本發(fā)明涉及防腐劑制備方法，特別涉及一種荷葉天然防腐劑的制備方法。

背景技術(shù)：

食品在加工、保藏、儲(chǔ)運(yùn)過(guò)程中易受微生物侵染造成腐敗，延長(zhǎng)食品包藏期限最為方便和經(jīng)濟(jì)的技術(shù)是添加食品防腐劑。過(guò)去人們大都使用合成防腐劑如苯甲酸、山梨酸及其鹽類(lèi)等，經(jīng)長(zhǎng)期研究發(fā)現(xiàn)，這類(lèi)化學(xué)合成防腐劑的過(guò)量使用會(huì)有致癌性、致畸性和易引起食物中毒等危害，還可能對(duì)人體造成積累性慢性傷害。天然防腐劑因其抗菌譜廣、安全無(wú)毒、性能穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，成為近年來(lái)研究和開(kāi)發(fā)利用食品工業(yè)的一個(gè)熱點(diǎn)。荷葉中含有的蓮堿、荷葉堿、原荷葉堿等多種生物堿，具有較強(qiáng)抑菌效果。此外，荷葉中的有機(jī)酸、黃酮、揮發(fā)油等成分也具有一定抑菌作用。此外，荷葉來(lái)源廣泛，材料易得，因此荷葉作為天然防腐劑原料在食品保藏中具有廣闊的應(yīng)用前景。

cn103099294a公開(kāi)了用乙醇作為浸提液的荷葉天然防腐劑的制備方法，用乙醇作為浸提液制備工藝繁瑣，生產(chǎn)成本增加。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明目的：提供一種綠色環(huán)保、工藝簡(jiǎn)單，提取率高的荷葉天然防腐劑的制備方法。

技術(shù)方案：本發(fā)明所述一種荷葉天然防腐劑的制備方法，包含以下步驟：(1)以荷葉為原料，加水煎煮，過(guò)濾得濾液；(2)將濾液減壓濃縮，加入絮凝澄清劑，靜置后分離，得荷葉提取液，主要活性成分為荷葉生物堿和黃酮化合物。

其中，本發(fā)明采用水作為溶劑提取荷葉內(nèi)抗菌成分，避免了有機(jī)溶劑的使用。避免用乙醇作為溶劑可以無(wú)需回收乙醇，減少工藝步驟，且后續(xù)步驟采用在濾液中直接加入絮凝澄清劑，提取液澄清度高、穩(wěn)定性好、有效成分的收率高、工藝簡(jiǎn)單、生產(chǎn)周期短、成本低、產(chǎn)生的沉淀易于過(guò)濾。

所述荷葉進(jìn)行如下處理：洗凈、烘干和粉碎。天然防腐劑的提取過(guò)程中，需要減少不必要的雜質(zhì)的引入，故該步驟可以去除荷葉本身帶來(lái)的雜質(zhì)。

所述加水煎煮為荷葉與水固液質(zhì)量比為1:15-20。荷葉與水的比例影響了荷葉提取液中有效成分提取量，但是水溶液過(guò)多，則會(huì)增加減壓濃縮時(shí)間和生產(chǎn)成本，水的含量過(guò)少，則提取效率不高，增加原材料荷葉的使用量，綜合考慮提取效率與后續(xù)步驟的成本，選用以上固液比例，達(dá)到最優(yōu)的條件，再增加水量，對(duì)荷葉生物堿的提取效果無(wú)顯著影響，本發(fā)明所述荷葉提取液中生物堿的含量不低于0.6％。

所述加水煎煮為煮沸時(shí)間為30-60min。在此時(shí)間段內(nèi)，可最大效率的提取荷葉內(nèi)活性成分，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，生產(chǎn)成本增加，對(duì)提取的有效成分濃度無(wú)顯著影響時(shí)間過(guò)短，則有效成分提取不充分。

所述減壓濃縮為濃縮至與原溶液的體積質(zhì)量比為1:1-10g/ml。減壓濃縮的溫度為50-80℃，增加減壓溫度則可以減少濃縮時(shí)間，提高生產(chǎn)效率，但是溫度過(guò)高，則會(huì)造成活性成分在制備過(guò)程中的損失。

其中，絮凝澄清劑加入量無(wú)限制，最優(yōu)的比例為占溶液的質(zhì)量百分比為0.01-0.2％。

所述絮凝澄清劑選自甲殼素、殼聚糖、ztc1+1-ii型天然澄清劑、ztc1+1-iii型天然澄清劑、ztc1+1-iv型天然澄清劑、ztc植提澄清劑中的一種或多種。絮凝澄清劑去除了荷葉提取液中淀粉、多糖等易被微生物利用的物質(zhì)，可顯著提高荷葉提取液的穩(wěn)定性和殺菌效果。

其中，荷葉提取液可以進(jìn)一步減壓縮，提高活性成分的濃度，使用、貯存方便。

本發(fā)明所述荷葉提取液可用于食品防腐保鮮，對(duì)常見(jiàn)革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性菌及酵母菌有很強(qiáng)的抑制作用，可將荷葉提取物應(yīng)用于各種食品的保鮮，達(dá)到了與化學(xué)防腐劑同樣的效果，可作為化學(xué)防腐劑的替代品。

如無(wú)特別說(shuō)明，本發(fā)明所述％為質(zhì)量百分比。

有益效果：本發(fā)明制備的荷葉提取液工藝簡(jiǎn)單，制備過(guò)程中無(wú)有機(jī)溶劑引入，生產(chǎn)成本低，提取效率高，適于工業(yè)生產(chǎn)。

附圖說(shuō)明

圖1為荷葉提取液與同等質(zhì)量濃度的苯甲酸鈉抑菌效果對(duì)比。

具體實(shí)施方式

一、材料來(lái)源

荷葉來(lái)源：選取新鮮荷葉，洗凈、烘干、粉碎備用。ztc1+1-iii型天然澄清劑、ztc1+1-iv型天然澄清劑、ztc1+1-ii型天然澄清劑、ztc植提澄清劑，購(gòu)自北京正天成澄清技術(shù)有限公司。其他材料均市售所得。

二、樣品制備

實(shí)施例1：稱取粉碎后荷葉干粉100g，加水1.5l，煎煮40min，過(guò)濾取濾液，60℃下減壓濃縮至500ml，加入絮凝澄清劑甲殼素，在濃縮液中的質(zhì)量濃度為0.01％，靜置后離心去除沉淀，將絮凝后提取液進(jìn)一步減壓縮，濃縮至100ml既得荷葉提取液。

將制備的荷葉提取液與苯甲酸鈉在同等質(zhì)量濃度0.05％條件下，添加到同量的蘋(píng)果汁中，37℃下放置，于3，6，9，12，15d測(cè)定菌落總數(shù)，以鮮榨蘋(píng)果汁第0天菌落總數(shù)為初始值，結(jié)果見(jiàn)圖1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著時(shí)間推進(jìn)，加入荷葉提取液和苯甲酸鈉的蘋(píng)果汁中的菌落總數(shù)遠(yuǎn)低于蘋(píng)果汁原液，菌落總數(shù)呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)。在同等質(zhì)量濃度下，荷葉提取液的抑菌效果與苯甲酸鈉相近。

實(shí)施例2：稱取粉碎后荷葉干粉100g，加水1.8l，煎煮30min，過(guò)濾取濾液，50℃下減壓濃縮至1.8l，加入絮凝澄清劑甲殼素，在濃縮液中的質(zhì)量濃度為0.06％，靜置后離心去除沉淀，將絮凝后提取液進(jìn)一步減壓縮，濃縮至100ml既得荷葉提取液。實(shí)施例2制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例3：稱取粉碎后荷葉干粉100g，加水2l，煎煮60min，過(guò)濾取濾液，80℃下減壓濃縮至400ml，加入絮凝澄清劑甲殼素，在濃縮液中的質(zhì)量濃度為0.2％，靜置后離心去除沉淀，將絮凝后提取液進(jìn)一步減壓縮，濃縮至100ml既得荷葉提取液。實(shí)施例3制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例4：稱取粉碎后荷葉干粉100g，加水1.5l，煎煮30min，過(guò)濾取濾液，80℃下減壓濃縮至150ml，加入絮凝澄清劑甲殼素，在濃縮液中的質(zhì)量濃度為0.1％，靜置后離心去除沉淀，將絮凝后提取液進(jìn)一步減壓縮，濃縮至100ml既得荷葉提取液。實(shí)施例4制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例5：稱取粉碎后荷葉干粉100g，加水2l，煎煮30min，過(guò)濾取濾液，50℃下減壓濃縮至200ml，加入絮凝澄清劑甲殼素，在濃縮液中的質(zhì)量濃度為0.15％，靜置后離心去除沉淀，將絮凝后提取液進(jìn)一步減壓縮，濃縮至100ml既得荷葉提取液。實(shí)施例5制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例6：稱取粉碎后荷葉干粉100g，加水1.8l，煎煮50min，過(guò)濾取濾液，60℃下減壓濃縮至600ml，加入絮凝澄清劑甲殼素，在濃縮液中的質(zhì)量濃度為0.05％，靜置后離心去除沉淀，將絮凝后提取液進(jìn)一步減壓縮，濃縮至100ml既得荷葉提取液。實(shí)施例6制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例7：絮凝澄清劑為殼聚糖，其余同實(shí)施例1。實(shí)施例7制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例8：絮凝澄清劑為殼聚糖，其余同實(shí)施例2。實(shí)施例8制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例9：絮凝澄清劑為殼聚糖，其余同實(shí)施例3。實(shí)施例9制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例10：絮凝澄清劑為殼聚糖，其余同實(shí)施例4。實(shí)施例10制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例11：絮凝澄清劑為殼聚糖，其余同實(shí)施例5。實(shí)施例11制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例12：絮凝澄清劑為殼聚糖，其余同實(shí)施例6。實(shí)施例12制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例13：絮凝澄清劑為ztc1+1-ii型天然澄清劑，其余同實(shí)施例1。實(shí)施例13制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例14：絮凝澄清劑為ztc1+1-ii型天然澄清劑，其余同實(shí)施例2。實(shí)施例14制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例15：絮凝澄清劑為ztc1+1-ii型天然澄清劑，其余同實(shí)施例3。實(shí)施例15制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例16：絮凝澄清劑為ztc1+1-ii型天然澄清劑，其余同實(shí)施例4。實(shí)施例16制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例17：絮凝澄清劑為ztc1+1-ii型天然澄清劑，其余同實(shí)施例5。實(shí)施例17制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例18：絮凝澄清劑為ztc1+1-ii型天然澄清劑，其余同實(shí)施例6。實(shí)施例18制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例19：絮凝澄清劑為ztc1+1-iii型天然澄清劑，其余同實(shí)施例1。實(shí)施例19制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例20：絮凝澄清劑為ztc1+1-iii型天然澄清劑，其余同實(shí)施例2。實(shí)施例20制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例21：絮凝澄清劑為ztc1+1-iii型天然澄清劑，其余同實(shí)施例3。實(shí)施例21制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例22：絮凝澄清劑為ztc1+1-iii型天然澄清劑，其余同實(shí)施例4。實(shí)施例22制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例23：絮凝澄清劑為ztc1+1-iii型天然澄清劑，其余同實(shí)施例5。實(shí)施例23制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例24：絮凝澄清劑為ztc1+1-iii型天然澄清劑，其余同實(shí)施例6。實(shí)施例24制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例25：絮凝澄清劑為ztc1+1-iv型天然澄清劑，其余同實(shí)施例1。實(shí)施例25制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例26：絮凝澄清劑為ztc1+1-iv型天然澄清劑，其余同實(shí)施例2。實(shí)施例26制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例27：絮凝澄清劑為ztc1+1-iv型天然澄清劑，其余同實(shí)施例3。實(shí)施例27制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例28：絮凝澄清劑為ztc1+1-iv型天然澄清劑，其余同實(shí)施例4。實(shí)施例28制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例29：絮凝澄清劑為ztc1+1-iv型天然澄清劑，其余同實(shí)施例5。實(shí)施例29制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例30：絮凝澄清劑為ztc1+1-iv型天然澄清劑，其余同實(shí)施例6。實(shí)施例30制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例31：絮凝澄清劑為ztc植提澄清劑，其余同實(shí)施例1。實(shí)施例31制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例32：絮凝澄清劑為ztc植提澄清劑，其余同實(shí)施例2。實(shí)施例32制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例33：絮凝澄清劑為ztc植提澄清劑，其余同實(shí)施例3。實(shí)施例33制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例34：絮凝澄清劑為ztc植提澄清劑，其余同實(shí)施例4。實(shí)施例34制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例35：絮凝澄清劑為ztc植提澄清劑，其余同實(shí)施例5。實(shí)施例35制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

實(shí)施例36：絮凝澄清劑為ztc植提澄清劑，其余同實(shí)施例6。實(shí)施例36制備的荷葉提取液性能同實(shí)施例1。

三、檢測(cè)結(jié)果

1、荷葉提取液絮凝前后抗菌活性比較

測(cè)試了制備的樣品對(duì)4種常見(jiàn)的食品腐敗菌及釀酒酵母的抑菌活性，以最低殺菌濃度(mbc)為評(píng)價(jià)指標(biāo)，通過(guò)二倍稀釋法測(cè)定絮凝前后，荷葉提取液對(duì)五種供試菌種的抑制作用，表1為絮凝前荷葉提取液最低殺菌濃度結(jié)果，表2為絮凝后荷葉提取液最低殺菌濃度結(jié)果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，絮凝前后的荷葉提取液的最低殺菌濃度不變，仍在0.031-0.25g/ml之間，但在0.0625g/ml相同濃度下，絮凝前大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌生長(zhǎng)更茂盛，說(shuō)明絮凝后的荷葉提取液的抑菌活性提高。

表1絮凝前荷葉提取液最低殺菌濃度(mbc)結(jié)果

注：+表示長(zhǎng)菌，++表示細(xì)菌生長(zhǎng)茂盛，-表示抑菌。

表2絮凝后荷葉提取液最低殺菌濃度(mbc)結(jié)果

注：+表示長(zhǎng)菌，++表示細(xì)菌生長(zhǎng)茂盛，-表示抑菌。