專利名稱：來自β溶血性鏈球菌菌株的ORF554的組合物和使用方法
來自β溶血性鏈球菌菌株的ORF 554的組合物和使用方法背景總的來說，本發(fā)明涉及細(xì)菌學(xué)、傳染病和免疫學(xué)領(lǐng)域。更具體而言，本發(fā)明涉及包 括β溶血性鏈球菌(hemolytic streptococci)多肽的多核苷酸、多肽和免疫原性組合物。β溶血性鏈球菌(BHS)物種是負(fù)責(zé)從淺表感染到更嚴(yán)重病的眾多人疾病的重要 病原體。它們包括來自血清學(xué)A、B、C和G組的物種。A組鏈球菌屬細(xì)菌(GAS;化膿性鏈球 菌(Sti^ptococcus pyogenes))可負(fù)責(zé)大多數(shù)情況的病，并且可以導(dǎo)致非侵入性疾病，例 如咽炎、猩紅熱、膿皰病、蜂窩織炎或丹毒，但某些菌株可以導(dǎo)致更嚴(yán)重的侵入性感染，例如 中毒性休克綜合征、壞死性筋膜炎和敗血病。另外，表面感染的并發(fā)癥可以導(dǎo)致免疫介導(dǎo) 的后遺癥。蘭斯菲爾德的(Lancefield’ s)B組鏈球菌(GBS ；無乳鏈球菌(Str印tococcus agalactiae))是新生兒中的新生兒敗血癥的主要原因，并且可以引起老年患者中的肺炎。 鏈球菌C和G組最初被公認(rèn)為動(dòng)物病原體，但近年來已顯示具有關(guān)于人疾病的強(qiáng)烈潛力。病 一般與A組鏈球菌中相似地呈現(xiàn)其自身，但仍未顯示導(dǎo)致免疫介導(dǎo)的后遺癥。C和G組鏈球 菌通常在具有潛在健康問題的患者中呈現(xiàn)，對(duì)于老年患者具有重要性并且在幾個(gè)鏈球菌物 種中分散。概述在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了由C組或G組鏈球菌開放讀碼框編號(hào)5M0)RF 554) 編碼的新型多肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包括SEQ ID N0:11中所示的氨基 酸序列的分離多肽，所述序列是得自下述的新型幾種不同ORF 5M序列的共有序列停 乳鏈球菌似馬亞種(Str印tococcus dysgalactiae subsp. Equisimilis)，艮口 SEQ ID N0: 2、SEQID NO :8、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO 26 和 SEQ ID NO 28 ；星座鏈球菌星座亞種 (Streptococcus constellatus subsp. Constellatus),艮SEQ IDNO 4 禾口 SEQ ID NO 32 ； 咽頰炎鏈球菌(Str印tococcus anginosus)，即 SEQ ID NO :6 和 SEQ ID NO :30 ；或其片段。 在某些實(shí)施方案中，分離多肽包括如下氨基酸序列或其片段或由如下氨基酸序列或其片段 組成，所述氨基酸序列在 SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :6、SEQID NO :8、SEQ ID NO 10,SEQ ID NO 26,SEQ ID NO 28、SEQ IDNO 30 禾口 / 或 SEQ ID NO :32 中顯示。在某些 實(shí)施方案中，分離多肽具有肽基脯氨酰異構(gòu)酶(PPI)活性。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了包括如下氨基酸序列或由如下氨基酸序列組成的分 離多肽，所述氨基酸序列與 SEQ ID NO 2,SEQ IDNO :4、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :10, SEQ IDNO :11、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :30 和 / 或 SEQID NO :32 至少90 %、95 %或99 %等同。在某些實(shí)施方案中，分離多肽具有肽基脯氨酰異構(gòu)酶活性。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了編碼鏈球菌ORF 5M多肽或其片段的分離多核苷 酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了分離多核苷酸，其編碼包括SEQ ID N0:11中所示的氨 基酸序列或其片段的多肽。在某些實(shí)施方案中，分離多核苷酸編碼包括如下氨基酸序列或 其片段或由如下氨基酸序列或其片段組成的多肽，所述氨基酸序列在SEQ ID NO 2, SEQID NO :4、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :28、SEQ ID N0:30和SEQ ID NO :32中的任何一個(gè)或多個(gè)中顯示。在某些實(shí)施方案中，分離多核苷酸包括如下核苷酸序列或其片段或由如下核苷酸序列或其片段組成，所述核苷酸序列在SEQ ID NO :1、SEQ IDNO :3、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :9、SEQ IDNO :25、SEQ ID NO 27,SEQ ID NO : 和SEQ ID NO :31中的任何一個(gè)或多個(gè)中顯示。在某些實(shí)施方案中，多核 苷酸與調(diào)節(jié)元件可操作地連接。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了編碼包括如下氨基酸序列或由如下氨基酸序列組成 的多肽(或其片段)的分離多核苷酸，所述氨基酸序列與SEQ ID NO 2,SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :6,SEQ ID NO :8、SEQID NO 10,SEQ ID NO =IUSEQ ID NO :26、SEQ ID NO :28、SEQID NO :30和SEQ ID NO :32中的任何一個(gè)或多個(gè)至少90%、95%或99%等同。在某些實(shí)施方案 中，分離多肽具有肽基脯氨酰異構(gòu)酶活性。在其他實(shí)施方案中，分離多核苷酸包括如下核苷 酸序列或其片段或由如下核苷酸序列或其片段組成，所述核苷酸序列與SEQ ID NO=USEQ IDNO :3、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :25、SEQ IDNO :27、SEQ ID NO : 和SEQ ID NO :31中的任何一個(gè)或多個(gè)至少90%、95%或99%等同。在某些實(shí)施方 案中，多核苷酸與調(diào)節(jié)元件可操作地連接。在某些實(shí)施方案中，調(diào)節(jié)元件包括誘導(dǎo)型啟動(dòng)子 和/或組成型啟動(dòng)子。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了包括核苷酸序列的多核苷酸載體，所述核苷酸序列 編碼包括如下氨基酸序列或其片段或由如下氨基酸序列或其片段組成的多肽，所述氨基酸 序列與 SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO 1 USEQID NO 26,SEQ ID NO 28、SEQ ID N0:30 禾口 SEQ ID NO :32 中的任何一個(gè)或多個(gè) 至少90%、95%或99%等同，或100%等同。在某些實(shí)施方案中，分離多肽具有肽基脯氨酰 異構(gòu)酶活性。載體可以是例如質(zhì)粒載體、病毒載體等。在其他實(shí)施方案中，多核苷酸載體包 括核苷酸序列(或其片段)，其與 SEQ ID NO :1、SEQ IDNO :3、SEQ ID NO :5、SEQ IDNO :7、 SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :25、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO 29 和 SEQ ID NO 31 中的任何一 個(gè)或多個(gè)至少90%、95%或99%等同，或100%等同。在某些實(shí)施方案中，多核苷酸載體是 表達(dá)載體，其使得能夠產(chǎn)生重組鏈球菌PPI蛋白質(zhì)。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了包括分離多核苷酸的離體細(xì)胞，所述分離多核苷酸 包括如下核苷酸序列或其片段或由如下核苷酸序列或其片段組成，所述核苷酸序列編碼由 ORF 554編碼的C組或G組鏈球菌PPI。在某些實(shí)施方案中，C組或G組鏈球菌PPI由包括 如下氨基酸序列或其片段或由如下氨基酸序列或其片段組成的ORF 554編碼，所述氨基酸 序列與 SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO =IUSEQ ID NO 26,SEQ ID NO 28、SEQ IDNO :30 禾口 SEQ ID NO :32 中的任何一個(gè)或多個(gè) 至少90 %、95 %或99 %等同，或100 %等同。在某些實(shí)施方案中，分離多核苷酸包括如下核 苷酸序列或其片段或由如下核苷酸序列或其片段組成，所述核苷酸序列與SEQID NO =USEQ IDNO 3, SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO :25, SEQ ID NO :27, SEQ ID NO :29和SEQ ID NO :31中的任何一個(gè)或多個(gè)至少90%、95%或99%等同，或100%等同。 在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞產(chǎn)生C組或G組鏈球菌PPI或其片段。在某些實(shí)施方案中，宿主細(xì) 胞包括包含分離多核苷酸的多核苷酸載體，所述分離多核苷酸包括與分離多核苷酸可操作 地連接的調(diào)節(jié)序列。在某些實(shí)施方案中，宿主細(xì)胞包括包含調(diào)節(jié)元件的多核苷酸載體，所述 調(diào)節(jié)元件可以是組成型或誘導(dǎo)型啟動(dòng)子。在某些實(shí)施方案中，宿主細(xì)胞包括其為質(zhì)粒、病毒 載體或表達(dá)載體的多核苷酸載體。在某些實(shí)施方案中，宿主細(xì)胞選自細(xì)菌、哺乳動(dòng)物細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞或酵母細(xì)胞。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了在受試者中引起針對(duì)C組或G組鏈球菌PPI多肽的 免疫應(yīng)答中有用的免疫原性組合物。在某些實(shí)施方案中，免疫原性組合物包括多肽或其片 段或由多肽或其片段組成，所述多肽包括如下氨基酸序列或由如下氨基酸序列組成，所述 氨基酸序列與 SEQ IDNO 2, SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:8、SEQ ID NO :10, SEQ ID NO :11, SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :30 和 SEQ ID NO :32 中的任何一個(gè) 或多個(gè)至少90 %、95 %或99 %等同，或100 %等同。在其他實(shí)施方案中，免疫原性組合物包 括分離多核苷酸或其片段或由分離多核苷酸或其片段組成，所述分離多核苷酸包括如下核 苷酸序列或由如下核苷酸序列組成，所述核苷酸序列與SEQ ID N0:USEQID N0:3、SEQ ID NO :5,SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :25,SEQ ID NO :27,SEQ ID NO :29 和 SEQ ID NO :31中的任何一個(gè)或多個(gè)至少90%、95%或99%等同，或100%等同。在某些實(shí)施方案中， 多核苷酸進(jìn)一步包括調(diào)節(jié)元件，例如調(diào)節(jié)受試者中的分離多核苷酸表達(dá)的誘導(dǎo)型或組成型 啟動(dòng)子。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了包括表位結(jié)合區(qū)或由表位結(jié)合區(qū)組成的免疫學(xué)試 劑，所述表位結(jié)合區(qū)與由C組或G組鏈球菌ORF 5M編碼的鏈球菌PPI結(jié)合。在某些實(shí)施 方案中，免疫學(xué)試劑包括抗體或由抗體組成，所述抗體與由ORF 5M編碼的至少一種鏈球 菌PPI多肽特異性結(jié)合。在某些實(shí)施方案中，抗體結(jié)合包括如下氨基酸序列或由如下氨基 酸序列組成的多肽，所述氨基酸序列與SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :11、SEQ IDNO :26、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO 30 和 SEQ ID NO :32中的任何一個(gè)或多個(gè)至少90%、95%或99%等同，或100%等同?？贵w可以是單 克隆抗體或多克隆抗體。在某些實(shí)施方案中，抗體是嵌合抗體，包括例如人源化抗體。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了用于誘導(dǎo)受試者中針對(duì)β溶血性鏈球菌或β溶血 性鏈球菌感染的免疫應(yīng)答的方法，其包括給受試者施用包括C組或G組鏈球菌PPI蛋白質(zhì) 或其片段的免疫原性組合物。在某些實(shí)施方案中，PPI蛋白質(zhì)包括如下氨基酸序列或由如下 氨基酸序列組成，所述氨基酸序列與SEQ ID NO 2,SEQ ID N0:4、SEQ ID NO :6、SEQ IDNO
8、SEQID NO :10, SEQ ID NO =IUSEQ ID NO 26, SEQ ID NO 28, SEQ ID NO 30 禾口 SEQ ID NO 32中的任何一個(gè)或多個(gè)至少90 %、95 %或99 %等同，或100 %等同。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了用于誘導(dǎo)受試者中針對(duì)β溶血性鏈球菌或β溶血 性鏈球菌感染的免疫應(yīng)答的方法，其包括給受試者施用包括多核苷酸的免疫原性組合物， 所述多核苷酸編碼C組或G組鏈球菌PPI蛋白質(zhì)或其片段。在某些實(shí)施方案中，PPI蛋白 質(zhì)包括如下氨基酸序列或由如下氨基酸序列組成，所述氨基酸序列與SEQ ID NO 2, SEQ IDNO 4,SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO 10,SEQ ID NO =IUSEQ ID NO :26、SEQ ID NO :28, SEQ ID NO :30禾口 SEQ ID NO :32中的任何一個(gè)或多個(gè)至少90%、95%或99%等同， 或100%等同。在其他實(shí)施方案中，多核苷酸包括如下核苷酸序列或由如下核苷酸序列組 成，所述核苷酸序列與 SEQ ID N0:1、SEQ IDNO :3、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO:
9、SEQID NO :25, SEQ ID NO :27、SEQ ID NO :29 和 SEQ ID NO :31 中的任何一個(gè)或多個(gè)至 少90%、95%或99%等同，或100%等同。在某些實(shí)施方案中，多核苷酸進(jìn)一步包括調(diào)節(jié)元 件，例如調(diào)節(jié)受試者中的分離多核苷酸表達(dá)的誘導(dǎo)型或組成型啟動(dòng)子。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了分離C組或G組鏈球菌PPI多肽或其片段在制備用于預(yù)防性治療受試者中的β溶血性鏈球菌感染的藥物中的用途。在某些實(shí)施方案中，受試 者是人。在某些實(shí)施方案中，PPI多肽包括如下氨基酸序列或由如下氨基酸序列組成，所述 氨基酸序列與 SEQID NO 2,SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:8、SEQ ID NO :10,SEQ ID N0:11、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :30 禾口 SEQ ID NO :32 中的任何一個(gè)或 多個(gè)至少90%、95%或99%等同，或100%等同。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了編碼分離C組或G組鏈球菌PPI多肽或其片段的分 離多核苷酸在制備用于預(yù)防性治療受試者中的β溶血性鏈球菌感染的藥物中的用途。在 某些實(shí)施方案中，受試者是人患者。在某些實(shí)施方案中，PPI多肽包括如下氨基酸序列或由 如下氨基酸序列組成，所述氨基酸序列與SEQ ID NO 2,SEQ ID N0:4、SEQ ID NO :6、SEQID NO 8, SEQ ID N0:10、SEQ ID NO =IUSEQ ID NO 26, SEQ ID NO 28, SEQ ID NO 30 禾口 SEQ ID NO 32中的任何一個(gè)或多個(gè)至少90 %、95 %或99 %等同，或100 %等同。在其他實(shí)施方案 中，多核苷酸包括如下核苷酸序列或由如下核苷酸序列組成，所述核苷酸序列與SEQ IDNO USEQ IDNO 3, SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO :25, SEQ ID NO :27, SEQ ID NO :29和SEQ ID NO :31中的任何一個(gè)或多個(gè)至少90%、95%或99%等同，或100% 等同。在某些實(shí)施方案中，多核苷酸進(jìn)一步包括調(diào)節(jié)元件，例如使得分離多核苷酸能夠在受 試者中表達(dá)的誘導(dǎo)型或組成型啟動(dòng)子。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了免疫學(xué)試劑在制備用于預(yù)防性治療受試者中的β 溶血性鏈球菌感染的藥物中的用途，所述免疫學(xué)試劑包括與C組或G組鏈球菌PPI多肽特 異性結(jié)合的區(qū)域。在某些實(shí)施方案中，免疫學(xué)試劑包括抗體或由抗體組成。在某些實(shí)施方 案中，受試者是人患者。在某些實(shí)施方案中，PPI多肽包括如下氨基酸序列或由如下氨基酸 序列組成，所述氨基酸序列與 SEQ ID NO 2,SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :10, SEQ ID NO :11、SEQ ID NO :26、SEQ IDNO :28、SEQ ID NO :30 和 SEQ ID NO :32 中的任何一個(gè)或多個(gè)至少90 %、95 %或99 %等同，或100 %等同。在某些實(shí)施方案中，抗體 可以是單克隆抗體或多克隆抗體。在某些實(shí)施方案中，抗體可以是嵌合抗體，例如人源化抗 體或多克隆抗體。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了用于治療受試者中的β溶血性鏈球菌的方法，其包 括施用在藥學(xué)上有效的賦形劑中的治療有效量的抗體或其片段，所述抗體與C組或G組鏈 球菌PPI多肽的表位特異性結(jié)合。在某些實(shí)施方案中，受試者是人。在某些實(shí)施方案中， PPI多肽包括如下氨基酸序列或由如下氨基酸序列組成，所述氨基酸序列與SEQ ID NO 2, SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :10、SEQ IDNO :11、SEQ ID NO :26、 SEQ ID N0:28、SEQ ID NO :30 禾口 SEQ IDNO 32 中的任何一個(gè)或多個(gè)至少 90%、95% 或 99% 等同，或100%等同。在某些實(shí)施方案中，抗體可以是單克隆抗體或多克隆抗體。在某些實(shí) 施方案中，抗體可以是嵌合抗體，例如人源化抗體或多克隆抗體。在另外其他方面，本發(fā)明提供了包括下述的試劑盒(a)分離的C組或G組鏈球菌 PPI 多肽，具有與 SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :4、SEQID NO :6、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :10、 SEQ ID NO 11、SEQ IDNO :26、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO 30 和 SEQ ID NO 32 中的任何一 個(gè)或多個(gè)至少90%、95%或99%等同，或100%等同的氨基酸序列；(b)編碼C組或G組鏈 球菌PPI多肽(同上)的分離多核苷酸；和/或(c)與C組或G組鏈球菌PPI多肽(同上) 的表位特異性結(jié)合的抗體。
序列表簡述SEQ ID NO 1是停乳鏈球菌似馬亞種中的ORF 554的核苷酸序列。SEQ ID NO 2是由停乳鏈球菌似馬亞種中的ORF 554編碼的氨基酸序列。SEQ ID NO 3是星座鏈球菌星座亞種中的ORF 554的核苷酸序列。SEQ ID NO 4是由星座鏈球菌星座亞種中的ORF 554編碼的氨基酸序列。SEQ ID NO 5是咽頰炎鏈球菌中的ORF 554的核苷酸序列。SEQ ID NO 6是由咽頰炎鏈球菌中的ORF 554編碼的氨基酸序列。SEQ ID NO :7 是鏈球菌屬物種(Sti^ptococcus sp.)菌株N04A27 中的 ORF 554 的 核苷酸序列。SEQ ID NO 8是由鏈球菌屬物種菌株N04A27中的ORF 554編碼的氨基酸序列。SEQ ID NO 9是鏈球菌屬物種菌株N04AFT中的ORF 554的核苷酸序列。SEQ ID NO 10是由鏈球菌屬物種菌株N04AFT中的ORF 554編碼的氨基酸序列。SEQ ID NO 11 是 SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :8 和 SEQ ID NO 10的多肽的共有氨基酸序列。SEQIDNO12是無乳鏈球菌GBS0827的ORF 554的核苷酸序列。
SEQIDNO13是由無乳鏈球菌GBS0827的ORF 554編碼的氨基酸序列。
SEQIDNO14是化膿性鏈球菌SPY_1390的ORF 554的核苷酸序列<)
SEQIDNO15是由化膿性鏈球菌SPY_1390的ORF 554編碼的氨基E駿序列。
SEQIDNO16是獸疫鏈球菌(S. zoopedimicus)的ORF 554的核苷E駿序列。
SEQIDNO17是由獸疫鏈球菌的ORF 5M編碼的氨基酸序列。
SEQIDNO18是引物D554 Fl的核苷酸序列。
SEQIDNO19是引物D5M F2的氨基酸序列。
SEQIDNO20是引物D5M F5的核苷酸序列。
SEQIDNO21是引物D5M Rl的氨基酸序列。
SEQIDNO22是引物D5M R4的核苷酸序列。
SEQIDNO23是引物ATCC12394 554 F的核苷酸序列。
SEQIDNO24是引物ATCC12394 554 R的氨基酸序列。
SEQIDNO25是停乳鏈球菌似馬亞種中的ORF 554的核苷酸序列。
SEQIDNO26是由停乳鏈球菌似馬亞種中的ORF 5M編碼的氨基麵■序列。
SEQIDNO27是停乳鏈球菌似馬亞種中的ORF 554的核苷酸序列。
SEQIDNO28是由停乳鏈球菌似馬亞種中的ORF 5M編碼的氨基麵■序列。
SEQIDNO29是咽頰炎鏈球菌中的ORF 554的核苷酸序列。
SEQIDNO30是由咽頰炎鏈球菌中的ORF 5M編碼的氨基酸序列。
SEQIDNO31是星座鏈球菌星座亞種中的ORF 554的核苷酸序列。
SEQIDNO32是由星座鏈球菌星座亞種中的ORF 5M編碼的氨基酸■序列。
詳述
本發(fā)明描述了得自C組或G組鏈球菌物種的多肽和多核苷酸，其與化膿性鏈球
開放讀碼框554(0RF 554)對(duì)應(yīng)。關(guān)于ORF 5M的DNA和氨基酸序列在公開的國際專利申 請(qǐng)?zhí)朩O 02/083859中提供。這些ORF 5M多肽與化膿性鏈球菌肽基脯氨酰異構(gòu)酶(PPI)蛋白質(zhì)相似。這些多核苷酸和多肽可以在免疫原性組合物中使用，以誘導(dǎo)受試者中針對(duì)β 溶血性鏈球菌或β溶血性鏈球菌感染的免疫應(yīng)答。術(shù)語“多核苷酸”、“核酸”和“核酸片段”在本文中可互換使用。這些術(shù)語包含由 磷酸二酯鍵連接的核苷酸?！岸嗪塑账帷笨梢允呛颂呛怂?RNA)或脫氧核糖核酸(DNA)聚 合物，其是單鏈或雙鏈的，任選包含合成、非天然或改變的核苷酸堿基。以DNA聚合物形式 的多核苷酸可以包括cDNA、基因組DNA、合成DNA的一個(gè)或多個(gè)區(qū)段，或其混合物。核苷酸 堿基在本文中由單字母編碼指示腺嘌呤(A)、鳥嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)、肌苷 (I)和尿嘧啶(U)。“蛋白質(zhì)”或“多肽”是在編碼多肽的多核苷酸中以由編碼序列決定的特定次序排 列的氨基酸鏈。術(shù)語“分離的”意指通過“人工”由天然狀態(tài)改變的。如果組合物或物質(zhì)在自然界 中存在，為了使它被視為“分離的”，那么它必須已改變或從其原始環(huán)境中取出，或兩者。例 如，活動(dòng)物中天然存在的多核苷酸或多肽不是“分離的”，但與其天然狀態(tài)的共存材料分開 的相同多核苷酸或多肽是“分離的”，如該術(shù)語在本文中采用的。分離多核苷酸或分離多肽 可以從其中它們天然存在的宿主細(xì)胞中純化。本發(fā)明涉及領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的常規(guī)核酸 純化方法可以用于獲得分離多核苷酸。C組或G組鏈球菌ORF 554多核苷酸本文描述的C組或G組鏈球菌ORF 554多核苷酸可以使用標(biāo)準(zhǔn)克隆和篩選技術(shù)獲 得。這些多核苷酸可以例如得自基因組DNA、衍生自mRNA的cDNA文庫、基因組DNA文庫，或 可以使用眾所周知和商購可得技術(shù)合成，例如通過PCR從cDNA文庫中或經(jīng)由RT-PCR(逆轉(zhuǎn) 錄聚合酶鏈反應(yīng))。術(shù)語“重組體”意指例如通過2個(gè)或更多個(gè)其他分開的多核苷酸區(qū)段的人為組合 制備的多核苷酸，例如通過化學(xué)合成或通過使用基因工程技術(shù)處理分離多核苷酸?！爸亟M DNA構(gòu)建體”包括與至少一種調(diào)節(jié)元件可操作地連接的本發(fā)明的分離多核苷酸中的任何。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了編碼C組或G組鏈球菌脯氨酰肽基異構(gòu)酶(PPI)蛋白 質(zhì)的分離多核苷酸或其片段。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離多核苷酸編碼包括SEQ ID NO 11中所示氨基酸序列的多 肽。SEQ ID NO :11的氨基酸序列是在比對(duì)得自C組或G組物種停乳鏈球菌似馬亞種ORF 554的概念翻譯的多肽序列后獲得的共有序列，所述多肽序列由SEQ ID N0:2、SEQ ID NO 4、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :8 和 SEQ ID NO :10 表示。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了分離多核苷酸，其編碼包括SEQID NO :2、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :11、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO 28,SEQ IDN0:30或SEQ ID NO :32中的任何一種或多種多肽，或其片段。示例性核苷酸 序列在 SEQ ID NO :1、SEQ IDNO :3、SEQ ID NO :5、SEQ IDNO :7、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO 25,SEQ ID NO 27,SEQ ID NO 29禾口 SEQ ID NO :31中顯示。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明 提供了由于遺傳密碼的簡并性與 SEQ ID NO :1、SEQ IDNO :3、SEQ ID NO :5、SEQ IDNO :7、 SEQ ID NO 9, SEQ ID NO 25, SEQ ID NO 27, SEQ ID NO 29 禾口 SEQ ID NO :31 中所示的多 核苷酸序列不同的多核苷酸。這些多核苷酸編碼相同ORF 5M多肽。使用本領(lǐng)域眾所周知的方法，可以容易地鑒定C組或G組鏈球菌ORF 554多核苷酸的直向同源物和等位基因變體。ORF 5M多核苷酸的等位基因變體和直向同源物可以包 括核苷酸序列，其一般與 SEQ IDNO :1、SEQ IDNO :3、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO 9, SEQ ID NO :25、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO 29 和 SEQ ID NO 31 中所示核苷酸序列 中的任何一個(gè)或多個(gè)或其片段至少約90-95%或更多等同。ORF 5M多核苷酸的等位基因 變體和直向同源物可以編碼包括如下氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列與SEQ ID NO 2, SEQ ID NO :4、SEQID NO :6、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :28、 SEQ ID NO 30和SEQ ID NO 32中的任何一個(gè)或多個(gè)中所示的氨基酸序列至少90%等同。 此類多核苷酸可以容易地鑒定為能夠在嚴(yán)格條件下與如下多核苷酸中的任何一個(gè)或多個(gè) 或其片段雜交，所述多核苷酸具有SEQ ID NO =USEQ IDNO :3、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :7、 SEQ IDNO :9、SEQ ID NO :25、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO 29 和 / 或 SEQ IDNO 31 中所示的 核苷酸序列。此外，ORF 5M多核苷酸的等位基因變體和直向同源物可以僅包括C組或G組鏈球 菌 ORF 554 多核苷酸編碼區(qū)的片段，例如 SEQ IDNO :1、SEQ IDNO :3、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :25、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO 29 禾口 / 或 SEQ ID NO 31 中所示多核苷酸的片段，或這些核苷酸序列的片段。在特定實(shí)施方案中，此類片段編碼免 疫原性片段。本領(lǐng)域技術(shù)人員充分了解許多水平的序列同一性在鑒定相關(guān)多核苷酸和多肽 序列中有用。序列比對(duì)和同一性百分比計(jì)算可以使用LASERGENE 生物信息學(xué)計(jì)算套件 (DNASTAR Inc. ,Madison, Wis.)的 MEGALIGN 程序執(zhí)行。使用 Clustal 比對(duì)方法(Higgins 和Sharp, Gene, 73(1) =237-44,1988)可以執(zhí)行序列的多重比對(duì)，用缺省參數(shù)例如GAP PENALTY = 10和GAP LENGTH PENALTY = 10。使用Clustal方法用于配對(duì)比對(duì)的缺省參數(shù) 可以是例如 KTUPLE UGAPPENALTY = 3、WINDOW = 5 和 DIAGONALS SAVED = 5。本發(fā)明的ORF 5M多核苷酸可以用于產(chǎn)生重組多肽用于包括在免疫原性組合物 和其他用途中。對(duì)于重組多肽的產(chǎn)生，多核苷酸可以包括關(guān)于成熟多肽的編碼序列、其自 身、或與其他編碼序列可操作地連接的關(guān)于成熟多肽的編碼序列，例如編碼前導(dǎo)或分泌序 列的那些，蛋白質(zhì)前序列、原序列或前原序列，或其他融合肽部分。例如，促進(jìn)融合多肽 純化的標(biāo)記序列可以與編碼序列連接(參見Gentz等人，Proc. Natl. Acad. Sci.USA，86 821-824,1989)。多核苷酸還可以包含非編碼5'和3'序列，例如轉(zhuǎn)錄、非翻譯序列、剪接 和多腺苷酸化信號(hào)。在特定實(shí)施方案中，本文提供的多核苷酸序列信息允許制備相對(duì)短DNA(或RNA) 寡核苷酸序列，其具有與本文公開的所選擇多核苷酸的核苷酸序列特異性雜交的能力。如 本文使用的，術(shù)語“寡核苷酸”定義為包括2個(gè)或更多個(gè)脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸的 分子，通常超過三C3)個(gè)，并且一般超過十(10)個(gè)且直到一百(100)個(gè)或更多(盡管優(yōu)選 20-30個(gè))。確切大小將依賴于許多因素，這依次依賴于寡核苷酸的最后功能或用途。因此， 在某些實(shí)施方案中，合適長度的核酸探針基于所選擇的核苷酸序列進(jìn)行制備，例如SEQ ID NO :1、SEQ IDNO :3、SEQ IDNO :5、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :25、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 29和SEQ ID NO 31中所示的序列。此類核酸探針與編碼C組或G組鏈球 菌PPI多肽的多核苷酸特異性雜交的能力給予它們?cè)诟鞣N實(shí)施方案中的特別效用。在某些 實(shí)施方案中，探針可以在用于檢測(cè)給定樣品中互補(bǔ)序列的存在的各種測(cè)定法中使用。
在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸可以用作引物。這些引物可以以任何方式產(chǎn)生，包括 化學(xué)合成、DNA復(fù)制、逆轉(zhuǎn)錄或其組合。使用本文描述的多核苷酸設(shè)計(jì)此類引物的序列，用 于檢測(cè)、擴(kuò)增或突變ORF 5M多核苷酸的限定區(qū)段，所述ORF 5M多核苷酸編碼C組或G組 鏈球菌PPI多肽，使用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)。在特定實(shí)施方案中，有利的是采用與用于檢測(cè)雜交物形成的合適標(biāo)記組合的本文 描述的多核苷酸。廣泛多樣的合適標(biāo)記是本領(lǐng)域已知的，包括放射性、酶促或其他配體，例 如抗生物素蛋白/生物素，其能夠給出可檢測(cè)信號(hào)。與SEQID NO =USEQ ID NO :3、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :12, SEQ ID NO :14、SEQ ID NO :16 和 SEQ ID NO :18 直到 SEQ ID NO :24、SEQ ID NO 25、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO 29和SEQ ID NO :31之一或其片段中包含的核苷酸序列等 同或充分等同的多核苷酸可以用作關(guān)于cDNA和基因組DNA的雜交探針，或用作關(guān)于核酸 擴(kuò)增(PCR)反應(yīng)的引物，以分離編碼本文所述多肽的全長cDNA和基因組克隆，且分離其他 基因(包括編碼來自除停乳鏈球菌外的物種的同系物和直向同源物的基因)的cDNA和基 因組克隆，其與 SEQ ID NO :1、SEQ IDNO :3、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :7、SEQID NO :9、SEQ ID NO 25,SEQ ID NO 27,SEQ ID NO 29和SEQ IDNO 31中所示的多核苷酸序列或其片段 具有高序列相似性。一般地，這些多核苷酸序列與參考多核苷酸序列的那種至少約90%等 同-至少約99%等同。探針或引物一般將包括至少15個(gè)核苷酸、至少30個(gè)核苷酸或至少 50個(gè)核苷酸。存在本領(lǐng)域技術(shù)人員可獲得且眾所周知的幾種方法，以獲得全長cDNA或延長短 cDNA，例如基于cDNA末端快速擴(kuò)增(RACE)方法的那些。參見Frohman等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85，8998-9002，1988。例如由 MARATHON 技術(shù)(Clontech Laboratories he.)例示的該技術(shù)的近期修飾已顯著簡化關(guān)于更長cDNA的研究。在MARATHON 技術(shù) 中，已由從選擇組織中提取的mRNA和在每個(gè)末端上連接的“銜接子”序列制備cDNA。隨后 使用基因特異性和銜接子特異性寡核苷酸引物的組合執(zhí)行核酸擴(kuò)增(PCR)，以擴(kuò)增cDNA的 “缺失” 5'末端。隨后使用“套式”引物重復(fù)PCR反應(yīng)，即設(shè)計(jì)為在擴(kuò)增產(chǎn)物內(nèi)退火的引物 (一般地在銜接子序列中更遠(yuǎn)的3'退火的銜接子特異性引物，和在已知基因序列中更遠(yuǎn) 的5'退火的基因特異性引物)。隨后可以通過DNA測(cè)序分析這種反應(yīng)的產(chǎn)物，并且通過使 產(chǎn)物與現(xiàn)有cDNA直接連接構(gòu)建全長cDNA，以獲得全序列，或通過執(zhí)行分開的全長PCR使用 新序列信息用于設(shè)計(jì)5'引物。C組或G組鏈球菌PPI多肽在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了分離的C組或G組鏈球菌肽基脯氨酰異構(gòu)酶(PPI)多 肽(由ORF 5M編碼)，其尤其可以用作免疫原和用于免疫原性組合物中。PPI多肽可以是
重組多肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包括SEQ ID NO 11中所示氨基酸序列的分離多 肽。SEQ ID NO :11中所示的氨基酸序列是在比對(duì)關(guān)于停乳鏈球菌似馬亞種ORF 5M獲得 的多核苷酸序列后獲得的共有序列，并且在SEQ ID NO 2,SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:6、SEQ ID NO 8 和 SEQID NO :10 中顯示。在一個(gè)實(shí)施方案中，多肽包括與SEQID NO :2、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :11、SEQID NO :26、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :30 和 SEQID NO 32中的任何一個(gè)或多個(gè)至少90%、95%或99%等同，或100%等同的氨基酸序列；所 述多肽的功能和非功能天然存在的變體或生物學(xué)等價(jià)物；所述多肽的重組產(chǎn)生的變體或生 物學(xué)等價(jià)物；所述多肽的直向同源物和/或等位基因變體；和所述多肽的片段。C組或G組鏈球菌PPI多肽的生物學(xué)等價(jià)物或變體包括功能和非功能多肽。功能 生物學(xué)等價(jià)物或變體包括多肽的天然存在的氨基酸序列變體，其維持在受試者中引發(fā)免疫 學(xué)或抗原應(yīng)答的能力。功能變體一般包含SEQ ID NO 2, SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :11、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :28、SEQ IDNO 30 和 SEQ ID NO :32中的任何一個(gè)或多個(gè)的一個(gè)或多個(gè)氨基酸的保守置換；或多肽的非關(guān)鍵區(qū)中 的非關(guān)鍵殘基的置換、缺失或插入。在某些實(shí)施方案中，可以在PPI多肽的結(jié)構(gòu)中進(jìn)行修飾和改變，并且仍獲得與未 改變的C組或G組鏈球菌PPI多肽具有相同抗原性的PPI多肽。例如，特定氨基酸可以置 換序列中的其他氨基酸，而抗原性沒有可測(cè)量的損失。因?yàn)檫@是限定多肽的生物學(xué)功能活 性的多肽的交互能力和性質(zhì)，所以可以在多肽序列中進(jìn)行特定氨基酸序列置換，并且仍獲 得具有相似性質(zhì)的多肽。在制備此類修飾和改變中，可以考慮氨基酸的親水指數(shù)。親水氨基酸指數(shù)在對(duì)多 肽賦予交互生物功能中的重要性是本領(lǐng)域一般理解的(Kyte和Doolittle，J Mol Biol, 157 第105-132頁，1982)。本領(lǐng)域已知特定氨基酸可以置換具有相似親水指數(shù)或得分的其 他氨基酸，并且仍產(chǎn)生具有相似生物活性的多肽。每個(gè)氨基酸已基于其疏水性和電荷特征 指定親水指數(shù)。這些指數(shù)是異亮氨酸(+4. 5)；纈氨酸(+4. 2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸 (+2. 8)；半胱氨酸/胱氨酸(+2. 5)；甲硫氨酸(+1. 9)；丙氨酸(+1. 8)；甘氨酸(-0. 4)；蘇氨 酸("0. 7)；絲氨酸(-0. 8)；色氨酸(-0. 9)；酪氨酸(-1. 3)；脯氨酸(-1. 6)；組氨酸(-3. 2)； 谷氨酸鹽("3. 5)；谷氨酰胺(-3. 5)；天冬氨酸鹽(-3. 5)；天冬酰胺(-3. 5)；賴氨酸(-3. 9)； 和精氨酸("4. 5)。本領(lǐng)域一般公認(rèn)氨基酸殘基的相對(duì)親水特征決定所得到的多肽的二級(jí)和三級(jí)結(jié) 構(gòu)，這進(jìn)而限定多肽與其他分子的相互作用，所述其他分子例如酶、底物、受體、抗體、抗原 等。本領(lǐng)域已知氨基酸可以由具有相似親水指數(shù)的另一種氨基酸置換且仍獲得功能上等價(jià) 的多肽。在某些實(shí)施方案中，修飾或改變的PPI多肽包括一個(gè)或多個(gè)置換氨基酸，其親水指 數(shù)在每個(gè)原始氨基酸的+/-2內(nèi)。在其他實(shí)施方案中，每個(gè)置換氨基酸的親水指數(shù)在其原始 氨基酸的+/-1內(nèi)。在另外其他的實(shí)施方案中，每個(gè)置換氨基酸的親水指數(shù)在其原始氨基酸 的 +/-0. 5 內(nèi)。相似氨基酸的置換也可以基于親水性進(jìn)行制備，特別是當(dāng)由此制備的生物學(xué)功 能等價(jià)多肽或肽預(yù)期用于在免疫學(xué)實(shí)施方案中使用時(shí)。美國專利號(hào)4，554，101教導(dǎo)了如由 其相鄰氨基酸的親水性控制的多肽的最大局部平均親水性與其免疫原性和抗原性相關(guān)。如該術(shù)語在本文中使用的，“變體”是分別與參考多核苷酸或多肽不同的多核苷酸 或多肽，但保留某些基本性質(zhì)。多核苷酸的一般變體在核苷酸序列中與參考多核苷酸不同。 變體的核苷酸序列中的改變可能改變或不改變由參考多核苷酸編碼的多肽的氨基酸序列。 核苷酸改變可能產(chǎn)生如下所述由參考序列編碼的多肽中的氨基酸置換、添加、缺失、融合和 截短。多肽的一般變體在氨基酸序列中與參考多肽不同。一般地，差異是有限的，從而使得 參考多肽和變體多肽的序列是總體相似的，并且在許多區(qū)域中是等同的。變體多肽及其參考多肽在氨基酸序列中可以相差以任何組合的一個(gè)或多個(gè)置換、添加和缺失。置換或插入 的氨基酸殘基可以是或不是由遺傳編碼所編碼的那種。多核苷酸或多肽的變體可以是天然 存在的，例如等位基因變體，或可以是未知天然存在的變體。多核苷酸和多肽的非天然存在 的變體可以通過誘變技術(shù)或通過直接合成進(jìn)行制備。重組系統(tǒng)對(duì)于多肽的重組生產(chǎn)，宿主細(xì)胞可以進(jìn)行遺傳改造，以摻入包括本發(fā)明的ORF 554 多核苷酸的表達(dá)系統(tǒng)。多核苷酸可以例如通過許多標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)手冊(cè)中描述的方法引入宿主 細(xì)胞內(nèi)，例如 Davis 等人，BASICMETHODS IN MOLECULAR BIOLOGY(1986)和 Sambrook 等 人，MOLECULAR CLONING :A LABORATORY MANUAL，第 2 版，ColdSpring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (1989.)這些方法包括例如磷酸鈣轉(zhuǎn)染、DEAE-葡聚糖介 導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)應(yīng)(transvection)、顯微注射、超聲、陽離子脂質(zhì)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、電穿孔、轉(zhuǎn)導(dǎo)、刮 擦裝載、彈道引入(ballistic introduction)和感染。合適宿主細(xì)胞的代表性例子包括細(xì)菌細(xì)胞(例如，鏈球菌屬、葡萄球菌屬 (staphylococci)、大腸桿菌(E. coli)、鏈霉菌屬物種(Str印tomycesspp.)和枯草芽孢桿 菌細(xì)胞)、酵母細(xì)胞(例如，畢赤酵母屬(Pichia)和釀酒酵母屬(Saccharomyces))、哺乳動(dòng) 物細(xì)胞(例如CHO細(xì)胞)和昆蟲細(xì)胞(例如，Sf9和Sf21)。重組產(chǎn)生的多肽可以通過眾所周知的方法從重組細(xì)胞培養(yǎng)中回收且純化，所述方 法包括高效液相色譜法、硫酸銨或乙醇沉淀、酸萃取、陰離子或陽離子交換色譜法、磷酸纖 維素色譜法、疏水相互作用色譜法、親和色譜法、羥磷灰石色譜法和凝集素色譜法。眾多載體系統(tǒng)中的任何一種或多種可以用于在異源細(xì)胞系統(tǒng)中表達(dá)且產(chǎn)生C 組或G組鏈球菌PPI多肽。此類載體系統(tǒng)尤其包括染色體、附加體和病毒衍生系統(tǒng)，例 如衍生自下述的載體細(xì)菌質(zhì)粒、減毒細(xì)菌例如沙門氏菌屬(Salmonella)(美國專利號(hào) 4，837，151)，噬菌體，轉(zhuǎn)座子，酵母附加體，插入元件，酵母染色體元件，病毒例如痘苗和其 他痘病毒、辛德畢斯、腺病毒、桿狀病毒、乳多空病毒例如SV40、禽痘病毒、假性狂犬病病 毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒、甲病毒例如委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒(美國專利號(hào)5，643，576)、非節(jié)段負(fù) 鏈RNA病毒例如水皰性口炎病毒(美國專利號(hào)6，168，943)，和衍生自其組合的載體，例如 衍生自質(zhì)粒和噬菌體遺傳元件的載體，例如粘粒和噬菌粒。表達(dá)系統(tǒng)應(yīng)包括調(diào)節(jié)以及引 起表達(dá)的控制區(qū)，例如啟動(dòng)子和其他調(diào)節(jié)元件(例如多腺苷酸化信號(hào))。一般地，可以使 用適合于維持、繁殖或表達(dá)多核苷酸以在宿主中產(chǎn)生多肽的任何系統(tǒng)或載體。合適核苷 酸序列可以通過眾所周知和常規(guī)技術(shù)中的任何而插入表達(dá)系統(tǒng)內(nèi)，例如Sambrook等人， M0LECULARCL0NING，A LABORATORY MANUAL(同上)中所示的那些。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包括C組或G組鏈球菌ORF 554多核苷酸的表 達(dá)載體，所述C組或G組鏈球菌ORF 554多核苷酸編碼C組或G組鏈球菌PPI多肽。表達(dá)載 體包括ORF 554多核苷酸，其編碼包括如下氨基酸序列或由如下氨基酸序列組成的多肽， 所述氨基酸序列與SEQ ID NO 2,SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :8、SEQ IDNO :10、 SEQ ID NO :11, SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :30 和 SEQ ID NO :32 中的任何 一個(gè)或多個(gè)至少90 %、95 %或99 %等同，或100 %等同。備選地，表達(dá)載體包括多核苷酸， 所述多核苷酸包括如下核苷酸序列或由如下核苷酸序列組成，所述核苷酸序列與SEQ ID NO :1、SEQ IDNO :3、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :9、SEQ IDNO :25、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO: 29和SEQ ID NO :31中的任何一個(gè)或多個(gè)至少90%、95%或99%等同，或 100%等同。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明的表達(dá)載體包括與增強(qiáng)子-啟動(dòng)子可操作地連接的 多核苷酸。在另外其他的實(shí)施方案中，表達(dá)載體包括與原核啟動(dòng)子可操作地連接的多核苷 酸。備選地，表達(dá)載體包括與其為真核啟動(dòng)子的增強(qiáng)子-啟動(dòng)子可操作地連接的多核苷酸。 表達(dá)載體進(jìn)一步包括多腺苷酸化信號(hào)，其位于羧基末端氨基酸的3'且在編碼多肽的轉(zhuǎn)錄 單位內(nèi)。如本文使用的，術(shù)語“調(diào)節(jié)元件”指控制核酸序列表達(dá)的某些方面的遺傳元件。例 如，啟動(dòng)子是促進(jìn)可操作地連接的編碼區(qū)轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)節(jié)元件。其他調(diào)節(jié)元件是增強(qiáng)子、沉 默子、剪接信號(hào)、多腺苷酸化信號(hào)、終止信號(hào)、RNA輸出元件、內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)等等。如本文使用的，啟動(dòng)子是轉(zhuǎn)錄開始的點(diǎn)(即，轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn))前面(上游)一般約 100個(gè)核苷酸對(duì)內(nèi)的DNA分子區(qū)域。那個(gè)區(qū)域一般包含幾個(gè)類型的DNA序列元件，其位于不 同基因中的相似相對(duì)位置中。如本文使用的，術(shù)語“啟動(dòng)子”包括本領(lǐng)域被稱為上游啟動(dòng)子 區(qū)的那種，啟動(dòng)子區(qū)或泛發(fā)真核RNA聚合酶II轉(zhuǎn)錄單位的啟動(dòng)子。另一個(gè)類型的不連續(xù)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列元件是增強(qiáng)子。增強(qiáng)子提供關(guān)于特定編碼區(qū) (例如，基因)的時(shí)間、位置和表達(dá)水平的特異性。增強(qiáng)子的主要功能是增加細(xì)胞中編碼序 列的轉(zhuǎn)錄水平，所述細(xì)胞包含與那個(gè)增強(qiáng)子結(jié)合的一種或多種轉(zhuǎn)錄因子。不像啟動(dòng)子，增強(qiáng) 子可以在位于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)可變距離時(shí)起作用，只要啟動(dòng)子存在。如本文使用的，短語“增強(qiáng)子-啟動(dòng)子”意指包含增強(qiáng)子和啟動(dòng)子元件的組合單 位。增強(qiáng)子-啟動(dòng)子與編碼至少一種基因產(chǎn)物的編碼序列可操作地連接。如本文使用的， 短語“可操作地連接”意指增強(qiáng)子-啟動(dòng)子以這樣的方式與編碼序列連接，使得那種編碼序 列的轉(zhuǎn)錄通過那個(gè)增強(qiáng)子-啟動(dòng)子控制且調(diào)節(jié)。用于使增強(qiáng)子-啟動(dòng)子與編碼序列可操作 地連接的方法是本領(lǐng)域眾所周知的。如本領(lǐng)域同樣眾所周知的，相對(duì)于其轉(zhuǎn)錄受控制的編 碼序列的精確定向和定位尤其依賴于增強(qiáng)子-啟動(dòng)子的特定性質(zhì)。因此，TATA盒最小啟動(dòng) 子一般定位在轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游約25到約30個(gè)堿基對(duì)處，并且上游啟動(dòng)子元件一般定位 在轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游約100到約200個(gè)堿基對(duì)處。相比之下，增強(qiáng)子可以位于起始位點(diǎn)下 游且可以在距離那個(gè)位點(diǎn)相當(dāng)大距離處。在本文描述的載體構(gòu)建體中使用的增強(qiáng)子-啟動(dòng)子可以是驅(qū)動(dòng)在待轉(zhuǎn)染細(xì)胞中 表達(dá)的任何增強(qiáng)子-啟動(dòng)子。通過采用具有眾所周知性質(zhì)的增強(qiáng)子-啟動(dòng)子，基因產(chǎn)物表達(dá) 的水平和模式可以得到最佳化。例如，常用啟動(dòng)子可以衍生自多瘤、腺病毒2、巨細(xì)胞病毒和 猿猴病毒40。對(duì)于用于原核和真核細(xì)胞的其他合適的表達(dá)系統(tǒng)，參見通過引用合并入本文 的 Sambrook 等人，“Molecular Cloning :A Laboratory Manual “第 2 版，Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N. Y., 1989的第16和17章。在另一個(gè)實(shí)施方案中，表達(dá)載體能夠指導(dǎo)核酸優(yōu)先在特定細(xì)胞類型中的表達(dá)(例 如，組織特異性調(diào)節(jié)元件用于表達(dá)核酸)。組織特異性調(diào)節(jié)元件是本領(lǐng)域已知的。合適組織 特異性啟動(dòng)子的非限制性例子包括白蛋白啟動(dòng)子(肝特異性；Pinkert等人，Genes Dev, 1 第洸8-277 頁，1987)，淋巴樣特異性啟動(dòng)子(Calame 和 Eaton，Adv Immunol, 43 第 235-275 頁，1988)，T 細(xì)胞受體的啟動(dòng)子(Winoto 和 Baltimore, EMBO J，8 第 729-733 頁，1989)和 免疫球蛋白的啟動(dòng)子(Banerji 等人，Cell，33 第 729-740 頁，1983)，(Queen 和 Baltimore，Cell,33 741-748頁，1983)，神經(jīng)元特異性啟動(dòng)子(例如，神經(jīng)絲啟動(dòng)子；Byrne和 Ruddle，PNAS，86 第 5473-5477 頁，1989)，胰腺特異性啟動(dòng)子(Edlund 等人，Science, 230 第912-916頁，1985)，和乳腺特異性啟動(dòng)子(例如，乳清啟動(dòng)子；美國專利號(hào)4，873，316和 國際申請(qǐng)EP沈4，166)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，調(diào)節(jié)元件包括發(fā)育調(diào)節(jié)的啟動(dòng)子，例如鼠 類hox啟動(dòng)子(Kessel和Gruss, Science，249 第374-379頁，1990)和甲胎蛋白啟動(dòng)子 (Campes 禾口 Tilghman，Genes Dev, 3 第 537—546，1989 頁)。載體DNA可以經(jīng)由常規(guī)轉(zhuǎn)化、感染或轉(zhuǎn)染技術(shù)引入原核或真核細(xì)胞內(nèi)。如本文 使用的，術(shù)語“轉(zhuǎn)化”和“轉(zhuǎn)染”意指用于將外源核酸引入宿主細(xì)胞內(nèi)的各種領(lǐng)域公認(rèn)技術(shù)， 其包括例如磷酸鈣或氯化鈣共沉淀、DEAE-葡聚糖介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、脂轉(zhuǎn)染、超聲和電穿孔方 法。用于轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的合適方法可以在Sambrook，等人("Molecular Cloning ALaboratory Manual "第 2 版，Cold Spring Harbor Laboratory, ColdSpring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. , 1989)和其他實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)中找到。多肽在原核生物中的產(chǎn)生最通常在大腸桿菌中進(jìn)行，用包含指導(dǎo)融合或非融合蛋 白表達(dá)的組成型或誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的載體。組成型啟動(dòng)子包括例如λ PL、spc核糖體和β-內(nèi) 酰胺酶。誘導(dǎo)型啟動(dòng)子包括例如阿拉伯糖、lac、tac和麥芽糖結(jié)合蛋白。融合載體將許多氨 基酸加入其中所編碼的蛋白質(zhì)，通常加入重組蛋白質(zhì)的氨基末端。此類融合載體一般發(fā)揮 3個(gè)用途增加重組蛋白質(zhì)的表達(dá)；增加重組蛋白質(zhì)的溶解性；和通過充當(dāng)親和純化中的配 體幫助重組蛋白質(zhì)的純化。通常，在融合表達(dá)載體中，蛋白酶解性切割位點(diǎn)在融合部分和重 組蛋白質(zhì)的連接處引入，以使得能夠在融合蛋白純化后從融合部分中分離重組蛋白質(zhì)。此 類酶及其同種識(shí)別序列包括因子)(a、凝血酶和腸激酶。本發(fā)明還提供了載體(例如，表達(dá)載 體、測(cè)序載體、克隆載體)，其包括本發(fā)明的至少一種多核苷酸，用本發(fā)明的載體遺傳改造的 宿主細(xì)胞，和通過重組技術(shù)產(chǎn)生本發(fā)明的多肽。無細(xì)胞翻譯系統(tǒng)也用于產(chǎn)生此類蛋白質(zhì)，使 用衍生自本發(fā)明的DNA構(gòu)建體的RNA。C組或G組鏈球菌PPI抗體本發(fā)明的多肽包括包含SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :4、SEQ IDNO :6、SEQ ID NO :8、 SEQ ID N0:10或SEQ ID NO :11中所示氨基酸序列、其片段和類似物的那些，或表達(dá)所述 序列、片段和類似物的細(xì)胞，其也可以用作免疫原，以產(chǎn)生與本發(fā)明的多肽特異性結(jié)合的抗 體。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了(a)與C組或G組鏈球菌PPI多肽特異性結(jié)合的抗體，(b) 此類抗體檢測(cè)細(xì)胞、細(xì)胞或組織提取物或生物流體中鏈球菌PPI多肽的存在或測(cè)量其數(shù)量 或濃度的用途，和(c)此類抗體用于治療受試者中的β溶血性鏈球菌感染的用途。本發(fā)明的抗體包括多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體和抗獨(dú)特型抗體。多克隆抗 體是衍生自用抗原免疫接種的動(dòng)物血清的抗體分子的異質(zhì)群體。單克隆抗體是與特異性抗 原結(jié)合的抗體的基本上同質(zhì)群體。一般而言，抗體可以例如使用常規(guī)雜交瘤技術(shù)(Kohler 和 Milstein(1975)Nature, 256 :495-499)、重組 DNA 方法(美國專利號(hào) 4，816，567)、或使 用抗體文庫的噬菌體展示(Clackson等人(1991) Nature，352 :624-628 ；Marks等人(1991) J. Mol. Biol.，222 :581-597)。對(duì)于另外的抗體生產(chǎn)技術(shù)，參見 Antibodies :A Laboratory Manual，編輯 Harlow 和 Lane，Cold Spring Harbor Laboratory，1988。本發(fā)明并不限于任 何特定來源、生產(chǎn)方法、或抗體的其他特別特征?？梢允褂卯a(chǎn)生或分離與C組或G組鏈球菌PPI多肽表位特異性結(jié)合的抗體的其他合適方法。在某些實(shí)施方案中，重組抗體選自肽或蛋白質(zhì)展示文庫，例如噬 菌體、核糖體、寡核苷酸、RNA和cDNA展示文庫(EP368, 684 ；PCT/GB91/01134 ；PCT/ GB92/01755 ；PCT/GB92/002240 ；PCT/GB92/00883 ；PCT/GB93/00605 ；PCT/GB94/01422 ；PCT/ GB94/02662 ；PCT/GB97/01835；W090/14443 ；W090/14424 ；W090/14430 ；PCT/US94/1234； W092/18619 ；W096/07754 ；EP614, 989 ；W095/16027 ；W088/06630 ；W090/3809 ；美國專利號(hào) 4，704，692 ；PCT/US91/02989 ；W089/06283 ；EP371, 998 ；EP550, 400 ；EP229, 046 ；和 PCT/ US91/07149.)在其他實(shí)施方案中，重組抗體選自隨機(jī)產(chǎn)生的肽或蛋白質(zhì)文庫(美國專利 號(hào) 5，723，323 ；5，763，192 ；5，814，476 ；5，817，483 ；5，824，514 ；5，976，862 ；WO 86/05803 ； 和EP 590，689.)在另外其他實(shí)施方案中，重組抗體在能夠產(chǎn)生人抗體儲(chǔ)庫的轉(zhuǎn)基因動(dòng) 物中產(chǎn)生(Nguyen 等人，Microbiol. Immunol. 41 :901-907,1997 ；Sandhu 等人，Crit. Rev. Biotechnol. 16 :95-118,1996 ；和 Eren 等人，Immunol. 93 :154-161,1998.)用于產(chǎn) 生重組抗體的其他技術(shù)包括例如(a)單細(xì)胞抗體生產(chǎn)技術(shù)例如選擇淋巴細(xì)胞抗體方法 (“SLAM")(美國專利號(hào)5，627，052)，(b)凝膠微滴和流式細(xì)胞術(shù)方法(Powell等人， Biotechnol. 8 :333-337,1990)，和(C)B 細(xì)胞選擇(Steenbakkers 等人，Molec. Biol. Reports 19 125-134，1994)。這些相同方法也可以用于改善抗C組或G組鏈球菌PPI抗體 與其特異性結(jié)合靶的親和力和/或親合力。完整抗體是免疫球蛋白(Ig)，并且它們一般是由2條輕鏈(各 25kDa)和2條 重鏈(各 50kDa)組成的四聚糖基化蛋白質(zhì)。輕鏈分類成2個(gè)同種型(λ和κ)，并且重 鏈分類為5個(gè)同種型(A、D、E、G和Μ)。某些重鏈同種型進(jìn)一步分成同種型亞類，例如IgGp IgG2、IgG3 和 IgG40不同抗體的結(jié)構(gòu)域和三維結(jié)構(gòu)是本領(lǐng)域已知的(Harlow和Lane，同上)。簡言之， 輕鏈由恒定結(jié)構(gòu)域(CJ和N末端可變結(jié)構(gòu)域組成。重鏈由3或4個(gè)恒定結(jié)構(gòu)域(Ch)、 鉸鏈區(qū)和N末端可變結(jié)構(gòu)域(Vh)組成。與Vh結(jié)構(gòu)域相鄰的C0指定為CH1。Vh和\結(jié)構(gòu)域 包含稱為構(gòu)架(FR)區(qū)的4個(gè)保守序列區(qū)域(FR1、FR2、FR3和FR4)，其形成關(guān)于稱為互補(bǔ)決 定區(qū)(OTR)的3個(gè)高變序列區(qū)域的支架。⑶R(⑶R1、⑶R2和⑶舊)包含特異性識(shí)別且結(jié)合 抗原的大多數(shù)抗體氨基酸。重鏈⑶R指示為H1、H2和H3，而輕鏈⑶R指示為L1、L2和L3。Fab片段(抗原結(jié)合片段)由通過恒定區(qū)之間的二硫鍵共價(jià)連接的Vh-Chi和VfQ 結(jié)構(gòu)域組成。Fv片段較小，并且由非共價(jià)連接的V1^nt結(jié)構(gòu)域組成。為了克服非共價(jià)結(jié)構(gòu) 域分離的趨勢(shì)，可以構(gòu)建單鏈Fv片段(ScFv)。scFv包含彈性多肽，其使(a)VH&C末端與 VJ勺N末端連接，或(b) V J勺C末端與N末端連接。15聚體(Gly4Ser)3肽可以用作接 頭，但其他接頭也是本領(lǐng)域已知的。通過使用編碼可變區(qū)的多個(gè)種系基因和各種體細(xì)胞事件產(chǎn)生抗體多樣性。體細(xì)胞 事件包括可變基因區(qū)段和多樣性(D)和連接(J)基因區(qū)段的重組，以制備完全Vh區(qū)和可變， 以及可變和連接基因區(qū)段的重組，以制備完全\區(qū)。CDR3(H;3)是抗體序列內(nèi)分子多樣性的 最大來源。H3例如可以短至2個(gè)氨基酸殘基或大于沈。最小的抗原結(jié)合片段是Fv，其由Vh 和\結(jié)構(gòu)域組成。本發(fā)明的抗C組或G組鏈球菌PPI抗體可以任選包括抗體恒定區(qū)或其部分。例如， 八結(jié)構(gòu)域可以在其C末端與輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域如C K或CX附著。類似地，Vh結(jié)構(gòu)域或其部 分可以與重鏈如IgA、IgD、IgE、IgG和IgM以及任何同種型亞類的全部或部分附著?？贵w同種型例如IgG1UgG2UgG3或IgG4由CH2和CH3結(jié)構(gòu)域決定。同種型可以通過改變這些結(jié) 構(gòu)域轉(zhuǎn)換而不影響抗原結(jié)合。恒定區(qū)是本領(lǐng)域已知的(參見例如，Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,No. 91-3242,National Institutes of Health Publications, Bethesda, Md.，1991.)術(shù)語“抗體”也意欲包括完整分子以及片段例如Fab，其能夠結(jié)合抗原。Fab片段 缺乏完整抗體的Fc片段，從循環(huán)中更快速清除，并且可能具有比完整抗體更少的非特異性 組織結(jié)合(Wahl等人，1983，J. Nucl. Med. 24 :316-325)。應(yīng)當(dāng)理解在本發(fā)明中有用的抗體 的Fab和其他片段可以用于檢測(cè)且定量C組或G組鏈球菌PPI多肽，根據(jù)用于完整抗體分 子的方法。嵌合抗體是分子，其不同部分衍生自不同動(dòng)物種類，例如具有衍生自鼠類單克 隆抗體的可變區(qū)(νΗ、\)和人免疫球蛋白恒定區(qū)(CH1-CH2-CHyCJ的那些。嵌合抗體和 用于其生產(chǎn)的方法是本領(lǐng)域已知的(Cabilly等人，1984，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81 3273-3277 ；Morrison 等人，1984，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81 :6851-6855 ；Boulianne 等 A, 1984,Nature 312 :643-646 ;Cabilly 等人，歐洲專利申請(qǐng) 125023 (1984 年 11 月 14 日公 開)；Taniguchi等人，歐洲專利申請(qǐng)171496 (1985年2月19日公開)；Morrison等人，歐 洲專利申請(qǐng) 173494(1986 年 3 月 5 日公開)；Neuberger 等人，PCT 申請(qǐng) WO 86/01533(1986 年3月13日公開)；Kudo等人，歐洲專利申請(qǐng)184187 (1986年6月11日公開)；Morrison 等人，歐洲專利申請(qǐng)173494(1986年3月5日公開)；Sahagan等人，1986，J. Immunol. 137 1066-1074 ；Robinson 等人，PCT/US86/02269 (1987 年 5 月 7 日公開)；Liu 等人，1987， Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84 :3439-3443 ；Sun 等人，1987，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84 214-218 ；Better等人，1988 Jcience 240 :1041-1043)。這些參考文獻(xiàn)在此通過引用合并。抗體以各種方式使用，例如用于證實(shí)蛋白質(zhì)表達(dá)或證實(shí)蛋白質(zhì)在哪里表達(dá)。標(biāo)記 的抗體(例如，用于FACS的熒光標(biāo)記)可以與完整細(xì)菌一起溫育，并且在細(xì)菌表面上標(biāo)記 的存在證實(shí)例如蛋白質(zhì)的定位。免疫原性組合物本發(fā)明提供了包括C組或G組鏈球菌PPI多肽中的一種或多種的免疫原性組合 物。在某些實(shí)施方案中，免疫原性組合物包括一種或多種PPI多肽和一種或多種生理學(xué)可 接受的載體，所述PPI多肽包括與SEQ IDNO :2、4、6、8和10至少90%、95%、99%或100%
等同的氨基酸殘基序列。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明的免疫原性組合物包括編碼C組或G組鏈球菌PPI多 肽的多核苷酸，和一種或多種生理學(xué)可接受的載體。在某些實(shí)施方案中，免疫原性組合物包 括具有與SEQ ID NO :1、3、5、7和/或9中的一個(gè)或多個(gè)至少90%、95%、99%或100%等同 的核苷酸序列的多核苷酸。如本文使用的，術(shù)語“免疫原性組合物”指以可施用方式的生物制劑的任何類型， 其能夠刺激用免疫原性組合物接種的受試者中的免疫應(yīng)答。免疫應(yīng)答可以包括抗體的誘導(dǎo) 和/或T細(xì)胞應(yīng)答的誘導(dǎo)。當(dāng)提及免疫原性組合物使用時(shí)，術(shù)語“保護(hù)”在本文中指與所討 論的疾病或病狀相關(guān)癥狀中的任何的改善(部分或完全)。因此，通過呈現(xiàn)的免疫原性組合 物保護(hù)受試者不受鏈球菌屬物種例如停乳鏈球菌(包括停乳和似馬亞種)感染一般導(dǎo)致細(xì) 菌生長和/或與鏈球菌感染相關(guān)的臨床癥狀中的一種或多種消除，包括關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎、腦膜炎、多漿膜炎、支氣管肺炎、腦膜炎、永久性聽力喪失和敗血病性休克。本文公開的方法可以包括誘導(dǎo)針對(duì)一種或多種病原體的免疫應(yīng)答，所述病原體包 括鏈球菌屬物種(例如，停乳鏈球菌、停乳鏈球菌似馬亞種、停乳鏈球菌停乳亞種、化膿性 鏈球菌、無乳鏈球菌、咽頰炎鏈球菌、星座鏈球菌、似馬鏈球菌(S. equisimilis)和中間鏈 球菌(S. intermedius)。)例如，該方法可以包括誘導(dǎo)針對(duì)一種或多種鏈球菌病原體例如停 乳鏈球菌似馬亞種的多克隆抗體產(chǎn)生。在某些實(shí)施方案中，該方法包括給受試者施用組合 物，所述組合物包括分離的C組或G組鏈球菌ORF 554多核苷酸或PPI多肽。多種測(cè)試用于評(píng)估本發(fā)明的多肽的體外免疫原性。例如，通過一起溫育鏈球菌屬 物種細(xì)胞、包含針對(duì)所討論多肽的特異性抗體的熱滅活血清、和外源補(bǔ)體來源的混合物，進(jìn) 行體外調(diào)理素測(cè)定法。調(diào)理吞噬作用在新鮮分離的多形核細(xì)胞(PMN' s)和抗體/補(bǔ)體/ 鏈球菌屬物種細(xì)胞混合物的溫育過程中進(jìn)行。用抗體和補(bǔ)體包被的細(xì)菌細(xì)胞在調(diào)理吞噬 作用后被殺死。通過鋪平板測(cè)定法混合物測(cè)定逃離調(diào)理吞噬作用的存活細(xì)菌的菌落形成 單位(cfu)。滴度報(bào)告為給出>50%細(xì)菌殺死的最高稀釋度的倒數(shù)，如通過與測(cè)定法對(duì)照 比較測(cè)定的。在測(cè)試的最低血清稀釋度(1 8)下顯示小于50%殺死的樣品報(bào)告為具有 調(diào)理吞噬作用抗體(OPA)滴度為4。上述方法是Gray' s方法的修飾(Gray，Conjugate VaccinesSupplement，第 694-697 頁，1990)。對(duì)于每種個(gè)別血清包括包含測(cè)試血清加上細(xì)菌細(xì)胞和熱滅活補(bǔ)體的測(cè)試血清對(duì) 照。這種對(duì)照用于評(píng)估抗生素或其他血清組分的存在是否能夠直接殺死細(xì)菌菌株(即，在 不存在補(bǔ)體或PMN' s的情況下)。具有已知調(diào)理素滴度的人血清用作陽性人血清對(duì)照。關(guān) 于每種未知血清的調(diào)理素抗體滴度計(jì)算為，與不含血清的對(duì)照比較給出50% cfu減少的血 清起始稀釋度的倒數(shù)。全細(xì)胞ELISA測(cè)定法也可以用于評(píng)估多肽抗原的體外免疫原性和表面暴露，其中 目的細(xì)菌菌株包被在平板例如96孔板上，并且來自經(jīng)免疫的動(dòng)物的測(cè)試血清與細(xì)菌細(xì)胞 反應(yīng)。如果對(duì)于測(cè)試多肽抗原特異的任何抗體與多肽抗原的表面暴露表位反應(yīng)，那么它可 以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)方法檢測(cè)。顯示所需體外活性的任何多肽隨后可以在體內(nèi)動(dòng)物攻擊模型中測(cè)試。在某些實(shí)施 方案中，免疫原性組合物通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的免疫接種方法和途徑(例如，鼻內(nèi)、腸 胃外、肌肉內(nèi)、經(jīng)口、經(jīng)直腸、陰道、經(jīng)皮、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下等)用于動(dòng)物(例如，小鼠) 的免疫。在用特定停乳鏈球菌免疫原性組合物免疫動(dòng)物后，用停乳鏈球菌或其他鏈球菌屬 物種攻擊動(dòng)物，并且就針對(duì)停乳鏈球菌或其他鏈球菌屬物種感染的抗性進(jìn)行測(cè)定。將C組或G組鏈球菌PPI/0RF 554多肽和多核苷酸摻入適合于施用于受試者的免 疫原性組合物。此類組合物一般包括核酸分子或蛋白質(zhì)，連同藥學(xué)上可接受的載體。如本 文使用的，短語“藥學(xué)上可接受的載體”意欲包括與藥學(xué)施用相容的任何和所有溶劑、分散 介質(zhì)、包衣、抗菌劑和抗真菌劑、等滲和吸收延遲劑、賦形劑等。此類介質(zhì)和試劑用于藥學(xué)活 性物質(zhì)的用途是本領(lǐng)域眾所周知的。除非任何常規(guī)介質(zhì)或試劑與活性化合物不相容，否則 此類介質(zhì)可以在本發(fā)明的組合物中使用。補(bǔ)充性活性化合物也可以摻入組合物內(nèi)。本發(fā)明的任何免疫原性組合物配制為與其預(yù)期施用途徑相容。施用途徑的例子 包括腸胃外(例如，肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、真皮內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi))、經(jīng)粘膜(例如，經(jīng)口、直腸、鼻 內(nèi)、陰道、呼吸)和經(jīng)皮(局部)。用于腸胃外、真皮內(nèi)或皮下應(yīng)用的溶液或懸浮液可以包括下述組分無菌稀釋劑例如注射用水、鹽水溶液、不揮發(fā)性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其 他合成溶劑；抗菌劑例如苯甲醇或?qū)αu基苯甲酸甲酯；抗氧化劑例如抗壞血酸或亞硫酸氫 鈉；螯合劑例如乙二胺四乙酸；緩沖劑例如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽，和用于調(diào)整張力的 試劑，例如氯化鈉或葡萄糖。可以用酸或堿例如鹽酸或氫氧化鈉調(diào)整PH。腸胃外制備物可 以封閉在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多劑量小瓶中。適合于注射用途的藥學(xué)組合物包括水溶液或分散系和用于臨時(shí)制備無菌注射 液或分散系的無菌粉劑。對(duì)于靜脈內(nèi)施用，合適載體包括生理鹽水、抑菌水、Cremophor EL (BASF, Parsippany, N. J.)或磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)。在所有情況下，組合物必須是無 菌的，并且應(yīng)流動(dòng)至容易注射性存在的程度。它在制造和貯存條件下必須是穩(wěn)定的，并且必 須針對(duì)微生物例如細(xì)菌和真菌的污染作用進(jìn)行保存。載體可以是溶劑或分散介質(zhì)，包含例 如水、乙醇、多羥基化合物(例如，甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合適混合物。合適流動(dòng) 性可以例如通過下述得到維持，通過使用包衣例如卵磷脂，在分散系的情況下通過維持所 需粒子大小，和通過使用表面活性劑。微生物作用的預(yù)防可以通過多種抗菌劑和抗真菌劑 來實(shí)現(xiàn)，例如對(duì)羥基苯甲酸、三氯叔丁醇、苯酚、抗壞血酸等。在許多情況下，等滲劑包括在 組合物中，例如糖、多元醇例如甘露醇、山梨糖醇和/或氯化鈉。可注射組合物的延長吸收 可以通過在組合物中包括延遲吸收的試劑來達(dá)到，所述試劑例如單硬脂酸鋁和明膠。無菌注射液可以通過將活性化合物(例如，C組或G組鏈球菌PPI多肽、ORF 554 多核苷酸或針對(duì)其的抗體)以所需量與上文列出成分之一或組合一起摻入合適溶劑中，需 要時(shí)，隨后為過濾滅菌。一般地，通過將活性化合物摻入無菌媒介物內(nèi)制備分散系，所述無 菌媒介物包含基本分散介質(zhì)和來自上述列舉那些的所需其他成分。在用于制備無菌注射液 的無菌粉劑的情況下，優(yōu)選制備方法是真空干燥和冷凍干燥，這產(chǎn)生來自其先前無菌過濾 溶液的活性成分加上任何另外所需成分的粉劑。經(jīng)口組合物一般包括惰性稀釋劑或食用載體。它們可以封閉在明膠膠囊中或壓縮 成片劑。為了經(jīng)口治療施用的目的，活性化合物可以與賦形劑一起摻入，并且以片劑、錠劑 或膠囊的形式使用。經(jīng)口組合物也可以使用流體載體進(jìn)行制備而用作漱口水，其中流體載 體中的化合物經(jīng)口應(yīng)用且發(fā)出瑟瑟聲，并且吐出或吞咽?？梢园ㄋ帉W(xué)上相容的結(jié)合劑和 /或佐劑材料作為組合物的部分。片劑、丸劑、膠囊、錠劑等可以包含下述成分中的任何，或 相似性質(zhì)的化合物粘合劑例如微晶纖維素、黃蓍膠或明膠；賦形劑例如淀粉或乳糖，崩解 劑例如海藻酸、Primogel或玉米淀粉；潤滑劑例如硬脂酸鎂或^erotes ；助流劑例如二氧 化硅膠體；甜味劑例如蔗糖或糖精；或調(diào)味劑例如薄荷、水楊酸甲酯或橙調(diào)味料。為了通過吸入施用，化合物以氣溶膠噴霧的形式從加壓容器或分配器或噴霧器中 遞送，所述分配器包含合適推進(jìn)劑，例如氣體例如二氧化碳。全身施用還可以通過經(jīng)粘液或 經(jīng)皮方式。對(duì)于經(jīng)粘膜或經(jīng)皮施用，在制劑中使用對(duì)于待穿透屏障合適的穿透劑。此類穿 透劑是本領(lǐng)域一般已知的，并且包括例如，對(duì)于經(jīng)粘膜施用、洗滌劑、膽汁鹽和梭鏈孢酸衍 生物。經(jīng)粘膜施用可以通過使用鼻腔噴霧或栓劑完成。對(duì)于經(jīng)皮施用，如本領(lǐng)域一般已知 的將活性化合物配制成軟膏、藥膏、凝膠劑或乳膏?；衔镞€可以以栓劑(例如用常規(guī)栓劑基質(zhì)，例如可可脂和其他甘油酯)或保留 灌腸的形式制備用于直腸遞送。在一個(gè)實(shí)施方案中，活性化合物用保護(hù)化合物不受從體內(nèi)快速消除的載體進(jìn)行制備，例如控制釋放制劑，包括埋植劑和微膠囊遞送系統(tǒng)。生物可降解、生物相容性聚合物例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原、聚原 酸酯和聚乳酸可以用作載體。用于制備此類制劑的方法對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員將是顯而易見 的。材料還可以從Alza Corporationand Nova Pharmaceuticals, Inc商購獲得。月旨質(zhì)體 懸浮液(包括靶向具有針對(duì)病毒抗原的單克隆抗體的受感染細(xì)胞的脂質(zhì)體)也可以用作藥 學(xué)上可接受的載體。這些可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備，例如如通過引用合并 入本文的美國專利號(hào)4，522，811中所述。有利的是配制以單位劑型形式的經(jīng)口或腸胃外組合物用于易于施用和劑量的均 勻性。如本文使用的，單位劑型形式指適合作為單元?jiǎng)┝坑糜诖委熓茉囌叩奈锢砩喜贿B 續(xù)單位；每個(gè)單位包含與所需藥學(xué)載體結(jié)合經(jīng)計(jì)算產(chǎn)生所需療效的預(yù)定數(shù)量的活性化合 物。關(guān)于本發(fā)明的單位劑型形式的規(guī)格由下述指示且直接依賴于下述活性化合物的獨(dú)特 特征和待達(dá)到的特定療效，和配藥法中固有的局限性例如用于治療個(gè)體的活性化合物。通過使本發(fā)明的多肽中的一種或多種與一種或多種已知鏈球菌多糖或多糖-蛋 白質(zhì)綴合物相組合提供組合免疫原性組合物。多糖-蛋白質(zhì)綴合物的蛋白質(zhì)組分被稱為“載體蛋白質(zhì)”。術(shù)語“載體蛋白質(zhì)”作 為組包括無毒、非反應(yīng)且以足夠量和純度可獲得的那些蛋白質(zhì)。載體蛋白質(zhì)可順應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)綴 合操作。例如，CRM197可以用作載體蛋白質(zhì)。CRM197，(ffyeth, Sanford, N. C.)是從白喉?xiàng)U菌 (Corynebacteriumdiphtheria)菌株C7(i3 197)中分離的白喉毒素的無毒變體(類毒素)， 所述白喉?xiàng)U菌在基于酪蛋白氨基酸和酵母提取物的培養(yǎng)基中生長。CRM197通過超濾、硫酸銨 沉淀和離子交換色譜法進(jìn)行純化。其他白喉類毒素也適合于用作載體蛋白質(zhì)。其他合適的載體蛋白質(zhì)包括滅活的細(xì)菌毒素例如破傷風(fēng)類毒素、百日咳類毒素、 霍亂類毒素(如例如WV2004/083251中所述)、大腸桿菌LT、大腸桿菌ST和來自銅綠假單 胞菌(I^eudomonas aeruginosa)的外毒素Α。還可以使用細(xì)菌外膜蛋白質(zhì)例如外膜復(fù)合物 c(OMPC)、孔蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合蛋白質(zhì)、肺松解術(shù)、肺炎球菌表面蛋白質(zhì)AO^spA)、肺炎球菌 粘附素蛋白質(zhì)O3SaA)、或流感嗜血桿菌(Haemophilusinfluenzae)蛋白質(zhì)D。其他蛋白質(zhì) 例如卵白蛋白、鑰孔血藍(lán)蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)或結(jié)核菌素(PPD)的純化蛋白質(zhì) 衍生物也可以用作載體蛋白質(zhì)。包括多核苷酸的免疫原性組合物通過多種載體和表達(dá)系統(tǒng)遞送給接受者。此類 系統(tǒng)尤其包括染色體、附加體和病毒衍生系統(tǒng)，例如衍生自下述的載體細(xì)菌質(zhì)粒、減毒 細(xì)菌例如沙門氏菌屬(美國專利號(hào)4，837，151)，噬菌體，轉(zhuǎn)座子，酵母附加體，插入元件， 酵母染色體元件，病毒例如痘苗和其他痘病毒、腺病毒、桿狀病毒、乳多空病毒例如SV40、 禽痘病毒、假性狂犬病病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒、甲病毒例如委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒(美國專利 號(hào)5，643，576)、辛德畢斯病毒和塞姆利基森林病毒、非節(jié)段負(fù)鏈RNA病毒例如水皰性口 炎病毒(美國專利號(hào)6，168，943)，和衍生自其組合的載體，例如衍生自質(zhì)粒和噬菌體遺 傳元件的載體，例如粘粒和噬菌粒。表達(dá)系統(tǒng)應(yīng)包括調(diào)節(jié)以及引起表達(dá)的控制區(qū)，例如 啟動(dòng)子和其他調(diào)節(jié)元件(例如多腺苷酸化信號(hào))。一般地，可以使用適合于維持、繁殖或 表達(dá)多核苷酸以在宿主中產(chǎn)生多肽的任何系統(tǒng)或載體。合適的核苷酸序列可以通過多 種眾所周知和常規(guī)技術(shù)中的任何插入表達(dá)系統(tǒng)內(nèi)，例如Sambrook等人，“Molecular Cloning :A LaboratoryManual“第 2 版，Cold Spring Harbor Laboratory, Cold SpringHarborLaboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. , 1989 中所示的那些。本發(fā)明的免疫原性組合物一般在單位劑量制劑中腸胃外施用，需要時(shí)，所述單位 劑量制劑包含標(biāo)準(zhǔn)、眾所周知的無毒生理學(xué)上可接受的載體、佐劑和媒介物。藥學(xué)上可接受的媒介物應(yīng)理解為指定進(jìn)入藥學(xué)或免疫原性組合物內(nèi)的化合物或 化合物組合，其不引起副作用并且使得可以例如促進(jìn)活性化合物施用，增加其在體內(nèi)的壽 命和/或其功效，增加其在溶液中的溶解性或備選地增強(qiáng)其保存。這些藥學(xué)上可接受的媒 介物是眾所周知的，并且根據(jù)選擇的活性化合物的性質(zhì)和施用方式通過本領(lǐng)域技術(shù)人員修 改。根據(jù)已知技術(shù)配制可注射制劑例如無菌可注射水性或油性懸浮液，其中使用合適 的分散劑或濕潤劑和懸浮劑。無菌可注射制備物還可以是在無毒腸胃外可接受的稀釋劑或 溶劑中的無菌注射液或懸浮液，例如作為在1，3-丁二醇中的溶液。在可以采用的可接受媒介物和溶劑中有水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。此外， 無菌、不揮發(fā)性油照慣例用作溶劑或懸浮介質(zhì)。為了這個(gè)目的，可以采用任何溫和的不揮發(fā) 性油，包括合成的甘油單或二酯。此外，脂肪酸例如油酸在注射劑制備中有用。載體包括用磷酸鹽、乳酸鹽、Tris等緩沖的中性鹽水溶液。當(dāng)施用病毒載體時(shí)，充 分純化載體以致使其基本上不含不希望有的污染物，例如缺陷干涉腺病毒顆?；騼?nèi)毒素和 其他熱原，從而使得它在接受載體構(gòu)建體的個(gè)體中不引起任何不利反應(yīng)。在某些實(shí)施方案 中，純化載體的方法涉及使用浮力密度梯度，例如氯化銫梯度離心。載體還可以是脂質(zhì)體。關(guān)于使用脂質(zhì)體作為遞送媒介物的方法是本領(lǐng)域眾所周知 的(參見例如，由 Schwendener RA, Adv. Exp. Med. Biol. 620 :117-128,2007 的綜述)。本發(fā)明的免疫原性組合物還包括與控制基因表達(dá)的調(diào)節(jié)序列可操作地連接的本 發(fā)明多核苷酸序列。將目的多核苷酸序列改造到表達(dá)載體例如質(zhì)粒內(nèi)，在促進(jìn)DNA表達(dá)的 調(diào)節(jié)元件的控制下，所述調(diào)節(jié)元件即啟動(dòng)子和/或增強(qiáng)子元件。在某些實(shí)施方案中，使用人 巨細(xì)胞病毒立即早期啟動(dòng)子/增強(qiáng)子(美國專利號(hào)5，168，06 。啟動(dòng)子可以是細(xì)胞特異性 的，并且允許多核苷酸僅在預(yù)定細(xì)胞中的大量轉(zhuǎn)錄。本發(fā)明的多核苷酸作為“裸露”DNA直接引入宿主內(nèi)(美國專利號(hào)5，580，859)或 與促進(jìn)劑一起在組合物中配制，所述促進(jìn)劑例如布比卡因和其他局部麻醉劑(美國專利 號(hào)5，593，972)和陽離子聚胺(美國專利號(hào)6，127，170。)在這個(gè)多核苷酸免疫接種操作中，本發(fā)明的多肽在體內(nèi)在瞬時(shí)基礎(chǔ)上表達(dá)；不將 遺傳材料插入或整合到宿主的染色體內(nèi)。這個(gè)操作區(qū)別于其中目的是將目的遺傳材料插入 或整合到染色體內(nèi)的基因療法。測(cè)定法用于證實(shí)通過免疫施用的多核苷酸不引起宿主中的 轉(zhuǎn)化表型(例如，美國專利號(hào)6，168，918)。在特定實(shí)施方案中，如本文描述的免疫原性組合物還包括一種或多種佐劑。佐 劑是當(dāng)連同免疫原或抗原一起施用時(shí)增強(qiáng)免疫應(yīng)答的物質(zhì)。許多細(xì)胞因子或淋巴因子已 顯示具有免疫調(diào)節(jié)活性，并且因此用作佐劑，包括但不限于白介素1-α、1_β、2、4、5、6、 7、8、10、12(參見例如，美國專利號(hào)5，723，127)、13、14、15、16、17和18(及其突變形式)； 干擾素-α、β和γ ；粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)(參見例如，美國專利號(hào) 5，078，996和ATCC登記號(hào)39900)；巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)；粒細(xì)胞集落刺激因 子(G-CSF)；以及腫瘤壞死因子α和β。對(duì)于本文描述的免疫原性組合物有用的另外其他佐劑包括趨化因子，包括但不限于MCP-1、MIP-I α、MIP-I β和RANTES ；粘附分子例如 選擇素，例如L-選擇素、P-選擇素和E-選擇素；粘蛋白樣分子，例如⑶34、GlyCAM-I和 MadCAM-I ；整聯(lián)蛋白家族成員例如LFA-1、VLA-U Mac-I和ρ150. 95 ；免疫球蛋白超家族成 員例如 PECAM，ICAMs 例如 ICAM-1、ICAM-2 和 ICAM-3，CD2 和 LFA-3 ；共刺激分子例如 CD40 和⑶40L ；生長因子包括血管生長因子、神經(jīng)生長因子、成纖維細(xì)胞生長因子、表皮生長因 子、Β7. 2、PDGF、BL-1和血管內(nèi)皮生長因子；受體分子包括i^as、TNF受體、Fit、Apo-1、p55、 WSL-I、DR3、TRAMP、Apo-3、AIR、LARD、NGRF, DR4、DR5、KILLER、TRAIL-R2、TRICK2 和 DR6 ；和 半胱天冬酶(ICE)。用于增強(qiáng)免疫應(yīng)答的合適佐劑進(jìn)一步包括但不限于MPL (3-0-去乙?；瘑瘟柞?脂質(zhì)A，Corixa, Hamilton, MT)，其在美國專利號(hào)4，912，094中描述。還適合于用作佐劑的 是合成的脂質(zhì)A類似物或氨基烷基葡糖胺磷酸鹽化合物(AGP)、或其衍生物或類似物，其 可從Corixa (Hamilton，MT)獲得，并且在美國專利號(hào)6，113,918中描述。一種此類AGP是 2-[(R) -3-十四酰氧基十四酰氨基]乙基2-脫氧-4-0-膦酰基-3-0-[ (R) -3-十四酰氧基 十四酰]-2-[ (R) -3-十四酰氧基十四酰-氨基]-b-D-吡喃葡萄糖苷，其也稱為5 (先前 稱為RC529)。這種5 佐劑配制為水形式(AF)或穩(wěn)定乳狀液(SE)。另外其他佐劑包括胞壁酰肽，例如N-乙?；?胞壁酰-L-蘇氨酰-D-異谷氨酰 胺(thr-MDP)，N-乙酰基-正胞壁酰-L-丙氨酸_2_(1’ -2’ 二棕櫚酰-sn-甘油-3-羥 基膦?；趸?_乙胺(MTP-PE)；水包油乳化液，例如使用微射流機(jī)(microfluidizer)例 如Model IlOY微射流機(jī)(Microfluidics，Newton, MA))配制成亞微米顆粒的MF59 (美國 專利號(hào)6，四9，884)(包含5%角鯊烯、0.5% Tween 80和0.5% Span 85(任選包含多種量 的MTP-PE)，和SAF (包含10%角鯊烯、0.4% Tween 80、5 %普朗尼克-嵌段聚合物L(fēng)121 和thr-MDP，微流化成亞微米乳狀液或渦旋以產(chǎn)生較大粒子大小的乳狀液)；不完全弗氏佐 劑(IFA)；鋁鹽(鋁)，例如氫氧化鋁、磷酸鋁、硫酸鋁；Amphigen ；阿夫立定-,1121/角鯊烯； D-丙交酯-聚丙交酯/糖苷；普朗尼克多羥基化合物；殺死的博德特氏菌(Bordetella)； 皂苷，例如在美國專利號(hào)5, 057, 540中描述的Stimulon QS-21 (Antigenics， Framingham, MA.),在美國專利號(hào) 5，254，339 中描述的 ISCOMATRIX (CSL Limited, Parkville, Australia)，和免疫刺激復(fù)合物(ISCOMS)；結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)；細(xì)菌脂多糖；合成的多核苷酸例如包含CpG基序的寡核苷酸(例如，美國 專利號(hào) 6, 207, 646)；在歐洲專利號(hào) 1, 296, 713 ^P 1, 326, 634 中描述的 IC-31 (Intercell AG, Vienna, Austria)；百日咳毒素(PT)或其突變體、霍亂毒素或其突變體(例如，美國專 利號(hào)7，285，281,7, 332，174,7, 361，355和7，384，640)；或大腸桿菌不耐熱毒素(LT)或其 突變體，特別是 LT-K63、LT-R72(例如，美國專利號(hào) 6，149,919,7, 115，730 和 7，291，588)。治療性抗體和抗原結(jié)合多肽本發(fā)明尤其針對(duì)鏈球菌感染的治療，通過在受試者中產(chǎn)生有利治療應(yīng)答的條件 下，給受試者施用治療免疫學(xué)試劑，例如識(shí)別在鏈球菌PPI內(nèi)的特異性表位的人源化單克 隆抗體。“免疫學(xué)試劑”包括例如抗體、人源化抗體、抗體片段、包括抗原結(jié)合元件或CDR的肽 等。“有利治療應(yīng)答”包括例如吞噬作用的誘導(dǎo)或β溶血性鏈球菌的調(diào)理作用。本發(fā)明還 涉及所公開的免疫學(xué)試劑在制備用于治療或預(yù)防β溶血性鏈球菌感染的藥物中的用途。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了預(yù)防或治療與患者中的β溶血性鏈球菌感染相關(guān)的疾病的方法。本發(fā)明的某些方法必需給患者施用有效劑量的抗體，所述抗體與鏈球菌PPI 表位特異性結(jié)合。此類方法對(duì)于預(yù)防或治療受試者中的β溶血性鏈球菌疾病特別有用。 “受試者”包括任何脊椎動(dòng)物，例如伴侶動(dòng)物、農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物、哺乳動(dòng)物和人患者。示例性方法包 括施用有效劑量的與鏈球菌PPI結(jié)合的抗體或抗原結(jié)合肽。某些實(shí)施方案包括施用有效劑 量的包括抗原識(shí)別位點(diǎn)或CDR的抗體或其他肽，其與鏈球菌PPI內(nèi)的表位特異性結(jié)合，例如 包括SEQ ID NO :2、4、6、8、10和11中的任何一個(gè)或多個(gè)的氨基酸序列的PPI。在另外一個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于施用抗體或其他抗原結(jié)合肽，其與受試者中 的鏈球菌PPI結(jié)合，并且誘導(dǎo)針對(duì)β溶血性鏈球菌的清除應(yīng)答。例如，此類清除應(yīng)答可以 通過Fc受體介導(dǎo)的吞噬作用實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明的治療性免疫學(xué)試劑一般基本上純化的，不含不希望有的污染物。這意味 著免疫學(xué)試劑一般至少約50 % w/w (重量/重量)純度，以及基本上不含干擾蛋白質(zhì)和污染 物。在某些實(shí)施方案中，免疫學(xué)試劑是至少約80% w/w純度。在其他實(shí)施方案中，免疫學(xué) 試劑是至少約90或約95% w/w純度。然而，使用常規(guī)蛋白質(zhì)純化技術(shù)，可以獲得至少99% w/w純度的均質(zhì)肽。該方法可以對(duì)無癥狀受試者和目前顯示疾病癥狀的受試者使用。在此類方法中使 用的抗體可以是人、人源化、嵌合或非人抗體、或其片段(例如，抗原結(jié)合片段、包括表位結(jié) 合區(qū)的肽或CDR)，并且可以是單克隆或多克隆的，如本文描述的。在另一個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于施用抗體與藥學(xué)載體作為藥學(xué)組合物。備選地， 抗體可以通過施用編碼至少一條抗體鏈的多核苷酸施用于受試者。表達(dá)多核苷酸以在患者 中產(chǎn)生抗體鏈。任選地，多核苷酸編碼抗體的重鏈和輕鏈。表達(dá)多核苷酸以在患者中產(chǎn)生 重鏈和輕鏈。在示例性實(shí)施方案中，就患者血液中施用抗體的水平監(jiān)控患者。順應(yīng)治療的受試者包括處于疾病危險(xiǎn)中但未顯示癥狀的個(gè)體，以及目前顯示癥狀 的患者。因此，呈現(xiàn)的免疫原性組合物和治療性抗體可以預(yù)防地施用于一般群體。在無癥 狀受試者中，治療可以在任何年齡時(shí)開始。治療可以通過測(cè)定隨著時(shí)間過去的抗體水平進(jìn) 行監(jiān)控。如果免疫應(yīng)答或抗體水平下降，那么指示加強(qiáng)劑量。在預(yù)防性應(yīng)用中，將免疫原性組合物或藥物施用于對(duì)β溶血性鏈球菌感染敏感 或另外處于β溶血性鏈球菌感染危險(xiǎn)中的受試者，其量足以消除或減少危險(xiǎn)、減輕嚴(yán)重 性、或延遲疾病開始，包括與感染相關(guān)的疾病的生物化學(xué)、組織學(xué)和/或行為癥狀，其并發(fā) 癥和在疾病發(fā)展過程中呈現(xiàn)的中間病理學(xué)表型。在治療性應(yīng)用中，將組合物或藥物施用于 懷疑或已患有此類疾病的患者，其量足以治愈或至少部分阻止疾病的癥狀(生物化學(xué)、組 織學(xué)和/或行為)，包括其并發(fā)癥和在疾病發(fā)展中的中間病理學(xué)表型。足以完成治療性或預(yù)防性處理的量定義為治療或預(yù)防有效劑量。在預(yù)防性和治療 性方案中，免疫學(xué)試劑通常以幾個(gè)劑量施用，直至已實(shí)現(xiàn)足夠的免疫應(yīng)答。術(shù)語“免疫應(yīng)答” 或“免疫學(xué)應(yīng)答”包括接受受試者中針對(duì)抗原的體液(抗體介導(dǎo)的)和/或細(xì)胞(通過抗 原特異性T細(xì)胞或其分泌產(chǎn)物介導(dǎo)的)應(yīng)答的發(fā)展。此類應(yīng)答可以是主動(dòng)應(yīng)答，即通過施 用免疫原(同上)所誘導(dǎo)的，或被動(dòng)應(yīng)答，即通過施用免疫球蛋白或抗體或預(yù)處理的T細(xì)胞 所誘導(dǎo)的。一般地，監(jiān)控免疫應(yīng)答，并且如果免疫應(yīng)答開始減弱，那么給予反復(fù)劑量。本發(fā)明的組合物用于治療β溶血性鏈球菌感染的有效劑量依賴于許多不同因素 而改變，所述不同因素包括施用方式、靶位點(diǎn)、患者的生理學(xué)狀況、患者是人還是其他動(dòng)物、施用的其他藥物、和處理是預(yù)防性的還是治療性的。通常，受試者是人，但也可以治療非人 哺乳動(dòng)物包括轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。治療劑量可能需要逐步增加，以最佳化安全和功效。對(duì)于使用抗體的被動(dòng)免疫接種，劑量范圍為約0.0001-100mg/kg，并且更通常為 0. 01-5mg/kg(例如，0. 02mg/kg、0. lmg/kg、0. 15mg/kg、0. 2mg/kg、0. 25mg/kg、0. 5mg/kg、 0. 75mg/kg、lmg/kg、2mg/kg等)宿主體重。例如，劑量可以是約lmg/kg體重或約10mg/kg 體重或在l-10mg/kg范圍內(nèi)。在上述范圍中間的劑量也意欲在本發(fā)明的范圍內(nèi)。受試者可 以每天、隔天、每周、每月、每2個(gè)月、每3個(gè)月或根據(jù)通過經(jīng)驗(yàn)分析決定的任何其他時(shí)間表 施用此類劑量。示例性治療必需經(jīng)過例如至少6個(gè)月的延長時(shí)期施用多次劑量。另外的示 例性治療方案必需每2周施用一次，或每月一次或每3-6個(gè)月一次。示例性劑量時(shí)間表包 括在連續(xù)天時(shí)的l-10mg/kg或15mg/kg，在隔天時(shí)的30mg/kg或每周60mg/kg。在某些方法 中，同時(shí)施用具有不同結(jié)合特異性的2種或更多種單克隆抗體，在所述情況下每種抗體施 用的劑量包括在所示范圍內(nèi)?？贵w通常以多次機(jī)會(huì)施用。單個(gè)劑量之間的間隔可以是每周、每月或每年。間隔 也可以是不規(guī)則的，如通過測(cè)量患者中針對(duì)鏈球菌PPI的抗體血液水平指示的。在某些方 法中，調(diào)整劑量以達(dá)到l-1000yg/ml的血漿抗體濃度，并且在某些方法中，是25-300 μ g/ ml。備選地，抗體可以作為持續(xù)釋放制劑施用，在所述情況下需要較不頻繁的施用。劑量和 頻率依賴于抗體在患者中的半衰期而改變。一般而言，人源化抗體顯示最長的半衰期，隨后 為嵌合抗體和非人抗體。施用劑量和頻率可以依賴于處理是預(yù)防性的還是治療性的而改變。在預(yù)防性應(yīng)用 中，將包含呈現(xiàn)的抗體或其混合物的組合物施用于不處于疾病狀態(tài)中的患者，以增強(qiáng)患者 的抵抗力。此類量定義為“預(yù)防有效劑量”。在這種用途中，精確量再次依賴于患者的健康 狀況和全身免疫性，但一般范圍為0. l-25mg/劑量，特別是0. 5-2. 5mg/劑量。相對(duì)低劑量 以相對(duì)不頻繁的間隔經(jīng)過長時(shí)間段施用。在治療性應(yīng)用中，有時(shí)需要以相對(duì)短間隔的相對(duì)高劑量(例如，約l_200mg抗體/ 劑量，其中更通常使用5-25mg的劑量)，直至疾病進(jìn)展減少或終止，并且優(yōu)選直至患者顯示 疾病癥狀的部分或完全改善。其后，患者可以施用預(yù)防性方案。關(guān)于編碼抗體的核酸的劑量范圍為約10ng-lg、lOOng-lOOmg、1 μ g-10mg、或 30-300 μ g DNA/患者。關(guān)于傳染性病毒載體的劑量從10到100或更多病毒粒子/劑量不等。治療性免疫學(xué)試劑可以通過腸胃外、局部、靜脈內(nèi)、經(jīng)口、皮下、動(dòng)脈內(nèi)、顱內(nèi)、腹膜 內(nèi)、鼻內(nèi)或肌肉內(nèi)方法施用用于預(yù)防性和/或治療性處理。免疫學(xué)試劑的最一般施用途徑 是靜脈內(nèi)輸注或皮下施用，盡管其他途徑也是同樣有效的。下一個(gè)最常見的途徑是肌肉內(nèi) 注射。這種類型的注射最一般在臂或腿肌肉中執(zhí)行。在某些方法中，免疫學(xué)試劑直接注射 到其中已積累沉積物的特定組織內(nèi)，例如顱內(nèi)注射。肌肉內(nèi)注射或靜脈內(nèi)輸注優(yōu)選用于抗 體施用。在某些方法中，抗體作為持續(xù)釋放組合物或裝置施用，例如microinfusor裝置 (例如，Medipad 裝置；參見 Meehan 等人，Journal of Controlled Release, 46 :107-119, 1997.)如上所述，通過施用編碼抗體及其組分鏈的核酸用于被動(dòng)免疫接種，可以在體內(nèi) (或離體)形成針對(duì)β溶血性鏈球菌感染的免疫應(yīng)答。此類核酸可以是DNA或RNA。編碼免疫學(xué)試劑的核酸區(qū)段一般與調(diào)節(jié)元件例如啟動(dòng)子和增強(qiáng)子連接，所述調(diào)節(jié)元件允許在患 者的預(yù)期靶細(xì)胞中表達(dá)DNA區(qū)段。對(duì)于在血細(xì)胞中的表達(dá)，如對(duì)于誘導(dǎo)免疫應(yīng)答希望的，來 自輕鏈或重鏈免疫球蛋白基因的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子元件或CMV主要立即早期啟動(dòng)子和增強(qiáng) 子適合于指導(dǎo)表達(dá)。連接的調(diào)節(jié)元件和編碼序列通?？寺〉捷d體內(nèi)。對(duì)于雙鏈抗體的施用， 2條鏈可以克隆到相同或分開載體中。許多病毒載體系統(tǒng)是可獲得的，包括逆轉(zhuǎn)錄病毒系統(tǒng)(參見例如，Lawrie和 Tumin, Cur. Opin. Genet. Develop. 3 :102109(1993))；腺病毒載體(參見例如，Bett 等 人，J.Virol. 67 :5911(1993))；腺伴隨病毒載體(參見例如，Zhou 等人，J. Exp. Med. 179 1867(1994))，來自痘家族包括痘苗病毒和禽痘病毒的病毒載體，來自甲病毒屬的病 毒載體例如衍生自辛德畢斯和塞姆利基森林病毒的那些(參見例如，Dubensky等 人，J.Virol. 70 :508(1996)),委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒(參見Johnston等人，美國專利號(hào) 5，643，576)和彈狀病毒，例如水皰性口炎病毒(參見Rose，美國專利號(hào)6，168, 943)和乳頭 狀瘤病毒(Ohe 等人，Human Gene Therapy 6:325(1995) ；Woo 等人，WO 94/1 和 Xiao& Brandsma, Nucleic Acids. Res. 24,2630 2622(1996))。編碼抗體或包括CDR的抗體片段的DNA，或包含其的載體，可以包裝到脂質(zhì)體內(nèi)。 合適脂質(zhì)和相關(guān)類似物由Eppstein等人，美國專利號(hào)5，208，036，F(xiàn)eigner等人，美國專利 號(hào)5，264，618，Rose，美國專利號(hào)5，279，833，和Epand等人，美國專利號(hào)5，283，185描述。 載體和編碼免疫原的DNA也可以與微粒載體吸附或結(jié)合，所述微粒載體的例子包括聚甲基 丙烯酸甲酯聚合物和聚丙交酯和聚(丙交酯共乙交酯)，參見例如，McGee等人，J. Micro Encap. 14(2) :197-210(1997)。多核苷酸載體或裸露多核苷酸(例如，DNA)可以通過施用于個(gè)體患者在體內(nèi)遞 送，一般通過全身施用(例如，靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻、胃、真皮內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下或顱內(nèi)輸注)或 局部應(yīng)用(參見例如，Anderson等人，美國專利號(hào)5，399，346)。術(shù)語“裸露多核苷酸”指不 連同轉(zhuǎn)染促進(jìn)劑一起施用的多核苷酸。裸露多核苷酸有時(shí)在質(zhì)粒載體中克隆。質(zhì)粒載體可 以進(jìn)一步包括轉(zhuǎn)染促進(jìn)劑例如布比卡因(Weiner等人，美國專利號(hào)5，593，972)。DNA還可 以使用基因槍以施用。參見Xiao & Brandsma，同上。編碼抗體(或包括CDR的片段)的 DNA沉淀到微型金屬珠的表面上。微彈轟擊(microprojectiles)用沖擊波或膨脹氦氣加 速，并且穿透組織到幾個(gè)細(xì)胞層的深度。例如，由Agricetus，Inc. Middleton Wis.制造的 ACCEL Gene Delivery Device，即DNA槍，適合于用于本發(fā)明的實(shí)踐中。備選地，簡單地通 過用化學(xué)或機(jī)械刺激將DNA點(diǎn)在皮膚上，裸露DNA可以經(jīng)過皮膚進(jìn)入血流內(nèi)(參見Howell 等人，WO 95/05853)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，編碼免疫學(xué)試劑的載體可以離體遞送給細(xì)胞，例如來自個(gè) 體患者外植的細(xì)胞(例如，淋巴細(xì)胞、骨髓抽吸物、組織活組織檢查)或萬能供體造血干細(xì) 胞，隨后為細(xì)胞再植入患者內(nèi)，通常在選擇已摻入載體的細(xì)胞后。本發(fā)明的免疫學(xué)試劑可以任選與其他試劑組合施用，所述其他試劑至少在治療β 溶血性鏈球菌疾病中部分有效。本發(fā)明的免疫學(xué)試劑還可以與其他試劑組合施用，所述其 他試劑增強(qiáng)治療性免疫學(xué)試劑進(jìn)入靶細(xì)胞或組織，例如脂質(zhì)體等。共施用此類試劑可以降 低達(dá)到所需效應(yīng)需要的治療性免疫學(xué)試劑(例如，治療性抗體或抗體鏈)的劑量。本發(fā)明的免疫學(xué)試劑通常作為包含活性治療性試劑即和多種其他藥學(xué)上可接受的組分的藥學(xué)組合物施用。參見Remington' s Pharmaceutical Science (第15版，Mack Publishing Company, Easton, Pa. (1980))。優(yōu)選形式依賴于預(yù)期施用方式和治療性應(yīng)用。 依賴于所需制劑，組合物還可以包括藥學(xué)上可接受的、無毒載體或稀釋劑，其定義為通常用 于配制藥學(xué)組合物用于動(dòng)物或人施用的媒介物。這樣選擇稀釋劑以便不影響組合的生物學(xué) 活性。此類稀釋劑的例子是蒸餾水、生理學(xué)磷酸鹽緩沖鹽水、林格氏溶液、葡萄糖溶液和漢 克氏溶液。此外，藥學(xué)組合物或制劑還可以包括其他載體，佐劑，或無毒、非治療性、非免疫 原性的穩(wěn)定劑等。藥學(xué)組合物還可以包括大的、緩慢代謝的大分子，例如蛋白質(zhì)、多糖例如殼聚糖、 聚乳酸、聚乙醇酸和共聚物(例如膠乳官能化的s印harose 、瓊脂糖、纖維素等)、聚合氨基 酸、氨基酸共聚物和脂質(zhì)聚集物(例如油小滴或脂質(zhì)體)。另外，這些載體可以充當(dāng)免疫刺 激劑(即，佐劑)。對(duì)于腸胃外施用，本發(fā)明的免疫學(xué)試劑可以作為物質(zhì)在具有藥學(xué)載體的藥學(xué)上可 接受的稀釋劑中的溶液或懸浮液的可注射劑量施用，所述藥學(xué)載體可以是無菌液體例如水 油、鹽水、甘油或乙醇。另外，輔助物質(zhì)例如濕潤劑或乳化劑、表面活性劑、PH緩沖物質(zhì)等可 以存在于組合物中。藥學(xué)組合物的其他組分是具有石油、動(dòng)物、蔬菜或合成起源的那些，例 如花生油、大豆油和礦物油。一般而言，二醇例如丙二醇或聚乙二醇是優(yōu)選液體載體，特別 是對(duì)于可注射溶液。抗體可以以積存注射或埋植劑制備物的形式施用，其可以以這樣的方 式配制，以便允許活性成分的持續(xù)釋放。示例性組合物包括在水性緩沖液中配制的5mg/mL 的單克隆抗體，所述水性緩沖液由50mM L-組氨酸、150mM NaCl組成，用HCl調(diào)整至pH6. 0。一般地，組合物制備為注射劑，作為液體溶液或懸浮液；還可以制備適合于在注射 前溶解或懸浮于液體媒介物中的固體形式。制備物還可以在脂質(zhì)體或微小粒子例如聚丙交 酯、聚乙交酯或共聚物中乳化或封裝，用于增強(qiáng)佐劑效應(yīng)，如上所述(參見LangerAcience 249 :1527(1990)和 Hanes，Advanced Drug Delivery Reviews 28:97(1997))。本發(fā)明的 免疫學(xué)試劑可以以積存注射或埋植劑制備物的形式施用，其可以以這樣的方式施用，以便 允許活性成分的持續(xù)或脈沖式釋放。適合于其他施用方式的另外制劑包括經(jīng)口、鼻內(nèi)和肺制劑、栓劑和經(jīng)皮應(yīng)用。對(duì)于 栓劑，粘合劑和載體包括例如聚乙二醇或甘油三酯；此類栓劑可以由包含在0. 5 % -10 %優(yōu) 選-2%范圍中的活性成分的混合物形成。經(jīng)口制劑包括賦形劑，例如藥學(xué)級(jí)別的甘露 醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素和碳酸鎂。這些組合物采取溶液、懸浮液、片劑、丸 劑、膠囊、持續(xù)釋放制劑或粉劑的形式，并且包含10% -95%活性成分，優(yōu)選25% -70%?？商娲兀?jīng)皮遞送可以使用皮膚貼劑或使用transferosomes來實(shí)現(xiàn)(Paul φ A, Eur. J. Immunol. 25 :3521 (1995) ；Cevc φ A, Biochem. Biophys. Acta 1368 20115(1998))。本發(fā)明還提供了監(jiān)控患有β溶血性鏈球菌感染或?qū)Ζ氯苎枣溓蚓腥久舾械?患者中的治療的方法，即用于監(jiān)控施用于患者的治療過程。該方法可以用于監(jiān)控對(duì)無癥狀 患者的治療性處理和對(duì)無癥狀患者的預(yù)防性處理。特別地，該方法對(duì)于監(jiān)控被動(dòng)免疫有用 (例如，測(cè)量施用抗體的水平)。某些方法必需測(cè)定例如在施用免疫學(xué)試劑的劑量之前患者中的抗體水平或譜的 基線值，并且使之與關(guān)于治療后的譜或水平的值比較。水平或譜的值中的顯著增加(即，大于相同樣品的反復(fù)測(cè)量中的實(shí)驗(yàn)誤差的一般邊緣，表示為距離此類測(cè)量平均值1個(gè)標(biāo)準(zhǔn) 差)顯示陽性治療結(jié)果(即，免疫學(xué)試劑的施用已實(shí)現(xiàn)所需應(yīng)答)。如果關(guān)于免疫應(yīng)答的 值未顯著改變或降低，那么指示陰性治療結(jié)果。如果治療是被動(dòng)免疫療法，那么抗體水平預(yù) 期隨著時(shí)間過去降低，具有特征半衰期。用于分析的組織樣品一般是來自患者的血液、血漿、血清、粘液流體或腦脊髓液。 樣品例如就針對(duì)鏈球菌PPI的抗體水平或滴度進(jìn)行分析。檢測(cè)對(duì)鏈球菌PPI特異的抗體 的ELISA方法在實(shí)施例部分描述。在某些方法中，使用清除測(cè)定法測(cè)定施用抗體的水平或 滴度，例如在體外吞噬作用測(cè)定法中(參見例如，Jansen等人，Clin. Diagn. Lab. Immunol.， 8(2) :245-250,2001.)在被動(dòng)免疫接種后的抗體譜一般顯示抗體濃度中的立即峰，隨后為指數(shù)式衰減。 如果沒有進(jìn)一步劑量，那么衰減在數(shù)天至數(shù)月的時(shí)期內(nèi)接近處理前水平，依賴于施用抗體 的半衰期。在某些方法中，在施用前進(jìn)行患者中針對(duì)鏈球菌PPI的抗體的基線測(cè)量，其后不 久進(jìn)行第二次測(cè)量，以測(cè)定峰抗體水平，并且以間隔進(jìn)行一次或多次進(jìn)一步測(cè)量，以監(jiān)控抗 體水平的衰減。當(dāng)抗體水平已下降至基線或小于基線的峰預(yù)定百分率(例如，50%、25%或 10%)時(shí)，使用抗體的進(jìn)一步劑量的施用。在某些方法中，峰或后續(xù)測(cè)量的小于本底的水平 與先前測(cè)定的參考水平比較，以構(gòu)成在其他患者中有利的預(yù)防性或治療性處理方案。如果 測(cè)量的抗體水平顯著小于參考水平(例如，在獲益于處理的患者群體中小于參考值的平均 值減1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差)，那么指示抗體的另外劑量的施用。另外的方法包括隨著治療過程監(jiān)控常規(guī)由研究者或醫(yī)生依賴以診斷或監(jiān)控鏈球 菌感染或相關(guān)疾病的任何領(lǐng)域公認(rèn)的示例性癥狀。例如，可以監(jiān)控蜂窩織炎、丹毒、小膿皰 疹、壞死性筋膜炎、咽喉痛、紅喉(redthroat)、惡寒、發(fā)熱、頭痛、惡心、嘔吐、心跳加快、不 適、扁桃體腫大、淋巴結(jié)腫大和/或皮疹。根據(jù)說明書內(nèi)引用的參考文獻(xiàn)的教導(dǎo)，最充分理解說明書，所有參考文獻(xiàn)在此通 過引用整體合并。在說明書內(nèi)的實(shí)施方案提供了本發(fā)明實(shí)施方案的舉例說明，并且不應(yīng)解 釋為限制本發(fā)明的范圍。技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)識(shí)到許多其他實(shí)施方案由本發(fā)明包含，并且預(yù)期說 明書和實(shí)施例僅被視為示例性的，而本發(fā)明的真實(shí)范圍和精神由下述權(quán)利要求指出。實(shí)施例1 停乳鏈球菌ORF 554的克隆關(guān)于A組的十二(12)個(gè)基因組序列和關(guān)于B組鏈球菌屬物種的多個(gè)基因組序列 是可公開獲得的。開放讀碼框(ORF)編號(hào)554(0RF 554)的DNA和蛋白質(zhì)序列已在這些鏈 球菌屬基因組的許多中得到鑒定；參見例如，公開的國際專利申請(qǐng)?zhí)朩O 02/083859。然而， 存在關(guān)于C組或G組基因組有限的序列信息。本文公開的是這個(gè)ORF 5M在其他G組和C 組鏈球菌菌株中的序列。包含ORF 5M的已知鏈球菌屬序列在AlignX(載體NTI)中比對(duì)，并且同源性區(qū) 域用于簡并引物構(gòu)建(參見 Wessner，Science, 286 (5554) 1495-1496，1999 ；Henikoff 和 Henikoff，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89 10915-10919，1992 ；和 Rhee 等人，Applied andEnvironmental Microbiology, 71 (2) :817-825,2005.)寡核苷酸引物設(shè)計(jì)為具有最低 限度簡并性，同時(shí)維持高解鏈溫度和低自身二聚化潛力。用于分離、擴(kuò)增和鑒定新型C組或 G組鏈球菌ORF 554多核苷酸的寡核苷酸引物核苷酸序列在SEQ ID NO 18-26中顯示。
使用對(duì)鏈球菌屬C分離物ATCC12394(停乳鏈球菌似馬亞種)制備的基因組DNA 制劑執(zhí)行起始PCR研究。獲得關(guān)于ORF 5M的5-最初和3-最初末端的部分基因序列。隨 后基于這些序列設(shè)計(jì)正向和反向引物(分別為SEQ ID N0:23和SEQ ID N0:24)，并且隨后 用于通過PCR產(chǎn)生來自不同G和C菌株的約700-900bp 0RF5M序列。在本公開內(nèi)容前未限定來自這些菌株的0RF554的基因組或蛋白質(zhì)序列。關(guān)于來 自分離物ATCC12394的ORF 554獲得的核苷酸序列在SEQ ID NO=I中描述，并且它的氨基 酸序列在SEQ ID NO 2中描述。0RF554在五(5)種分離物中發(fā)現(xiàn)得自ATCC的ATCC12394、ATCC35666和 ATCC27823，和作為臨床前篩選的部分獲得的2種蘭斯菲爾德G組分離物N04A27和 N04AFT[ fF^^· 6122K1-9000, Cross Sectional Serology Study, Australia, F. Laudat, MD，Paris]。它們分別的核苷酸序列在SEQ ID NO :1、3、5、7、9、25、27、29和31中描述。它們 分別的氨基酸序列在SEQ ID NO :2、4、6、8、10、洸、28、30和32中描述。制備在SEQ ID N0: 2、4、6、8和10之間的共有氨基酸序列，并且作為SEQ ID NO 11呈現(xiàn)。在新型C組或G組鏈球菌PPI和ORF 554序列與已知A組和B組鏈球菌PPI和 ORF 554序列之間的蛋白質(zhì)和核酸序列的比對(duì)和ClustalW分析(Chenna等人，Nuc. Acids Res. ,31,3497-3500(2003))提供了在表1中概括的百分率。表1:同一性百分比A 氨基酸同一性
權(quán)利要求
1.包括如下氨基酸序列的分離多肽，所述氨基酸序列與SEQIDNO 2,SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :6, SEQ ID N0:8、SEQ ID NO 10, SEQ ID NO =IUSEQ ID NO :26, SEQ ID NO :28, SEQ ID NO 30和SEQID NO :32中的任何一個(gè)或多個(gè)至少90%等同。
2.權(quán)利要求1的分離多肽，其中所述多肽包括SEQID NO 2, SEQID NO :4、SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO :8, SEQ ID NO :10、SEQ ID NO =IUSEQ ID NO :26、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO: 30和SEQ ID NO :32中任何一個(gè)的氨基酸序列。
3.分離多核苷酸，其編碼權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的分離多肽中的任何一個(gè)。
4.權(quán)利要求3的分離多核苷酸，其中所述多核苷酸包括與SEQIDN0:USEQ ID NO :3、 SEQ ID NO 5,SEQ ID N0:7、SEQ ID NO :9、SEQID NO 25,SEQ ID NO 27,SEQ ID NO :29 和 SEQ ID N0:31中的任何一個(gè)或多個(gè)至少90%等同的核苷酸序列。
5.權(quán)利要求3或權(quán)利要求4的分離多核苷酸，其中所述多核苷酸包括SEQID NO=USEQ ID NO 3, SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:7、SEQ IDNO :9、SEQ ID NO 25, SEQ ID NO 27, SEQ ID NO 29和SEQ ID NO 31中的任何一個(gè)的核苷酸序列。
6.權(quán)利要求3-5中任一項(xiàng)的分離多核苷酸，其中所述多核苷酸與調(diào)節(jié)元件可操作地連接。
7.多核苷酸載體，其包括權(quán)利要求3-6中任一項(xiàng)的分離多核苷酸。
8.權(quán)利要求7的多核苷酸載體，其中所述多核苷酸載體是質(zhì)粒、病毒載體和表達(dá)載體 中的任何一種或多種。
9.細(xì)胞，其包括權(quán)利要求3-6中任一項(xiàng)的分離多核苷酸，或權(quán)利要求7和8中任一項(xiàng)的 多核苷酸載體，其中所述細(xì)胞是離體的。
10.權(quán)利要求9的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞選自細(xì)菌、酵母細(xì)胞、哺乳動(dòng)物細(xì)胞和昆蟲細(xì)胞。
11.免疫原性組合物，其包括權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的分離多肽。
12.免疫原性組合物，其包括權(quán)利要求3-6中任一項(xiàng)的分離多核苷酸，或權(quán)利要求7和 8中任一項(xiàng)的多核苷酸載體。
13.用于誘導(dǎo)患者中針對(duì)β溶血性鏈球菌細(xì)菌或β溶血性鏈球菌感染的免疫應(yīng)答的 方法，其包括給所述患者施用權(quán)利要求11或權(quán)利要求12的免疫原性組合物。
14.權(quán)利要求13的方法，其中所述β溶血性鏈球菌細(xì)菌或β溶血性鏈球菌感染來自 A組、B組、C組或G組。
15.權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的分離多肽在制備在預(yù)防性治療患者中的β溶血性鏈球 菌感染中有用的藥物中的用途。
16.權(quán)利要求3-6中任一項(xiàng)的分離多核苷酸或權(quán)利要求7和8中任一項(xiàng)的多核苷酸載 體在制備在預(yù)防性治療患者中的β溶血性鏈球菌感染中有用的藥物中的用途。
17.試劑盒，其包括權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的分離多肽。
18.試劑盒，其包括權(quán)利要求3-6中任一項(xiàng)的分離多核苷酸或權(quán)利要求7和8中任一項(xiàng) 的多核苷酸載體。
19.產(chǎn)生分離多肽的方法，其包括用包含編碼權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的分離多肽的分 離多核苷酸的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染或感染細(xì)胞，并且在允許所述多肽通過所述細(xì)胞表達(dá)的條件 下培養(yǎng)所述細(xì)胞，并且從所述細(xì)胞中純化所述多肽。
全文摘要
本發(fā)明涉及包括C組和G組鏈球菌的肽基脯氨酰異構(gòu)酶(PPI)多肽和編碼其的多核苷酸的組合物和使用方法。本發(fā)明還涉及包括PPI多肽和多核苷酸的免疫原性組合物，以及結(jié)合PPI多肽的抗體和抗體片段。此外，本發(fā)明涉及使用免疫原性組合物在受試者中誘導(dǎo)針對(duì)β溶血性鏈球菌的免疫應(yīng)答，以及通過施用治療抗體或抗體片段賦予被動(dòng)免疫性的方法。
文檔編號(hào)A61K39/09GK102105165SQ200980128869
公開日2011年6月22日 申請(qǐng)日期2009年6月19日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月20日
發(fā)明者A·S·安德森, E·墨菲, E·布勞恩施泰因, I·L·道奇 申請(qǐng)人:惠氏有限責(zé)任公司