專利名稱：：用于治療骨質(zhì)疏松和治療癌骨轉(zhuǎn)移的膦酸鹽藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及膦酸鹽藥物，具體涉及用于治療骨質(zhì)疏松和治療癌骨轉(zhuǎn)移的膦酸鹽藥物。骨質(zhì)疏松是一種常見病，隨著社會(huì)老齡化的出現(xiàn)，骨質(zhì)疏松患者越來越多，目前我國已超過8000萬人，2000年以后，將超過1億人，這是一個(gè)極為嚴(yán)重的社會(huì)問題。骨質(zhì)疏松主要由年齡增大后內(nèi)分泌減弱(婦女停經(jīng)后，雌激素分泌減少；男性雄激素分泌減少，女性和男性降鈣素分泌減少)、慢性疾病(如甲亢、甲狀旁腺功能亢進(jìn)、糖尿病等內(nèi)分泌疾病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、Paget氏病等骨骼疾病)和長期服用激素等藥物所致。當(dāng)前用于治療骨質(zhì)疏松的藥物主要有性激素和降鈣素，另外還有各種鈣劑。性激素和降鈣素用于人體內(nèi)分泌激素和降鈣素之不足，以促進(jìn)成骨細(xì)胞活性和降低破骨細(xì)胞活性，使骨代謝由骨吸收大于骨形成的負(fù)平衡向骨吸收小于或等于骨形成的正平衡方向發(fā)展，以防止骨質(zhì)疏松的形成或惡化，從而治療骨質(zhì)疏松，但由于激素的各種毒副作用，不宜長期使用。各種鈣制劑對形成新骨有一定作用，但不能從根本上解決骨質(zhì)疏松問題。近年來國際上開發(fā)出了二膦酸鹽類的抗骨吸收藥物，有逐漸取代激素類藥物的趨勢，如羥基乙叉二膦酸鹽(Etidronate)；1-二氯代亞甲基二膦酸鹽(Clodronate商品名骨膦)，3-氨基-1-羥基丙基二膦酸鹽(Pamidronate商品名博寧)；4-氨基-1-羥基丁基二膦酸鹽(Alendronate商品名阿倫)等。癌癥到晚期由于癌細(xì)胞的擴(kuò)散侵蝕或受某些體液因子刺激，破骨細(xì)胞或成骨細(xì)胞活性增強(qiáng)，引起癌骨轉(zhuǎn)移，使骨代謝趨向不平衡，由于原發(fā)癌的種類不同，可引起成骨性為主的癌骨轉(zhuǎn)移(如前列腺癌、乳腺癌等)或溶骨性為主的癌骨轉(zhuǎn)移(如鼻咽癌、肺癌等)。部分癌骨轉(zhuǎn)移患者將產(chǎn)生劇烈骨痛或高血鈣癥，必須給予及時(shí)治療。對于癌骨轉(zhuǎn)移引起的劇烈骨痛常用核素治療(如153Sm-EDTMP、186Re-HEDP、89SrCl2等)和二膦酸鹽類藥物治療(如骨膦、博寧等)，對于癌骨轉(zhuǎn)移引起的高血鈣癥，常用降鈣素或二膦酸鹽類藥物治療，其中膦酸鹽用于治療癌骨轉(zhuǎn)移，沒有核素治療引起的血液毒性(血白細(xì)胞和血小板減小)，具有開發(fā)意義。但現(xiàn)有二膦酸鹽類藥物的療效仍不夠理想，毒副作用還需進(jìn)一步減小。本發(fā)明的目的就是提供療效更好且毒副作用小的治療骨質(zhì)疏松和治療癌骨轉(zhuǎn)移的新藥。本發(fā)明所提供的是以亞甲基二膦酸鹽或羥基亞甲基二膦酸鹽或乙二胺四甲撐膦酸鹽中的一種膦酸鹽為主要活性成份的用于治療骨質(zhì)疏松和治療癌骨轉(zhuǎn)移的新藥。其中亞甲基二膦酸鹽的一次用量(以膦酸計(jì))為4mg～600mg，羥基亞甲基二膦酸鹽的一次用量(以膦酸計(jì))為2mg～300mg，乙二胺四甲撐膦酸鹽的一次用量(以膦酸計(jì))為3mg～450mg。所說的膦酸鹽是指這些膦酸與鈉離子、鈣離子、鋅離子、四價(jià)锝離子或是乙二胺四甲撐膦酸與三價(jià)鐵離子、釤離子形成的膦酸鹽或锝絡(luò)合物。其中，用高锝酸鈉和膦酸鹽制備锝[99Tc]膦酸鹽時(shí)，必須用0.3mg～1.0mg氯化亞錫或氟化亞錫或二氧化硫脲作為還原劑，以使高價(jià)锝(正七價(jià))還原成能與膦酸鹽絡(luò)合的四價(jià)锝[99Tc]。另外，為了提高锝[99Tc]膦酸鹽絡(luò)合物的穩(wěn)定性，還可以加入0.2mg～1.0mg的抗氧化劑抗壞血酸或龍膽酸。其中，膦酸鹽、微量元素锝[99Tc]、藥學(xué)還原劑和抗氧化劑均為有效活性成份，其主要活性成份膦酸鹽(以膦酸計(jì))的比例在總體活性成份中至少占50％。亞甲基二膦酸(MDP)、羥基亞甲基二膦酸(HMDP)是國內(nèi)外用于核醫(yī)學(xué)骨顯像劑(锝[99mTc]亞甲基二膦酸鹽注射液和锝[99mTc]羥基亞甲基二膦酸鹽注射液)的載體，乙二胺四甲撐膦酸(EDTMP)是用于核醫(yī)學(xué)癌骨轉(zhuǎn)移藥物釤-153-乙二胺四甲撐膦酸鹽(153Sm-EDTMP)注射液的載體，以上三種膦酸鹽過去未發(fā)現(xiàn)有抑制骨吸收、治療骨質(zhì)疏松和治療癌骨轉(zhuǎn)移的作用。發(fā)明人用骨膦和這三種膦酸鹽作了抑制破骨細(xì)胞藥效實(shí)驗(yàn)，方法為將10日齡大白兔(體重100g～120g)四肢長骨分離破骨細(xì)胞，接種于象牙骨薄切片上(Φ1.5cm)培養(yǎng)，5小時(shí)后加入上述藥物或培養(yǎng)液。培養(yǎng)4天后取出骨片經(jīng)1％甲苯胺蘭染色后，光鏡下觀察計(jì)數(shù)吸收陷窩(藥物用a-MEM培養(yǎng)劑稀釋到所需濃度L實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明當(dāng)四種膦酸鹽在濃度為10-4mol/L時(shí)對破骨細(xì)胞的活性有明顯抑制作用。本發(fā)明的三種膦酸鹽對破骨細(xì)胞活性的抑制率明顯高于現(xiàn)有藥品骨膦對破骨細(xì)胞的抑制率(試驗(yàn)結(jié)果見表6)。另外發(fā)明人選以上三種膦酸鹽之一的亞甲基二膦酸鹽為代表進(jìn)行了預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松的整體藥效動(dòng)物試驗(yàn)，即將8月齡SD雌性大鼠(體重200g-300g)雙側(cè)卵巢切除造成骨質(zhì)疏松模型，分兩批次通過灌胃給予亞甲基二膦酸鹽，第一次給予大鼠200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg三個(gè)劑量，第二次為50g/kg、25g/kg兩個(gè)劑量，另用尼爾雌醇為對照藥，均連續(xù)給藥90天，試驗(yàn)結(jié)果表明，各劑量組亞甲基二膦酸鹽對雙側(cè)卵巢切除的骨質(zhì)疏松模型大鼠骨量丟失均有預(yù)防作用，而50mg/kg劑量組的效果優(yōu)于其它劑量組，對松質(zhì)骨的作用比對皮質(zhì)骨的作用要好(見表7～9)，并優(yōu)于尼爾雌醇對照組；劑量為200mg/kg劑量組對卵巢切除大鼠子宮有一定抑制作用，血清E2也有增高的趨勢，但不如對照組尼爾雌醇(見表10)。用以上膦酸鹽進(jìn)行了對治療骨質(zhì)疏松和治療癌骨轉(zhuǎn)移的初步臨床實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，治療骨質(zhì)疏松的有效率為100％，治療334例癌骨轉(zhuǎn)移，鎮(zhèn)痛效果很好，有效率達(dá)85.33％，其中顯效率達(dá)35.63％，還有部分患者的癌骨轉(zhuǎn)移病灶縮小和消失。另外，當(dāng)患者的骨質(zhì)疏松是由類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎等自身免疫性疾病引起時(shí)，為了標(biāo)本兼治，在治療骨質(zhì)疏松時(shí)，須同時(shí)治療引起骨質(zhì)疏松的自身免疫性疾病，此時(shí)在膦酸鹽中應(yīng)加入微量元素锝[99Tc]。其制備方法為在藥學(xué)上允許的還原劑(如氯化亞錫或氟化亞錫或二氧化硫脲)存在下，將高锝[99Tc]酸鈉還原成低價(jià)態(tài)锝[99Tc](Ⅳ)，并與膦酸鹽絡(luò)合生成锝[99Tc]膦酸鹽絡(luò)合物(如锝[99Tc]亞甲基二膦酸鹽)，利用此類锝[99Tc]膦酸鹽治療骨關(guān)節(jié)已受到破壞、骨關(guān)節(jié)端已發(fā)生骨質(zhì)疏松的嚴(yán)重類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者，能控制類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者病情的發(fā)展，并能修復(fù)破骨，治療骨質(zhì)疏松，改善關(guān)節(jié)功能，已使一些已癱瘓的患者下床行走，恢復(fù)了生活自理能力。上述結(jié)果表明本發(fā)明的三種膦酸鹽在通過抑制骨吸收來治療骨質(zhì)疏松和治療癌骨轉(zhuǎn)移(用于癌骨轉(zhuǎn)移鎮(zhèn)痛，降低高血鈣癥的血鈣濃度，使癌骨轉(zhuǎn)移病灶縮小、消失)方面與同類藥物相比有更優(yōu)越的效果和更為重要的臨床應(yīng)用意義與價(jià)值。本發(fā)明的具體實(shí)施方式如下所說的膦酸鹽藥物包括注射劑、口服劑等不同劑型，根據(jù)適應(yīng)癥與劑型不同，膦酸鹽的量(以膦酸計(jì))和锝[99Tc]的量有所不同，其他金屬離子的量無特別要求，只要求膦酸鹽的pH值接近中性(pH值為4.0～8.0)。其中注射劑可分為靜注液和靜滴液，對于每單位藥物的亞甲基二膦酸鹽靜注液，膦酸的含量可以為4mg、5mg、10mg、20mg或50mg；對于每單位藥物的羥基亞甲基二膦酸鹽靜注液，膦酸的含量可以為2mg、5mg、10mg或20mg；對于每單位藥物的乙二按四甲撐膦酸鹽靜注液，膦酸的含量可以為3mg、5mg、10mg、20mg或30mg。對于每單位藥物的亞甲基二膦酸鹽靜滴液，膦酸的含量可以為100mg、200mg或300mg；對于每單位藥物的羥基亞甲基二膦酸鹽靜滴液，膦酸的含量可以為50mg、100mg或150mg；對于每單位藥物的乙二胺四甲撐膦酸鹽靜滴液，膦酸的含量可以為75mg、100mg或200mg。口服劑可制備成口服膠囊或片劑，對于每單位藥物的亞甲基二膦酸鹽口服劑，膦酸的含量可以為100mg、200mg、300mg、400mg、500mg或600mg；對于每單位藥物的羥基亞甲基二膦酸鹽口服劑，膦酸的含量可以為50mg、100mg、150mg、200mg或300mg；對于每單位藥物的乙二胺四甲撐膦酸鹽口服劑，膦酸的含量可以為75mg、150mg、200mg、300mg或450mg。當(dāng)藥物為锝[99Tc]膦酸鹽注射劑時(shí)，對于上述每一種膦酸含量的膦酸鹽，锝的含量可以為0.04μg、0.05μg、0.07μg、0.1μg、0.3μg、0.5μg、1μg或2μg，氯化亞錫或氟化亞錫或二氧化硫脲的含量可以為0.3mg、0.5mg、0.6mg、1.0mg。在上述的锝[99Tc]膦酸鹽藥物中，還可以加入抗氧化劑抗壞血酸或龍膽酸，其含量可以為0.2mg～1.0mg，其中0.2mg、0.3mg、0.4mg、0.5mg、0.6mg、0.7mg、0.8mg、0.9mg、1.0mg都是可以使用的劑量。上述膦酸鹽中的膦酸含量及含有锝[99Tc]時(shí)的锝[99Tc]含量范圍見表1(其他金屬離子無特別要求)。表1以上所述的各種藥物的具體制備方法及最佳實(shí)施方案如下1、常用膦酸鹽靜注液的制備在凈化生產(chǎn)廠房內(nèi)，按無菌操作要求稱取所需量膦酸，用二次蒸餾水溶解，用2N氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液酸度至pH值5.0～7.0，在用生理鹽水稀釋至所需濃度，后經(jīng)細(xì)菌過濾器過濾，再按要求分裝成一定規(guī)格，最后經(jīng)壓蓋密封，高溫消毒滅菌，臨床應(yīng)用是直接靜脈注射。表25ml膦酸鹽靜注液的膦酸含量規(guī)格2、常用膦酸鹽靜滴液的制備在凈化生產(chǎn)廠房內(nèi)，按無菌操作要求稱取所需量膦酸，用二次蒸餾水溶解，用2N氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液酸度至pH值5.0～7.0，在用生理鹽水稀釋至所需濃度(50～100mg/ml)，后經(jīng)細(xì)菌過濾器過濾，再按要求分裝進(jìn)10ml玻瓶(每瓶2ml～2.5ml)，在無菌室內(nèi)凍干成粉針劑，在壓蓋密封，臨用前用250～500ml生理鹽水溶解稀釋，靜脈滴注。表3膦酸鹽靜滴液的膦酸含量規(guī)格3、常用膦酸鹽口服劑(膠囊或片劑)制備按常規(guī)口服膠囊或片劑制備工藝，制備所需規(guī)格的膦酸鹽口服劑。表4膦酸鹽口服劑的膦酸含量規(guī)格4、锝[99Tc]膦酸鹽注射液的制備在凈化廠房內(nèi)，按無菌操作要求稱取所需量的膦酸，高锝[99Tc]酸鈉，還原劑氯化亞錫(SnCl2·2H2O)和抗氧化劑抗壞血酸(維生素C)配制成所需濃度溶液，再制成不同規(guī)格的注射液或靜滴液。表5锝膦酸鹽注射液各種有效成份的含量規(guī)格表6膦酸鹽對破骨細(xì)胞的抑制試驗(yàn)結(jié)果(膦酸鹽的濃度為10-4mol/L)表7MDP對卵巢切除大鼠90天后股骨骨量測量結(jié)果(X±SD、n=8)<tablesid="table5"num="005"><table>分組干重(g/cm3)灰重(g/cm3)鈣(g/cm3)正常對照組1.193±0.0300.805±0.0210.337+0.011切卵對照組1.118±0.018△△△0.759±0.020△△△0.284±0.017△△△切卵+MD)P50mg/kg1.201±0.016***0.818±0.014**0.355±0.012***切卵+尼爾雌醇1mg/kg1.160±0.044*0.792±0.047*0.341±0.012*</table></tables>與正常組比較△△△P＜0.001與切卵組比較*P＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.001表8對卵巢切除大鼠用亞甲基二膦酸鹽(MDP)灌胃90天后大鼠BMD測量結(jié)果(X±SD)<tablesid="table6"num="006"><table>分組全身BMD(n=6),g/cm2％股骨BMD(n=8),g/cm2％正常對照組0.413±0.0180.231±0.017切卵對照組0.391±0.014↓5.30.214±0.011△↓5.3(與正常比較)切卵+MDP50mg/kg0.406±0.024↑3.80.219±0.011↑2.3(與切卵比較)切卵+尼爾雌醇1mg/kg0.386±0.011↓1.30.217±0.018↑1.4(與切卵比較)</table></tables>△P＜0.05表9對卵巢切除大鼠用亞甲基二膦酸鹽(MDP)灌胃90天后大鼠腰椎骨小梁面積測量結(jié)果(X±SD)與正常組比較△△△P＜0.001與切卵組比較*P＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.001表10對卵巢切除大鼠用亞甲基二膦酸鹽(MDP)灌胃90天后大鼠子宮濕度和血清E2測量結(jié)果(X±SD)與正常組比較△△△P＜0.001與切卵組比較*P＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.00權(quán)利要求1．一種用于治療骨質(zhì)疏松和治療癌骨轉(zhuǎn)移的膦酸鹽藥物，其特征在于藥物的主要活性成份包括亞甲基二膦酸鹽或羥基亞甲基二膦酸鹽或乙二胺四甲撐膦酸鹽當(dāng)中的一種膦酸鹽，其中亞甲基二膦酸鹽的一次用量為4mg～600mg，羥基亞甲基二膦酸鹽的一次用量為2mg～300mg，乙二胺四甲撐膦酸鹽的一次用量為3mg～450mg。2．如權(quán)利要求1所述的藥物，其特征在于所說的膦酸鹽是指這些膦酸與鈉離子、鈣離子、鋅離子、四價(jià)锝離子或者是乙二胺四甲撐膦酸與三價(jià)鐵離子、釤離子形成的膦酸鹽或锝絡(luò)合物。3．如權(quán)利要求1或2所述的藥物，其特征在于在制藥學(xué)允許的還原劑存在條件下，由高锝酸鈉與膦酸生成的锝[99Tc]膦酸鹽中，每單位藥物的锝[99Tc]的含量為0.04μg～2.00μg。4．如權(quán)利要求3所述的藥物，其特征在于所說的制藥學(xué)允許的還原劑為氯化亞錫或氟化亞錫或二氧化硫脲，每單位藥物中其含量為0.3mg～1.0mg。5．如權(quán)利要求3所述的藥物，其特征在于锝[99Tc]的膦酸鹽藥物中還含有抗氧化劑抗壞血酸或龍膽酸，每單位藥物中其含量為0.2mg～1.0mg。6．如權(quán)利要求4所述的藥物，其特征在于锝[99Tc]的膦酸鹽藥物中還含有抗氧化劑抗壞血酸或龍膽酸，每單位藥物中其含量為0.2mg～1.0mg。7．如權(quán)利要求1或2或4或5或6所述的藥物，其特征在于其主要活性成份膦酸鹽的比例在總體活性成份中至少占50％。8．如權(quán)利要求3所述的藥物，其特征在于其主要活性成份膦酸鹽的比例在總體活性成份中至少占50％。全文摘要本發(fā)明提供了一種用于治療骨質(zhì)疏松和治療癌骨轉(zhuǎn)移的膦酸鹽藥物,其主要活性成份包括亞甲基二膦酸鹽或羥基亞甲基二膦酸鹽或乙二胺四甲撐膦酸鹽當(dāng)中的一種膦酸鹽,其中亞甲基二膦酸鹽的一次用量為4mg～600mg,羥基亞甲基二膦酸鹽的一次用量為2mg～300mg,乙二胺四甲撐膦酸鹽的一次用量為3mg～450mg。發(fā)明的三種膦酸鹽在通過抑制骨吸收來治療骨質(zhì)疏松和治療癌骨轉(zhuǎn)移方面與同類藥物相比具有療效更好且毒副作用小的優(yōu)越效果。文檔編號A61P19/00GK1302609SQ0010008公開日2001年7月11日申請日期2000年1月6日優(yōu)先權(quán)日2000年1月6日發(fā)明者李茂良,李明起,張毅,李敏,鐘國標(biāo),苑嬌梅,程作用,王翰申請人:中國核動(dòng)力研究設(shè)計(jì)院