本發(fā)明屬于食藥用菌深加工技術(shù)領(lǐng)域，具體的說涉及一種含有食用菌多糖的益生菌固體飲料及其制備方法。
背景技術(shù)：
人體健康與腸道菌群密不可分。在人類的腸道，尤其是結(jié)腸中，存在著大量微生物，據(jù)推測(cè)，一個(gè)正常成人體內(nèi)，腸道內(nèi)的細(xì)菌總重量可達(dá)1-1.5千克，包含的細(xì)菌數(shù)量則可以達(dá)到1014個(gè)，而一個(gè)成年人自身的細(xì)胞數(shù)量為1013個(gè)，也就是說，居住在我們腸道內(nèi)的細(xì)菌數(shù)量，是人體細(xì)胞總數(shù)的10倍。這些細(xì)菌有助于人體消化食物，產(chǎn)生維生素以預(yù)防食物中細(xì)菌所誘發(fā)的疾病，同時(shí)腸道菌群的存在能通過自身屏蔽和影響機(jī)體免疫系統(tǒng)，阻止病原菌入侵人體。腸道菌群附著在腸道內(nèi)壁表面的粘膜層之上，構(gòu)成了一層由細(xì)菌構(gòu)成的屏障，通過其中占主導(dǎo)作用的共生菌的活動(dòng)，抑制致病菌的生長(zhǎng)，同時(shí)阻止致病透過這層屏障進(jìn)入人體。在進(jìn)行被動(dòng)防御的同時(shí)，腸道菌群可以刺激機(jī)體在腸道形成更多的淋巴器官，并增加免疫球蛋白在血漿和腸粘膜中的水平，使得免疫系統(tǒng)處于一種適度的活躍狀態(tài)，以此對(duì)入侵體內(nèi)的病原菌保持有效的免疫作用。而腸道菌群的失調(diào)，則可造成免疫系統(tǒng)的過度活躍，從而產(chǎn)生自體免疫疾病
益生菌即有益菌，簡(jiǎn)單來講，益生菌是指對(duì)人和動(dòng)物有益的細(xì)菌，以雙歧桿菌、乳桿菌為代表。益生菌通過調(diào)理腸道菌群，維持腸道菌群的平衡，從而促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收、提高免疫力、預(yù)防和治療便秘及腹瀉、降低血脂、抑制腸道病源和腐敗微生物的生長(zhǎng)，分解致癌物質(zhì)等。
益生元主要是不能直接被宿主消化吸收，而是維持益生菌的“養(yǎng)料”，促進(jìn)益生菌的生長(zhǎng)繁殖，或者說是益生菌的“專享”食物，能夠被腸道內(nèi)有益細(xì)菌分解吸收，促進(jìn)有益細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖，從而改善寄主健康的物質(zhì)。目前，大多數(shù)商業(yè)用益生菌為寡糖，如低聚異麥芽糖、低聚半乳糖、低聚果糖等，它們具有改善腸道健康的作用。而一些多糖，如杏鮑菇多糖、銀耳多糖具有潤(rùn)腸胃、提高免疫力、抗腫瘤、降血脂、駐顏?zhàn)o(hù)膚等多種活性，但是市場(chǎng)上以食用菌多糖作為益生元的功能性食品還很少。
隨著人們生活水平的提高以及生活節(jié)奏加快，許多上班族形成了不健康的飲食習(xí)慣，日常攝入較多高糖、高脂肪、高熱量的食物，而運(yùn)動(dòng)量較少，導(dǎo)致亞健康問題日益凸顯，腸道菌群系統(tǒng)失調(diào)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是基于現(xiàn)代都市人群亞健康的現(xiàn)狀，提供一種具有調(diào)節(jié)腸道菌群微生態(tài)的含有食用菌多糖的益生菌固體飲料及其制備方法。
為解決上述技術(shù)問題所采取的技術(shù)方案為：
本發(fā)明涉及一種含有食用菌多糖的益生菌固體飲料，其特征在于：由杏鮑菇多糖、銀耳多糖、益生菌粉、低聚半乳糖、低聚果糖、水溶性膳食纖維、三氯蔗糖復(fù)配而成，各組分的重量百分比分別為：杏鮑菇多糖3-4.5％，銀耳多糖4.5-5％，益生菌粉4-6％，低聚半乳糖10-15％，低聚果糖5-10％，水溶性膳食纖維60-70％，三氯蔗糖0.05-0.1％。
本發(fā)明涉及一種含有食用菌多糖的益生菌固體飲料，其特征在于：所述杏鮑菇多糖是通過杏鮑菇碎塊按料液比(g:ml)1:12于蒸餾水中浸泡40min，沸水提取2h，提取2次，合并濾液，10000r/min離心15min，上清按濃縮比1:3加熱濃縮，加入無水乙醇至乙醇終濃度為50％(v/v)，4℃靜置過夜，10000r/min離心15min，沉淀加水溶解，揮發(fā)乙醇后，冷凍干燥所得。
本發(fā)明涉及一種含有食用菌多糖的益生菌固體飲料，其特征在于：所述的銀耳多糖購(gòu)自上海輝文生物技術(shù)有限公司，多糖含量達(dá)到85％，分子量大于80萬道爾頓。
所述的益生菌粉購(gòu)自丹尼斯克(中國(guó))有限公司
所述的低聚半乳糖、低聚果糖購(gòu)自量子高科(中國(guó))生物股份有限公司
所述的水溶性膳食纖維購(gòu)自上海統(tǒng)園食品技術(shù)有限公司
本發(fā)明涉及一種含有食用菌多糖的益生菌固體飲料，其特征在于：所述的益生菌固體飲料含有高純度的食用菌多糖，杏鮑菇多糖含量大于60％，β-葡聚糖含量大于35％。
所述β-葡聚糖含量采用megazymeβ-葡聚糖試劑盒法測(cè)定。
本發(fā)明涉及的益生菌粉由乳雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌按1:1復(fù)合而成，混合后總?cè)樗峋罹鷶?shù)為1.5-2×1010cfu/g。
益生菌粉howarubifidohn019乳雙歧桿菌、howarudophilusncfm嗜酸乳桿菌購(gòu)自丹尼斯克(中國(guó))有限公司。
本發(fā)明涉及一種含有食用菌多糖的益生菌固體飲料，其特征在于：制備成一種含有食用菌多糖的益生菌固體飲料。
本發(fā)明涉及一種含有食用菌多糖的益生菌固體飲料，其特征在于：通過如下方法制備得到：
①混料：按各組分重量百分比，杏鮑菇多糖3-4.5％，銀耳多糖4.5-5％，低聚半乳糖10-15％，低聚果糖5-10％，水溶性膳食纖維60-70％，三氯蔗糖0.05-0.1％，充分混合均勻；
②制粒：混合均勻的物料內(nèi)按重量百分比8-15％加入85％乙醇，制軟材，加至軟材適中后，過26目篩制成顆粒；
③干燥：將制好的顆粒，放入平盤中，推入鼓風(fēng)干燥箱中烘干，干燥溫度為50-65℃，開啟鼓風(fēng)，干燥至水分小于5％時(shí)，取出顆粒；
④整粒：將取出后的顆粒，再次過26目篩，得到固體顆粒；
⑤混合：將整粒后的固體顆粒冷卻至室溫后，10萬級(jí)潔凈環(huán)境下，與4-6％益生菌粉混合均勻。
⑥包裝：按每袋1.5g，裝入鋁箔袋內(nèi)，側(cè)封，制得含有食用菌多糖的益生菌固體飲料。
本發(fā)明涉及一種含有食用菌多糖的益生菌固體飲料的制備方法，具體制備步驟如下：
①混料：按各組分重量百分比，杏鮑菇多糖3-4.5％，銀耳多糖4.5-5％，低聚半乳糖10-15％，低聚果糖5-10％，水溶性膳食纖維60-70％，三氯蔗糖0.05-0.1％，充分混合均勻；
②制粒：混合均勻的物料內(nèi)按重量百分比8-15％加入85％乙醇，制軟材，加至軟材適中后，過26目篩制成顆粒；
③干燥：將制好的顆粒，放入平盤中，推入鼓風(fēng)干燥箱中烘干，干燥溫度為50-65℃，開啟鼓風(fēng)，干燥至水分小于5％時(shí)，取出顆粒；
④整粒：將取出后的顆粒，再次過26目篩，得到固體顆粒；
⑤混合：將整粒后的固體顆粒冷卻至室溫后，10萬級(jí)潔凈環(huán)境下，與4-6％益生菌粉混合均勻。
⑥包裝：按每袋1.5g，裝入鋁箔袋內(nèi)，側(cè)封，制得含有食用菌多糖的益生菌固體飲料。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明提供的益生菌固體飲料，將益生元和益生菌優(yōu)化組合，人們同時(shí)攝入益生菌和含有益菌因子的益生元。水溶性膳食纖維、食用菌多糖協(xié)同增效，可大量增殖有益菌，提高外源性益生菌在腸道粘膜的定植率，改善腸道菌群系統(tǒng)平衡，提高人體免疫力，全面呵護(hù)人體健康。
本發(fā)明提供的益生菌固體飲料，含有高純度的食用菌多糖，藥理實(shí)驗(yàn)證明，食用菌多糖具有增強(qiáng)免疫力、抗腫瘤、具有潤(rùn)腸胃、降血脂、駐顏?zhàn)o(hù)膚等多種活性，人體對(duì)作為有益生元功能的多糖耐受力更好，可減少腸胃不適、腹部氣脹或因迅速酸化而導(dǎo)致的黏膜損傷和腹瀉等副作用。大分子的多糖可為整個(gè)大腸提供持久性的可發(fā)酵糖源，同時(shí)，食用菌多糖自身的免疫功效，有利于機(jī)體腸道菌群的重塑和平衡。
附圖說明
圖1：杏鮑菇多糖的hplc圖譜
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。但本發(fā)明的內(nèi)容并不僅限于下面的實(shí)施例。
實(shí)施例1
①混料：按各組分重量百分比，杏鮑菇多糖4.5％，銀耳多糖4.8％，低聚半乳糖10％，低聚果糖8.5％，水溶性膳食纖維68.1％，三氯蔗糖0.1％，充分混合均勻；
②制粒：混合均勻的物料內(nèi)按重量百分比10％加入85％乙醇，制軟材，加至軟材適中后，過26目篩制成顆粒；
③干燥：將制好的顆粒，放入平盤中，推入鼓風(fēng)干燥箱中烘干，干燥溫度為50-65℃，開啟鼓風(fēng)，干燥至水分3.7％時(shí)，取出顆粒；
④整粒：將取出后的顆粒，再次過26目篩，得到固體顆粒；
⑤混合：將整粒后的固體顆粒冷卻至室溫后，10萬級(jí)潔凈環(huán)境下，與4.0％益生菌粉混合均勻。
⑥包裝：按每袋1.5g，裝入鋁箔袋內(nèi)，側(cè)封，制得含有食用菌多糖的益生菌固體飲料。
實(shí)施例2
①混料：按各組分重量百分比，杏鮑菇多糖3.0％，銀耳多糖5.0％，低聚半乳糖15％，低聚果糖5.0％，水溶性膳食纖維65.95％，三氯蔗糖0.05％，充分混合均勻；
②制粒：混合均勻的物料內(nèi)按重量百分比15％加入85％乙醇，制軟材，加至軟材適中后，過26目篩制成顆粒；
③干燥：將制好的顆粒，放入平盤中，推入鼓風(fēng)干燥箱中烘干，干燥溫度為50-65℃，開啟鼓風(fēng)，干燥至水分3.5％時(shí)，取出顆粒；
④整粒：將取出后的顆粒，再次過26目篩，得到固體顆粒；
⑤混合：將整粒后的固體顆粒冷卻至室溫后，10萬級(jí)潔凈環(huán)境下，與6.0％益生菌粉混合均勻。
⑥包裝：按每袋1.5g，裝入鋁箔袋內(nèi)，側(cè)封，制得含有食用菌多糖的益生菌固體飲料。
實(shí)施例3
①混料：按各組分重量百分比，杏鮑菇多糖3.3％，銀耳多糖4.7％，低聚半乳糖13.3％，低聚果糖6.7％，水溶性膳食纖維66.6％，三氯蔗糖0.07％，充分混合均勻；
②制粒：混合均勻的物料內(nèi)按重量百分比12加入85乙醇，制軟材，加至軟材適中后，過26目篩制成顆粒；
③干燥：將制好的顆粒，放入平盤中，推入鼓風(fēng)干燥箱中烘干，干燥溫度為50-65℃，開啟鼓風(fēng)，干燥至水分3.7％時(shí)，取出顆粒；
④整粒：將取出后的顆粒，再次過26目篩，得到固體顆粒；
⑤混合：將整粒后的固體顆粒冷卻至室溫后，10萬級(jí)潔凈環(huán)境下，與5.33％益生菌粉混合均勻。
⑥包裝：按每袋1.5g，裝入鋁箔袋內(nèi)，側(cè)封，制得含有食用菌多糖的益生菌固體飲料。
實(shí)施例4
①混料：按各組分重量百分比，杏鮑菇多糖3.9％，銀耳多糖5.0％，低聚半乳糖15％，低聚果糖10％，水溶性膳食纖維60％，三氯蔗糖0.1％，充分混合均勻；
②制粒：混合均勻的物料內(nèi)按重量百分比18加入85乙醇，制軟材，加至軟材適中后，過26目篩制成顆粒；
③干燥：將制好的顆粒，放入平盤中，推入鼓風(fēng)干燥箱中烘干，干燥溫度為50-65℃，開啟鼓風(fēng)，干燥至水分3.5％時(shí)，取出顆粒；
④整粒：將取出后的顆粒，再次過26目篩，得到固體顆粒；
⑤混合：將整粒后的固體顆粒冷卻至室溫后，10萬級(jí)潔凈環(huán)境下，與6.0％益生菌粉混合均勻。
⑥包裝：按每袋1.5g，裝入鋁箔袋內(nèi)，側(cè)封，制得含有食用菌多糖的益生菌固體飲料。
實(shí)施例5
①混料：按各組分重量百分比，杏鮑菇多糖3.0％，銀耳多糖4.5％，低聚半乳糖11％，低聚果糖6.4％，水溶性膳食纖維70％，三氯蔗糖0.1％，充分混合均勻；
②制粒：混合均勻的物料內(nèi)按重量百分比12加入85％乙醇，制軟材，加至軟材適中后，過26目篩制成顆粒；
③干燥：將制好的顆粒，放入平盤中，推入鼓風(fēng)干燥箱中烘干，干燥溫度為50-65℃，開啟鼓風(fēng)，干燥至水分3.7％時(shí)，取出顆粒；
④整粒：將取出后的顆粒，再次過26目篩，得到固體顆粒；
⑤混合：將整粒后的固體顆粒冷卻至室溫后，10萬級(jí)潔凈環(huán)境下，與5.0％益生菌粉混合均勻。
⑥包裝：按每袋1.5g，裝入鋁箔袋內(nèi)，側(cè)封，制得含有食用菌多糖的益生菌固體飲料。
實(shí)施例6
實(shí)施例1-5制備的含有食用菌多糖的益生菌固體飲料中，乳酸菌總數(shù)參照食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)gb4789.35-2016乳酸菌檢驗(yàn)進(jìn)行測(cè)定。
操作步驟：
(1)以無菌操作稱取25g樣品，置于裝有225ml生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，于8000r/min-10000r/min均質(zhì)1min-2min，制成1:10樣品勻液；或置于225ml生理鹽水的無菌均質(zhì)袋中。用拍擊式均質(zhì)器拍打1min-2min制成1:10的樣品勻液。
(2)用1ml無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1ml，沿管壁緩慢注于裝有9ml生理鹽水的無菌試管中(注意吸管尖端不要觸及稀釋液)振搖試管或換用1支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻,制成1∶100的樣品勻液。
(3)另取1ml無菌吸管或微量移液器吸頭，按上述操作順序，做10倍遞增樣品勻液，每遞增稀釋一次，即換用1次1ml滅菌吸管或吸頭。
(4)乳酸菌計(jì)數(shù)：根據(jù)待檢樣品活菌總數(shù)的估計(jì)，選擇2個(gè)-3個(gè)連續(xù)的適宜稀釋度，每個(gè)稀釋度吸取1ml樣品勻液于滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。稀釋液移入平皿后,將冷卻至48℃的mrs瓊脂培養(yǎng)基傾注入平皿約15ml，轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使混合均勻。36℃±1℃厭氧培養(yǎng)72h±2h。從樣品稀釋到平板傾注要求在15min內(nèi)完成。
(5)選取菌落數(shù)在30cfu-300cfu之間、無蔓延菌落生長(zhǎng)的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。低于30cfu的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300cfu的可記錄為多不可計(jì)。每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。
經(jīng)測(cè)定實(shí)施例1-5制備的含有食用菌多糖的益生菌固體飲料中，乳酸菌總數(shù)在1.5-2×1010cfu/g。
實(shí)施例7
固體飲料中杏鮑菇多糖中β-葡聚糖的含量采用megazymeβ-葡聚糖試劑盒法測(cè)定。具體步驟如下：
1)測(cè)定葡聚糖總量：
(1)稱取10mg左右多糖樣品于帶塞試管中，輕拍使樣品落入試管底部。向每個(gè)管中加入1.5ml濃鹽酸(37％v/v)，蓋上蓋子，渦旋混勻，30℃水浴45min，期間每隔15min渦旋一次(以確保所有的β-葡聚糖溶解)。
(2)向每個(gè)管中加入10ml蒸餾水，渦旋。擰松蓋子，置于沸水浴中，5min之后，擰緊蓋子，繼續(xù)孵育2小時(shí)。
(3)將反應(yīng)管冷卻至室溫，小心松開蓋子，每管中加入10ml2nkoh。
(4)定量轉(zhuǎn)移每管中的內(nèi)容物至50ml的容量瓶，用200mm醋酸鈉緩沖液(ph5.0)漂洗試管，并定容。顛倒混勻。取1ml在12000r/min條件下離心10min，上清液待測(cè)。
(5)每管上清液中取0.1ml(復(fù)樣)，加置玻璃試管(16×100mm)底部。取0.1ml溶于200mm醋酸鈉緩沖液中的1,3-β-葡聚糖外切酶(20u/ml)和β-葡糖苷酶(4u/ml)，至每一個(gè)試管底部，渦旋，40℃孵育1h。
(6)每管加3.0mlgopod試劑(取2.5ml瓶3液，25mg瓶4樣品，用蒸餾水定容至50ml)，40℃孵育20分鐘。510nm下測(cè)定所有管中的吸光度值。
備注：每一批次的測(cè)定中要包括一個(gè)蘑菇或酵母制劑的質(zhì)控物，并包括空白試劑和葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品(10ug)(設(shè)定4個(gè)平行)
空白試劑：0.2ml醋酸鈉緩沖液(200mm，ph5.0)+3.0mlgopod試劑。
d-葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品：含有0.1mld-葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品(1mg/ml)+0.1ml醋酸鈉緩沖液(200mm，ph5.0)+3.0mlgopod試劑。
2)α-葡聚糖的測(cè)定
(1)稱取10mg左右樣品于帶塞試管中，輕拍使樣品落入試管底部。
(2)向一個(gè)每管中加入2ml2m的koh，將試管冰浴，再向每個(gè)試管中加入磁力攪拌棒(5×15mm)，用磁力攪拌機(jī)在冰浴狀態(tài)下攪拌20min，以重懸浮絮狀物(溶解植物糖原/淀粉)。
(3)向每個(gè)試管中加入8ml1.2m的醋酸鈉緩沖液(ph3.8)，磁力攪拌器攪拌。立即加入0.2ml淀粉葡萄糖苷酶(1630u/ml)加轉(zhuǎn)化酶(500u/ml)，混勻。40℃孵育30min，期間漩渦震蕩混勻，試管里的最終體積大約為10.3ml，取1ml，12000r/min離心10min。
(4)取0.1ml上清液轉(zhuǎn)移至玻璃試管(16×100mm)，加0.1ml醋酸鈉緩沖液(200mm，ph5.0)、3.0mlgopod試劑，40℃孵育20min。
(5)相對(duì)于空白試劑，510nm測(cè)定所有管中的吸光度值。
β-葡聚糖總量(％w/w)＝δe×f/w×90
α-葡聚糖(％w/w)＝δe×f/w×9.27
β-葡聚糖＝β-葡聚糖總量-α-葡聚糖
δe＝反應(yīng)吸光度值減去空白試劑的吸光度值
f＝吸光度值轉(zhuǎn)化為葡萄糖(μg)的因子＝100/100μgd-葡萄糖的吸光度值
經(jīng)測(cè)定，杏鮑菇多糖中β-葡聚糖含量為36.9％。
實(shí)施例8
固體飲料中杏鮑菇多糖的分子量測(cè)定采用高效凝膠尺寸排阻色譜-多角度激光光散射-示差折光檢測(cè)儀聯(lián)用分析技術(shù)(hpsec-malls-ri)。
稱取5mg粗多糖樣品，加入1ml流動(dòng)相充分溶解，離心，上清液用0.25μm的水相微孔膜過濾后取100μl進(jìn)樣分析。具體色譜條件為：以tsk-gel系列g(shù)6000pwxl和g4000pwxl色譜柱(7.8mm×300mm，tosoh，日本)為分析柱，以0.15mol/lnano3和0.05mol/lnah2po4(ph＝7，0.02％疊氮鈉)為流動(dòng)相，在35℃條件下，以0.5ml/min流速進(jìn)行洗脫分析。其中8角度激光光散射儀的光源波長(zhǎng)選用623.8nm，多糖在溶液中的折光指數(shù)增量(dn/dc)按照0.146ml/g計(jì)算。使用astra(version6.1.1,wyatttechnology,santabarbara,ca)數(shù)據(jù)分析軟件對(duì)光散射數(shù)據(jù)進(jìn)行采集和分析，計(jì)算多糖分子量和其他分子特性。
經(jīng)hplc圖譜分析，該益生菌固體飲料所用杏鮑菇多糖分子量大于100萬道爾頓。