專利名稱：一種具有降血糖作用的中藥提取物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，公開了一種從中藥中提取有效成分的方法，更特別的，本發(fā)明涉及從桑科植物桑葉、桑枝、桑白皮中提取具有治療糖尿病及其并發(fā)癥的組份，這些組份可應(yīng)用于糖尿病及其并發(fā)癥的治療。
背景技術(shù)：
桑葉，桑枝和桑白皮為桑樹的葉子，嫩枝和樹根的皮，是同一個(gè)植物的不同部位，常用的中藥之一。桑葉為桑科桑屬植物上(Morus alba L.)的樹葉。桑葉的藥用首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，桑葉性味苦甘、寒，甘所以益血，寒所以涼血。甘寒相合，故下氣而益陰，又能止咳，有補(bǔ)益之功。桑枝為?？粕僦参锷５母稍锬壑?，味苦平，入肝經(jīng)。功用去風(fēng)濕，利關(guān)節(jié)，利水。桑白皮為桑科桑屬植物桑的除去栓皮的根皮。性味甘，寒。入肺，脾經(jīng)。功用瀉肺平喘，利水消腫。治療肺熱咳喘，吐血，水腫，腳氣，小便不利。歷代中醫(yī)藥書中都有桑能夠治療消渴的記載。如《本草經(jīng)疏》載，桑葉味苦，甘，寒，甘所以益血，寒所以涼血，甘寒相合，故下氣而益陰，又能明目而止渴；《本草綱目》載，桑葉乃手足陽明之藥，煎汁代茶，能止消渴。
桑科植物的主要成分有黃酮及黃酮苷類、生物堿類、甾類成分、揮發(fā)油成分、多糖類、氨基酸類、維生素類和微量元素等。近年來國內(nèi)外很多研究結(jié)果表明桑葉，桑枝和桑白皮具有很好的降血糖功能，其降糖活性的機(jī)理研究認(rèn)為與其有效成分中生物堿有密切相關(guān)。
有關(guān)桑葉、桑枝和桑白皮中提取分離生物堿以及其糖苷酶抑制活性的專利較多，如中國專利公開號(hào)CN1338275A，CN13094A，CN14394623A，CN1466961A，CN1471934A，CN1559539A等，只涉及到利用有機(jī)溶劑或陽離子交換樹脂層析法分離桑葉、桑白皮中的總生物堿，而未涉及大孔樹脂和離子交換樹脂連續(xù)層析分離不同組份的方法。又如中國專利公開號(hào)CN1351085A中涉及桑葉多糖的分離，提取分離方法采用有機(jī)溶劑和離子交換樹脂，均未涉及大孔樹脂和離子交換樹脂連續(xù)分離方法。
本發(fā)明首次采用柱層析連續(xù)分離方法，將桑葉、桑枝和桑白皮的水或含水的醇提物連續(xù)吸附于大孔樹脂和離子交換樹脂，用不同極性的溶劑如水、不同濃度醇和氨水洗脫，同時(shí)分離得到黃酮類、生物堿類和多糖類組份，其得率和含量均達(dá)到預(yù)期的結(jié)果，而且本發(fā)明中采用的柱層析連續(xù)分離方法與傳統(tǒng)的有機(jī)溶劑連續(xù)萃取分離法相比，具有安全無毒性，無污染等優(yōu)點(diǎn)，可行而可靠，可以推廣大規(guī)模生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是公開一種具有降血糖作用的中藥提取物，它由?？浦参锷Ｈ~、桑枝、桑白皮中分離得到的多糖類、黃酮類和生物堿類組份組成。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是制備此中藥提取物主要組份的方法。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是指出此此中藥提取物的用途。
在本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提供一種具有降血糖作用的中藥提取物，是由?？浦参锷Ｈ~、桑枝、桑白皮任一或其組合中分離得到的多糖類、黃酮類和生物堿類組份組成，其特征在于，所分離得到的組份中各組份按照質(zhì)量百分比，多糖類組份含量為24-27％；黃酮類組份含量為53-61％；生物堿類組份含量為15-20％。
本發(fā)明所分離得到的組份中可以有極少量的雜質(zhì)。
本發(fā)明的黃酮類組份中槲皮素質(zhì)量百分比為30～50％。
本發(fā)明的生物堿類組份中多羥基生物堿1-脫氧野尻霉素(DNJ)質(zhì)量百分比為30～45％。
在本發(fā)明的第二方面，本發(fā)明提供上述中藥提取物主要組份的制備方法(1)將?？浦参锷Ｈ~、桑枝、桑白皮任一或其組合粉碎后，加入5-10倍體積的水，醇或含水醇溶劑，在25-100℃，提取2-3次，每次不少于20分鐘，得提取液，將提取液過濾渣質(zhì)得濾液1，再去除沉淀，得濾液2，將濾液2過大孔樹脂，用去離子水洗脫，將洗脫液濃縮后醇沉，沉淀物經(jīng)脫色后干燥得組份1，即，多糖類組份；(2)再用不同濃度的醇洗脫大孔樹脂，各部分收集到洗脫液無色為止，分別濃縮干燥后得組份2，即，黃酮類組份；(3)將大孔樹脂穿透部分液體再過離子交換樹脂，水洗，用0.2-1N氨水洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥而得組份3，即，生物堿類組份。
進(jìn)一步的，本發(fā)明制備方法步驟(1)所述作為提取溶劑的醇可以是甲醇、乙醇、異丙醇。
進(jìn)一步的，本發(fā)明制備方法步驟(1)所述的去除沉淀過程采用了絮凝工藝，即，把濾液1濃縮到原體積的1/10左右加入甲殼素或澄清劑，在70-80℃保溫5-6小時(shí)后，離心去沉淀。
進(jìn)一步的，本發(fā)明制備方法步驟(1)所述的醇沉工藝為洗脫液濃縮到1/5～1/2小體積后加入甲醇或乙醇至總濃度達(dá)到按照體積比70-80％，4℃放置過夜，離心而得到沉淀物。更優(yōu)化的體積比為70％。
進(jìn)一步的，本發(fā)明制備方法步驟(1)所述的脫色劑為乙醇和丙酮。
進(jìn)一步的，本發(fā)明制備方法所述的大孔樹脂可選自AB-8型，D101型，Amberlite 252或Diaion HP-20。
進(jìn)一步的，本發(fā)明制備方法所述的離子交換樹脂可采用苯乙烯樹脂，選自001×1.1型，001×4型，001×7型，Amberlite IR 120，Dowex 50或Diaion SK-IA。
進(jìn)一步的，本發(fā)明制備方法所述的大孔樹脂洗脫液為甲醇或乙醇的一種，濃度為30-95％。
進(jìn)一步的，本發(fā)明制備方法所述的氨水洗脫液濃度為0.5N。
在本發(fā)明制備方法步驟(1)中，提取方法的條件是為了較為充分地提取?？浦参锷Ｈ~、桑枝、桑白皮中的藥物成分，本領(lǐng)域中對(duì)提取方法的條件做適當(dāng)而不是實(shí)質(zhì)改變的方法也應(yīng)當(dāng)是本發(fā)明的內(nèi)容，例如提取5次，每次15分鐘。
在本發(fā)明制備方法步驟(1)中，濃縮及干燥的方法可以依據(jù)本領(lǐng)域許多常規(guī)的方法而實(shí)現(xiàn)，例如蒸發(fā)濃縮，真空干燥，霧化干燥，等等方法。
本發(fā)明制備方法中的提取組份按以下方法來鑒定和控制質(zhì)量(1)多糖類試管法(萘酚-硫酸試劑法(Molish反應(yīng)))各取組份1、組份2、組份3少許，分別試驗(yàn)，即，加80％乙醇振搖溶解后離心，沉淀加熱溶于乙醇中，再加等體積的10％α-萘酚-乙醇液，搖勻，沿試管壁滴加濃硫酸，在組份1的試驗(yàn)中，兩液界面處出現(xiàn)紫紅色環(huán)，表明組份1含有多糖。
薄層色譜取各組份0.1g，分別試驗(yàn)，即，加入2mL甲醇里，用力振搖后取上清液10μL點(diǎn)在硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲醇＝8∶2展開，在組份1的試驗(yàn)中，在紫外燈下觀察顯有紫色熒光斑點(diǎn)，表明組份1含有多糖。
多糖含量測(cè)定精密稱取組份1，0.1g，加80％乙醇10mL，超聲處理10分鐘后過濾，不溶物用80％乙醇20mL分4次洗滌后，用熱水溶解沉淀，至100mL，備用。精密稱取上述溶液0.5mL，放置10mL具塞試管里，加水至1mL。加入1mL 5％苯酚水溶液，搖勻，沿管壁緩緩加入濃硫酸5mL，搖勻，置沸水浴中5分鐘，冷卻。以1mL水加試劑為空白，在490nm波長處測(cè)定吸光度值。由校正曲線算出多糖含量。
(2)黃酮類試管法(鹽酸鎂粉還原顯色反應(yīng))取各組份分別配成10mg·mL-1水溶液，分別試驗(yàn)，即，加入少量鎂粉和1mL濃鹽酸，觀察泡沫顏色。在組份2的試驗(yàn)中，樣品溶液在加入鎂粉和濃鹽酸后，迅速產(chǎn)生粉紅色泡沫，表明組份2含有黃酮類物質(zhì)。
薄層色譜取各組份少許，分別試驗(yàn)，即，加入60％乙醇溶解，取10μL點(diǎn)在聚酰胺薄膜上，以90％乙醇中展開，用三氯化鋁乙醇液顯色，于紫外分析儀365nm下觀察熒光斑點(diǎn)，在組份2的試驗(yàn)中，熒光斑點(diǎn)表現(xiàn)為紫色斑點(diǎn)，表明組份2含有黃酮類物質(zhì)。
黃酮的含量測(cè)定用60％乙醇配置0.098mg·mL-1的槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別取0.0lmL，1.0mL，2.0mL，3.0mL，4.0mL，5.0mL，加入5％亞硝酸鈉溶液0.3mL搖勻后放置6min；加入10％亞硝酸鈉溶液0.3ml搖勻后放置6分鐘；加入1mol氫氧化鈉溶液4mL并加入60％乙醇稀釋至10mL，搖勻，放置15min。于510nm測(cè)定吸光度，求算標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后分別測(cè)定提取物中的槲皮素的含量。取黃酮組份1g加入10ml 60％乙醇，然后超聲提取30分鐘，取上清液1ml分別置于10ml量瓶中，按上述方法測(cè)定樣品槲皮素含量，然后分別測(cè)定提取物中的槲皮素的含量。
(3)生物堿的定性鑒別試管法(硅鎢酸沉淀法)取各組份分別以水配制成1mg/ml溶液，分別試驗(yàn)，即，滴加濃鹽酸數(shù)滴，再逐滴滴加硅鎢酸試液，如有生物堿則灰色不溶物出現(xiàn)，隨硅鎢酸試液的加入，不溶物增多。試驗(yàn)表明，組份3含有生物堿類物質(zhì)。
薄層色譜法取各組份分別在薄層板上點(diǎn)樣，展開劑為異丙醇∶醋酸∶水＝4∶2∶1，聯(lián)苯甲氨-氯氣顯色法，進(jìn)行顯色。有雞蛋黃色斑點(diǎn)為生物堿。試驗(yàn)表明，組份3含有生物堿類物質(zhì)。
生物堿含量檢測(cè)HPLC法測(cè)定含量以1-脫氧野尻霉素為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，用氨基鍵合相硅膠為填充料劑，乙腈-水為流動(dòng)相，視差折光檢測(cè)器上檢測(cè)。分別精密吸取一定濃度的對(duì)照品溶液與組份3樣品溶液各10μL，注入液相色譜儀，依法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，從而測(cè)定組份3中的1-脫氧野尻霉素的含量。
在本發(fā)明的第三方面，本發(fā)明指出了該中藥提取物在制備α-糖苷酶抑制劑方面的應(yīng)用，及其在制備治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明制備方法有益效果本發(fā)明首次采用柱層析連續(xù)分離方法，將桑葉、桑枝和桑白皮的水或含水的醇提物連續(xù)吸附于大孔樹脂和離子交換樹脂，用不同極性的溶劑如水、不同濃度醇和氨水洗脫，分別連續(xù)分離得到黃酮類、生物堿類和多糖類組份，其得率和含量均達(dá)到預(yù)期的結(jié)果，而且本發(fā)明中采用的柱層析連續(xù)分離方法與傳統(tǒng)的有機(jī)溶劑連續(xù)萃取分離法相比，具有安全無毒性，無污染等優(yōu)點(diǎn)，可行而可靠，可以推廣大規(guī)模生產(chǎn)。


圖1顯示了降血糖活性成分的提取分離工藝流程。
圖2顯示了各提取組份對(duì)正常小鼠糖耐量的影響及血糖峰值相對(duì)抑制率。
圖3顯示了各提取組份對(duì)STZ誘導(dǎo)的糖尿病小鼠糖耐量的影響及血糖峰值相對(duì)抑制率。
具體實(shí)施例方式
以下將對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
一、桑葉、桑枝或桑白皮中有效成分的提取實(shí)施例1桑葉1kg，加入5-10倍體積的去離子水，100℃提取3次，每次不少于20分鐘，合并提取液，將提取液過濾渣質(zhì)得濾液1，再去除沉淀，所述的去除沉淀過程采用了絮凝工藝，即，將提取的濾液1濃縮到原來的1/10體積時(shí)，加入甲殼素或澄清劑，在70-80℃保溫5-6小時(shí)后，離心去沉淀，得濾液2，將濾液2過AB-8大孔樹脂，流速5ml·min-1，用去離子水洗脫至洗脫液中加95％乙醇時(shí)無沉淀為止，將洗脫液濃縮到1/4體積后加入95％乙醇，使乙醇終濃度達(dá)到70％，靜止過夜后過濾，沉淀用乙醇和丙酮反復(fù)洗脫至洗脫液無色后，低溫干燥而得組份1，9g，用定性鑒別實(shí)驗(yàn)包括試管法和薄層色譜法證明該組份為多糖組份；然后接著用30％，50％，70％，90％乙醇洗脫大孔樹脂，各部分收集到洗脫液無色為止，分別濃縮干燥得組份2，11g，5.5g，0.9g和0.3g，用定性鑒別實(shí)驗(yàn)包括試管法和薄層色譜法證明該組份為黃酮類組份，并且用比色法對(duì)黃酮類組份進(jìn)行的含量測(cè)定表明槲皮素質(zhì)量占黃酮類組份質(zhì)量的30％～50％。另外，將大孔樹脂穿透部分液體再過Amberlite IR 120陽離子交換樹脂，水洗，用0.2mol·L-1，氨水洗脫，收集洗脫液，低溫濃縮，真空干燥得組份3，6.7g，用定性鑒別實(shí)驗(yàn)包括試管法和薄層色譜法該組份為生物堿類組份，并且用HPLC法對(duì)生物堿類組份進(jìn)行的含量測(cè)定表明1-脫氧野尻霉素質(zhì)量占生物堿類組份質(zhì)量的35％～45％。
本發(fā)明實(shí)施例1～3的提取過程原料與技術(shù)參數(shù)，見表1。
本發(fā)明實(shí)施例1～3所提取中藥提取物的各組份的質(zhì)量百分比，見表2。
實(shí)施例2桑葉和桑枝各500g混在一起共1kg，加7倍體積50％甲醇，25℃。共3次，合并濾液，濃縮，離心、去除沉淀，上清液過AB-8大孔樹脂，流速5ml·min-1，用去離子水洗脫至洗脫液中加95％乙醇時(shí)無沉淀為止，將洗脫液濃縮到一定體積后加入95％乙醇，使乙醇終濃度達(dá)到75％，靜止過夜后過濾，沉淀用乙醇和丙酮反復(fù)洗脫至洗脫液無色后，低溫干燥而得組份1，8.4g，用定性鑒別實(shí)驗(yàn)包括試管法和薄層色譜法證明該組份為多糖組份；然后接著用30％，50％，70％，90％乙醇洗脫大孔樹脂，各部分收集到洗脫液無色為止，分別濃縮干燥得組份2，12g，6g，0.92g和0.3g，用定性鑒別實(shí)驗(yàn)包括試管法和薄層色譜法證明該組份為黃酮類組份，并且用比色法對(duì)黃酮類組份進(jìn)行的含量測(cè)定表明槲皮素質(zhì)量占黃酮類組份質(zhì)量的32％～41％。另外，將大孔樹脂穿透部分液體再過732離子交換樹脂，水洗，用0.5mol·L-1，氨水洗脫，收集洗脫液，低溫濃縮，真空干燥得組份3，6.3g，用定性鑒別實(shí)驗(yàn)包括試管法和薄層色譜法該組份為生物堿類組份，并且用HPLC法對(duì)生物堿類組份進(jìn)行的含量測(cè)定表明1-脫氧野尻霉素質(zhì)量占生物堿類組份質(zhì)量的31％～40％。
實(shí)施例3桑枝和桑白皮各500g共1kg，10倍體積去30％乙醇，70℃。共3次，合并濾液，濃縮，離心、去除沉淀，上清液過D101大孔樹脂，流速5ml·min-1，用去離子水洗脫至洗脫液中加95％乙醇時(shí)無沉淀為止，將洗脫液濃縮到一定體積后加入95％乙醇，使乙醇終濃度達(dá)到80％，靜止過夜后過濾，沉淀用乙醇和丙酮反復(fù)洗脫至洗脫液無色后，低溫干燥而得組份1，9.4g，用定性鑒別實(shí)驗(yàn)包括試管法和薄層色譜法證明該組份為多糖組份；然后接著用30％，50％，70％，90％乙醇洗脫大孔樹脂，各部分收集到洗脫液無色為止，分別濃縮干燥得組份2，15g，8g，0.9g和0.2g，用定性鑒別實(shí)驗(yàn)包括試管法和薄層色譜法證明該組份為黃酮類組份，并且用比色法對(duì)黃酮類組份進(jìn)行的含量測(cè)定表明槲皮素質(zhì)量占黃酮類組份質(zhì)量的31％～45％。另外，將大孔樹脂穿透部分液體再過732離子交換樹脂，水洗，用1mol·L-1，氨水洗脫，收集洗脫液，低溫濃縮，真空干燥得組份3，6g，用定性鑒別實(shí)驗(yàn)包括試管法和薄層色譜法該組份為生物堿類組份，并且用HPLC法對(duì)生物堿類組份進(jìn)行的含量測(cè)定表明1-脫氧野尻霉素質(zhì)量占生物堿類組份質(zhì)量的30％～43％。
表1 本發(fā)明的提取過程原料與技術(shù)參數(shù)


表2 本發(fā)明的3種提取過程所獲得的中藥提取組中各組份的質(zhì)量百分比

二、體外糖苷酶抑制實(shí)驗(yàn)實(shí)施例4(1)大鼠大腸黏膜糖苷酶的提取將凍存的大鼠小腸(空腸)解凍，用小鑷子擠壓采取黏膜。往該黏膜中加入5倍量的含有5×10-3mol·L-1乙二胺四乙酸的0.1mol·L-1磷酸鉀緩沖液(pH值7.0)，一邊冷卻一邊勻漿。然后離心分離(4℃，21000r·min-1，60min)，往所得沉淀物中加入含1％TritonX-100的0.1mol·L-1磷酸鉀緩沖液(pH值7.0)至5倍量，進(jìn)行可溶化處理(4℃，60min)，將其進(jìn)行超速離心(110000r·min-1，90min)，將其上清液用0.1mol·L-1磷酸鉀緩沖液(pH值7.0)進(jìn)行透析(4℃，24h)，制得酶液，蛋白含量按Lowry法測(cè)定，所得到的酶提取液保存在-70℃。
(2)檢測(cè)本檢測(cè)在96孔板上進(jìn)行，設(shè)3個(gè)組每組4個(gè)復(fù)孔，分別為a.對(duì)照組(緩沖液+底物+酶液)；b.空白對(duì)照組(緩沖液)；c.樣品測(cè)定組(樣品+底物+酶液)。操作方法為預(yù)先往板孔里加入80μL樣品溶液(用0.1mol·L-1pH7.0磷酸緩沖液分別稀釋成6個(gè)濃度梯度(20-1000μg.mL-1))，然后加入40μL 20×10-3mol·L-1底物(PNPG)，37℃保溫5min，加入酶溶液40μL，37℃保溫15min，加入160μL 0.2mol·L-1Na2CO3終止酶反應(yīng)。最后在酶標(biāo)儀上405nm處測(cè)定吸光度值，按下列方法計(jì)算抑制率，抑制率(％)＝[(a-b)-(c-b)/(a-b)]×100％，并計(jì)算相應(yīng)的IC50。結(jié)果見表3。
表3 中藥提取組份對(duì)糖苷酶抑制活性

表3中，體外糖苷酶抑制活性檢測(cè)結(jié)果表明，各組分的濃度為20~1000μg·mL-1時(shí)糖苷酶活性抑制率為32％~95％，抑制率最高的是生物堿類，然后是黃酮類，和多糖類。
三、正常小鼠糖耐量試驗(yàn)實(shí)施例5ICR小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)2-3天，空腹20小時(shí)。小鼠隨機(jī)分為模型組、拜唐蘋組、中藥樣品組(包括生物堿組、黃酮組和多糖組)。模型組灌胃0.5mL可溶性淀粉(用生理鹽水按2.5g·kg-1體重劑量配制)和0.5mL生理鹽水；拜唐平組灌胃0.5mL可溶性淀粉和0.5mL拜唐平溶液(用生理鹽水按10mg·kg-1體重劑量臨用前配制)。中藥組灌胃0.5mL可溶性淀粉和0.5mL樣品溶液(用生理鹽水按150mg·kg-1體重劑量臨用前配制)。各組動(dòng)物給淀粉后0min，30min，60min，90min，120min眼眶靜脈叢取血，測(cè)定各時(shí)間點(diǎn)的血糖值并計(jì)算血糖峰值相對(duì)抑制率。以血清中總的葡萄糖增值(TIG)表示總的血清葡萄糖的變化(以0時(shí)刻作為基線校正)，血糖峰值相對(duì)抑制率(％)＝(對(duì)照組TIG-給藥組TIG)/對(duì)照組TIG×100％。
各提取組份對(duì)正常小鼠糖耐量的影響及血糖峰值相對(duì)抑制率見圖2，正常小鼠糖耐量試驗(yàn)表明各組分均有顯著抑制正常小鼠灌喂淀粉后2h內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)血糖的升高(P＜0.01或P＜0.05)，其中給淀粉30min時(shí)抑制效果最明顯(P＜0.05)。血糖峰值相對(duì)抑制率以拜糖蘋最高，其次生物堿，黃酮和多糖。
四、STZ誘導(dǎo)的小鼠糖耐量試驗(yàn)實(shí)施例6ICR小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)2-3天，空腹20小時(shí)。腹腔注射STZ 200mg·kg-1(在4℃條件下用pH值4.5的檸檬酸緩沖液臨用前配置)，3天后，取血測(cè)定血糖＞11mmol·L-1者入選實(shí)驗(yàn)。注射STZ一周后可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分組與實(shí)驗(yàn)方法同上。
結(jié)果見圖3，在STZ誘導(dǎo)的糖尿病小鼠糖耐量試驗(yàn)表明，糖尿病小鼠給淀粉后2h內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)的血糖值變化中對(duì)其中給淀粉30min后的血糖升高有明顯抑制效果(P＜0.01或P＜0.05)，其余時(shí)間段除了拜唐蘋外無明顯影響(P＜0.01)，血糖峰值相對(duì)抑制率以拜糖蘋最高，其次生物堿，黃酮和多糖。
權(quán)利要求
1.一種具有降血糖作用的中藥提取物，是由桑科植物桑葉、桑枝、桑白皮任一或其組合中分離得到的多糖類、黃酮類和生物堿類組份組成，其特征在于，所分離得到的組份中各組份按照質(zhì)量百分比，多糖類組份含量為24-27％；黃酮類組份含量為53-61％；生物堿類組份含量為15-20％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥提取物，其特征在于所述的黃酮類組份中槲皮素質(zhì)量百分比為30～50％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥提取物，其特征在于所述的生物堿類組份中多羥基生物堿1-脫氧野尻霉素(DNJ)質(zhì)量百分比為30～45％。
4.權(quán)利要求書1所述的中藥提取物主要組份的制備方法，其特征在于，包括以下步驟(1)將?？浦参锷Ｈ~、桑枝、桑白皮任一或其組合粉碎后，加入5-10倍體積的水，醇或含水醇溶劑，在25-100℃提取2-3次，每次不少于20分鐘，得提取液，將提取液過濾渣質(zhì)得濾液1，再去除沉淀，得濾液2，將濾液2過大孔樹脂，用去離子水洗脫，將洗脫液濃縮后醇沉，沉淀物經(jīng)脫色后干燥得組份1，即，多糖類組份；(2)再用不同濃度的醇洗脫大孔樹脂，各部分收集到洗脫液無色為止，分別濃縮干燥后得組份2，即，黃酮類組份；(3)將大孔樹脂穿透部分液體再過離子交換樹脂，水洗，用0.2-1N氨水洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥而得組份3，即，生物堿類組份。
5.根據(jù)權(quán)利要求書4所述的中藥提取物主要組份的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述作為提取溶劑的醇可以是甲醇、乙醇、異丙醇。
6.根據(jù)權(quán)利要求書4所述的中藥提取物主要組份的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述的去除沉淀過程采用了絮凝工藝，即，把濾液1濃縮到原體積的1/10時(shí)加入甲殼素或澄清劑，在70-80℃保溫5-6小時(shí)后，離心去沉淀。
7.根據(jù)權(quán)利要求書4所述的中藥提取物主要組份的制備方法，其特征在于，所述的醇沉工藝為洗脫液濃縮到1/5～1/2小體積后加入甲醇或乙醇至總濃度達(dá)到按照體積比70-80％，4℃放置過夜，離心而得到沉淀物。
8.根據(jù)權(quán)利要求書7所述的中藥提取物主要組份的制備方法，其特征在于，所述的醇沉工藝中加入甲醇或乙醇至總濃度達(dá)到按照體積比為70％。
9.根據(jù)權(quán)利要求書4所述的中藥提取物主要組份的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述的脫色劑為乙醇和丙酮。
10.根據(jù)權(quán)利要求書4所述的中藥提取物主要組份的制備方法，其特征在于，所述的大孔樹脂可選自AB-8型，D101型，Amberlite 252或Diaion HP-20。
11.根據(jù)權(quán)利要求書4所述的中藥提取物主要組份的制備方法，其特征在于，所述的離子交換樹脂可采用苯乙烯樹脂，選自001×1.1型，001×4型，001×7型，Amberlite IR 120，Dowex 50或Diaion SK-IA。
12.根據(jù)權(quán)利要求書4所述的中藥提取物主要組份的制備方法，其特征在于，步驟(2)所述的大孔樹脂洗脫液為甲醇或乙醇的一種，濃度為30-95％。
13.根據(jù)權(quán)利要求書5所述的中藥提取物主要組份的制備方法，其特征在于，所述的氨水濃度為0.5N。
14.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一所述的中藥提取物在制備α-糖苷酶抑制劑方面的應(yīng)用。
15.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一所述的中藥提取物在制備治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種具有降血糖作用的中藥提取物，是由?？浦参锷Ｈ~、桑枝、桑白皮任一或其組合中分離得到的多糖類、黃酮類和生物堿類組份組成，所分離得到的組份中各組份按照質(zhì)量百分比，多糖類組份含量為24－27％；黃酮類組份含量為53－ 61％；生物堿類組份含量為15－20％。本發(fā)明還公開了從桑科植物桑葉、桑枝、桑白皮中提取多種具有降血糖作用的組份黃酮類、多糖類和生物堿類的方法，此方法為粉碎原材料，用水、醇或含水的醇類溶劑進(jìn)行提取，去雜，通過大孔樹脂和離子交換樹脂連續(xù)吸附，用水，不同濃度醇，氨水洗脫，濃縮低溫干燥而得到的。這些提取物可用于制備治療糖尿病和其并發(fā)癥的藥物。
文檔編號(hào)A61P3/00GK1742803SQ200510028709
公開日2006年3月8日 申請(qǐng)日期2005年8月11日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月11日
發(fā)明者原愛紅, 黃哲 申請(qǐng)人:原愛紅, 黃哲