本發(fā)明涉及肉及肉制品的保鮮領(lǐng)域。更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及一種用于肉品保鮮的抗菌劑。

背景技術(shù)：

肉及肉制品蛋白質(zhì)和脂肪含量豐富，水活度較高，在加工、運(yùn)輸和貯存過(guò)程中易受到微生物的侵染而腐敗變質(zhì)。為延長(zhǎng)肉品的貨架期，利用防腐抗菌劑抑制或殺滅腐敗微生物是有效的方法之一。隨著肉類食品安全問(wèn)題的突出和人們對(duì)健康的重視，生物防腐抗菌劑越來(lái)越受到企業(yè)和消費(fèi)者的青睞。但是生物抗菌劑的抑菌范圍相對(duì)較窄，常不能單一地使用，需要與其它抗菌劑聯(lián)合使用。如nisin乳酸鏈球菌素是目前應(yīng)用最廣泛的抗菌劑，但是它有效抑菌濃度較高且僅在低ph時(shí)有效，鑒于其在應(yīng)用上的局限性，開(kāi)發(fā)新的生物抗菌劑或者增效劑具有較強(qiáng)的應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的一個(gè)目的是解決至少上述問(wèn)題，并提供至少后面將說(shuō)明的優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明基于意想不到的發(fā)現(xiàn)，即卷曲乳桿菌s層蛋白slpb與乳酸鏈球菌素nisin協(xié)同作用時(shí)，能夠殺死腐生葡萄球菌。

本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種用于肉品保鮮的抗菌劑，其能夠利用卷曲乳桿菌k313的s層蛋白slpb與乳酸鏈球菌素nisin協(xié)同作用，增強(qiáng)對(duì)肉品中常見(jiàn)腐敗菌腐生葡萄球菌的抑制作用，用于肉品保鮮，延長(zhǎng)貨架期。

為了實(shí)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的這些目的和其它優(yōu)點(diǎn)，提供了一種用于肉品保鮮的抗菌劑，包括：一種用于肉品保鮮的抗菌劑，其包括：卷曲乳桿菌(lactobacilluscrispatus)k313的s層蛋白slpb和乳酸鏈球菌素nisin。s層(surfacelayer)是存在于細(xì)菌及古細(xì)菌細(xì)胞外由蛋白或糖蛋白亞單位組成的單分子層晶格狀結(jié)構(gòu)。s-層蛋白的功能包括:維持細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、吸附小分子和離子、黏附或免疫調(diào)節(jié)等。我們研究發(fā)現(xiàn)slpb通過(guò)損傷細(xì)胞壁，使nisin易進(jìn)入細(xì)胞膜，起到穿孔作用，從而協(xié)助nisin殺死細(xì)菌。二者協(xié)同作用能顯著抑制s.saprophyticusp2的生長(zhǎng)。

優(yōu)選的是，所述用于肉品保鮮的抗菌劑包括：30-50重量份的卷曲乳桿菌k313的s層蛋白slpb以及100-500重量份的乳酸鏈球菌素。

優(yōu)選的是，所述用于肉品保鮮的抗菌劑包括：40重量份的卷曲乳桿菌k313的s層蛋白slpb以及250-500重量份的乳酸鏈球菌素。研究發(fā)現(xiàn)，按照重量份進(jìn)行如本發(fā)明所述配比后，二者的協(xié)同作用最優(yōu)，殺菌效果最好。

優(yōu)選的是，所述卷曲乳桿菌k313的s層蛋白slpb通過(guò)以下步驟制備：

(1)以卷曲乳桿菌(lactobacilluscrispatus)k313基因組dna為模板，利用如seqidno:2所示的核苷酸序列和如seqidno:3所示的核苷酸序列進(jìn)行pcr擴(kuò)增，得到包含如seqidno:1所示的核苷酸序列的基因片段，之后將該基因片段構(gòu)建到pet-22b表達(dá)載體上得到重組載體pet-slpb；

(2)將構(gòu)建好的重組載體pet-slpb以cacl2法轉(zhuǎn)化到大腸桿菌e.colibl21中，構(gòu)建重組菌株，之后利用該重組菌株進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，然后通過(guò)進(jìn)行蛋白純化，得到所述卷曲乳桿菌k313的s層蛋白slpb，所述slpb的氨基酸序列如seqidno:4所示。利用工程菌株例如大腸桿菌進(jìn)行異源表達(dá)，然后制備所述卷曲乳桿菌k313的s層蛋白slpb。該方法可以提高所述卷曲乳桿菌k313的s層蛋白slpb的制備量，同時(shí)更容易純化。

優(yōu)選的是，所述pcr擴(kuò)增程序依次包括：94℃預(yù)變性4min；94℃變性40s，52℃退火1min，72℃延伸2min，30個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min。

優(yōu)選的是，利用該重組菌株進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，然后通過(guò)進(jìn)行蛋白純化，制得的卷曲乳桿菌k313的s層蛋白slpb的方法包括：

步驟一，挑取重組菌株單菌落于含抗生素的lb培養(yǎng)基中，37℃搖動(dòng)培養(yǎng)過(guò)夜；將過(guò)夜培養(yǎng)物按2％的接種量轉(zhuǎn)接到含抗生素的新鮮lb培養(yǎng)基中，37℃振蕩培養(yǎng)至od600＝0.8；加入終濃度為1.0mm的iptg誘導(dǎo)表達(dá)，18℃繼續(xù)培養(yǎng)4h；

步驟二，5000-10000g離心5min收集誘導(dǎo)表達(dá)的大腸桿菌，用pbs緩沖液洗兩遍，用1/10體積的bindingbuffer緩沖液重懸菌體；將菌體置于冰水混合物中超聲破碎，然后4℃，10000-15000g離心30min，上清液即為大腸桿菌可溶性蛋白成分；

步驟三，純化：用0.22μm濾膜過(guò)濾上清液；用5倍柱體積的水沖洗histrap^tmffcrudecolumns，流速為1ml/min；用5倍柱體積的bindingbuffer緩沖液平衡柱子；將所述上清液用針頭吹打后上樣，以打斷樣品中的dna分子，之后用10倍體積的bindingbuffer緩沖液沖洗柱子；用10倍體積的washingbuffer緩沖液沖洗柱子，洗掉未結(jié)合的蛋白樣品；用5倍體積的elutionbuffer緩沖液洗脫，將純化的蛋白置于磷酸鹽緩沖液中進(jìn)行梯度透析，去除咪唑及鹽離子，制得卷曲乳桿菌k313的s層蛋白slpb。純化的蛋白濃度用bradford蛋白定量試劑盒定量。

優(yōu)選的是，所述超聲破碎時(shí)，超聲強(qiáng)度為25-30％，超聲功率為300-400w，超聲工作時(shí)間5s，停歇時(shí)間5s，處理99次，兩個(gè)循環(huán)。

優(yōu)選的是，所述bindingbuffer緩沖液包含：20mm磷酸鹽緩沖液，500mmnacl以及25mm咪唑，ph7.4；

所述washingbuffer緩沖液包含：20mm磷酸鹽緩沖液，500mmnacl以及50mm咪唑，ph7.4；

所述elutionbuffer緩沖液包含：20mm磷酸鹽緩沖液，500mmnacl以及500mm咪唑，ph7.4。

本發(fā)明至少包括以下有益效果：本發(fā)明所述用于肉品的抗菌劑選用卷曲乳桿菌k313的s層蛋白slpb與nisin兩種組分進(jìn)行混合制備。利用卷曲乳桿菌k313的s層蛋白slpb與nisin的協(xié)同作用，不僅可以抑制腐生葡萄球菌s.saprophyticusp2的生長(zhǎng)，同時(shí)slpb通過(guò)損傷s.saprophyticusp2的表面增強(qiáng)nisin的殺菌作用；二者共同作用造成細(xì)胞的死亡。所述卷曲乳桿菌k313的s層蛋白slpb的制備采用工程菌株進(jìn)行異源表達(dá)，其制備方法簡(jiǎn)單，產(chǎn)量大，容易純化。本發(fā)明所述用于肉品的抗菌劑利用卷曲乳桿菌k313的s層蛋白slpb與nisin的協(xié)同作用，增強(qiáng)對(duì)肉品中常見(jiàn)腐敗菌腐生葡萄球菌的抑制作用，增強(qiáng)殺菌作用，應(yīng)用于肉品保鮮，延長(zhǎng)貨架期。

本發(fā)明的其它優(yōu)點(diǎn)、目標(biāo)和特征將部分通過(guò)下面的說(shuō)明體現(xiàn)，部分還將通過(guò)對(duì)本發(fā)明的研究和實(shí)踐而為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所理解。

附圖說(shuō)明

圖1為利用本發(fā)明各實(shí)施例中所述用于肉品保鮮的抗菌劑處理后的s.saprophyticusp2生長(zhǎng)曲線圖；

圖2為利用本發(fā)明各實(shí)施例中所述用于肉品保鮮的抗菌劑處理后的s.saprophyticusp2的掃描電鏡圖；

圖3為利用本發(fā)明各實(shí)施例中所述用于肉品保鮮的抗菌劑處理后的s.saprophyticusp2的透射電鏡圖；

圖4為利用本發(fā)明各實(shí)施例中所述用于肉品保鮮的抗菌劑處理后的s.saprophyticusp2胞內(nèi)和胞外atp的含量曲線圖；

圖5為利用本發(fā)明各實(shí)施例中所述用于肉品保鮮的抗菌劑處理后的s.saprophyticusp2的群體效應(yīng)圖；

圖6為利用本發(fā)明各實(shí)施例中所述用于肉品保鮮的抗菌劑處理后的s.saprophyticusp2膜電勢(shì)差的變化圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說(shuō)明書(shū)文字能夠據(jù)以實(shí)施。

應(yīng)當(dāng)理解，本文所使用的諸如“具有”、“包含”以及“包括”術(shù)語(yǔ)并不排除一個(gè)或多個(gè)其它元件或其組合的存在或添加。

本發(fā)明提供一種用于肉品保鮮的抗菌劑，其包括：卷曲乳桿菌(lactobacilluscrispatus)k313的s層蛋白slpb和乳酸鏈球菌素。其中所述卷曲乳桿菌(lactobacilluscrispatus)k313的s層蛋白slpb通過(guò)下述方法制備：

(1)以卷曲乳桿菌(lactobacilluscrispatus)k313基因組dna為模板，利用如seqidno:2所示的核苷酸序列和如seqidno:3所示的核苷酸序列進(jìn)行pcr擴(kuò)增，得到包含如seqidno:1所示的核苷酸序列的基因片段，之后將該基因片段經(jīng)內(nèi)切酶ndei-ecori消化，純化后構(gòu)建到經(jīng)過(guò)相同內(nèi)切酶消化的pet-22b表達(dá)載體上得到重組載體pet-slpb；pcr擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性4min；94℃變性40s，52℃退火1min，72℃延伸2min，30個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min。

(2)將構(gòu)建好的重組載體pet-slpb以cacl2法轉(zhuǎn)化到大腸桿菌e.colibl21中，構(gòu)建重組菌株，之后利用該重組菌株進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，然后通過(guò)進(jìn)行蛋白純化，得到所述卷曲乳桿菌k313的s層蛋白slpb，所述slpb的氨基酸序列如seqidno:4所示。利用工程菌株例如大腸桿菌進(jìn)行異源表達(dá)，然后制備所述卷曲乳桿菌k313的s層蛋白slpb。該方法可以提高所述卷曲乳桿菌k313的s層蛋白slpb的制備量，同時(shí)更容易純化。

上游引物中酶切位點(diǎn)引入了atg起始密碼子

(2)利用該重組菌株進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，然后通過(guò)進(jìn)行蛋白純化，制到所述卷曲乳桿菌k313的s層蛋白slpb

挑取重組菌單菌落于5ml含抗生素的lb培養(yǎng)基中，37℃搖動(dòng)培養(yǎng)過(guò)夜；將過(guò)夜培養(yǎng)物按2％的接種量轉(zhuǎn)接到含抗生素的新鮮lb培養(yǎng)基中，37℃振蕩培養(yǎng)至od600＝0.8；加入終濃度為1.0mm的iptg誘導(dǎo)表達(dá)，18℃繼續(xù)培養(yǎng)4h；10，000g離心5min收集誘導(dǎo)表達(dá)的大腸桿菌，用pbs洗兩遍，用1/10體積的bindingbuffer(20mm磷酸鹽緩沖液,500mmnacl,25mm咪唑,ph7.4)重懸菌體；菌體置冰水混合物中超聲破碎，處理強(qiáng)度25～30％(400wt)，處理頻率5s/5s，處理99次，兩個(gè)循環(huán)；4℃10,000g離心30min，上清即為大腸桿菌可溶性蛋白成分，用0.22μm濾膜過(guò)濾上清液；用5倍柱體積的水沖洗histrap^tmffcrudecolumns，流速為1ml/min；用5倍柱體積的bindingbuffer平衡柱子；將樣品用針頭吹打，以打斷樣品中的dna分子，然后上樣，上樣速度為1ml/min；用10倍體積的bindingbuffer沖洗柱子；用10倍體積的washingbuffer(20mm磷酸鹽緩沖液,500mmnacl,50mm咪唑,ph7.4)沖洗柱子，洗掉未結(jié)合的蛋白樣品；用5倍體積的elutionbuffer(20mm磷酸鹽緩沖液,500mmnacl,500mm咪唑,ph7.4)洗脫，將液體回收在1.5ml的離心管中；sds-page電泳檢測(cè)蛋白純化；同時(shí)將純化的蛋白于置磷酸鹽緩沖液中梯度透析，去除咪唑及鹽離子。純化的蛋白濃度用bradford蛋白定量試劑盒定量。

實(shí)施例1

本發(fā)明所述用于肉品的抗菌劑包括：100μg/ml乳酸鏈球菌素nisin和40μg/ml卷曲乳桿菌k313的s層蛋白slpb。

實(shí)施例2

本發(fā)明所述用于肉品的抗菌劑包括：250μg/ml乳酸鏈球菌素nisin和40μg/ml卷曲乳桿菌k313的s層蛋白slpb。

實(shí)施例3

本發(fā)明所述用于肉品的抗菌劑包括：500μg/ml乳酸鏈球菌素nisin和30μg/ml卷曲乳桿菌k313的s層蛋白slpb。

實(shí)施例4

本發(fā)明所述用于肉品的抗菌劑包括：500μg/ml乳酸鏈球菌素nisin和50μg/ml卷曲乳桿菌k313的s層蛋白slpb。

實(shí)施例5

一種用于肉品的抗菌劑包括：500μg/ml乳酸鏈球菌素nisin。

實(shí)施例6

一種用于肉品的抗菌劑包括：40μg/ml卷曲乳桿菌k313的s層蛋白slpb。

下面對(duì)上述實(shí)施例制備的抗菌劑進(jìn)行系列檢測(cè)：

利用各實(shí)施例中所述的抗菌劑進(jìn)行腐生葡萄球菌培養(yǎng)和肉品處理，并測(cè)定相關(guān)數(shù)據(jù)，具體如下：

1，腐生葡萄球菌生長(zhǎng)曲線測(cè)定

將過(guò)夜培養(yǎng)的腐生葡萄球菌s.saprophyticusp2以2％的接種量接種到新鮮的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基中添加實(shí)施例1、實(shí)施例5和實(shí)施例6制備所述抗菌劑，37℃搖床培養(yǎng)，進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)。測(cè)定od600并繪制它們的生長(zhǎng)曲線，見(jiàn)圖1。

由圖1可知，當(dāng)nisin濃度為100μg/ml，slpb40μg/ml時(shí)，能降低s.saprophyticusp2的生長(zhǎng)速度，但最終細(xì)胞密度未有明顯變化。而當(dāng)nisin和slpb協(xié)同作用時(shí)，無(wú)論生長(zhǎng)速度還是最終細(xì)胞密度都顯著降低，說(shuō)明二者協(xié)同作用能顯著抑制s.saprophyticusp2的生長(zhǎng)。

2，腐生葡萄球菌細(xì)胞形態(tài)觀察

將過(guò)夜培養(yǎng)的腐生葡萄球菌s.saprophyticusp2以2％的接種量接種到5ml新鮮的培養(yǎng)基中，待od600生長(zhǎng)至1.0,5000r/min離心5min收集菌體，菌體懸浮在5ml的pbs中并添加實(shí)施例1、實(shí)施例5和實(shí)施例6制備所述抗菌劑。37℃處理2h，5000r/min離心5min收集菌體，并用pbs洗兩遍，然后用2.5％(v/v)的戊二醛過(guò)夜固定。之后分成兩份，一份用緩沖液(0.1mol·l^-1kh2po4，ph6.0)洗滌2次，以60％、70％、80％和90％乙醇，順序脫水各一次，每次10min，然后以無(wú)水乙醇重復(fù)脫水2次，每次10min，再用100％丙酮脫水，揮發(fā)去溶劑，電鍍噴金，掃描電鏡觀察，加速電壓為20kv。結(jié)果見(jiàn)圖2。另一份緩沖液(0.1mol·l^-1kh2po4，ph6.0)洗滌2次，以60％、70％、80％和90％丙酮，順序脫水各一次，每次10min，然后以無(wú)水丙酮重復(fù)脫水2次，環(huán)氧樹(shù)脂epon812包埋，梯度烘干，采用萊卡超薄切片機(jī)切成厚度為30nm的樣品，醋酸鈾和檸檬酸鉛雙染色，透射電鏡觀察、拍照，工作電壓為80kv。結(jié)果見(jiàn)圖3。

由圖2可知，未處理的細(xì)胞具有完整的細(xì)胞膜。而經(jīng)過(guò)nisin處理后細(xì)胞扁平，暗示可能有胞內(nèi)物質(zhì)滲漏。經(jīng)過(guò)slpb處理后細(xì)胞表面有輕微的損傷，而經(jīng)nisin和slpb協(xié)同作用后，細(xì)胞明顯凹陷及皺縮，說(shuō)明slpb能損傷s.saprophyticusp2的表面，而增強(qiáng)nisin的殺菌作用，進(jìn)而造成大量胞內(nèi)物質(zhì)的滲漏。

由圖3可知，未處理的細(xì)胞，細(xì)胞壁細(xì)胞膜界線清晰，結(jié)構(gòu)完整。經(jīng)nisin處理后，未見(jiàn)細(xì)胞壁損傷。但是經(jīng)slpb處理后，細(xì)胞的細(xì)胞壁細(xì)胞膜界線不清，細(xì)胞壁損傷嚴(yán)重。而經(jīng)nisin和slpb協(xié)同作用后，細(xì)胞的細(xì)胞壁細(xì)胞膜損傷嚴(yán)重?？紤]到nisin已知為膜穿孔細(xì)菌素，且觀察到slpb能損傷細(xì)胞壁，因此我們推測(cè)slpb通過(guò)損傷細(xì)胞壁，使nisin易進(jìn)入細(xì)胞膜，起到穿孔作用，從而協(xié)助nisin殺死細(xì)菌。

3，胞內(nèi)胞外atp的測(cè)定

菌體處理如上所述。每隔30min取樣測(cè)定胞內(nèi)和胞外atp含量，結(jié)果見(jiàn)圖4。將處理的菌株5000r/min離心5min，上清用來(lái)測(cè)定胞外atp含量，菌體重懸于pbs中，沸水浴10min，12000r/min離心5min，收集上清用來(lái)測(cè)定胞內(nèi)atp含量，atp測(cè)定利用atp檢測(cè)試劑盒(beyotime,中國(guó))按說(shuō)明進(jìn)行?；瘜W(xué)發(fā)光檢測(cè)利用infinite200pro微孔板發(fā)光檢測(cè)儀。

atp含量反映出細(xì)胞膜非特異性穿孔指數(shù)。由圖4可知，對(duì)照和經(jīng)slpb處理后的細(xì)胞，胞外atp含量維持在10nmol/od左右，經(jīng)nisin處理2.5h后，胞外atp的含量達(dá)為29.3nmol/od，而經(jīng)nisin和slpb協(xié)同處理后，胞外atp的含量在0.5h時(shí)即達(dá)到144.5nmol/od，而2.5h后能達(dá)到322.4nmol/od。與此相對(duì)應(yīng)地，經(jīng)nisin和slpb協(xié)同作用，2.5h后胞內(nèi)atp的含量從395降到34.2nmol/od。結(jié)果說(shuō)明slpb和nisin協(xié)同作用能增強(qiáng)質(zhì)膜的滲透性并誘導(dǎo)atp的釋放。

4，流式細(xì)胞儀分析

菌體處理如上所述。處理的菌體首先加入50μm二醋酸羧基熒光素(cfda)于37℃染色15min，隨后用15μm碘化丙錠染色10min后，收集菌體，用pbs清洗兩遍后，重懸于pbs中，用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)(accuric6，becton,jerseyusa)，流速為400-600events/s，收集20,000events。結(jié)果見(jiàn)圖5。

由圖5可知，94.2％的s.saprophyticus細(xì)胞位于第三象限，表明大多數(shù)未處理的細(xì)胞具有較高的酯酶活性和完整的細(xì)胞膜。經(jīng)過(guò)nisin處理后，活細(xì)胞和亞致死細(xì)胞數(shù)量分別為6.44％和52.0％，死細(xì)胞數(shù)量為32％。經(jīng)slpb處理后，活細(xì)胞數(shù)量從94.2％降為38.3％(p<0.05)，亞致死細(xì)胞數(shù)量從2.56％增大至40.8％，但是死細(xì)胞數(shù)量沒(méi)有明顯的變化，說(shuō)明細(xì)胞膜滲透性增加，但是大多數(shù)胞內(nèi)酶的活性未受影響。而經(jīng)nisin和slpb協(xié)同作用后，死細(xì)胞數(shù)量增至82.3％，表明slpb能顯著增加nisin的抗菌效果，二者共同作用造成細(xì)胞的死亡。

5，膜電勢(shì)差的測(cè)定

過(guò)夜培養(yǎng)的腐生葡萄球菌s.saprophyticusp2以2％的接種量接種到5ml新鮮的培養(yǎng)基中，待od600生長(zhǎng)至1.0，5000r/min離心5min收集菌體，用hepes緩沖液(50mmol/lhepes、0.6mmol/lkcl和0.2％葡萄糖，ph7.5)清洗兩遍后，懸浮在等體積的hepes緩沖液中。制備好的菌液加入0.5μmdisc3(5)，待熒光穩(wěn)定后加入100μg/mlnisin；40μg/mlslpb；100μg/mlnisin+40μg/mlslpb，以5mmol/l尼日利亞菌素和纈氨霉素做陰性和陽(yáng)性對(duì)照，每隔兩分鐘檢測(cè)熒光值(激發(fā)波長(zhǎng)622nm，發(fā)射波長(zhǎng)670nm)。結(jié)果見(jiàn)圖6。

由圖6可知，40μg/mlslpb大約消散-57.4％的膜電勢(shì)差，而nisin和slpb協(xié)同作用時(shí)，可以瞬間造成膜電勢(shì)差的完全消散。據(jù)已知報(bào)道，nisin作用于細(xì)胞膜可干擾膜的完整性，從而消散膜電勢(shì)差。我們的結(jié)果說(shuō)明slpb可能增強(qiáng)消散膜電勢(shì)差，從而增強(qiáng)nisin的抗菌作用。

6，將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的s.saprophyticusp2用生理鹽水稀釋成10⁴cfu/ml備用。取新鮮的雞胸肉，絞碎，20g一袋包裝后輻照滅菌，然后將制備的菌液加入1ml。隨后添加實(shí)施例2-6制備的抗菌劑，7℃冷藏保存，于0,3,6,9,12天取樣測(cè)定揮發(fā)性鹽基氮(tvb-n)值和活菌數(shù)。揮發(fā)性鹽基氮測(cè)定參考國(guó)標(biāo)gb/t5009.44-1996。結(jié)果見(jiàn)表1和表2。

表1不同抗菌劑處理?xiàng)l件下貯藏雞肉的活菌書(shū)

a代表標(biāo)準(zhǔn)方差.不同字母表示縱向的差異顯著性(p<0.05).

由表1可知，雞肉的起始菌數(shù)為2.6logcfu/g。貯藏6天后，對(duì)照樣品的活菌數(shù)達(dá)到6logcfu/g，經(jīng)slpb和nisin單獨(dú)處理的雞肉樣品，貯藏9天后活菌數(shù)達(dá)到6logcfu/g。在12天的貯藏期間，slpb和nisin共同處理的雞肉樣品，活菌數(shù)仍未達(dá)到6logcfu/g，貨架期可延長(zhǎng)6天。

表2不同抗菌劑處理?xiàng)l件下貯藏雞肉的tvb-n含量

a代表標(biāo)準(zhǔn)方差.不同字母表示縱向的差異顯著性(p<0.05).

由表2可知，空白對(duì)照與經(jīng)各實(shí)施例抗菌劑處理后的雞肉樣品，其tvb-n的含量從最初的5.6mg/100g肉樣品分別增至30.96,18.37，15.07，,10.23，10.07和15.35mg/100g肉樣品。tvb-n含量在15–25mg/100g肉樣品之間表明肉的新鮮度受到影響，而雞肉樣品中tvb-n含量超過(guò)25mg/100g意味著腐敗。經(jīng)nisin+slpb或0.5nisin+slpb處理，tvb-n含量降至10.07和15.35mg/100g肉樣品，表明slpb能顯著增加nisin的作用效果，而降低nisin的用量。

盡管本發(fā)明的實(shí)施方案已公開(kāi)如上，但其并不僅僅限于說(shuō)明書(shū)和實(shí)施方式中所列運(yùn)用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對(duì)于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地實(shí)現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限于特定的細(xì)節(jié)和這里示出與描述的圖例。

sequencelisting

<110>江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院

<120>用于肉品保鮮的抗菌劑

<130>2016

<160>5

<170>patentinversion3.5

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<212>dna

<213>卷曲乳桿菌（lactobacilluscrispatus）k313

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<213>人工序列

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<212>dna

<213>人工序列

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<212>prt

<213>卷曲乳桿菌（lactobacilluscrispatus）k313

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485490495

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500

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<212>dna

<213>卷曲乳桿菌（lactobacilluscrispatus）k313

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gctcaagttccagctaagccagctactaagccaagtacttcagaaagcattaacgctggt420

aacggttcagtatttgacaacgctgcaaaccttgctgtaaacatcactgcagttgcttct480

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