一種酪蛋白?肉桂精油脂質(zhì)體抗菌劑的制備方法和用圖
【專利摘要】本發(fā)明屬于抗菌劑及食品添加劑或者化妝品領(lǐng)域，具體涉及一種酪蛋白?肉桂精油脂質(zhì)體抗菌劑的制備方法及應(yīng)用。本發(fā)明通過(guò)將肉桂精油包裹在酪蛋白脂質(zhì)體中，以實(shí)現(xiàn)減少肉桂精油在施用過(guò)程中的揮發(fā)，從而減少肉桂精油的浪費(fèi)，提高其利用率，達(dá)到長(zhǎng)效抗菌與高效利用的目的。
【專利說(shuō)明】
一種酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體抗菌劑的制備方法和用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于抗菌劑及食品添加劑或者化妝品領(lǐng)域，具體涉及一種酪蛋白-肉桂精 油脂質(zhì)體抗菌劑的制備方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 肉桂精油屬揮發(fā)性油，是一種黃色至紅褐色澄清液體，其主要成分為肉桂醛，其次 為α_水芹烯、1，8_桉葉油素、對(duì)傘花烴、樟腦、芳樟醇、β_石竹烯、α_依蘭烯、α_松油醇、香葉 醇、桂酸甲酯、桂酸乙酯、丁子香酚、肉桂醇等。肉桂精油具有抗氧化、清除膽固醇、降血糖、 降血脂、抗菌等功能。目前，肉桂精油已被食品藥品監(jiān)督管理局認(rèn)為是一種安全無(wú)毒的食品 添加劑。肉桂精油已被廣泛應(yīng)用于食品調(diào)味料、臨床治療、醫(yī)療保健等領(lǐng)域。
[0003]國(guó)內(nèi)已有很多關(guān)于肉桂精油在食品、化妝品、醫(yī)藥技術(shù)等領(lǐng)域的專利申請(qǐng)。 CN104532596A公開(kāi)了一種肉桂油微膠囊織物整理液的制備方法。所得的織物整理液具有更 好的耐水洗性能，更持久的抗菌保健和防皺功能。CN104872215A公開(kāi)了一種含有肉桂油的 微囊化植物精油驅(qū)蚊劑。CN102660053A公開(kāi)了一種卡拉膠-肉桂精油可食性薄膜及其制備 方法。所得薄膜用于超市冷鮮肉的包裝，可以有效延長(zhǎng)冷鮮肉保質(zhì)期。CN103271996A公開(kāi)了 一種肉桂精油與混合環(huán)糊精包合物及其制備方法。該技術(shù)提高了包合率，增加了溶解度和 穩(wěn)定性，并且避免了在生產(chǎn)過(guò)程中使用有機(jī)溶劑。CN103690626A公開(kāi)了一種復(fù)方肉桂膠囊 及其制備方法。產(chǎn)品口感良好，具有明顯的效果，保質(zhì)期長(zhǎng)。CN102885379A公開(kāi)了一種雙重 抑菌肉桂醛微膠囊的制備方法。CN103653179A公開(kāi)了一種肉桂精油納米脂質(zhì)體及其制備方 法。方法操作簡(jiǎn)單，且制備的納米脂質(zhì)體分散性好，粒徑均勻，穩(wěn)定性好。CN101519624公開(kāi) 了一種肉桂精油微膠囊的制備方法。產(chǎn)品具有良好的熱穩(wěn)定性和溶解分散性。
[0004] 雖然肉桂精油在醫(yī)學(xué)，食品和化妝品行業(yè)被廣泛應(yīng)用，具有較好的殺菌、增香等特 點(diǎn)，但是肉桂精油易揮發(fā)，暴露在空氣中不穩(wěn)定，所以要尋找有效的方法降低肉桂精油在使 用過(guò)程中的揮發(fā)程度，延長(zhǎng)其貯存期。
[0005] 納米脂質(zhì)體能將精油包裹在內(nèi)，并且納米脂質(zhì)體不會(huì)對(duì)肉桂精油的主要活性成分 造成破壞。納米脂質(zhì)體使肉桂精油中的活性成分與外界環(huán)境隔絕開(kāi)來(lái)，可以降低肉桂精油 的揮發(fā)性，延長(zhǎng)保存期。但由于脂質(zhì)體的緩釋作用，包裹精油的脂質(zhì)體保質(zhì)期有限。因此，選 用酪蛋白制成穩(wěn)定性更高的酪蛋白脂質(zhì)體。此外，納米脂質(zhì)體由于它們的亞細(xì)胞尺寸，能加 強(qiáng)脂質(zhì)體的被動(dòng)吸收機(jī)制，減少物質(zhì)運(yùn)輸阻力，從而增強(qiáng)精油的抗菌效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是公開(kāi)一種酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體的制備方法及其用途，通過(guò)將 肉桂精油包裹在酪蛋白脂質(zhì)體中，以實(shí)現(xiàn)減少肉桂精油在施用過(guò)程中的揮發(fā)，從而減少肉 桂精油的浪費(fèi)，提高其利用率，達(dá)到長(zhǎng)效抗菌與高效利用的目的。本發(fā)明由肉桂精油，大豆 卵磷脂，膽固醇和表面活性劑Brij-35,酪蛋白制成酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體。
[0007] 本發(fā)明的制備方法是將肉桂精油，大豆卵磷脂，膽固醇混合于有機(jī)溶劑，減壓蒸發(fā) 形成光滑的薄膜，加入水相介質(zhì)溶解膜狀物并超聲成乳液，通過(guò)離心和微孔濾膜過(guò)濾，得到 粒徑為納米級(jí)的肉桂精油脂質(zhì)體，其特征在于:將納米級(jí)的肉桂精油脂質(zhì)體與酪蛋白和表 面活性劑的溶液混合，攪拌均勻，通過(guò)低溫冷凍緩慢融化的方法使酪蛋白鑲嵌在脂質(zhì)體上， 通過(guò)溫和超聲使脂質(zhì)體閉合，最終形成包裹肉桂精油的酪蛋白脂質(zhì)體。
[0008] 本發(fā)明的大豆卵磷脂和膽固醇的質(zhì)量比為5:1;用于制備精油脂質(zhì)體的乳液含有 肉桂精油的濃度為5.0mg/mL;表面活性劑為十二烷基聚乙二醇醚(Brij-35)，得到包裹肉桂 精油的酷蛋白脂質(zhì)體后其最終濃度為1. 〇mg/mL。
[0009] 本發(fā)明中所述的有機(jī)溶劑為氯仿。
[0010] 本發(fā)明中所用的水相介質(zhì)是根據(jù)中國(guó)藥典2000版標(biāo)準(zhǔn)配制的磷酸鹽緩沖溶液，pH 值6.5~7.4,優(yōu)選7.2。
[0011] 所述的酪蛋白和表面活性劑的溶液是將酪蛋白分散在Brij-35的磷酸鹽緩沖液中 得到的，Br i j-35濃度為1 Omg/mL，分散后溶液中酪蛋白濃度為1. Omg/mL。
[0012] 本發(fā)明中脂質(zhì)體上鑲嵌的蛋白為酪蛋白，肉桂精油脂質(zhì)體與酪蛋白和表面活性劑 的溶液以體積比1 〇: 1混合，混合后溶液中酪蛋白濃度為〇. lmg/mL，Bri j-35濃度為1.Omg/ mL〇
[0013] 本發(fā)明中低溫冷凍緩慢融化是指將混合液在-18°c下冷凍2h，隨后在0°C下緩慢融 化2h。
[0014] 本發(fā)明中溫和超聲是指在低功率50W條件下超聲2h，溫度范圍0-10°C。
【附圖說(shuō)明】
[0015] 圖1酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體的包封率。
[0016] 圖2酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體的粒徑與多分散系數(shù)(PDI)。
[0017] 圖3酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體對(duì)大腸桿菌的抗菌效果。
[0018] 圖4酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體對(duì)金黃色葡萄球菌的抗菌效果。
[0019]表1酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體的Zeta電位。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 通過(guò)下面實(shí)例說(shuō)明本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】，但本發(fā)明的保護(hù)內(nèi)容，不僅局限于此
[0021] 實(shí)施例1酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體的包封率
[0022] 1實(shí)驗(yàn)材料 大豆卵磷脂 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 膽固醇 AR 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 三氯甲烷 AR 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司
[0023] 肉桂精油 AR 法國(guó)Flofilmna精油 Brij-35 GR 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 酪蛋白 CP 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司
[0024] 2實(shí)驗(yàn)方法
[0025] 1)肉桂精油脂質(zhì)體的制備
[0026]①稱取lg大豆卵磷脂，0.2g膽固醇和250mg的肉桂精油，加入50mL氯仿使其溶解。 [0027]②在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)至溶劑蒸干，蒸發(fā)溫度為10~30°C，圓底燒瓶?jī)?nèi)壁會(huì)形成 光滑的薄膜;然后將所得產(chǎn)品放入真空干燥箱中，30°C，真空狀態(tài)下干燥24h。
[0028] ③加入50mL的磷酸鹽緩沖液到圓底燒瓶中進(jìn)行水化，水化超聲波功率為100W，超 聲時(shí)間為5h。
[0029] ④將所得混合液于細(xì)胞超微粉碎儀中以功率360W，工作10s間隙5s，粉碎30min。
[0030] ⑤將所得產(chǎn)品進(jìn)行離心，4000rpm，15min，取上層液體。
[0031 ]⑥將所得液體用0.22μπι濾膜進(jìn)行過(guò)濾，得濾液。
[0032] 2)酷蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體的制備
[0033] ①按照上述肉桂精油脂質(zhì)體的制備方法，制備肉桂精油濃度為5mg/mL的肉桂精油 脂質(zhì)體。
[0034]②將酪蛋白超聲分散在含10mg/mL Brij-35的磷酸鹽緩沖液中，形成酪蛋白一 Br i j-35溶液，其中酪蛋白濃度為1. Omg/mL。
[0035]③在50mL肉桂精油脂質(zhì)體中添加5mL lmg/mL的酪蛋白-Brij-35溶液，混合均勻。 [0036]④將所得混合液于超聲條件下擴(kuò)散lOmin。
[0037] ⑤將所得混合液在-18 °C下冷凍2h。
[0038]⑥將所得混合液在0 °C下緩慢融化2h。
[0039] ⑦通過(guò)溫和超聲（功率50W，2h，KQ-300DE，昆山市超聲儀器有限公司）使脂質(zhì)體閉 合，所得溶液即為酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體。
[0040] 3)包封率的測(cè)定
[00411用無(wú)水乙醇稀釋肉桂精油，逐級(jí)稀釋成濃度分別為0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mg/mL的 標(biāo)準(zhǔn)溶液。然后，分別吸取lyL標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行GC-MS分析，對(duì)其主要成分丁子香酚的譜峰面積 進(jìn)行自動(dòng)積分，繪制丁子香酚峰面積-肉桂精油濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線。取lmL酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì) 體樣品，13500rpm，離心3h，倒掉上清液。接著加入lmL乙醇破乳劑，超聲3h。最后以lOOOOrpm 的轉(zhuǎn)速離心15min，取上清液，用于GC-MS分析。制備好的脂質(zhì)體樣品，對(duì)精油主成分的峰面 進(jìn)行自動(dòng)積分，再根據(jù)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出脂質(zhì)體中肉桂精油的含量。則：
[0042] 包封率=,月曰質(zhì)f本+%樹(shù)目獅勺3? x 1娜： 初始添加的肉桂精油的總量
[0043] 3酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體的包封率
[0044] 包封率是評(píng)價(jià)脂質(zhì)體制劑質(zhì)量好壞的最重要的指標(biāo)，也是脂質(zhì)體能否發(fā)揮較普通 制劑尚效、低毒等特點(diǎn)的關(guān)鍵。由圖1可看出，肉桂精油脂質(zhì)體的包封率為40.1 %，酷蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體的包封率為81.3%。因此制備酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體可以明顯提高脂質(zhì) 體的包封率。
[0045] 實(shí)施例2酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體的粒徑與多分散系數(shù)(PDI)
[0046] 1實(shí)驗(yàn)材料 [0047]①空白脂質(zhì)體 [0048]②肉桂精油脂質(zhì)體
[0049]③酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體
[0050] 2實(shí)驗(yàn)方法
[0051] 用美國(guó)布魯克海文儀器公司產(chǎn)的，型號(hào)為BI-9000的高濃度激光粒度儀測(cè)定酪蛋 白-肉桂精油脂質(zhì)體的粒徑和多分散系數(shù)(PDI)值，所測(cè)樣品放入樣品池直接測(cè)量即可。 [0052] 3酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體的粒徑與多分散系數(shù)(PDI)
[0053] 多分散系數(shù)(PDI)直接反映酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，因此是主要參考指 標(biāo)，脂質(zhì)體的PDI在0~0.3范圍內(nèi)屬于最好，在0.3~0.7范圍內(nèi)較差，但可以接受，當(dāng)PDI> 0.8時(shí)，不予考慮。如圖2所示，空白脂質(zhì)體的粒徑為86.4nm、PDI為0.353，肉桂精油脂質(zhì)體的 粒徑為145.0nm、PDI為0.246，酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體的粒徑為615.0腦、？01為0.029。蛋 白-肉桂精油脂質(zhì)體的多分散系數(shù)(PDI)最小，因此制備酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體可以明顯 提尚脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。
[0054] 實(shí)施例3酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體的Zeta電位
[0055] 1實(shí)驗(yàn)材料
[0056] ①空白脂質(zhì)體
[0057]②肉桂精油脂質(zhì)體
[0058]③酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體 [0059] 2實(shí)驗(yàn)方法
[0000] 用英國(guó)馬爾文儀器有限公司生產(chǎn)的型號(hào)為Zetasirer nano ZSZeta的電位儀測(cè) 量，直接將待測(cè)脂質(zhì)體樣品放入電位儀中測(cè)量即可。
[0061] 3酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體的Zeta電位
[0062] 表1酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體的Zeta電位
[0063]
[0064] Zeta電位也可以直接反映酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，因此也是主要參考 指標(biāo)，脂質(zhì)體的Zeta電位的絕對(duì)值越大說(shuō)明脂質(zhì)體越穩(wěn)定性，Zeta電位的絕對(duì)值在0~30范 圍內(nèi)屬于不穩(wěn)定，在大于30時(shí)脂質(zhì)體較穩(wěn)定性。如表1所示，三種脂質(zhì)體均帶負(fù)電，空白脂質(zhì) 體的Zeta電位為-22.8mV，其絕對(duì)值小于30，脂質(zhì)體不穩(wěn)定；肉桂精油脂質(zhì)體的Zeta電位為-40. lmV，其絕對(duì)值大于30脂質(zhì)體，較穩(wěn)定;酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體的Zeta電位為-55.OmV， 其絕對(duì)值最大，脂質(zhì)體最穩(wěn)定。
[0065] 實(shí)施例4酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體的抗菌性能
[0066] 1實(shí)驗(yàn)材料
[0067] ①肉桂精油脂質(zhì)體(保存7天、30天、60天、90天）
[0068]②酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體(保存7天、30天、60天、90天）
[0069] 2實(shí)驗(yàn)方法
[0070]采用平板菌落計(jì)數(shù)法，以大腸桿菌（Escherichia coli)和金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)為模式菌種測(cè)定酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體的殘存菌數(shù)。將大腸桿 菌和金黃色葡萄球菌接種到液體培養(yǎng)基中，分別置于空氣搖床中在37 °C、150rpm的條件下 震蕩培養(yǎng)24~48h，獲得對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌懸液。取適量處于對(duì)數(shù)期的大腸桿菌和金黃色葡萄 球菌分別加入含有一定量無(wú)菌磷酸鹽緩沖液的試管中（細(xì)菌濃度約為1〇 5~106CFU/mL)，然 后再向試管中加入濃度為20%(v/v)的肉桂精油脂質(zhì)體及酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體。同時(shí)另 取兩個(gè)分別含有以上兩種菌的試管并向其中加入等量無(wú)菌水(不加脂質(zhì)體)作為對(duì)照。將各 試管均置于空氣搖床中在37°C、150rpm的條件下震蕩反應(yīng)24h。分別于不同時(shí)間點(diǎn)的取適量 培養(yǎng)液進(jìn)行十倍梯度稀釋到合適的濃度，然后移取l〇〇yL稀釋液滴到無(wú)菌固體平板培養(yǎng)基 上，涂布均勻之后放入37°C恒溫恒濕培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)。24~48h后進(jìn)行平板菌落計(jì)數(shù)，從 而對(duì)肉桂精油脂質(zhì)體和酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體的抗菌活性進(jìn)行評(píng)價(jià)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，結(jié)果 取平均值。
[0071] 3酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體的抗菌性能
[0072] 不同保存期的酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體的抗菌活性的變化也可以間接反映脂質(zhì)體 的穩(wěn)定性。因此對(duì)保存7天、30天、60天、90天的肉桂精油脂質(zhì)體及酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體 進(jìn)行了抗菌性能評(píng)價(jià)，結(jié)果如圖3、圖4所示。保存時(shí)間為7天時(shí)，肉桂精油脂質(zhì)體與酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體的抗菌活性相近，對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均顯示了良好的抗菌效 果。保存時(shí)間為30天時(shí)，肉桂精油脂質(zhì)體的抗菌效果明顯降低，而酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體 仍然顯示出良好的抗菌效果。保存時(shí)間為60天和90天時(shí)，肉桂精油脂質(zhì)體幾乎沒(méi)有顯示抗 菌效果，而酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體仍然保持良好的抗菌效果。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體抗菌劑的制備方法，將肉桂精油，大豆卵磷脂，膽固醇 混合于有機(jī)溶劑，減壓蒸發(fā)形成光滑的薄膜，加入水相介質(zhì)溶解膜狀物并超聲成乳液，通過(guò) 離心和微孔濾膜過(guò)濾，得到粒徑為納米級(jí)的肉桂精油脂質(zhì)體，其特征在于:將納米級(jí)的肉桂 精油脂質(zhì)體與酪蛋白和表面活性劑的溶液混合，攪拌均勻，通過(guò)低溫冷凍緩慢融化的方法 使酪蛋白鑲嵌在脂質(zhì)體上，通過(guò)溫和超聲使脂質(zhì)體閉合，最終形成包裹肉桂精油的酪蛋白 脂質(zhì)體。2. 如權(quán)利要求1所述的一種酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體抗菌劑的制備方法，其特征在于： 大豆卵磷脂和膽固醇的質(zhì)量比為5:1;用于制備精油脂質(zhì)體的乳液含有肉桂精油的濃度為 5.0mg/mL;表面活性劑為十二烷基聚乙二醇醚(Brij-35)，得到包裹肉桂精油的酪蛋白脂質(zhì) 體后其最終濃度為1 .Omg/mL。3. 如權(quán)利要求1所述的一種酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體抗菌劑的制備方法，其特征在于： 所述的有機(jī)溶劑為氯仿。4. 如權(quán)利要求1所述的一種酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體抗菌劑的制備方法，其特征在于： 所用的水相介質(zhì)是根據(jù)中國(guó)藥典2000版標(biāo)準(zhǔn)配制的磷酸鹽緩沖溶液，pH值6.5~7.4,優(yōu)選 7.2。5. 如權(quán)利要求1所述的一種酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體抗菌劑的制備方法，其特征在于： 所述的酪蛋白和表面活性劑的溶液是將酪蛋白分散在Brij-35的磷酸鹽緩沖液中得到的， Br i j-35濃度為1 Omg/mL，分散后溶液中酪蛋白濃度為1. Omg/mL。6. 如權(quán)利要求1所述的一種酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體抗菌劑的制備方法，其特征在于： 脂質(zhì)體上鑲嵌的蛋白為酪蛋白，肉桂精油脂質(zhì)體與酪蛋白和表面活性劑的溶液以體積比 10:1混合，混合后溶液中酪蛋白濃度為0. lmg/mL，Bri j-35濃度為1 .Omg/mL。7. 如權(quán)利要求1所述的一種酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體抗菌劑的制備方法，其特征在于： 低溫冷凍緩慢融化是指將混合液在_18°C下冷凍2h，隨后在0°C下緩慢融化2h。8. 如權(quán)利要求1所述的一種酪蛋白-肉桂精油脂質(zhì)體抗菌劑的制備方法，其特征在于： 溫和超聲是指在低功率50W條件下超聲2h，溫度范圍0-10°C。
【文檔編號(hào)】A61K8/14GK106038327SQ201610520118
【公開(kāi)日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年7月4日
【發(fā)明人】崔海英, 李偉, 林琳
【申請(qǐng)人】江蘇大學(xué)