一種含有益生菌的生長豬專用酶及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種含有益生菌的生長豬專用酶及其制備方法，屬于飼料酶制劑領域。所述含有益生菌的生長豬專用酶由以下重量份數(shù)的組分組成：中草藥粉0.5-2份，木聚糖酶80-100份，蛋白酶20-30份，果膠酶10-20份，纖維素酶8-12份，地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物20-30份，中溫α-淀粉酶5-10份。其中地衣芽孢桿菌（Bacillus?licheniformis）β-10-25，保藏編號CCTCC?NO：M?2013538。制備方法如下：地衣芽孢桿菌經(jīng)發(fā)酵后通過過濾、濃縮、干燥獲得的培養(yǎng)物與其他成分復配，所得復合酶能提高飼料轉化率，降低飼料成本。
【專利說明】一種含有益生菌的生長豬專用酶及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于酶制劑領域，具體涉及一種生長豬專用酶及其制造方法。
【背景技術】
[0002]飼料酶制劑是為了提高動物對飼料的消化、利用或改善動物體內(nèi)的代謝效能而加入飼料中的酶類物質。目前可以在飼料中添加的酶制劑包括淀粉酶、α-半乳糖苷酶、纖維素酶、β -葡聚糖酶、葡萄糖氧化酶、脂肪酶、麥芽糖酶、甘露聚糖酶、果膠酶、植酸酶、蛋白酶、角蛋白酶、木聚糖酶等。由于飼料原料結構的復雜性，目前飼料工業(yè)生產(chǎn)中更多使用的是復合酶制劑。復合酶制劑是一種新型的飼料添加劑，在國外其應用始于20世紀70年代，而我國的飼料工業(yè)在20世紀90年代才開展酶制劑的應用。因此，加大對飼料復合劑的研究對于我國的養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展具有非常重要的意義。
[0003]飼用酶種類繁多，在畜禽生產(chǎn)中均取得了相當好的效果。前蘇聯(lián)科學家在早期斷奶仔豬日糧中添加淀粉糊精酶，使得日增重提高14.6%，碳水化合物消化率提高77.2%。據(jù)美國有關資料報道，Collier在早期斷奶仔豬日糧中補充酶制劑(含蛋白酶、淀粉酶、葡聚糖酶)，結果實驗組比對照組日增重提高了 25%，飼料轉化率提高了 15.5%。西德學者曾多次進行育肥豬添加復合酶制劑的實驗研究，在以大麥為主的日糧中，添加0.1%的復合酶制劑，結果為:實驗組比對照組生長速度提高5.1%，飼料利用率提高4.1%?？梢?，飼料酶能顯著提高畜禽對飼料的消化吸收，促進生長，降低飼料成本，并且作為一種綠色飼料添加劑，它的使用具有安全性，有利于畜牧業(yè)生產(chǎn)走上經(jīng)濟節(jié)約型的發(fā)展道路。
[0004]此外，科學實驗 證實了地衣芽孢桿菌具有促進畜禽生長，降低料重比；增加腸道有益菌數(shù)量，改善畜禽腸道微生態(tài)環(huán)境；預防和治療腸道疾病，降低死亡率的作用。1989年，美國FDA和美國飼料控制官員協(xié)會公布了可以直接飼喂且一般認為是安全的微生物菌種名單，其中包括地衣芽孢桿菌。中華人民共和國農(nóng)業(yè)部318號公告也把地衣芽孢桿菌列入了飼料添加劑目錄。
[0005]目前，市場上針對飼料的復合酶多種多樣，但是有的酶配比不合理，達不到應有的效果，導致畜禽生長緩慢，生產(chǎn)力低下；有的酶活性低，添加量大，導致飼養(yǎng)成本成本高。鑒于糧食的短缺是困擾我國飼料工業(yè)發(fā)展的主要因素，因此，要選擇有利于節(jié)約糧食資源的畜牧業(yè)發(fā)展道路，提高飼料利用率，充分利用有限的糧食資源獲得盡可能多的畜產(chǎn)品。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于針對上述缺陷提供一種配比合理，活性高且含有益生菌的生長豬專用酶及其制備方法。
[0007]本發(fā)明的目的可以通過以下技術方案來實現(xiàn):
[0008]一種含有益生菌的生長豬專用酶，由以下重量份數(shù)的組分組成:中草藥粉2-8份，木聚糖酶80-100份，蛋白酶20-30份，果膠酶10-20份，纖維素酶8_12份，地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物20-30份，中溫α -淀粉酶5-10份。[0009]所述木聚糖酶、蛋白酶、果膠酶、纖維素酶和中溫α -淀粉酶均為湖南鴻鷹翔生物工程股份有限公司或其他現(xiàn)有產(chǎn)品；
[0010]所述中草藥粉的制備方法如下:
[0011]稱取黃芪10-30份；黨參10-18份；板藍根10-15份；當歸10-15份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下混合獲得中草藥粉；
[0012]所述地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物制備方法如下:
[0013](I)種子培養(yǎng)
[0014]將地衣芽孢桿菌斜面菌種經(jīng)三級搖瓶發(fā)酵劑一級種子罐發(fā)酵；
[0015]所述種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基為:酵母粉0.5%，蛋白胨I %，可溶性淀粉1%，NaCll %,ρΗ4.5-7.0,121-123°C滅菌 30_40min。
[0016](2)發(fā)酵罐發(fā)酵
[0017]將一級種子罐發(fā)酵液以3%接種量接入含有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度35-45°C，攪拌速度200-300r/min，通風量(V/V) 1:1-3，培養(yǎng)時間10_15h ;然后將IL經(jīng)過121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至35_45°C時恒溫培養(yǎng)15-20h ;此時，將一級種子罐發(fā)酵液以2%接種量追加接入發(fā)酵罐，恒溫培養(yǎng)10-15h ;繼續(xù)將IL經(jīng)過121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至35_45°C時恒溫培養(yǎng)10-15h ;
[0018]所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:麥麩75g，玉米粉55g，米糠25g，豆餅粉20g，β -葡聚糖2g，中草藥粉40g，海藻糖35g，酵母粉6g，玉米漿3g，硫酸銨2g，磷酸氫二鉀2g，磷酸二氫鉀2g，檸檬酸鈉3g，消泡劑0.5g,純凈水`1000mL, pH值4.5-7.0,121°C滅菌20min ；
[0019]所述發(fā)酵培養(yǎng)基的調(diào)配方法為:按比例準確稱取原料，將原料中的純凈水、玉米粉、豆餅粉投入配料罐中，調(diào)節(jié)PH值3-7，加入中溫淀粉酶(3u/g玉米粉)與高溫淀粉酶(30u/g玉米粉)，同時邊攪拌邊升溫至70°C保溫15-30min，然后緩慢升溫至90°C保溫15-30min進行液化，最后加入其它原料，攪拌均勻，調(diào)初始PH3-7，121_123°C滅菌30_40min備用。
[0020]溶解氧控制:通過調(diào)整攪拌轉速及通風量，控制溶解氧15-30% ；
[0021]PH控制:通過補氨水或稀磷酸，控制發(fā)酵過程中pH值保持在3-7 ；
[0022]補料控制:當發(fā)酵液中的還原糖含量降至3mg/ml-8mg/ml時,開始添加補料培養(yǎng)基，補料量以維持發(fā)酵液還原糖含量為2mg/ml-5mg/ml ；
[0023]放罐標準:60-80%菌體衰老自溶，酶活力增長緩慢。
[0024](3)發(fā)酵液經(jīng)孔徑10-1000 μ m粗濾，然后于10_20°C循環(huán)超濾濃縮去除水分得固形物含量20-40%濃縮液；濃縮液經(jīng)真空冷凍干燥、超微粉碎得地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物。
[0025]所述地衣芽孢桿菌具體為地衣芽孢桿菌(B acillus Iicheniformis) β-10-25。該菌株已于2013年11月3日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC，地址為:湖北省武漢市武昌區(qū)珞珈山武漢大學生命科學學院)，保藏號為CCTCC NO:Μ2013538ο
[0026]該菌株為通過物理化學誘變獲得，特點如下:
[0027]所述菌株在固體平板上菌落為白色，邊緣不整齊，表面干燥不透明，鏡檢為革蘭氏陽性細菌，細胞形態(tài)呈短桿狀，芽孢中生，橢圓形，不膨大。
[0028]所述菌株生理生化特征:V-P試驗( + )，淀粉水解( + )，酪素水解( + )，明膠水解(+)，硝酸鹽還原(+)，吲哚試驗(-)，利用檸檬酸鹽(+)，硝酸還原(+)，甘露醇(+)，木糖(+ )。
[0029]所述地衣芽孢桿菌β -10-25是一株高產(chǎn)熱穩(wěn)定性β -葡聚糖酶的菌株，生產(chǎn)所得的葡聚糖酶酶活力高達8000-10000u/ml ;在室溫下保存6個月后酶活損失小于25%，4°C保存12個月后酶活損失小于20% ;60°C條件下保存Ih后仍能保持80%以上酶活，70°C條件下保存IOmin后保持20%以上酶活。比現(xiàn)有的β _葡聚糖酶酶活力高，熱穩(wěn)定性及儲存穩(wěn)定性均較高，特別適合飼料工業(yè)的需求。
[0030]優(yōu)選的，一種含有益生菌的生長豬專用酶按如下重量份數(shù)組成:中草藥粉5份，木聚糖酶90份，蛋白酶25份，果膠酶15份，纖維素酶10份，地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物25份，中溫α -淀粉酶8份。[0031]所述生長豬專用酶適用于飼料加工廠和養(yǎng)殖場自配飼料，使用時應與飼料中的其它原料混合均勻。建議每噸全價料添加量為80-150g (飼料中小麥用量低于30%，添加量為100g/t，小麥用量超過30%，添加量為120-150g/t)。
[0032]有益效果:
[0033]本發(fā)明所添加的地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物，與添加純酶工藝相比不僅簡化了酶的純化工藝，而且在添加酶的同時加入大量益生菌——地衣芽胞桿菌。地衣芽胞桿菌的添加一方面能產(chǎn)生蛋白多肽類抗菌物質，拮抗腸道病原細菌，抑制需氧菌及兼性厭氧菌特別是大腸桿菌等病原菌的繁殖，一方面還能產(chǎn)生除β_葡聚糖酶外的多種酶類，如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶及纖維素酶等，從而進一步提高畜禽對蛋白質和能量的利用率，促進動物生長。最后，地衣芽胞桿菌還具有增強動物免疫功能、抵御感染和改善動物生理狀態(tài)的功能。本發(fā)明所添加地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物中的葡聚糖酶酶活力高達8000-10000u/ml ;該酶在60°C條件下保存Ih后仍能保持80%以上酶活，70°C條件下保存IOmin后保持20%以上酶活；在室溫下保存6個月后酶活損失小于25%，4°C保存12個月后酶活損失小于20%。比現(xiàn)有的β-葡聚糖酶酶活力高，酶作用最適PH值范圍寬泛，熱穩(wěn)定性及儲存穩(wěn)定性均較高。相較于市售的生長豬專用酶，在同樣的用量下本發(fā)明對飼料的酶解率更高，從而提高飼料轉化率，降低飼料成本。(采用實施例3的具體數(shù)據(jù))。
[0034]本發(fā)明中添加了中草藥粉，其具有天然抗菌和增強免疫力的作用，可以有效的提高畜禽動物的抗應激能力、免疫功能以及抗病防御機能。另外，中草藥粉中添加了具有抗熱應激原作用的黃芩、板藍根，使得本發(fā)明產(chǎn)品具有更好的穩(wěn)定性和保存活性，較沒有添加中草藥粉的產(chǎn)品在長時間高溫條件下的保存活性提高了 15%。本發(fā)明配比合理，有效的補充了內(nèi)源酶的不足，促進營養(yǎng)物質的消化吸收，提高了塑料利用率，節(jié)約了飼養(yǎng)成本。
【具體實施方式】
[0035]實施例1中草藥粉的制備方法
[0036]一種中草藥粉的制備方法如下:
[0037]稱取黃芪25份；黨參15份；板藍根12份；當歸12份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，混合獲得中草藥粉。
[0038]實施例2 —種地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物的制備方法
[0039]括如下步驟:[0040](I)液體種子擴大培養(yǎng)
[0041]①一級種子培養(yǎng):將活化后的斜面菌種2環(huán)接入500毫升搖瓶中，培養(yǎng)基裝量100毫升，旋轉式搖床180轉/分，培養(yǎng)溫度40°C，培養(yǎng)時間IOh ；
[0042]②二級種子培養(yǎng):將一級種子按照10%的接種量接入500毫升二級種子搖瓶中，培養(yǎng)條件與一級種子相同；
[0043]③三級種子培養(yǎng):將二級種子以10%接種量接入5000毫升三級種子搖瓶中，培養(yǎng)基裝量1000毫升，旋轉式搖床100轉/分，培養(yǎng)溫度40°C，培養(yǎng)時間12h ；
[0044]④一級種子罐培養(yǎng):將三級種子以10%接種量接入總容積為150L的一級種子罐，發(fā)酵培養(yǎng)基裝量100L，培養(yǎng)溫度41 °C，攪拌速度300rpm，通風量(V/V) 1: 1.5，罐壓
0.05Mpa,培養(yǎng)時間15h ；
[0045]所述種子培養(yǎng)基重量組成為:酵母粉0.5%，蛋白胨I %，可溶性淀粉I %，NaCll%，ρΗ5.5，121。。滅菌 35min。
[0046](2)發(fā)酵罐發(fā)酵
[0047]將一級種子罐發(fā)酵液以3%接種量接入含有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度37°C，攪拌速度250r/min，通風量(V/V) 1:1-3，培養(yǎng)時間12h ;然后將IL經(jīng)過121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至37°C時恒溫培養(yǎng)18h ;此時，將一級種子罐發(fā)酵液以2%接種量追加接入發(fā)酵罐，恒溫培養(yǎng)12h ;繼續(xù)將IL經(jīng)過121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至37°C時恒溫培養(yǎng)12h ；
[0048]所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:麥麩75g，玉米粉55g，米糠25g，豆餅粉20g，β -葡聚糖2g，中草藥粉40g，海藻糖35g，酵母`粉6g，玉米漿3g，硫酸銨2g，磷酸氫二鉀2g，磷酸二氫鉀2g，檸檬酸鈉3g，消泡劑0.5g,純凈水1000mL, pH值5.5，121°C滅菌20min ；
[0049]所述發(fā)酵培養(yǎng)基的調(diào)配方法為:按比例準確稱取原料，將原料中的純凈水、玉米粉、豆餅粉投入配料罐中，調(diào)節(jié)PH值5.5，加入中溫淀粉酶(3u/g玉米粉)與高溫淀粉酶(30u/g玉米粉)，同時邊攪拌邊升溫至70°C保溫20min，然后緩慢升溫至90°C保溫20min進行液化，最后加入其它原料，攪拌均勻，調(diào)初始PH5.5，121°C滅菌35min備用。
[0050]所述發(fā)酵培養(yǎng)基中的中草藥粉組成和制備方法如下:
[0051]黃芪20份；黨參5份；當歸12份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下混合獲得中草藥粉；
[0052](3)發(fā)酵液經(jīng)孔徑500 μ m粗濾，然后于15°C循環(huán)超濾濃縮去除水分得固形物含量20%濃縮液；濃縮液經(jīng)真空冷凍干燥、超微粉碎得地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物。
[0053]實施例3 —種飼用復合酶制劑的制備方法
[0054]一種含有益生菌的生長豬專用酶，由以下重量份數(shù)的酶制劑組成:
[0055]中草藥粉2份，木聚糖酶90份，蛋白酶25份，果膠酶15份，纖維素酶10份，地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物25份，中溫α -淀粉酶8份。
[0056]中草藥粉組成:黃芪10份；黨參10份；板藍根15份；當歸15份。
[0057]按量取產(chǎn)自湖南鴻鷹翔生物工程股份有限公司或其他公司的木聚糖酶，蛋白酶，纖維素酶，中溫α -淀粉酶，果膠酶，以及上述的中草藥粉，實施例2所述的地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物，于25°C條件下在混合機中攪拌均勻，攪拌時間為5分鐘。攪拌均勻裝箱后于常溫或冷
室中保存。[0058]實施例4 一種飼用復合酶制劑的制備方法
[0059]一種含有益生菌的生長豬專用酶，由以下重量份數(shù)的酶制劑組成:
[0060]中草藥粉8份，木聚糖酶80份，蛋白酶20份，果膠酶10份，纖維素酶8份，地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物30份，中溫α -淀粉酶10份。
[0061]中草藥粉組成:黃芪30份；黨參18份；板藍根10份；當歸12份；
[0062]按上述配方取產(chǎn)自湖南鴻鷹翔生物工程股份有限公司的木聚糖酶，蛋白酶，纖維素酶，中溫α -淀粉酶，果膠酶，以及上述的中草藥粉，實施例2所述的地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物，于25°C條件下在混合機中攪拌均勻，攪拌時間為5分鐘。攪拌均勻裝箱后于常溫或冷室中保存。
[0063]實施例5 —種飼用復合酶制劑的制備方法
[0064]一種含有益生菌的生長豬專用酶，由以下重量份數(shù)的酶制劑組成:
[0065]中草藥粉6份，木聚糖酶100份，蛋白酶30份，果膠酶20份，纖維素酶12份，地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物20份，中溫α -淀粉酶5份。
[0066]中草藥粉組成:黃芪18份；黨參14份；板藍根13份；當歸10份；
[0067]按上述配方取產(chǎn)自湖南鴻鷹翔生物工程股份有限公司的木聚糖酶，蛋白酶，纖維素酶，中溫α -淀粉酶，果膠酶，以及上述的中草藥粉，實施例2所述的地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物，于25°C條件下在混合機中攪拌均勻，攪拌時間為5分鐘。攪拌均勻裝箱后于常溫或冷室中保存。
[0068]實施例6效果對比實驗`
[0069]選取120頭30Kg生長豬，按血統(tǒng)及性別無差異分為實驗組和對照組，每組3個重復，每個重復20頭豬。實驗期為28天，實驗組每噸飼料添加本實施例3所述復合酶制劑120g，對照組不添加復合酶制劑，于試驗期的始末日早晨空腹稱重，計算飼料日增重和料肉比，并對毛色進行打分。實驗結果如下表所示:
[0070]
I對照組I試驗組
平均日增重(g/d) 655.20712.67
飼料/增重2?452Λ6
毛色打分(10分制) 5?58?5
[0071]實施例5效果對比
[0072]選取120頭生長豬，按體重、血統(tǒng)及性別無差異分為實驗組和對照組，每組3個重復，每個重復20頭豬。實驗期為28天，實驗組和對照組每噸飼料均添加復合酶制劑120g，實驗組所用復合酶制劑為實施例3所述復合酶制劑，對照組所用復合酶制劑是為市售生長豬專用酶，于試驗期的始末日早晨空腹稱重，計算飼料轉化率、日增重和料肉比。實驗結果如下表所示:
[0073]
pMlpsi
【權利要求】
1.一種含有益生菌的生長豬專用酶，其特征在于:由以下重量份數(shù)的組分組成:中草藥粉2-8份，木聚糖酶80-100份，蛋白酶20-30份，果膠酶10-20份，纖維素酶8_12份，地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物20-30份，中溫α -淀粉酶5-10份； 所述地衣芽孢桿菌為地衣芽孢桿菌(B acillus Iicheniformis) β-10-25,保藏編號為 CCTCC NO:Μ2013538ο
2.如權利要求1所述一種含有益生菌的生長豬專用酶，其特征在于，所述中草藥粉的制備方法如下: 稱取黃芪10-30份；黨參10-18份；板藍根10-15份；當歸10-15份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下混合獲得中草藥粉。
3.如權利要求1所述一種含有益生菌的生長豬專用酶，其特征在于，地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物的制備方法，包括如下步驟: 地衣芽孢桿菌β-10-25經(jīng)斜面菌種活化培養(yǎng)后進行一、二、三級液體種子和種子罐培養(yǎng)；將一級種子罐發(fā)酵液以3%接種量接入含有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度35-45°C，攪拌速度200-300r/min，通風量(V/V) 1:1-3,培養(yǎng)時間10_15h ;然后將IL經(jīng)過121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至35_45°C時恒溫培養(yǎng)15-20h ;此時，將一級種子罐發(fā)酵液以2%接種量追加接入發(fā)酵罐，恒溫培養(yǎng)10-15h ;繼續(xù)將IL經(jīng)過121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至35_45°C時恒溫培養(yǎng)10-15h ; 發(fā)酵液經(jīng)孔徑10-1000 μ m粗濾，然后于10-20°C循環(huán)超濾濃縮去除水分得固形物含量20-40%濃縮液；濃縮`液經(jīng)真空冷凍干燥、超微粉碎得地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物。
4.如權利要求3所述的一種含有益生菌的生長豬專用酶，其特征在于；所述種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基為:酵母粉0.5%，蛋白胨1%，可溶性淀粉l%，NaCll%，pH4.5-7.0，121-123。。滅菌 30_40min。 所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:麥麩75g，玉米粉55g，米糠25g，豆餅粉20g，β -葡聚糖2g，中草藥粉40g，海藻糖35g，酵母粉6g，玉米漿3g，硫酸銨2g，磷酸氫二鉀2g，磷酸二氫鉀2g，檸檬酸鈉3g,消泡劑0.5g,純凈水1000mL, pH值4.5-7.0,121°C滅菌20min ； 所述發(fā)酵培養(yǎng)基的調(diào)配方法為:按比例準確稱取原料，將原料中的純凈水、玉米粉、豆餅粉投入配料罐中，調(diào)節(jié)pH值3-7,加入中溫淀粉酶(3u/g玉米粉)與高溫淀粉酶(30u/g玉米粉)，同時邊攪拌邊升溫至70°C保溫15-30min，然后緩慢升溫至90°C保溫15_30min進行液化，最后加入其它原料，攪拌均勻，調(diào)初始PH3-7，121-123°C滅菌30_40min備用。
5.如權利要求3所述的一種含有益生菌的生長豬專用酶，所述發(fā)酵培養(yǎng)基中的中草藥粉組成和制備方法如下:黃芪20份；黨參5份；當歸12份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下混合獲得中草藥粉。
6.一種制備如權利要求1-5所述的含有益生菌的生長豬專用酶的方法，包括如下步驟: 按照原料組成將中草藥粉，木聚糖酶，蛋白酶，果膠酶，纖維素酶，地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物，中溫α -淀粉酶混合均勻即可； 所述木聚糖酶，蛋白酶，果膠酶，纖維素酶，中溫α -淀粉酶為湖南鴻鷹翔生物工程股份有限公司或其他現(xiàn)有產(chǎn)品；所述中草藥粉的制備方法如下: 稱取黃芪10-30份；黨參10-18份；板藍根10-15份；當歸10-15份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下混合獲得中草藥粉劑。 所述地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物的制備方法如下: (1)種子培養(yǎng) 將地衣芽孢桿菌β-10-25斜面菌種經(jīng)三級搖瓶發(fā)酵劑一級種子罐發(fā)酵； 所述種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基為:酵母粉0.5%，蛋白胨I %，可溶性淀粉I %，NaCll %,ρΗ4.5-7.0,121-123°C滅菌 30_40min。 (2)發(fā)酵罐發(fā)酵 將一級種子罐發(fā)酵液以3%接種量接入含有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度35-45°C，攪拌速度200-300r/min，通風量(V/V) 1:1-3,培養(yǎng)時間10_15h ;然后將IL經(jīng)過121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至35_45°C時恒溫培養(yǎng)15-20h ;此時，將一級種子罐發(fā)酵液以2%接種量追加接入發(fā)酵罐，恒溫培養(yǎng)10-15h ;繼續(xù)將IL經(jīng)過121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至35_45°C時恒溫培養(yǎng)10-15h ; 所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:麥麩75g，玉米粉55g，米糠25g，豆餅粉20g，β -葡聚糖2g，中草藥粉40g，海藻糖35g，酵母粉6g，玉米漿3g，硫酸銨2g，磷酸氫二鉀2g，磷酸二氫鉀2g，檸檬酸鈉3g,消泡劑0.5g,純凈水1000mL, pH值4.5-7.0,121°C滅菌20min ；` 所述發(fā)酵培養(yǎng)基的調(diào)配方法為:按比例準確稱取原料，將原料中的純凈水、玉米粉、豆餅粉投入配料罐中，調(diào)節(jié)pH值3-7,加入中溫淀粉酶(3u/g玉米粉)與高溫淀粉酶(30u/g玉米粉)，同時邊攪拌邊升溫至70°C保溫15-30min，然后緩慢升溫至90°C保溫15_30min進行液化，最后加入其它原料，攪拌均勻，調(diào)初始PH3-7，121-123°C滅菌30_40min備用。 溶解氧控制:通過調(diào)整攪拌轉速及通風量，控制溶解氧15-30% ； pH控制:通過補氨水或稀磷酸，控制發(fā)酵過程中pH值保持在3-7 ； 補料控制:當發(fā)酵液中的還原糖含量降至3mg/ml-8mg/ml時,開始添加補料培養(yǎng)基,補料量以維持發(fā)酵液還原糖含量為2mg/ml-5mg/ml ； 放罐標準:60-80%菌體衰老自溶，酶活力增長緩慢。 (3)發(fā)酵液經(jīng)孔徑10-1000μ m粗濾，然后于10-20°C循環(huán)超濾濃縮去除水分得固形物含量20-40%濃縮液；濃縮液經(jīng)真空冷凍干燥、超微粉碎得地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物。
7.如權利要求1所述的一種含有益生菌的生長豬專用酶，其特征在于:由以下重量份數(shù)的組分組成:中草藥粉5份，木聚糖酶90份，蛋白酶25份，果膠酶15份，纖維素酶10份，地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物25份，中溫α -淀粉酶8份。
8.如權利要求1所述的一種含有益生菌的生長豬專用酶在畜禽飼養(yǎng)中的應用。
【文檔編號】A23K1/165GK103865904SQ201310738188
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2013年12月27日 優(yōu)先權日:2013年12月27日
【發(fā)明者】張錦杰, 朱永明, 劉文明, 劉波, 向左東 申請人:湖南鴻鷹生物科技有限公司