ)上進(jìn)行HPLC。流動(dòng)相是60∶40(v∶v)乙腈0.1％H3PO4，1.5ml/分鐘。在210nm下檢測。注入的樣品1微升溶于乙腈，其濃度為10mg/ml。產(chǎn)物的保留時(shí)間9.6分鐘，開始酯洗脫在5.0分鐘，酚在3.0分鐘，非溴代酯在3.8分鐘。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器汽提溶劑，得到黃色漿狀物溶于4.0升水和12.0升醚中。分離混合物，有機(jī)相用1.6升5％(w∶w)NaOH水溶液，然后用1.6升水，最后用1.6升25％(w∶w)NaCl水溶液洗滌。有機(jī)相用0.32kg MgSO4干燥，經(jīng)Whatman#1濾紙過濾。汽提溶劑得到1.0kg潮濕、米色的晶體。通過溶于75℃的1.0升甲基環(huán)己烷，然后冷卻到20℃在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上重結(jié)晶。晶體通過Whatman#1濾紙過濾，用三份0.25升冷(15℃)甲基環(huán)己烷洗滌。過夜干燥濕產(chǎn)物(0.97kg)，得到0.81kg98％純產(chǎn)物(得率79％)。產(chǎn)品質(zhì)子NMR(CDCl3，300MHz)顯示位移值為3.75(s，3H)，5.69(s，1H)和7.05-7.55(m，4H)。實(shí)施例3該實(shí)施例涉及4-氯苯基-(3-三氟甲基苯氧基)乙酸的制備 向裝有磁攪拌器、反應(yīng)器溫度控制器、回流濃縮器和氮?dú)夥障碌?2升Morton反應(yīng)器中加入4-氯苯基-(3-三氟甲基苯氧基)-乙酸甲酯(810克，2.3摩爾)和無水乙醇(5.8升)。攪拌加熱到57℃以溶解固體。加入KOH(520克，9.3摩爾)在0.98升水中的溶液。使溶液回流30分鐘，通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器汽提溶劑，得到2.03kg兩個(gè)近乎無色液體的混合物。將它們?nèi)苡谒?16升)，用16克中性Norit處理，然后通過在Whatman#1濾紙上的硅藻土墊子過濾。通過加入總共2.75升3M HCl(8.25摩爾)使濾液的pH從開始的13降低到1-2。加入第一個(gè)2.30升酸后形成了極粘稠的固體，此時(shí)加入醚(7升)。分離兩層，有機(jī)層用MgSO4(230克)干燥，經(jīng)Whatman#1濾紙過濾。汽提溶劑，得到0.85kg水-白色糖漿狀物。然后通過加入甲基環(huán)己烷(800毫升)并慢慢旋轉(zhuǎn)冷卻到18℃使物質(zhì)在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上重結(jié)晶。然后溫度降低到5℃，過濾晶體，用0.10升冷(0℃)甲基環(huán)己烷分批洗滌5次，得到0.59kg濕晶體。干燥濕晶體，得到0.48kg(62％得率)產(chǎn)物，在質(zhì)子NMR中沒有可檢出的對-氯苯基乙酸。產(chǎn)品質(zhì)子NMR(CDCl3，300MHz)顯示位移值為5.65(s，1H)7.02-7.58(m，8H)和10.6(s，1H)。
實(shí)施例4該實(shí)施例涉及4-氯苯基-(3-三氟甲基苯氧基)乙酸拆分的對映異構(gòu)體的制備 向裝有頭上攪拌器的12升頂部開口的Morton反應(yīng)器中加入4-氯苯基-(3-三氟甲基苯氧基)-乙酸(350克，1.06摩爾)和異丙醇(4.0升)，加熱到65±3℃。加入(-)辛可尼定(300克，1.02摩爾)在異丙醇(2.0升)中的漿狀物，用另外的0.8升異丙醇將所有的固體淋洗進(jìn)入反應(yīng)器。使溫度從65℃下降到56℃，最后形成透明的橙色溶液，使混合物保持在55±5℃下達(dá)2小時(shí)。通過Whatman#1濾紙過濾收集細(xì)小晶體，用0.7升熱(55℃)異丙醇洗滌一次。在氛圍溫度下，在12.6-L真空烘箱里，在5升/分鐘的氮?dú)饬飨率咕w干燥16小時(shí)。干燥的固體重0.37kg，有80％(+)對映異構(gòu)體過量(ee)。用氛圍溫度下的250×4.6mmR，R-WhelkO-1柱進(jìn)行HPLC測定對映異構(gòu)體過量值。注入的樣品是20微升的2mg/ml樣品在乙醇中的溶液。柱用95∶5∶0.4己烷∶異丙醇∶乙酸以1ml/分鐘的流速洗脫。在210nm下檢測。(+)對映異構(gòu)體在7-8分鐘時(shí)流出，(-)對映異構(gòu)體在11-13分鐘時(shí)流出。母液又有第二次析出，馬上過濾，洗滌，干燥得到0.06kg鹽，它是90％ee(-)對映異構(gòu)體。相似的是，第三次、第四次和第五次析出物各重0.03kg、0.03kg和0.7kg；各自是88％、89％和92％的(-)對映異構(gòu)體過量。
粗制(+)鹽(320克)用乙醇(5.9升)和甲醇(1.2升)的混合物重結(jié)晶?；旌衔镉妙^上的攪拌器攪拌加熱至溶解，在室溫下冷卻16小時(shí)，過濾，用0.20升5∶1(v∶v)乙醇∶甲醇洗滌兩次。干燥結(jié)晶，得到0.24kg(+)對映異構(gòu)體，其ee為97％。這相當(dāng)于該異構(gòu)體的回收率為80％。拆分的鹽懸浮在醚(6.5升)和水(4.0升)的混合物中用頭上攪拌器攪拌。通過pH試條測定，用濃H2SO4(0.13升)在水(2.5升)中的溶液將pH降低到0-1。分離各相，有機(jī)相用6.5升水分批洗滌兩次。加入乙酸(1.9升)，有機(jī)相再用6.5升水洗滌一次最后分離后，加入0.1升25％(w∶w)NaCl水溶液清除任何微量的乳劑。用0.19kgMgSO4使產(chǎn)品干燥，過濾，并除去溶劑，得到0.13kg水-白色漿狀物，在冷卻時(shí)固化。這相當(dāng)于97％產(chǎn)品的回收率，其(+)對映異構(gòu)體有95％ee?！拨痢矰+5.814°(c＝0.069在甲醇中)。
合并的粗制(-)鹽(200克)用異丙醇(3.1升)重結(jié)晶。加熱混合物以溶解所有的固體并快速過濾以除去不溶的固體。室溫下攪拌冷卻混合物達(dá)16小時(shí)，過濾，洗滌，干燥得到0.16kg(-)對映異構(gòu)體，其ee為97％。這相當(dāng)于該異構(gòu)體的回收率49％。用上述對(+)酸的處理的相同方式分離酸的(-)對映異構(gòu)體。將拆分的鹽懸浮在醚和水中，用濃H2SO4降低pH，產(chǎn)品在有機(jī)相中萃取。實(shí)施例5A.制備(-)4-氯苯基-(3-三氟甲基苯氧基)乙酰氯 向帶有磁攪拌器、Claissen適配器、反應(yīng)器量熱儀和通向氣體洗滌器的回流冷凝器的2升蒸發(fā)燒瓶中加入(-)4-氯苯基-(3-三氟甲基苯氧基)-乙酸(143克，0.42摩爾，純度97％)和CHCl3(170毫升)，加熱至沸，以達(dá)到溶解。加入SOCl2(38毫升，62.1克，0.52摩爾)。使混合物回流加熱(最終68℃)達(dá)4.5小時(shí)，然后汽提揮發(fā)物，得到151克黃色混濁液體(103％表觀得率)。該物質(zhì)用于下個(gè)步驟而無需進(jìn)一步純化。
B.制備(+)4-氯苯基-(3-三氟甲基苯氧基)乙酰氯 向帶有磁攪拌器、Claissen適配器、反應(yīng)器量熱儀和通向氣體洗滌器的回流冷凝器的3升蒸發(fā)燒瓶中加入(+)4-氯苯基-(3-三氟甲基苯氧基)-乙酸(131克，0.37摩爾，)和CHCl3(152毫升)，加熱至沸，以達(dá)到溶解。加入SOCl2(35毫升，56.5克，0.48摩爾)。使混合物回流加熱(最終70℃)達(dá)4小時(shí)，然后汽提揮發(fā)物，得到139克液體。該物質(zhì)用于下個(gè)步驟而無需進(jìn)一步純化。
實(shí)施例6A.制備(-)4-氯苯基-(3-三氟甲基苯氧基)乙酸2-乙酰氨基乙酯
在氮?dú)夥障?，在冰水浴中，向帶有磁攪拌器、反?yīng)器量熱儀的3升圓底燒瓶中加入DMF(420毫升)，吡啶(37毫升，36克，0.46摩爾)和N-乙酰基乙醇胺(39毫升，43克，0.42摩爾)。將混合物冷卻到0-5℃，在40分鐘里加入粗制(-)4-氯苯基-(3-三氟甲基苯氧基)乙酰氯(151克，0.42摩爾，基于前述步驟的得率100％)在醚(170毫升)中的溶液，使反應(yīng)器里的溫度低于13℃。使混合物在室溫下攪拌16小時(shí)，通過加水(960毫升)，然后加入乙酸乙酯(630毫升)進(jìn)行溶解。水的加入發(fā)生了放熱，使溫度從24℃上升到34℃。加入乙酸乙酯使溫度下落到30℃。分離各層，水相用乙酸乙酯(125毫升)萃取一次。合并的有機(jī)層用7％(w∶w)NaHCO3水溶液(125毫升)萃取一次，用60毫升水分批萃取五次，用25％(w∶w)NaCl水溶液萃取兩次。產(chǎn)物用MgSO4(42克)干燥，經(jīng)Whatman#1濾紙過濾，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器汽提溶劑，得到160克黃色漿狀物，得率為80％，質(zhì)子NMR顯示有87％產(chǎn)物，8％EtOAc，4％非溴代酰胺和1％DMF。該漿狀物在室溫下溶于MTBE(225毫升)，攪拌下加入冰冷(-15℃)的85％己烷(400毫升)。形成兩個(gè)液體，然后結(jié)晶，混合物形成固體。用固定有Whatman#1的布氏漏斗拿下固體，裝好，用100毫升1∶1(v∶v)MTBE∶己烷分批洗滌三次，得到312克濕產(chǎn)品，干燥得到127克，相對于73％得率。
B.制備(+)4-氯苯基-(3-三氟甲基苯氧基)乙酸2-乙酰氨基乙酯 在氮?dú)夥障?，在冰水浴中，向帶有磁攪拌器、反?yīng)器量熱儀的3升圓底燒瓶中加入DMF(365毫升)，吡啶(33毫升，32.3克，0.41摩爾)和N-乙?；掖及?34毫升，38.1克，0.37摩爾)。將混合物冷卻到0-5℃，在25分鐘里加入粗制(+)4-氯苯基-(3-三氟甲基苯氧基甲基苯氧基)乙酰氯(139克，0.37摩爾，基于前述步驟的得率100％)在醚(155毫升)中的溶液，使反應(yīng)器里的溫度低于13℃。使混合物在室溫下攪拌40小時(shí)，通過加水(850毫升)，然后加入乙酸乙酯(550毫升)進(jìn)行溶解。水的加入發(fā)生了放熱，使溫度從24℃上升到34℃。加入乙酸乙酯使溫度下落到30℃。分離各層，水相用乙酸乙酯(110毫升)萃取一次。合并的有機(jī)層用55毫升水分批洗滌兩次，用55毫升25％(w∶w)NaCl水溶液分批洗滌五次，用30克MgSO4干燥，通過Whatman#1濾紙過濾。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器汽提溶劑，得到168克黃色液體，相當(dāng)于86％得率，質(zhì)子NMR顯示有79％產(chǎn)品，9％EtOAc，8％非溴代酰胺和4％DMF。產(chǎn)品在800毫升燒杯中這樣結(jié)晶在室溫下溶于MTBE(200毫升)，冷卻到-15℃達(dá)1.4小時(shí)，加入200毫升85％己烷，然后驟冷1小時(shí)。用固定有Whatman#1的布氏漏斗拿出固體，裝好，用1∶1(v∶v)MTBE∶己烷(100毫升)洗滌一次，得到201克濕產(chǎn)品，氮?dú)饬飨赂稍锂a(chǎn)物，使用頭部攪拌器用85％己烷(700毫升)研磨。過濾材料，干燥得到87克產(chǎn)品?！拨痢矰+2.769°(c.＝0.048，甲醇中)?！拨痢矰-2.716°(c.＝0.049，甲醇中)。也用250×4.6mmR，R-WhelkO-1柱在室溫下進(jìn)行HPLC分析(+)和(-)對映異構(gòu)體。注入的樣品是20微升2mg/ml樣品的乙醇溶液。柱用60∶40異丙醇∶己烷，流動(dòng)速率1ml/分鐘洗脫。在220nm下檢測。(+)對映異構(gòu)體在5.0-5.2分鐘時(shí)流出，(-)對映異構(gòu)體在5.7-5.9分鐘時(shí)流出。
實(shí)施例7該實(shí)施例涉及用本發(fā)明化合物抑制細(xì)胞色素P450 2C9(CYP2C9)的方法。
在37℃下，用或不用試驗(yàn)化合物對匯合的人肝臟微粒體(0.6毫克蛋白/毫升)分析甲磺丁脲羥基化活性(100μM14C-甲磺丁脲；1mM NADPH)達(dá)60分鐘。試驗(yàn)外消旋的鹵芬酸(halofenic acid)、(-)鹵芬酸和(+)鹵芬酸(0.25μM到40μM)。如圖1所示，消旋鹵芬酸抑制了CYP2C9-介導(dǎo)的甲磺丁脲在人肝臟微粒體中的羥基化活性，其表觀IC50為0.45μM。鹵芬酸對映異構(gòu)體抑制CYP2C9的能力有明顯的不同。(+)鹵芬酸表觀IC50是0.22μM，而(-)鹵芬酸的幾乎低20-倍效力，其表觀IC50是3.6μM。
實(shí)施例8該實(shí)施例涉及本發(fā)明化合物降低葡萄糖的時(shí)間進(jìn)程。
A.材料和方法從Jackson實(shí)驗(yàn)室(美國緬因州，BarHarbor)購得雄性，9-10周齡，C57BL/6J ob/ob小鼠。將動(dòng)物飼養(yǎng)在標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)條件下，22℃，50％相對濕度，4-5小鼠/籠，以Pruina嚙齒動(dòng)物的咀嚼飲食及水隨意供養(yǎng)。處理前，從每個(gè)動(dòng)物的尾部靜脈采血。使用非禁食血糖濃度在300-500mg/dl之間的小鼠。每個(gè)處理組由10個(gè)小鼠構(gòu)成，使每組中動(dòng)物的平均血糖水平在研究開始時(shí)是相同的。用強(qiáng)飼法給小鼠口服賦形劑、消旋鹵芬酯(250mg/kg)、(-)鹵芬酯(250mg/kg)或(+)鹵芬酯(250mg/kg)一次。所有的化合物都在含有5％(v/v)二甲亞砜(DMSO)、1％(v/v)吐溫80和2.7％(w/v)甲基纖維素的液體制劑中供給。強(qiáng)飼體積是10ml/kg。在給藥后1.5、3、4.5、6、7.5、9和24小時(shí)時(shí)采血來分析血漿中的葡萄糖濃度。用葡萄糖氧化酶方法(Sigma Chemical Co.，美國MO，St.Louis)來比色測定血糖濃度。用Student不配對的t試驗(yàn)計(jì)算發(fā)現(xiàn)組之間(藥物處理組與賦形劑處理組或藥物處理組之間)有明顯差異。
B.結(jié)果如圖2所示，消旋鹵芬酯在9小時(shí)的峰活性的大多數(shù)時(shí)間點(diǎn)能明顯降低血糖濃度。(-)鹵芬酯在1.5小時(shí)處即可降低血糖，在3小時(shí)處達(dá)到峰活性。在24小時(shí)里保持低的血糖濃度。(+)鹵芬酯到4.5小時(shí)才顯示出明顯的活性，在7.5小時(shí)處顯示出峰活性。此后血糖開始反彈。鹵芬酯的(-)和(+)對映異構(gòu)體在3和24-小時(shí)的時(shí)間點(diǎn)處有顯著的差異。(-)鹵芬酯活性出現(xiàn)得更快，持續(xù)時(shí)間更長。
實(shí)施例9該實(shí)施例涉及本發(fā)明化合物對葡萄糖的降低活性。
A.材料和方法從Jackson實(shí)驗(yàn)室(美國緬因州，Bar Harbor)購得雄性，8-9周齡，C57BL/6Job/ob小鼠。將動(dòng)物飼養(yǎng)在標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)條件下，22℃，50％相對濕度，4-5小鼠/籠，以Pruina嚙齒動(dòng)物的咀嚼飲食及水隨意供養(yǎng)。處理前，從每個(gè)動(dòng)物的尾部靜脈采血。使用非禁食血糖濃度在300-520mg/dl之間的小鼠。每個(gè)處理組由10個(gè)小鼠構(gòu)成，使每組中動(dòng)物的平均血糖水在研究開始時(shí)是相同的。用強(qiáng)飼法給小鼠口服賦形劑、消旋鹵芬酯(250mg/kg)、(-)鹵芬酯(125和250mg/kg)或(+)鹵芬酯(125和250mg/kg)每日一次共5天。消旋鹵芬酯在2.7％(w/v)甲基纖維素中給予，(-)和(+)對映異構(gòu)體在含有5％(v/v)二甲亞砜(DMSO)、1％(v/v)吐溫80和2.7％(w/v)甲基纖維素的液體制劑中給予。強(qiáng)飼體積是10ml/kg。在第一次給藥后3、6、27、30和120小時(shí)時(shí)采血來分析血漿中的葡萄糖和胰島素。在取樣的120小時(shí)前試驗(yàn)動(dòng)物禁食過夜(14小時(shí))。用葡萄糖氧化酶方法(Sigma Chemical Co.，美國MO，St.Louis)來比色測定血糖濃度。用大鼠胰島素RIA試劑盒(來自Linco Research Inc.，美國MO，St.Charles)來測定血漿胰島素濃度。用Student不配對的t試驗(yàn)計(jì)算發(fā)現(xiàn)組之間(藥物處理組與賦形劑處理組或藥物處理組之間)有明顯差異。
B.結(jié)果如圖3所示，(-)鹵芬酯在6、27和30小時(shí)明顯降低血糖濃度。(-)鹵芬酯的兩個(gè)劑量水平都在6、27和30小時(shí)明顯降低血糖濃度。高劑量(250mg/kg)在3小時(shí)處是有活性的。125mg/kg的(+)鹵芬酯在6和27小時(shí)時(shí)血糖濃度降低，而250mg/kg的(+)鹵芬酯在3、6、27和30小時(shí)時(shí)血糖濃度降低。圖4顯示了血漿胰島素水平。消旋鹵芬酯在6和27小時(shí)處能明顯降低血漿胰島素水平。兩個(gè)劑量的(-)鹵芬酯在27小時(shí)處能降低血漿胰島素水平，用250mg/kg/天處理的動(dòng)物在30小時(shí)處能明顯降低血漿胰島素水平。兩個(gè)劑量的(+)鹵芬酯在27和30小時(shí)時(shí)能明顯降低胰島素水平。用125mg/kg/天處理的動(dòng)物在6小時(shí)后也能觀察到明顯降低。禁食過夜(在120小時(shí)時(shí))后，所有的處理都能明顯降低血糖濃度(圖5)。除了125mg/kg/天(+)鹵芬酯外的所有鹵芬酯處理組都能明顯降低血漿胰島素(圖6)。
實(shí)施例10該實(shí)施例涉及本發(fā)明化合物對耐胰島素和受損葡萄糖耐受力的改善。
A.材料和方法將雄性，8-9周齡，Zucker fa/fa大鼠(Charles River)飼養(yǎng)在標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)條件下，22℃，50％相對濕度，2-3小鼠/籠，以Pruina嚙齒動(dòng)物的咀嚼飲食及水隨意供養(yǎng)。處理前，根據(jù)體重將大鼠分成6組，每個(gè)處理組由8個(gè)大鼠組成。用強(qiáng)飼法給小鼠口服賦形劑、消旋鹵芬酯(100mg/kg)、(-)鹵芬酯(50或100mg/kg)或(+)鹵芬酯(50或100mg/kg)一次。所有的化合物在含有5％(v/v)二甲亞砜(DMSO)、1％(v/v)吐溫80和2.7％(w/v)甲基纖維素的液體制劑中給予。強(qiáng)飼體積是10ml/kg。在處理后5.5小時(shí)及取去食物后4小時(shí)給所有的大鼠口服葡萄糖(1.9g/kg)。在口服葡萄糖后0、15、30、60、90、120和180分鐘時(shí)抽取血樣測定血糖濃度。賦形劑、(-)鹵芬酯(50mg/kg)和(+)鹵芬酯(50mg/kg)組在每天進(jìn)行強(qiáng)飼處理5天后給予胰島素。第5天，最后劑量后5.5小時(shí)及取消食物后4小時(shí)對大鼠靜脈注射胰島素(0.75U/kg)。在注射胰島素后3、6、9、12、15和18分鐘時(shí)取血測量血糖濃度。用葡萄糖氧化酶方法(SigmaChemical Co.，美國MO，St.Loouis)來比色測定血糖濃度。用Student不配對的t試驗(yàn)計(jì)算發(fā)現(xiàn)組之間(藥物處理組與賦形劑處理組或藥物處理組之間)有明顯差異。
B.結(jié)果如圖7A所示，在用鹵芬酯處理后給予葡萄糖，具有受損的葡萄糖耐受力的Zucker肥胖大鼠的血糖水平較低。在降低葡萄糖中(-)鹵芬酯最有效，其效應(yīng)的持續(xù)時(shí)間比消旋體或(+)對映異構(gòu)體長。圖7B顯示了所有處理組的曲線下面積增長(AUC)。用(-)鹵芬酯處理的動(dòng)物相對于賦形劑處理的對照，其葡萄糖面積減少更明顯。雖然用消旋體或(+)鹵芬酯處理組中AUC減少，但其效應(yīng)沒有(-)鹵芬酯處理的大鼠組中的大，其差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
通過監(jiān)控靜脈注射胰島素后葡萄糖的降低來分析胰島素敏感性的改變。線條的斜率直接指示試驗(yàn)動(dòng)物的胰島素敏感性。如圖8所示，與賦形劑處理的對照(p＜0.01)和用(+)鹵芬酯處理的動(dòng)物(p＜0.005)相比，用(-)鹵芬酯處理5天后胰島素敏感性明顯改善。用(+)鹵芬酯處理對胰島素的敏感性效應(yīng)小，其與賦形劑處理的對照沒有明顯的差異(p＝0.083)。用(-)鹵芬酯處理可明顯降低Zucker肥胖大鼠(受損葡萄糖耐受力和耐胰島素的模型)的胰島素耐受性。
實(shí)施例11該實(shí)施例涉及本發(fā)明化合物降低脂質(zhì)的活性。
A.材料和方法從GMI實(shí)驗(yàn)室(美國印第安納州，Indianapolis)得到9周齡的雄性Zucker糖尿病肥胖(ZDF)大鼠。在74天齡時(shí)開始每天強(qiáng)飼口服賦形劑或鹵芬酯的對映異構(gòu)體。如處理方案所指出的，在治療前得到開始的血樣供第1天的分析。通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)分析血漿中甘油三酯和膽固醇。
B.結(jié)果在實(shí)驗(yàn)I中，動(dòng)物接受的劑量為25mg/kg/天。如圖9A和圖9B所示，只有在用(-)鹵芬酯處理7天和13天后的動(dòng)物才出現(xiàn)血漿中膽固醇明顯下降的現(xiàn)象。在實(shí)驗(yàn)II中，在107天齡的動(dòng)物每日接受12.5mg/kg/天或37.5mg/kg/天的鹵芬酯(-)和(+)對映異構(gòu)體。如圖10A和10B所示，高劑量7天后血漿膽固醇明顯降低，但用(+)鹵芬酯處理14天后血漿膽固醇則沒有明顯降低。相反的是，低劑量的(-)鹵芬酯在7天后也可使血漿膽固醇明顯降低。在高劑量處理7天和14天后時(shí)注意到血漿膽固醇濃度下降很大。如圖11A和11B所示，高劑量處理7天后血漿甘油三酯明顯降低，(-)鹵芬酯對映異構(gòu)體處理的動(dòng)物的下降幅度更大。
實(shí)施例12該實(shí)施例涉及(±)鹵芬酯類似物和(-)鹵芬酯類似物的降低葡萄糖活性。
A.材料和方法從Jackson實(shí)驗(yàn)室(美國緬因州Bar Harbor)購得雄性8-9周齡C57BL/6Job/ob小鼠。將動(dòng)物飼養(yǎng)在標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)條件下，22±3℃，50±20％相對濕度，4-5小鼠/籠，以Pruina嚙齒動(dòng)物的咀嚼飲食及水隨意供養(yǎng)。處理前，從每個(gè)動(dòng)物的尾部靜脈采血。使用非禁食低血糖水平在250-500mg/dl的小鼠。每個(gè)處理組由8-10個(gè)小鼠組成，每組動(dòng)物在研究開始的平均血糖水平是相同的。用強(qiáng)飼法給小鼠口服賦形劑、(-)鹵芬酸、(±)類似物14、29、33、34、35、36、37或38，其劑量為125mg/kg，或(-)類似物29、36、37或38，其劑量為150mg/kg，一天一次，持續(xù)1-3天。化合物在含有5％(v/v)二甲亞砜(DMSO)、1％(v/v)吐溫80和0.9％(w/v)甲基纖維素的液體制劑中給予。強(qiáng)飼體積是10ml/kg。在每個(gè)劑量后6小時(shí)處理取血樣，分析血漿葡萄糖。每天測量食物攝入和體重。用葡萄糖氧化酶方法(Sigma Chemical Co.，美國MO，St.Louis)來比色測定血糖濃度。用Student不配對的t試驗(yàn)計(jì)算發(fā)現(xiàn)組之間(藥物處理組與賦形劑處理組進(jìn)行比較)有明顯差異。
B.結(jié)果如表2所示，在5個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)中對化合物進(jìn)行評價(jià)。單劑(-)鹵芬酸在6小時(shí)處即明顯降低血糖濃度。類似物14在6、30和54小時(shí)處即明顯降低血糖濃度。類似物33在6和54小時(shí)處明顯降低血糖濃度。類似物29和38在30和54小時(shí)處明顯降低血糖濃度。類似物35和36在30和54小時(shí)處明顯降低血糖濃度。類似物37在54小時(shí)明顯降低血糖濃度。單劑(-)類似物29、36、37和38在6小時(shí)處明顯降低血糖濃度?；衔锾幚聿挥绊憚?dòng)物的食物攝入和體重。
式II表1(±)和(-)鹵芬酯類似物。式II化合物
表2(±)鹵芬酯和(-)鹵芬酯類似物的降低葡萄糖活性
實(shí)施例13該實(shí)施例涉及(-)鹵芬酯和(+)鹵芬酯活性的比較。
A.材料和方法從Genetic Models，Inc.(美國印第安那州，Indianapolis)購得雄性8-9周齡ZDF大鼠。將動(dòng)物飼養(yǎng)在標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)條件下，22±3℃，50±20％相對濕度，3大鼠/籠，以Pruina嚙齒動(dòng)物的咀嚼飲食及水隨意供養(yǎng)。處理前，從每個(gè)動(dòng)物的尾部靜脈采血。使用禁食4小時(shí)血糖水平在200-500mg/dl的大鼠。每個(gè)處理組由8-10個(gè)大鼠組成，每組動(dòng)物在研究開始的平均血糖水平是相當(dāng)?shù)?。用?qiáng)飼法給小鼠口服賦形劑、(-)鹵芬酯或(+)鹵芬酯，其劑量為50mg，一天一次，持續(xù)3天?；衔镌诤?％(v/v)二甲亞砜(DMSO)、1％(v/v)吐溫80和0.9％(w/v)甲基纖維素的液體制劑中給予。強(qiáng)飼體積是5ml/kg。第2天和第3天在給藥后5小時(shí)取血樣。用葡萄糖氧化酶方法(Sigma Chemical Co.，美國MO，St.Louis)來比色測定血糖濃度。用Student不配對的t試驗(yàn)計(jì)算發(fā)現(xiàn)組之間(藥物處理組與賦形劑處理組進(jìn)行比較)有明顯差異。
B.結(jié)果與賦形劑處理的動(dòng)物相比，口服50mg/kg(-)鹵芬酯可明顯降低血漿葡萄糖濃度，而同樣劑量的(+)鹵芬酯不會(huì)降低血糖濃度(圖12)。
實(shí)施例14該實(shí)施例涉及(±)鹵芬酯和(-)鹵芬酯的藥物動(dòng)力學(xué)研究。
A.材料和方法從Charles River購得雄性225-250克SD大鼠。將動(dòng)物飼養(yǎng)在標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)條件下，22±3℃，50±20％相對濕度，3大鼠/籠，以Pruina嚙齒動(dòng)物的咀嚼飲食及水隨意供養(yǎng)。在戊巴比妥鈉(50mg/kg腹腔內(nèi)注射)下將插管放在左頸動(dòng)脈，在處理前，讓動(dòng)物恢復(fù)2天。通過口服強(qiáng)飼給予單劑50mg/kg的(±)鹵芬酯或(-)鹵芬酯?；衔镌诤?％(v/v)二甲亞砜(DMSO)、1％(v/v)吐溫80和0.9％(w/v)甲基纖維素的液體制劑中給予。強(qiáng)飼體積是5ml/kg。在給予后1、2、4、6、8、12、24、48、72、96和120小時(shí)后取血樣。用手性特定HPLC分析對于每個(gè)對映異構(gòu)體((-)鹵芬酸和(+)鹵芬酸)的血漿樣品，由于酯是前體藥物，在體內(nèi)它們轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的對映異構(gòu)體的酸。
B.結(jié)果口服(±)鹵芬酯后，在血樣中檢測(-)鹵芬酸和(+)鹵芬酸。如表3中所示，兩個(gè)對映異構(gòu)的酸具有不同的分布特征。(-)鹵芬酸的消除比(+)鹵芬酸的慢。結(jié)果，(-)鹵芬酸的AUC明顯比(+)鹵芬酸的AUC高，4708.0對758.0μg·h/ml，末端的半衰期是46.8對14.3小時(shí)。
口服(-)鹵芬酯后，(-)鹵芬酸的分布特性與給予(±)鹵芬酯的基本相同，因?yàn)槠淠┒税胨テ谑窍嗤?表2)。(-)鹵芬酸的c最大和AUC按比例較高，因(-)鹵芬酯的給予量較大(表3)。也檢測血漿中的(+)鹵芬酸，但其濃度比(-)鹵芬酸的低得多。可以預(yù)見在體內(nèi)形成了(+)鹵芬酸，因?yàn)?，兩個(gè)酸的末端半衰期(T1/2)是相似的。
這些結(jié)果顯示，由于(-)鹵芬酸的AUC比(+)鹵芬酸的AUC明顯高，故使用(-)鹵芬酯更好。表3(-)鹵芬酯(-對映異構(gòu)體)和(+)鹵芬酯(+對映異構(gòu)體)的藥物動(dòng)力學(xué)分析
(±)鹵芬酯中的每個(gè)對映異構(gòu)體劑量是消旋混合物總劑量的50％。
表4給予單劑(-)鹵芬酯后(-)鹵芬酸和(+)鹵芬酸的血漿濃度
*BQL＝低于定量的限制＜1.00μg/mlN/A＝?jīng)]有得到樣品實(shí)施例15該實(shí)施例涉及用(-)鹵芬酯預(yù)防糖尿病的形成和減輕高甘油三酯血癥A.材料和方法從Jackson實(shí)驗(yàn)室(美國緬因州Bar Harbor)購得雄性4周齡C57BL/6Jdb/db小鼠。將動(dòng)物飼養(yǎng)在標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)條件下，22±3℃，50±20％相對濕度，5小鼠/籠，以Pruina嚙齒動(dòng)物的粉末飲食(#8640)及水隨意供養(yǎng)。處理前，從每個(gè)動(dòng)物的尾部靜脈采血測量血漿葡萄糖、胰島素和甘油三酯濃度。這樣分配小鼠，使每組中動(dòng)物在研究開始的平均血糖水平和體重是相當(dāng)?shù)?。對照組(20個(gè)小鼠)給予混有5％蔗糖的粉末咀嚼飼料，處理組(20個(gè)小鼠)用混有5％蔗糖和(-)鹵芬酯的粉末咀嚼飼料。根據(jù)動(dòng)物體重和食物攝入來不斷地調(diào)節(jié)咀嚼飼料中的(-)鹵芬酯的量，以滿足目標(biāo)劑量150mg/kg/天。在非禁食條件下，在上午8-10時(shí)取血，每周一次，持續(xù)9周。每1-3天測量食物攝入和體重。用購自Sigma Chemical Co.的試劑盒(315號(hào)和339號(hào)美國St.Louis，MO)來比色測定血糖及甘油三酯濃度。用購自Limo Reseauh(St.Charles，MO)的RIA分析試驗(yàn)盒測定血漿胰島素水平。用Student不配對的t試驗(yàn)計(jì)算發(fā)現(xiàn)組之間(藥物處理組與賦形劑處理組進(jìn)行比較)有明顯差異。
B.結(jié)果C57BL/6J db/db小鼠在4周齡時(shí)處于前-糖尿病狀態(tài)。它們的血漿葡萄糖濃度是正常的，但血漿胰島素濃度明顯升高。如圖13所示，兩個(gè)組中的血漿葡萄糖濃度在實(shí)驗(yàn)開始時(shí)是正常的。在自然形成糖尿病后，對照組的血糖濃度隨著動(dòng)物年齡的增長而進(jìn)行性地增長，而(-)鹵芬酯處理組中的血糖水平增加卻被預(yù)防了或明顯延緩了。如圖5所示，約30％小鼠在(-)鹵芬酯處理組中沒有形成糖尿病(糖尿病被定義為血糖水平＞250mg/dl)。另一方面，對照組中所有的小鼠在10周齡時(shí)產(chǎn)生糖尿病。與血漿葡萄糖的發(fā)現(xiàn)一致，對照組中的胰島素進(jìn)行性地下降，表明胰臟分泌胰島素的能力變壞。(-)鹵芬酯處理可維持血漿胰島素濃度，表明預(yù)防了胰腺功能變壞(圖14)。
圖16顯示C57BL/6J db/db小鼠中血漿甘油三酯濃度對年齡的進(jìn)行性變化。給予(-)鹵芬酯在實(shí)驗(yàn)進(jìn)程中可減緩血漿甘油三酯濃度的增加。
實(shí)施例16該實(shí)施例揭示了(-)4-氯苯基-(3-三氟甲基苯氧基)-乙酸2-乙酰氨基乙基酯((-)鹵芬酯)的制備 4-氯苯基乙酸與1，2-二氯乙烷合并，使所得的溶液加熱到45℃。向反應(yīng)混合物中加入硫酰氯，加熱到60℃達(dá)18小時(shí)。讓反應(yīng)混合物冷卻到室溫，然后向溶液中慢慢加入N-乙酰基乙醇胺在二氯甲烷中的溶液。攪拌30分鐘后，用碳酸鉀和硫代硫酸鈉的水溶液淬滅反應(yīng)。有機(jī)層用水洗滌，用硫酸鎂干燥并過濾。通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，得到2-溴-2-(4-氯苯基)-乙酸N-乙?；被一サ挠汀?將3-羥基苯并三氟化物加到氫氧化鉀在異丙醇中的溶液。將2-溴-2-(4-氯苯基)-乙酸N-乙?；被一ピ诋惐贾械奈镔|(zhì)加到異丙醇/酚溶液中，在室溫下攪拌4小時(shí)。通過真空蒸餾除去異丙醇，將所得的漿狀物溶于乙酸乙酯，用水洗滌兩次，鹽水洗滌一次。用硫酸鎂干燥和過濾后，除去溶劑得到粗制品的油。粗制品溶于熱甲苯/己烷(1∶1v/v)，冷卻到0-10℃以結(jié)晶產(chǎn)品。濾餅用己烷/甲苯(1∶1v/v)洗滌，然后在50℃真空下干燥。分離的固體用熱的1∶6(v/v)在己烷中的異丙醇洗滌。冷卻后，形成了消旋的(-)4-氯苯基-(3-三氟甲基苯氧基)-乙酸2-乙酰氨基乙基酯為結(jié)晶固體。通過過濾收集固體，濾餅用1∶6(v/v)在己烷中的異丙醇洗滌，在50℃真空下干燥。
消旋化合物溶于20％異丙醇(IPA)和80％己烷的溶液里，其濃度為2.5％(wt/wt)。所得的溶液以連續(xù)的方式經(jīng)過Whelk-OR，R手性靜止相(CSP)，直至得到＞98％ee萃取物。減壓下從萃取物中蒸發(fā)溶劑，得到(-)(4-氯苯基-(3-三氟甲基苯氧基)-乙酸2-乙?；被一?。(通過Universal PharmTechnologies LLC，美國馬里蘭州01845進(jìn)行模擬的移動(dòng)床拆分。)實(shí)施例17該實(shí)施例涉及通過給予(-)鹵芬酯來降低血漿尿酸水平。
A.材料和方法從Charles River購得雄性SD大鼠，重275-300克。動(dòng)物在標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)條件下飼養(yǎng)(3大鼠/籠)，22±3℃溫度，50±20％相對濕度，以Purina嚙齒咀嚼(#8640)的粉末飼料和水隨意供養(yǎng)。為了建立高尿酸血癥，在實(shí)驗(yàn)中始終給動(dòng)物含有2.5％(w/w)1，4，5，6-四氫-4，6-二氧-1，3，5-三嗪-2-羧酸(SigmaChemical Co.，美國MO，St.Louis)的飲食。1，4，5，6-四氫-4，-二氧-1，3，5-三嗪-2-羧酸(氧嗪酸)通過抑制尿酸酶來升高尿酸。在給予飲食后3天篩選大鼠的血漿尿酸水平，排除具有極端血漿尿酸水平的大鼠。大鼠分成三組，每組的平均尿酸水平相同。通過強(qiáng)飼法給予50mg/kg的賦形劑、(-)鹵芬酯或(+)鹵芬酯每天一次，持續(xù)3天。第4天，對每個(gè)大鼠給予100mg/kg的(-)鹵芬酯或(+)鹵芬酯，所有的大鼠在強(qiáng)飼口服后4小時(shí)腹腔內(nèi)注射1，4，5，6-四氫-酯或(+)鹵芬酯，所有的大鼠在強(qiáng)飼口服后4小時(shí)腹腔內(nèi)注射1，4，5，6-四氫-4，6-二氧-1，3，5-三嗪-2-羧酸(250mg/kg)。(-)鹵芬酯和(+)鹵芬酯在含有5％(v/v)二甲亞砜(DMSO)、1％(v/v)吐溫80和0.9％(w/v)甲基纖維素的液體制劑中給予。1，4，5，6-四氫-4，6-二氧-1，3，5-三嗪-2-羧酸在含有0.9％(w/v)甲基纖維素的液體制劑中給予。強(qiáng)飼和注射的體積為5ml/kg。在第4天強(qiáng)飼后6小時(shí)取血。用Infinity尿酸試劑(Sigma Chemical Co.，美國MO，St.Louis)比色計(jì)量測定血漿尿酸水平。用Student不配對t-試驗(yàn)計(jì)算組之間(藥物處理組與賦形劑組之間進(jìn)行比較)的明顯差異。
B.結(jié)果如圖17所示，口服(-)鹵芬酯能明顯降低血漿尿酸水平。(+)鹵芬酯也可降低血漿尿酸水平，但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
實(shí)施例18該實(shí)施例涉及通過本發(fā)明化合物抑制細(xì)胞色素P450異構(gòu)形式(isoforms)。
A.材料和方法使用下列探測底物來研究試驗(yàn)品對細(xì)胞色素P450異構(gòu)形式1A2、2A6、2C9、2C19、2D6、2E1和3A4的抑制效力100μM非那西丁(CYP1A2)、1μM香豆素(CYP2A6)、150μM甲磺丁脲(CYP2C9)、50μM S-3-甲基苯乙妥因(CYP2C19)、16μM右美沙芬(CYP2D6)、50μM氯唑沙宗(CYP2E1)和80μM睪酮(CYP3A4)。在有或沒有試驗(yàn)品存在下，在人肝臟微粒體中測定每個(gè)異構(gòu)形式的活性。
除非特別指出，所有的培養(yǎng)在37℃下進(jìn)行。所有試驗(yàn)和陽性對照的樣品數(shù)為N＝3，所有的賦形劑對照的N＝6。在室溫下制備(-)鹵芬酸(MW＝330)的1000×甲醇貯備液，然后用Tris緩沖液稀釋，最終濃度為0.33、1.0、3.3、10和33.3μM，每個(gè)含有0.1％甲醇。所有的組包括由微粒體和含有0.1％甲醇的Tris緩沖液中不含試驗(yàn)品的底物構(gòu)成的賦形劑對照(VC)。用下列已知的CYP450抑制劑來制備陽性對照(PC)混合物5μM呋拉茶堿(CYP1A2)、250μM反苯環(huán)丙胺(CYP2A6)、50μM磺胺苯吡唑(CYP2C9)、10μM奧美拉唑(CYP2C19)、1μM奎尼丁(CYP2D6)、100μM4-甲基吡唑(CYP2E1)和5μM酮康唑(CYP3A4)。包括色譜干擾對照(CIC)來研究試驗(yàn)品和其代謝物對色譜干擾的可能性。試驗(yàn)品(33.3μg/ml)與1×微粒體蛋白、1×NRS和10μL合適的有機(jī)物如下所述一起培養(yǎng)合適的時(shí)間。
通過肝臟均勻混合物的不同離心制備的、匯集了成年雄性和雌性微粒體的穩(wěn)定冷凍的材料用于該研究(參見，如Guengerich，F(xiàn).P.(1989)，分析和表征酶，在Principles and Methods of Toxicology(A.W.Hayes編輯)，777-813，Raven Press，美國紐約)。在Tris緩沖液中制備培養(yǎng)混合物，以便對每個(gè)異構(gòu)形式包含微粒體蛋白(1mg/ml)，每個(gè)探測底物的濃度(是貯備液的100×)和(每個(gè)濃度的)試驗(yàn)品或陽性對照。在37℃下預(yù)培養(yǎng)5-分鐘后，加入NADPH再生系統(tǒng)來引發(fā)反應(yīng)，按下列時(shí)間在37℃下培養(yǎng)樣品非那西丁(CYP1A6)30分鐘、香豆素(CYP2A6)20分鐘，甲磺丁脲(CYP2C9)40分鐘，S-3-甲基苯乙妥因(CYP2C19)30分鐘、右美沙芬(CYP2D6)15分鐘、氯唑沙宗(CYP2E1)20分鐘和睪酮(CYP3A4)10分鐘。在合適的時(shí)候通過加入等體積的甲醇來終止培養(yǎng)反應(yīng)，但對于S-3-甲基苯乙妥因例外，通過加入100微升高氯酸來終止反應(yīng)。如前所述，所有的底物在其各自的Km濃度附近進(jìn)行評估。
在每次培養(yǎng)后，通過測量各自探測底物的代謝速率來測定P450異構(gòu)形式(isoform)的活性。如下檢測每個(gè)探測底物的代謝物撲熱息痛對CYP1A2；7-羥基香豆素對CYP2A6；4-羥基甲磺丁脲對CYP2C9；4-羥基-3-甲基苯乙妥因?qū)YP2C19右美沙芬對CYP2D6；6-羥基氯唑沙宗對CYP2E1；和6β-羥基睪酮對CYP3A4。用HPLC(In Vitro Technologies，Inc.，美國馬里蘭州Baltimore)分析活性。
用下列等式計(jì)算抑制抑制百分?jǐn)?shù)＝((賦形劑對照-處理)/賦形劑對照)×100試驗(yàn)品的抑制百分?jǐn)?shù)以列表形式表示。計(jì)算出每個(gè)試驗(yàn)品濃度的描述性統(tǒng)計(jì)學(xué)(平均和標(biāo)準(zhǔn)偏差)，然后顯示出抑制效力。對試驗(yàn)品用Sorftmax 2.6.1中的4-參數(shù)曲線固定等式來計(jì)算IC50值。
該實(shí)施例中的測量時(shí)間、溫度和濃度是近似值。
B.結(jié)果表5-8列出了細(xì)胞色素P450的7個(gè)異構(gòu)形式的每個(gè)結(jié)果，表示為代謝活性和抑制百分?jǐn)?shù)。10和33μM劑量水平的(-)鹵芬酸抑制4-羥基甲磺丁脲的產(chǎn)生(CYP2C9，IC50＝11μM)，也抑制了4-羥基3-甲基苯乙妥因的產(chǎn)生(CYP2C19)。沒有觀察到對其它CYP450異構(gòu)形式的抑制。應(yīng)當(dāng)注意，該實(shí)驗(yàn)中CYP2C9的IC50是實(shí)施例7中的約三倍(11μM與3.6μM比較)。該結(jié)果可能是由于實(shí)施例7中至少部分使用了較低純度的(-)鹵芬酸(較低的ee)。
表5用0.33、1.0、3.3、10和33.3μM劑量的(-)鹵芬酸培養(yǎng)男性和女性微粒體中非那西丁(CYP1A2)和香豆素(CYP2A6)的肝臟微粒體活性
表中的數(shù)值是N＝3個(gè)樣品(VCN＝6)的平均±標(biāo)準(zhǔn)偏差?？s寫AC，撲熱息痛；7-HC，7-羥基香豆素；CIC，色譜干擾對照；VC，賦形劑對照(0.1％甲醇)；NA，沒有得到；FUR，呋拉茶堿；TRAN，反苯環(huán)丙胺。
表6用0.33、1.0、3.3、10和33.3μM劑量的(-)鹵芬酸培養(yǎng)男性和女性微粒體中甲磺丁脲(CYP2C9)和S-3-甲基苯乙妥因(CYP2C19)的肝臟微粒體活性
表中的數(shù)值是N＝3個(gè)樣品(VCN＝6)的平均±標(biāo)準(zhǔn)偏差?？s寫4-OHTB，4-羥基甲磺丁脲；4-OHME，4-羥基-3甲基苯乙妥因；CIC，色譜干擾對照；VC，賦形劑對照(0.1％甲醇)；NA，沒有得到；OMP，奧美拉唑；SFZ，磺胺苯吡唑；BQL，低于定量限制。
表7用0.33、1.0、3.3、10和33.3μM劑量的(-)鹵芬酸培養(yǎng)男性和女性微粒體中右美沙芬(CYP2D6)和氯唑沙宗(CYP2E1)的肝臟微粒體活性
表中的數(shù)值是N＝3個(gè)樣品(VCN＝6)的平均±標(biāo)準(zhǔn)偏差?？s寫DEX右美沙芬；6-OHCZX，6-羥基氯唑沙宗；CIC，色譜干擾對照；VC，賦形劑對照(0.1％甲醇)；NA，沒有得到；4-MP，4-甲基吡唑；QUIN，奎尼??；BQL，低于定量限制。
表8用0.33、1.0、3.3、10和33.3μM劑量的(-)鹵芬酸培養(yǎng)男性和女性微粒體中睪酮(CYP3A4)的肝臟微粒體活性
表中的數(shù)值是N＝3個(gè)樣品(VCN＝6)的平均±標(biāo)準(zhǔn)偏差?？s寫6β-OHT，6β-羥基睪酮；CIC，色譜干擾對照；VC，賦形劑對照(0.1％甲醇)；NA，沒有得到；KTZ，酮康唑；BQL，低于定量限制。
雖然為了便于理解，上面已經(jīng)詳細(xì)地描述了本發(fā)明，很顯然，可在權(quán)利要求書的范圍里實(shí)施某些修飾。所有本文引用的公開物和專利文件在此全文并入本文供參考。
權(quán)利要求
1.一種調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物中2型糖尿病的方法，包括對所述的哺乳動(dòng)物給予治療有效量的式I化合物的(-)立體異構(gòu)體，或其藥學(xué)上可接受的鹽， 其中R選自羥基、低級芳烷氧基、二低級烷基氨基-低級烷氧基、低級烷酰氨基低級烷氧基、苯甲酰氨基-低級烷氧基、脲基-低級烷氧基、N’-低級烷基-脲基-低級烷氧基、氨基甲酰基-低級烷氧基、鹵代苯氧基取代的低級烷氧基、氨基甲?；〈谋窖趸Ⅳ驶?低級烷氨基、N，N-二低級烷基氨基-低級烷基氨基、鹵代低級烷基氨基、羥基取代的低級烷基氨基、低級烷?；趸〈牡图壨榛被?、脲基和低級烷氧基羰基氨基；和X是鹵素；其中化合物基本上沒有(+)立體異構(gòu)體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中化合物是下式II化合物 其中R2選自苯基-低級烷基、低級烷酰氨基-低級烷基和苯甲?；?低級烷基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中化合物是(-)2-乙酰氨基乙基4-氯苯基-(3-三氟甲基苯氧基)乙酸酯。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中通過靜脈輸注、透皮釋放或口服給藥來給予化合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中給予量為約100mg-3000mg/天。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中給予量為約500mg-1500mg/天。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中給予量為約5-250mg/kg/天。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中化合物與藥學(xué)上可接受的載體一起給予。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中化合物通過降低哺乳動(dòng)物的血糖水平來調(diào)節(jié)高脂血癥。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中化合物調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物的血紅蛋白A1c。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中化合物調(diào)節(jié)與糖尿病有關(guān)的微血管和大血管并發(fā)癥。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中微血管并發(fā)癥是視網(wǎng)膜病、神經(jīng)病或腎病。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中大血管并發(fā)癥是心血管疾病或外周血管疾病。
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中化合物調(diào)節(jié)動(dòng)脈硬化。
15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中化合物預(yù)防哺乳動(dòng)物中形成糖尿病。
16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中化合物與選自下列的一種化合物組合給予磺酰脲或其它胰島素促泌素、噻唑烷二酮、fibrate、HMG-CoA還原酶抑制劑、雙胍、膽酸結(jié)合樹脂、煙酸、α-葡萄糖苷酶抑制劑和胰島素。
17.一種調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物耐胰島素的方法，包括對所述的哺乳動(dòng)物給予治療有效量的式I化合物的(-)立體異構(gòu)體，或其藥學(xué)上可接受的鹽， 其中R選自羥基、低級芳烷氧基、二低級烷基氨基-低級烷氧基、低級烷酰氨基低級烷氧基、苯甲酰氨基-低級烷氧基、脲基-低級烷氧基、N’-低級烷基-脲基-低級烷氧基、氨基甲?；?低級烷氧基、鹵代苯氧基取代的低級烷氧基、氨基甲?；〈谋窖趸?、羰基-低級烷氨基、N，N-二低級烷基氨基-低級烷基氨基、鹵代低級烷基氨基、羥基取代的低級烷基氨基、低級烷?；趸〈牡图壨榛被?、脲基和低級烷氧基羰基氨基；和X是鹵素；其中化合物基本上沒有(+)立體異構(gòu)體。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中化合物是下式II化合物 其中R2選自苯基-低級烷基、低級烷酰氨基-低級烷基和苯甲?；?低級烷基。
19.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中化合物是(-)2-乙酰氨基乙基4-氯苯基-(3-三氟甲基苯氧基)乙酸酯。
20.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中通過靜脈輸注、透皮釋放或口服給藥來給予化合物。
21.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中給予量為約100mg-3000mg/天。
22.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中給予量為約500mg-1500mg/天。
23.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中給予量為約5-250mg/kg/天。
24.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中化合物與藥學(xué)上可接受的載體一起給予。
25.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中化合物預(yù)防哺乳動(dòng)物中形成耐胰島素。
26.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中化合物調(diào)節(jié)多囊卵巢綜合癥。
27.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中化合物調(diào)節(jié)受損的葡萄糖耐受力。
28.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中化合物調(diào)節(jié)肥胖癥。
29.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中化合物調(diào)節(jié)妊娠性糖尿病。
30.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中化合物調(diào)節(jié)綜合癥X。
31.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中化合物調(diào)節(jié)動(dòng)脈硬化。
32.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中化合物與選自下列的一種化合物組合給予磺酰脲或其它胰島素促泌素、噻唑烷二酮、fibrate、HMG-CoA還原酶抑制劑、雙胍、膽酸結(jié)合樹脂、煙酸、α-葡萄糖苷酶抑制劑和胰島素。
33.一種減緩哺乳動(dòng)物中高脂血癥的方法，包括對所述的哺乳動(dòng)物給予治療有效量的式I化合物的(-)立體異構(gòu)體，或其藥學(xué)上可接受的鹽， 其中R選自羥基、低級芳烷氧基、二低級烷基氨基-低級烷氧基、低級烷酰氨基低級烷氧基、苯甲酰氨基-低級烷氧基、脲基-低級烷氧基、N’-低級烷基-脲基-低級烷氧基、氨基甲?；?低級烷氧基、鹵代苯氧基取代的低級烷氧基、氨基甲?；〈谋窖趸?、羰基-低級烷氨基、N，N-二低級烷基氨基-低級烷基氨基、鹵代低級烷基氨基、羥基取代的低級烷基氨基、低級烷酰基氧基取代的低級烷基氨基、脲基和低級烷氧基羰基氨基；和X是鹵素；其中化合物基本上沒有(+)立體異構(gòu)體。
34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中化合物是下式II化合物 其中R2選自苯基-低級烷基、低級烷酰氨基-低級烷基和苯甲?；?低級烷基。
35.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中化合物是(-)2-乙酰氨基乙基4-氯苯基-(3-三氟甲基苯氧基)乙酸酯。
36.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中通過靜脈輸注、透皮釋放或口服給藥來給予化合物。
37.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中化合物可降低膽固醇水平、甘油三酯水平，或兩者都被降低。
38.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中給予量為約100mg-3000mg/天。
39.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中給予量為約500mg-1500mg/天。
40.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中給予量為約5-250mg/kg/天。
41.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中化合物與藥學(xué)上可接受的載體一起給予。
42.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中化合物與選自下列的一種化合物組合給予磺酰脲或其它胰島素促泌素、噻唑烷二酮、fibrate、HMG-CoA還原酶抑制劑、雙胍、膽酸結(jié)合樹脂、煙酸、α-葡萄糖苷酶抑制劑和胰島素。
43.一種藥物組合物，包括藥學(xué)上可接受的載體和治療有效量的式I化合物的(-)立體異構(gòu)體，或其藥學(xué)上可接受的鹽， 其中R選自羥基、低級芳烷氧基、二低級烷基氨基-低級烷氧基、低級烷酰氨基低級烷氧基、苯甲酰氨基-低級烷氧基、脲基-低級烷氧基、N’-低級烷基-脲基-低級烷氧基、氨基甲?；?低級烷氧基、鹵代苯氧基取代的低級烷氧基、氨基甲酰基取代的苯氧基、羰基-低級烷氨基、N，N-二低級烷基氨基-低級烷基氨基、鹵代低級烷基氨基、羥基取代的低級烷基氨基、低級烷酰基氧基取代的低級烷基氨基、脲基和低級烷氧基羰基氨基；和X是鹵素；其中化合物基本上沒有(+)立體異構(gòu)體。
44.根據(jù)權(quán)利要求43所述的組合物，其中藥物組合物調(diào)節(jié)2型糖尿病。
45.根據(jù)權(quán)利要求43所述的藥物組合物，其中藥物組合物調(diào)節(jié)耐胰島素癥。
46.根據(jù)權(quán)利要求43所述的藥物組合物，其中藥物組合物調(diào)節(jié)高脂血癥。
47.根據(jù)權(quán)利要求43所述的藥物組合物，它包括治療有效量的下式II化合物的(-)立體異構(gòu)體 其中R2選自苯基-低級烷基、低級烷酰氨基-低級烷基和苯甲?；?低級烷基。
48.根據(jù)權(quán)利要求43所述的藥物組合物，其中化合物是(-)2-乙酰氨基乙基4-氯苯基-(3-三氟甲基苯氧基)乙酸酯。
49.根據(jù)權(quán)利要求43所述的藥物組合物，它為片劑或膠囊劑。
50.一種治療哺乳動(dòng)物中高脂血癥的方法，包括對所述的哺乳動(dòng)物給予治療有效量的式I化合物的(-)立體異構(gòu)體，或其藥學(xué)上可接受的鹽， 其中R選自羥基、低級芳烷氧基、二低級烷基氨基-低級烷氧基、低級烷酰氨基低級烷氧基、苯甲酰氨基-低級烷氧基、脲基-低級烷氧基、N’-低級烷基-脲基-低級烷氧基、氨基甲酰基-低級烷氧基、鹵代苯氧基取代的低級烷氧基、氨基甲?；〈谋窖趸?、羰基-低級烷氨基、N，N-二低級烷基氨基-低級烷基氨基、鹵代低級烷基氨基、羥基取代的低級烷基氨基、低級烷?；趸〈牡图壨榛被?、脲基和低級烷氧基羰基氨基；和X是鹵素；其中化合物基本上沒有(+)立體異構(gòu)體。
51.根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法，其中化合物是下式II化合物 其中R2選自苯基-低級烷基、低級烷酰氨基-低級烷基和苯甲?；?低級烷基。
52.根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法，其中化合物是(-)2-乙酰氨基乙基4-氯苯基-(3-三氟甲基苯氧基)乙酸酯。
53.根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法，其中化合物與藥學(xué)上可接受的載體一起給予。
全文摘要
本發(fā)明提供了(－)(3－三鹵甲基苯氧基)(4－鹵代苯基)乙酸衍生物的應(yīng)用,本發(fā)明也提供了治療耐胰島素、2型糖尿病、高脂血癥和高尿酸血癥的組合物。
文檔編號(hào)A61K31/425GK1368879SQ00811290
公開日2002年9月11日 申請日期2000年6月2日 優(yōu)先權(quán)日1999年6月4日
發(fā)明者K·L·樂斯基, J·羅 申請人:麥它波萊克斯股份有限公司, 戴厄泰克斯股份有限公司