一種降尿酸肽螯合鈣及其制備方法和用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于秋刀魚的精深加工領(lǐng)域，具體涉及一種來源于秋刀魚的降尿酸肽螯合 鈣，及其制備方法和用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 尿酸是內(nèi)源性嘌呤和飲食中嘌呤的代謝產(chǎn)物，主要由細(xì)胞代謝分解的核酸和其他 嘌呤類化合物經(jīng)酶作用分解而來。人體中尿酸20%來源于富含嘌呤或核酸蛋白食物，屬外 源性；而80%來源于內(nèi)源性嘌呤代謝。人體每天產(chǎn)生的尿酸中有將近70%經(jīng)過腎臟排泄， 一旦尿酸生成過量和/或排泄減少，將引起血尿酸水平的上升，當(dāng)血尿酸持續(xù)上升時(shí)，則會 引起尿酸鹽在軟組織中的沉積，進(jìn)而誘發(fā)高尿酸血癥和痛風(fēng)甚至累及生命。
[0003] 隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人們的生活水平極大地提高，人們的飲食結(jié)構(gòu)和生活方式也隨 之發(fā)生了改變，近年來高尿酸病的發(fā)病率呈明顯上升的趨勢，且易發(fā)于中老年人。雖然目前 已有一些具有明顯降尿酸或抗痛風(fēng)的藥物，但都不同程度存在毒副作用，使得人們對健康 藥物和保健食品的需求更加迫切。
[0004] 生物活性肽是指由氨基酸通過肽鍵連接起來的具有某些特殊生理活性的多肽物 質(zhì)，其肽鏈長度不一，結(jié)構(gòu)各不相同，導(dǎo)致其具有不同的生理活性，如降血壓、降膽固醇、抗 血栓、抗癌、抗氧化等。經(jīng)過科研工作者的不懈努力，越來越多的生物活性肽被不斷發(fā)現(xiàn)。
[0005] 此外，高尿酸血癥會引起通風(fēng)癥的發(fā)作，主要是由于當(dāng)血液中尿酸濃度達(dá)到飽和 時(shí)，尿酸水平的繼續(xù)增高會使得尿酸發(fā)生結(jié)晶，形成通風(fēng)石并沉積在關(guān)節(jié)內(nèi)的滑液中，不僅 使得滑液喪失潤滑保護(hù)關(guān)節(jié)的作用，反而會像沙漿一樣與關(guān)節(jié)摩擦、使病人疼痛難受形成 痛風(fēng)，而且還會磨壞關(guān)節(jié)表面的鈣質(zhì)，使得關(guān)節(jié)的承重能力更差，變形更嚴(yán)重。在我國，高尿 酸患者常見于中老年人，他們本來就存在不同程度的缺鈣，導(dǎo)致情況惡化。因此，在治療或 預(yù)防高尿酸血癥的同時(shí)，也應(yīng)該重視鈣的補(bǔ)充和吸收。
[0006] 秋刀魚是一種海洋魚，其長期在海洋特殊環(huán)境中生存，其內(nèi)部必定存在某些獨(dú)特 的生物活性物質(zhì)，如果能夠?qū)⑦@些生物活性物質(zhì)釋放出來，并且與鈣質(zhì)結(jié)合，用于治療和 預(yù)防高尿酸癥，既能達(dá)到降尿酸的效果，又可起到補(bǔ)鈣的作用，將具有極大的經(jīng)濟(jì)和社會意 義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的首要目的在于提供一種降尿酸肽螯合鈣的制備方法，該方法是采用生物 酶解技術(shù)將秋刀魚內(nèi)部的降尿酸活性片段釋放出來，并將其與鈣發(fā)生螯合反應(yīng)。
[0008] 本發(fā)明的另一目的在于提供由上述方法制得的降尿酸肽螯合鈣，該產(chǎn)品兼具降尿 酸和補(bǔ)鈣作用。
[0009] 本發(fā)明的再一目的在于提供上述的降尿酸肽螯合鈣的用途。
[0010] 本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0011] 一種降尿酸肽螯合鈣的制備方法，包括以下步驟：
[0012] (1)秋刀魚預(yù)處理：秋刀魚去頭、去內(nèi)臟，清洗干凈，過絞肉機(jī)絞碎，加入秋刀魚碎 肉質(zhì)量3~5倍的水，在40~50°C下加熱攪拌1~2小時(shí)，然后調(diào)節(jié)體系pH值至4. 2,繼 續(xù)攪拌加熱1~1. 5小時(shí)，離心分離，棄除上清液和上層油脂，取沉淀物；
[0013] (2)降尿酸肽的制備：往秋刀魚沉淀物中加入其質(zhì)量1~1. 5倍的水，調(diào)節(jié)體系pH 值至7. 0,然后加入蛋白酶，在50~55°C下保溫水解6~9小時(shí)后，滅酶，離心，取上清液， 得到秋刀魚降尿酸肽液；以秋刀魚沉淀物的質(zhì)量為計(jì)算基準(zhǔn)，蛋白酶的總加入量占1. 5~ 3.0% ；
[0014] (3)秋刀魚肽螯合鈣的制備：將秋刀魚降尿酸肽液的pH值調(diào)至7. 0~8. 5,按秋刀 魚降尿酸肽液固形物質(zhì)量30~50%加入氯化鈣固體，在30~35°C下保溫30~60min，然 后加入無水乙醇攪拌15~30min;此處，生成的螯合鈣不溶于無水乙醇，加入無水乙醇可以 達(dá)到分離螯合鈣的目的；將反應(yīng)物離心，取沉淀物真空干燥，得到降尿酸肽螯合鈣產(chǎn)品；
[0015] 所述的調(diào)節(jié)體系pH值是用0.1~0.5mol/L的NaOH溶液或HC1溶液調(diào)節(jié)；
[0016] 所述的離心是5000r/min離心15~20min ;
[0017] 步驟⑵所述的蛋白酶是商業(yè)用的堿性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶，優(yōu)選諾維信公司的 堿性蛋白酶（Alcalase 2. 4L)和風(fēng)味蛋白酶（Flavourzyme 500MG);堿性蛋白酶的加入量 占秋刀魚沉淀物質(zhì)量的0. 6~0. 8%，風(fēng)味蛋白酶的加入量占秋刀魚沉淀物質(zhì)量的1. 0~ 1. 5% ；
[0018] 步驟（3)中，無水乙醇質(zhì)量為秋刀魚降尿酸肽液質(zhì)量的8~12倍。
[0019] 由上述方法制得的降尿酸肽螯合鈣可用于制備具有降尿酸和/或補(bǔ)鈣功效的藥 物和保健品，在應(yīng)用時(shí)，可以將其與具有降尿酸作用的中草藥復(fù)配。
[0020] 本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果：
[0021] (1)本發(fā)明首先通過現(xiàn)代生物酶解技術(shù)釋放秋刀魚蛋白中的活性片段，然后采用 濕法螯合制備蛋白肽螯合鈣產(chǎn)品。從秋刀魚蛋白中釋放出來的生物活性肽段具有明顯降尿 酸功效，同時(shí)，該蛋白肽具有良好的螯合鈣質(zhì)的作用，制備得到的降尿酸肽螯合鈣產(chǎn)品不僅 具有顯著的降尿酸作用，同時(shí)解決了對維持骨、肌肉功能至關(guān)重要的鈣的正常吸收與利用 的損失問題，可成為一種優(yōu)秀的兼?zhèn)浣的蛩岷脱a(bǔ)充鈣質(zhì)的產(chǎn)品。
[0022] (2)本發(fā)明工藝操作簡單、生產(chǎn)成本低、沒有任何污染，所得降尿酸肽螯合鈣產(chǎn)品 的降尿酸活性強(qiáng)，且鈣的吸收率高。
【附圖說明】
[0023] 圖1是各實(shí)施例和對比例產(chǎn)品在不同pH值條件下的溶解性柱狀圖。
【具體實(shí)施方式】
[0024] 下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限 于此。
[0025] 以下各實(shí)施例中，各樣品對黃嘌呤氧化酶抑制率的實(shí)驗(yàn)方法如下：
[0026] (1)溶液的配置
[0027] 0?2mol/L (pH 7. 5)磷酸緩沖液（PBS):準(zhǔn)確稱取 30. 0838g Na2HP04 ? 12H20 和 2. 4962g NaH2P04 ? 2H20,用去離子水溶解，定容至500ml。
[0028] 黃嘌呤溶液：準(zhǔn)確稱取6. 4mg黃嘌呤，先用1ml1M NaOH將其溶解，再加入100ml PBS，以1M HC1調(diào)節(jié)pH值至7. 5。
[0029] 黃嘌呤氧化酶：取120 y 1酶液，以PBS稀釋至8ml。
[0030] 尿酸標(biāo)曲：準(zhǔn)確稱取10mg尿酸，加入10ml水，再稀釋至0. 1~0. 9mg/ml。
[0031] 醋酸胺-冰醋酸：準(zhǔn)確稱取醋酸胺3. 85g定容至1000ml，然后加入4ml冰醋酸。
[0032] (2)樣品預(yù)處理：
[0033] 將樣品稀釋至40mg/ml，在96孔酶標(biāo)板中依次加入50 y 1樣品與50 y 1黃嘌呤，每 個(gè)樣品做3個(gè)平行，37°C保溫lOmin后加入150 y 1黃嘌呤氧化酶，37°C繼續(xù)保溫20min后 加入80 y 1 1M HC1終止反應(yīng)，過0. 25 y m水性膜，待測。
[0034]色譜柱：ZorbaxEclipseXDB-C18 柱（5ym，4.6X 250mm,安捷倫），
[0035] 液相條件：洗脫液為10%甲醇+90%醋酸胺-冰醋酸溶液，進(jìn)樣體積為20yL，流 速lml/min，檢測波長為290nm，運(yùn)行時(shí)間10min〇
[0036] (3)計(jì)算公式
[0037]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種降尿酸肽螯合鈣的制備方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 秋刀魚預(yù)處理：秋刀魚去頭、去內(nèi)臟，清洗干凈，過絞肉機(jī)絞碎，加入秋刀魚碎肉質(zhì) 量3~5倍的水，在40~50°C下加熱攪拌1~2小時(shí)，然后調(diào)節(jié)體系pH值至4. 2,繼續(xù)攪 拌加熱1~1. 5小時(shí)，離心分離，棄除上清液和上層油脂，取沉淀物； (2) 降尿酸肽的制備：往秋刀魚沉淀物中加入其質(zhì)量11~1. 5倍的水，調(diào)節(jié)體系pH 值至7. 0,然后加入蛋白酶，在50~55°C下保溫水解6~9小時(shí)后，滅酶，離心，取上清液， 得到秋刀魚降尿酸肽液；以秋刀魚沉淀物的質(zhì)量為計(jì)算基準(zhǔn)，蛋白酶的總加入量占1. 5~ 3. 0% ； (3) 秋刀魚肽螯合鈣的制備：將秋刀魚降尿酸肽液的pH值調(diào)至7. 0~8. 5,按秋刀魚降 尿酸肽液固形物質(zhì)量30~50%加入氯化鈣固體，在30~35°C下保溫30~60min，然后加 入無水乙醇攪拌15~30min，離心，取沉淀物真空干燥，得到降尿酸肽螯合鈣產(chǎn)品。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的降尿酸肽螯合鈣的制備方法，其特征在于：步驟（2)所述的 蛋白酶為堿性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的降尿酸肽螯合鈣的制備方法，其特征在于：堿性蛋白酶的 加入量占秋刀魚沉淀物質(zhì)量的〇. 6-0. 8%，風(fēng)味蛋白酶的加入量占秋刀魚沉淀物質(zhì)量的 I. 0-1. 5%〇
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的降尿酸肽螯合鈣的制備方法，其特征在于：堿性蛋白酶是諾 維信公司的Alcalase 2. 4L，風(fēng)味蛋白酶是諾維信公司的Flavourzyme500MG。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的降尿酸肽螯合鈣的制備方法，其特征在于：步驟（3)中，無水 乙醇質(zhì)量為秋刀魚降尿酸肽液質(zhì)量的8~12倍。
6. -種降尿酸肽螯合鈣，其特征在于：是由權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的方法制備得到。
7. 權(quán)利要求6所述的降尿酸肽螯合鈣在制備具有降尿酸和/或補(bǔ)鈣功效的藥物和保健 品中的應(yīng)用。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的降尿酸肽螯合鈣在制備具有降尿酸和/或補(bǔ)鈣功效的藥物和 保健品中的應(yīng)用，其特征在于：將所述的降尿酸肽螯合鈣與具有降尿酸作用的中草藥復(fù)配。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種降尿酸肽螯合鈣及其制備方法和用途，其制備方法包括以下步驟：將秋刀魚絞碎，然后加熱攪拌，再調(diào)節(jié)pH值至4.2，離心分離取沉淀，加入蛋白酶酶解，酶解產(chǎn)物離心后取上清，即秋刀魚降尿酸肽液；加入氯化鈣固體，然后加入無水乙醇攪拌，離心，取沉淀物真空干燥，得到降尿酸肽螯合鈣產(chǎn)品。本發(fā)明通過現(xiàn)代生物酶解技術(shù)釋放秋刀魚蛋白中的活性片段，然后采用濕法螯合制備蛋白肽螯合鈣產(chǎn)品。從秋刀魚蛋白中釋放出的生物活性肽段具有明顯降尿酸功效，同時(shí)，該蛋白肽具有較好的螯合鈣的作用，制備得到的降尿酸肽螯合鈣產(chǎn)品不僅具有顯著的降尿酸作用，同時(shí)解決了對維持骨、肌肉功能至關(guān)重要的鈣的正常吸收與利用的損失問題。
【IPC分類】A23L1-305, A23L1-304, A23L1-327
【公開號】CN104664454
【申請?zhí)枴緾N201510095099
【發(fā)明人】蘇國萬, 趙謀明, 趙容鐘, 趙強(qiáng)忠, 劉洋
【申請人】華南理工大學(xué)
【公開日】2015年6月3日
【申請日】2015年3月3日