本發(fā)明屬于功能食品
技術(shù)領(lǐng)域：
。更具體地，涉及一種具有抗氧化作用的海參固體飲料及其制備方法。
背景技術(shù)：
：人體細(xì)胞在正常的新陳代謝過程中會產(chǎn)生活性氧簇產(chǎn)物(ros)，這類產(chǎn)物包括超氧離子、羥基自由基、過氧化氫。其中一些產(chǎn)物，如超氧離子和羥基自由基，屬于不穩(wěn)定的產(chǎn)物，而過氧化氫則相對穩(wěn)定且容易擴(kuò)散。人體中同時還存在抗氧化系統(tǒng)，包括超氧化物歧化酶(sod)、過氧化氫酶和谷胱甘肽酶等。除此之外，人體還含有一些具有抗氧化作用的小分子產(chǎn)物，如谷胱甘肽等。正常情況下，人體中的抗氧化系統(tǒng)和氧化系統(tǒng)處于平衡的狀態(tài)，細(xì)胞新陳代謝中產(chǎn)生的氧化產(chǎn)物不會對細(xì)胞造成傷害。一旦氧化產(chǎn)物堆積過多，打破了抗氧化系統(tǒng)和氧化系統(tǒng)的平衡狀態(tài)(即產(chǎn)生了氧化應(yīng)激)，則會影響人體細(xì)胞正常的生理活動，如細(xì)胞傳導(dǎo)、基因表達(dá)、細(xì)胞凋亡等，最后導(dǎo)致疾病和衰老的產(chǎn)生。venussosaa等人指出神經(jīng)退行性疾病(如老年癡呆、帕金森疾病)、糖尿病、心血管疾病、免疫系統(tǒng)疾病、衰老和癌癥的產(chǎn)生都與氧化應(yīng)激有著密切的聯(lián)系。海參是以海底藻類和浮游生物為食的棘皮類動物，在中國主要分布在南海、黃海及渤海等海域，具有高蛋白、低脂肪的特點(diǎn)，自古以來被人們視作一種營養(yǎng)滋補(bǔ)品。海參的可食部位主要是體壁，其消化道等內(nèi)臟(含有豐富的海洋活性物質(zhì))通常被作為廢棄物丟掉，造成了極大的浪費(fèi)。海參的主要營養(yǎng)成分包括多糖、皂苷、腦苷脂、神經(jīng)節(jié)脂、蛋白質(zhì)等，大量研究表明海參具有抗氧化活性。如王靜等人利用海參的自溶得到能夠清除活性氧簇的抗氧化肽；李學(xué)鵬等人研究表明海參的酶解液具有良好的抗氧化作用；楊濤等人利用堿性蛋白酶對海參內(nèi)臟進(jìn)行酶解，得到具有良好作用的抗氧化活性肽。中國專利201210534393.5中公開了一種以海參為原料，枸杞、香菇為輔料制備的具有增強(qiáng)免疫力、增強(qiáng)人體抗病能力的泡騰片。一方面原料較多，還加有香精，另一方面，其制備工藝會造成抗氧化活性和營養(yǎng)成分的損失。另外，目前海參被捕撈上岸后，主要的處理方式有烘干、熏干、日光照射。通常，漁民在捕撈海參后采用自然日光照射的方式對海參進(jìn)行干燥，然而這種方法很難保證海參的清潔衛(wèi)生狀況。烘干、熏干不能保證海參的營養(yǎng)成分、口感、顏色等。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有海參利用技術(shù)的缺陷和不足，提供一種具有抗氧化功效的海參固體飲料的制備方法，不僅能更好的利用海參的營養(yǎng)價值，還能利用藍(lán)莓與其復(fù)配實(shí)現(xiàn)協(xié)同增效的作用，增強(qiáng)其抗氧化活性以及口感等。本發(fā)明的目的是提供一種具有抗氧化作用的海參固體飲料及其制備方法。本發(fā)明另一目的是提供該方法制備得到的具有抗氧化作用的海參固體飲料。本發(fā)明上述目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種具有抗氧化作用的海參固體飲料的制備方法，將海參加工成粉末，加入蒸餾水和堿性蛋白酶進(jìn)行第一次酶解；然后加入藍(lán)莓勻漿液和胃蛋白酶進(jìn)行第二次酶解，除雜后濃縮、冷凍干燥，即得到海參固體飲料粉末。優(yōu)選地，海參和藍(lán)莓的重量比為10～30：100。更優(yōu)選地，海參和藍(lán)莓的重量比為20：100。具體地，所述具有抗氧化作用的海參固體飲料的制備方法，包括如下步驟：s1.海參原料制備：迅速用清水將新鮮捕撈的海參洗凈，冷凍干燥；s2.第一次酶解：將凍干的海參粉碎至粉末狀得海參粉末，加入蒸餾水混勻，調(diào)節(jié)ph至8～10，加入堿性蛋白酶進(jìn)行第一次酶解，然后95℃滅酶20min，冷卻至室溫，得到第一酶解液；s3.藍(lán)莓原料準(zhǔn)備：將新鮮的藍(lán)莓清洗干凈，勻漿得到藍(lán)莓勻漿液；s4.第二次酶解：將藍(lán)莓勻漿液加入到步驟s1的第一酶解液中，調(diào)節(jié)ph至1～5，加入胃蛋白酶進(jìn)行第二次酶解，然后95℃滅酶20min，得到第二酶解液；s5.去除雜質(zhì)：將步驟s4的第二酶解液離心去除不溶固體雜質(zhì)，取上清液；s6.濃縮及干燥：對步驟s5的上清液濃縮，濃縮液冷凍，待濃縮液凝結(jié)后進(jìn)行干燥，得到的干燥粉末即是海參固體飲料。其中，優(yōu)選地，步驟s1所述冷凍干燥是置于冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行冷凍干燥。優(yōu)選地，步驟s2中海參粉末和蒸餾水的料液比為1：3～1：6w/v。優(yōu)選地，步驟s2中堿性蛋白酶的用量為：海參量的3～7％。優(yōu)選地，步驟s2所述第一次酶解的酶解溫度為40～60℃。優(yōu)選地，步驟s2所述第一次酶解的酶解時間2～6小時。優(yōu)選地，步驟s3中藍(lán)莓占海參重量的10～30％。更優(yōu)選地，步驟s3中藍(lán)莓占海參重量的20％。優(yōu)選地，步驟s4中胃蛋白酶的用量為：海參量的3～7％。優(yōu)選地，步驟s4所述第二次酶解的酶解溫度30～60℃。優(yōu)選地，步驟s4所述第二次酶解的酶解時間2～6小時。優(yōu)選地，步驟s5所述離心的條件為4000～6000r/min。更優(yōu)選地，步驟s5所述離心的條件為5000r/min。優(yōu)選地，步驟s6所述冷藏是-80℃條件下冷藏。另外，上述方法制備得到的具有抗氧化作用的海參固體飲料，也在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。藍(lán)莓是世界糧農(nóng)組織推薦的世界五大健康水果之一，含有豐富的花青素、多酚化合物以及維生素c等，食用藍(lán)莓能顯著提高血清的抗氧化能力，降低許多慢性疾病的風(fēng)險。本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，在海參的制備工藝過程中，適當(dāng)?shù)募尤胨{(lán)莓進(jìn)行復(fù)配，能夠起到顯著的協(xié)同增效作用，不僅可以增強(qiáng)海參固體飲料的抗氧化活性，還能改善海參固體飲料的口感風(fēng)味。本發(fā)明具有以下有益效果：本發(fā)明采用的冷凍干燥技術(shù)對捕撈后的新鮮海參進(jìn)行冷凍干燥，而不是常用的日光照射干燥或烘干熏干手段，極大限度的保留了海參的營養(yǎng)成分，且衛(wèi)生條件能夠得到保證。本發(fā)明利用堿性蛋白酶和胃蛋白酶對海參粉末進(jìn)行酶解，不僅可以得到具有抗氧化作用的海參活肽，使海參的營養(yǎng)價值充分的釋放，還能充分的利用海參的內(nèi)臟等部分，不會造成浪費(fèi)。另外，本發(fā)明將藍(lán)莓提取物制備和海參的第二步酶解結(jié)合起來，優(yōu)化了工藝。藍(lán)莓提取物含有的多酚化合物、蝦青素以及維生素c都具有良好的抗氧化活性，該工藝的改進(jìn)不僅可以增強(qiáng)海參固體飲料的抗氧化活性，還能改善海參固體飲料的口感風(fēng)味。具體實(shí)施方式以下結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明，但實(shí)施例并不對本發(fā)明做任何形式的限定。除非特別說明，本發(fā)明采用的試劑、方法和設(shè)備為本
技術(shù)領(lǐng)域：
常規(guī)試劑、方法和設(shè)備。除非特別說明，以下實(shí)施例所用試劑和材料均為市購。實(shí)施例1制備海參固體飲料1、海參原料制備：迅速用清水將新鮮捕撈的南海海參洗凈，置于冷凍干燥機(jī)中，冷凍干燥，凍干后得到海參原料。2、第一次酶解：將凍干的海參粉碎至粉末狀，按料液比1：3w/v加入蒸餾水，混勻，調(diào)節(jié)溫度至40℃，調(diào)節(jié)ph至8，加入堿性蛋白酶進(jìn)行第一步酶解，酶解時間2小時；然后調(diào)節(jié)溫度至95℃滅酶，滅酶時間20min，冷卻到室溫，得到第一酶解液。3、藍(lán)莓原料準(zhǔn)備：將新鮮的藍(lán)莓(約占海參重量的20％)清洗干凈，勻漿，得到藍(lán)莓勻漿液。4、第二次酶解：將藍(lán)莓勻漿液加入到步驟(1)得到的第一酶解液中，調(diào)節(jié)ph至1，加入胃蛋白酶，調(diào)節(jié)溫度至30℃，酶解時間2小時；然后調(diào)節(jié)溫度至95℃滅酶，滅酶時間20min，得到第二酶解液。5、去除雜質(zhì)：將步驟(4)得到的第二酶解液在5000r/min的條件下離心，去除不溶固體雜質(zhì)，取上清液待用。6、濃縮及干燥：利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀對步驟(5)的上清液進(jìn)行濃縮，濃縮液體于-80℃條件下冷藏，待濃縮液凝結(jié)后放入冷凍干燥機(jī)進(jìn)行干燥，得到的干燥粉末即是海參固體飲料。實(shí)施例2制備海參固體飲料1、海參原料制備：迅速用清水將新鮮捕撈的遼寧海參洗凈，置于冷凍干燥機(jī)中，冷凍干燥，凍干后得到海參原料。2、第一次酶解：將凍干的海參粉碎至粉末狀，按料液比為1：6w/v加入蒸餾水，混勻，調(diào)節(jié)溫度至60℃，調(diào)節(jié)ph至10，加入堿性蛋白酶進(jìn)行第一步酶解，酶解時間6小時；然后調(diào)節(jié)溫度至95℃滅酶，滅酶時間20min，冷卻到室溫，得到第一酶解液。3、藍(lán)莓原料準(zhǔn)備：將新鮮的藍(lán)莓(約占海參重量的20％)清洗干凈，勻漿，藍(lán)莓勻漿液。4、第二次酶解：將藍(lán)莓勻漿液加入到步驟(1)得到的第一酶解液中，調(diào)節(jié)ph至5，加入胃蛋白酶，調(diào)節(jié)溫度至60℃，酶解時間6小時；然后調(diào)節(jié)溫度至95℃滅酶，滅酶時間20min，得到第二酶解液。5、去除雜質(zhì)：將步驟(4)得到的第二酶解液在5000r/min的條件下離心，去除不溶固體雜質(zhì)，取上清液待用。6、濃縮及干燥：利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀對步驟(5)的上清液進(jìn)行濃縮，濃縮液體于-80℃條件下冷藏，待濃縮液凝結(jié)后放入冷凍干燥機(jī)進(jìn)行干燥，得到的干燥粉末即是海參固體飲料。實(shí)施例3制備海參固體飲料1、海參原料制備：迅速用清水將新鮮捕撈的南海海參洗凈，置于冷凍干燥機(jī)中，冷凍干燥，凍干后得到海參原料。2、第一次酶解：將凍干的海參粉碎至粉末狀，按料液比為1：3w/v加入蒸餾水，混勻，調(diào)節(jié)溫度至50℃，調(diào)節(jié)ph至9，加入堿性蛋白酶進(jìn)行第一步酶解，酶解時間4小時；然后調(diào)節(jié)溫度至95℃滅酶，滅酶時間20min，冷卻到室溫，得到第一酶解液。3、藍(lán)莓原料準(zhǔn)備：將新鮮的藍(lán)莓(約占海參重量的20％)清洗干凈，勻漿，藍(lán)莓勻漿液。4、第二次酶解：將藍(lán)莓勻漿液加入到步驟(1)得到的第一酶解液中，調(diào)節(jié)ph至3，加入胃蛋白酶，調(diào)節(jié)溫度至40℃，酶解時間4小時；然后調(diào)節(jié)溫度至95℃滅酶，滅酶時間20min，得到第二酶解液。5、去除雜質(zhì)：將步驟(4)得到的第二酶解液在5000r/min的條件下離心，去除不溶固體雜質(zhì)，取上清液待用。6、濃縮及干燥：利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀對步驟(5)的上清液進(jìn)行濃縮，濃縮液體于-80℃條件下冷藏，待濃縮液凝結(jié)后放入冷凍干燥機(jī)進(jìn)行干燥，得到的干燥粉末即是海參固體飲料。實(shí)施例4制備海參固體飲料1、海參原料制備：迅速用清水將新鮮捕撈的南海海參洗凈，置于冷凍干燥機(jī)中，冷凍干燥，凍干后得到海參原料。2、第一次酶解：將凍干的海參粉碎至粉末狀，按料液比為1：3w/v加入蒸餾水，混勻，調(diào)節(jié)溫度至40℃，調(diào)節(jié)ph至8，加入堿性蛋白酶進(jìn)行第一步酶解，酶解時間2小時；然后調(diào)節(jié)溫度至95℃滅酶，滅酶時間20min，冷卻到室溫，得到第一酶解液。3、藍(lán)莓原料準(zhǔn)備：將新鮮的藍(lán)莓(約占海參重量的20％)清洗干凈，勻漿，藍(lán)莓勻漿液。4、第二次酶解：將藍(lán)莓勻漿液加入到步驟(1)得到的第一酶解液中，調(diào)節(jié)ph至2，加入胃蛋白酶，調(diào)節(jié)溫度至60℃，酶解時間6小時；然后調(diào)節(jié)溫度至95℃滅酶，滅酶時間20min，得到第二酶解液。5、去除雜質(zhì)：將步驟(4)得到的第二酶解液在5000r/min的條件下離心，去除不溶固體雜質(zhì)，取上清液待用。6、濃縮及干燥：利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀對步驟(5)的上清液進(jìn)行濃縮，濃縮液體于-80℃條件下冷藏，待濃縮液凝結(jié)后放入冷凍干燥機(jī)進(jìn)行干燥，得到的干燥粉末即是海參固體飲料。實(shí)施例5海參固體飲料的抗氧化活性測試本實(shí)施例通過動物實(shí)驗測試證明上述實(shí)施例1～4制備的海參固體飲料的抗氧化活性效果。1、實(shí)驗動物：健康合格的昆明小鼠40只(20～22g)，雌雄各半。2、實(shí)驗方法：將40只昆明小鼠隨機(jī)分為4組：第一組不做處理，剩余三組小鼠每日皮下注射d-半乳糖(200mg/kg.bw劑量)，連續(xù)6周。同時，第一組和第二組小鼠每日灌胃生理鹽水(200mg/kg.bw)，第三組小鼠每日灌胃海參酶解提取物，第四組小鼠灌胃本專利方法制備的海參藍(lán)莓復(fù)合提取物，連續(xù)6周。灌胃實(shí)驗后，取血清待測。采用sod、mda試劑盒測量血清的sod酶活力和mda產(chǎn)物的含量。實(shí)驗數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，以p<0.05為差異有顯著意義。3、實(shí)驗結(jié)果如表1所示，與正常組小鼠相比，皮下注射d-半乳糖后小鼠體內(nèi)的sod酶活力顯著下降(p<0.01)，氧化產(chǎn)物mda增加(p<0.05)，表明d-半乳糖誘導(dǎo)了小鼠體內(nèi)產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)；第三組小鼠體內(nèi)sod活力顯著高于第二組小鼠(p<0.01)，mda含量顯著低于第一組和第二組(分別p<0.05，p<0.01)；第四組小鼠體內(nèi)sod活力顯著高于第一組和第二組(分別p<0.05，p<0.01)，mda含量顯著低于第一組和第二組(分別p<0.01，p<0.01)。實(shí)驗結(jié)果表明，d-半乳糖誘導(dǎo)了昆明小鼠產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，體內(nèi)sod酶活力顯著下降，mda含量增加；海參提取物能夠緩解d-半乳糖誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激，具有抗氧化作用，而本專利制備的海參提取物具有更強(qiáng)的抗氧化作用，表明在提取海參活性物質(zhì)的過程中加入藍(lán)莓起到了協(xié)同增效的作用，極大的增強(qiáng)了海參提取物的抗氧化作用。表1海參提取物對小鼠血清sod酶活力和mda含量的影響組別sod活力(u/mg)mda含量(nmol/ml)第一組225.16±16.135.45±1.53第二組156.42±25.65**7.89±4.21**第三組234.21±29.98##5.05±2.45*##第四組269.48±22.85*##4.35±2.89**##注：與第一組相比：*p<0.05；**p<0.01。與第二組相比：#p<0.05；##p<0.05.實(shí)施例6單酶法/雙酶法篩選實(shí)驗以海參蛋白水解度為指標(biāo)確定最佳酶解條件，采用甲醛滴定法測定水解度。1、實(shí)驗方法取冷凍干燥海參粉末100g，料液比1:4，ph值8，溫度50℃，按表2條件分別采用單酶法和雙酶法進(jìn)行酶解；酶解后，分別取這3組酶解產(chǎn)物2ml，利用甲醛滴定法測定水解度。2、實(shí)驗結(jié)果實(shí)驗結(jié)果表明單獨(dú)采用堿性蛋白酶的水解度為26.91％，單獨(dú)采用胃蛋白酶酶解的水解度為23.52％，采用雙酶法酶解的水解度為46.19％?？梢钥闯?，雙酶法的酶解效率要顯著高于單酶法方法，因此本專利采用雙酶法進(jìn)行酶解。表2酶解條件當(dāng)前第1頁12