本發(fā)明涉及一種具有降血糖作用的藥食同源的組合物的制備方法及由該方法制備的組合物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
糖尿病(diabetesmellitus，dm)以高血糖為主要標(biāo)志，是一組由遺傳和環(huán)境因素相互作用而引起的臨床綜合征。糖尿病人由于胰島素分泌絕對(duì)不足或相對(duì)不足以及靶組織細(xì)胞對(duì)胰島素敏感性降低，從而引起糖、蛋白質(zhì)、脂肪、水和電解質(zhì)等一系列物質(zhì)的代謝紊亂。高血糖則是由于胰島素分泌缺陷或其生物作用受損，或兩者兼有而引起。糖尿病患者長期存在的高血糖，會(huì)導(dǎo)致各種組織特別是眼、腎、心臟、血管及神經(jīng)的慢性損害和功能障礙。目前治療糖尿病的方法主要有藥物治療、運(yùn)動(dòng)治療和飲食治療等。傳統(tǒng)的降血糖藥物如胰島素、磺酰脲類和雙胍類物質(zhì)雖然能短時(shí)降低血糖，但往往會(huì)產(chǎn)生一些副作用，并且有可能使機(jī)體產(chǎn)生依賴性。天然降血糖食品具有來源廣泛、副作用小和價(jià)格低廉等特點(diǎn)，容易被普通人接受，是日常保健和自我調(diào)養(yǎng)的最佳手段。因此，降血糖的功能性食品的研究和開發(fā)也越來越受重視。藥食同源的中藥中含有多糖類、黃酮類、多肽類、生物堿類和皂苷類降血糖活性因子，與膳食纖維、植物蛋白和益生元等組合使用具有良好的降血糖功效。
中藥全成分加工服用，藥量大，服用不便。在辯證施治處方中藥快速加工中，超微破壁粉碎技術(shù)的應(yīng)用，則能克服以上缺點(diǎn)。它在粉碎中藥飲片的過程中，使構(gòu)成中藥飲片的動(dòng)植物細(xì)胞壁絕大部分破碎，細(xì)胞內(nèi)容物逸出，有效成分能被人體全部以近似大分子的形式直接吸收利用，減少服用量，提高療效。由于“貝利”微粉機(jī)在粉碎中的固體乳化作用，使其在流態(tài)化固相中進(jìn)行乳化、分散、均質(zhì)、表面改性等作業(yè)。同時(shí)，可提高粉碎時(shí)的溫度，模擬煎煮中藥飲片的過程，也可降低粉碎時(shí)的溫度，保存不穩(wěn)定成分。亦能安排中藥飲片粉碎次序，使之符合湯劑制備中先煎后入等特殊要求。還能利用飲片中的超細(xì)纖維作為支撐結(jié)構(gòu)，在不加入任何輔料的情況下形成顆粒。保留了湯劑的制備過程，同時(shí)為進(jìn)一加工水丸、膠囊等劑型提供了理想的原料。
本發(fā)明是提供一種藥食同源的組合物在降血糖功能食品中的應(yīng)用。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種藥食同源的組合物在降血糖功能食品中的應(yīng)用，該組合物由下列重量份的原料藥制成：
麥苗20-30，梔子10-14，葛根10-16，紫蘇籽6-10，桑葉10-14，薄荷10-14，低聚果糖8-12，低聚半乳糖6-10。
其中麥苗粉是采用小麥或大麥嫩葉為原料，通過高溫殺青、超微粉碎等技術(shù)制成的翠綠色粉末，富含18種氨基酸、多種維生素、礦物質(zhì)、蛋白質(zhì)、葉綠素、活性酵素及膳食纖維，被稱為“綠色血液”、“堿性食物之王”。經(jīng)由醫(yī)學(xué)界研究表明，對(duì)增強(qiáng)人體免疫力、延緩衰老、抗疲勞、促進(jìn)微循環(huán)均有積極作用，并具有抗癌、保護(hù)肝臟、降糖等保健作用；梔子具有瀉火除煩、清熱利尿、涼血解毒等多種功效。梔子中含有大量的環(huán)烯醚萜類化合物，同時(shí)還存在一些有機(jī)酸(酯)、黃酮、香豆素、揮發(fā)油等化學(xué)成份。現(xiàn)代藥理研究表明梔子具有降糖降脂的藥理活性；葛根為豆科植物野葛的干燥根，味甘、辛，具有解表退熱、生津、透疹、升陽止瀉等功效，葛根有效成分葛根素等可以有效降低胰島素抵抗一高血壓大鼠的血壓、血糖，提高胰島素敏感性，對(duì)改善胰島素抵抗有著積極的意義；紫蘇籽具有降血糖、降低膽固醇、抗癌、提高免疫力、止咳平喘、改善情緒等生理功能；桑葉具有止消渴的功效，現(xiàn)代藥理研究證明桑葉可明顯抑制血糖升高，具有預(yù)防和治療糖尿病的作用；薄荷具有疏散風(fēng)熱、清熱解表、利咽透疹、祛風(fēng)消腫、利咽止痛之功效，現(xiàn)代藥理研究表明薄荷具有降血糖的作用；以低聚果糖和低聚半乳糖為主的功能性低聚糖屬低甜度、低熱量糖，能夠促使血脂正常化，服用后不會(huì)使人發(fā)胖，不易使人血糖值升高，因此特別適合糖尿病患者服用。
本發(fā)明組合物的原料藥的重量份比優(yōu)選為：
麥苗20，梔子14，葛根10，紫蘇籽10，桑葉10，薄荷14，低聚果糖8，低聚半乳糖10。
本發(fā)明組合物的原料藥的重量份比還優(yōu)選為：
麥苗22，梔子13，葛根11，紫蘇籽9，桑葉11，薄荷13，低聚果糖9，低聚半乳糖9。
本發(fā)明組合物的原料藥的重量份比還優(yōu)選為：
麥苗24，梔子12，葛根12，紫蘇籽8，桑葉12，薄荷12，低聚果糖10，低聚半乳糖8。。
本發(fā)明組合物的原料藥的重量份比還優(yōu)選為：
麥苗26，梔子11，葛根13，紫蘇籽7，桑葉13，薄荷11，低聚果糖11，低聚半乳糖7。
本發(fā)明組合物的原料藥的重量份比還優(yōu)選為：
麥苗28，梔子10，葛根14，紫蘇籽6，桑葉14，薄荷10，低聚果糖12，低聚半乳糖6。
本發(fā)明組合物的原料藥的重量份比還優(yōu)選為：
麥苗30，梔子12.5，葛根16，紫蘇籽7.5，桑葉13.5，薄荷10.5，低聚果糖9.5，低聚半乳糖9.5。
本發(fā)明組合物主要有麥苗、梔子、葛根、紫蘇籽、桑葉、薄荷等組成，可以明顯緩解糖尿病大鼠病情。使大鼠的毛色更為光亮，行動(dòng)較為敏捷。大鼠的血糖濃度由初始的12～13mmol/l，給藥30天后可降到7～8mmol/l，降血糖效果與二甲雙胍組接近，胰島素水平均有明顯升高，體質(zhì)量增加比率也有所上升。大鼠胰島細(xì)胞活性增加，并呈一定的劑量依賴性。藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明組合物對(duì)糖尿病模型sd大鼠有明顯的治療作用，其降血糖機(jī)制可能是通過抑制胰島β-細(xì)胞凋亡來增加胰島素分泌。
本發(fā)明組合物由以下步驟組成：
(1)按照原料藥重量比例稱取原料(梔子、葛根、紫蘇籽、桑葉、薄荷)，凈選；
(2)分別將藥材干燥至水分約為5.5％，混合，將藥材粉碎成細(xì)粉(過100～150目)，備用。
(3)將藥材細(xì)粉加入料斗中，使用“貝利”超微粉碎機(jī)進(jìn)行超微粉碎，收集微粉(過300目)
(4)將上述微粉與麥苗粉、低聚果糖、低聚半乳糖混合即得。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案。
以下實(shí)施例中所使用的原料梔子、葛根、紫蘇籽、桑葉、薄荷購自廣州市清平藥材市場，麥苗粉夠自青海凈草生物科技有限公司。低聚果糖和低聚半乳糖夠自量子高科生物科技有限公司。
實(shí)施例1
處方：
麥苗20，梔子14，葛根10，紫蘇籽10，桑葉10，薄荷14，低聚果糖8，低聚半乳糖10。
制備方法：
(1)按照原料藥重量比例稱取原料(梔子、葛根、紫蘇籽、桑葉、薄荷)，凈選。
(2)分別將藥材干燥至水分約為5.5％，混合，將藥材粉碎成細(xì)粉(過100～150目)，備用。
(3)將藥材細(xì)粉加入料斗中，使用“貝利”粉碎機(jī)進(jìn)行超微粉碎，收集微粉(過300目)，即得。
(4)將上述微粉與麥苗粉、低聚果糖、低聚半乳糖混合即得。
實(shí)施例2
處方：
麥苗22，梔子13，葛根11，紫蘇籽9，桑葉11，薄荷13，低聚果糖9，低聚半乳糖9。
制備方法：
(1)按照原料藥重量比例稱取原料(梔子、葛根、紫蘇籽、桑葉、薄荷)，凈選。
(2)分別將藥材干燥至水分約為5.5％，混合，將藥材粉碎成細(xì)粉(過100～150目)，備用。
(3)將藥材細(xì)粉加入料斗中，使用“貝利”粉碎機(jī)進(jìn)行超微粉碎，收集微粉(過300目)，即得。
(4)將上述微粉與麥苗粉、低聚果糖、低聚半乳糖混合即得。
實(shí)施例3
處方：
麥苗24，梔子12，葛根12，紫蘇籽8，桑葉12，薄荷12，低聚果糖10，低聚半乳糖8。
制備方法：
(1)按照原料藥重量比例稱取原料(梔子、葛根、紫蘇籽、桑葉、薄荷)，凈選。
(2)分別將藥材干燥至水分約為5.5％，混合，將藥材粉碎成細(xì)粉(過100～150目)，備用。
(3)將藥材細(xì)粉加入料斗中，使用“貝利”粉碎機(jī)進(jìn)行超微粉碎，收集微粉(過300目)，即得。
(4)將上述微粉與麥苗粉、低聚果糖、低聚半乳糖混合即得。
實(shí)施例4
處方：
麥苗26，梔子11，葛根13，紫蘇籽7，桑葉13，薄荷11，低聚果糖11，低聚半乳糖7。
制備方法：
(1)按照原料藥重量比例稱取原料(梔子、葛根、紫蘇籽、桑葉、薄荷)，凈選。
(2)分別將藥材干燥至水分約為5.5％，混合，將藥材粉碎成細(xì)粉(過100～150目)，備用。
(3)將藥材細(xì)粉加入料斗中，使用“貝利”粉碎機(jī)進(jìn)行超微粉碎，收集微粉(過300目)，即得。
(4)將上述微粉與麥苗粉、低聚果糖、低聚半乳糖混合即得。
實(shí)施例5
處方：
麥苗28，梔子10，葛根14，紫蘇籽6，桑葉14，薄荷10，低聚果糖12，低聚半乳糖6。
制備方法：
(1)按照原料藥重量比例稱取原料(梔子、葛根、紫蘇籽、桑葉、薄荷)，凈選。
(2)分別將藥材干燥至水分約為5.5％，混合，將藥材粉碎成細(xì)粉(過100～150目)，備用。
(3)將藥材細(xì)粉加入料斗中，使用“貝利”粉碎機(jī)進(jìn)行超微粉碎，收集微粉(過300目)，即得。
(4)將上述微粉與麥苗粉、低聚果糖、低聚半乳糖混合即得。
實(shí)施例6
處方：
麥苗30，梔子12.5，葛根16，紫蘇籽7.5，桑葉13.5，薄荷10.5，低聚果糖9.5，低聚半乳糖9.5。
制備方法：
(1)按照原料藥重量比例稱取原料(梔子、葛根、紫蘇籽、桑葉、薄荷)，凈選。
(2)分別將藥材干燥至水分約為5.5％，混合，將藥材粉碎成細(xì)粉(過100～150目)，備用。
(3)將藥材細(xì)粉加入料斗中，使用“貝利”粉碎機(jī)進(jìn)行超微粉碎，收集微粉(過300目)，即得。
(4)將上述微粉與麥苗粉、低聚果糖、低聚半乳糖混合即得。
為了證實(shí)本發(fā)明組合物降血糖的療效，用按實(shí)施例6方法制得的組合物粉末，進(jìn)行了一下動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究：
1實(shí)驗(yàn)材料
實(shí)施例6組合物粉末(zhw)，鏈脲佐菌素(美國sigma公司)，艾塞那肽(美國百特制藥)，鹽酸二甲雙胍片(中美上海施貴寶制藥有限公司)，雄性sd大鼠，體質(zhì)量(180±20)g，血糖儀(德國羅氏血糖儀)，大鼠胰島細(xì)胞(上海美軒生物科技有限公司)，mtt檢測試劑盒(上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司)，胰島素elisa試劑盒(上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司)。
2實(shí)驗(yàn)方法
2.1動(dòng)物模型建立及分組給藥
組合物的制備：將實(shí)施例6組合物加入蒸餾水配置成不同質(zhì)量濃度的藥液備用。所有藥品均當(dāng)天配制使用。
糖尿病動(dòng)物模型建立：雄性sd大鼠80只適應(yīng)性喂養(yǎng)3d，禁食3-5h，測空腹血糖，作為動(dòng)物基礎(chǔ)血糖值。隨后隨機(jī)選取60只大鼠禁食24h(自由飲水)，腹腔注射鏈脲佐菌素50mg/kg，5d后禁食3-5h，測空腹血糖，血糖值大于11.1mmol/l為高血糖模型成功動(dòng)物。
高血糖模型大鼠降血糖實(shí)驗(yàn)：選取高血糖模型動(dòng)物按禁食3-5h的血糖水平分組，每組10只，模型對(duì)照組(灌胃蒸餾水)、低劑量(300mg/kg)、中劑量(600mg/kg)、高劑量(1800mg/kg)、鹽酸二甲雙胍陽性對(duì)照組(84.0mg/kg)，剩余20只正常大鼠為空白對(duì)照組(灌胃蒸餾水)和高劑量組(1800mg/kg)，分籠飼養(yǎng)，空腹灌胃，每天的灌胃時(shí)間固定(下午14：00-15：00)，連續(xù)30d，分別在第8、15、22、30天測空腹血糖值和體重。
糖耐量實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)的第30天，各組動(dòng)物禁食3-5h，測定給予葡萄糖前血糖值，二甲雙胍、高、中、低劑量組、正常高劑量組分別給予藥物灌胃，模型對(duì)照組和正常對(duì)照組給予等劑量體積蒸餾水灌胃，15～20min后各組經(jīng)口給予葡萄糖2.0g/kgbw，測定給葡萄糖后各組0.5、2.0h的血糖值，觀察各組給葡萄糖后各時(shí)間點(diǎn)血糖值及血糖曲線下面積。
胰島素檢測：實(shí)驗(yàn)第30天，利用胰島素elisa試劑盒對(duì)大鼠胰島素進(jìn)行檢測。
2.2細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
培養(yǎng)液的制備，將將實(shí)施例6粉末混合均勻，加入80℃適量的熱水，超聲波萃取3次，用3倍體積的95％乙醇進(jìn)行沉淀，減壓干燥得到提取物粉末，用超純水進(jìn)行溶解配成低中高(20，40，80nmol/l)3種不同濃度的溶液，高壓滅菌后加入dmem培養(yǎng)基(含雙抗)中。
細(xì)胞活性檢測：將購買的大鼠胰島β-細(xì)胞接種于96孔微量培養(yǎng)板中，37℃培養(yǎng)12h后，加入不同濃度的提取液，艾塞那肽和超純水作為陽性和陰性對(duì)照培養(yǎng)48h，細(xì)胞活性采用mtt檢測法。mtt溶液(5g/l，20μl)加入到每個(gè)孔中，并在37℃下培養(yǎng)4h后棄上清液，加入終止溶液的dmso(100μl/孔)震蕩10min，在490nm由酶標(biāo)儀檢測吸光度值來確定細(xì)胞活性。
2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法用spss19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料均以
3實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.1狀態(tài)觀察給藥7d后觀察，模型對(duì)照組較其他組的大鼠精神狀態(tài)較差，皮毛失去光澤，身體消瘦，動(dòng)作遲緩，反應(yīng)遲鈍，飲水量和食物攝入量均顯著增加。陽性對(duì)照組和給藥組大鼠的狀態(tài)類似，程度明顯減輕。
3.2組合物的降血糖作用30d灌胃實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，高中低劑量組從給藥第7天起就有降血糖作用，并且降血糖效果隨著治療時(shí)間的延長作用明顯增強(qiáng)，血糖濃度由初始的11.7、11.6、12.1mmol/l，給藥30天后降到6.6、7.7、7.8mmol/l，降血糖效果與二甲雙胍組的6.6mmol/l接近，且各劑量組之間沒有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。高劑量組的正常大鼠血糖水平無明顯變化。糖尿病大鼠模型給藥30d的空腹血糖變化見表1。
表1組合物對(duì)大鼠血糖的影響(
3.3糖尿病模型大鼠的糖耐量變化與模型對(duì)照組auc的39.0相比，高、中、低3種劑量的組合物均能明顯降低糖尿病大鼠auc，分別為18.4、22.6、17.6，且效果與二甲雙胍對(duì)照組auc的20.1相近，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無明顯差異。與空白對(duì)照組相比，正常大鼠的高劑量組的auc值無明顯變化?？傊?，組合物可以有效地降低糖尿病大鼠的糖耐量，見表2。
表2大鼠糖耐量及auc值(
3.4糖尿病模型大鼠胰島素水平變化
與模型對(duì)照組相比，高、中、低劑量給藥組和陽性藥物對(duì)照組糖尿病大鼠的血清胰島素水平有所上升，高、中、低劑量組(8.8％-12.7％)略低于陽性藥物對(duì)照組(21.1％)，由此推測組合物使糖尿病大鼠血糖下降和提高胰島素水平有關(guān)。高血糖大鼠血清胰島素變化見表3。
表3組合物對(duì)大鼠胰島素水平的影響(
3.5糖尿病模型大鼠體質(zhì)量的變化
正常大鼠空白對(duì)照組和正常大鼠高劑量組的大鼠體質(zhì)量增加非常明顯增加了56.8％和56.4％。與模型對(duì)照組相比，高、中、低劑量組能明顯改善糖尿病大鼠的暴飲暴食，并能改善糖尿病引起的大鼠極度消瘦，提高大鼠體質(zhì)量，體質(zhì)量增加比率分別為24.8％、26.9％和33.6％，較陽性對(duì)照組的增加47.5％相比，劑量組顯示可適當(dāng)控制體質(zhì)量增加。給藥組之間并無明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見表4。
表4混合物對(duì)大鼠體質(zhì)量的影響(
3.6大鼠胰島β-細(xì)胞增殖影響
組合物能夠很好地抑制大鼠胰島β-細(xì)胞凋亡，提高細(xì)胞活力，與空白對(duì)照相比，給藥組和陽性藥物對(duì)照組的細(xì)胞活力上升，見表5。
表5混合物對(duì)大鼠胰島β-細(xì)胞的細(xì)胞活力影響(
4實(shí)驗(yàn)結(jié)論
上述實(shí)驗(yàn)證實(shí)了組合物對(duì)鏈脲佐菌素致病的糖尿病模型大鼠有良好的降血糖效果。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，組合物能夠很好地提高糖尿病大鼠體內(nèi)胰島素水平，降低血糖水平，緩解糖尿病大鼠暴飲暴食、消瘦的癥狀，并能控制體重增長。體外實(shí)驗(yàn)通過對(duì)不同濃度提取物條件下細(xì)胞活力的檢測，可以推測其降血糖的機(jī)制可能是通過抑制細(xì)胞凋亡來增加胰島細(xì)胞數(shù)量，進(jìn)而提高體內(nèi)胰島素水平來達(dá)到降血糖的效果。因此，組合物具有降血糖的功效。