本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2012年07月31日、進(jìn)入中國的申請(qǐng)?zhí)枮?01280074989.x、發(fā)明名稱為“飲料及其制造方法”的申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。本發(fā)明涉及一種飲料及其制造方法。所述飲料包含特定的乳成分，可用于預(yù)防和治療各種骨疾病如骨質(zhì)疏松癥、骨折、風(fēng)濕癥和關(guān)節(jié)炎。
背景技術(shù)：
：近年來，各種骨疾病如骨質(zhì)疏松癥、骨折和腰痛在世界范圍內(nèi)隨著社會(huì)老齡化等增多，已成為嚴(yán)重的社會(huì)問題。這些疾病由鈣攝入不足、鈣吸收能力下降、閉經(jīng)后激素失衡等引起。據(jù)認(rèn)為，從生命早期通過活化成骨細(xì)胞和骨形成盡可能地增加體內(nèi)骨量，并且增加最大骨量和骨強(qiáng)度(骨密度+骨質(zhì))，在預(yù)防各種骨疾病，例如骨質(zhì)疏松、骨折和腰痛方面是有效的。注意術(shù)語“骨質(zhì)”涉及骨顯微結(jié)構(gòu)、代謝更新(metabolicturnover)、微小骨折和鈣化。據(jù)稱各種骨疾病，例如骨質(zhì)疏松、骨折和腰痛可通過抑制破骨細(xì)胞的骨吸收來預(yù)防。骨始終以平衡的方式反復(fù)吸收和形成(重塑)。然而，當(dāng)由于閉經(jīng)期后激素平衡變化等引起骨吸收超過骨形成時(shí)，可發(fā)生各種骨疾病，例如骨質(zhì)疏松、骨折和腰痛。因此，通過抑制破骨細(xì)胞的骨吸收和維持骨強(qiáng)度在恒定水平可使骨得到強(qiáng)化。考慮到上述情形，為了強(qiáng)化骨，已攝取單獨(dú)添加鈣鹽例如碳酸鈣、磷酸鈣或乳酸鈣的鈣鹽或者天然鈣產(chǎn)品例如乳清鈣、牛骨粉或雞蛋殼的藥物、飲食品或飼料等。包含此類鈣產(chǎn)品以及具有鈣吸收促進(jìn)效果的物質(zhì)，例如酪蛋白磷肽或寡聚多糖的藥物、飲食品或飼料等也已經(jīng)用于強(qiáng)化骨。然而，當(dāng)攝取包含鈣鹽或天然鈣產(chǎn)品的飲食品時(shí)鈣吸收率為50％以下，并且攝取的大部分鈣可能排出體外而沒有被吸收。另外，即使鈣被吸收入體內(nèi)，由于對(duì)骨的親和性可根據(jù)其形式或同時(shí)攝取的營養(yǎng)成分的類型而不同，也未必顯示骨代謝改善效果或骨強(qiáng)化效果。已知雌激素產(chǎn)品、活性維生素d3制品、維生素k2制品、雙膦酸鹽(bisphosphonate)制品和降鈣素制品等作為用于治療骨質(zhì)疏松或強(qiáng)化骨的藥物，并且還開發(fā)了新型藥物例如抗rankl抗體。然而，這些藥物可具有副作用例如耳鳴、頭痛或食欲不振。另外，從安全和成本等觀點(diǎn)，目前上述物質(zhì)處于不能添加到食品或飲品的狀況。因此，已需要根據(jù)各種骨疾病例如骨質(zhì)疏松、骨折和腰痛的性質(zhì)來開發(fā)可長期經(jīng)口攝取，通過促進(jìn)骨形成和抑制骨吸收增加骨強(qiáng)度，并且可期望具有預(yù)防或治療各種骨疾病的效果的此類飲食品。現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)[專利文獻(xiàn)1]jp-a-h08-151331[專利文獻(xiàn)2]jp-a-h10-7585[專利文獻(xiàn)3]jp-a-2000-281587技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：發(fā)明要解決的問題本發(fā)明目的是提供一種飲料，其可用于各種骨疾病如骨質(zhì)疏松癥、骨折、風(fēng)濕癥和關(guān)節(jié)炎的預(yù)防和治療。用于解決問題的方案本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)通過攝取包含血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物，并相對(duì)于血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物以特定的質(zhì)量比包含抑半胱氨酸蛋白酶蛋白(cystatin)和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物的飲料可有效地增加骨密度。該發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致發(fā)明的完成。具體地，本發(fā)明包括以下方面：(1)一種飲料，所述飲料包含大于0.8mg/100ml且150mg/100ml以下的血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物，和以與血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物的質(zhì)量比為0.006～1.7的抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物。(2)一種預(yù)防骨疾病的方法，其包括以200ml/天以上的量攝取根據(jù)(1)所述的飲料。(3)根據(jù)(1)所述的飲料的制造方法，其包括將血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物以及抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物與飲料原料混合，并將所得的混合物滅菌。(4)根據(jù)權(quán)利(1)所述的飲料的制造方法，其包括添加血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物和抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物至滅菌的飲料原料。發(fā)明的效果本發(fā)明的飲料顯示骨強(qiáng)化效果，并且可用于預(yù)防和治療各種骨疾病例如骨質(zhì)疏松、骨折、風(fēng)濕癥和關(guān)節(jié)炎。具體實(shí)施方式本發(fā)明的飲料的特征在于飲料以特定量包含血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物，并且相對(duì)于血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物以特定質(zhì)量比進(jìn)一步包含抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白酶抑制劑的水解產(chǎn)物。牛乳通常包含約0.2～0.8mg/100ml的血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物，和包含約0.4～1mg/100ml的抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物。相反，本發(fā)明的飲料添加有血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物和抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物，并且所述飲料包含大于0.8mg/100ml且150mg/100ml以下的血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物，和相對(duì)于血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物以0.006～1.7的質(zhì)量比的抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物。作為本發(fā)明的飲料中包含的血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物以及抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物，可使用由哺乳動(dòng)物，例如人、奶牛(cow)、水牛(buffalo)、山羊或綿羊的乳制備的包含血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物的級(jí)分；由哺乳動(dòng)物，例如人、奶牛、水牛、山羊或綿羊的乳制備的包含抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物的級(jí)分；由基因工程生產(chǎn)的包含血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物的級(jí)分；從血液或器官純化的血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物；或從血液或器官純化的抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物等。還可使用商購可得的純化的血管生成素或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白試劑。本發(fā)明的飲料可包含通過使用一種或多種蛋白酶消化包含血管生成素的級(jí)分、血管生成素試劑，或包含抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的級(jí)分、抑半胱氨酸蛋白酶蛋白試劑等獲得的血管生成素的水解產(chǎn)物或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物。本發(fā)明的飲料可包含通過直接從乳或來源于乳的材料，例如脫脂乳或乳清提取包含血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物以及抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物的級(jí)分制備的蛋白材料。例如，該蛋白材料可如下制備。具體地，使乳或來源于乳的材料與陽離子交換樹脂接觸，并以0.1至2.0m的鹽濃度洗脫吸附到樹脂的乳來源的蛋白，使用反滲透膜、電滲析膜、超濾膜或微濾膜等脫鹽和濃縮，并任選地使用蛋白酶，例如胰蛋白酶、胰酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、激肽釋放酶、組織蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶或v8蛋白酶進(jìn)行蛋白水解至分子量為8000以下。當(dāng)使用蛋白酶進(jìn)行蛋白水解時(shí)，分子量的下限優(yōu)選為500以上。由此獲得的蛋白材料可通過冷凍干燥或噴霧干燥等干燥，并且干燥產(chǎn)物可并入飲料中。本發(fā)明的飲料通過將血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物以及抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物、或包含血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物以及抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物的蛋白材料等添加到乳原料，以使飲料包含大于0.8mg/100ml且150mg/100ml以下的血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物，和相對(duì)于血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物以0.006～1.7的質(zhì)量比的抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物。如下述試驗(yàn)例中所示，當(dāng)如上所述飲料包含血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物以及抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物時(shí)，與單獨(dú)攝取血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物的情況相比可更加有效地獲得骨強(qiáng)化效果。本發(fā)明的飲料可以常規(guī)方式來生產(chǎn)，只要飲料包含各自特定量的血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物以及抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物即可。例如，本發(fā)明的飲料通過將血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物添加到乳原料例如乳來源的材料，以使飲料包含特定量的血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物，并且通過將抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物添加到混合物以使抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物與血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物的質(zhì)量比在上述特定范圍內(nèi)。注意作為乳來源材料等的飲料原料，可給出例如牛乳、脫脂濃縮乳、脫脂奶粉、乳清、黃油、奶油、發(fā)酵乳、乳制品乳酸菌飲料或乳酸菌飲料等，此外還可給出例如它們適當(dāng)混合的乳飲料、加工乳、成分調(diào)整乳、低脂肪乳或無脂肪乳等。當(dāng)添加血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物和抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物至飲料原料如乳來源的材料時(shí)，可將血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物和抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物添加至未滅菌的飲料原料或滅菌的飲料原料。當(dāng)添加至未滅菌的飲料原料時(shí)，滅菌可在添加后進(jìn)行。在該情形下，優(yōu)選加熱滅菌。例如，將飲料原料本身，或者添加有血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物和抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物的飲料原料加熱至70℃，使用均質(zhì)器在15mpa壓力下均質(zhì)化，在130℃下滅菌2秒鐘，并冷卻至5℃。當(dāng)對(duì)通過添加血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物和抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物至飲料原料而制備的混合物滅菌時(shí)，優(yōu)選在130℃下滅菌2秒鐘以下。本發(fā)明的飲料可以添加飲食品中通常使用的原料等，如糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素、礦物質(zhì)或香料，除了血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物、抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物、上述飲料原料以外，還可添加其他骨強(qiáng)化成分，如鈣、維生素d、維生素k或異黃酮。如下述動(dòng)物試驗(yàn)中所示，當(dāng)以每kg體重200ml以上的量經(jīng)口攝取時(shí)，本發(fā)明的飲料可強(qiáng)化骨。由于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的攝入相當(dāng)于根據(jù)血中藥物濃度的成人攝入(參見mitsuyoshinakajima(1993)，“yakkouhyokavol.8”，hirokawa-shotenltd.，第2-18頁)，所以期望可強(qiáng)化骨，并且特別地可通過以每個(gè)成人200ml/天以上的量攝取本發(fā)明的飲料可預(yù)防或治療各種骨疾病，例如骨質(zhì)疏松、骨折、風(fēng)濕癥和關(guān)節(jié)炎。以下通過參考例、實(shí)施例和試驗(yàn)例進(jìn)一步更詳細(xì)地描述本發(fā)明。注意以下實(shí)施例僅用于說明性目的，不應(yīng)解釋為限制本發(fā)明。參考例1血管生成素級(jí)分的制備(1)用去離子水徹底洗滌填充有30kg陽離子交換樹脂(磺化chitopearl；由fujispinningco.,ltd.制造)的柱，然后將1000升未滅菌的脫脂乳(ph6.7)施加到柱。在用去離子水徹底洗滌柱之后，用0.1至2.0m線性梯度的氯化鈉洗脫吸附的蛋白。使用s-sepharose陽離子交換色譜(由amershambioscientific制造)分級(jí)包含血管生成素的洗脫級(jí)分，并在90℃下熱處理所得包含血管生成素的級(jí)分10分鐘，并離心除去沉淀物。將包含血管生成素的級(jí)分進(jìn)一步進(jìn)行凝膠過濾色譜(柱：superose12)。使用反滲透膜使獲得的洗脫物脫鹽，并冷凍干燥脫鹽的洗脫物以獲得16.5g血管生成素級(jí)分，其血管生成素純度為90％。重復(fù)這些連續(xù)操作30次。參考例2血管生成素級(jí)分的制備(2)用去離子水徹底洗滌填充有10kg肝素sepharose(由gehealthcare制造)的柱，然后將500升未滅菌的脫脂乳(ph6.7)施加到柱。在用0.5m氯化鈉溶液徹底洗滌柱之后，用1.5m氯化鈉溶液洗脫柱。使用反滲透膜使洗脫物脫鹽，并冷凍干燥脫鹽的洗脫物以獲得18g血管生成素級(jí)分，其血管生成素純度為5％。重復(fù)上述連續(xù)操作50次。參考例3抑半胱氨酸蛋白酶蛋白級(jí)分的制備在90℃下熱處理100,000升5％乳清蛋白溶液，并通過離心除去沉淀物。用通過將羧甲基化的木瓜蛋白酶結(jié)合至tresyl-toyopearl(由tosohcorporation制造)制備的載體填充柱。用0.5m氯化鈉溶液平衡化后，將上述乳清蛋白溶液施加到柱。然后用0.5m氯化鈉溶液和包含吐溫20(0.1％)的0.5m氯化鈉溶液連續(xù)洗滌柱。之后，用20mm乙酸-0.5m氯化鈉溶液洗脫包含抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的級(jí)分。用1m氫氧化鈉溶液立即中和洗脫的級(jí)分。然后使用反滲透膜使獲得的洗脫物脫鹽，并冷凍干燥脫鹽的洗脫物以獲得9.6g抑半胱氨酸蛋白酶蛋白級(jí)分，其抑半胱氨酸蛋白酶蛋白純度為90％。重復(fù)上述連續(xù)操作20次。包含于飲料中的血管生成素和抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的測(cè)量根據(jù)修正的jp-a-2008-164511中所述的方法測(cè)量飲料中的血管生成素、血管生成素的水解產(chǎn)物、抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物的含量。具體地，將106μl飲料添加到5ml超純水，并將1/1000當(dāng)量的甲酸添加到混合物以制備樣品溶液。干燥十微升(10μl)樣品溶液，并溶解于20μl含8m脲和1mm三(羧乙基)膦(tcep)的0.1m碳酸氫銨中。在56℃下加熱溶液30分鐘。在溶液回到室溫后，將5μl100mm碘乙酰胺溶液添加到該溶液，并在暗處使混合物反應(yīng)30分鐘。在添加54μl超純水后，將10μl的0.1μg/ml胰蛋白酶和10μl的0.1μg/ml賴氨?；逆渻?nèi)切酶添加到混合物。在37℃下使混合物反應(yīng)16小時(shí)。然后通過添加3μl甲酸終止反應(yīng)，并用作測(cè)量用的樣品肽溶液。用包含0.1％甲酸、0.02％三氟乙酸(tfa)和2％乙腈的10fmol/μl內(nèi)標(biāo)肽溶液稀釋樣品溶液6倍，并將2.5μl稀釋的溶液進(jìn)行l(wèi)c/ms/ms分析。通過使用hplc系統(tǒng)梯度洗脫分離肽。更具體地，使用在magic2002hplc系統(tǒng)上的配備有5μl肽trap的柱(magicc18,0.2mm(id)×50mm)以2μl/分鐘的流速分離肽。使用溶液a(2％乙腈-0.05％甲酸)和溶液b(90％乙腈-0.05％甲酸)作為hplc洗脫液。在2至65％使用溶液b的洗脫條件下經(jīng)20分鐘實(shí)施梯度洗脫。作為測(cè)量抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的對(duì)象離子，母體離子(parention)為nh2-qvvsgmnyfldvelgr-cooh(m/z914.4)，和ms/ms靶離子為nh2-fldvelgr-cooh(m/z948.7)。作為測(cè)量血管生成素的對(duì)象離子，母體離子為nh2-yihfltqhydak-cooh(m/z768.8)，和ms/ms靶離子為nh2-fltqhydak-cooh(m/z1122.8)。關(guān)于內(nèi)標(biāo)肽，母體離子為nh2-ettvfenlpek-cooh(其中，p標(biāo)記有13c和15n)(m/z656.9)，和ms/ms靶離子為nh2-fenlpek-cooh(其中，p標(biāo)記有13c和15n)(m/z882.4)。將系統(tǒng)“l(fā)cqadvantage”用于ms。各蛋白的峰面積由所得色譜計(jì)算，并且由相對(duì)于內(nèi)標(biāo)肽的比計(jì)算濃度。實(shí)施例1將三百三十毫克(330mg)參考例1中得到的血管生成素級(jí)分和1mg參考例3中得到的抑半胱氨酸蛋白酶蛋白級(jí)分與200ml牛乳混合。將混合物在130℃下滅菌2秒鐘，并冷卻至10℃以獲得飲料(實(shí)施例制品1)。所得飲料包含150mg/100ml的血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物，和飲料中抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物與血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物的質(zhì)量比為0.006。實(shí)施例2將二十四毫克(24mg)參考例2中得到的血管生成素級(jí)分和2mg參考例3中得到的抑半胱氨酸蛋白酶蛋白級(jí)分與200ml牛乳混合。將混合物在130℃下滅菌2秒鐘，并冷卻至10℃以獲得飲料(實(shí)施例制品2)。所得飲料包含0.81mg/100ml的血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物，和飲料中抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物與血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物的質(zhì)量比為1.7。實(shí)施例3將二十四毫克(24mg)參考例1中得到的血管生成素級(jí)分和2mg參考例3中得到的抑半胱氨酸蛋白酶蛋白級(jí)分與200ml牛乳混合。將混合物在130℃下滅菌2秒鐘，并冷卻至10℃以獲得飲料(實(shí)施例制品3)。所得飲料包含11mg/100ml的血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物，和飲料中抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物與血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物的質(zhì)量比為0.12。比較例1將二十二毫克(22mg)參考例2中得到的血管生成素級(jí)分和4mg參考例3中得到的抑半胱氨酸蛋白酶蛋白級(jí)分與200ml牛乳混合。將混合物在130℃下滅菌2秒鐘，并冷卻至10℃以獲得飲料(比較例制品1)。所得飲料包含0.75mg/100ml的血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物，和飲料中抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物與血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物的質(zhì)量比為3.0。比較例2將三百三十毫克(330mg)參考例1中得到的血管生成素級(jí)分和0.25mg參考例3中得到的抑半胱氨酸蛋白酶蛋白級(jí)分與200ml牛乳混合。將混合物在130℃下滅菌2秒鐘，并冷卻至10℃以獲得飲料(比較例制品2)。所得飲料包含150mg/100ml的血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物，和飲料中抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物與血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物的質(zhì)量比為3.0。試驗(yàn)例1通過動(dòng)物試驗(yàn)測(cè)定實(shí)施例制品1至3以及比較例制品1和2的骨強(qiáng)化效果。將c3h/hej小鼠(5周大，雄性)用于動(dòng)物試驗(yàn)。1周馴化后，將小鼠分為六組(10只小鼠/組)。使用管以每1kg小鼠重量200ml/天的量、一天一次2周向小鼠經(jīng)口投與實(shí)施例制品1至3以及比較例制品1和2的各產(chǎn)品。對(duì)照組不投與任何實(shí)施例制品1至3以及比較例制品1和2。投與完成后(第二周)，使用micro-ct(由rigakucorporation制造)測(cè)量各小鼠右脛骨的骨密度。結(jié)果示于表1中。如表1所示，經(jīng)口投與實(shí)施例制品1至3的組與對(duì)照組和投與比較例制品1或2的比較例組相比顯示骨密度顯著增加。表1骨密度(mg/cm3)對(duì)照組1238±9實(shí)施例制品11265±11實(shí)施例制品21270±13實(shí)施例制品31268±12比較例制品11244±5比較例制品21243±7參考例4用去離子水徹底洗滌填充有400g陽離子交換樹脂(磺化chitopearl；由fujispinningco.,ltd.制造)的柱(直徑：4cm，高度：30cm)，并以25ml/分鐘的流速將40升未滅菌的脫脂乳(ph6.7)施加到柱。用去離子水徹底洗滌柱后，使用包含0.78m氯化鈉的0.02m碳酸鹽緩沖液(ph7.0)洗脫吸附到樹脂上的蛋白。使用反向滲透膜脫鹽洗脫物，并冷凍干燥脫鹽的洗脫物以獲得18g粉狀蛋白材料(參考例產(chǎn)品4)。參考例5將參考例產(chǎn)品4的四克(4g)蛋白材料溶解于800ml水。在添加作為蛋白酶的胰蛋白酶(由sigma制造)后，從而獲得0.03重量％的終濃度，在37℃下使混合物進(jìn)行酶促處理8小時(shí)。通過90℃下熱處理5分鐘失活蛋白酶后，冷凍干燥混合物以獲得3.0g粉狀蛋白材料(參考例產(chǎn)品5)。實(shí)施例4將四十毫克(40mg)參考例產(chǎn)品4與200ml滅菌的牛乳混合以獲得飲料(實(shí)施例制品4)。獲得的飲料包含1.2mg/100ml的血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物，并且飲料中抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物與血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物的質(zhì)量比為0.39。實(shí)施例5將四十毫克(40mg)參考例產(chǎn)品5與200ml滅菌的牛乳混合以獲得飲料(實(shí)施例制品5)。獲得的飲料包含1.15mg/100ml的血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物，并且飲料中抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物與血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物的質(zhì)量比為0.4。比較例3將三十毫克(30mg)參考例產(chǎn)品4和10mg參考例3中獲得的抑半胱氨酸蛋白酶蛋白級(jí)分與200ml滅菌的牛乳混合以獲得飲料(比較例制品3)。獲得的飲料包含0.95mg/100ml的血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物，并且飲料中抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產(chǎn)物與血管生成素和/或血管生成素的水解產(chǎn)物的質(zhì)量比為5.2。試驗(yàn)例2通過動(dòng)物試驗(yàn)測(cè)定實(shí)施例制品4和5以及比較例制品3的骨強(qiáng)化效果。將四十只sd雌性大鼠(51周大)用于動(dòng)物試驗(yàn)。將大鼠分為五組(8只大鼠/組)。四組進(jìn)行卵巢切除，剩余一組假手術(shù)(shamsurgery)。4周恢復(fù)期后，使用管以每1kg小鼠重量200ml/天、每日六次分劑量向切除卵巢的大鼠經(jīng)口投與實(shí)施例制品4或5或比較例制品3。對(duì)照組不投與實(shí)施例制品4和5以及比較例制品3的任何產(chǎn)品。4周恢復(fù)期后，以與對(duì)照組相同的方式飼養(yǎng)進(jìn)行假手術(shù)的大鼠16周。投與完成后(第十六周)，使用micro-ct(由rigakucorporation制造)測(cè)量各大鼠右脛骨的骨密度。結(jié)果示于表2中。如表2所示，經(jīng)口投與實(shí)施例制品4和5的組與對(duì)照組和投與比較例制品3的比較例組相比顯示骨密度顯著增加。另外，骨密度接近假手術(shù)組的骨密度。表2骨密度(mg/cm3)對(duì)照組552±10假手術(shù)組601±8實(shí)施例制品4596±10實(shí)施例制品5595±9比較例制品3555±12當(dāng)前第1頁12