專利名稱：細菌菌株和包含它們的藥物組合物以及該菌株在預(yù)防和治療疾病上的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及細菌菌株和包含它們的藥物組合物以及該菌株在預(yù)防和治療與膽汁酸改變的代謝有關(guān)的或由這種代謝引起的疾病上的用途。
肝膽汁是具有電解質(zhì)組合的類似血漿的有色等張液體。膽汁的主要組分包括水(82％)，膽汁酸(12％)，卵磷脂和其它磷脂(4％)，以及未酯化的膽甾醇(0.7％)。其它成分包括綴合膽紅素，蛋白質(zhì)，電解質(zhì)，粘液以及藥物肝轉(zhuǎn)化的最后產(chǎn)物，激素，等等。在基本條件下，膽汁的肝臟產(chǎn)生量是大約500-1000毫升/天。
主要的膽汁酸膽酸(CA)以及鵝膽酸(CDCA)從肝臟的膽甾醇合成，與甘氨酸以及?；撬峋Y合，并且被排泄到膽汁中。次要的膽汁酸，包括脫氧膽酸(DCA)和石膽酸(LA)，在結(jié)腸中作為主要的膽汁酸的細菌代謝物形成。其它膽汁酸，稱為第三膽汁酸(例如熊去氧膽酸-UDCA)在腸中隨甾醇環(huán)上羥基的酶促差向異構(gòu)化形成。
在正常的膽汁中，甘氨酸對?；撬峋Y合物的比是大約2∶1，而在膽汁阻塞患者中經(jīng)常發(fā)現(xiàn)硫酸鹽和膽汁酸的葡糖苷酸綴合物的增加的濃度。
腸微生物系統(tǒng)把膽汁酸轉(zhuǎn)變成為不同的代謝物。這些生物轉(zhuǎn)化包括在膽汁酸和?；撬峄蚋拾彼嶂g的鍵的水解，形成未綴合或自由的膽汁酸和?；撬峄蚋拾彼帷Ｒ虼宋淳Y合的膽汁酸使得可以發(fā)生C3，C7，和C12位置上的羥基的氧化和在7α和7β位置上的脫羥基化。后一轉(zhuǎn)化導(dǎo)致次要的膽汁酸DCA與LA的形成。主要的膽汁酸(脫綴合的但不是轉(zhuǎn)化的)以及次要的膽汁酸被從腸腔再吸收并進入肝門血流。然后被肝膽囊攝取，與甘氨酸或?；撬峋Y合，并再分泌到膽汁(腸肝循環(huán))中。
通常，膽汁酸池每日循環(huán)大約5至10次。所述池的腸吸收有大約95％的效率，因此，膽汁酸的糞便排出在0.3至0.6克/天的范圍內(nèi)。糞便排出被每日合成等值補償。
因此，在膽汁中存在的膽汁酸池的組合是肝臟和微生物系統(tǒng)酶之間的復(fù)合相互作用產(chǎn)生的結(jié)果。
去綴合活性是許多細菌(需氧菌以及厭氧菌)共有的特征，但是在專性厭氧細菌中特別普通，所說細菌例如，擬桿菌屬、真細菌界、梭狀芽胞桿菌屬、雙歧桿菌屬等等。細菌的大多數(shù)是抗甘氨酸和牛磺酸綴合物兩者活性的；然而，它們中的一些有一定程度的特異性，取決于結(jié)合的氨基酸，以及結(jié)合至甾類化合物核上的氫氧化物的數(shù)量。由細菌水解酶的作用產(chǎn)生的游離膽汁酸可以由羥基類固醇脫氫酶(steroidodehydrogenase)氧化C3，C7和C12位置上存在的羥基。
對膽汁酸的代謝紊亂的興趣來自假設(shè)膽汁酸和/或其代謝物涉及一些肝-膽汁和胃腸疾病的致病機理中所說疾病是膽汁消化不良癥，膽結(jié)石，急性和慢性肝病，結(jié)腸的炎癥性疾病，等等。
在文獻中膽汁酸疏水性與去垢性相關(guān)非常常見；次要的膽汁酸比主要的膽汁酸有更大的疏水性，脫羥基膽酸(DCA)比膽酸(CA)是實際上的更好的去垢劑。因此，在膽汁中DCA增加的濃度可以涉及a)膽甾醇分泌的增加，具有增加的飽和指數(shù)；b)對肝臟細胞的細胞毒素作用。
因此，膽汁酸模式的定性的修正可能是一個決定性的因素，尤其在治療以上提及的病理狀態(tài)中。
這樣，仍然需要有效的細菌菌株或者組合物，它們通過降低7α-脫羥基酶活性，同時降低去綴合，可以用于治療和/或預(yù)防與膽汁酸代謝紊亂相關(guān)的疾病。
還沒有發(fā)現(xiàn)任何細菌菌株能夠以這樣的方式定性修飾膽汁酸模式。
因此，本發(fā)明的一個目的是提供細菌新菌株，特別是革蘭氏-陽性細菌，其在治療和/或預(yù)防與膽汁酸代謝紊亂有關(guān)的或由膽汁酸代謝紊亂引起的疾病上有用。
本發(fā)明的另一個目的是提供包含一種或多種這樣的細菌菌株并且在治療和/或預(yù)防與膽汁酸代謝紊亂有關(guān)的或由膽汁酸代謝紊亂引起的疾病上有用的藥物組合物。
以上目的和其它目的將在以下詳盡描述期間變得更明顯，它們由發(fā)明人達到了，發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)具有降低的7α-脫羥基酶(dehydroxylase)活性或無該活性和降低的使膽汁酸去綴合(deconjugate)能力或無該能力的細菌菌株。這與原先已知的相反。因此，本發(fā)明提供了這些菌株在以有用的方式修飾膽酸以預(yù)防或治療與膽汁酸代謝紊亂有關(guān)的或由膽汁酸代謝紊亂引起的疾病上的用途。
這樣，在第一實施方案中，本發(fā)明提供了細菌新菌株，它們具有低于50％，優(yōu)選地低于25％的7α-脫羥基酶活性，以及低于50％，優(yōu)選地低于25％的綴合膽汁酸去綴合(deconjugation)活性。
根據(jù)本發(fā)明的菌株的本質(zhì)特征在權(quán)利要求1中限定；具有所說特征的特定菌株在從屬權(quán)利要求2至11中限定。
本發(fā)明也提供了用于預(yù)防和/或治療與膽汁酸改變的代謝有關(guān)的或由膽汁酸改變的代謝引起的疾病的藥物組合物，所說的組合物包含根據(jù)本發(fā)明的至少一種細菌菌株。根據(jù)本發(fā)明的組合物的本質(zhì)特征在權(quán)利要求12中限定；所說組合物的特定實施方案在從屬權(quán)利要求13至25中限定。
此外，本發(fā)明提供了根據(jù)本發(fā)明的至少一種細菌菌株在制備所說的藥物組合物上的用途。所說用途的本質(zhì)特征在權(quán)利要求26中限定，特定的實施方案在從屬權(quán)利要求27至36中限定。
在本發(fā)明的上下文中，與膽汁酸代謝紊亂有關(guān)的或由膽汁酸代謝紊亂引起的疾病包括肝臟疾病消化道疾病，如失明環(huán)綜合癥，膽結(jié)石，肝硬化，慢性肝病，急性肝病，囊性纖維變性，肝內(nèi)膽汁阻塞，腸內(nèi)炎癥性疾病，colonpathies，吸收障礙。該藥物組合物也可以用于預(yù)防婦女在懷孕或爾后期間出現(xiàn)膽結(jié)石和用于進行減肥或吃規(guī)定的飲食的受治療者。
細菌菌株的7α-脫羥基酶活性應(yīng)低于低于50％，優(yōu)選地應(yīng)低于25％。所說的7α-脫羥基酶活性值是由以下實施例1描述的方法測定的那些。具體地說，于37℃在添加有2毫克/毫升甘氨膽酸(GCA)或2毫克/毫升?；悄懰?TCA)的15毫升特定的培養(yǎng)基中培養(yǎng)所研究的菌株的107個細胞48小時，然后測定產(chǎn)生的7α-脫羥基化的產(chǎn)物的量。由下式計算7α-脫羥基酶活性的百分比值
培養(yǎng)48小時后
GCA或TCA的質(zhì)量基于上述，待施用的細菌菌株還應(yīng)具有低于50％，優(yōu)選地低于25％的綴合膽汁酸去綴合活性。通過用與描述的測定7α-脫羥基酶活性的培養(yǎng)方法相同的方法，接著測定所形成的脫綴合產(chǎn)物的量來測定脫綴合能力。用下式計算脫綴合活性培養(yǎng)48小時后
GCA或TCA的質(zhì)量本發(fā)明的細菌菌株可以腸道施用。優(yōu)選地，本發(fā)明的細菌菌株口頭施用。
雖然可以施用單一細菌菌株，但施用按照本發(fā)明的兩種或多種細菌的混合物也是可能的。
雖然施用的細菌的確切的劑量隨著患者的狀況和體重、被治療的具體的疾病以及被施用的菌株的性質(zhì)而變化，但經(jīng)施用103到1013個細菌菌株細胞/克可以獲得理想的結(jié)果。為獲得本發(fā)明的好的效果，以在患者腸中置入其重要量的量和濃度施用是優(yōu)選的。因此所說菌株以含有103到1013個細菌菌株細胞/克(優(yōu)選地是108到1012個細菌菌株細胞/克)的組合物施用，并且所說組合物以使患者在治療時在1到365天(優(yōu)選地是在3到60天)期限內(nèi)接著1克到20克菌株/天(優(yōu)選地是1克到20克菌株/天)的用藥方式施用或者在預(yù)防時根據(jù)經(jīng)驗的用藥方式是優(yōu)選的。所說細菌菌株可以以任何適合于腸內(nèi)施用的形式施用，如膠囊，片劑，或口服的液體或者腸內(nèi)施用的液體。
典型地，根據(jù)本發(fā)明的細菌菌株可以在診斷為代謝紊亂后施用。然而，在膽汁膽石的預(yù)防的情況之下，菌株也可以在受治療者被確定為屬于風險群(例如開始懷孕或開始進行減肥或吃規(guī)定的飲食)時施用。也可以在在患者的膽囊摘除之后施用本發(fā)明的菌株。
在一更為優(yōu)選的實施方案中，當所治療的疾病是肝硬化時，提供了共同施用乳果糖。合適地，乳果糖以100毫克到100克/天，優(yōu)選地是1克到20克/天的量施用。
在另一個更為優(yōu)選的實施方案中，提供了共同施用基于膽汁酸的制劑，如熊去氧膽酸或?；桥；切苋パ跄懰?。合適地，熊去氧膽酸或?；切苋パ跄懰嵋?0毫克到3000毫克/天，優(yōu)選地是50毫克到800毫克/天的量施用。
優(yōu)選地，本發(fā)明的藥物組合物包含的細菌菌株的濃度是103至1013個細胞/克，優(yōu)選地是108至1012個細胞/克。藥學上可接受的的載體可以是適合于腸內(nèi)施用，并且與細菌菌株相容的任何載體，如右旋糖，碳酸鈣，以及不同的添加物質(zhì)，如淀粉，明膠，維生素，抗氧化劑，染料或改善味道的物質(zhì)。
本發(fā)明的組合物也可以包含一個可有可無的藥物組分，其與所使用的細菌相容，并能增強存在的有效成分的活性?？鼓憠A能藥物，抗組胺劑，腎上腺素能劑，抗?jié)儎?，抗酸劑，antidiarroic和-抗炎癥性藥物，鎮(zhèn)靜劑，退熱劑，利膽劑、抗風濕劑，止痛藥物，利尿劑，防腐劑，抗脂血癥劑，保肝藥物以及在胃腸能動性上有活性的藥物(例如trimebutine)可以是本文所提及的藥物。
當治療肝硬化時，更為優(yōu)選的是藥物組合物進一步包含乳果糖。合適地，組合物包含100毫克到100克/天，優(yōu)選地是1克到20克/天的乳果糖。當治療肝硬化和慢性肝炎時，藥物組合物包含基于膽汁酸的制劑(如熊去氧膽酸或牛磺熊去氧膽酸)是優(yōu)選的。合適地，組合物包含10至3,000毫克/天的這樣的膽汁酸制劑，優(yōu)選地是50至800毫克/天的熊去氧膽酸或?；切苋パ跄懰?。
隨著下列例證性實施方案的描述，本發(fā)明的其它特征會變得明顯，這些實施方案用來說明本發(fā)明但不用來限制本發(fā)明。
實施例實施例1試驗了下列種嗜熱鏈球菌，屎鏈球菌，保加利亞乳桿菌，胚牙乳桿菌，嬰兒雙歧桿菌。在特定的營養(yǎng)培養(yǎng)基(15毫升)中重復(fù)培養(yǎng)各菌株(107CFU)；＂CFU＂指＂菌落＂形成單位。
不同種所使用的培養(yǎng)基表嬰兒雙歧桿菌MRS+0.5％葡萄糖(在稀釋成20％無菌溶液滅菌之后添加)嗜熱鏈球菌 M17所有其它菌株MRS
MRS培養(yǎng)基組成 (克/升)通用胨 10.0克肉膏5.0克酵母膏 5.0克磷酸氫鉀2.0克吐溫80 1.0克二堿價檸檬酸銨 2.0克醋酸鈉 5.0克硫酸鎂 0.1克硫酸錳 0.05克制備以50克/升溶解到蒸餾水中，在121℃滅菌15分鐘-25℃時pH值6.5+-0.1。
M17培養(yǎng)基(Merck)的組成 (克/升)大豆粉胨 5.0克肉胨 2.5克酪蛋白胨 2.5克酵母膏 2.5克肉膏 5.0克乳糖 5.0克抗壞血酸 0.5克β-甘油磷酸鈉 19.0克磷酸鎂 0.25克制備以42.5克/升溶解到蒸餾水中，在121℃滅菌15分鐘-25℃時pH值7.2+-0.1。
在厭氧條件下培養(yǎng)嬰兒雙歧桿菌，由于已知它是厭氧細菌。于37℃的培養(yǎng)24小時后，向每根試管添加相對于30毫克量的膽汁鹽以獲得2毫克/毫升的最終濃度。所使用的膽汁酸是從西格馬化學公司獲得的甘氨膽酸(GCA)和?；悄懰?TCA)。各膽汁酸單獨地添加至每一系列的細菌培養(yǎng)物中。
在培養(yǎng)48小時之后，2分鐘內(nèi)添加異丙醇3毫升。然后在400rpm下離心15分鐘，并收集上清液(5毫升)。上清液在-30℃下冷藏直到被分析。由HPLC(高效液態(tài)色譜)測定綴合膽汁鹽存在的百分比，其中采用裝配有檢測器二極管排列模式(Diode array mod)1000和Spherisorb5μmODS2C18反向柱，流動相由甲醇/緩沖磷酸鹽(20mMol)(在水/乙腈/水(150∶60∶20∶20，體積比)中，pH值2.5)組成，流速0.85毫升/分鐘，檢測波長為205nm。在氮氣下干燥的100微升待試樣品用100微升流動相抽提，所述流動相包含濃度為2毫克/毫升的內(nèi)標7α-OH-12α-OH-二羥基-58-膽烷酸(Calbiochem美國)。
與細菌培養(yǎng)物一起培養(yǎng)的膽汁酸的回收百分比由檢測的膽汁酸的面積(GCA或TCA)與內(nèi)標的面積的比計算。當在培養(yǎng)48小時后的細菌培養(yǎng)物中發(fā)現(xiàn)綴合膽汁酸的數(shù)量低于50％時，在二氧化硅60凝膠板上進行薄層色譜(TLC)，以檢測CA和DCA的存在，用環(huán)己烷/異丙醇/醋酸為流動相(30∶10∶1，體積比)。在每一平板上上樣20微升酒精提取物，20微升CA和DCA的溶液，20微升CA，以及20微升DCA。平板在室溫展開后用硫酸處理并加熱到145℃，直到出現(xiàn)有色斑點。
去綴合實驗的結(jié)果(表I)說明，用GCA試驗的16個菌株中的5個能夠完全使添加至培養(yǎng)物中的膽汁酸去綴合，如以前文獻中報道的和所有研究者廣泛知道的。令人驚奇地是，十種菌株對能使GCA去綴合但不完全，范圍從9％至90％(表I)。在需氧和厭氧細菌之間沒有任何區(qū)別。兩種菌株，嗜熱鏈球菌YS52和嬰兒雙歧桿菌Bi6對GCA沒有任何去綴合活性。此外，菌株YS52不進攻膽汁酸-牛磺酸鍵。
16個試驗的菌株中僅有一個能使TCA全部去綴合嬰兒雙歧桿菌Bi6。
脫羥基作用實驗的結(jié)果(表II)說明16個菌株中僅有一個能使GCA完全脫羥基。6個菌株一點也無脫羥基活性YS25；SF2；SF4；LA3；LA10；Bi6。其它的菌株能使GCA對脫羥基但不完全，范圍從9％至90％。對TCA而言，7個菌株根本不能使其脫羥基YS52；SF3；LA3；LA10；LB1；LB7；LB77。1個菌株使TCA完全脫羥基；其它菌株以一定的百分比使TCA脫羥基。
表I在培養(yǎng)48小時之后由細菌培養(yǎng)物產(chǎn)生的GCA和TCA去綴合百分比細菌保藏號 GCA％TCA％嗜熱鏈球菌YS46 I-1668 99嗜熱鏈球菌YS48 I-1669 17 11嗜熱鏈球菌YS52 I-1670 00屎鏈球菌SF2100 3屎鏈球菌SF3 I-1671 27 0屎鏈球菌SF4100 12保加利亞乳桿菌LA3 100 80保加利亞乳桿菌LA10 100 95胚牙乳桿菌LB1 I-1664 90胚牙乳桿菌LB3 I-1665 20 12胚牙乳桿菌LB7 I-1666 14 0胚牙乳桿菌LB77 I-1667 20 0嬰兒雙歧桿菌Bi280 15嬰兒雙歧桿菌Bi390 10嬰兒雙歧桿菌Bi4100 26嬰兒雙歧桿菌Bi60100表II在培養(yǎng)48小時之后由細菌培養(yǎng)物產(chǎn)生的GCA和TCA脫羥基百分比細菌保藏號 GCA％TCA％嗜熱鏈球菌YS46 I-1668 99嗜熱鏈球菌YS48 I-1669 17 11嗜熱鏈球菌YS52 I-1670 00屎鏈球菌SF203屎鏈球菌SF3 I-1671 27 0屎鏈球菌SF4012保加利亞乳桿菌LA3 00保加利亞乳桿菌LA10 00胚牙乳桿菌LB1 I-1664 90胚牙乳桿菌LB3 I-1665 20 12胚牙乳桿菌LB7 I-1666 14 0胚牙乳桿菌LB77 I-1667 20 0嬰兒雙歧桿菌Bi280 15嬰兒雙歧桿菌Bi390 10嬰兒雙歧桿菌Bi4100 26嬰兒雙歧桿菌Bi60100這些菌株已以下列保藏號保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur嗜熱鏈球菌YS46I-1668嗜熱鏈球菌YS48I-1669嗜熱鏈球菌YS52I-1670屎鏈球菌SF3 I-1671胚牙乳桿菌LB1 I-1664胚牙乳桿菌LB3 I-1665胚牙乳桿菌LB7 I-1666胚牙乳桿菌LB77I-1667下列菌株保藏在Centro Ricerche Sitia-Yomo S.p.A.-Strada perMerlino，3-ZELO BUON PERSICO(米蘭)-意大利，并可從該保藏單位獲得，各菌株由以下指出的識別號區(qū)別屎鏈球菌SF2SF2屎鏈球菌SF4SF4保加利亞乳桿菌LA3 LA3保加利亞乳桿菌LA10 LA10嬰兒雙歧桿菌Bi2Bi2嬰兒雙歧桿菌Bi3Bi3嬰兒雙歧桿菌Bi4Bi4嬰兒雙歧桿菌Bi6Bi6這些結(jié)果顯示我們試驗的菌株的大多數(shù)具有使膽汁酸去綴合的低的能力，并且有菌株一點也不去綴合。這一觀察是驚人的，因為還沒有已知乳酸細菌使膽汁鹽去綴合。而且，明顯的是，菌株的酶對結(jié)合到側(cè)鏈上的特異性膽汁酸是選擇性的。在這種研究中，最清楚的例子是嬰兒雙歧桿菌，這一菌株不能使甘氨酸-綴合膽汁酸去綴合，但是能使?；撬?綴合的膽汁酸完全去綴合。一些其它菌株(LB1，LB7，LB77，SF3)不能使TCA去綴合，但在一定程度上能使GCA去綴合。
總之，已發(fā)現(xiàn)了去綴合和脫羥基能力弱的或沒有能力的菌株。實施例2三個健康自愿者在用每克包含1×1011個嗜熱鏈球菌YS52細胞的lactobacilli制劑處理(每天6克，共28天)后，試驗他們的膽汁酸含量。在開始處理之前和12小時饑餓后，將管插入受試者中，在用藍肽刺激后，收集膽汁，于-80℃冷凍。用回波描記術(shù)估價膽囊收縮，由Rx(熒光透視法)檢查所述管子在十二指腸的第二個部分中的位置。
在4周治療之后，對受試者第二次插管，并收集膽汁。試驗以前描述的一些膽汁酸在膽汁樣品中的含量。結(jié)果在表III中示出。
表III膽汁酸 病人#1病人#2病人#3前 后前 后前后Glychenodeoxycholic32 1522 152812Glycodeoxycholic 6 5 9 2 43Glycourscdeoxycholic 1 5 1 7 14?；悄懰? 9 2615 251221脫氧?；悄懰? 1 3 5 8 39注(膽汁酸按親水能力順序列出，其與去垢性成反向關(guān)系)?；悄懰崤；敲撗跄懰酖lycourscdeoxycholicGlycadeoxycholicGlychenodeoxycholic這一實驗證實實施例1中所示的結(jié)果，如果施用本發(fā)明的目標菌株，則對一種主要的膽汁酸有較低的去綴合作用。所獲得的結(jié)果是在腸肝循環(huán)中更長地保持主要的膽汁酸。
膽汁酸的性質(zhì)在表III的注釋中指出。因此，按照這些結(jié)果，施用選擇的細菌菌株可以降低膽汁酸的去垢性，從而降低細胞溶解活性。實施例3用包含嗜熱鏈球菌YS46和YS48(兩種菌株)、保加利亞乳桿菌LB1，LB7和LB77(三種菌株)處理14個慢性肝炎患者。對于制備包含各菌株的重量的相同分數(shù)的混合物而言，在與其它的混合之前，使各菌株達每克150×109個細胞的濃度。每天施用6克所說的混合物，共28天。肝臟酶在處理前和處理后測量，結(jié)果示于表IV中。
表IV用細菌混合物處理對肝臟酶天冬氨酸氨基移轉(zhuǎn)酶(AST；SGOT)和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT；SGPT)的影響病人 AST(SGOT) ALT(SGPT)前 后 前 后#1 92 59 10246#2 89 67 96 42#3 17486 97 39#4 12191 10266#5 11681 11155#6 15687 94 76#7 16366 69 37#8 78 64 12257#9 10939 87 86#1016670 10248#1156 24 11862#1213183 96 79#1313786 94 74#1484 87 144114平均 11971 10263標準偏差 36 19 17 21配對數(shù)據(jù)的t試驗P＜0,001P＜0,00權(quán)利要求
1.一種具有下列特性的細菌菌株(a)低于50％的7α-脫羥基酶活性，和(b)低于50％的膽汁酸去綴合活性，以及保持活性(a)和(b)的其后代、突變體和衍生物。
2.權(quán)利要求1的菌株，該菌株是革蘭氏-陽性細菌菌株。
3.權(quán)利要求1和/或2的菌株，該菌株屬于選自嗜熱鏈球菌，屎鏈球菌和保加利亞乳桿菌的種。
4.權(quán)利要求3的菌株，其中所說的細菌菌株是嗜熱鏈球菌YS52，該菌株以保藏號I-1670保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
5.權(quán)利要求3的菌株，其中所說的細菌菌株是嗜熱鏈球菌YS46，該菌株以保藏號I-1668保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
6.權(quán)利要求3的菌株，其中所說的細菌菌株是嗜熱鏈球菌YS48，該菌株以保藏號I-1669保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
7.權(quán)利要求3的菌株，其中所說的細菌菌株是屎鏈球菌SF3，該菌株以保藏號I-1671保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-Institut Pasteur。
8.權(quán)利要求3的菌株，其中所說的細菌菌株是保加利亞乳桿菌LB1，該菌株以保藏號I-1664保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
9.權(quán)利要求3的菌株，其中所說的細菌菌株是保加利亞乳桿菌LB3，該菌株以保藏號I-1665保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
10.權(quán)利要求3的菌株，其中所說的細菌菌株是保加利亞乳桿菌LB7，該菌株以保藏號I-1666保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
11.權(quán)利要求3的菌株，其中所說的細菌菌株是保加利亞乳桿菌LB77，該菌株以保藏號I-1667保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-Institut Pasteur。
12.一種用于預(yù)防和治療與膽汁酸改變的代謝有關(guān)的或由膽汁酸改變的代謝引起的疾病的藥物組合物，其特征在于該組合物包含能產(chǎn)生使患者改變的代謝正?；饔玫挠行Я康?1)至少一種具有下列活性(a)和(b)的細菌菌株以及保持活性(a)和(b)的其后代、突變體和衍生物(a)低于50％的7α-脫羥基酶活性，和(b)低于50％的膽汁酸去綴合活性。(2)藥學上可接受的載體。
13.權(quán)利要求12的藥物組合物，其中所說的至少一種細菌菌株是革蘭氏-陽性細菌菌株。
14.權(quán)利要求12和/或13的組合物，其中所說的至少一種細菌菌株屬于選自嗜熱鏈球菌，屎鏈球菌和保加利亞乳桿菌的種。
15.權(quán)利要求14的組合物，其中所說的細菌菌株是嗜熱鏈球菌YS52，該菌株以保藏號I-1670保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
16.權(quán)利要求14的組合物，其中所說的細菌菌株是嗜熱鏈球菌YS46，該菌株以保藏號I-1668保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
17.權(quán)利要求14的組合物，其中所說的細菌菌株是嗜熱鏈球菌YS48，該菌株以保藏號I-1669保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
18.權(quán)利要求14的組合物，其中所說的細菌菌株是屎鏈球菌SF3，該菌株以保藏號I-1671保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
19.權(quán)利要求14的組合物，其中所說的細菌菌株是保加利亞乳桿菌LB1，該菌株以保藏號I-1664保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
20.權(quán)利要求14的組合物，其中所說的細菌菌株是保加利亞乳桿菌LB3，該菌株以保藏號I-1665保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
21.權(quán)利要求14的組合物，其中所說的細菌菌株是保加利亞乳桿菌LB7，該菌株以保藏號I-1666保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
22.權(quán)利要求14的組合物，其中所說的細菌菌株是保加利亞乳桿菌LB77，該菌株以保藏號I-1667保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-Institut Pasteur。
23.權(quán)利要求12的組合物，該組合物每克包含103至1013個所述細菌菌株細胞。
24.權(quán)利要求12的組合物，該組合物還包含乳果糖。
25.權(quán)利要求12的組合物，該組合物還包含選自熊去氧膽酸(ursodeoxycholic acid)和?；切苋パ跄懰?tauroursodeoxycholicacid)的基于膽汁酸的制劑。
26.至少一種具有下列活性(a)和(b)的細菌菌株以及保持活性(a)和(b)的其突變體和衍生物在制備預(yù)防和治療與膽汁酸改變的代謝有關(guān)的或由膽汁酸改變的代謝引起的疾病之藥物組合物上的用途(a)低于50％的7α-脫羥基酶活性，和(b)低于50％的膽汁酸去綴合活性。
27.權(quán)利要求26的用途，其中所說的至少一種細菌菌株是革蘭氏-陽性細菌菌株。
28.權(quán)利要求26和/或27的用途，其中所說的至少一種細菌菌株屬于選自嗜熱鏈球菌，屎鏈球菌和保加利亞乳桿菌的種。
29.權(quán)利要求28的用途，其中所說的細菌菌株是嗜熱鏈球菌YS52，該菌株以保藏號I-1670保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
30.權(quán)利要求28的用途，其中所說的細菌菌株是嗜熱鏈球菌YS46，該菌株以保藏號I-1668保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
31.權(quán)利要求28的用途，其中所說的細菌菌株是嗜熱鏈球菌YS48，該菌株以保藏號I-1669保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
32.權(quán)利要求28的用途，其中所說的細菌菌株是屎鏈球菌SF3，該菌株以保藏號I-1671保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-Institut Pasteur。
33.權(quán)利要求28的用途，其中所說的細菌菌株是保加利亞乳桿菌LB1，該菌株以保藏號I-1664保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
34.權(quán)利要求28的用途，其中所說的細菌菌株是保加利亞乳桿菌LB3，該菌株以保藏號I-1665保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
35.權(quán)利要求28的用途，其中所說的細菌菌株是保加利亞乳桿菌LB7，該菌株以保藏號I-1666保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
36.權(quán)利要求28的用途，其中所說的細菌菌株是保加利亞乳桿菌LB77，該菌株以保藏號I-1667保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-Institut Pasteur。
全文摘要
本發(fā)明提供了具有下列特性的細菌菌株(a)低于50％的7α-脫羥基酶活性，和(b)低于50％的膽汁酸去綴合活性；也提供了保持活性(a)和(b)的所述菌株的后代、突變體和衍生物；還提供了包含一種或多種這樣的菌株的藥物組合物和所述菌株在預(yù)防和治療與膽汁酸改變的代謝有關(guān)的或由膽汁酸改變的代謝引起的疾病上的用途。
文檔編號C12N1/21GK1165857SQ9710344
公開日1997年11月26日 申請日期1997年3月10日 優(yōu)先權(quán)日1996年3月11日
發(fā)明者R·M·A·卡維里爾偉斯麗, C·德斯墨尼 申請人:R·M·A·卡維里爾偉斯麗, C·德斯墨尼